JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Bu iletişim kuralı cerrahi labyrinthectomy vestibüler sistem çalışmak için kullanışlı bir yöntemdir bir farenin açıklar.

Özet

Vestibüler sistem veya vestibüler tazminat işlem çalışmaya, birkaç yöntem cerrahi ya da kimyasal labyrinthectomy ve vestibüler neurectomy gibi vestibüler zarar için geliştirilmiştir. Cerrahi labyrinthectomy nispeten basit, güvenilir ve hızlı bir yöntemdir. Burada, fare labyrinthectomy için cerrahi tekniği tarif. Postauricular bir kesi dış işitme kanal ve sonra üzengi kulak zarı ve kemikçiklerdeki kaldırıldı kulak zarının ortaya çıkarmak için genel anestezi altında yapılır. Üzengi ve oval pencere arasında yer almaktadır, stapes arter savunmasız bir yapıdır ve açık cerrahi alan elde etmek için korunması gerekir. Fenestrate bir delik antre 2.1 mm matkap bur ile stapes için üstün yapılır. Daha sonra % 100 etanol bu delikten enjekte ve birkaç kez Aspire. Titiz diseksiyon mikroskop ve dikkatli kanama kontrol altında güvenilir sonuçlar elde etmek için önemlidir. Nistagmus, baş eğerek ve haddeleme hareket gibi vestibüler kaybı belirtileri hemen ameliyat sonrası görülür. Rotarod veya döndürme sandalye test objektif ve kantitatif vestibüler fonksiyon değerlendirmek için kullanılabilir.

Giriş

Vestibüler organ denge ve göz kontrolü için önemlidir. Normal vestibüler fonksiyon iki iç kulak vestibüler organlarda simetrik afferent sinyaller bağlıdır. Vestibüler hypofunction veya kaybı, baş dönmesi, nistagmus ve postural dengesizlik neden olmaktadır. Akut hasar sonra vestibüler fonksiyon kendiliğinden vestibüler tazminat1,2olarak bilinen bir işlem birkaç gün içinde kurtarır. Statik açıkları vestibüler tazminat spontan dinlenme faaliyet Ipsilateral ve kontralateral vestibüler çekirdekler arasında dengesizlik ile ilgili kurtarma bir süreçtir. Dinamik açıkları vestibüler tazminat elde esas üzerinden duyu ve davranış oyuncu değişikliği (görüntü veya somatosensor girişlerini kullanarak)3. Bu işlemler için nöronal plastisite çalışmaları4,5caziptir.

Vestibüler sistem ve nöronal plastisite cerrahi ve kimyasal labyrinthectomy ve vestibüler neurectomy5,6 gibi vestibüler tazminat sırasında destek mekanizmaları incelemek için birkaç yöntem geliştirilmiştir ,7,8. Vestibüler neurectomy tamamıyla vestibüler kayıp ikna etmek için belirli bir şekilde, ama daha zor ve invaziv bir işlemdir ve beyin hasarı8,9neden olabilir. Bu yöntem büyük cerrahi beceri gerektirir ve labyrinthectomy daha fazla zaman alır. Kimyasal labyrinthectomy viomisin, arsanilate ve tetracaine, dahil olmak üzere daha kolay ve güvenilir sonuçlar10,11,12yol açabilir. Ancak, koklea da zarar görebilir ve vestibüler kaybı saat11üzerinde gelişebilir. Ayrıca, doğru değerlendirme için korunmalıdır, beyin kimyasalların etkileri pek açık değildir. Cerrahi labyrinthectomy ilk 184215 hayvan çalışmalarında tanıştı ve ilk 193616köstebeğiyle bildirildi. Bu teknik çok beri kullanılmıştır hayvan çalışmaları5,17,18,19. Cerrahi labyrinthectomy bir özel, güvenilir ve nispeten basit yöntemdir. 13 , 14 bunların yanında vestibüler hasar belirtileri hemen ameliyat sonrası görülür. Burada, bizim cerrahi tekniğin fare labyrinthectomy için açıklamak.

Protokol

Bu çalışmada kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi, Seul Ulusal Üniversitesi hangi değerlendirme ve akreditasyon laboratuvar hayvan bakım Derneği tarafından akredite Hastanesi (14-0148-C1A1), uygun olarak gerçekleştirildi Uluslararası.

Not: 7-8 hafta eski (200/250 g) Sprague-Dawley (SD) erkek rats üzerinde deneyler yapıldı. Her hayvan 1 hafta deneme başlangıcı önce laboratuvar koşulları acclimatized. Hayvanlar bir sabit 12 ile sıcaklık ve nem kontrollü bir odada muhafaza-h:12-s açık: koyu döngüsü ücretsiz erişimi ile yiyecek ve su için.

1. Labyrinthectomy

  1. Autoclaved cerrahi aletler steril bir yastık ile kapak. Çalışma alanının % 70 etanol ile dezenfekte. Steril örtü kullanmak ve steril koşullar ameliyat sırasında korumak.
  2. Bir elbise giymek, maske (kapak burun ve ağız için), kap (kafa kapsayacak şekilde) ve bir çift steril eldiven. Cerrahi aletler steril yüzeyler ile temas sadece gelmelidir.
  3. Tiletamine-zolazepam anestezi (40 mg/kg vücut ağırlığı) enjekte intramüsküler medial uyluk veya intraperitoneally ve xylazine (10 mg/kg vücut ağırlığı) intramüsküler veya intraperitoneally.
    Not: Genel anestezi isoflurane inhalasyon, dahil olmak üzere, diğer modları da kullanılabilir.
  4. Fare (42 ° C'de başlangıçta küme) bir ısınma yastık yerleştirin. Her iki gözde ise anestezi altında göz kuruluğu önlemek için farenin yağlayıcı göz merhem uygulamak.
  5. Fareyi onun sağ yanına koyun. Cerrahi alanda kürk Saç makasları ile tıraş. Site % 70 etanol ile dezenfekte.
  6. %1 lidokain hidroklorür subkutan sol retroauricular alanın içine enjekte.
  7. Bir neşter bıçak #15 kullanarak, bir ~5.0 cm retroauricular kesi yapmak. Kas ve fasya dış işitme kanal Iris makasla (Şekil 1A) ortaya çıkarmak için ayırın. Biraz dış işitme #15 bıçak veya Iris makas (Şekil 1B) kullanılarak kanal açın. Yaygın olarak kulak zarı (Şekil 2A) ortaya çıkarmak.
  8. (7.5 X veya 12,5 X) mikroskop altında kulak zarı ve forseps kullanarak üzengi dışında kemikçiklerdeki kaldırın. Kasları lambdoidal sırt üzerinde bıçak #15 veya Iris makas (Şekil 2B) ile bağlantısını kesin.
  9. Düşük hızda bir matkap kullanarak (< 3000 devir/dakika) bir elmas bur (2.1 veya 1,4 mm) ile yüz sinir (Şekil 3A) çıkış noktasının çevresinde tympanic bulla kemik matkap. Stapedial arter tanımlayın. Stapedial arter delme işlemi sırasında zarar vermemesi için dikkat ediniz.
  10. Antre stapedial arter ile üstün sondaj devam ve yuvarlak pencere ve kemikli lateral semisirküler kanal bulaşmasına neden. Onun ampulla yakınındaki lateral semisirküler kanal açın. Lateral semisirküler kanal düzlemde delme devam ve üst semisirküler kanal ampulla matkap.
  11. 18-G veya 22-G iğne kullanarak giriş içeriğini Aspire edin. Enjekte ve 1 cm%3 100 etanol 3 Aspire x.
  12. Kaslar ve basit kesintiye uğramış dikiş ile iki kat deride kapatın.
  13. Sternal recumbency korumak için yeterli kendine geldi kadar bir hayvan başıboş bırakmayın. Bir ısıtma yastığı veya a ısı lamba kullanarak wakens kadar fareyi sıcak tut. Uyanış sonra her zamanki çevre koşullarına sahip bir oda bireysel bir kafeste fare taşımak.
  14. Antibiyotik yönetmek (Örneğin, Cefazoline 20 mg/kg, trimetoprim-sülfonamid 100 µL subkutan, veya penisilin 300.000 IU) 1; gün gerektiği gibi bir ağrı kesici (değil bir opioid; Örneğin, Metacam 2 mg/kg, Carprofen 5 mg/kg subkutan) da verilebilir.

2. sahte cerrahi

  1. Bir denetim olarak sahte ameliyat için (Bölüm 1), başı olarak aynı cerrahi ve ameliyat sonrası yordamları gerçekleştirin dış işitme kanal ve kulak zarı (adım 1,7), kulak zarı ve kemikçiklerdeki maruz dahil olmak üzere ve dekolmanı lambdoidal üzerinde kaslarının (adım 1.8), ridge ama semisirküler kanal açmayın veya etanol enjekte.

3. onay vestibüler fonksiyon kaybı

Not: Vestibüler fonksiyon kaybı her iki davranış veya vestibüler fonksiyon testleri kullanılarak değerlendirilebilir. 13 , 17 , 18 postural asimetri ve nistagmus değerlendirme davranış testleri içerir.

  1. Spontan veya uyarılmış varil-sol tarafına düşen veya lesioned yan18doğru eğilerek hareket etme haddeleme, içeren postural asimetri tanımlayın. Video 1bkz.
  2. Nistagmus gönüllü göz hareketi görsel bir denetim tarafından tanımlayın. Spontan nistagmus yok ne zaman dinlenme durumunda hava yavaşça hayvan18kafasına puf. Video 2bkz.

Sonuçlar

Ameliyat başarısını davranış testleri tarafından doğrulandı. Bütün hayvanlar vestibüler fonksiyon tek taraflı bir kaybı tipik davranış sergiledi. Spontan varil inişli çıkışlı bir hava puff tarafından erken kurtarma aşamasında (Video 1) baş veya vücut için hafif bir dokunuş uyarılmış ameliyattan hemen sonra açıktı. Ameliyattan sonra 3 d, ara sıra ile lesioned yana doğru eğilerek etrafında taşındı hayvanlar sol tarafına düşüyor....

Tartışmalar

Bu teknik ani, kalıcı ve tam vestibüler fonksiyon kaybı oluşturmak için kullanışlı bir yöntemdir. Bu çalışmak vestibüler nörite, bir akustik tümör ve Meniere hastalığı gibi vestibüler patolojiler için kullanılabilir. Birçok çalışma bu teknik çalışmak vestibüler çekirdeği nöronal plastisite veya ilgili merkezi sürece5,17,18,19için kullandık.

Açıklamalar

Yazarlar ifşa gerek yok.

Teşekkürler

Bu araştırma Kore sağlık teknoloji R & D proje ile Kore Sağlık Sanayi Geliştirme Enstitüsü (Sağlık Bakanlığı ve sosyal yardım, Kore Cumhuriyeti tarafından finanse edilen KHIDI), bir hibe tarafından desteklenmiştir (sayı vermek: HI15C2651).

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
ASPIRATOR KB-012KOH BONG & CO., LTD.KB-012Medical aspirator
Blade: #15Fine Science Tools#10015-00Blades for #7 Scalpel Handles, #15
Carbon Steel BurrsFine Science Tools#19007-05shaft diameter: 2.3 mm, length: 44 mm, package of 10 burrs
Carl Zeiss Surgical GmbHCarl Zeiss#6627100863Surgical microscope
Dumont #3cFine Science Tools#11231-20Standard tip 0.17 x 0.10 mm, 11 cm
Dumont #5SFFine Science Tools#11252-00
Dumont #7BFine Science Tools#11270-20Serrated 0.17 x 0.10 mm, 11 cm
Extra Fine Bonn: straightFine Science Tools#14084-08Iris scissors, best suited for microdissection under high magnification
Fine Iris Scissors: straightFine Science Tools#14094-11Made from martensitic stainless steel, combined with molybdenum and vanadium
Finger Loop Ear PunchFine Science Tools#24212-011 mm. Provides stability and control for researchers using the numbering system
HartmanFine Science Tools#13002-10Tip width: 1 cm, serrated, 10 cm
Short Scalpel Handle #7 SolidFine Science Tools#10003-12#7 short, 12 cm
Small Vessel CauterizerFine Science Tools#18000-03Replacement tip, straight knife, keeps bleeding to a minimum and therefore provides a surgical field clear of clamps and hemostats
Strong 207SSAESHIN207SPowerful torque at low speed, available with speed or on/off foot controller
Suction TubesJEUNGDO B&P CO., LTD.H-1927-8Frazier, 18 cm
VICRYLETHICONW9570TSynthetic absorbable sterile surgical suture
Weitlaner-LocktiteFine Science Tools#17012-13Maximum spread: 4.5 cm, 2 x 3 blunt teeth, 11 cm
ZoletilVirbac, FranceTiletamine-zolazepam
RompunBayerXylazine
RimadylPfizerCarprofen
SeptraPfizerTrimethoprim-sulfonamide 

Referanslar

  1. Curthoys, I. S., Halmagyi, G. M. Vestibular compensation: a review of the oculomotor, neural, and clinical consequences of unilateral vestibular loss. Journal of Vestibular Research. 5 (2), 67-107 (1995).
  2. Smith, P. F., Curthoys, I. S. Mechanisms of recovery following unilateral labyrinthectomy: a review. Brain Research. Brain Research Reviews. 14 (2), 155-180 (1989).
  3. Lacour, M., Helmchen, C., Vidal, P. P. Vestibular compensation: the neuro-otologist's best friend. Journal of Neurology. 263, S54-S64 (2016).
  4. Darlington, C. L., Smith, P. F. Molecular mechanisms of recovery from vestibular damage in mammals: recent advances. Progress in Neurobiology. 62 (3), 313-325 (2000).
  5. Shinder, M. E., Ramanathan, M., Kaufman, G. D. Asymmetric gene expression in the brain during acute compensation to unilateral vestibular labyrinthectomy in the Mongolian gerbil. Journal of Vestibular Research. 16 (4-5), 147-169 (2006).
  6. Dutheil, S., Brezun, J. M., Leonard, J., Lacour, M., Tighilet, B. Neurogenesis and astrogenesis contribution to recovery of vestibular functions in the adult cat following unilateral vestibular neurectomy: cellular and behavioral evidence. Neuroscience. 164 (4), 1444-1456 (2009).
  7. Gunther, L., et al. N-acetyl-L-leucine accelerates vestibular compensation after unilateral labyrinthectomy by action in the cerebellum and thalamus. PLoS One. 10 (3), e0122015 (2015).
  8. Pericat, D., Farina, A., Agavnian-Couquiaud, E., Chabbert, C., Tighilet, B. Complete and irreversible unilateral vestibular loss: a novel rat model of vestibular pathology. Journal of Neuroscience Methods. 283, 83-91 (2017).
  9. Cass, S. P., Goshgarian, H. G. Vestibular compensation after labyrinthectomy and vestibular neurectomy in cats. Otolaryngology-Head and Neck Surgery. 104 (1), 14-19 (1991).
  10. Vignaux, G., et al. Evaluation of the chemical model of vestibular lesions induced by arsanilate in rats. Toxicology and Applied Pharmacology. 258 (1), 61-71 (2012).
  11. Berryhill, W. E., Graham, M. D. Chemical and physical labyrinthectomy for Meniere's disease. Otolaryngologic Clinics of North America. 35 (3), 675-682 (2002).
  12. Morgenstern, C., Mori, N., Arnold, W. Experimental studies on the effect of labyrinth anesthesia. Archives of Oto-Rhino-Laryngology. 237 (3), 255-261 (1983).
  13. Nadasy, G. L., Raffai, G., Feher, E., Schaming, G., Monos, E. A simple standard technique for labyrinthectomy in the rat: a methodical communication with a detailed description of the surgical process. Physiology International. 103 (3), 354-360 (2016).
  14. Hitier, M., Besnard, S., Vignaux, G., Denise, P., Moreau, S. The ventrolateral surgical approach to labyrinthectomy in rats: anatomical description and clinical consequences. Surgical and Radiologic Anatomy. 32 (9), 835-842 (2010).
  15. Flourens, M. J. . Recherches experimentales sur les propriétés et les fonctions du système nerveux dans les animaux vertébrés. , (1824).
  16. T'Ang, Y., Wu, C. F. The effects of unilateral labyrinthectomy in the albino rat. Chinese Journal of Physiology. 10, 571-598 (1936).
  17. Chang, M. Y., et al. MicroRNAs 218a-5p, 219a-5p, and 221-3p regulate vestibular compensation. Scientific Reports. 7 (1), 8701 (2017).
  18. Bergquist, F., Ludwig, M., Dutia, M. B. Role of the commissural inhibitory system in vestibular compensation in the rat. The Journal of Physiology. 586 (18), 4441-4452 (2008).
  19. Cameron, S. A., Dutia, M. B. Cellular basis of vestibular compensation: changes in intrinsic excitability of MVN neurones. NeuroReport. 8 (11), 2595-2599 (1997).
  20. Park, M. K., Lee, B. D., Lee, J. D., Jung, H. H., Chae, S. W. Gene profiles during vestibular compensation in rats after unilateral labyrinthectomy. Annals of Otology, Rhinology & Laryngology. 121 (11), 761-769 (2012).
  21. Yamamoto, H., Tominaga, M., Sone, M., Nakashima, T. Contribution of stapedial artery to blood flow in the cochlea and its surrounding bone. Hearing Research. 186 (1-2), 69-74 (2003).
  22. Potegal, M., Abraham, L., Gilman, S., Copack, P. Technique for vestibular neurotomy in the rat. Physiology & Behavior. 14 (2), 217-221 (1975).
  23. Tung, V. W., Burton, T. J., Dababneh, E., Quail, S. L., Camp, A. J. Behavioral assessment of the aging mouse vestibular system. Journal of Visualized Experiments. (89), e51605 (2014).
  24. de Jeu, M., De Zeeuw, C. I. Video-oculography in mice. Journal of Visualized Experiments. 65 (65), e3971 (2012).

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

T psorunu 135tazminatba d nmesii kulaklabyrinthectomys anba d nmesiantre

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır