JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

نُظهر اختبار سمية الطحالب للمواد الصعبة (مثل المواد الملونة أو المواد النانوية) باستخدام إعداد مضاء عموديًا بمُدرّي.

Abstract

13 - بيانات السمية الإيكولوجية هي شرط لتسجيل المواد الكيميائية قبل السوق وما بعدها بواسطة اللوائح الأوروبية والدولية (مثل نظام REACH). وكثيراً ما يستخدم اختبار سمية الطحالب في التقييم التنظيمي للمخاطر الكيميائية. ومن أجل تحقيق موثوقية عالية وقابلية استنساخ عالية، يعد وضع مبادئ توجيهية موحدة أمرا حيويا. وبالنسبة لاختبار السمية الطحالب، تتطلب المبادئ التوجيهية ظروفاً مستقرة وموحدة من المعلمات مثل درجة الحرارة ودرجة الحرارة ومستويات ثاني أكسيد الكربون وكثافة الضوء. ويمكن أن تتداخل المواد النانوية وغيرها من المواد التي تسمى بمواد صعبة مع الضوء مما يسبب تباينا كبيرا في النتائج التي تم الحصول عليها مما يعوق قبولها التنظيمي. ولمعالجة هذه التحديات، قمنا بتطوير LEVITATT (جدول الإضاءة العمودي LED لاختبارات سمية الطحالب). يستخدم الإعداد إضاءة LED من الأسفل مما يسمح بتوزيع الضوء المتجانس والتحكم في درجة الحرارة مع تقليل تظليل العينة الداخلية. الإعداد يحسن حجم العينة للكتلة الحيوية الكم ولا في الوقت نفسه ضمان تدفق كافية من CO2 لدعم النمو الأسي للطحالب. بالإضافة إلى ذلك، يمكن تصميم مواد حاويات الاختبار لتقليل الامتزاز والتطاير. عند اختبار المواد الملونة أو تعليق الجسيمات، واستخدام أضواء LED يسمح أيضا لزيادة شدة الضوء دون توليد الحرارة إضافية. يزيد التصميم المدمج والمتطلبات الدنيا من المعدات من إمكانيات تنفيذ نظام LEVITATT في مجموعة واسعة من المختبرات. في حين أن الامتثال للمبادئ التوجيهية ISO ومنظمة التعاون والتنمية في الميدان الاقتصادي لاختبار السمية الطحالب، أظهرت LEVITATT أيضا انخفاض في التغير بين العينات لمادتين مرجعيتين (3،5-ديكولوروبفينول وK2Cr2O7)وثلاثة المواد النانوية (ZnO، CeO2،وBaSO4)مقارنة مع قارورة إرلنماير وألواح microtiter.

Introduction

اختبار السمية الطحالب هو واحد من ثلاثة اختبارات إلزامية فقط تستخدم لتوليد بيانات السمية الإيكولوجية المطلوبة لتسجيل المواد الكيميائية قبل وبعد السوق بواسطة اللوائح الأوروبية والدولية (مثل REACH1 و TSCA (الولايات المتحدة الأمريكية)). ولهذا الغرض، وضعت المنظمات الدولية مبادئ توجيهية موحدة لاختبار الطحالب (مثل المنظمة الدولية للتوحيد القياسي ومنظمة التعاون والتنمية في الميدان الاقتصادي). هذه المعايير والمبادئ التوجيهية اختبار يصف ظروف الاختبار المثالي من حيث درجة الحرارة ودرجة الحرارة، ومستويات ثاني أكسيد الكربون وكثافة الضوء. غير أن الحفاظ على ظروف اختبار مستقرة أثناء اختبار الطحالب أمر صعب في الممارسة العملية، وتعاني النتائج من مشاكل في قابلية التكاثر والموثوقية لمجموعة من المواد الكيميائية والمواد النانوية (التي يشار إليها في كثير من الأحيان باسم "المواد الصعبة")2. معظم الاجهزة القائمة اختبار السمية الطحالب تعمل مع كميات كبيرة نسبيا (100-250 مل) تقع على شاكر المدارية داخل حاضنة. ويحد هذا الإعداد من عدد تركيزات الاختبار ويستنسخ كميات كبيرة وقابلة للتحقيق من ثقافة الطحالب ومواد الاختبار. بالإضافة إلى ذلك، نادراً ما يكون لهذه الاجهزة حقل ضوء موحد وظروف الإضاءة الموثوقة هي كذلك من الصعب الحصول عليها في قارورات كبيرة، جزئياً حيث تقلل كثافة الضوء بشكل كبير من زيادة الرحلات الخفيفة وجزئياً بسبب هندسة القارورة. وتشمل الاجهزة البديلةألواح 3 من البلاستيك التي تحتوي على أحجام عينات صغيرة لا تسمح بأحجام كافية لأخذ العينات لقياس رقمH أو قياسات إضافية للكتلة الحيوية أو استخراج الصباغ أو غيرها من التحليلات التي تتطلب أخذ عينات مدمرة. أحد التحديات الخاصة باستخدام الاجهزة الموجودة لاختبار سمية الطحالب من المواد النانوية والمواد التي تشكل التعليقات الملونة هو التدخل أو حجب الضوء المتوفر للخلايا الطحالب ، وغالبا ما يشار إليها باسم "التظليل"4،5. قد يحدث التظليل داخل قوارير بواسطة مادة الاختبار و/أو التفاعلات بين مادة الاختبار وخلايا الطحالب، أو يمكن أن يحدث التظليل بين القنينات، بسبب تحديد موضعها بالنسبة لبعضها البعض ومصدر الضوء.

وتستند هذه الطريقة على إعداد اختبار السمية الطحالب على نطاق صغير الذي قدمه أرينسبرغ وآخرون6 الذي يسمح بإجراء الاختبار وفقا لمعايير مثل OECD 2017، وISO 86928. والطريقة هي أكثر الأمثل لمعالجة القيود المذكورة أعلاه من خلال: 1) استخدام تكنولوجيا ضوء LED لضمان ظروف ضوئية موحدة مع توليد الحرارة الحد الأدنى، 2) توفير حجم عينة كافية للتحليل الكيميائي / البيولوجي مع الحفاظ على درجة حرارة ثابتة، ومستويات CO2، و 3) تمكين استخدام مواد حاوية اختبار متعددة الاستخدامات لاختبار المواد المتطايرة أو المواد ذات الإمكانية العالية للفحص.

Protocol

1. وصف الإعداد LEVITATT

  1. استخدام 20 مل قنينات الزجاج التلألؤ(الشكل 1، إدراج 1) السماح للاختراق الضوء. بدلا من ذلك، يمكن استخدام قارورة بلاستيكية خفيفة قابلة لل ركلة. كمّيّة ال [اّينتّر هّدّدّدّيّرّيّ].
  2. استخدام تعليق اختبار 4 مل على الأقل في بداية الاختبار للسماح بالتجريد الكمي للكتلة الحيوية وتحديد الخواص/القياس الكمي للمواد النانوية أثناء وبعد الاحتضان(الشكل 1، إدراج 2).
  3. تناسب قوارير مل 20 مل مع قبعة (الشكل 1، إدراج 3) حيث يتم حفر ثقب صغير (ما يقرب من 1 مم في القطر) للسماح لتبادل CO2 مع الغلاف الجوي. هذا التبادل أمر بالغ الأهمية لضمان مستويات ثابتة من مستويات الـ PH وCO2 أثناء الاختبار.
  4. للمواد المتطايرة، استخدم غطاء مغلفة تفلون محكم الهواء للسماح CO2 إثراء من headspace باستخدام حقنة9 أو قارورة مغلقة تماما مع عدم وجود مرحلة الغاز الذي يتم الحفاظ على CO2 في الحل من قبل بيكربونات الصوديوم المخصب (NaHCO3) نظامعازلة 10.
  5. ربط القوارير مع المشابك التي شنت على الغلاف الخارجي (الشكل 1، إدراج 4).
  6. استخدام مصدر ضوء LED الموجود تحت قوارير الاختبار(الشكل 1، إدراج 5) توفير إضاءة فلورية موحدة من نوع "بارد أبيض" أو "ضوء النهار" وشدة الضوء في نطاق 60-120 μE∙m-2•s-1 تقاس في نطاق الطول الموجي الفعال للضوء من 400 نانومتر إلى 700 نانومتر. يستخدم الإعداد كثافة الضوء قابل للتعديل في نطاق 5-160 μE•m -2•s-1 عن طريق تركيب باهتة الضوء إلى المصدر. وهذا يسمح للاختبار في كثافة الضوء أعلى وأقل.
  7. جبل الإعداد على شاكر المدارية لتهيج العينات طوال مدة الاختبار. هذا يحافظ على الخلايا في تعليق حر ويسهل CO2 نقل الشامل من الهواء إلى الماء(الشكل 1, إدراج 6).
  8. وضع الإعداد في غرفة درجة الحرارة التي تسيطر عليها أو مجلس الوزراء الحرارة للحفاظ على درجات حرارة مستقرة طوال الاختبار(الشكل 1، إدراج 7).

figure-protocol-2117
الشكل 1: صورة جدول الإضاءة العمودي LED لاختبارات سمية الطحالب (LEVITATT). 1) 20 مل قنينات التسجيل الزجاجي للحضانة، 2) عينة 4 مل للتحليل، 3) غطاء مع ثقب حفر لتبادل CO2، 4) غلاف لظروف الضوء المحدد، 5) مصدر ضوء LED الموجود في وسط الغلاف، 6) شاكر المداري للهياج أثناء التجربة، و 7) مجلس الوزراء thermostatic. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

2- إعداد وسيط نمو الطحالب

  1. و ISO 8692 الطحالب نمو المتوسطة يتكون من أربعة حلول مختلفة للأسهم. تزن كمية مناسبة من الأملاح وتمييع في المياه فائقة الpure وفقا للجدول 1.
حلول الأسهمالمغذياتالتركيز في محلول المخزونالتركيز في محلول الاختبار
1: المغذيات الكبيرةNH4Cl1.5 غرام/لتر15 ملغم / لتر (ن: 3.9 ملغ / لتر)
MgCl2• 6H2O1.2 غرام/لتر12 ملغم / لتر (ملغ: 2.9 ملغ / لتر)
CaCl2• 2H2O1.8 غرام/لتر18 ملغم / لتر (كاليفورنيا: 4.9 ملغ / لتر)
MgSO4• 7H2O1.5 غرام/لتر15 ملغم / لتر (S: 1.95 ملغ / لتر)
KH2PO4 0.16 غ/لتر1.6 ملغم / لتر (P: 0,36 ملغ / لتر)
2: Fe-EDTAFeCl3• 6H2O64 ملغم / لتر64 ميكروغرام/لتر (في: 13 ميكروغرام/لتر)
Na2EDTA• 2H2O100 ملغ / لتر100 ميكروغرام/لتر
3: عناصر تتبعH3BO3a 185 ملغم / لتر185 ميكروغرام/لتر (ب: 32 ميكروغرام/لتر)
MnCl2∙ 4H2O415 ملغ/ لتر415 ميكروغرام/لتر (عدد الغمات: 115 ميكروغرام/لتر)
ZnCl2 3 ملغ / لتر3 ميكروغرام/لتر (زنة: 1.4 ميكروغرام/لتر)
CoCl2• 6H2O1.5 ملغم/لتر1.5 ميكروغرام/لتر (Co: 0.37 ميكروغرام/لتر)
CuCl2• 2H2O0.01 ملغم/لتر0.01 ميكروغرام/لتر (مكعب: 3.7 نانوغرام/لتر)
Na2MoO4• 2H2O7 ملغ / لتر7 ميكروغرام/لتر (مو: 2.8 ميكروغرام/لتر)
4: NaHCO3NaHCO3 50 غرام /لتر50 ملغم / لتر (ج: 7.14 ملغ / لتر)

الجدول 1: تركيزات المغذيات في حلول المخزون من أجل متوسط نمو الطحالب

ملاحظة: H3BO3 يمكن أن تذوب بإضافة 0.1 M NaOH. يجب إزالة EDTA عند اختبار المعادن، لتجنب التعقيد مع أيونات المعادن. تعقيم حلول الأسهم عن طريق الترشيح غشاء (متوسط قطر المسام 0.2 μm) أو عن طريق autoclaving (120 درجة مئوية، 15 دقيقة). لا يوجد حلول الأسهم الأوتوكلاف 2 و 4، ولكن تعقيم لهم عن طريق الترشيح غشاء. تخزين الحلول في الظلام عند 4 درجة مئوية.

  1. لإنتاج 1 لتر من الطحالب متوسطة النمو، ونقل 500 مل تعقيم المياه فائقة السخاء في 1 L تعقيم قارورة الحجمية وإضافة 10 مل من الأسهم الحل 1: المغذيات الكبيرة، 1 مل من الأسهم الحل 2: Fe-EDTA، 1 مل من الأسهم الحل 3: العناصر النادرة، و 1 مل من الأسهم الحل 4: NaHCO3.
  2. ملء ما يصل إلى 1 لتر مع المياه فائقة الطهر تعقيم، سدادة قارورة ويهز جيدا لتجانس متوسطة نمو الطحالب.
  3. اكويبيل الحل قبل الاستخدام عن طريق تركها بين عشية وضحاها في اتصال مع الهواء أو عن طريق محتدما مع العقيمة، وتصفية الهواء لمدة 30 دقيقة. بعد التوازن، قم بضبط درجة حُكَرَة النفايات، إذا لزم الأمر، إلى 8.1 ± 0.2، إما بـ 1 M HCl أو 1 M NaOH.

3. إعداد اختبار الطحالب

ملاحظة: يتم عرض مخطط تدفق إجراء اختبار الطحالب في الشكل 2.

figure-protocol-6585
الشكل 2: رسم تخطيطي للتدفق لإعداد اختبار الطحالب. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

  1. إعداد حل الأسهم من مجمع اختبار في التركيز اختبار أعلى المطلوب في متوسط نمو الطحالب أعدت وفقا للخطوة 2. لإعداد حلول الأسهم / التعليقات، اتبع منظمة التعاون والتنمية في الميدان الاقتصادي 201 (للمركبات القابلة للذوبان) أو OECD 318 (للمواد النانوية).
  2. قياس في مستوى الأسهم في حل الأسهم. إذا كان ينحرف أكثر من وحدة واحدة من متوسط نمو الطحالب، ضبط درجة ح H إلى 8 مع إما 1 M HCl أو 1 M NaOH.
  3. احسب حجم التلقين اللازم للوصول إلى تركيز الخلية النهائي من 1 × 104 خلايا /مل في حل اختبار 25 مل.
    ملاحظة: يجب أن تأتي inoculum من ثقافة غير ملوثة تزايداً أسياً Raphidocelis رأس المال الفرعي نمت باستخدام إعداد LEVITATT.
  4. حساب كمية من محلول الأسهم لإضافة إلى كل قارورة حجم 25 مل الحجمي للحصول على تركيزات الاختبار المطلوب. وينبغي ألا يتجاوز العامل بين كل تركيز 3.2.
  5. مارك واحد 25 مل قارورة الحجم لكل تركيز المختارة و 25 مل إضافية تحكم الحجمي قارورة ملحوظ.
  6. إضافة كمية من محلول المخزون من مجمع الاختبار اللازمة للوصول إلى التركيزات المطلوبة إلى قارورة حجم 25 مل. لا تقم بإضافة حل الأسهم إلى عنصر التحكم.
  7. أضف المتوسط إلى كل قارورة حجمية 25 مل للوصول إلى حجم 20 مل تقريبا.
  8. إضافة حجم inoculum المحسوبة في الخطوة 3.3 إلى كل قارورة حجمية 25 مل. أضف المتوسط إلى كل قارورة حجمية 25 مل إلى حجم إجمالي نهائي قدره 25 مل.
  9. سداد القارورة وخلط جيدا عن طريق تحويل القارورة مرتين عموديا.
  10. نقل 0.4 مل من كل قارورة إلى قارورة قبعة المسمار الفردية وإضافة 1.6 مل من الأسيتون (المشبعة مع MgCO3):عينة واحدة لكل تركيز الاختبار والسيطرة. أغلق الأغطية بإحكام واحفظها في الظلام في درجة حرارة الغرفة حتى قياسات الفلور (القسم 4).
  11. Pipet 4 مل من كل حل اختبار في 20 مل قنينات التلألؤ (3 يكرر لكل تركيز و 5 يكرر للسيطرة). أغطية المسمار على قوارير التلألؤ. تذكر أن الأغطية يجب أن يكون لها ثقب حفر (ما يقرب من 1 مم في القطر) للسماح لتبادل CO2.
  12. بعد 24 ح، 48 ح، و 72 ساعة، pipet 0.4 مل من كل قارورة إلى قنينات قبعة المسمار وإضافة 1.6 مل من الأسيتون (المشبعة مع MgCO3). أغلق الأغطية بإحكام واحفظها في الظلام في درجة حرارة الغرفة حتى قياسات الفلور (القسم 4).
  13. بعد أخذ العينة الأخيرة في 72 ساعة، تجمع بلطف التكرارات الثلاثة لتركيز معين في قارورة واحدة وقياس درجة ح. كرر لجميع التركيزات والسيطرة. وينبغي أن لا ينحرف درجة حُرْر أكثر من 1.5 وحدة عن درجة حَسِّيِّه الأولي لأي من العينات المقاسة.
  14. تصريف السوائل المتبقية في حاوية نفايات وفقا للقواعد والأنظمة المؤسسية الخاصة بك.

4. تحليل عينات اختبار الطحالب

  1. استخدام مطياف الفلوريسنس لقياس الكتلة الحيوية الطحالب (هنا كما هو الكلورو فيريل A). وتبلغ ذروة الانبعاثات بالنسبة للكلورووفيل ألف 420 نانومتر الطول الموجي للإثارة و671 نانومتر الطول الموجي للانبعاثات.
  2. قياس الفلورية لكل عينة على حدة ثلاث مرات وحساب متوسط قيمة كل عينة.
  3. استخدم المعادلة 1 لحساب معدل النمو. ويمكن استخدام الفلورس (الوحدات النسبية) المقاسة مباشرة كمعلمة الكتلة الحيوية في المعادلة 1.
    المعادلة 1: μ = (ln Nt – ln N0) / t
    حيث μ هو معدل النمو (د-1)،N0 هو الكتلة الحيوية الأولية، Nt هو الكتلة الحيوية في الوقت t، و t هو طول فترة الاختبار (d). ملاحظة، N0 و Nر ينبغي أن أعرب في نفس الوحدة.
  4. استخدام برنامج إحصائي لتناسب منحنى الانحدار غير الخطي (على سبيل المثال، وظيفة log-logistic أو Weibull) لبيانات معدل النمو للحصول على قيم تركيز فعالة عند 10٪، 20٪، و 50٪ تثبيط. في المعلومات التكميلية، يُعطى مثال على رمز لتركيبه في البرنامج الإحصائي R باستخدام حزمة DRC11.

النتائج

يتم إجراء اختبار أولي مع مادة مرجعية لتحديد حساسية سلالة الطحالب. المواد المرجعية المستخدمة بانتظام لر. 10000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000 7,8 ويبين الشكل 3 والجدول 2 نتيجة تمثيلية لاختبار الطحالب بما في ...

Discussion

العوالق النباتية تحول الطاقة الشمسية وثاني أكسيد الكربون إلى مادة عضوية، وبالتالي لها دور محوري في النظام الإيكولوجي المائي. ولهذا السبب، تدرج اختبارات تثبيط نمو الطحالب كأحد ثلاثة اختبارات إلزامية للسمية المائية اللازمة لتقييم المخاطر التنظيمية للمواد الكيميائية. والقدرة على إجراء ا?...

Disclosures

ليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.

Acknowledgements

تم تمويل هذا البحث من قبل PATROLS - الأدوات المتقدمة لاختبار NanoSafety ، اتفاقية المنحة 760813 في إطار برنامج البحث والابتكار في أفق 2020.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
AcetoneSigma-AldrichV179124
Ammonium chlorideSigma-Aldrich254134
BlueCap bottles (1L)Buch & Holm A/S 9072335
Boric acidSigma-AldrichB0394
Calcium chloride dihydrateSigma-Aldrich208290
Clear acrylic sheet (40x40 cm)
Cobalt(II) chloride hexahydrateSigma-Aldrich255599
Copper(II) chloride dihydrateSigma-Aldrich307483
Ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt dihydrateSigma-Aldrich E5134
Fluorescence Spectrophotometer F-7000Hitachi
Hydrochloric acidSigma-Aldrich258148
Iron(III) chloride hexahydrateSigma-Aldrich236489
LED light sourceHelmholt Elektronik A/SH35161Neutral White, 6500K
Magnesium chloride hexahydrateSigma-AldrichM9272
Magnesium sulfate heptahydrateSigma-Aldrich230391
Manganese(II) chloride tetrahydrateSigma-Aldrich221279
Orbital shakerIKA2980200
Potassium phosphate monobasicSigma-AldrichP0662
Raphidocelis subcapitataNORCCANIVA-CHL1 strain
Scintillation vials (20 mL)Fisherscientific11526325
Sodium bicarbonateSigma-AldrichS6014
Sodium hydroxideSigma-Aldrich415413
Sodium molybdate dihydrateSigma-Aldrich331058 
Spring clampFrederiksen Scientific A/S472002
Thermostatic cabinetVWRWTWA208450Alternative: temperature controlled room
Ventilation pipe (Ø125 mm)Silvan22605630165
Volumetric flasks (25 mL)DWK Life Sciences246781455
Zinc chlorideSigma-Aldrich208086

References

  1. European Chemicals Agency. Guidance on Registration. European Chemicals Agency. , (2016).
  2. Organisation for Economic Cooperation and Development. Guidance Document on Aquatic Toxicity Testing of Difficult Substances and Mixtures. Organisation for Economic Cooperation and Development. , (2019).
  3. Blaise, C., Legault, R., Bermingham, N., Van Coillie, R., Vasseur, P. A simple microplate algal assay technique for aquatic toxicity assessment. Toxicity Assessment. 1 (3), 261-281 (1986).
  4. Hjorth, R., Sorensen, S. N., Olsson, M. E., Baun, A., Hartmann, N. B. A certain shade of green: can algal pigments reveal shading effects of nanoparticles. Integrated Environmental Assessment and Management. 12 (1), 200-202 (2016).
  5. Chen, F., et al. Algae response to engineered nanoparticles: current understanding{,} mechanisms and implications. Environmental Science: Nano. 6 (4), 1026-1042 (2019).
  6. Arensberg, P., Hemmingsen, V. H., Nyholm, N. A miniscale algal toxicity test. Chemosphere. 30 (11), 2103-2115 (1995).
  7. Organisation for Economic Cooperation and Development. Test No. 201: Freshwater Alga and Cyanobacteria, Growth Inhibition Test. Organisation for Economic Cooperation and Development. , (2011).
  8. International Organization for Standardization (ISO). Water Quality - Fresh Water Algal Growth Inhibition Test with Unicellular Green Algae. International Organization for Standardization (ISO). , (2012).
  9. Halling-Sørensen, B., Nyhohn, N., Baun, A. Algal toxicity tests with volatile and hazardous compounds in air-tight test flasks with CO2 enriched headspace. Chemosphere. 32 (8), 1513-1526 (1996).
  10. Mayer, P., Nyholm, N., Verbruggen, E. M. J., Hermens, J. L. M., Tolls, J. Algal growth inhibition test in filled, closed bottles for volatile and sorptive materials. Environmental Toxicology and Chemistry. 19 (10), 2551-2556 (2000).
  11. Ritz, C., Baty, F., Streibig, J. C., Gerhard, D. Dose-response analysis using R. PloS One. 10 (12), 0146021 (2015).
  12. Birch, H., Kramer, N. I., Mayer, P. Time-resolved freely dissolved concentrations of semivolatile and hydrophobic test chemicals in in vitro assays-measuring high losses and crossover by headspace solid-phase microextraction. Chemical Research in Toxicology. 32 (9), 1780-1790 (2019).
  13. Trac, L. N., Schmidt, S. N., Mayer, P. Headspace passive dosing of volatile hydrophobic chemicals - toxicity testing exactly at the saturation level. Chemosphere. 211, 694-700 (2018).
  14. Eisentraeger, A., Dott, W., Klein, J., Hahn, S. Comparative studies on algal toxicity testing using fluorometric microplate and Erlenmeyer flask growth-inhibition assays. Ecotoxicology and Environmental Safety. 54 (3), 346-354 (2003).
  15. Paixao, S. M., Silva, L., Fernandes, A., O'Rourke, K., Mendonca, E., Picado, A. Performance of a miniaturized algal bioassay in phytotoxicity screening. Ecotoxicology. 17 (3), 165-171 (2008).
  16. Thellen, C., Blaise, C., Roy, Y., Hickey, C. Round-robin testing with the selenastrum--capricornutum microplate toxicity assay. Hydrobiologia. 188, 259-268 (1989).
  17. Nagai, T., Taya, K., Annoh, H., Ishihara, S. Application of a fluorometric microplate algal toxicity assay for riverine periphytic algal species. Ecotoxicology and Environmental Safety. 94, 37-44 (2013).
  18. Lee, W. M., An, Y. J. Effects of zinc oxide and titanium dioxide nanoparticles on green algae under visible, UVA, and UVB irradiations: no evidence of enhanced algal toxicity under UV pre-irradiation. Chemosphere. 91 (4), 536-544 (2013).
  19. Samei, M., Sarrafzadeh, M. H., Faramarzi, M. A. The impact of morphology and size of zinc oxide nanoparticles on its toxicity to the freshwater microalga, Raphidocelis subcapitata. Environmental Science and Pollution Research. 26 (3), 2409-2420 (2019).
  20. Neale, P. A., Jaemting, A. K., O'Malley, E., Herrmann, J., Escher, B. I. Behaviour of titanium dioxide and zinc oxide nanoparticles in the presence of wastewater-derived organic matter and implications for algal toxicity. Environmental Science: Nano. 2 (1), 86-93 (2015).
  21. Hartmann, N. B., et al. The challenges of testing metal and metal oxide nanoparticles in algal bioassays: titanium dioxide and gold nanoparticles as case studies. Nanotoxicology. 7 (6), 1082-1094 (2013).
  22. Farkas, J., Booth, A. M. Are fluorescence-based chlorophyll quantification methods suitable for algae toxicity assessment of carbon nanomaterials. Nanotoxicology. 11 (4), 569-577 (2017).
  23. Handy, R. D., et al. Practical considerations for conducting ecotoxicity test methods with manufactured nanomaterials: what have we learnt so far. Ecotoxicology. 21 (4), 933-972 (2012).
  24. Handy, R. D., et al. Ecotoxicity test methods for engineered nanomaterials: practical experiences and recommendations from the bench. Environmental Toxicology and Chemistry. 31 (1), 15-31 (2012).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

164 Raphidocelis OECD 201 ISO 8692 LEVITATT

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved