A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Method Article
* These authors contributed equally
ونحن تصف البروتوكول مفصلاً للتصميم والمحاكاة والرطب-مختبر تجارب وتحليل لإعادة التشكيل حامل الاكورديون الحمض النووي لتنسجم 6 من 6.
الحمض النووي على أساس nanostructure الأنظمة الميكانيكية أو nanomachines الحمض النووي، التي تنتج الحركة نانوية معقدة في 2D و 3D في نانومتر إلى القرار انغستروم، تظهر إمكانات كبيرة في مختلف مجالات تقنية النانو مثل المفاعلات الجزيئية، تسليم المخدرات، والنظم نانوبلاسمونيك. إعادة التشكيل رف الاكورديون الحمض النووي، الذي يمكن التلاعب مجتمعة شبكة نانوية 2D أو 3D من العناصر، في مراحل متعددة استجابة لمدخلات الحمض النووي، هو وصف. منهاج العمل لديها إمكانات لزيادة عدد العناصر التي يمكن التحكم نانوماتشينيس الحمض النووي من بضعة عناصر لنطاق شبكة بمراحل متعددة لإعادة تشكيل.
في هذا البروتوكول، يصف لنا عملية تجريبية كاملة لإعادة التشكيل رف الاكورديون الحمض النووي لتنسجم 6 من 6. ويشمل البروتوكول إجراء القاعدة ومحاكاة تصميم الهياكل وتجربة الرطب-مختبر للتوليف وإعادة تشكيلها. وبالإضافة إلى ذلك، يتم تضمين تحليل الهيكل باستخدام ال (مجهر إلكتروني) وبكى (نقل الطاقة صدى الأسفار) في البروتوكول. أساليب تصميم ومحاكاة رواية المشمولة بهذا البروتوكول سيساعد الباحثين على استخدام الرف الاكورديون الحمض النووي لمزيد من التطبيقات.
والميكانيكية وأنظمة على أساس النانو الحمض النووي أو الحمض النووي نانوماتشينيس1،2،3،،من45 فريدة من نوعها لأنها تنتج الحركة نانوية معقدة في 2D و 3D في نانومتر إلى القرار انغستروم، وفقا لمختلف الجزيئية البيولوجية المحفزات،2،،من36. بإرفاق المواد الوظيفية في هذه الهياكل، والسيطرة على مواقعها، يمكن تطبيق هذه الهياكل في مختلف المجالات. على سبيل المثال، اقترحت nanomachines الحمض النووي لمفاعل الجزيئية7والمخدرات تسليم8، ونظم نانوبلاسمونيك9،10.
سابقا، قدمنا الحمض النووي الحامل الاكورديون إعادة التشكيل، التي يمكن التلاعب في 2D أو 3D شبكة نانوية من العناصر11 (الشكل 1A). خلافا لسائر nanomachines الحمض النووي التي تتحكم فقط في عدد قليل من العناصر، يمكن التلاعب المنهاج جماعياً العناصر 2D أو 3D صفت دورياً في مراحل مختلفة. ونحن نتوقع أن شبكة تفاعل المواد الكيميائية والبيولوجية القابلة لبرمجة أو نظام الحوسبة جزيئية يمكن أن يبني من نظامنا، بزيادة عدد عناصر التحكم. رف الاكورديون الحمض النووي هو هيكل، الذي متصل شبكة متعددة الحمض النووي عوارض المفاصل يتألف من واحد-الذين تقطعت بهم السبل الحمض النووي (الشكل 1B). يتم إعادة تكوين رف الاكورديون المتولدة عن عوارض الحمض النووي قبل الإقفال الحمض النووي، والتي هجن إلى الجزء لزجة من الحزم وتغيير الزاوية بين الحزم وفقا لطول الجزء الجسور من التأمين (تأمين الدولة). وباﻹضافة إلى ذلك، يدل تشكيل متعدد خطوة إضافة تأمين جديدة بعد تشكيل دولة حرة بفصل إقفال الحمض النووي عن طريق ستراند المستندة إلى توهولد تشريد12،13.
في هذا البروتوكول، يصف لنا كامل عملية تصميم وتركيب الحامل الاكورديون الحمض النووي إعادة التشكيل. ويتضمن البروتوكول التصميم والمحاكاة والرطب-مختبر تجارب وتحليل لتركيب الحمض النووي الحامل الاكورديون لتنسجم 6 من 6 وتشكيل هذه. هيكل المشمولة بالبروتوكول هو النموذج الأساسي ل البحوث السابقة11 وهو 65 نانومتر من 65 نانومتر في الحجم، تتألف من 14 الحزم. من حيث التصميم والمحاكاة، يختلف التصميم الهيكلي للحامل الاكورديون التقليدية الحمض النووي أوريغامي14،15 (أي، معبأة بأحكام). لذلك، تم تعديل تصميم القاعدة والمحاكاة الجزيئية من الأساليب التقليدية. وللتدليل، نعرض تقنية التصميم باستخدام النهج المعدل من كادنانو14 ومحاكاة للحامل الاكورديون باستخدام أوكسدنا16،17 مع برامج نصية إضافية. وأخيراً، يرد كلا البروتوكولين تيم والحنق لتحليل الهياكل المكونة من الرف الاكورديون.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
1-تصميم 6 من 6 رف الاكورديون الحمض النووي مع كادنانو14
2-محاكاة الهيكل مع أوكسدنا
3-توليف لهيكل
ملاحظة: يتم تكييف أسلوب التوليف من15،البروتوكول السابق18.
4-تنقية الهيكل
ملاحظة: تم تنقيته عينات من جميع هياكل قبل التحليل. في هذا القسم، ونحن تصف البروتوكول لتنقية الوتد، ومقتبسة من الأدب السابق19. أيضا يمكن أن تكون تنقية العينة بالتفريد جل كما هو موضح في السابق الأدب15،18.
5-إعادة تشكيل الرف الاكورديون من 'دولة حرة' إلى 'الدولة تأمين'
6-إعادة تشكيل الرف الاكورديون من 'الدولة تأمين' إلى 'دولة حرة'
7. تصوير ال
ملاحظة: تم تكييف بروتوكول تصوير تيم من الأدب السابق18،20.
8-تآكل التحليل
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
يتم محاكاة رف الاكورديون الحمض النووي 6 مصممة بواسطة 6 من16،أوكسدنا17 وتظهر النتائج في الشكل 6. من نتيجة المحاكاة، تم التأكيد على أن يتم تشكيل هيكل المقصود دون تشويه هيكل.
الصور تيم في
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
ويدخل هذا البروتوكول العملية برمتها من التصميم والمحاكاة وتوليف وتحليل الدنا ثنائي الأبعاد الأساسية الرف الاكورديون. تعديل تصميم ومحاكاة القواعد قد وصفت لأنه يختلف حكم التصميم القياسية أوريغامي الحمض النووي، حيث أن الحمض النووي الحامل الاكورديون النيوكليوتيدات إضافية في عمليات الانت?...
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
الكتاب لا تمت بصلة إلى الكشف عن
هذا البحث تم دعمها جزئيا من "برنامج مركز تنمية البحوث العالمية" من خلال مؤسسة البحوث الوطنية Korea(NRF) الممول من وزارة العلوم و "تكنولوجيا المعلومات والاتصالات" (مست) (2015K1A4A3047345) و Nano· المواد "برنامج تطوير التكنولوجيا" عن طريق الوطنية بحوث مؤسسة من كوريا (جبهة الخلاص الوطني) الممولة من وزارة العلوم و "تكنولوجيا المعلومات والاتصالات" (مست) (2012M3A7A9671610). معهد "بحوث الهندسة" في جامعة سيول الوطنية توفير التسهيلات البحثية لهذا العمل. المؤلف الاعتراف بالامتنان تجاه "يون" تاي-يونج (العلوم البيولوجية، جامعة سيول الوطنية) فيما يتعلق بالتحليل الطيفي الأسفار لتحليل الحنق.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
M13mp18 Single-stranded DNA | NEB | N4040s | |
1M MgCl2 Solution | Biosesang | M2001 | |
Tris-EDTA buffer | Biosesang | T2142 | |
Nuclease-Free Water | Qiagen | 129114 | |
5M Sodium Chloride solution | Biosesang | s2007 | |
PEG 8000 | Sigma Aldrich | 1546605 | |
10N NaOH | Biosesang | S2038 | |
Uranyl formate | Thomas Science | C993L42 | |
Thermal cycler C1000 | Biorad | ||
Nanodropic 2000 | Thermo Fisher Scientific | ||
TEM (LIBRA 120) | Carl Zeiss | ||
Fluorometer Enspire 2300 | Perkin-Elmer | ||
Centrifuge | Labogene | LZ-1580 |
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved