بروتوكول معدل لزراعة القلب غير المتجانس للفأر يتوافق مع المعايير المعاصرة لتقنية التعقيم والتخدير وتسكين الألم

Summary

تصف هذه الورقة تقنية معدلة لزراعة القلب الوعائي غير المتجانس مع تقنية معقمة محدثة وتسكين الألم والتخدير.

Abstract

ساهم تطوير النماذج التجريبية لزراعة القلب في الحيوانات في العديد من التطورات في مجالات علم المناعة وزرع الأعضاء الصلبة. في حين تم استخدام نموذج زرع قلب الفئران الوعائية غير المتجانسة في البداية في دراسات رفض الكسب غير المشروع باستخدام مجموعات من سلالات الفئران الفطرية غير المتطابقة ، فإن الوصول إلى السلالات المعدلة وراثيا والطرائق العلاجية يمكن أن يوفر رؤى جديدة قوية قبل السريرية. في الأساس ، لم تتغير المنهجية الجراحية لهذه التقنية منذ تطويرها ، خاصة فيما يتعلق بالعوامل المهمة مثل تقنية التعقيم والتخدير وتسكين الألم ، والتي لها تأثيرات مادية على المراضة والوفيات بعد الجراحة. بالإضافة إلى ذلك ، من المتوقع أن توفر التحسينات في الإدارة المحيطة بالجراحة تحسينات في كل من رعاية الحيوان والنتائج التجريبية. تقدم هذه الورقة تقريرا عن بروتوكول تم تطويره بالتعاون مع خبير متخصص في التخدير البيطري وتصف التقنية الجراحية مع التركيز على الإدارة المحيطة بالجراحة. بالإضافة إلى ذلك ، نناقش الآثار المترتبة على هذه التحسينات ونقدم تفاصيل حول استكشاف الأخطاء وإصلاحها الخطوات الجراحية الهامة لهذا الإجراء.

Introduction

نحن مدينون بالكثير من فهمنا لعلم المناعة وزرع الأعضاء للبحث القائم على النماذج التجريبية لزراعة الأعضاء الصلبة باستخدام الحيوانات. منذ الوصف الأول لزراعة القلب الوعائي في الثدييات¹ ، ساهمت هذه النماذج في المعرفة في مجالات واسعة النطاق ، بما في ذلك التطبيق العلاجي لانخفاض حرارة الجسم² ، وفوائد استخدام الغرز المتخصصة³ ، وتقنيات زرع الرئة والقلب الكلي⁴. قدم تطوير نماذج زرع القلب في الفئران ^5,6 نطاقا أوسع للتجارب المناعية بسبب توفر خطوط تكاثر مختلفة. أدى النطاق الأوسع بكثير من سلالات الفئران الفطرية والطافرة المتاحة إلى قيام Corry et ^al.7 بتطوير تقنية زرع القلب غير المتجانس للفئران بسبب المزايا الكبيرة التي يجلبها هذا النطاق لأبحاث الزرع. تم استخدام هذا النموذج على نطاق واسع وساهم في فهم أكبر لرفض الكسب غير المشروع⁸ والعلاجات⁹. ومع ذلك ، منذ وصفها الأول ، ظلت التقنية دون تغيير إلى حد كبير بخلاف بعض التفاصيل الفنية البسيطة مثل التعديلات على موضع مواقع المفاغرة^10,11.

منذ دمج تقنية Corry et ^al.7 في تجاربنا ، حددنا مجالات واعدة لتحسين البروتوكول ، وهي تقنية التعقيم والتخدير وتسكين الألم. كان من المتوقع أن تقدم التحسينات في هذه المجالات تأثيرا إيجابيا على النتائج التجريبية وتحسين رفاهية الحيوان. وقد ظهر هذا سابقا عند استخدام تقنية التعقيم في جراحات الحيوانات الصغيرة لأنها تساعد في الحد من التهابات ما بعد الجراحة¹² ، والتي لا تؤثر فقط على المراضة والوفيات ولكن يمكن أن تعرض أيضا التجارب المصممة لتقييم الاستجابة المناعية بعد جراحة الزرع. من وجهة نظر التخدير والمسكنات ، يساعد استخدام نظام مكرر على تقليل التكلفة على الحيوانات وتحقيق التوازن بين الحجة الأخلاقية لهذا النموذج الجراحي من خلال تخفيف آلام ومعاناة الأشخاص التجريبيين. علاوة على ذلك ، يحد التخدير المناسب وتسكين الألم من استجابة الإجهاد المرتبطة بالألم ، مما يحسن جودة التعافي بعد الجراحة ، وفي النهاية يزيد من معدل النجاح الجراحي¹³.

بهدف تحسين كل من رعاية الحيوان والنتائج التجريبية ، تم تطوير بروتوكول مع تعديلات لسد هذه الفجوات. تم تكييف هذا البروتوكول من البروتوكول الذي وصفه في الأصل Corry et ^al.7 بالتشاور مع طبيب التخدير البيطري ومع إيلاء الاعتبار الواجب لكل من آثار ومدة تأثيرات التدخلات الدوائية المستخدمة في نظام التخدير والمسكنات. استند النهج إلى مبادئ التخدير المتوازن وتسكين الألم متعدد الوسائط لضمان الرعاية المناسبة المحيطة بالجراحة¹⁴. بالإضافة إلى تطبيق تقنية التعقيم ، تم إعطاء البوبرينورفين الأفيوني وبوبيفاكايين المخدر الموضعي بشكل استباقي. تم إجراء التخدير العام باستخدام عامل التخدير المستنشق إيزوفلوران.

Protocol

تم إجراء هذا البحث وفقا لمدونة قواعد الممارسة لرعاية واستخدام الحيوانات للأغراض العلمية¹⁵ وتمت الموافقة عليها بموجب بروتوكولات أخلاقيات الحيوان RA/3/100/1568 و AE173 (لجنة أخلاقيات الحيوان بجامعة غرب أستراليا ولجنة أخلاقيات الحيوان التابعة لمعهد هاري بيركنز للبحوث الطبية ، على التوالي). انظر جدول المواد للحصول على تفاصيل بشأن جميع المواد والأدوات والحيوانات المستخدمة في هذا البروتوكول.

1. إعداد الحيوان للجراحة

ملاحظة: الموظفون مكرسون إما لدور إجراء الجراحة أو مراقبة التخدير طوال العملية.

1. للتسكين قبل الجراحة، يتم تطبيق جرعة من البوبرينورفين (0.05-0.1 ملغ/كغ، مخففة إلى 0.03 ملغ/مل مع كلوريد الصوديوم 0.9٪) تحت الجلد للفأر المتلقي قبل ساعة واحدة على الأقل من بدء الجراحة المتلقية. إدخال جميع التفاصيل المتعلقة بإعطاء الأدوية وجرعاتها ووقت تناولها وآثارها في سجل التخدير.
   ملاحظة: هذا النهج ليس مطلوبا بالضرورة للمتبرع لأنه جراحة غير تعافي ، حيث يتم القتل الرحيم للمتبرع تحت التخدير العام مباشرة بعد حصاد العضو.
2. تحريض التخدير
   1. ضع الماوس في غرفة الحث لنظام التنفس المخدر مع تدفق الأكسجين من 1-2 لتر · دقيقة ^{− 1} مع 4٪ إيزوفلوران. تأكيد التخدير الكافي من خلال مراقبة الاستلقاء وفقدان رد الفعل الصحيح وانخفاض معدل التنفس.
   2. بمجرد تخديره بشكل كاف ، قم بإزالة الماوس من غرفة الحث وحلق البطن البطني عن كثب باستخدام كليبرز لإزالة الشعر. في حالة المتبرع ، احلق المنطقة الممتدة من الأعضاء التناسلية إلى الهامش العلوي للصدر البطني. في حالة المتلقي ، احلق المنطقة الممتدة من الأعضاء التناسلية إلى الهامش الساحلي. في كلتا الحالتين ، تأكد من أن المنطقة المحلوقة تصل إلى خط منتصف الإبط بشكل جانبي.
3. للحفاظ على التخدير ، ضع الفأر في الاستلقاء الظهري لتلقي التخدير والأكسجين من مخروط الأنف في نظام التنفس (عدم إعادة التنفس) ، والذي يوفر الأكسجين بمعدل 1 لتر دقيقة − 1 وإيزوفلوران (^1.5 ٪ -2.5٪).
   ملاحظة: سطح العمل الجراحي عبارة عن لوحة جراحية فوق وسادة تدفئة ، ويتم تأمين كل طرف من أطراف الماوس باستخدام شريط micropore.
4. نظرا لصعوبة المراقبة الشاملة للتغيرات الفسيولوجية المرتبطة بالتخدير في الفئران ، قم بمراقبة وتسجيل معلمات محدودة. راقب درجة الحرارة وعمق التخدير ومعدل التنفس كل 5 دقائق على الأقل طوال مدة التخدير.
   1. لمنع انخفاض حرارة الجسم الشديد وارتفاع الحرارة (من الاحترار النشط بواسطة وسادة الحرارة) ، راقب درجة حرارة الجسم طوال العملية. أدخل مسبارا مستقيميا نظيفا ومشحما في مستقيم الحيوان ثم ثبته على اللوحة الجراحية باستخدام شريط micropore.
      ملاحظة: يعود هذا المسبار إلى نظام ديناميكي (إحدى ميزات نظام توصيل التخدير) ، والذي يعدل درجة حرارة وسادة التدفئة لإدارة درجة حرارة الجسم.
   2. اطلب من الشخص المسؤول عن التخدير تقييم عمق التخدير من خلال مراقبة الاستجابات لتحفيز المخلب أو الذيل من الضغط الذي يطبقه الملقط الرضحي ، والمنعكس الجفني ، وتوتر العضلات.
   3. قياس معدل التنفس من خلال مراقبة حركة جدار الصدر مع مراقبة الجهد التنفسي بشكل شخصي لتقييم حجم المد والجزر. احسب معدل التنفس عن طريق عد الأنفاس خلال فترة 10-15 ثانية والضرب في 6 أو 4 ، على التوالي ، لتحديد معدل التنفس / دقيقة.
5. لتحضير الجلد ، قم بتطهير موقع الجراحة باستخدام أدوات تطبيق معقمة ذات رؤوس قطنية. ضع الكلورهيكسيدين في حركة دائرية وموسعة تعمل من مركز موقع الجراحة إلى الحواف. كرر هذه العملية 3x (مع قضيب جديد ذو رأس قطني في كل مرة) قبل التطبيق النهائي لمزيج من الكلورهيكسيدين والإيثانول مع قضيب جديد معقم برأس قطني بنفس النمط ، مع الانتقال من مركز موقع الجراحة إلى الحافة.
6. اطلب من الجراح وضع جل يد قائم على الإيثانول قبل ارتداء رداء جراحي معقم وقفازات جراحية معقمة.
7. لتحضير المجال الجراحي ، ضع ستائر جراحية معقمة (مقطوعة مسبقا إلى 25 سم × 25 سم) على جانبي اللوحة الجراحية ، لتكون بمثابة موقع لوضع الأدوات المعقمة. استخدم مقصا معقما لتثبيت ثنى معقم أوسع مقاس 25 سم × 40 سم لقطع فتحة صغيرة (أطول قليلا من موقع الشق) بيضاوية الشكل. ضع هذه الستارة فوق الجزء العلوي من الحيوان بحيث يقع fenestration في موقع شق المقترح. تأكد من أن الأطراف الجانبية لهذه الستارة الثالثة تتداخل مع الستارتين الأصغر على كلا الجانبين لإنشاء مجال جراحي مستمر.

2. جراحة المتبرع

ملاحظة: انظر الشكل التكميلي S1 لمعرفة الجوانب الرئيسية لجراحة المتبرع.

1. إجراء جراحة المتبرع بمساعدة مجهر جراحي. للبدء ، استخدم تكبيرا قدره 8x ، وقم بإجراء شق جلدي في خط الوسط البطني باستخدام شفرة مشرط جراحية (# 23). تأكد من أن الشق يمتد من الطرف الذيلي للمنطقة المحلوقة إلى الهامش الساحلي بهامش سليم من الجلد المجهز في كلا الطرفين.
   ملاحظة: يتم اختيار تكبير البداية 8x لتمكين التصور الكافي للبنية الكلية للموضوع في بداية الجراحة. من هذه النقطة فصاعدا ، يكون التكبير وفقا لتقدير المشغل ويجب اختياره لتوفير توازن مناسب بين الوعي الظرفي الذي يوفره التكبير المنخفض والتفاصيل الدقيقة التي يمكن تصورها بتكبير أعلى.
2. باستخدام قضيبين معقمين برأس قطني مبللين بمحلول ملحي طبيعي دافئ ، قم بتحويل الأمعاء الدقيقة لكشف الشريان الأورطي البطني والوريد الأجوف السفلي (IVC). استخدم أدوات التطبيق لتشريح هذه الأوعية بصراحة من الأنسجة المحيطة.
3. استخدم حقنة 3.0 مل مع إبرة 30 جم ، 0.5 بوصة لسحب 2.5 مل من 100 وحدة دولية · مل ⁻¹ من محلول كلوريد الصوديوم الهيبارين 0.9٪ (يتم الاحتفاظ به عند 4 درجات مئوية حتى الحاجة إليه أثناء الجراحة). باستخدام ملقط خياطة الجسم المستدير ذو الرأس المستقيم مع اليد غير المهيمنة لتأمين الشريان الأورطي البطني في منطقة الحجاب الحاجز تحت ، استخدم اليد المهيمنة لحقن 1.5 مل من المحلول في الشريان الأورطي في اتجاه القلب. أغلق بضع الأبهر الناتج بضغط من قضيب ذو رأس قطني.
4. استخدم مقص الجراحة المجهرية ذات الرؤوس المستقيمة لنقل IVC للسماح بالاستنزافة.
5. إجراء بضع الصدر باستخدام مقص جراحي لعمل شقين في خطوط منتصف الإبط الثنائية. عند هذه النقطة ، تأكد من وفاة الحيوان وأوقف تشغيل مبخر الأيزوفلوران.
6. قم بتأمين الجزء المتوسط الناتج من جدار الصدر باستخدام مشبك البلدغ الصغير. مرر هذا إلى المساعد الجراحي غير المعقم الذي يمكنه تأمينه في مخروط الأنف باستخدام شريط جراحي micropore.
   ملاحظة: الهدف هو توفير الجر على هذا الجزء من الصدر ، والذي يساعد في التعرض لأنسجة القلب.
7. باستخدام ملقط خياطة الجسم المستدير ، حدد وحرك IVC داخل الصدر.
   ملاحظة: من الناحية المثالية ، يجب أن يكون الملقط ذو الرأس المستقيم في اليد غير المهيمنة والملقط المنحني في اليد السائدة.
8. مع تثبيت IVC في ملقط اليد غير المهيمنة ، استخدم اليد المهيمنة لحقن 1.5 مل المتبقية من محلول كلوريد الصوديوم 100 وحدة دولية ^{− مل − 1} في القلب.
9. باستخدام كلتا المجموعتين من الملقط ، اربط IVC باستخدام حرير مضفر 7/0 بطول 2 سم. استخدم عقدة الجراح مع رميتين إضافيتين للأمان. اجعل هذه العقدة قريبة على طول الوعاء إلى القلب قدر الإمكان.
10. تأمين طرفي هذه العقدة باستخدام ملقط الشريان. ضع هذه الملقط بحيث توفر قوة جر لطيفة للقلب في الاتجاه الذيلي لتسهيل وضع الوعاء الأمثل للتشريح اللاحق.
11. تحديد الغدة الصعترية في الجانب الأمامي العلوي من القلب. استخدم الملقط لتشريح هذا العضو من المتبرع لتحديد الوريد الأجوف العلوي (SVC).
12. إزالة adventitia والأنسجة المرتبطة SVC باستخدام ملقط. استخدم ملقط منحني لتشريح بصراحة وجعل قناة صغيرة خلفية للوعاء. تأكد من أن هذه القناة قريبة من القلب قدر الإمكان.
13. مرر قطعة من الحرير المضفر 7/0 بطول 2 سم عبر هذه القناة باستخدام ملقط ثم اربطها باستخدام التقنية المذكورة أعلاه.
14. عند نقطة حوالي 2 مم من هذا الربط (على الجانب المقابل للقلب) ، قسم SVC باستخدام مقص جراحي مجهري منحني.
15. باستخدام أدوات التطبيق ذات الرؤوس القطنية ، اقلب القلب إلى اليمين التشريحي.
16. تحديد الوريد الأزيجوتي على اليسار التشريحي للقلب. باستخدام ملقط ، تشريح بصراحة من الهياكل المحيطة. كما كان من قبل ، استخدم ملقط منحني الرأس لإنشاء قناة صغيرة خلفية لهذا الوعاء.
17. استخدم قطعة ثالثة من الحرير المضفر 7/0 مقطوعة إلى 2 سم لربط الوريد الأزيجتي على مقربة قصوى من القلب باستخدام نفس تقنية ربط العقدة. قطع الوعاء 2 مم من الربط على الجانب بعيدا عن القلب.
18. باستخدام أدوات التطبيق ذات الرؤوس القطنية ، اقلب قمة القلب مرة أخرى إلى اليسار التشريحي. استخدم الملقط لتحديد الأبهر الصاعد وتعبئته. مرر الملقط المنحني أسفل قوس الأبهر لإنشاء قناة بين الشريان الأورطي الصاعد والنازل.
19. باستخدام مقص جراحي مجهري مستقيم الرأس ، قم بنقل قوس الأبهر القريب من فروعه.
20. باستخدام ملقط ، وتحديد وتعبئة الشريان الرئوي. باستخدام ملقط منحني ، قم بعمل قناة خلفية للوعاء.
21. باستخدام مقص جراحي مجهري مستقيم الرأس ، قم بنقل الشريان عند نقطة قريبة من تشعبه.
22. استخدم قنية ري Rycroft لحقن 2 مل بلطف من 10 وحدة دولية · مل ^{− 1} من كلوريد الصوديوم الهيبارين 0.9٪ من خلال الشريان الرئوي والشريان الأورطي الصاعد لطرد أي دم متبقي من القلب.
    ملاحظة: يشار إلى تدفق كاف من خلال إزالة الدم المرئي من الأوعية التاجية.
23. باستخدام قطعة 3 سم من الحرير المضفر 7/0 ، قم بربط الأوعية الخلفية المتبقية (الأوردة الرئوية) باستخدام عقدة الجراح برميتين لاحقتين. افصل القلب عن جدار الصدر الخلفي عن طريق القطع بعناية باستخدام المقص الجراحي.
24. أخرج القلب برفق من الصدر ، واغمره في محلول جامعة ويسكونسن (UWS) ، ثم ضعه على الثلج للتخزين (عند 4 درجات مئوية).

3. جراحة المتلقي

1. بعد إعداد الحيوان كما هو موضح في القسم 1 ، ضع مواد تشحيم العين. حقن جرعة على أساس الوزن (8 ملغم / كغم) من بوبيفاكايين (0.25٪ مخفف إلى 0.625 ملغ / مل في محلول كلوريد الصوديوم 0.9٪) في الأنسجة تحت الجلد من البطن البطني على طول موقع الشق المخطط له. استخدم حقنة أنسولين 29 جم لهذا الحقن وابحث عن خط مستقيم من الفقاعة المرئية التي تغطي مدى الشق المخطط له (الشكل التكميلي S2A-C).
   ملاحظة: يجب إعطاء خمس إلى سبع دقائق لإتاحة الوقت لتأثير الذروة للمخدر الموضعي.
2. مع ضبط المجهر على تكبير 8x ، قم بعمل شق جلدي في خط الوسط البطني باستخدام شفرة مشرط جراحية معقمة (# 23). تأكد من أن بضع البطن يمتد من أسفل البطن إلى الهامش الساحلي. أدخل ضامنا لزيادة المجال الجراحي إلى أقصى حد (الشكل التكميلي S2D).
3. بلل قطعة 5 سم × 5 سم من الشاش المعقم بمحلول كلوريد الصوديوم الدافئ بنسبة 0.9٪ وضعه في الجانب العلوي من موقع الجراحة. باستخدام براعم قطنية معقمة مبللة ، قم بإزالة الأمعاء برفق ، وضعها فوق هذا الشاش ، ولف الشاش حول العضو (الشكل التكميلي S3A).
   ملاحظة: يساعد هذا الإجراء على تقليل فقدان السوائل غير المحسوس أثناء الجراحة ويساعد في التراجع.
4. حرر وحرك الشريان الأورطي البطني و IVC من الأنسجة المحيطة باستخدام تقنية تشريح حادة. استخدمي مزيجا من أدوات التطبيق ذات الرؤوس القطنية وملقط خياطة الجسم المستدير لهذه الخطوة. تأكد من أن منطقة الخلوص تقع بين الجانب تحت الكلوي للأوعية وفوق تشعب الشريان الأورطي مباشرة (الشكل التكميلي S3B).
   ملاحظة: التصور المناسب في هذه المرحلة سيسهل مفاغرة الأوعية الدموية عالية الجودة.
5. تحديد الأوعية البطنية الخلفية. باستخدام الملقط ، قم بسحب الشريان الأورطي برفق في اتجاه بعيد عن العمود الفقري (أي طولي إلى محور الأوعية البطنية).
   ملاحظة: من المهم أن يتم التعامل مع الشريان الأورطي فقط وليس IVC بهذه الطريقة بسبب قابلية هذا الأخير للتفتيت.
6. ربط كل وعاء البطن المحددة في منطقة مفاغرة المخطط لها. اصنع قناة على جانبي هذه الأوعية رأسيا عن طريق تمرير الملقط المنحني الخلفي إلى الأوعية البطنية على كلا الجانبين. تم تحديد كل وعاء وتعبئته بهذه الطريقة باستخدام أطوال 10/0 نايلون مربوطة بأدوات في عقدة الجراح برمية إضافية واحدة (الشكل التكميلي S3C).
7. عزل موقع مفاغرة من الدورة الدموية. للقيام بذلك ، قم بتثبيت مشبك جراحي في الرأس ثم الأطراف الذيلية للأوعية البطنية (الأهم من ذلك ، بهذا الترتيب الدقيق). تأكد من أن المشابك تعبر كلا السفينتين بدرجة كافية لضمان الانسداد الكامل.
8. باستخدام ملقط في اليد غير المهيمنة لتثبيت الشريان الأورطي ، قم بإجراء بضع الأبهر باستخدام إبرة 30 G في الجانب الأمامي من الشريان الأورطي. قم بتمديده باستخدام مقص جراحي مجهري مستقيم الرأس (الشكل التكميلي S3D).
9. أداء بضع الوريد. باستخدام ملقط مستقيم ، ضع الجر الأمامي اللطيف على IVC عند النقطة التي تتماشى مع منتصف بضع الأبهر. استخدم مقص الجراحة المجهرية المنحنية بحيث يكون الجانب المقعر مواجها للأمام لإزالة جزء من IVC بطول متساو مع بضع الأبهر (الشكل التكميلي S4A).
10. باستخدام 10 وحدة دولية · مل ^{− 1} محلول كلوريد الصوديوم الهيبارين ، اغسل الأجزاء الداخلية من الأوعية المفتوحة للدم المتبقي.
11. ضع قلب المتبرع في البطن. تأكد من أن الوضع بحيث يكون الشريان الأورطي الصاعد بجانب بضع الأبهر البطني مباشرة ويتم تدوير القلب بحيث يمكن سحب الشريان الرئوي عبر المفاغرة الثانية.
12. باستخدام 10/0 نايلون ، ضع خياطة البقاء بين موضع الساعة 12 من بضع الأبهر والطرف المقابل من تجويف الشريان الأورطي الصاعد. قم بإجراء ذلك باستخدام ملقط ذو رأس مستقيم وحامل إبرة مجهرية واربطه باستخدام عقدة الجراح بثلاث رميات لاحقة. قطع الأطراف لترك حوالي 2 مم من خياطة.
13. ضع خياطة إقامة ثانية بين موضع الساعة 6 من بضع الأبهر والجانب المقابل من الشريان الأورطي الصاعد. نظرا لأن هذا الخيط سيكون أيضا بمثابة قاعدة للخيوط الجراحية اللاحقة ، اترك 10 مم على الأقل من الذيل للربط النهائي.
14. ضع خياطة جري مستمرة من 10/0 نايلون بطريقة تصاعدية لمعارضة الحافة اليمنى التشريحية لبضع الأبهر والحافة الحرة المقابلة للشريان الأورطي الصاعد. استخدم ما يقرب من أربع رميات لهذا الخط.
15. مرر الطرف الحر للخياطة حول خياطة البقاء البعيدة قبل وضع خياطة الجري المستمرة الثانية أسفل الجانب الأيسر التشريحي للتأثير على الوضع مع الحافة الحرة المتبقية من بضع الأبهر. اربط الخيط بالذيل باستخدام عقدة الجراح برميتين إضافيتين.
16. ضع خياطة البقاء بين موضع الساعة 12 من بضع الوريد IVC والطرف المقابل من تجويف الشريان الرئوي.
17. من نقطة الربط هذه ، ضع خياطة جارية مستمرة بطريقة تنازلية بين الحافة اليسرى التشريحية للشريان الرئوي والحافة المقابلة لبضع الوريد. استخدم في المتوسط أربع رميات لهذا الخط متبوعة بواحدة بين موضع الساعة 6 من بضع الوريد والطرف المقابل من تجويف الشريان الرئوي. قم بأربع رميات أخرى لرسم الحواف الحرة النهائية للشريان الرئوي وبضع الوريد معا.
18. اربط الطرف الحر للخياطة بنهاية المرساة باستخدام عقدة جراح ربط أداة برميتين إضافيتين.
19. أعد وضع القلب للجلوس مركزيا في البطن باستخدام أعواد القطن. تحقق من الأوعية بحثا عن التواء ، مما قد يتداخل مع تدفق الدم.
20. ضع رغوة الجل على جميع خطوط الخياطة (الشكل التكميلي S4B). ضع وشكل قطعتين من حوالي 2 مم لكل منهما حولها بحيث يتم تغطية جميع خطوط الخياطة المرئية.
21. الافراج عن المشابك الوعائية: أولا المشبك الذيلية ، ثم المشبك الرأسي. نظرا لأنه من المتوقع حدوث كمية صغيرة من النزف ، ضع أدوات التطبيق ذات الرؤوس القطنية بشكل استباقي على مواقع المفاغرة لتوفير الضغط.
22. بمجرد خلوه من التسريبات التي يمكن ملاحظتها ، قم بتقييم القلب بحثا عن النبض (الشكل التكميلي S4C). إذا لم يحدث هذا ، فتحقق للتأكد من عدم حدوث التواء في الأوعية القلبية (خاصة بالنسبة لل IVC).
23. أعد وضع الأمعاء الآن فوق القلب وحوله. إذا ظهرت جافة ، بلل التجويف البريتوني باستخدام محلول كلوريد الصوديوم الدافئ.
24. أغلق تجويف البطن باستخدام خيوط أحادية البرولين 6/0 غير القابلة للامتصاص بواسطة طبقات:
    أولا الطبقة العضلية ، ثم الجلد (الشكل التكميلي S4D). استخدم تقنية عدم الانقطاع المستمر.
25. قم بإزالة المتلقي برفق من اللوحة الجراحية وإزالته من المخدر.
26. تطبيق 1 مل من محلول ملحي دافئ تحت الجلد ووضع المتلقي في قفص معد مسبقا مع الاحترار للمراقبة وفقا لبروتوكولات التعافي بعد العملية الجراحية (الشكل التكميلي S4E).

4. رعاية ما بعد الجراحة

1. مباشرة بعد الجراحة ، ضع المتلقي في قفص نظيف على وسادة التدفئة تحت المراقبة الدقيقة لمدة 3 ساعات على الأقل. خلال هذه الفترة ، راقب المعلمات المختلفة (النشاط ، وضعية الجسم ، حالة المعطف ، تعبيرات الوجه ، المشية ، التهوية ، ظهور موقع الجراحة ، وجود نبضات قلب البطن الواضحة) كل 30 دقيقة على الأقل. انسب درجة إلى كل معلمة (0 = عادي ، 1 = غير طبيعي قليلا أو متقطعا ، 2 = غير طبيعي بشكل معتدل أو ثابت).
   ملاحظة: يتم تشغيل التدخلات من خلال مجموع المعلمات المراقبة التي تتجاوز درجات الرفاهية المحددة في بروتوكول الأخلاقيات المتعلق بهذا النموذج.
2. انقل المستلمين إلى خزانة دافئة تحفظ عند 25 درجة مئوية ، حيث يظلون حتى اليوم 7 بعد العملية. خلال أول 3 أيام ، راقبها على الأقل 2x يوميا. خلال ال 4 أيام المتبقية ، راقبها على الأقل 1x يوميا. للتسكين بعد الجراحة، يتم تطبيق جرعة من البوبرينورفين (0.5-0.1 ملغ/كغ، مخففة إلى 0.03 ملغ/مل مع كلوريد الصوديوم 0.9٪) تحت الجلد للفأر المتلقي في المساء بعد الجراحة ومرتين يوميا لمدة 3 أيام بعد الجراحة.
3. بمجرد إزالته من الخزانة الدافئة ، راقب المستلمين على الأقل 2x أسبوعيا حتى نقطة النهاية التجريبية المناسبة.

النتائج

لتحديد فعالية التقنية الجراحية في تعزيز النتائج الجيدة لالتئام الجروح واستعادة الفئران ، حددت التجارب المبكرة في المختبر خصائص البقاء على قيد الحياة لمجموعة من ترقيع القلب ذات المناعة المتغيرة للمتلقي. وشملت هذه الطعوم الخلقية (ن = 5) و syngenec (n = 5) ، والتي تشترك في نفس علامات معقد التوافق ال?...

Discussion

نموذج زرع القلب التقويمي للفئران هو نموذج قوي قبل سريري يستخدم في المقام الأول للتحقيق في آثار عدم تطابق MHC على مستوى وطبيعة الرفض المناعي ، ومؤخرا ، تأثير الزرع على الاحتفاظ بالمناعة المقيمة في أنسجة^{الكسب غير المشروع 16}. بينما نتبع في البداية عن كثب بروتوكول Corry et ^al.7<...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
2030 Rycroft irrigating cannula 30 G	McFarlane	56005HU
Braided surgical silk 7-0
Bulldog clamp curved - 35 mm	Roboz	RS-7441-5
Bupivacaine 0.25%
Buprenorphine
Castroviejo needle holder catch curved -  145 mm	Haag-Streit	11.62.15
Chlorhexidine 5% solution	Ebos	JJ61371
Cotton-tipped applicator - 7.5 cm	Dove	SN109510
Ethanol 70% solution	Ebos	WH130192EE
Gauze 5 x 5 cm white	Aero	AGS50
Gelfoam 80 mm x 125 mm	Pfizer	7481D
Hair clipper	Wahl	9860L
Heparin 1,000 IU in 1 mL
Iris SuperCut scissors straight - 11.5 cm	Inka Surgical	11550.11
Isoflurane vaporiser	Darvall	9176
Micro bulldog clamp - 3.7 cm	Greman	14119-G
Micro scissors curved 105 mm
Micropore plain paper surgical tape - 2.5 cm wide	Ebos	7810L
Microsurgical scissors - curved tip
Monofilament polyprolene suture - 5/0	Surgipro	P-205-X
Myweigh i101 Precision Scale 100 g x 0.005 g	Myweigh	Kit00053
Needle - 30 G x 0.5 inch	BD	BD304000
Needleholder 15 cm curved "super fine"	Surgical Specialists	ST-B-15-8.2
Nylene 10/0 x 15 cm on 3.8 mm 3/8 circle round bodied taper (diam 0.07mm) CV300
Round body suture forceps curved 0.3 mm 120 mm	B. Braun	FD281R
Round body suture forceps straight 0.3 mm 120 mm	B. Braun	FD280R
Round handled vannas spring scissors-str/12.5 cm		15400-12
Spring scissors-Cvd Sm blades		15001-08
Stevens scissors blunt straight 110 mm
Surgical backboard			Rigid laminated cardboard. 15 x 15 cm
Surgical drapes			Cut into two sizes. 25 cm x 25 cm, and 25 cm x 40 cm
Surgical microscope
Syringe - 1 mL	BD	592696
Syringe - 3 mL	Leica	M651
Toothed forceps	BD	309657
University of Wisconsin Solution
Warming pad			Far infrared warming pad 20 x 25 cm
Westcott spring scissors
Yasargil clip applier bayonet	Aesculap	FE582K
Yasargil titanium clip perm 6.6 mm	Aesculap	A19FT222T
Mouse usage
Strain/SEX/Weight	Donor	Recipent
BALB/c, female, 19-23 g	7	21
C57BL/6, female, 17-20 g	7	0
CD45.1 BALB/c, female, 17-21 g	5	0