التنبيب المتكرر للأوتراكشفاء في الفئران

Summary

الهدف من هذه المقالة هو وصف طريقة مكررة من تنبيب فأرالمختبر. هذه الطريقة غير الغازية ، وبالتالي ، مثالية للدراسات التي تتطلب الرصد التسلسلي لوظيفة الجهاز التنفسي و / أو غرس العلاجات في الرئة.

Abstract

يصف الأدب عدة طرق لتنبيب الماوس التي تتطلب إما تصور الجلاوطي من خلال تجويف الفم أو شق في الرقبة البطنية لتأكيد مباشر لوضع قنية في القصبة الهوائية. ويمكن أن تشكل الصعوبة النسبية أو صدمة الأنسجة الناجمة عن هذه الإجراءات عائقاً أمام قدرة المحقق على إجراء دراسات طولية. توضح هذه المقالة تقنية يسمح فيها التلاعب الجسدي للفأرة بعد استخدام مزيل الشعر لإزالة الشعر من الرقبة البطنية بالتصور عبر الجلد للالقصبة الهوائية لتنبيب الأوروتراكفيل بغض النظر عن درجة الجلد تصبغ. هذه الطريقة غير ضارة بالموضوع وتتحقق بسهولة مع فهم محدود لتشريح المورين. يسهل هذا النهج المكرر التنبيب المتكرر ، والذي قد يكون ضروريًا لمراقبة تطور المرض أو غرس العلاجات. قد يؤدي استخدام هذه الطريقة إلى تقليل عدد الحيوانات والمهارة التقنية اللازمة لقياس وظائف الرئة في نماذج الماوس من أمراض الجهاز التنفسي.

Introduction

فأر المختبر هو نموذج الحيوان المشترك لأمراض الجهاز التنفسي البشرية. وهكذا ، هناك العديد من الطرق المنشورة لتنبيب الماوس لغرض غرس العلاجات وقياس ميكانيكا الجهاز التنفسي. معظم الإجراءات الموصوفة تتطلب تصور الجلاوطي من خلال تجويف الفم مع معدات متخصصة مثل منظار الحنجرة أو مصدر ضوء الألياف البصرية^1،2، 3^{،,4،5،6،7}.³ ومع ذلك ، يمكن أن يكون هذا صعبًا عندما تكون هناك حاجة إلى قنية كبيرة نسبيًا ، لأنها يمكن أن تحجب وجهة نظر الباحث. وقد عالج ليمجونياوونغ وآخرون⁸ هذا القلق بطريقة التنبيب التي يتم فيها إجراء شق جلدي صغير على طول خط الوسط في الرقبة البطنية مما يسمح بتصور القصبة الهوائية. بعد الإجراء ، يتم إغلاق الشق بلاصق للأنسجة.

بالنسبة للدراسات التي تتطلب عمليات تنبيب متكررة ، يتطلب التقطيع والإغلاق المتتالي لهذا الموقع إزالة الهوامش الجلدية وصدمة الأنسجة إلى الرقبة البطنية. الغرض من نهج تصور التراشف التراجيدي عبر الجلد للتنبيب عن طريق الفم هو توفير تقنية مكررة وغير باضعة مناسبة خصيصًا لدراسات التنبيب المتكررة وكذلك أحداث تنبيب واحد في الفئران.

Protocol

وقد وافقت اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها (IACUC) التابعة لجامعة ولاية أوهايو على جميع الأنشطة الحيوانية الموصوفة هنا، وأجريت في مرافق معتمدة من AAALAC.

1- إعداد الإجراءات

1. بناء منصة التنبيب. لتحقيق المنحدر منصة مناسبة، استخدم ثلاثة بوصة (7.6 سم) الموثق 3-حلقة. أضعاف طول 15-20 سم من الحرير 3-0 أو غيرها من المواد الخيط في النصف والالتزام نهايات الخيط إلى أعلى المنصة يميل مع الشريط لإنشاء حلقة تعليق(الشكل 1).
2. حدد قنية من الحجم المناسب والطول.
   ملاحظة: بالنسبة للفأرة التي يبلغ طولها 20-30 جم، يمكن استخدام قسطرة طويلة من 1 إلى 1.5 بوصة (2.5-3.8 سم) تصل إلى 18 جم. لهذه الدراسة، تم استخدام 18 امرأة تبلغ من العمر أسبوعًا في BALB/c وفئران C57BL/6 البالغة من العمر 10 أسابيع (n = 3 من كل سلالة). يوفر غمد القسطرة الأبيض المبهم أفضل تصور عبر الجلد.
3. قطع شطبة في الطرف القاصي من القسطرة وتمهيد السطح قطع مع ورقة جلخ لخلق طرف شطبة مدورة. خلق بلطف منحنى طفيف في قنية حوالي 1 سم من شطبة(الشكل 2).
   ملاحظة: يجب استخدام قسطرة جديدة لكل فأرة.
4. إجراء حقن للفأرة باستخدام الكيتامين (5.4 ملغم/غرام من وزن الجسم) وxylazine (16 ميكروغرام/غرام من وزن الجسم) التي تدار داخل البيريتين.  تطبيق مرهم ophthalimic العقيمة على العينين.
   ملاحظة: ويتحقق عمق التخدير السليم من خلال عدم استجابة الماوس لقرصة إصبع القدم شركة.
5. قم بتعليق الماوس في وضع ية على منصة التنبيب عن طريق ربط القواطع العلوية حول خيط الحرير في الجزء العلوي من السطح الزاوية(الشكل 3). مرة واحدة يتم وضع الماوس بشكل مباشر في recumbency الظهرية، فهم بلطف قاعدة الذيل والتراجع الذيل نحو الجدول. ضع قطعة من الشريط فوق قاعدة الذيل لتأمين الماوس.
6. تطبيق كريم إزالة المزيل(جدول المواد)على منطقة عنق الرحم البطنية لمدة 30-45 ق ثم إزالة جميع كريم إزالة المزيل من منطقة عنق الرحم باستخدام شاش جاف. كرر عملية التطبيق إذا لزم الأمر. شطف الجلد جيدا بالماء المالح أو المقطر لإزالة أي بقايا ثم مسح الجافة.

2- إجراء التنبيب

1. استخدام مستقيم، الملقط المسطحة في اليد غير المهيمنة لسحب اللسان بلطف بطريقة تفتح بما فيه الكفاية الفم لإدخال قنية.
   ملاحظة: لا ينبغي استخدام ملقط الأسنان الفئران لأن هذا سوف يضر اللسان.
2. مع اليد المهيمنة ، تقدم في القنية إلى الفم بحيث تكون النهاية التي هي distal إلى الانحناء الطفيف ضد سقف فم الشخص.
3. الافراج عن اللسان والانزلاق على الحافة المسطحة من الملقط مغلقة caudally على طول الرقبة البطنية حتى يتم التوصل إلى manubrium. هذا الاقتراح يُشرّد الغدد اللعابية ويُسّط العضلات التي تغطي القصبة الهوائية. يظهر القصبة الهوائية عبر الجلد كخط أبيض(الشكل 3A). إذا لزم الأمر، تدوير الملقط في اتجاه الجمجمة مع الحفاظ على التوتر على الجلد في اتجاه caudal للتسبب في الغدد اللعابية المشردة في وقت لاحق إلى الذروة. هذه المناورة يخلق المزيد من التباين حول القصبة الهوائية(الشكل 3B).
   ملاحظة: تجنب القوة المفرطة على الرقبة البطنية لأنها يمكن أن تنهار القصبة الهوائية وتضعف التنفس.
4. تقدم في حين أن القُلة في وقت واحد الصيد الطرف المنفز من التهوية عن طريق التمويع من اليد المهيمنة مع مرونة في وقت واحد من المعصم.
5. ويشار إلى الموضع الصحيح للقنية من خلال تصور قنية مبهمة في القصبة الهوائية(الشكل 4B, D). إذا كانت قد تقدمت قنية الماضي مستوى أصل العضلات المدلكة وتصور قنية في القصبة الهوائية لم يتم تأكيد، تراجع عن قنية وإعادة محاولة المناورة.
6. تأكيد وضع القنية المناسبة عن طريق ربط لمبة تضخم الرئة إلى قنية ومراقبة التوسع الصدري مع الاكتئاب المتزامن للجهاز.
7. دون إزاحة القنية ، فك بعناية القواطع من الماوس من منصة التنبيب. نقل الماوس إلى منصة أفقية(جدول المواد)وإدراج قنية إلى محول على جهاز التنفس الصناعي. بعد التضخم العميق، تهوية الماوس لمدة 60 ق ثم قياس مقاومة الجهاز التنفسي.

3- الاسترداد

1. بمجرد اكتمال الإجراء، حرك الماوس إلى منصة دافئة. توفير التحفيز المستمر عن طريق إصبع القدم الخفيف أو قرصة الذيل لتشجيع التنفس التلقائي.
2. يمكن أن يحدث استئصال عندما يبدأ الماوس فقط في المضغ. فهم قنية على مستوى المحور وسحب بلطف أنبوب قحوية وبعيدا عن الماوس حتى تتم إزالة قنية تماما من فم الموضوع.
   ملاحظة: فمن الأفضل لتوفير دعم مجرى الهواء مع قنية جامدة لأطول فترة ممكنة خلال عملية الانتعاش.
3. مرة واحدة extubated، ونقل الماوس إلى قفص الانتعاش نظيفة مع دعم الحرارة. مراقبة الماوس باستمرار حتى يكون متنقلا تماما، واكتمال الاسترداد.

النتائج

الرصد التسلسلي لوظيفة الرئة الأساسية
تم تنبيب أنثى بالب/ج البالغة من العمر ثمانية عشر أسبوعًا وفئران C57BL/6 البالغة من العمر 10 أسابيع (n = 3 من كل سلالة) باستخدام الطريقة الموصوفة في اليوم 0 و3 و10 و17. بعد التنبيب في كل يوم ، تم توصيل هذا الموضوع بجهاز التنفس الصناعي الميكانيكي المزود ب...

Discussion

التنبيب باستخدام تقنية التصور تراكل عبر الجلد يقدم نهجا المكرر لطريقة شق الجلد القياسية. مع إيلاء اهتمام خاص لعدة خطوات رئيسية، يمكن أن يتحقق التنبيب بسهولة وبسرعة. يجب وضع الحيوان مباشرة في الردورة الظهرية على منصة التنبيب مع الماوس المضمون في تراجع لطيف. وهذا سوف تمتد الحيوان إلى محاذا?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
18Gx1 1/4" intravenous catheter, Safelet	Fisher Scientific	#14-841-14	Cannula for intubation
70% ethanol, 10L	Fisher Scientific	25467025	Cleaning cannula
Abrasive paper (sandpaper)	Porter-Cable	74001201	Cannula preparation
AnaSed (xylazine sterile solution) injection (100 mg/ml)	Akorn Animal Health	NDC# 59399-111-50	Anesthesia
Blue labeling tape (0.5 in x 14 yds)	Fisher Scientific	15966	Restraint on intubation platform
Braided silk suture without needle, nonsterile, (3-0)	Henry Schein	Item #1007842	Intubation platform
Deltaphase Isothermal Pad	Braintree Scientific	39DP	Mouse thermoregulation and recovery
Deltaphase Operating Board	Braintree Scientific	39OP	Mouse recovery (prior to extubation)
Distilled water	ThermoFisher	15230253	Cleaning mouse following depilation
Eye Scissors, angled, sharp/sharp	Harvard Apparatus	72-8437	Cannula preparation
FlexiVent (FX Module 2)	Scireq	N/A	Record lung function data (not required to perform procedure, used in this study to validate procedure)
Gauze sponges	Fisher scientific	13-761-52	Hair removal
Heavy-Duty 3" 3-Ring View Binders	Staples	24690CT	Intubation platform
Instat Software	Graphpad	N/A	Statistical analysis software
Insulin syringe (0.5 cc, U100)	Fisher Scientific	329461	Anesthesia administration
Ketamine HCl Injection, USP (100 mg/ml)	Llyod Laoratories	List No. 4871	Anesthesia
Lung inflation bulb	Harvard Apparatus	72-9083	Confirm cannula placement
Micro Forceps, Curved, Smooth	Harvard Apparatus	72-0445	Retract tongue and create tension on neck for cannula visualization
Nair (hair removal lotion), 9 oz bottle	Church & Dwight	42010440	Hair removal
Sterile saline (0.9%), 10 ml	Fisher Scientific	NC9054335	Anesthesia, cleaning skin following hair removal