استراتيجيات أخذ العينات وتجهيزها لعينات الأنسجة المصرف البيولوجي من النماذج الطبية الخنزير

Summary

هي أثبت التطبيق العملي والأداء لطرق لتوليد عينات الأنسجة التمثيلية من نماذج حيوانية الخنزير لمجموعة واسعة من التحليلات المصب في مشاريع المصرف البيولوجي، بما في ذلك فولوميتري، عينة عشوائية منتظمة، وتجهيز فرق لعينات الأنسجة لأنواع التحليلات الجزيئية والسمات النوعية والكمية.

Abstract

في البحوث الطبية متعدية الجنسيات، أصبحت نماذج الخنزير اطراد أكثر شعبية. النظر في القيمة العالية للحيوانات الفردية، ولا سيما من الخنازير المعدلة وراثيا نماذج، وعدد الحيوانات المتوفرة لهذه النماذج محدودة غالباً، إنشاء مجموعات المصرف (البيولوجي) لعينات الأنسجة المجهزة على نحو كاف يناسب طائفة واسعة من أساليب التحاليل اللاحقة، بما في ذلك التحليلات غير محدد في النقطة الزمنية لأخذ العينات، تمثل النهج ذات مغزى الاستفادة الكاملة من قيمة متعدية للنموذج. فيما يتعلق بالخصائص المميزة للتشريح الخنزير، أنشئت مؤخرا مبادئ توجيهية شاملة لجيل موحدة للممثل، ونماذج عالية الجودة من الخنزير وأنسجة مختلفة. هذه المبادئ التوجيهية شرطان أساسيان لإمكانية تكرار نتائج النتائج وقابليتها للمقارنة بين مختلف الدراسات والمحققين. تسجيل البيانات الأساسية، مثل الأوزان الجهاز ووحدات التخزين، وتحديد مواقع أخذ العينات، وإعداد عينات الأنسجة إلى يتم إنشاؤها، فضلا عن التوجه، وحجمها وتجهيز واتجاهات التشذيب، هي من العوامل ذات الصلة تحديد جينيراليزابيليتي وقابليتها للاستخدام من العينة للتحليلات المورفولوجية الجزيئية والنوعي والكمي. هنا، مظاهرة توضيحية، عمليا، خطوة بخطوة التقنيات الأكثر أهمية لجيل ممثل، عينة المصرف البيولوجي متعددة الأغراض من أنسجة الخنزير ويرد. الأساليب الموصوفة هنا تشمل تحديد حجم الجهاز/الأنسجة والكثافة، تطبيق إجراء المرجحة حجم عينة عشوائية منتظمة لأجهزة متني بتحديد مدى تقلص الأنسجة عد نقطة، تتصل بتضمين النسيجي من العينات، وتوليد العينات عشوائياً موجها لتحليلات ستيريولوجيكال الكمية، مثل الخواص موحدة عشوائي (أيار) المقاطع الناجمة عن أساليب "أورينتاتور" و "إيسيكتور"، والزي العمودي عشوائي (فور) المقاطع.

Introduction

الطب متعدية الجنسيات، والخنازير شائعة بشكل متزايد لاستخدامها كنماذج^1،2،3،،من⁴⁵، نظراً لأوجه الشبه مفيدة عدة بين الخنزير من الحيوانات الكبيرة و تشريح جسم الإنسان وعلم وظائف الأعضاء، وتوافر الوسائل البيولوجية الجزيئية المنشأة السماح لجيل من مصممة خصيصا، والكائنات المعدلة وراثيا خنزير نماذج لمجموعة واسعة من الأمراض الشروط^1،4.

بالمقارنة مع نماذج القوارض، العدد من حيوانات طراز خنزير كل منها التي يمكن توفيرها لإجراء تجارب عليها في أي وقت غير محدود. هذا سبب الفاصل الزمني جيل الخنزير حوالي سنة واحدة، والجهود المالية والوقت الكثيفة اللازمة لتوليد نماذج الخنزير وتربية الحيوانات. ولذلك، الحيوانات الفردية من طراز خنزيري، فضلا عن العينات التي يمكن أن تتولد من هذه الخنازير، قيمة للغاية، لا سيما إذا كان وراثيا نماذج النقانق و/أو القضايا التجريبية على المدى الطويل (مثلاً، مضاعفات متأخرة ويتم فحص الأمراض المزمنة) في الأفراد الذين تتراوح أعمارهم بين^2،،من⁶⁷.

أثناء الدراسة، وأي أداء التحليلات الإضافية التي كانت مقرره في تصميم الدراسة التجريبية الأولية لا يمكن لاحقاً تتحول إلى أن تكون ذات الصلة، مثلاً، بعنوان اكتشف متميزة المسائل الناشئة من قبل نتائج غير متوقعة. إذا لم تتوفر عينات مناسبة لمثل هذه التجارب الإضافية، قد يكون غير متناسب ارتفاع التكاليف والنفقات كثيفة الوقت اللازمة لتوليد إضافية الخنازير وعينات الأنسجة. أن نكون مستعدين لمثل هذه الاحتمالات، وجيل مجموعات المصرف البيولوجي المصانة احتياطية عينات من مختلف الأجهزة أو الأنسجة البيولوجية-السوائل، مناسب كما وكيفا لمجموعة واسعة من التحليلات اللاحقة، يعتبر هاما نهج^2،،من⁶⁷. الاستفادة المثلى من نموذج حيوان الخنزير، توافر عينات كافية المصرف البيولوجي كما يوفر إمكانية فريدة لتنفيذ طائفة واسعة من أساليب التحليل المختلفة على المواد عينة مماثلة على مستوى جهاز متعدد في نفسه ونظمت الحيوانات الفردية، مثلاً، بتوزيع العينات للعلماء من مختلف الأفرقة العاملة في أبحاث شبكة^2،،من⁶⁷. بالإضافة إلى ذلك، الاستراتيجية '' تطلعي '' أخذ العينات في بيوبانكينج يساهم أيضا في خفض عدد الحيوانات اللازمة في دراسة. مزايا نموذج الخنزير بيوبانكينج ثبت مؤخرا في جهاز متعدد، دراسة مولتيوميكس، فحص الجهاز عبر الحديث في نموذج الخنزير معدلة وراثيا للسكري الطويلة الأمد، باستخدام عينات من "المصرف البيولوجي خنزير" ميونيخ ميدي ².

وهناك بعض المتطلبات الإلزامية التي يجب أن تمتثل عينات المصرف البيولوجي عموما إثبات الموثوقية والقابلية للتفسير لنتائج التحليلات التي يؤديها في وقت لاحق. يجب أن يكون إنشاء العينات تكاثر، ويجب أن تكون ممثلة، أيعلى نحو كاف مما يعكس الميزات المورفولوجية والجزيئية المهتمة الأنسجة/جهاز أخذ العينات من⁷. يجب أن تكون مناسبة لمجموعة واسعة من أنواع التحليل المصب، تؤخذ بكميات كافية العينات وتجهيزها وفقا للمطالب (بما في ذلك ظروف الوقت ودرجة الحرارة) أساليب تحليلية مختلفة، بما في ذلك وصفية تحاليل نسيجية، مثل كريوهيستولوجي والبارافين والأنسجة البلاستيك، immunohistochemistry، التهجين في الموقع ، والتحليل المجهري الإلكترون ultrastructural والتحليلات التشخيصية المختبرات السريرية، كذلك صيغته الجزيئية تحاليل الحمض النووي والجيش الملكي النيبالي، والبروتينات ونواتج الأيض.

للسماح بتقييم مجموعة واسعة من المعلمات المورفولوجية كمية مميزة مثل الأرقام أو وحدات التخزين أو أطوال أو المساحات السطحية لهياكل الأنسجة متميزة بالتحليلات الكمية ستيريولوجيكال، قسم تجارب معشاة طائرات عينات نسيجية لكل الأجهزة/الأنسجة تحتاج إلى إعداد^7،،من^89،،من¹⁰¹¹. في الدراسات المورفولوجية الكمية، والتحديد الدقيق للحجم الكلي للأنسجة، والجهاز، أو حجرة الجهاز، أخذ العينات من (أي، المساحة المرجعية) من الأهمية بمكان^{7،9 , 12} لحساب الكميات المطلقة من المعلمات المهتمة داخل الجهاز كل منهما أو الأنسجة، أو الكائن الحي. في نهاية المطاف، قد أثر انكماش الأنسجة المتصلة بتضمين أثناء إعداد مقاطع نسيجية تكون مصممة وتؤخذ في الاعتبار¹³. ولذلك، تحليلات ستيريولوجيكال الكمية، لا سيما من العينات المحفوظة (الثابتة عينات الأنسجة، كتل الأنسجة المضمنة، أقسام النسيجي، إلخ) من الدراسات السابقة في بعض الأحيان محدودة للغاية أو حتى مستحيلاً¹²، خاصة إذا لم يتم فولوميتري لكل الأجهزة/الأنسجة، إذا تم تطبيق لا تصميم العينات كافية لتبرير عينات تمثيلية، إذا كانت الأرقام والمبالغ من العينات الفردية المتاحة غير كافية، أو التجهيز عينات غير متوافق مع تقدير لمعلمة (معلمات) المورفولوجية كمية من الفائدة. بسبب العوامل المؤثرة المحتملة المتعددة، مدى ملاءمة مواد الأرشيف-عينة لإجراء تحليلات متميزة من المعلمات المورفولوجية الكمية يتعذر الرد على نحو لا لبس فيه، ولكن يعتمد على تقييم دقيق لكل حالة على حدة.

وهكذا، حسب الموقع، الحجم، عدد، وتجهيز واتجاه التشذيب، والتوجه لعينات يحتمل أن تؤثر على نتائج التحاليل اللاحقة، هذه العوامل ذات أهمية كبيرة ويجب النظر في تصميم أي دراسة تجريبية. وفيما يتعلق بهذه الجوانب والسمات الخاصة للتشريح الخنزير، إرشادات أخذ العينات شاملة ومفصلة وواسعة النطاق قد أنشئ مؤخرا نماذج حيوانية تتكيف مع الخنزير، توفير إشارة قوية موحدة، واستنساخه ، وكفاءة توليد عينات زائدة عن الحاجة، ومعالجتها على نحو كاف وذات جودة عالية من أكثر من 50 مختلفة الخنزير والأنسجة^6،7.

الوصف المنهجي، وفيديو تعليمي المبين في هذه المادة توفر تفصيلية وتوضيحية ومفهومة، خطوة بخطوة تعليمات للأداء العملي لمجموعة متنوعة من التقنيات فولوميتري، أخذ عينات من أنسجة الخنزير و الأجهزة، ومعالجة عينات الأنسجة لأساليب مختلفة من تحليل المتلقين للمعلومات. التقنيات الموصى بها التي تشمل أساليب لتحديد حجم الجهاز/الأنسجة وكثافات استناداً إلى مبادئ أرخميدس وكافالييري⁹، بما في ذلك تحديد الأبعاد لانكماش أنسجة ثلاثية الأبعاد ذات الصلة تضمين في وسائل الإعلام المختلفة التضمين¹⁴ أثناء تجهيزها للفحص النسيجي، تطبيق عمليا حجم المرجحة المنتظمة عينة عشوائية نهج، تجهيز العينات عينات الأنسجة لمختلف اللاحقة تحليلات^7،8،،من⁹¹⁵، وتوليد مناسب الموجهة وتجهيز العينات المحتملة التحليلات الكمية ستيريولوجيكال^{7،8، 9،،}من¹⁰¹¹. بجوار تطبيقها في مشاريع المصرف البيولوجي الخنزير، الأساليب الواضحة ملائمة عموما لجميع الدراسات دراسة الخصائص المورفولوجية histo الكمية الأجهزة/الأنسجة. علاوة على ذلك، يتم تصميم العينات العشوائية المنتظمة مفيدة بصفة خاصة لجيل عينات ممثلة في تجارب باستخدام أساليب التحليل الجزيئي للكشف عن التعديلات وفرة من، مثلاً، والكشف، والبروتينات، أو نواتج الأيض في مختلف الأعضاء والأنسجة.

تقدم الفقرات التالية عرضاً موجزاً لهذه الأساليب، أثناء أدائهم العملي هو الموصوفة في المقطع بروتوكول.

تحديد حجم الجهاز/الأنسجة
تحديد الأوزان الجهاز ووحدات التخزين مهم في العديد من إعدادات التجريبية، كما قد تشير هذه العوامل إلى دراسة التغييرات، يحتمل أن تتصل تجريبيا العوامل ذات الأهمية. الحجم الإجمالي الجهاز/الأنسجة مطلوب أيضا عادة حساب المعايير الكمية المطلقة، (مثلاً، عدد الخلايا الإجمالي)، من كثافة الحجم العددي ستيريولوجيكالي المقدر (أي، والعدد من الخلايا كل وحدة التخزين من الأنسجة)^7،12. وبصرف النظر عن تقنيات استخدام معدات تقنية معقدة، مثل التصوير المقطعي بالكمبيوتر، وهناك أساسا ثلاثة الأساليب العملية التي تستخدم عادة لتحديد الحجم المطلق لجهاز أو الأنسجة. يمكن تحديد حجم الجهاز بواسطة "القياس الحجمي المباشر" وفقا لمبدأ أرخميدس، أي، قياس حجم الماء أو المحلول الملحي شردهم هيكل عندما غمرت تماما. أجهزة الخنزير كبيرة نسبيا، هذه النهج غير عملي وعرضه لعدم الدقة، نظراً لأنها تتطلب قوارير كبيرة جداً الحجمي/قياس. أكثر سهولة، يمكن حساب حجم الجهاز/الأنسجة من الوزن والكثافة^7،،من¹²¹⁶، الذي يمكن تحديد كفاءة استخدام "أسلوب غمر"^{7،12 ،16} (البروتوكول خطوة 1.1.). يمكن أيضا تقدير حجم الجهاز/الأنسجة باستخدام النهج فولوميتري استناداً إلى "مبدأ كافالييري" (1598-1647). بعبارات بسيطة، مبدأ كافالييري ينص على أن إذا هي مقطوع كائنين في طائرات موازية لطائرة على أرض، ولمحات المقاطع قطع طريق الكائنين في المقابل المسافات من الطائرة على الأرض نفس المناطق، الكائنين تحتوي وحدة التخزين نفسها. وهكذا يمكن تقدير حجم الكائنات على شكل تعسفي كنتاج لمناطقهم الشخصية قسم في الطائرات قسم مواز، بعيد المنال على قدم المساواة، والمسافة بين الطائرات القسم. وهذا أمر يمكن فهمه بالقياس التالية: النظر في الكدسات اثنين تتألف من نفس العدد من القطع متطابقة وتوضع جنبا إلى جنب، مكدس واحد مع منظم عملات مكدسة فوق بعضها البعض في الغلة شكل أسطواني مكدس عمله، والآخر كومة من القطع النقدية مع قبالة مركز وضع القطع النقدية (الشكل 3A). على الرغم من اختلاف الأشكال الموجودة في كلا كدسات عمله، على وحدات التخزين هي نفسها، منذ مجالات القطع على المستويات المقابلة لكلا كدسات (أيمجالات لمحات مقاطع المتوازية تخترق كلا كدسات العملة في مسافات متساوية من الأرض) متطابقة. ويرد تقدير الكم من الأعضاء والأنسجة باستخدام كافالييري المبدأ^7،،من¹²¹⁵ الخنزير في الخطوة 1.2.

تحديد مدى تقلص الأنسجة المتصلة بتضمين النسيجي
في تحليلات للعديد من المعلمات المورفولوجية الكمية المقاسة في أقسام الأنسجة النسيجي، قد أثر انكماش الأنسجة المتصلة بالتضمين التي تحدث خلال الأنسجة المعالجة للأنسجة تكون مصممة وأخذها في الاعتبار. مدى تقلص الأنسجة المتصلة بالتضمين قد يكون المتغير، ويعتمد على كل من الأنسجة، والمعالجة، والتضمين متوسطة^8،،من^1317،،من¹⁸¹⁹. عموما، تحدث التغييرات المتعلقة بتضمين حجم عينة الأنسجة (أي، معظمهم من انكماش) في جميع الأبعاد الثلاثة للفضاء، ومن ثم يؤثر على كافة المعلمات الأبعاد وتقدر الكمية تحليلات ستيريولوجيكال⁸ . أساسا، ويمكن تقدير مدى تقلص الأنسجة المتصلة بالتضمين، معبراً عنها بمعامل انكماش الأنسجة الخطي (f_S)، كما هو موضح في الخطوة 1، 3. ويستخدم لتصحيح معلمات المورفولوجية الكمية (انكماش حساسة)¹⁴.

المرجحة حجم عينة عشوائية منتظمة من الأجهزة/الأنسجة
لإنشاء مجموعة المصرف البيولوجي من عينات الجهاز/أنسجة الخنزير، أثبتت النهج المرجحة حجم عينة عشوائية منتظمة مثل كما هو موضح في الخطوة 2 أن التقنيات العملية، وتوفير الوقت، وتتسم بالكفاءة لجيل ممثل، عينات الأنسجة المتعددة الأغراض^7،،من^89،15.

جيل من المقاطع "عشوائي موحد الخواص" والمقاطع "الرأسية موحدة عشوائي" للتحليلات الكمية ستيريولوجيكال
عينات الأنسجة المصرف البيولوجي بحاجة إلى أن تكون مناسبة لمجموعة واسعة من أساليب التحليل ستيريولوجيكال الكمية المختلفة لتقدير أقصى قدر معلمات التي لا يمكن تحديده دون عينة إعداد الكافي. يمكن تحديد معلمات ستيريولوجيكال الكمية كلها تقريبا، استخدام "الخواص (مستقلة) موحدة عشوائي (أيار) أقسام"^8،9. في المقاطع أيار، هو العشوائية ثلاثي الأبعاد اتجاه الطائرة مقطع عينة الأنسجة. ويمكن تحقيق ذلك بالتوزيع العشوائي للموقف الذي عينة الأنسجة بالنسبة إلى موقف الطائرة القسم, كما هو مطبق في أسلوب "إيسيكتور"¹¹ (الخطوة 3، 1 من البروتوكول)، أو بواسطة التعشيه التوجه للطائرة الباب نسبة إلى عينة الأنسجة، كما هو الحال في أسلوب "أورينتاتور"¹⁰ (الخطوة 3، 2 من البروتوكول). في عينات الأنسجة، مثل الجلد أو الغشاء المخاطي العينة عرض محور عمودي بطبيعة الحال الراهنة، أو المعرفة والتعرف عليها بشكل صحيح، إعداد "موحدة عشوائي (فور) المقاطع العمودية" (البروتوكول خطوة 3.3.) مقطوع تماما داخل الطائرة من بهم المحور الرأسي هو مفيد^8،20. لخطاب كامل الأسس النظرية لأخذ العينات في أيار/فور ومناقشة شاملة المحتملة تحليلات ستيريولوجيكال الكمية المصب، ويحال القارئ المهتمة بالكتب المدرسية للكمية ستيريولوجي في الحياة العلوم^8،9.

Protocol

جميع الأساليب الموصوفة هنا استخدام عينات الأنسجة المستمدة من الحيوانات الميتة، والامتثال الكامل للنظام القانوني الألماني للرفق بالحيوان.

1-فولوميتري

1. غمر تقنية لتحديد كثافة الأنسجة/الجهاز (1 الرقم و الرقم 2) ^{7 , 12 , 16}
   1. إعداد المواد: مشرط ريش والمناشف الورقية والملقط غرامة، جداول المختبرات القياسية، الزجاج أو قنينة بلاستيكية، ملحي 0.9% وأصحاب العينة المشيدة ذاتيا (الشكل 2A).
   2. المكوس قطعة من الأنسجة (الحد الأقصى لحجم: 2 × 2 × 2 سم³) من الجهاز/الأنسجة، على وجه التحديد من حجرة الجهاز للفائدة. الأجهزة الصغيرة، مثل الغدة النخامية أو الغدة الصنوبرية، يتم قياسها بكاملها.
      تنبيه: تأكد من أن حجم العينة لا سيما أصغر من القطر الداخلي للكأس (الخطوة 1.1.5 وما يليها)، ومستوى التعبئة للسماح باكتمال غمر العينة دون الاتصال بالجدران الداخلية للكأس في خطوة 1.1.7.
   3. مسحه العينة مع منشفة ورقية لإزالة السوائل الزائدة من الدم/الأنسجة بدقة.
   4. وزن العينة على مقياس دقة وتسجيل وزن العينة (m_S). تحديد وزن عينات الأنسجة الصغيرة بملغ أقرب (الشكل 1A).
   5. ضع كوب مملوءة بدرجة حرارة الغرفة ملحي 0.9% على المقياس. لا شغل تماما الكأس، للسماح لغمر عينة الأنسجة في الخطوة اللاحقة دون تجاوزه.
      تحذير: استخدام حجم الكأس مناسب للحجم ووزن sample(s) الأنسجة التي يمكن قياسها ونطاق القياس الفعال للجدول. للحصول على عينات أكبر تصل إلى 2 × 2 × 2 سم³، حجم كوب من 50 – 100 مل المناسب في تركيبة مع مقياس قياس من ما يقرب من 100 ملغ إلى 500 غرام، بينما لعينات صغيرة، استخدم قنينة حجم 5 – 10 مل في تركيبة مع جداول الدقة مع قياس يتراوح بين حوالي 0.1 ملغ و 20 غرام.
   6. غمر صاحب العينة (أي، حلقة جامدة بما فيه الكفاية من سلك رفيع أو شيئا من هذا القبيل، الشكل 2 ألف) في المياه المالحة إلى موضع ملحوظ (الأسهم في الشكل 1B, 2B الشكل، و الشكل 2). ثم إعادة تعيين (الفارغ) عرض الجدول إلى صفر.
   7. إرفاق عينة الأنسجة بدقة لصاحب العينة وغمر العينة في المياه المالحة تماما حتى يتم التوصل إلى موقف ملحوظ على صاحب العينة (الأسهم في الشكل 1B, 2B الشكل، و الشكل 2).
      تنبيه: العينة المغمورة وصاحب العينة يجب إلا يكون الاتصال مع الجدران الداخلية أو أسفل الكأس أو على سطح المياه المالحة.
   8. حين عقد صاحب العينة والعينة المغمورة في هذا الموقف، تسجيل الوزن المعروض في الجدول (م_ل)، إشارة إلى وزن المحلول الملحي شردهم عينة الأنسجة (الشكل 1 ج، الشكل 2، و الشكل 2).
   9. حساب حجم العينة (V_S) من م_ل، وكثافة المحلول الملحي في درجة حرارة الغرفة (20 درجة مئوية) (ρ_{المالحة} = 1.0048 g/cm³) الخامس_S = m_L/ Ρ_{المالحة} [ز/g/cm³] (الشكل 1).
   10. حساب كثافة عينات الأنسجة (ρ_عينة) من الوزن (أيكتلة) العينة (m_S) وحجمه (V_S): ρ_عينة = م_S /V_S[g/cm³] (الشكل 1).
   11. لأجهزة قياس بكاملها، كرر القياس ثلاث مرات وحساب الجهاز متوسط الكثافة من قيم قياس واحد. الأجهزة الكبيرة/الأنسجة، إجراء القياسات المتكررة مع عينات مختلفة من حجرة الجهاز/الأنسجة/الجهاز نفسه، وحساب متوسط كثافة من القياسات واحد، تبعاً لذلك.
   12. حساب الحجم الإجمالي لحجرة الجهاز/الأنسجة/الجهاز من الوزن والكثافة (الشكل 1).
2. تطبيق كافالييري-طريقة لتحديد حجم الجهاز الخنزير ⁷
   1. إعداد المواد: صور حاكم، قدمه ذات الورنيّة، سكين، مقص، ملقط، القلم للماء، والبلاستيك الشفاف، الماسح الضوئي، الكاميرا، وعبر شبكات مطبوعة على الورق الشفاف البلاستيك.
   2. ضع كامل الجهاز/الأنسجة على سطح عادي (قطع قاعدة) وقياس الطول (l) للجهاز على طول محورها الطولي (الشكل 3B، الشكل 5A).
   3. قطع الجهاز كاملة/الأنسجة إلى مسافة واحدة موازية شرائح متعامد على المحور الطولي الجهاز (الشكل 3، الرقم 5 (ب)). اختر مسافة d بين فرعين (أي، سمك الفاصل الزمني/قسم تقطيع، عادة حوالي 1 سم) صغيرة بما فيه الكفاية الحصول على عدد كاف من ألواح الأنسجة/الجهاز. عشوائياً موقف القسم الأول على مسافة بين 0 والفاصل الزمني لتقطيع من الهامش للجهاز. بينما تشريح، القاضي بصريا بالموقف والتوجه لكل طائرة القسم، للحصول على حوالي الجهاز المتوازي/الأنسجة في ألواح من سمك موحد تقريبا.
      ملاحظة: العدد اللازم من ألواح الأنسجة/جهاز يعتمد على الشكل والحجم لفحص الجهاز/الأنسجة. إذا كانت الأجهزة الصغيرة أو العينات يجب أن تكون مقطوع في ألواح رقيقة من دي فايف مم، تضمين العينات في أجار قبل تمزيقها (راجع الخطوة 1.3.3.) واستخدام جهاز تقني لتقطيع العينة جزءا لا يتجزأ من أجار. فترات تقطيع المستحب تجريبيا للخنزير الأكثر والأنسجة، وكذلك أمثلة لأجهزة تشريح، مبينة في "المواد التكميلية" من الأنسجة أخذ العينات أدلة للخنزير الطب الحيوي "نماذج" "⁷.
   4. ضع جميع الجهاز/أنسجة ألواح على نفس السطح أسفل على قاعدة شاملة (أي، دأبت على الحق أو الطائرة الجزء الأيسر من كل لوح الجهاز، 3D الشكل، الشكل 5) والعد الألواح (n).
   5. الحصول على ملفات قسم من ألواح الأنسجة بواحدة من الطرق التالية:
      1. بعناية وضع ألواح الأنسجة على الورق الشفاف البلاستيك المسمى على نحو ملائم، مع المحافظة على التوجه لتلك السطوح القسم العلوي والسفلي. تتبع الخطوط العريضة لألواح الأنسجة على الورق الشفاف البلاستيك باستخدام قلم لماء (3E الشكل1-2).
      2. أخذ صور فوتوغرافية لألواح الأنسجة، عقد الكاميرا عمودياً فوق السطوح القسم (3F الشكل). لمعايرة، ضع مسطرة حجم إلى جانب ألواح الأنسجة.
      3. مسح ألواح الأنسجة على ماسح ضوئي مسطح مع المحافظة على التوجه لتلك السطوح القسم العلوي والسفلي (الشكل 3). لمعايرة، ضع مسطرة حجم إلى جانب ألواح الأنسجة.
   6. قياس مجالات القسم (تم تتبعها أو تصويرها أو الممسوحة ضوئياً) لمحات من جميع أنسجة ألواح بواحدة من الطرق التالية:
      1. تراكب أو ركب الملامح لوح الجهاز تتبع مع حجم مناسب، طباعة معايرة الشبكة من الصلبان متباعدة بالتساوي على شفافية البلاستيك وعدد جميع الصلبان ضرب منطقة الشخصية (الرقم 3 أي3-4؛ قارن إلى الشكل 5). حساب مساحة المقطع الشخصية لكل لوح الجهاز بضرب العدد الصلبان ضرب منطقة الشخصية بالمنطقة المقابلة للصليب واحد.
         ملاحظة: للحصول على حجم دقيقة بما فيه الكفاية تقديرات، اختر شبكة مشتركة مع مسافة صغيرة بما فيه الكفاية بين الصلبان المجاورة، حيث أن يعبر في متوسط على الأقل 100 سوف تصل السطوح قسم من الألواح جهاز واحد في كل دراسة حالة للدراسة . الأحجام المستحب تجريبيا عبر الشبكة لأعضاء وأنسجة الخنزير الأكثر مبينة في "المواد التكميلية" من الأنسجة أخذ العينات أدلة للخنزير الطب الحيوي "نماذج" "⁷.
      2. قياس المجالات من ألواح الأنسجة في الصور الرقمية من الصور/المسح الضوئي باستخدام المناسبة المتاحة تجارياً أو مجانية مورفوميتري الناعمة-وتطبيقات الأجهزة (الشكل 3 ح)، مثل نظام تجاري صورة تحليل²¹، أو إيماجيج²².
         تنبيه: ملاحظة أن أحد الأنسجة بلاطة (الأول أو آخر) ينصب على الماسح الضوئي يستريح على سطحه الطبيعية، على التوالي، ويواجه الكاميرا مع سطحه الطبيعية. ولذلك، الممسوحة ضوئياً صورة صورة صور هذه البلاطة، لن تظهر على سطح قسم. ولذلك، يتم قياس أي ملف تعريف المجال قسم في الصورة الصورة/الصورة الممسوحة ضوئياً من هذه البلاطة الأنسجة (الرقم 3I). أيضا ملاحظة الإسقاط الزائد الموجودة في الصور الممسوحة ضوئياً، والصور الفوتوغرافية من ألواح الجهاز/الأنسجة، أي، فقط قياس مجالات ملامح المقطع الفعلي، ولكن ليس من الأنسجة في صورة الكذب وراء سطح البلاطة القسم (الشكل 12 جه).
   7. حساب حجم الجهاز يقدر كنتاج لمجموع كل قسم مجالات المقابلة الشخصية جميع ألواح الأنسجة للحالة الواحدة (أياستمرار لليمين أو اليسار، على التوالي، على سطح الجزء العلوي أو السفلي من كل جهاز لوح ومتوسط سمك ألواح (أي، حاصل قسمة قياس طول المحور الرأسي الجهاز (l) وعدد ألواح)¹⁵.
3. تحديد مدى انكماش أنسجة ثلاثية الأبعاد ذات الصلة بتضمين أثناء تجهيز عينات الأنسجة لعلم الأنسجة
   1. إعداد المواد: مبضع ريش والملقط واجار، قوالب صب المعادن، والماسح الضوئي الرقمي وحاكم الحجم (مثلاً، ورق الرسم البياني).
   2. قطع سطح قسم طائرة جديدة، من عينة أنسجة ثابتة.
      ملاحظة: إذا كان بسهولة باستخدام عينات من تضمين الأنسجة (الناعمة) تشوه (الأنسجة الدهنية والأنسجة هلامية)، عينة الأنسجة الثابتة في أجار قبل تقطيع (الشكل 4 أ).
   3. لتضمين عينة في أجار:
      1. مزيج مسحوق أجار القياسية المستخدمة للأحياء المجهرية الثقافة المتوسطة مع حجم مناسب للمياه (حوالي 0.5 – 1 ز أجار/10 مل من الماء) في كوب زجاج. يقلب الخليط والحرارة في فرن ميكروويف في 700 ث حتى الغليان 3 – 5 س. يقلب الخليط وجلب ليغلي مرة أخرى ل s 3 – 5.
      2. بشكل اختياري، لزيادة على النقيض أجار إلى عينة الأنسجة، صبغ أجار السائل، مثلاً، بالحبر الأسود (إضافة الحبر 1 مل 10 مل أجار السائل الساخن ويقلب بشدة).
      3. صب أجار الساخنة في قالب صب (مثلاً، العفن معدنية المستخدمة البارافين التضمين، الرقم 10 ألف-دال)، وغمر عينة الأنسجة الثابتة في أجار الحارة. واسمحوا أجار بارد حتى التجميد، وإزالة العفن، وخفض كتلة أجار مع الأنسجة المضمنة باستخدام مبضع أو شفرة حلاقة.
         تنبيه: أثناء التعامل مع أجار السائل الساخن، ارتداء نظارات واقية وقفازات. عينات الأنسجة عملية ثابتة في الحل فورمالدهايد تحت عادم هود وارتداء نظارات واقية وقفازات المختبر.
   4. ضع العينة مع سطحه المقطع أسفل على ماسح ضوئي مسطح، جنبا إلى جنب مع حاكم حجم ومسح سطح القسم (الشكل 4 أ، ب).
   5. تحديد المنطقة سطح مقطع عينة الأنسجة الثابتة (_f) في المسح الرقمي، باستخدام واحدة من التقنيات الموضحة في الخطوة 1.2.6 (الشكل 4 باء).
   6. تضمين العينة في المتوسط التضمين البلاستيكية، مثل الإيبوكسي (مثلاً، ابن) أو جليكولميثاكريلاتي/ميثيلميثاكريلاتي (GMA/مجلس العمل المتحد)²³، البروتوكولات القياسية التالية^23،،من²⁴²⁵ ( الشكل 4). ضمان المحافظة على سطح مقطع عينة الثابتة الممسوحة ضوئياً في الخطوة السابقة (1.3.4) في العينة جزءا لا يتجزأ من البلاستيك.
      ملاحظة: للحفاظ على التوجه لقسم سطح العينة أثناء معالجة العينة، استمرار وضع العينة مع سطحه القسم المقصود تواجه هبوطاً في الكاسيت التضمين أو قالب الصب، أو وضع علامة المقطع المقصود السطح (أو الجانب الآخر من العينة) مع الحبر.
   7. قص مقطع النسيجي من كتلة البلاستيك المقابلة لسطح العينة الأنسجة الثابتة (الخطوة 1.3.2) الفرع الأصلي استخدام تحميل المقطع على شريحة زجاجية (الشكل 4) مبضع (الشكل 4)، ووصمة بشكل روتيني ( مثلاً، وتوضع وويوزين وصمة عار، ح & ه)^24،25.
      تنبيه: لتلقي مقطع النسيجي تقريبا في نفس الطائرة كسطح المقطع الأصلي من عينة الأنسجة الثابتة، بعناية على ضبط موقف كتلة البلاستيك في جبل مبضع قبل تمزيقها.
   8. مع المقطع الملون التي تواجه هبوطاً على ماسح ضوئي مسطح جنبا إلى جنب مع حاكم حجم مكان الشريحة وتفحص المقطع (4E الشكل).
   9. تحديد مجال المقطع عينة الأنسجة جزءا لا يتجزأ من البلاستيك(_ﻫ)في المسح الرقمي، باستخدام واحدة من التقنيات الموضحة في الخطوة 1.2.6 (4F الشكل).
   10. حساب انكماش الأنسجة المتصلة بتضمين متوسط (لكل الأنسجة والمتوسطة التضمين) من مجالات قياس الملامح القسم المقابلة لعينات الأنسجة قبل وبعد تضمين في تضمين المتوسطة من البلاستيك. ويحسب معامل الانكماش الخطي و_s كالجذر التربيعي لحاصل قسمة مجالات لمحات قسم من عينات الأنسجة ن بعد تضمينها في البلاستيك التضمين المتوسطة (أ) (_ه) وفي المناطق الملامح القسم المقابلة لعينات الأنسجة نفسها قبل تضمينها في البلاستيك التضمين المتوسطة (_f) (الشكل 4)¹⁴.

2-حجم المرجحة عينة عشوائية منتظمة بنقطة الفرز وتجهيز عنها الأنسجة لأنواع التحليل المصب⁷

1. إعداد المواد: المسطرة، الفرجار، سكين، مقص، ملقط، القلم للماء، نقطة/عبر شبكات مطبوعة على الورق الشفاف البلاستيك، وجداول الأرقام العشوائية.
   ملاحظة: نسخ قوالب لعبر الشبكات (5-60 مم) يتم توفيرها في "المواد التكميلية" من الأنسجة أخذ العينات أدلة للخنزير الطب الحيوي "نماذج" "⁷.
2. ضع الجهاز/الأنسجة على سطح عادي (قطع قاعدة) وقياس الطول (l) للجهاز على طول محورها الطولي (الشكل 5A، الشكل 6A).
3. قطع الجهاز/الأنسجة كاملة إلى مسافة واحدة موازية شرائح متعامد على محورها الطولي (الشكل 5 (ب)). اختر مسافة d بين فرعين (أيتقطيع المقطع الفاصل الزمني/سمك، عادة حوالي 1 سم) صغيرة بما يكفي للحصول على عدد كاف من شرائح الأنسجة/الجهاز. عشوائياً موقف القسم الأول على مسافة بين 0 والفاصل الزمني لتقطيع من الهامش للجهاز. بينما تشريح، القاضي بصريا بالموقف والتوجه لكل طائرة الفرع للحصول على ألواح متوازية تقريبا الجهاز/الأنسجة من سمك موحد تقريبا.
   ملاحظة: العدد اللازم من ألواح الأنسجة/الجهاز يعتمد على حجم الأنسجة/الجهاز فحص وعدد مواقع عينات الأنسجة. إذا كانت الأجهزة الصغيرة أو العينات يجب أن تكون مقطوع في ألواح رقيقة من دي فايف مم، تضمين العينات في أجار قبل تمزيقها (راجع الخطوة 1.3.3.) واستخدام الأجهزة التقنية لتقطيع العينة جزءا لا يتجزأ من أجار. وترد في "المواد التكميلية" من الأنسجة أخذ العينات أدلة للخنزير الطب الحيوي "نماذج" "⁷فترات تقطيع المستحب تجريبيا للخنزير الأكثر والأنسجة، وكذلك أمثلة لتشريح الأجهزة.
4. ضع جميع الجهاز/أنسجة ألواح على نفس السطح أسفل على قاعدة قطع (الشكل 6B).
5. تراكب ألواح الأنسجة مع شبكة عبر حجم مناسب مطبوعة على شفافية بلاستيك عن طريق وضع الأبعد ترك العلوي عبر الشبكة عبر نقطة عشوائية من الأنسجة (الشكل 5-د، الشكل 6B).
   ملاحظة: اختر شبكة مشتركة مع مسافة صغيرة بما فيه الكفاية بين الصلبان المجاورة، حيث أنه في كل حالة دراسة لهذه الدراسة، سوف تصل الصلبان على الأقل ضعف عدد surface(s) قسم من حجرة الأنسجة أخذ عينات، كعدد العينات التي يجب أن يؤخذ من هذه المقصورة الأنسجة. الأحجام المستحب تجريبيا عبر الشبكة لأعضاء وأنسجة الخنزير الأكثر مبينة في "المواد التكميلية" من الأنسجة أخذ العينات أدلة للخنزير الطب الحيوي "نماذج" "⁷.
6. مارك وعدد جميع الصلبان ضرب الأنسجة (على التوالي، المقصورة الأنسجة الفرعية أخذ عينات). استمرار تطبيق طريقة موحدة للعد والترقيم من الصلبان ضرب حجرة الأنسجة أخذ عينات في جميع الأنسجة ألواح، مثلاً، بترقيم متعاقبة من الصلبان كل منها في كل سطر بسطر، من اليسار إلى اليمين ومن من الأعلى إلى الأسفل، أو، مثلاً، بترقيم الصلبان في بلاطة نسيج واحد تلو الآخر في اتجاه عقارب الساعة، بدءاً من الصليب الأقرب إلى موقف 12:00 م، كما أظهرت القبض في الشكل 5E.
7. قسمة العدد الصلبان ضرب حجرة الأنسجة/الأنسجة لتكون عينات (n) عدد العينات إلى يتم إنشاؤها للحصول على الفاصل الزمني العينة المنتظمة (i).
8. تحديد موضع المعاينة الأولى باختيار عدد عشوائي x في الفاصل الزمني بين 1، و. لهذا، استخدم جدول رقم عشوائي. وضع علامة على موضع أخذ العينات الأول (x) وكل القادم x + i، x + 2أنا x + 3ط، إلخ، عبر ضرب حجرة الأنسجة/الأنسجة أخذ عينات على شفافية البلاستيك استخدام قلم لماء (5F الشكل).
   ملاحظة: الجداول رقم عشوائي يمكن سهولة وسرعة إنشاء باستخدام أرقام عشوائية على إنترنت.
9. العلامة الأنسجة تقاطع المواقع المقابلة للملحوظة بزيادة شفافية البلاستيك قليلاً ووضع قطعة صغيرة من ورق حلويات فارغة ونظيفة على سطح البلاطة الأنسجة باستخدام زوج من ملاقط (الشكل 5، 6E الشكل ).
10. المكوس عينة أنسجة من مواقع عينات (ح رقم 5، 6F الشكل، الشكل 7 أ)، وكذلك تقسيم لأنواع مختلفة من التحاليل اللاحقة (الشكل 6، الشكل 7 أ-ب)، كما هو محدد في الجدول 1.
11. وبعد أخذ العينات، تنظيف الورق الشفاف البلاستيك بالماء الدافئ والصابون، وجافة، وإعادة استخدامها.

3-توليد عشوائي موحد الخواص (أيار) المقاطع والمقاطع الرأسية موحدة عشوائي (فور) للتحليلات الكمية ستيريولوجيكال

1. تقنية "إيسيكتور"
   1. إعداد المواد: شفرات الحلاقة أو مبضع واجار، وقوالب الصب كروية (مثلاً، صب قوالب لحلوى، التي يمكن الحصول عليها من الموردين حلواني)، والمشابك foldback والملقط.
   2. ضع قطعة حجم الكافي (1 × 1 × 1 سم³) الثابتة، بشكل منهجي عشوائياً عينات أنسجة في قالب صب كروية وعقد معا المشابك foldback، وملء القالب مع أجار السائل الحار (الشكل 8 أ-ه).
   3. إزالة المجال أجار (الشكل 8F) من قالب الصب بعد التجميد لاجار.
   4. لفة في المجال أجار مع العينة جزءا لا يتجزأ من النسيج عبر الجدول، وقف، والفرع هو في موقف عشوائي.
      ملاحظة: الطائرة قسم الناتج قسما أيار (الرقم 8F-ز).
   5. المضي قدما بتضمين عينات الأنسجة في راتنج البلاستيك مثل التقييم البحري العالمي/مجلس العمل المتحد، الحفاظ على اتجاه المقطع أيار طائرة (انظر 1.3.5).
2. تقنية "أورينتاتور"
   1. إعداد المواد: شفرات الحلاقة أو مبضع، أجار، الملقط، جدول/جداول الأرقام العشوائية، ويطبع الدوائر اكويانجولار، وجيب التمام المرجحة.
      ملاحظة: تتوفر نسخ القوالب من الدوائر في المنشورات السابقة^8،26.
   2. ضع العينة من الأنسجة الثابتة (أو الأنسجة الثابتة جزءا لا يتجزأ من أجار) في طباعة دائرة اكويانجولار مع حافة واحدة موازية إلى 0-180 ° الاتجاه (الشكل 9 ألف، الرقم 10E).
   3. تحديد زاوية عشوائية باستخدام جدول الأرقام العشوائية. البحث عن علامات المطابقة في نطاق دائرة اكويانجولار، الذي يستند العينة. استخدام هذه العلامات، قطع مقطع من خلال العينة (أو عن طريق أجار المحيطة بالعينة جزءا لا يتجزأ من النسيج)، مع الطائرة الفرع موجهة موازية لاتجاه الزاوية العشوائية المشار إليها في نطاق دائرة اكويانجولار، والرأسية إلى يستريح سطح العينة (9B الشكل-C، الرقم 10F).
   4. وضع كتلة الأنسجة مع سطح المادة التي تم إنشاؤها في الخطوة السابقة التي تواجه الجانب السلبي في دائرة المرجحة جيب التمام مع حافة سطح يستريح توضع موازية لاتجاه 1-1 (الشكل 9، الرقم 10 ح).
   5. كرر الخطوة 3.2.3 وقص مقطع جديد من خلال العينة بزاوية عشوائية مصممة باستخدام الجدول رقم عشوائي (9E الشكل-واو، الرقم 10I-ي).
      ملاحظة: الطائرة القسم الناتجة قسم أيار.
   6. إذا كان ذلك مناسباً، تحدد مجال الشخصية قسم أيار عينة الأنسجة الثابتة للبت في انكماش الأنسجة المتصلة بالتضمين (الشكل 9-ي) كما هو موضح في الخطوة 1، 3، والمضي قدما لتضمين عينات الأنسجة في البلاستيك الراتنج مثل التقييم البحري العالمي/مجلس العمل المتحد.
3. جيل مقاطع الرأسية موحدة عشوائي (فور)
   1. إعداد المواد: شفرات الحلاقة أو مبضع، أجار، الملقط، جدول/جداول الأرقام العشوائية، ويطبع من الدوائر اكويانجولار.
      ملاحظة: تتوفر نسخ القوالب من الدوائر في المنشورات السابقة^8،26.
   2. تحديد محور عمودي ضمن العينة الأنسجة الثابتة التي دائماً معترف بها في العينة/الأقسام أثناء الخطوات اللاحقة.
      ملاحظة: عادة ما يتم اختيارها المحور العمودي على سطح العينة الأنسجة الطبيعية كالمحور العمودي.
   3. إذا كان ذلك مناسباً، تضمين العينة في أجار (الشكل 11 باء).
      ملاحظة: تضمين أجار قبل فور-أو أيار-تقطيع العينة الثابتة المفضل عموما لعينات صغيرة ورقيقة وهشة، أو لينة. أيضا استخدام التضمين أجار من عينات لتسهيل وضع العينة فور مقطعة أثناء تضمين اللاحقة للعينة في المتوسط راتنج البلاستيك.
   4. ضع العينة في طباعة دائرة اكويانجولار، مع المحور الرأسي أورثوجونالي موجهة إلى طائرة الجدول الجدول/الورقة (الشكل 11).
   5. قص العينة بزاوية عشوائية (تحديد باستخدام جدول أرقام عشوائية) مع الطائرة مقطع متعامد إلى الجدول وموازية للمحور الرأسي الحصول على طائرة قسم فور (الشكل 11).
   6. إذا كان ذلك مناسباً، تحدد مجال الشخصية قسم أيار عينة الأنسجة الثابتة للبت في انكماش الأنسجة المتصلة بالتضمين كما هو موضح في الخطوة 1، 3 (مقارنة الرقم 9-ي)، والمضي قدما لتضمين عينات الأنسجة في راتنج البلاستيك مثل التقييم البحري العالمي/مجلس العمل المتحد.

النتائج

تقنية غمر لتحديد كثافة الأنسجة/الجهاز

رقم 12A ب- يظهر تصميم الممثل كثافة وحجم الكلي الخنزير باستخدام تقنية غمر هو موضح في الخطوة 1، 1 (الشكل 1و الشكل 2). وترد نتائج أكثر تمثيلاً لقياسات ?...

Discussion

جيل من المصرف البيولوجي عينة مجموعات من النماذج الحيوانية النقانق يتطلب تقنيات قوية والبروتوكولات لتحديد حجم الجهاز/الأنسجة، جيل استنساخه من الممثل، عينات الأنسجة الزائدة مناسبة لمجموعة واسعة نطاق من أساليب تحليل مختلفة، التعشيه التوجه لأقسام عينة للتحاليل الكمية ستيريولوجيكال. الأس?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Agar	Carl Roth GmbH, Germany	Agar (powder), Cat.: 5210.3	Dissolve approximately 1 g of agar in 10 ml cold water in a glass or plastic beaker, heat in microwave-oven at 700 W, boil the solution twice with rigorous stirring. Cast into mold while still warm and let solidify. Caution: While handling with hot liquid agar, wear protective goggles and gloves.
Caliper	Hornbach Baumarkt GmbH, Bornheim, Germany	Schieblehre Chrom/Vernickelt 120 mm Cat.: 3664902	Any kind of caliper (mechanical or electronic) will do as well.
Casting molds (metal)	Engelbrecht Medizin & Labortechnik, Edermünde, Germany	Einbettschälchen aus Edelstahl, 14 x 24 x 5 mm, Cat.: 14302b	Any other kind of metal casting mold used for paraffin-embedding will do as well.
Copy templates of cross grids (5mm - 6 cm)	n.a.	n.a.	Copy templates of cross grids (5mm - 6 cm) are provided in the supplemental data file of Albl et al.  Toxicol Pathol. 44, 414-420, doi: 10.1177/0192623316631023 (2016)
Copy templates of equiangular and cosine-weighted circles	n.a.	n.a.	Copy templates of equiangular and cosine-weighted circles are provided in Nyengaard & Gundersen. Eur Respir Rev. 15, 107-114, doi: 10.1183/09059180.00010101 (2006) and in Gundersen et al. Stereological Principles and Sampling Procedures for Toxicologic Pathologists. In: Haschek and Rousseaux´s Handbook of Toxicologic Pathology. 3rd ed, 215-286, ISBN: 9780124157590 (2013).
Foldback clamps (YIHAI binder clips, 15 mm and 19 mm)	Ningbo Tianhong Stationery Co ltd., China	Y10006 and Y10005	Any other type of standard office foldback clamps will do as well.
Forceps (anatomical)	NeoLab Migge GmbH, Heidelberg, Germany	neoLab Standard -Pinzette 130 mm, anatomisch, rund, Cat.: 1-1811	Any type of anatomical forceps will do.
Formaldehyde-solution 4%	SAV-Liquid Produktion GmbH, Flintsbach, Germany	Formaldehyd 37/40 %, Cat.: 1000411525005	Dilute to 4% from concentrated solution. Buffer to neutral pH. Wear appropriate eye-, hand- and respiratory protection. Process tissue samples fixed in formaldehyde solution under an exhaust hood and wear protective goggles and laboratory gloves.
Graph paper (for calibration)	Büromarkt Böttcher AG, Jena, Germany. www.bueromarkt-ag.de	Penig Millimeterpapier A4, Cat.: 2514	Any type of graph paper (scaled in millimeter) will do.
Laboratory beakers (5ml, 10 ml, 50 ml, 100 ml)	NeoLab Migge GmbH, Heidelberg, Germany	Becherglas SIMAX® , niedrige Form, Borosilikatglas 3.3 Cat.: E-1031, E-1032, E-1035, E-1036	Any kind of glass- or plastic beakers of 5 – 100 ml volume will do.
Laboratory scale(s)	Mettler Toledo GmbH, Gießen, Germany	PM6000	Any standard laboratory scales with measuring ranges between 0.1 mg to approximately 20 g, respectively between 100 mg to approximately 500 g will do
	Sartorius AG, Göttingen, Germany	BP61S
Microtome blades	Engelbrecht Medizin & Labortechnik, Edermünde, Germany	FEATHER Microtome blasdes S35, Cat.:14700	Any kind of single-use microtome blades will do.
Morphometry/planimetry software/system	National Institute of Health (NIH)	ImageJ	Download from https://www. imagej.nih.gov/ij/ (1997).
Zeiss-Kontron, Eching, Germany	VideoplanTM image analysis system	Out of stock
Photo camera	Nikon	D40	Any kind of digital photocamera that can be mounted to a tripod  will do.
Plastic transparencies	Avery Zweckform GmbH, Oberlaindern, Germany	Laser Overhead-Folie DINA4 Cat.:  3562	Any (laser)-printable plastic transparency will do.
Random number tables	n.a.	n.a.	Random number tables can conveniently be generated (with defined numbers of random numbers and within defined intervals), using random number generators, such as: https://www.random.org/
Razor blades	Plano GmbH, Wetzlar, Germany	T5016	Any kind of razor blades will do.
Ruler	Büromarkt Böttcher AG, Jena, Germany. www.bueromarkt-ag.de	Office-Point Lineal 30 cm, Kunststoff, transparent, Cat.: ln30	Any kind of cm-mm-scaled ruler will do as well.
Saline (0.9%)	Carl Roth GmbH, Germany	Natriumchlorid, >99% Cat.: 0601.1	To prepare 0.9% saline, dissolve 9 g NaCl in 1000 ml of distilled water at 20°C.
Scalpel blades	Aesculap AG & Co KG, Tuttlingen, Germany	BRAUN Surgical blades N°22	Any kind of scalpel blades will do.
Scanner	Hewlett-Packard	hp scanjet 7400c	Any type of standard office scanner capable of scanning with resolutions from 150-600 dpi will do.
Slicing devices	n.a.	n.a.	Examples forself constructed slicing devices can be found in Knust, et al. Anatomical record. 292, 113-122, doi: 10.1002/ar.20747 (2009) and in the supplemental data file of Albl et al.  Toxicol Pathol. 44, 414-420, doi: 10.1177/0192623316631023 (2016).
Spherical casting molds (e.g., in 25.5 mm diameter)	Pralinen-Zutaten.de, Windach, Germany	Pralinen-Hohlkugeln Vollmilch, 25.5 mm	Spherical casting molds can as well be be self-constructed, or obtained from other confectioner suppliers (for for pralines). The casting molds indicated here are actually the package/wrapping of hollow pralines bodies (first eat the pralines and then use the package for generation of i-sector sections)
Thin wire	Basteln & Hobby Schobes, Straßfurth, Germany. www,bastel-welt.de	Messingdraht (0.3 mm) Cat.: 216464742	Any other kind of thin wire will also do.
Tissue paper	NeoLab Migge GmbH, Heidelberg, Germany	Declcate Task Wipes-White, Cat.: 1-5305	Any other kind of laboratory tissue paper will do as well.
Waterproof pen	Staedler Mars GmbH & Co KG, Nürnberg, Grmany	Lumocolor permanent 313, 0.4 mm, S, black, Cat.: 313-2	Any other kind of waterproof pen will do as well.