JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

يوفر هذا البروتوكول طريقة سريعة لتحديد توافق حبوب اللقاح وعدم التوافق في أصناف الحمضيات.

Abstract

تستخدم الحمضيات عدم التوافق الذاتي القائم على S-RNase لرفض حبوب اللقاح الذاتية ، وبالتالي تتطلب أشجار الملقحات القريبة للتلقيح والتسميد الناجحين. ومع ذلك ، فإن تحديد الأصناف المناسبة لتكون بمثابة ملقحات عملية تستغرق وقتا طويلا. لحل هذه المشكلة ، قمنا بتطوير طريقة سريعة لتحديد أصناف الحمضيات المتوافقة مع التلقيح والتي تستخدم الرحلان الكهربائي لهلام الأغاروز وتلطيخ الأنيلين الأزرق. يتم تحديد توافق حبوب اللقاح بناء على تحديد الأنماط الجينية S عن طريق استخراج الحمض النووي الكلي وإجراء فحوصات التنميط الجيني القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل باستخدام مواد أولية محددة. بالإضافة إلى ذلك ، يتم جمع الأنماط بعد 3-4 أيام من التلقيح اليدوي ، ويتم إجراء تلطيخ أزرق الأنيلين. أخيرا ، يتم ملاحظة حالة نمو أنابيب حبوب اللقاح باستخدام مجهر مضان. يمكن إثبات توافق حبوب اللقاح وعدم توافقها من خلال ملاحظة ما إذا كان نمو أنبوب حبوب اللقاح طبيعيا أم مكبوتا ، على التوالي. نظرا لبساطتها وفعاليتها من حيث التكلفة ، تعد هذه الطريقة أداة فعالة لتحديد توافق حبوب اللقاح وعدم توافق أصناف الحمضيات المختلفة لإنشاء مجموعات عدم التوافق وعلاقات عدم التوافق بين الأصناف المختلفة. توفر هذه الطريقة معلومات أساسية للاختيار الناجح لأشجار الملقحات المناسبة ، وبالتالي تسهل إنشاء بساتين جديدة واختيار الآباء المناسبين لبرامج التربية.

Introduction

عدم التوافق الذاتي (SI) هو آلية يتم التحكم فيها وراثيا موجودة في حوالي 40٪ من أنواع كاسيات البذور. في هذه العملية ، ترفض المدقة حبوب اللقاح من نبات له نفس النمط الوراثي SI ، وبالتالي تمنع الإخصاب الذاتي 1,2. Ma jia pummelo هو نوع محلي في مقاطعة Jinagsu ، الصين ، مع الصفات الممتازة للفاكهة الوردية الكبيرة ، ومحتوى العصير الغني ، والطعم الحلو والحامض ، وقشر سميك3. على الرغم من أن SI يعزز التهجين ، إلا أنه يؤثر سلبا على محصول وجودة الثمار4 ويتطلب أشجار ملقحات مناسبة ذات أنماط وراثية مميزة من SI للحصول على معدلات موثوقة لتحديد الفاكهة وإنتاجية عالية. في الوقت الحاضر ، هناك نوعان رئيسيان من SI ، عدم التوافق الذاتي البوغي (SSI) ، ويمثله Brassicaceae ، وعدم التوافق الذاتي المشيجي (GSI) ، ويمثله Rosaceae و Papaveraceae و Rutaceae و Solanaceae5،6،7،8.

الحمضيات هي واحدة من أهم محاصيل الفاكهة في العالم. تم العثور على نظام GSI القائم على S-RNase في العديد من مدخلات الحمضيات ويؤثر سلبا على معدل تكوين الفاكهة9. في هذا النظام ، يتم التحكم في SI بواسطة موضع S ، وهو موضع واحد متعدد الأشكال مع أليلين معقدين يحملان محددات المدقة S ومحددات حبوب اللقاحS 7. المحدد الأنثوي هو S ribonuclease (S-RNase) ، والمحدد الذكري هو S locus F-box (SLF) 7. تفرز خلايا المدقة بروتينات S-RNase. يتم التعرف على S-RNases غير الذاتية بواسطة بروتينات SLF ، مما يؤدي إلى انتشار وتدهور S-RNases غير الذاتي بواسطة مسار البروتيازوم 26S. في المقابل ، فإن S-RNases الذاتية قادرة على تجميع وتثبيط نمو أنبوب حبوب اللقاح (PT) لأنها تتهرب من بروتينات SLF ، وبالتالي ، يتم منعها من الانتشار في كل مكان10،11،12،13.

هنا ، نبلغ عن تقنية في الجسم الحي مفيدة لتحديد الأنماط الجينية S ودرجات توافق حبوب اللقاح وعدم توافقها. يتضمن البروتوكول استخراج الحمض النووي الكلي من الأوراق والتنبؤ بالنمط الجيني S باستخدام الاشعال الخاصة ب S. علاوة على ذلك ، يوفر تلطيخ الأنيلين الأزرق والفحص المجهري الفلوري متبوعا بالتلقيح اليدوي دليلا على درجة التوافق وعدم التوافق. كما تم تكييف إجراء التلقيح شبه في الجسم الحي ، والذي يتضمن التلقيح اليدوي للزهور في المختبر14,15 ، لتقييم درجات التوافق الذاتي وعدم التوافق. ومع ذلك ، فقد استخدمنا أيضا التلقيح الميداني متبوعا بتعبئة الزهور لتجنب التلوث من حبوب اللقاح غير المرغوب فيها للسماح لأنابيب حبوب اللقاح بالتطور في الظروف الطبيعية. هذا البروتوكول بسيط ومباشر ويوفر المعلومات اللازمة للاختيار الناجح لأشجار الملقحات المناسبة.

Protocol

1. التحضير لتلطيخ الأنيلين الأزرق

  1. قم بإعداد الكواشف والأدوات التالية للتجربة: فرشاة الملقحات ، وملاقط ، وقلم رصاص ، وورق كبريتات ، وكيس تلقيح ، وأكياس قفل مضغوط ، ومشابك ورق ، وفورمالديهايد ، وحمض الخليك الجليدي ، وإيثانول مطلق ، وأنابيب طرد مركزي ، وملقط ، وقطارات غراء ، وشرائح زجاجية ، وأغطية ، ومشارط ، وبولي إيثيلين جلايكول.
  2. تحضير وسط إنبات في المختبر يحتوي على 0.02٪ MgSO4 ، 0.01٪ KNO 3 ، 0.03٪ Ca(NO 3)2 ، 0.01٪ H 3 BO 3 ، 20٪ PEG-4000 ، و 15٪ سكروز. اضبط الرقم الهيدروجيني على 6.0-6.2 باستخدام KOH. استخدم محرك مغناطيسي حيث يصعب إذابة PEG-4,000.
  3. تحضير محلول Carnoy المثبت ، وهو الإيثانول المطلق وحمض الخليك الجليدي الممزوج بنسبة 3: 1. قم بإعداد محلول تثبيت FAA ، وهو 40٪ فورمالديهايد ، 80٪ إيثانول ، وحمض الخليك الجليدي (1: 8: 1). تحضير 4 M هيدروكسيد الصوديوم (NaOH) ومحلول أزرق الأنيلين ، وهو 0.1٪ أزرق أنيلين في 0.1 M K3PO4. استخدم زجاجة كهرمانية لتخزين محلول الأنيلين الأزرق لأنه حساس للضوء.

2. جمع حبوب اللقاح

  1. تعرف على فترة ازدهار الأشجار التجريبية (Ma jia pummelo في هذه الدراسة) مسبقا. اجمع الزهور الناضجة غير المفتوحة من بداية فترة الإزهار إلى مرحلة الذروة المزهرة ، وضعها في كيس بسحاب. يمكن تخزين الزهور في درجة حرارة 4 درجات مئوية في الثلاجة لمدة 24 ساعة.
  2. خذ الزهور إلى المختبر. استخدم الملقط لجمع الأنثرات ، وضعها في طبق بتري يحتوي على ورق ترشيح. جمع anthers من 20 إلى 30 زهرة.
  3. ضع طبق بتري الذي يحتوي على الأنثرات في فرن على حرارة 28 درجة مئوية لمدة 24 ساعة حتى تجف حبوب اللقاح. للاطلاع على تنظيم الزهور المفصل ، انظر Hu et al.9.
  4. ضع حبوب اللقاح المجففة في أنبوب طرد مركزي سعة 1.5 مل. احفظ حبوب اللقاح في كيس بسحاب محكم الغلق يحتوي على هلام السيليكا المتغير اللون (مجفف). أغلق الكيس ، وقم بتسمية الكيس باسم صنف حبوب اللقاح وتاريخ التخزين. يمكن تخزين حبوب اللقاح المجففة في ثلاجة -20 درجة مئوية لمدة 96 أسبوعا16.

3. اختبار إنبات حبوب اللقاح في المختبر

  1. صب 300 ميكرولتر من الوسط السائل في طبق زراعة الخلايا أو غطاء أنبوب الطرد المركزي 2 مل ، ورش حبوب اللقاح بالتساوي بمساعدة فرشاة التلقيح. احتضان حبوب اللقاح عند 28 درجة مئوية في بيئة مظلمة رطبة لمدة 12 ساعة.
  2. قم بإزالة الجزء العلوي 1 مم من طرف طرف ماصة سعة 1000 ميكرولتر. استخدم الماصة لامتصاص حبوب اللقاح بكمية صغيرة من محلول الاستزراع ونقلها إلى مركز شريحة المجهر. قم بتغطيتها بغطاء غطاء. راقب العينة بمجهر مقلوب باستخدام هدف 10x.
  3. قم بإجراء ثلاث نسخ متماثلة مستقلة باستخدام نفس كثافة حبوب اللقاح تقريبا لكل نسخةمتماثلة 17. قم بإدارة كمية حبوب اللقاح بصريا ، وتأكد من أن طبق بتري بأكمله مغطى بحبوب اللقاح وأن كل طبق بتري يحتوي على كمية متساوية تقريبا من حبوب اللقاح.
  4. تنتج حبوب اللقاح المنبتة أنبوب حبوب اللقاح بطول ضعف قطره تقريبا. احسب معدل الإنبات من 20 مجالا مرئيا ، وهو ما يعطي النسبة المئوية لحبوب اللقاح النابتة في جميع حقول حبوب اللقاح.

4. التلقيح

  1. اختيار يوم مشمس دون الرياح للتلقيح. حدد 10 براعم مكتملة النمو على وشك الفتح ، وقشر البتلات بعناية ، واحرص على عدم إصابتها بكدمات.
  2. استخدم فرشاة التلقيح لنشر كمية كافية من حبوب اللقاح القابلة للحياة على سطح وصمة العار ، واحرص على عدم إتلاف المدقة. للتلقيح الذاتي ، استخدم حبوب اللقاح من نفس النبات / الصنف. للتلقيح المتبادل ، استخدم حبوب اللقاح من نبات ذي نمط وراثي مختلف.
  3. غطي الزهور الملقحة بكيس ورقي كبريتات. استخدم مشبك ورق لإغلاق الكيس ولمنع التلقيح عن طريق حبوب اللقاح المميزة وراثيا.
  4. اكتب اسم النوع وعدد ووقت التلقيح على الملصق. الملصق على الفروع القريبة من الزهور الملقحة.

5. أخذ العينات والتثبيت والحفظ

  1. قم بإزالة أكياس التلقيح بعد حوالي 3-4 أيام من التلقيح ، واجمع الزهور الملقحة في أكياس بسحاب.
  2. قم بإزالة البتلات والأوعية والمبيضين على الفور من الزهور ، واغمر الوصمات المنصهرة في الأنماط في أنبوب طرد مركزي يحتوي على محلول مثبت طازج. احتضن الوصمات والأنماط في المحلول المثبت طوال الليل عند 4 درجات مئوية.
  3. في اليوم التالي ، تخلص من المحلول المثبت ، واغسل الوصمات والأنماط مرتين إلى ثلاث مرات في 95٪ من الإيثانول.
  4. نقل الأنماط إلى محلول الإيثانول 70 ٪. تأكد من أن العينة مغمورة تماما في المحلول. يمكن تخزين الأنماط في هذه المرحلة عند 4 درجات مئوية لمدة 1-2 أشهر.

6. تلطيخ الأنيلين الأزرق

  1. اغسل عينات النمط المخزنة في 70٪ من الإيثانول بالماء المقطر ثلاث إلى أربع مرات. اغمر في محلول هيدروكسيد الصوديوم بطول 4 أمتار ، وأغلقه ، واحتضنه في حمام مائي على حرارة 65 درجة مئوية لمدة 60 دقيقة. خلال هذه الخطوة ، يتغير لون النمط من الأصفر والأبيض إلى البرتقالي والأحمر.
  2. انقعي الأنماط في الماء المقطر لمدة 30 دقيقة. تخلصي من الماء المقطر ، واغسلي الأنماط بالماء المقطر ثلاث إلى أربع مرات أو حتى يصبح لون النمط أصفر.
  3. ضع العينة في أنبوب سعة 10 مل ، وأضف الأنيلين الأزرق حتى يتم غمس العينة ، واصبغها لمدة 12 ساعة في الظلام.
  4. راقب نمو أنبوب حبوب اللقاح باستخدام مجهر مضان.

7. المجهر الفلوري

  1. قبل مراقبة العينات ، ضع الشريحة على طاولة مسطحة ، وأضف قطرتين إلى ثلاث قطرات من البولي إيثيلين جلايكول إلى سطح الشريحة.
  2. اغسل النمط المراد ملاحظته بالماء المقطر. استخدم مشرطا لتقسيمه إلى نصفين على طول المحور الطولي. ضع نصف النمط على الشريحة الزجاجية ، وقم بتغطيتها بغطاء غطاء.
  3. ضع الشريحة على مسرح المجهر فوق الفتحة ، وتصور باستخدام هدف 10x. استخدم مرشح DAPI (الإثارة: 325-375 نانومتر ؛ الانبعاثات: 435-485 نانومتر). لاحظ خمسة أنماط لكل نوع من أنواع التلقيح. مراقبة نمو أنبوب حبوب اللقاح.

8. تحديد النمط الجيني S القائم على تفاعل البوليميراز المتسلسل

  1. استخرج الحمض النووي الجينومي من عينة وصمة العار باستخدام طريقة CTAB18.
    1. ضع الأوراق المجمعة في أنبوب طرد مركزي سعة 2 مل ، وقم بتجميدها في النيتروجين السائل. تحضير HCl:EDTA:NaCl:H2O عازلة بنسبة 1:1:3:5 وخليط كحول كلوروفورم إيزو أميل بنسبة 24:1
    2. أضف 10 مل من المخزن المؤقت المحضر ، و 0.2 جم من CTAB ، و 200 ميكرولتر من ميركابتوفوإيثانول إلى أنبوب طرد مركزي سعة 50 مل ، وضعها في حمام مائي عند 65 درجة مئوية لمدة 5 دقائق حتى يصبح المحلول واضحا وشفافا.
    3. ضع الشفرات في ملاط ، وأضف العينات المجمدة ، وأضف النيتروجين السائل ، وطحنها. ضع العينة الأرضية في أنبوب طرد مركزي سعة 2 مل ، وأضف 600 ميكرولتر من خليط CTAB ، وضعها في حمام مائي عند 65 درجة مئوية لمدة 60 دقيقة ، واخلطها رأسا على عقب كل 30 دقيقة.
    4. أضف 700 ميكرولتر من خليط كحول كلوروفورم إيزو أميل (24: 1) ، واخلطه رأسا على عقب لمدة 10 دقائق. أجهزة الطرد المركزي عند 24 درجة مئوية عند 12000 × جم لمدة 10 دقائق ، ماصة المادة الطافية ، ونقلها إلى أنبوب طرد مركزي سعة 1.5 مل.
    5. أضف 60 ميكرولتر من محلول كلوريد الصوديوم 5 M و 1 مل من الإيثانول المطلق ، واخلطه رأسا على عقب. تجمد عند -20 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة ، وأجهزة الطرد المركزي عند 24 درجة مئوية و 9000 × جم لمدة 5 دقائق.
    6. تخلص من المادة الطافية ، وأضف 1 مل من محلول الإيثانول بنسبة 70٪ ، واتركها في درجة حرارة الغرفة لمدة 1-2 ساعة. أجهزة الطرد المركزي عند 24 درجة مئوية ، 9000 × جم لمدة 5 دقائق ، وتخلص من المادة الطافية ، واستنشق محلول الإيثانول الزائد ، وجفف في الهواء لمدة 5 دقائق.
    7. أضف 100 ميكرولتر من الماء المعقم ليذوب ، وقم بقياس تركيز الحمض النووي باستخدام مقياس الطيف الضوئي ، وقم بتجميده في مجمد -4 درجة مئوية للتخزين طويل الأجل.
    8. تكوين نظام تفاعل RT-PCR. قم بإعداد مزيج التفاعل التالي ل 10 ميكرولتر يحتوي على 5 ميكرولتر من 2x PCRMix ، و 0.25 ميكرولتر لكل من التمهيدي الأمامي والخلفي ، و 1 ميكرولتر من الحمض النووي (100 نانوغرام / ميكرولتر) ، و 3.5 ميكرولتر من H2O.
  2. قم بإعداد برنامج PCR حسب الجدول 1. كان برنامج تفاعل البوليميراز المتسلسل لجميع الأشكال المتساوية 95 درجة مئوية لمدة 5 دقائق 32x (95 درجة مئوية لمدة 30 ثانية ، 55 درجة مئوية لمدة 30 ثانية ، و 72 درجة مئوية لمدة 1 دقيقة) و 72 درجة مئوية لمدة 5 دقائق. افصل المنتجات على 1.5٪ من المواد الهلامية TAE-agarose والصورة9. تحقق من النمط الجيني S المحدد باستخدام الحمض النووي الجينومي.

النتائج

بالنسبة للتجارب التي أجريت هنا ، تم اختيار الزهور الناضجة ، وتم جمع الأنثرات وتجفيفها في فرن ، ونبت حبوب اللقاح عند 28 درجة مئوية لمدة 12 ساعة. تم تحديد صلاحية حبوب اللقاح ومعدلات إنباتها كما هو موضح في الشكل 1.

تم تلقيح الحمضيات يدويا ، وتم تقييم توافق حبوب الل?...

Discussion

في محاصيل الفاكهة ، يعتبر كل من البارثينوكاربي و SI من السمات المهمة لأنهما يمهدان الطريق للفواكه الخالية من البذور - وهي سمة تحظى بتقدير كبير من قبل المستهلكين. عدم التوافق الذاتي يعزز رفض حبوب اللقاح الذاتية ، وبالتالي يمنع زواج الأقارب20. بين الحمضيات ، pummelo هو نوع غير متوافق ...

Disclosures

يعلن أصحاب البلاغ أنه ليس لديهم ما يكشفون عنه.

Acknowledgements

تم دعم هذا المشروع ماليا من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (32122075 ، 32072523).

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
absolute ethanolSinopharm Chemical ReagentCo., Ltd10009218
Aniline blueSinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd
Boric acid, H3BO3Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd10004818
Brown bottleLabgic Technology Co., Ltd
Calcium nitrate tetrahydrate, Ca(NO3 )2Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd80029062
Centrifugal tubeLabgic Technology Co., Ltd
centrifuge tubesLabgic Technology Co., Ltd
CTABGEN-VIEW SCIENTIFIC INC57-09-0(CAS)
DroppingJiangsu Songchang Medical Equipment Co., Ltd
Ethylenediaminetetraacetic acid, EDTASinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd10009617
ForcepsLUXIANZI Biotechnology Co., Ltd
formaldehydeSinopharm Chemical ReagentCo., Ltd10010018
Fully automatic sample fast grinderShanghai Jingxin Industrial Development Co., LtdTissuelyser-96
glacial acetic acidSinopharm Chemical ReagentCo., Ltd10000218
Grinding TubeShanghai Jingxin Industrial Development Co., Ltd
Isoamyl alcoholSinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd10003218
Isopropyl alcoholSinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd80109218
labelM&G Chenguang Stationery Co., Ltd.
Leica DMi8Shanghai Leica Co.,Ltd21903797
Magnesium sulfate heptahydrate, MgSO4Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd10013018
MICROSCOPE Cover glassZhejiang Shitai Industrial Co., Ltd
NaClSinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd10019318
paper clipsM&G Chenguang Stationery Co., Ltd.
pencilM&G Chenguang Stationery Co., Ltd.
pollinator brushShanghai Yimei Plastics Co., Ltd
Polyethylene glycol, PEG 6000Beijing Dingguo Changsheng Biotechnology Co., LtdDH229-1
Polyethylene glycol, PEG-4000Guangzhou saiguo biotech Co., Ltd1521GR500
Potassium hydroxide, KOHSinopharm Chemical ReagentCo., Ltd10017008
Potassium nitrate, KNO3Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd10017218
ScalpelJiangsu Songchang Medical Equipment Co., Ltd
SlideZhejiang Shitai Industrial Co., Ltd
Sodium hydroxide, NAOHSinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd10019718
SucroseSinopharm Chemical ReagentCo., Ltd10021418
sulfate paperTaizhou Jinnong Mesh Factory
Thermostat water bathShanghai Jinghong Experimental Equipment Co., LtdL-909193
TrichloromethaneSinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd10006818
Tripotassium phosphate tribasic trihydrate, K3PO4Shanghai Lingfeng Chemical Reagent Co.,Ltd20032318
Tris-HClGEN-VIEW SCIENTIFIC INC1185-53-1
zip lock bagsM&G Chenguang Stationery Co., Ltd.
β-MercaptoethanolGEN-VIEW SCIENTIFIC INC60-24-2(CAS)

References

  1. Matsumoto, D., Tao, R. Recognition of S-RNases by an S locus F-box like protein and an S haplotype-specific F-box like protein in the Prunus-specific self-incompatibility system. Plant Molecular Biology. 100 (4-5), 367-378 (2019).
  2. Goldberg, E. E., et al. Species selection maintains self-incompatibility. Science. 330 (6003), 493-495 (2010).
  3. Zhang, L., Wang, R., Zhao, G., Wang, A., Lin, G. Comparative study on fruit quality of Guangfeng Ma jia pummelo and Pinghe red pummelo. China Agricultural Science Bulletin. 37 (22), 126-130 (2021).
  4. Min, H. E., Chao, G. U., Juyou, W. U., Shaoling, Z. Recent advances on self-incompatibility mechanism in fruit trees. Acta Horticulturae Sinica. 48 (4), 759-777 (2021).
  5. Fujii, S., Kubo, K., Takayama, S. Non-self- and self-recognition models in plant self-incompatibility. Nature Plants. 2 (9), 2-9 (2016).
  6. Meng, X., Sun, P., Kao, T. S-RNase-based self-incompatibility in Petunia inflata. Annals of Botany. 108 (4), 637-646 (2011).
  7. Liang, M., et al. Evolution of self-compatibility by a mutant Sm-RNase in citrus. Nature Plants. 6 (2), 131-142 (2020).
  8. Thomas, S. G., Franklin-Tong, V. E. Self-incompatibility triggers programmed cell death in Papaver pollen. Nature. 429, 305-309 (2004).
  9. Hu, J., et al. Downregulated expression of S2-RNase attenuates self-incompatibility in "Guiyou No. 1" pummelo. Horticulture Research. 8 (1), 199 (2021).
  10. Guo, H., Halitschke, R., Wielsch, N., Gase, K., Baldwin, I. T. Mate selection in self-compatible wild tobacco results from coordinated variation in homologous self-Incompatibility genes. Current Biology. 29 (12), 2020-2030 (2019).
  11. Sun, P., Li, S., Lu, D., Williams, J. S., Kao, T. Pollen S-locus F-box proteins of petunia involved in S-RNase-based self-incompatibility are themselves subject to ubiquitin-mediated degradation. The Plant Journal. 83 (2), 213-223 (2015).
  12. Hua, Z., Kao, T. Identification and characterization of components of a putative petunia S-locus F-box-containing E3 ligase complex involved in S-RNase-based self-incompatibility. Plant Cell. 18 (10), 2531-2553 (2006).
  13. Entani, T., et al. Ubiquitin-proteasome-mediated degradation of S-RNase in a solanaceous cross-compatibility reaction. The Plant Journal. 78 (6), 1014-1021 (2014).
  14. Abdallah, D. Analysis of self-incompatibility and genetic diversity in diploid and hexaploid plum genotypes. Frontiers in Plant Science. 10, 896 (2019).
  15. Herrera, S., Lora, J., Hormaza, J. I., Herrero, M., Rodrigo, J. Optimizing production in the new generation of apricot cultivars: self-incompatibility, S-RNase allele identification, and incompatibility group assignment. . Frontiers in Plant Science. 9, 527 (2018).
  16. Yuan, S. C., Chin, S. W., Lee, C. Y., Chen, F. C. Phalaenopsis pollinia storage at sub-zero temperature and its pollen viability assessment. Botanical Studies. 59 (1), 1 (2018).
  17. Liang, M. Identification and evolution of genes related to self-incompatibility in citrus. , (2019).
  18. Cheng, Y. J., Guo, W. W., Yi, H. L., Pang, X. M., Deng, X. X. An efficient protocol for genomic DNA extraction from Citrus species. Plant Molecular Biology Reporter. 21 (2), 177-178 (2003).
  19. Wei, Z., et al. Identification of S-genotypes of 63 pummelo germplasm resources. Acta Horticulturae Sinica. 49 (5), 1111-1120 (2021).
  20. de Nettancourt, D. Incompatibility in angiosperms. Sexual Plant Reproduction. 10, 185-199 (1997).
  21. Igic, B., Lande, R., Kohn, J. R. Loss of self-incompatibility and its evolutionary consequences. International Journal of Plant Sciences. 169 (1), 93-104 (2008).
  22. Guerrero, B. I., Guerra, M. E., Rodrigo, J. Establishing pollination requirements in Japanese plum by phenological monitoring, hand pollinations, fluorescence microscopy and molecular genotyping. Journal of Visualized Experiments. (165), e61897 (2020).
  23. Herrera, S., Lora, J., Hormaza, J. I., Rodrigo, J. Determination of self- and inter-(in)compatibility relationships in apricot combining hand-pollination, microscopy and genetic analyses. Journal of Visualized Experiments. (160), e60241 (2020).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

196 S RNase S

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved