رباعية الداما : تعديل لوحة الداما ثلاثية الأبعاد لدراسة تركيبات المخدرات

Summary

يصف هذا البروتوكول كيفية دراسة جميع التركيبات الممكنة التي يمكن الحصول عليها بين أربعة أدوية في تجربة واحدة. وتستند هذه الطريقة على معيار 96 جيدا لوحة الفحص الدقيق تخفيف وحساب تركيزات مثبطة كسور (FICs) لتقييم النتائج.

Abstract

مفهوم العلاج مزيج من الأدوية أصبحت مهمة جدا أساسا مع الزيادة الحادة في مقاومة الأدوية. تهدف لوحة الداما الرباعية، التي تسمى أيضا لوحة الداما Q، إلى تعظيم عدد المجموعات الممكنة التي يمكن الحصول عليها بين أربعة أدوية في تجربة واحدة لتقليل الوقت والعمل اللازمين لتحقيق نفس النتائج مع بروتوكولات أخرى. ويستند هذا البروتوكول على تقنية التخفيف الدقيق البسيط حيث يتم تخفيف الأدوية ودمجها معا في عدة لوحات 96 بئرا.

في المجموعة الأولى من لوحات 96 بئرا ، يضاف مرق Muller-Hinton يليه أول دواء مطلوب (على سبيل المثال ، Cefotaxime هنا) لتخفيفه بشكل متسلسل. بعد الانتهاء من الخطوة الأولى ، يتم استخدام مجموعة أخرى من لوحات 96 بئرا لتمييع الدواء الثاني (على سبيل المثال ، Amikaci) ، والذي سيتم نقله عن طريق إزالة حجم معين من الدواء 2 ووضعه في الآبار المقابلة في المجموعة الأولى من لوحات 96 بئرا تحتوي على الدواء الأول. ويتم تنفيذ الخطوة الثالثة بإضافة التركيزات المطلوبة من الدواء الثالث (مثل ليفوفلوكساسين) إلى الصفائح المناسبة في المجموعة الأولية التي تحتوي على مزيج من الدواء 1 و 2. ويتم تنفيذ الخطوة الرابعة بإضافة التركيزات المطلوبة من الدواء الرابع (مثل تريميثوبريم-سولفاميثوكسيزول) إلى الصفائح المناسبة في المجموعة الأولى. ثم، سيتم إعداد E. القولونية ESBL البكتيرية inoculum وإضافتها.

هذه الطريقة مهمة لتقييم جميع التركيبات الممكنة ولها مجموعة أوسع من الاحتمالات لاختبارها بالإضافة إلى ذلك في اختبار الجسم الحي. على الرغم من كونها تقنية متعبة تتطلب الكثير من التركيز ، فإن النتائج رائعة وتوفير الوقت حيث يمكن اختبار الكثير من التركيبات في تجربة واحدة.

Introduction

مع زيادة المقاومة بسبب الإفراط في استخدام وإساءة استخدام المضادات الحيوية^1،2، أصبحت الحاجة إلى تطوير أدوية وعوامل جديدة لعلاج العدوى البكتيرية حاسمة. والنهج الجديدة مثل استحداث عقاقير جديدة هامة جدا للتغلب على أزمة المقاومة. ومع ذلك، فإن صناعة الأدوية ليست مهتمة بتطوير عوامل جديدة مضادة للميكروبات. وعلاوة على ذلك، إذا تم تطوير أدوية جديدة، البكتيريا سوف تبقي على تطور وتطوير المقاومة ضد هذه الأدوية الجديدة^3،4. وبالتالي، فإن مشكلة المقاومة لن تحل، مما يجعل الحاجة إلى نهج آخر أمرا لا بد منه ينبغي النظر فيه ودراسة التغلب على المقاومة البكتيرية.

مزيج الدواء هو مفهوم مهم جدا لعلاج العدوى البكتيرية أساسا تلك التي تسببها مسببات الأمراض المقاومة للأدوية المتعددة^5،6. أنه يقلل من مسار العلاج, يقلل من الجرعة المعطاة; وبالتالي ، فإن تقليل سمية الدواء المعطى ، يساعد في تقليل معدل تطور المقاومة ، وبطريقة ما ، يتحسس البكتيريا بالأدوية المعطاة كما هو موضح في مفهوم الحساسية الجانبية^5و7و8و9.

تطوير المقاومة لدواء واحد يتطلب طفرة واحدة; ومع ذلك ، فإن تطور المقاومة لمزيج من الأدوية التي تستهدف مسارات متعددة يتطلب العديد من الطفرات المستقلة التي تتباطأ بسبب هذا المزيج. مثال على انخفاض المقاومة أثناء استخدام العلاج المركب هو انخفاض معدل مقاومة ريفامبين في الميكوباكتريا السل¹⁰. مثال آخر هو دراسة أجراها Gribble وآخرون التي أظهرت معدل ظهور سلالات مقاومة في المرضى الذين يتناولون Piperacillin وحدها لتكون أعلى مما كانت عليه في تلك التي تأخذ مزيجا من carboxypenicillin وأمينوغليكوزيد¹⁰. وقد أظهرت الدراسات أن تطور المقاومة ل aminoglycosides في البكتيريا المتطورة جعل هذه السلالات حساسة لمختلف الأدوية الأخرى⁵. الجمع بين بيتا لاكتام فئة المخدرات أموكسيسيلين وحامض اللاكتاماز المانع clavulanic أظهرت نجاحا في علاج السلالات البكتيرية المقاومة⁸.

تقليل وقت العلاج هو ميزة جيدة ناتجة عن تركيبات المخدرات. على سبيل المثال، فإن العلاج من البنسلين مجتمعة أو سيفترياكسون مع جنتاميسين لمدة 2 أسابيع تعطي نفس الفعالية التي قدمها البنسلين أو سيفترياكسون وحدها عندما تعطى لمدة 4 أسابيع¹¹. الجمع بين الأدوية يسمح لاستخدام جرعات أقل من الأدوية التي ليست فعالة عندما تعطى وحدها مثل البلدان المتوسطة الدخل الفرعية. ويمكن إعطاء مثال السلفوناميدات حيث استخدام السلفوناميدات الثلاثي يقلل، بجرعات أقل، والسمية المنتجة التي هي تشكيل الكريستال أو تبلور عند استخدام السلفوناميدات غير القابلة للذوبان بجرعات كاملة¹².

وبالتالي ، فإن تقليل الجرعة المعطاة ووقت العلاج سيقلن في نهاية المطاف من سمية الأدوية على الجسم. فكرة تطوير طرق لتقييم التفاعل بين الأدوية المشتركة مهمة جدا. في إحدى الدراسات، أظهرت النتائج أن العلاج المركب أكثر فعالية لعلاج الأنواع المقاومة من Acinetobacter و P. aeruginosa⁸.

إعطاء الأدوية في تركيبة
هناك طرق مختلفة يمكننا من خلالها دراسة تركيبات المخدرات ، مثل طريقة لوحة الداما ، وطريقة منحنى قتل الوقت ، وطريقة الاختبار الإلكتروني¹³. يمكن لطريقة لوحة الداما دراسة جميع التركيبات الممكنة بين العقارين المعنيين في تجربة واحدة نفسها. بالإضافة إلى ذلك ، تم تطويره لدراسة مزيج من ثلاثة أدوية¹⁴. الآن، ونحن توسيع هذا لدراسة مزيج من أربعة أدوية أساسا لعلاج مسببات الأمراض المقاومة للأدوية المتعددة.

عادة ما يتم إجراء المقايسة منحنى قتل الوقت لاختبار تأثير مبيد للجراثيم من دواء معين. كما تم استخدامه لاختبار تأثير تركيبات المخدرات حيث يتم الجمع بين العديد من الأدوية بتركيزات محددة. يتطلب هذا البروتوكول إعداد العديد من الأنابيب أو الأكواب العقيمة حيث نضيف في كل كوب المرق ، مزيج من الأدوية ، والإجهاد البكتيري المطلوب. بعد احتضان وتسجيل الكثافة البصرية في عدة نقاط زمنية ، تتم مقارنة النتائج مع معدل النمو الطبيعي للسلالة المستخدمة لمعرفة ما إذا كان معدل النمو قد زاد أو انخفض أو لم يتغير^13.

عادة ما يتم إجراء طريقة الاختبار الإلكتروني لاختبار الحد الأدنى من التركيز المثبط (MIC) حيث يتم وضع شريط يحتوي على تركيز متدرجة من الدواء المعني على لوحة تلقيح. كما تم استخدامه لاختبار الجمع بين اثنين من الأدوية حيث يتم إضافة شريطين إلى لوحة بطريقة عمودية تتقاطع في MICs^{بهم 13}.

ووفقا للأدبيات، لا يوجد معيار ذهبي لتحديد التآزر ودراسةه؛ وبالتالي، فإنه من الصعب تقييم أي من الطرق المستخدمة لدراسة الجمع هو أفضل والتي تنتج واحدة نتائج أفضل وأكثر موثوقية أساسا¹³. ومع ذلك ، فإن الفحص لقتل الوقت كثيف العمالة ، ويستغرق وقتا طويلا ،^{ومكلفا 15،16}، في حين يتم تطوير طريقة الاختبار الإلكتروني لدراسة مزيج بين عقارين فقط. يمكن للوحة الداما دراسة جميع التركيبات الممكنة بين الدواءين المختبرين وهذا هو السبب في اختيار هذه التقنية لتطويرها.

Protocol

1. خطوات التحضير

1. إعداد مرق مولر-هينتون (MHB) بإضافة 25 غرام من مرق MH إلى 1 لتر من الماء المقطر والمزيج. الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية لمدة 2.5 ساعة. ثم، تخزين الوسائط autoclaved في درجة حرارة الغرفة أو في الثلاجة.
2. زراعة البكتيريا الفرعية في السؤال(E. coli ESBL) على وسائل الإعلام أجار باستخدام طريقة streaking أربعة أرباع واحتضان بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية.
   1. باستخدام حلقة معقمة، واتخاذ مستعمرة واحدة ونشرها في النصف الأول من لوحة أغار ماكونكي عن طريق القيام الشرائط المتوازية وثيقة.
   2. باستخدام الحلقة، نشر البكتيريا في الربع الثاني عن طريق streaking من الربع الأول.
   3. من الربع الثاني، قم بتوسيع الشرائط في الربع الثالث باستخدام خطوط متوازية قريبة.
   4. نشر البكتيريا في وسط الربع الرابع عن طريق streaking من الربع الثالث.

2. إعداد الفريق

1. ضع أربع لوحات من 96 بئرا بجانب بعضها البعض لتشكيل مربع. باستخدام شريط، الشريط أسفل معا.
2. كرر هذه الخطوة للحصول على أربع لوحات تحتوي كل منها على 4 لوحات وتسميتها A1 و A2 و A3 و A4.
3. أضف 50 ميكرولتر من مرق MH إلى الآبار بين العمود 2 والعمود 11 في لوحات 16 96-well من اللوحات الأربع.
4. إضافة 200 ميكرولتر من مرق MH إلى بئر H12 بمثابة السيطرة السلبية بشكل جيد في لوحات 16 96 جيدا من الألواح الأربعة.
5. إضافة 150 ميكروغرام من مرق MH إلى الآبار A1 و H1 بمثابة آبار التحكم الإيجابية في لوحات 16 96 جيدا من الألواح الأربعة.

3. المخدرات 1، سيفوتيكسيم، تخفيف المسلسل

1. إلى أنبوب مخروطي، أضف 15 مل من dH₂O المعقم.
   1. حساب حجم أن تتم إزالتها من محلول المخزون من المخدرات بعد الصيغة C₁V₁ = C₂V₂. وهكذا، V₁ = (C₂ × 15 مل) / C₁.
      ملاحظة: في حالتنا، حل الأسهم Cefotaxime هو 10⁵ ميكروغرام / مل وجيم₂ هو 256 ميكروغرام / مل. وهكذا، V₁ = 38.4 ميكرولتر.
2. إزالة حجم محسوب من 15 مل من dH₂O العقيمة، ومن ثم إضافة الدواء.
3. ماصة 50 ميكرولتر من محلول الدواء المعد في كل بئر في العمود 11 والعمود 12 باستثناء H12.
4. ابدأ التخفيف التسلسلي عن طريق إزالة 50 ميكرولتر من العمود 11 ووضعه في الآبار المقابلة في العمود 10 ، ثم من 10 حتى الوصول إلى العمود 2 حيث سيتم التخلص من 50 ميكرولتر المأخوذة من العمود 2.
5. كرر الخطوتين 3.4 و3.5 لجميع لوحات الآبار 96 16 من الألواح الأربعة.

4. المخدرات 2، Amkacin، المخفف المسلسل

1. إلى أنبوب مخروطي، أضف 10 مل من dH₂O المعقم.
2. حساب حجم أن تتم إزالتها من محلول المخزون من المخدرات بعد الصيغة C₁V₁ = C₂V₂. وهكذا، V₁ = (C₂ × 10 مل) / C₁.
   ملاحظة: في حالتنا، حل مخزون أميكاسين هو 10³ ميكروغرام/مل و C₂ هو 64 ميكروغرام/مل. وهكذا، V₁ = 64 ميكرولتر.
3. إزالة حجم محسوب من 10 مل من DH₂O العقيمة، ومن ثم إضافة الدواء.
4. خذ ثماني لوحات منفصلة من 96 بئرا.
5. إلى كل لوحة، أضف 100 ميكرولتر من MHB إلى الآبار بين الصفين G و B.
6. إضافة 100 ميكرولتر من المخدرات التي أعدت سابقا 2 حل إلى آبار الصف G.
7. تمييع تسلسليا من الصف G إلى الصف B عن طريق أخذ 100 ميكرولتر من كل بئر وأخيرا تجاهل 100 ميكرولتر من آبار الصف B.
8. كرر الخطوات 4.5 و4.6 و4.7 لإعداد ثمانية أطباق.

5. نقل المخدرات 2 إلى أربعة لوحات

1. ماصة 50 ميكرولتر من المخدرات 2 من الآبار بين الصفين G و B في الآبار المقابلة في كل لوحة في الألواح الأربعة. لوحة واحدة أعدت 96 جيدا يحتوي على 100 ميكروغرام من المخدرات 2 التي تكفي لاثنين من لوحات في لوحة واحدة.

6. المخدرات 3، ليفوفلوكساسين، بالإضافة إلى

1. إلى أربعة أنابيب مخروطية مختلفة، أضف 14 مل من dH₂O العقيم.
2. حساب حجم أن تتم إزالتها من محلول المخزون من المخدرات بعد الصيغة C₁V₁ = C₂V₂. وهكذا، V₁ = (C₂ × 14 مل) / C₁.
   ملاحظة: في حالتنا، يتم إعداد ليفوفلوكساسين في أربعة تركيزات مختلفة من محلول المخزون من 5 × 10³ ميكروغرام / مل.
   C₁ = 2 ميكروغرام/مل، V₁ = 5.6 ميكرولتر
   C₂ = 4 ميكروغرام/مل، V₁ = 11.2 ميكرولتر
   C₃ = 8 ميكروغرام/مل، V₁ = 22.4 ميكرولتر
   C₄ = 16 ميكروغرام/مل، V₁ = 44.8 ميكرولتر
3. إزالة حجم محسوب من 14 مل من DH₂O العقيمة من كل أنبوب، ومن ثم إضافة الدواء.
4. بعد إعداد التركيزات المطلوبة من الدواء الثالث ، خذ 50 ميكرولتر وأضفها إلى الآبار المقابلة بين الصفين B و G والأعمدة 2 و 12 في اللوحة المقابلة في كل لوحة حيث يتوافق C1 مع لوحات P1 الأربعة في الألواح الأربعة ، يتوافق C2 مع لوحات P2 الأربعة في الألواح الأربعة ، C3 يتوافق مع لوحات P3 الأربعة في الألواح الأربعة، وC4 يتوافق مع لوحات P4 الأربعة في الألواح الأربعة.

7. المخدرات 4، تريميثوبريم-سولفاميثوكسيزول، إضافة إلى ذلك

1. إلى أنبوب مخروطي، أضف 14 مل من dH₂O المعقم.
2. حساب حجم أن تتم إزالتها من محلول المخزون من المخدرات بعد الصيغة C₁V₁ = C₂V₂. وهكذا، V₁ = (C₂ × 14 مل) / C₁.
   ملاحظة: في حالتنا، يتم إعداد ثلاثي ميثوبريم-سولفاميثوكسيزول في أربعة تركيزات مختلفة من محلول المخزون من 48 × 10³ ميكروغرام /مل.
   C₁ = 512 ميكروغرام/مل، V₁ = 149.33 ميكرولتر
   C₂ = 1024 ميكروغرام/مل، V₁ = 298.66 ميكرولتر
   C₃ = 2048 ميكروغرام/مل، V₁ = 597.33 ميكرولتر
   C₄ = 4096 ميكروغرام/مل، V₁ = 1 194.66 ميكرولتر
3. إزالة حجم محسوب من 14 مل من dH₂O العقيمة من كل أنبوب، ومن ثم إضافة الدواء.
4. بعد إعداد التركيزات المطلوبة من الدواء الرابع ، خذ 50 ميكرولتر وأضفها إلى الآبار المقابلة بين الصفين B و G والأعمدة 2 و 12 في اللوحات الأربع في اللوحة المقابلة حيث يتوافق C1 مع اللوحة 1 ، C2 يتوافق مع اللوحة 2 ، C3 يتوافق مع اللوحة 3 ، و C4 يتوافق مع اللوحة 4.

8. إعداد وإضافة البكتيريا inoculum E. القولونية ESBL

1. باستخدام حلقة معقمة، نقل مستعمرة واحدة من عزل البكتيرية E. coli ESBL سابقا مثقف على طبق من ذهب إلى 2 مل من MHB المعقمة ودوامة.
2. تحقق من العكر حيث ينبغي أن يكون 0.5 ماكفارلاند باستخدام عداد الكثافة.
3. أضف 80 مل من مرق MH المعقم إلى كوب بول معقم.
4. إضافة inoculum البكتيرية من inoculum ماكفارلاند 0.5 إلى كوب البول بعد C₁V₁ = C₂V₂, حيث V₁ = (10⁶ × 80 مل) / 10⁸ = 800 ميكرولتر.
5. ماصة 50 ميكرولتر من محلول inoculum 10⁶ CFU / مل في كل بئر باستثناء H12، وهو التحكم في العقم بشكل جيد.
6. احتضان لوحات في 37 درجة مئوية بين عشية وضحاها.
7. بعد الحضانة، إضافة 50 ميكرولتر من Iodotetrazolium لتسجيل النمو في الآبار.

9. بروتوكول قالب FIC (ملف تكميلي)

1. اكتب أعلى تركيز للدواء 1 (Cefotaxime) في الخلية الصفراء في اللوحة A.
2. اكتب أعلى تركيز للدواء 2 (أميكاسين) في الخلية الصفراء في اللوحة B.
3. اكتب أعلى تركيز للدواء 3 (Levofloxacin) في الخلية الصفراء في اللوحة C.
4. اكتب أعلى تركيز للدواء 4 (تريميتهوبريم-سولفاميثوكسيزول) في اللوحة D.
5. تتبع الخط الأحمر (النمو / لا واجهة النمو) من خلال تسليط الضوء على الآبار وجود نمو باللون الأحمر.
6. اكتب هيئة التصنيع العسكري من المخدرات 1 في جدول المخدرات 1 (ATB1).
7. اكتب هيئة التصنيع العسكري من المخدرات 2 في جدول المخدرات 2 (ATB2).
8. اكتب هيئة التصنيع العسكري من المخدرات 3 في جدول المخدرات 3 (ATB3).
9. اكتب هيئة التصنيع العسكري من المخدرات 4 في جدول المخدرات 4 (ATB4).
10. لحساب FIC ل ATB1
    1. تحديد الآبار على واجهة النمو / لا نمو.
    2. في الجدول ATB1، انقر نقرا مزدوجا على الخلية المجاورة ل FIC1 واسحب الخلية الصفراء على يسار اللوحة A إلى أول بئر محدد.
    3. كرر الخطوة 9.10.2 لكل بئر مختارة حيث 1 جيدا يتوافق مع FIC1، حسنا 2 يتوافق مع FIC2، وهلم جرا.
11. لحساب FIC ل ATB2
    1. في الجدول ATB2، انقر نقرا مزدوجا على الخلية المجاورة لFIC1 واسحب الخلية الصفراء على يسار اللوحة B إلى أول بئر تم تحديده مسبقا.
    2. كرر الخطوة 9.11.1 لكل بئر تم اختياره مسبقا.
12. لحساب FIC ل ATB3
    1. في الجدول ATB3، انقر نقرا مزدوجا على الخلية المجاورة لFIC1 واسحب الخلية الصفراء على يسار اللوحة C إلى أول بئر تم تحديده مسبقا.
    2. كرر الخطوة 9.12.1 لكل بئر تم اختياره مسبقا.
13. لحساب FIC ل ATB4
    1. في الجدول ATB4، انقر نقرا مزدوجا على الخلية المجاورة ل FIC1 واسحب الخلية الصفراء على يسار اللوحة D إلى أول بئر تم تحديده مسبقا.
    2. كرر الخطوة 9.13.1 لكل بئر تم اختياره مسبقا.
14. في الجدول المسمى ATB1 +2+3+4، قم بتلخيص FIC1 لكل ATB تلقائيا. نفس سيحدث ل FICs الأخرى (FIC2 FIC3 وهكذا).
    1. في الخلية التي تحتوي على FIC وأبرز باللون الأصفر، انقر مرتين على ذلك وحدد ΣFICs summed من الجدول ATB1 +2+3+4.
15. كرر هذه الخطوات لكل ورقة من الأوراق التسعة التي تمثل اللوحات التسعة.
    ملاحظة: في الورقة FIC كافة، سيعرض الجدول FIC النهائي summed مع تفسير القيمة التي تم الحصول عليها.

10. تحديد هيئة التصنيع العسكري باستخدام المقايسة microdilution للأدوية الأربعة

1. تسمية أربعة صفوف مختلفة مع اختصار كل دواء اختبارها. على سبيل المثال، CTX لCefotaxime، AMK لأميكاسين، ليفو لليفوفلوكساسين، وSXT لTrimethoprim-sulfamethoxazole.
2. ماصة 200 ميكرولتر من مرق مولر هينتون العقيم إلى رقم جيد 1 ورقم جيد 12 في كل صف المستخدمة. حسنا رقم 12 سيكون بمثابة السيطرة السلبية بشكل جيد.
3. ماصة 100 ميكرولتر من مرق مولر هينتون العقيم إلى الآبار 2 حتى 11 في كل صف مستخدم.
4. حساب حجم كل دواء تضاف باستخدام الصيغة C₁V₁ = C₂V₂. وهكذا، V₁ = (C₂ × 4 × V₂) / C₁. V₂ هو الحجم النهائي في الآبار وهو 200 ميكرولتر، C₁ هو تركيز محلول المخزون، وC₂ هو التركيز الأولي الذي نحتاج إلى أن يكون في البئر الأول.
   ملاحظة: هنا، نستخدم ما يلي:
   سيفوتيسيم: C₁ = 10⁵ ميكروغرام/مل، حيث نقوم بتخفيفه إلى 10⁴ ميكروغرام/مل، C₂ = 256 ميكروغرام/مل؛ وبالتالي، V₁ = 20.48 ميكرولتر
   أميكاسين: C₁ = 10³ ميكروغرام/مل، C₂ = 64 ميكروغرام/مل؛ وبالتالي، V₁ = 51.2 ميكرولتر
   ليفوفلوكساسين: C₁ = 5 × 10³ ميكروغرام / مل، حيث تمييعه إلى 5 × 10² ميكروغرام / مل، C₂ = 16 ميكروغرام / مل؛ وبالتالي، V₁ = 25.6 ميكرولتر
   تريميثوبريم-سولفاميثوكسيزول: C₁ = 48 × 10³ ميكروغرام/مل، C₂ = 4096 ميكروغرام/مل؛ وبالتالي، V₁ = 68.26 ميكرولتر
5. ماصة الحجم المطلوب لكل دواء في البئر الأول من الصف المقابل بعد إزالة نفس الحجم من مرق 200 ميكرولتر للحصول على حجم إجمالي قدره 200 ميكرولتر بعد إضافة الدواء.
6. تمييع تسلسلي عن طريق إزالة 100 ميكرولتر من البئر 1 إلى بئر 2 وهلم جرا حتى الوصول إلى بئر 10 حيث سيتم التخلص من 100 ميكرولتر إزالتها من البئر 10. لاحظ أن جيدا 11 بمثابة السيطرة الإيجابية بشكل جيد.
7. ماصة 100 ميكرولتر من 10⁶ أعدت inoculum البكتيرية في كل بئر في كل صف المستخدمة باستثناء عدد جيد 12 بمثابة السيطرة السلبية.
8. حضانة عند 37 درجة مئوية بين عشية وضحاها.

النتائج

يمثل الشكل 2A النتائج التي تم الحصول عليها من خلال الجمع بين سيفوتاكسيم وأميكاسين مع تركيزات محددة من ليفوفلوكساسين وتريمثوبريم-سولفاميثوكسيزول. يمكننا أن نرى في الجزء الأيسر من الشكل لوحات الأربعة التي يتم تقديمها تخطيطيا مع تركيزات المخدرات في الجزء الأيمن من الشكل. تم?...

Discussion

يشبه أسلوب "لوحة الداما رباعية" لوحة الداما ولوحة الداما ثلاثي الأبعاد في بروتوكولها. ومع ذلك، ينبغي أخذ بعض الخطوات الحاسمة في الاعتبار لتجنب الأخطاء أثناء التجربة.

تأكد من اختبار لهيئة التصنيع العسكري من كل دواء ضد عزل اختبارها قبل البدء في البروتوكول لمعرفة ما هي التركي?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
1000 µL tips	Citotest	4330000402
200 µL tips	Citotest	4330-0013-17
50 mL centrifuge tube	corning	430828	For drug 3 and 4 preparation
5 mL polysterene round-bottom Tube	Falcon	352058	For 0.5 MacFarland bacterial inoculum preparation
90mm petri dishes	JRZ Plastilab		As bed for the solutions to be added using the multichannel pipette
96-well plates	corning	3596	For serial diltuion and combining drugs
Bactrim 200, 40 mg (Trimethoprim-sulamethoxazole	By CRNEXI SAS Fontenay-sous-Bois, France	10177403	Drug 4
Ceforane, 1 g (Cefotaxime)	PHARCO Pharmaceuticals	24750/2006	Drug 1
Densitometer
E. Coli ESBL strain	Retreived as a medical strain from the Saint-George Hospital Lebanon		Bacterial strain
Mac Conkey + crystal violet agar	BIO-RAD	64169508	For making agar plates used for subculturing
Miacin 500 mg/2 mL (Amikacin)	HIKMA Pharmaceuticals	2BXMIA56N-AEF	Drug 2
Muller-Hinton Broth	BIO-RAD	69444	For making bacterial media
Multichannel Pipette	Thermo Scientific	GJ54761	For serial dilution and addition of media, bacteria and drugs
Paper Tape
Single Channel pipettes	Thermo Scientific	OH19855 HH40868	For the addition of media, bacteria and drugs
Tavanic, 500 mg (Levofloxacin)	sanofi aventis	221937/2009	Drug 3