Farelerde Tekrarlanan Orotracheal Entübasyon

Özet

Bu makalenin amacı, laboratuvar faresinin entübasyonunun rafine bir yöntemini açıklamaktır. Yöntem noninvaziv ve bu nedenle, solunum fonksiyonu ve / veya akciğer içine tedavilerin indaşseri izleme gerektiren çalışmalar için idealdir.

Özet

Literatürde fare entübasyonu için ya ağız boşluğu ndan glottisin görüntülenmesi ya da nefes borusunda kanül yerleşiminin doğrudan doğrulanması için ventral boyundaki kesi gerektiren çeşitli yöntemler açıklanmaktadır. Bu tür işlemlerle konuya bağlı göreceli zorluk veya doku travması, bir araştırmacının uzunlamasına çalışmalar yapabilmesine engel teşkil edebilir. Bu makalede, ventral boyun saç kaldırmak için bir depilatörü nardından sonra farenin fiziksel manipülasyon ne olursa olsun cilt derecesi ne olursa olsun orotracheal entübasyon için trakea transkutanöz görselleştirme izin veren bir teknik göstermektedir Pigmentasyon. Bu yöntem konuya zararsızdır ve sınırlı bir mürin anatomisi anlayışı ile kolayca elde edilir. Bu rafine yaklaşım, hastalığın ilerlemesini veya tedavilerin indatılması için gerekli olabilecek tekrarlanan entübasyonu kolaylaştırır. Bu yöntemin kullanılması, solunum yolu hastalıklarının fare modellerinde akciğer fonksiyonunu ölçmek için gerekli olan hayvan sayısının azalmasına ve teknik beceriye neden olabilir.

Giriş

Laboratuvar fareinsan solunum hastalığı için ortak bir hayvan modelidir. Bu nedenle, hem tedavilerin instillasyonu hem de solunum mekaniğinin ölçümü amacıyla fare entübasyonu için yayınlanmış çeşitli yöntemler bulunmaktadır. Açıklanan prosedürlerin çoğu bir laringoskop veya fiber optik ışık^kaynağı1,^2,3,4,5,6,7gibi özel ekipman ile ağız boşluğu ile glottis görselleştirme gerektirir.^, Ancak, bu nispeten büyük bir kanül gerekli olduğunda zor olabilir, bu araştırmacının görünümünü gizlemek gibi. Limjunyawong ve ark.⁸ hangi küçük bir kutanöz kesi trakea görselleştirme için izin ventral boyun orta hattı boyunca yapılır entübasyon yöntemi ile bu endişe ele almış. İşlemin ardından kesi doku yapıştırıcısı ile kapatılır.

Sık tekrarlanan entübasyonlar gerektiren çalışmalar için, ardışık intübasyon ve bu sitenin kapatılması cilt marjları ve ventral boyun doku travması debridman gerektirir. Oral entübasyona transkutanöz trakeal görüntüleme yaklaşımının amacı, farelerde tek entübasyon olaylarının yanı sıra tekrarlanan entübasyon çalışmaları için özel olarak uygun olan rafine, noninvaziv bir teknik sunmaktır.

Protokol

Burada açıklanan tüm hayvan faaliyetleri Ohio State Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır ve AAALAC onaylı tesislerde gerçekleştirilmiştir.

1. Prosedür Hazırlığı

1. Entübasyon platformunu oluştur. Uygun platform eğimini elde etmek için, üç inç (7,6 cm) 3 halkalı bağlayıcı kullanın. 15−20 cm uzunluğunda 3-0 ipek veya diğer iplik malzemesini ikiye katlayın ve bir süspansiyon halkası oluşturmak için ipliğin uçlarını bantla eğimli platformun tepesine yapıştırın (Şekil 1).
2. Uygun boyut ve uzunlukta bir kanül seçin.
   NOT: 20−30 g fare için 1−1,5 inç (2,5−3,8 cm) uzunluğunda bir kateter 18 G'ye kadar kullanılabilir. Bu çalışmada 18 haftalık dişi BALB/c ve 10 haftalık C57BL/6 fare (n = 3 her tür) kullanıldı. Opak beyaz kateter kılıfı en iyi transkutanöz görüntülemeyi sağlar.
3. Kateterin distal ucundabir kesve alın ve yuvarlak bir yontma ucu oluşturmak için aşındırıcı kağıt ile kesme yüzeyini düzleştirin. Kanülde eğimli yaklaşık 1 cm'lik hafif bir büküm yavaşça oluşturun (Şekil 2).
   NOT: Her fare için yeni bir kateter kullanılmalıdır.
4. Ketamin (5.4 mg/g vücut ağırlığı) ve intraperitoneal olarak uygulanan ksilazin (16 g/g vücut ağırlığı) ile fareyi anestezi edin.  Gözlere steril oftalmit merhem uygulayın.
   NOT: Uygun anestezik derinlik, farenin sağlam bir parmak sıkışmasına yanıt verilmemesi ile elde edilir.
5. Entübasyon platformunda, açılı yüzeyin üst kısmındaki ipek ipliğin etrafındaki üst kesici dişleri bağlayarak fareyi entübasyon platformunda supine pozisyonunda askıya alın(Şekil 3). Fare dorsal recumbency kare konumlandırılmış sonra, yavaşça kuyruk tabanını kavramak ve masaya doğru kuyruk geri çekmek. Fareyi sabitlemek için kuyruk tabanına bir bant parçası yerleştirin.
6. 30−45 s için ventral servikal bölgeye tüy dökücü krem(Tablo)uygulayın sonra kuru bir gazlı bez kullanarak servikal bölgeden tüm tüy dökücü krem çıkarın. Gerekirse başvuru işlemini tekrarlayın. Iyice tuzlu veya distile su ile cilt durulayın sonra kuru silin herhangi bir kalıntı kaldırmak için.

2. Entübasyon Prosedürü

1. Kanülün tanıtımı için ağzı yeterince açarak dili yavaşça geri çekmek için baskın olmayan elde düz, düz forseps kullanın.
   NOT: Fare diş prizi kullanılmamalıdır, çünkü bu dilin zarar görmesine neden olur.
2. Baskın el ile, hafif viraj distal olan ucu konunun ağzının çatı karşı olacak şekilde ağız içine kanül ilerlemek.
3. Dili bırakın ve kapalı çalgılardüz kenarı manubrium ulaşıncaya kadar ventral boyun boyunca caudally kaydırın. Bu hareket yanal tükürük bezleri yerinden ve trakea kapsayan kas düzleştirir. Trakea transkutan olarak beyaz bir çizgi olarak görünür (Şekil 3A). Gerekirse, kaudal yönde bir deri üzerinde gerginlik korurken bir kraniodorsal yönde forceps döndürmek yanal yerinden tükürük bezleri zirveye neden. Bu manevra trakea etrafında daha fazla kontrast oluşturur (Şekil 3B).
   NOT: Nefes borusunu çökertebileceği ve solunumu bozabileceği nden ventral boyunda aşırı güç kullanmaktan kaçının.
4. Aynı anda bilek eşzamanlı fleksiyon ile baskın el insupination tarafından kanül ventrally distal ucu olta ise kanül ilerletin.
5. Kanülün doğru yerleştirilmesi, opak kanülün trakeadaki görselleştirilmesiile gösterilir (Şekil 4B,D). Kanül, masseter kasının kökeni nin seviyesini geçtiyse ve kanülün nefes borusundaki görselleştirme onaylanmamışsa, kanülü geri alın ve manevrayı yeniden dene.
6. Kanüle bir akciğer şişirme ampulü bağlayarak ve cihazın eşzamanlı depresyonu ile torasik genişleme gözlemleyerek uygun kanül yerleşimi doğrulayın.
7. Kanül yerinden olmadan, farenin kesici kesici lerini entübasyon platformundan dikkatlice çözün. Fareyi yatay bir platforma(Malzeme Tablosu)taşıyın ve kanülü vantilatörün üzerindeki adaptöre takın. Derin enflasyon uzerine fareyi 60 s için havalandırın ve solunum direncini ölçer.

3. Kurtarma

1. Yordam tamamlandıktan sonra fareyi ısıtılmış bir platforma taşıyın. Spontan solunumu teşvik etmek için ışık altı veya kuyruk puşları ile sürekli uyarım sağlayın.
2. Ekstübasyon fare sadece çiğnemeye başladığında oluşabilir. Kavunu göbek seviyesinde tutun ve kanül deneğin ağzından tamamen çıkarılana kadar tüpü yavaşça ve fareden çekin.
   NOT: İyileşme sürecinde mümkün olduğunca uzun süre sert kanül ile hava yolu desteği sağlamak tercih edilir.
3. Bir kez extübasyon, ısı desteği ile temiz bir kurtarma kafesi için fare aktarın. Fareyi tamamen ambulatuar olana ve kurtarma tamamlanana kadar sürekli olarak izleyin.

Sonuçlar

Bazal pulmoner fonksiyonun seri takibi
On sekiz haftalık dişi BALB/c ve 10 haftalık C57BL/6 fareler (her bir türün n = 3'ü) belirtilen yöntem kullanılarak 0, 3, 10 ve 17. Her gün entübasyon sonrasında, konu % 100 oksijen(Tablo Malzemeler)ile birlikte verilen mekanik bir ventilatöre bağlandı. Solunum direnci (Rrs) 5 s için düzenlenen 25 cm H₂O derin bir enflasyon sonrasında 60 s için zorunlu salınım tekniği kullanılarak ölçüldü. Fizyolojik aralıkta...

Tartışmalar

Transkutanöz trakeal görme tekniği kullanılarak entübasyon, standart deri kesi yöntemine rafine bir yaklaşım sunar. Birkaç önemli adıma özel dikkat ile, entübasyon kolayca ve hızlı bir şekilde elde edilebilir. Hayvan, entübasyon platformunda fare nin nazik bir şekilde geri çekilmesi ile dorsal recumbency'ye kare olarak yerleştirilmelidir. Bu dikey hizalama ve entübasyon için uygun konumlandırma içine hayvan genişletecektir. Buna ek olarak, tüy dökücü krem 30−45 s'den daha uzun süre hayvan?...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
18Gx1 1/4" intravenous catheter, Safelet	Fisher Scientific	#14-841-14	Cannula for intubation
70% ethanol, 10L	Fisher Scientific	25467025	Cleaning cannula
Abrasive paper (sandpaper)	Porter-Cable	74001201	Cannula preparation
AnaSed (xylazine sterile solution) injection (100 mg/ml)	Akorn Animal Health	NDC# 59399-111-50	Anesthesia
Blue labeling tape (0.5 in x 14 yds)	Fisher Scientific	15966	Restraint on intubation platform
Braided silk suture without needle, nonsterile, (3-0)	Henry Schein	Item #1007842	Intubation platform
Deltaphase Isothermal Pad	Braintree Scientific	39DP	Mouse thermoregulation and recovery
Deltaphase Operating Board	Braintree Scientific	39OP	Mouse recovery (prior to extubation)
Distilled water	ThermoFisher	15230253	Cleaning mouse following depilation
Eye Scissors, angled, sharp/sharp	Harvard Apparatus	72-8437	Cannula preparation
FlexiVent (FX Module 2)	Scireq	N/A	Record lung function data (not required to perform procedure, used in this study to validate procedure)
Gauze sponges	Fisher scientific	13-761-52	Hair removal
Heavy-Duty 3" 3-Ring View Binders	Staples	24690CT	Intubation platform
Instat Software	Graphpad	N/A	Statistical analysis software
Insulin syringe (0.5 cc, U100)	Fisher Scientific	329461	Anesthesia administration
Ketamine HCl Injection, USP (100 mg/ml)	Llyod Laoratories	List No. 4871	Anesthesia
Lung inflation bulb	Harvard Apparatus	72-9083	Confirm cannula placement
Micro Forceps, Curved, Smooth	Harvard Apparatus	72-0445	Retract tongue and create tension on neck for cannula visualization
Nair (hair removal lotion), 9 oz bottle	Church & Dwight	42010440	Hair removal
Sterile saline (0.9%), 10 ml	Fisher Scientific	NC9054335	Anesthesia, cleaning skin following hair removal