JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

يصف هذا البروتوكول طريقه جديده لقياس ألوان للكشف عن پريماكين المضادة للملاريا (PMQ) في القنفذ الاصطناعية والأمصال البشرية.

Abstract

وقد أوصت منظمه الصحة العالمية پريماكين (pmq) ، وهو دواء هام لمكافحه الملاريا ، لعلاج التهابات التي تهدد الحياة الناجمة عن p. متصور واوفال. ومع ذلك, PMQ له اثار ضاره غير مرغوب فيها التي تؤدي إلى انحلال النصفي الحاد في المرضي الذين يعانون من نقص الجلوكوز-6-فوسفات (G6PD) عوز. هناك حاجه لتطوير أساليب بسيطه وموثوق بها لتحديد PMQ مع الغرض من رصد الجرعة. في وقت مبكر 2019 ، وقد أبلغنا عن الاشعه فوق البنفسجية والنهج القائم علي العين المجردة للقياس الكمي اللوني PMQ. واستند الكشف علي رد فعل مثل Griess بين PMQ وانانينس ، والتي يمكن ان تولد المنتجات azo الملونة. الحد الأقصى للكشف عن القياس المباشر لل PMQ في البول الاصطناعي هو في نطاق نانومولار. وعلاوة علي ذلك ، أظهرت هذه الطريقة إمكانات كبيره للقياس الكمي PMQ من عينات المصل البشري في تركيزات ذات الصلة سريريا. في هذا البروتوكول ، سوف نقوم بوصف التفاصيل الفنية المتعلقة بالتوليفات وتوصيف منتجات azo الملونة ، واعداد الكاشف ، وإجراءات تحديد PMQ.

Introduction

Pmq هي واحده من أهم الادويه المضادة للملاريا ، وانها لا تعمل فقط كانسجه شيزونتوسيدي لمنع الانتكاس ولكن أيضا كجاميتوسيتوسيدي لمقاطعه انتقال المرض1،2،3،4. انحلال الاوعيه هو واحد من الآثار الجانبية المتعلقة PMQ ، والتي تصبح خطيره للغاية في تلك التي تعاني من نقص في G6PD. ومن المعروف ان الاضطراب الوراثي G6PD موزع في جميع انحاء العالم مع وجود تردد الجينات بين 3-30 ٪ في المناطق الموبوءة بالملاريا. شده ضعف pmq يعتمد علي درجه نقص G6PD فضلا عن الجرعة ومده التعرض pmq5,6. ولخفض المخاطر ، أوصت منظمه الصحة المحدودة بجرعة منخفضه واحده (0.25 ملغم أساس/كغ) من PMQ لعلاج الملاريا. ومع ذلك ، لا يزال هذا التحدي من الاختلافات في حساسية المخدرات المريض5،7. رصد الجرعة ضروري لتقييم الدوائية بعد أداره PMQ, التي يمكن ان تؤثر علي تعديل الجرعة لعلاج ناجح مع سميه محدوده.

اللوني السائل عاليه الأداء (HPLC) هو الأسلوب الأكثر استخداما لتحديد السريرية PMQ. وذكرت endoh وآخرون نظام HPLC مع كاشف للاشعه فوق البنفسجية للقياس الكمي PMQ المصل باستخدام C-18 البوليمر هلام العمود8. في نظامهم, وقد عجلت البروتينات المصل لأول مره مع اسيتلونيتريل, ومن ثم تم فصل pmq في ماده طافي ل hplc. وكان منحني المعايرة الخطية علي مدي تركيز من 0.01-1.0 ميكروغرام/مل8. وقد ابلغ عن طريقه أخرى علي أساس المرحلة العكسية HPLC مع الكشف عن الاشعه فوق البنفسجية في 254 نانومتر للقياس الكمي من PMQ والأيض الرئيسية9. وكان منحني المعايرة ل PMQ خطيه في المدى بين 0.025-100 ميكروغرام/مل. تم استخدام استخراج سائل سائل إضافي مع الهكسين المختلطة والخلات ايثيل كمرحله عضويه للفصل PMQ مع النسبة المئوية للاسترداد إلى 89%9. وفي الاونه الاخيره ، وضعت ميراندا وآخرون طريقه UPLC مع الكشف عن الاشعه فوق البنفسجية في 260 nm لتحليل PMQ في تركيبات الكمبيوتر اللوحي مع حد الكشف في 3 ميكروغرام/مل10.

علي الرغم من ان أساليب HPLC تظهر حساسية واعده في تحديد المخدرات والحساسية يمكن زيادة تحسين إذا تم تجهيز HPLC مع مطياف الشامل ، لا تزال هناك بعض العيوب. وعاده ما يتعذر الوصول إلى قياسات المخدرات المباشرة في السوائل البيولوجية بواسطة HPLC ، لان العديد من الجزيئات الحيوية يمكن ان تؤثر بشكل كبير علي التحليل. استخراج اضافيه مطلوبه لأزاله جزيئات الذاتية قبلhplcالتحليل 11,12. وعلاوة علي ذلك ، يتم اجراء كشف PMQ بواسطة كاشف HPLC-الاشعه فوق البنفسجية عاده في الطول الموجي للامتصاص الأقصى (260 نانومتر).; ومع ذلك ، هناك العديد من الجزيئات الذاتية في السوائل البيولوجية مع امتصاص قوي في 260 نانومتر (علي سبيل المثال ، الأحماض الامينيه والفيتامينات والأحماض النووية واصباغ اوروكروم) ، التالي تتداخل مع الكشف عن الاشعه فوق البنفسجية PMQ. وهناك حاجه إلى وضع أساليب بسيطه وفعاله من حيث التكلفة لتحديد الكفاءة الاقتصادية بحساسية وانتقائية معقولتين.

وقدم رد فعل griess لأول مره في 1879 كاختبار قياس ألوان للكشف عن النتريت13,14,15,16. في الاونه الاخيره ، تم استكشاف هذا التفاعل علي نطاق واسع للكشف ليس فقط النتريت ولكن أيضا الجزيئات الأخرى ذات الصلة بيولوجيا17،18،19،20. وقد سبق لنا الإبلاغ عن الدراسة المنهجية الاولي لرد فعل Griess غير متوقع مع PMQ (الشكل 1). في هذا النظام ، PMQ قادره علي تشكيل azos الملونة عندما يقترن مع الانينات المستبدلة في وجود أيونات النتريت في ظل الظروف الحمضية. وقد وجدنا كذلك ان لون azos متنوعة من الأصفر إلى الأزرق عند زيادة الكترون التبرع تاثير مستبدل علي الانينينات21. وقد تم تطوير طريقه القياس اللوني للاشعه فوق البنفسجية مقابل امتصاص القياس الكمي PMQ من خلال رد فعل الأمثل بين 4-ميثوكسيانيلين و PMQ. وقد أظهرت هذه الطريقة إمكانات كبيره للكشف الحساسة والانتقائية من PMQ في السوائل ذات الصلة الحيوية. هنا ، ونحن نهدف إلى وصف الإجراءات التفصيلية لتحديد PMQ استنادا إلى هذه الاستراتيجية اللونية.

Protocol

1. توليف من Azos الملونة

  1. في قارورة القاع جولة 25 مل (RBF) ، تذوب الانيلين (0.1 ملليمول) و پريماكين بيفسفات (45.5 ملغ ، 0.1 ملليمول) إلى 10 مل من ح3بو4 الحل (5 ٪ v/v). وضع RBF علي حمام الجليد ، أضافه شريط ضجة مع الحجم المناسب في الحل ، ووضع RBF علي لوحه يحركها.
    ملاحظه: لتوليف azo الجيل الثالث 3g (الشكل 2) ، استخدم 0.2 ملليمول من پريماكين بيفسفات.
  2. تذوب نانو2 (6.9 ملغ ، 0.1 ملليمول) في 1 مل من المياه المبردة ومن ثم أضافه إلى خليط رد الفعل قطره. أزاله حمام الجليد ، والحفاظ علي خليط التفاعل اثار في درجه حرارة الغرفة.
  3. مراقبه رد الفعل مع هلام السيليكا المغلفة طبقه رقيقه اللوني (TLC) لوحه. استخدام ثنائي كلورو ميثان (DCM)/الميثانول (meoh) الخليط (المجلد/المجلد = 5:1) كما الشاطف ل TLC. المنتجات azo المعروضات البقع الملونة علي لوحه TLC ، والتي من السهل التمييز بين العينين العارية. وقف رد الفعل عندما تختفي البقع PMQ علي TLC.
  4. ضبط خليط التفاعل إلى درجه الحموضة > 10 من NaOH (2 M) علي حمام الجليد. استخدام قمع فصل 50 mL لاستخراج الخليط 3 مرات مع 20 مل من خلات ايثيل لكل منهما ، والجمع بين وتركيز المرحلة العضوية تحت فراغ باستخدام المبخر الدوارة.
    ملاحظه: قبل الاستخراج ، وضبط قيمه الأس الهيدروجيني من حلول رد فعل أكثر من 10. هذا يستطيع حافظت الأمين أوليه كشكله [نون-متاين], لذلك يسهل استخراج.
  5. تنقيه البقايا عن طريق الفصل اللوني فلاش مع المرحلة العكسية هلام السيليكا تحت الضغط العادي ، وذلك باستخدام MeOH/H2O كما التملص. جفف محلول المنتج من خلال التجميد لإعطاء منتجات azo المرغوبة.
    ملاحظه: ويمكن أيضا ان يتم تنفيذ نفس رد الفعل في محلول HCl المخفف (0.2 M).

2. الاشعه فوق البنفسجية مقابل القياسات والحساب النظري

  1. تذوب نقيه azo (50 μM) في الماء المقطر أو في 5 ٪ ح3بو4 الحل (pH 1.1) ، علي التوالي. سجل أطياف امتصاص الاشعه فوق البنفسجية-فيس (250-700 نانومتر) علي مقياس طيفي في درجه حرارة الغرفة (25 درجه مئوية). تصدير البيانات كملفات .xls/. xlsx لمزيد من التحليل.
  2. اجراء جميع الحسابات النظرية ل PMQ نفسها والمنتجات azo باستخدام برنامج Gaussian 16. استخدام الوقت المعتمدة الكثافة الوظيفية نظرية (TD-DFT) مع مجموعه أساس 6-31G. وتشمل تاثيرات المذيبات بواسطة نموذج التواصل المستقطب (PCM) الشكلية باستخدام الماء.
    1. استخدام البرمجيات (علي سبيل المثال ، مكتب Chemdraw) لرسم الهياكل ومن ثم حفظ الهيكل كملف الإدخال غاوس (gif).
    2. فتح ملف gif مع عرض غوس وانقر فوق الزر حساب. حدد الاعداد حساب غاوس، اختيار + freq، والأرض الدولة-dft-B3LYP-6-31g؛ من ثم انقر فوق إرسال. سيؤدي تحسين الهندسة إلى إنشاء ملف .log.
    3. اتباع الاجراء أعلاه ، استخدم غوس فيو لفتح ملف السجل هذا. انقر فوق حساب-الاعداد حساب غاوسي وحدد الطاقة والدفتيريا--التي--B3LYP---------------------------------- ثم إرسال. سيقوم حساب الطاقة بإنشاء ملف سجل آخر وملف مكعب.
    4. استخدم طريقه عرض غوس لفتح ملف السجل من حساب الطاقة. انقر فوق النتائج-UV/فيس لرؤية الامتصاص المتوقع.
    5. استخدام غوس عرض لفتح ملف مكعب. انقر فوق النتيجةs وحدد السطح وملامح سطح الإجراءات وسطح جديد لرؤية المدارات.
  3. قارن النتائج من كل من القياس التجريبي وحساب الغوسيه. حساب خطا النسبة المئوية بين القيم المحسوبة والمقيسة ، وفقا للمعادلة التالية.
                  خطا = | (Wماكس كال.-wماكسexper.) /Wماكسexper. | × 100%
    حيث يمثل Wmax كال الحد الأقصى لامتصاص الطول الموجي من الحساب النظري و wماكس exper. يمثل الطول الموجي من نتيجة تجريبية.

3. تصميم PMQ

  1. قياس Pmq باستخدام لوحه 96-بئر (الشكل 5)
    1. حل 4-ميثوكسيانيلين في 0.2 M HCl للحصول علي محلول انيلين 200 mM ، R1. يذوب نيتريت الصوديوم في الماء المقطر للحصول علي محلول 5 ملم ، R2. الحفاظ علي جميع الحلول في الثلاجة في 4 درجه مئوية قبل الاستخدام.
    2. أضافه 100 μL من R1 في لوحه 96 ، وأضافه 50 μL من PMQ التي تحتوي علي عينه في لوحه لخلط مع R1. ثم ، أضافه 50 μL من R2 في لوحه. خلط الحلول عن طريق التنضيد المتكررة.
    3. الحفاظ علي لوحه في درجه حرارة الغرفة لمده 15 دقيقه ، ومن ثم تسجيل الامتصاص UV-فيس في 504 nm. كرر 3x لكل اختبار.  المنتج azo مستقره مع التعرض للضوء الغرفة ؛ فانه ليس من الضروري للحفاظ علي لوحه تحت الظلام.
    4. تصدير البيانات كملفات .xls/. xlsx لمزيد من التحليل.
  2. منحني المعايرة لقياس PMQ المباشر في عينه البول
    1. اعداد حلول PMQ باستخدام البول الاصطناعية مع تركيزات PMQ في 0, 1, 2, 5, 10, 20, 50, 100, 200 μM, علي التوالي.
    2. أضافه 100 μL من R1 في لوحه 96 ، وأضافه 50 μL من محلول البول PMQ لخلط مع R1. ثم قم باضافه 50 μL من R2 إلى الخليط أعلاه. خلط الحلول عن طريق التنضيد المتكررة. الحفاظ علي لوحه في درجه حرارة الغرفة لمده 15 دقيقه ، ومن ثم تسجيل الامتصاص UV-فيس في 504 nm.
    3. إنشاء منحني معايره استنادا إلى الامتصاص I504 وتركيزات pmq. استخدم القيم من الآبار بدون PMQ كفارغه ، واطرح القيم الفارغة من كافة الاختبارات قبل معالجه البيانات.
    4. تنفيذ نوبة خطيه لتوليد المعادلات الخطية ك y = aX + b، حيث y هي كثافة الامتصاص عند 504 نانومتر ، X هو تركيز pmq ، a هو الميل ، و b هو تقاطع Y للخط الخطي.
  3. منحني المعايرة لقياس PMQ مباشره في عينه مصل الإنسان
    1. اعداد حلول PMQ باستخدام مصل الإنسان مع تركيزات PMQ في 0, 1, 2, 5, 10, 20, 50, 100, 200, μM علي التوالي.
    2. أضافه 100 μL من R1 إلى لوحه 96 وأضافه 50 μL من محلول المصل PMQ لخلط مع R1. أضافه 50 μL من R2 إلى الخليط أعلاه ومزج الحلول عن طريق التنضيد المتكررة. الحفاظ علي لوحه في درجه حرارة الغرفة لمده 15 دقيقه ومن ثم تسجيل الامتصاص الاشعه فوق البنفسجية-vis في 504 nm. تصدير البيانات كملف .xls/. xlsx لمزيد من التحليل.
    3. إنشاء منحني معايره استنادا إلى الامتصاص I504 وتركيزات pmq. استخدم القيم من الآبار بدون PMQ كفارغه ، واطرح القيم الفارغة من كافة الاختبارات قبل معالجه البيانات.
    4. تنفيذ نوبة خطيه لتوليد المعادلات الخطية ك y = aX + b، حيث y هي كثافة الامتصاص عند 504 نانومتر ، X هو تركيز pmq ، a هو الميل ، و b هو تقاطع Y للخط الخطي.
  4. استخراج PMQ من المصل
    1. أضافه كميه معينه من PMQ في مصل الإنسان لمحاكاة المصل التي تحتوي علي PMQ. لاستخراج PMQ ، أضافه 6 مل من خليط خلات ايثيل/الهكسان (7:1 v/v) في 2 مل من المصل التي تحتوي علي PMQ في أنبوب الطرد المركزي 15 مل.
    2. أضافه 100 μL من هيدروكسيد الصوديوم (2 M) حل لنظام الاستخراج. هز الأنبوب بعنف باستخدام خلاط دوامه لمده 30 ثانيه. جمع الطبقة العضوية والتركيز عليه باستخدام المبخر الدوارة تحت فراغ.
    3. أعاده أذابه بقايا مع 200 μL من الماء المقطر وأزاله مكونات الدهون غير قابله للذوبان عن طريق الترشيح من خلال غشاء علي شكل قرص مع حجم المسام 220 nm. استخدم الحل النهائي للاختبار.
  5. تحديد PMQ من المصل مع استخراج
    1. اتبع الخطوات 3.2 أو 3.3 لتوليد منحني المعايرة ل PMQ في الماء المقطر. استخراج PMQ من الأمصال التي تحتوي علي PMQ وفقا للخطوة 3.4.
    2. أضافه 100 μL من R1 و 50 μL من محلول PMQ في لوحه 96 حسنا. أضافه 50 μL من R2 إلى الخليط أعلاه ، ومزج الحلول عن طريق التنضيد المتكررة.
    3. الحفاظ علي لوحه في درجه حرارة الغرفة لمده 15 دقيقه وتسجيل الامتصاص الاشعه فوق البنفسجية-vis في 504 nm. استخدام الآبار مع R1 و R2 ولكن بدون PMQ كعناصر التحكم. تصدير البيانات كملفات .xls/. xlsx لمزيد من التحليل.
    4. اطرح قيم عنصر التحكم من قيم الامتصاص I504 لكل اختبار ، ثم استخدم النتيجة لحسابات التركيز وفقا لمعادله البطانة من منحني المعايرة.
      ملاحظه: يمكن حساب حد الكشف (اللد) ل PMQ في جميع الحالات وفقا للأسلوب القياسي22. واستند حساب علي وظيفة المعايرة: اللد = 3.3 × SD/b، حيث sd هو الانحراف المعياري لل فارغه و b هو الميل من خط الانحدار

النتائج

لتحسين ظروف التفاعل (الشكل 2) ، وقد استخدمت الانينات المختلفة للزوجين مع pmq من خلال رد فعل griess. لقد حققنا سلسله من azos مع ألوان مختلفه. وقد وجد ان الانانينات مع الكترون التبرع مستبدل يمكن ان يسبب التحول الأحمر في طيف امتصاص الاشعه فوق البنفسجية-فيس. وأجريت الحسابات النظرية من ?...

Discussion

وصفنا طريقه القياس اللوني لقياس الكمية المناسبة ل PMQ. ومن المحتمل ان تكون الطريقة الحالية الأكثر بساطه وفعالية من حيث التكلفة. الأهم من ذلك ، يوفر هذا الأسلوب يتيح قياس PMQ علي أساس العين المجردة دون استخدام اي معدات.

رد فعل Griess الأمثل للكشف عن PMQ يمكن ان تولد اللون الأحمر azo مع ...

Disclosures

وليس لدي أصحاب البلاغ ما يعلنونه.

Acknowledgements

ويعترف المؤلفون بمنحه البدء من جامعه قوانغتشو للطب الصيني ومشروع التدريب علي البحث العلمي للشباب في غزوم (2019QNPY06). ونحن نعترف أيضا مركز لينغنان للبحوث الطبية في جامعه قوانغتشو للطب الصيني لدعم المرافق.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
4-MethoxyanilineAladdinK1709027
2,4-DimethoxyanilineHeowns10154207
3,4-DimethoxyanilineBidepharmBD21914
4-MethylanilineAdamas-betaP1414526
4-NitroanilineMacklinC10191447
96-wells,Flat BottonLabserv310109008
Gaussian@16 softwareGaussian, IncVersion:x86-64 SSE4_2-enabled/Linux
Hydrochloric acidGCRF20180902
Marvin sketch (software)CHEMAXONfree edition: 15.6.29
Phosphoric acidMacklinC10112815
Primaquine bisiphosphate3A ChemicalsCEBK200054
Sodium nitriteAlfa Aesar5006K18R
SulfonamidesTCI(shanghai)GCPLO-BP
Varioskan LUX Plate readerThermo FisherSupplied with SkanIt Software 4.1

References

  1. Fernando, D., Rodrigo, C., Rajapakse, S. Primaquine in vivax malaria: an update and review on management issues. Malar Journal. 10, 351 (2011).
  2. Deng, C., et al. Large-scale Artemisinin-Piperaquine Mass Drug Administration With or Without Primaquine Dramatically Reduces Malaria in a Highly Endemic Region of Africa. Clinical Infectious Diseases. 67 (11), 1670-1676 (2018).
  3. Pavic, K., et al. Primaquine hybrids as promising antimycobacterial and antimalarial agents. European Journal of Medical Chemistry. 143, 769-779 (2018).
  4. McQueen, A., et al. Synthesis, characterization, and cellular localization of a fluorescent probe of the antimalarial 8-aminoquinoline primaquine. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 27 (20), 4597-4600 (2017).
  5. Ashley, E. A., Recht, J., White, N. J. Primaquine: the risks and the benefits. Malaria Journal. 13 (1), 418 (2014).
  6. Watson, J., Taylor, W. R., Menard, D., Kheng, S., White, N. J. Modelling primaquine-induced haemolysis in G6PD deficiency. Elife. 6, (2017).
  7. Beutler, E. Glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency: a historical perspective. Blood. 111 (1), 16-24 (2008).
  8. Endoh, Y. S., et al. High-performance liquid chromatographic determination of pamaquine, primaquine and carboxy primaquine in calf plasma using electrochemical detection. Journal of Chromatography B: Biomedical Sciences and Applications. 579 (1), 123-129 (1992).
  9. Dua, V. K., Kar, P. K., Sarin, R., Sharma, V. P. High-performance liquid chromatographic determination of primaquine and carboxyprimaquine concentrations in plasma and blood cells in Plasmodium vivax malaria cases following chronic dosage with primaquine. Journal of Chromatography B: Biomedical Applications. 675 (1), 93-98 (1996).
  10. Miranda, T. A., Silva, P. H. R., Pianetti, G. A., César, I. C. Simultaneous quantitation of chloroquine and primaquine by UPLC-DAD and comparison with a HPLC-DAD method. Malaria Journal. 14, 29 (2015).
  11. Tatsuno, M., Nishikawa, M., Katagi, M., Tsuchihashi, H. Simultaneous determination of illicit drugs in human urine by liquid chromatography-mass spectrometry. Journal of Analytical Toxicology. 20 (5), 281-286 (1996).
  12. Erni, F. Use of high-performance liquid chromatography in the pharmaceutical industry. Journal of Chromatography A. 507, 141-149 (1990).
  13. Tsikas, D. Analysis of nitrite and nitrate in biological fluids by assays based on the Griess reaction: Appraisal of the Griess reaction in the l-arginine/nitric oxide area of research. Journal of Chromatography B. 851 (1), 51-70 (2007).
  14. Zurcher, D. M., Adhia, Y. J., Romero, J. D., McNeil, A. J. Modifying a known gelator scaffold for nitrite detection. Chemical Communications. 50 (58), 7813-7816 (2014).
  15. Kunduru, K. R., Basu, A., Tsah, T., Domb, A. J. Polymer with pendant diazo-coupling functionality for colorimetric detection of nitrates. Sensors and Actuators B: Chemical. 251, 21-26 (2017).
  16. Li, D., Ma, Y., Duan, H., Deng, W., Li, D. Griess reaction-based paper strip for colorimetric/fluorescent/SERS triple sensing of nitrite. Biosensors and Bioelectronics. 99, 389-398 (2018).
  17. Deng, T., et al. A novel strategy for colorimetric detection of hydroxyl radicals based on a modified Griess test. Talanta. 195, 152-157 (2019).
  18. Pang, H., et al. A photo-responsive macroscopic switch constructed using a chiral azo-calix[4]arene functionalized silicon surface. Chemical Communications (Camb). 54 (24), 2978-2981 (2018).
  19. Kaur, N., Dhaka, G., Singh, J. Simple naked-eye ratiometric and colorimetric receptor for anions based on azo dye featuring with benzimidazole unit. Tetrahedron Letters. 56 (9), 1162-1165 (2015).
  20. Liu, F., Lou, J., Hristov, D. X-Ray responsive nanoparticles with triggered release of nitrite, a precursor of reactive nitrogen species, for enhanced cancer radiosensitization. Nanoscale. 9 (38), 14627-14634 (2017).
  21. Deng, T., et al. An unexpected Griess reaction on the important anti-malarial drug primaquine and its application for drug determination. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 171, 8-14 (2019).
  22. Shrivastava, A., Gupta, V. Methods for the determination of limit of detection and limit of quantitation of the analytical methods. Chronicles of Young Scientists. 2 (1), 21-25 (2011).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

152 8 vis azo

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved