لابيرينثيكتومي الجراحية من الفئران لدراسة نظام الدهليزية

Summary

ويصف هذا البروتوكول labyrinthectomy الجراحية من الفئران، ووسيلة مفيدة لدراسة المنظومة الدهليزية.

Abstract

دراسة المنظومة الدهليزية أو بعملية التعويض الدهليزية، وضعت عددا من الأساليب لتسبب ضررا الدهليزية، بما في ذلك لابيرينثيكتومي الجراحي أو الكيميائي والدهليزيه نيوريكتومي. لابيرينثيكتومي الجراحية طريقة بسيطة وموثوق بها وسريعة نسبيا. وهنا يصف لنا تقنية جراحية للفئران لابيرينثيكتومي. شق بوستاوريكولار تتم تحت التخدير العام إلى فضح القناة السمعية الخارجية وغشاء الطبل، بعد ذلك يتم إزالة غشاء الطبل والعظيمات دون stapes. الشريان stapes، الذي يقع بين stapes والإطار البيضاوي، هو بنية ضعيفة ويجب الحفاظ عليها للحصول على حقل جراحية واضحة. حفرة فينيستراتي الدهليز يرصد مع بر حفر 2.1-مم متفوقة stapes. ثم الإيثانول 100% هو حقن من خلال هذا الثقب ويستنشق عدة مرات. تشريح دقيق تحت المجهر والمراقبة الدقيقة النزيف ضرورية للحصول على نتائج يمكن الاعتماد عليها. وتعتبر أعراض فقدان الدهليزية، مثل رأرأة وآماله الرأس، واقتراح متداول، فورا بعد الجراحة. يمكن استخدام روتارود أو تناوب الرئاسة الاختبار موضوعيا وكمياً تقييم الوظيفة الدهليزية.

Introduction

ومن الضروري الجهة الدهليزية للتحكم بالتوازن والعين. وظيفة دهليزية عادي يعتمد على إشارات الزبائ متناظرة من أجهزة الدهليزية في الأذنين الداخلية اثنين. Hypofunction الدهليزية أو فقدان يستحث الدوخة، رأرأة، واختلال الوضعي. بعد الضرر الحاد، يسترد الوظيفة الدهليزية تلقائياً في غضون عدة أيام، عملية تعرف بتعويض الدهليزية^1،2. الدهليزية تعويض العجز ثابت عملية الاسترداد تتعلق بخلل نشاط يستريح عفوية بين الأنوية الدهليزية عن وكونترالاتيرال. تعويض العجز في دينامية الدهليزية ويتحقق أساسا عن طريق استبدال الحسية والسلوكية (باستخدام مدخلات بصرية أو سوماتوسينسوري)³. هذه العمليات جذابة اللدونة العصبية الدراسات^4،5.

وقد وضعت عددا من الطرق لدراسة المنظومة الدهليزية والآليات التي تعزز اللدونة العصبية أثناء التعويض الدهليزية، مثل لابيرينثيكتومي الكيميائية والجراحية والدهليزيه نيوريكتومي^{5،6 ،،}من⁷⁸. نيوريكتومي الدهليزية بطريقة معينة للحث على خسارة الدهليزية كاملة، لكن هو إجراء أكثر صعوبة والغازية وقد تؤدي إلى تلف الدماغ^8،9. هذا الأسلوب يتطلب مهارة جراحية أكبر ووقتاً أكثر مما لابيرينثيكتومي. لابيرينثيكتومي الكيميائية بما في ذلك مع الجنتامايسين، أرسانيلاتي، وجهاز، هو أسهل، ويمكن أن تسفر عن نتائج يمكن الاعتماد عليها^10،،من¹¹¹². ومع ذلك، القوقعة قد تتضرر أيضا وفقدان الدهليزية قد تتطور على مدى الساعة¹¹. بالإضافة إلى ذلك، آثار المواد الكيميائية في الدماغ، والتي ينبغي الحفاظ عليها لتقييم دقيق، غير واضحة. قدم لأول مرة في الدراسات الحيوانية في عام 1842¹⁵ لابيرينثيكتومي الجراحية وذكر أولاً في الفئران في عام 1936¹⁶. هذه التقنية قد استخدمت منذ ذلك الحين في العديد من الدراسات الحيوانية^5،17،،من¹⁸¹⁹. Labyrinthectomy الجراحية طريقة محددة، يمكن الاعتماد عليها، وبسيطة نسبيا. ^{13 , 14} -وعلاوة على ذلك، أعراض الضرر الدهليزية تعتبر فورا بعد الجراحة. هنا، نحن تصف لنا تقنية جراحية للجرذ لابيرينثيكتومي.

Protocol

وأجرى هذه الدراسة وفقا لرعاية الحيوان المؤسسية واستخدام اللجنة لسول الوطنية المستشفى الجامعي (14-0148-C1A1)، التي هي معتمدة من الرابطة للتقييم والاعتماد لرعاية الحيوانات المختبرية الدولية.

ملاحظة: التجارب التي أجريت على الفئران الذكور سبراغ داولي (SD) من 7-8 أسابيع من العمر (200/250 g). وكان أقلمة الحيوان كل الظروف المختبرية لمدة أسبوع واحد قبل البدء التجربة. تم إيواء الحيوانات في غرفة تسيطر على درجة الحرارة والرطوبة مع ثابت 12-h:12-الضوء: الظلام ح دورة مع حرية الوصول إلى الغذاء والماء.

1-لابيرينثيكتومي

1. وتشمل الأدوات الجراحية يعقم مع لوحة عقيمة. تطهير منطقة التشغيل مع الإيثانول 70%. تستخدم ثني عقيمة والحفاظ على ظروف معقمة أثناء الجراحة.
2. ارتداء ثوب، قناع (لتغطية الآنف والفم)، الحد الأقصى (لتغطية الرأس)، وزوج من القفازات المعقمة. يجب أن تأتي الأدوات الجراحية فقط في اتصال مع السطوح العقيمة.
3. حقن مخدر تيليتاميني-زولازيبام (40 مغ/كغ من وزن الجسم) عضليا في فخذه الآنسي أو إينترابيريتونيلي، وإكسيلازيني (10 مغ/كغ من وزن الجسم) عضليا أو إينترابيريتونيلي.
   ملاحظة: وسائط أخرى من التخدير العام، بما في ذلك استنشاق isoflurane، يمكن أيضا استخدامها.
4. مكان الفئران على لوح الاحترار (مبدئياً في 42 درجة مئوية). تطبيق مرهم العين زيوت التشحيم لكلتا العينين من الفئران لمنع جفاف العين في حين تحت التخدير.
5. وضع الفئران في الجانب الأيمن. يحلق الفراء في منطقة العمليات الجراحية مع مقص الشعر. تطهير الموقع مع الإيثانول 70%.
6. حقن 1% ليدوكائين هيدروكلوريد تحت الجلد في منطقة ريترووريكولار اليسرى.
7. استخدام شفرة المبضع #15، جعل شق ريترواوريكولار سم ~5.0. فصل العضلات ورباط لفضح القناة السمعية الخارجية مع قزحية مقص (الشكل 1A). قليلاً فتح القناة السمعية الخارجية باستخدام شفرة #15 أو المقص آيريس (الشكل 1B). تعرض غشاء الطبل (الشكل 2A) على نطاق واسع.
8. تحت مجهر (7.5 X أو 12.5 X)، إزالة غشاء الطبل والعظيمات استثناء stapes، استخدام الملقط. فصل العضلات في ريدج لامبدويدال مع شفرة #15 أو المقص آيريس (الشكل 2).
9. استخدام حفر على سرعة منخفضة (< 3000 لفة في الدقيقة) مع بر الماس (2.1 أو 1.4 ملم)، حفر العظم الفقاعة tympanic حول نقطة لخروج العصب الوجهي (الشكل 3A). تحديد الشريان ستابيديال. الحرص على عدم الأضرار الشريان ستابيديال أثناء عملية الحفر.
10. مواصلة الحفر الدهليز متفوقة على الشريان ستابيديال ويعرض الإطار جولة والقناة نصف دائري الأفقي عظمى. فتح القناة نصف دائري الجانبية قرب لها أمبالا. مواصلة الحفر في طائرة القناة نصف دائري الأفقي والحفر ampulla قناة نصف دائري متفوقة.
11. نضح محتويات الدهليز استخدام إبرة ز 18 أو 22-ز. حقن ونضح 1 سم³ من الإيثانول 100% 3 x.
12. إغلاق العضلات والجلد في طبقتين مع خيوط توقف بسيطة.
13. لا تترك حيوان غير المراقب حتى قد وعيه كافية للحفاظ على ريكومبينسي القصية. تبقى الفئران الحارة حتى أنه يوقظ استخدام وسادة تدفئة أو مصباح حرارة. بعد الصحوة، نقل الفئران إلى أقفاص فردية في غرفة تتميز بالظروف البيئية المعتادة.
14. إدارة المضادات الحيوية (مثلاً، سيفازوليني 20 مغ/كغ، ميثوبريم-سلفوناميد 100 ميليلتر تحت الجلد، أو البنسلين 300,000 وحدة دولية) حسب الحاجة في اليوم الأول؛ مسكن (عدم شبائه الأفيون؛ مثلاً، ميتاكام 2 مغ/كغ، والايبوبروفين 5 ملغ/كغ تحت الجلد) يمكن أيضا إعطاء.

2. جراحة الشام

1. لعملية جراحية الشام كعنصر تحكم، تنفيذ نفس الإجراءات الجراحية وبعد الجراحة (وفقا للفرع 1)، بما في ذلك التعرض للقناة السمعية الخارجية وغشاء الطبل (الخطوة 1، 7)، إزالة غشاء الطبل والعظيمات، مفرزة من العضلات في لامبدويدال ريدج (الخطوة 1.8)، ولكن لا فتح القناة نصف دائري أو حقن الإيثانول.

3-التحقق من فقدان الوظيفة الدهليزية

ملاحظة: يمكن تقييم الخسائر المتعلقة بالوظيفة الدهليزية باستخدام أما اختبارات الوظيفة الدهليزية أو السلوكية. ^{13 , 17 ,} وتشمل الاختبارات السلوكية ¹⁸ تقييم التباين الوضعي وراراه.

1. تحديد التباين الوضعي الذي يشمل عفوية أو مقولة البرميل المتداول، تقع على الجانب الأيسر، أو يتحرك في حين يميل نحو الجانب ليسيونيد¹⁸. مشاهدة فيديو 1.
2. تحديد رأرأة قبل تفتيش البصري لحركة العين الطوعية. عندما تغيب رأرأة عفوية في الدولة، ويستريح نفخة الهواء بلطف على رأسه الحيوان¹⁸. مشاهدة فيديو 2.

النتائج

تم التحقق من صحة نجاح عملية جراحية قبل الاختبارات السلوكية. أظهرت جميع الحيوانات سلوك نموذجية لفقدان الوظيفة الدهليزية الانفرادية. المتداول للبرميل العفوي كان واضحا فورا بعد الجراحة، ويجري أثارت من قبل نفخة هواء فوق الرأس أو لمسة خفيفة للجسم في مرحلة الإنعاش المبكر (

Discussion

هذا الأسلوب طريقة مفيدة لإنشاء فقدان الوظيفة الدهليزية المفاجئ ودائمة وكاملة. ويمكن استخدام هذا لدراسة الأمراض الدهليزية، مثل التهاب الأعصاب الدهليزية، والورم الصوتية، ومرض مينيير. العديد من الدراسات قد استخدمت هذه التقنية لدراسة اللدونة العصبية من الأنوية الدهليزية أو عملية مركزية ذ?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
ASPIRATOR KB-012	KOH BONG & CO., LTD.	KB-012	Medical aspirator
Blade: #15	Fine Science Tools	#10015-00	Blades for #7 Scalpel Handles, #15
Carbon Steel Burrs	Fine Science Tools	#19007-05	shaft diameter: 2.3 mm, length: 44 mm, package of 10 burrs
Carl Zeiss Surgical GmbH	Carl Zeiss	#6627100863	Surgical microscope
Dumont #3c	Fine Science Tools	#11231-20	Standard tip 0.17 x 0.10 mm, 11 cm
Dumont #5SF	Fine Science Tools	#11252-00
Dumont #7B	Fine Science Tools	#11270-20	Serrated 0.17 x 0.10 mm, 11 cm
Extra Fine Bonn: straight	Fine Science Tools	#14084-08	Iris scissors, best suited for microdissection under high magnification
Fine Iris Scissors: straight	Fine Science Tools	#14094-11	Made from martensitic stainless steel, combined with molybdenum and vanadium
Finger Loop Ear Punch	Fine Science Tools	#24212-01	1 mm. Provides stability and control for researchers using the numbering system
Hartman	Fine Science Tools	#13002-10	Tip width: 1 cm, serrated, 10 cm
Short Scalpel Handle #7 Solid	Fine Science Tools	#10003-12	#7 short, 12 cm
Small Vessel Cauterizer	Fine Science Tools	#18000-03	Replacement tip, straight knife, keeps bleeding to a minimum and therefore provides a surgical field clear of clamps and hemostats
Strong 207S	SAESHIN	207S	Powerful torque at low speed, available with speed or on/off foot controller
Suction Tubes	JEUNGDO B&P CO., LTD.	H-1927-8	Frazier, 18 cm
VICRYL	ETHICON	W9570T	Synthetic absorbable sterile surgical suture
Weitlaner-Locktite	Fine Science Tools	#17012-13	Maximum spread: 4.5 cm, 2 x 3 blunt teeth, 11 cm
Zoletil	Virbac, France		Tiletamine-zolazepam
Rompun	Bayer		Xylazine
Rimadyl	Pfizer		Carprofen
Septra	Pfizer		Trimethoprim-sulfonamide