تتبع انتشار الخلايا السرطانية من نقائل الرئة باستخدام التحويل الضوئي

Summary

نقدم طريقة لدراسة إعادة نشر الخلايا السرطانية من نقائل الرئة تتضمن بروتوكولا جراحيا للتحويل الضوئي الانتقائي لنقائل الرئة ، يليه تحديد الخلايا السرطانية المعاد نشرها في الأعضاء الثالثة.

Abstract

ورم خبيث - الانتشار المنهجي للسرطان - هو السبب الرئيسي للوفيات المرتبطة بالسرطان. على الرغم من أن ورم خبيث يعتقد عادة أنه عملية أحادية الاتجاه حيث تنتشر خلايا الورم الرئيسي وتنبعث البذور ، إلا أن الخلايا السرطانية في النقائل الموجودة يمكن أيضا أن تعيدالانتشار وتؤدي إلى آفات جديدة في المواقع الثالثية في عملية تعرف باسم "ورم خبيث من النقائل" أو "ورم خبيث إلى ورم خبيث البذر". قد يؤدي البذر من ورم خبيث إلى ورم خبيث إلى زيادة العبء النقيلي وتقليل نوعية حياة المريض وبقائه على قيد الحياة. لذلك ، فإن فهم العمليات الكامنة وراء هذه الظاهرة أمر بالغ الأهمية لتحسين استراتيجيات العلاج للمرضى الذين يعانون من السرطان النقيلي.

لا يعرف سوى القليل عن بذر ورم خبيث إلى ورم خبيث ، ويرجع ذلك جزئيا إلى القيود اللوجستية والتكنولوجية. تعتمد الدراسات حول البذر من ورم خبيث إلى ورم خبيث بشكل أساسي على طرق التسلسل ، والتي قد لا تكون عملية للباحثين الذين يدرسون التوقيت الدقيق لأحداث البذر من ورم خبيث إلى ورم خبيث أو ما يعززها أو يمنعها. هذا يسلط الضوء على عدم وجود منهجيات تسهل دراسة البذر من ورم خبيث إلى ورم خبيث. لمعالجة هذا الأمر ، قمنا بتطوير - ووصف هنا - بروتوكولا جراحيا للفئران للتحويل الضوئي الانتقائي لنقائل الرئة ، مما يسمح بوضع علامات محددة وتتبع مصير الخلايا السرطانية التي تعيد الانتشار من الرئة إلى المواقع الثالثية. على حد علمنا ، هذه هي الطريقة الوحيدة لدراسة إعادة نشر الخلايا السرطانية وبذر ورم خبيث إلى ورم خبيث من الرئتين التي لا تتطلب التحليل الجينومي.

Introduction

ورم خبيث هو السبب الرئيسي للوفيات المرتبطة بالسرطان¹. ينشأ السرطان النقيلي عندما تنتشر خلايا الورم الرئيسي في جميع أنحاء الجسم وتتكاثر إلى أورام يمكن اكتشافها سريريا في الأعضاء البعيدة ^2,3.

على الرغم من أن ورم خبيث يعتقد عادة أنه عملية أحادية الاتجاه حيث تنتشر الخلايا السرطانية من الورم الرئيسي وتستعمر الأعضاء البعيدة⁴ ، إلا أن الأدلة السريرية والتجريبية المتزايدة تشير إلى وجود عملية أكثر تعقيدا ومتعددة الاتجاهات. لقد ثبت أن الخلايا السرطانية المنتشرة يمكن أن تعيد زرع الورم الرئيسي (إذا كان لا يزال في مكانه)⁵

Protocol

تم تنفيذ جميع الإجراءات الموضحة في هذا البروتوكول وفقا للمبادئ التوجيهية واللوائح الخاصة باستخدام الفقارية ، بما في ذلك الموافقة المسبقة من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام في كلية ألبرت أينشتاين للطب.

قبل الجراحة ، يجب إنشاء نقائل الرئة في الفئران باستخدام الخلايا السرطانية التي تعبر عن بروتين قابل للتحويل الضوئي / قابل للتبديل الضوئي. تم نشر العديد من البروتوكولات لتوليد ورم خبيث في الرئة^26،27،28.

1. التحضير للجراحة

1. إعداد مناطق عمل متميزة لإعداد الفئران (إزالة الشعر والتنبيب) والجراحة والت....

النتائج

يوضح الشكل 1 خطوات الجراحة الموصوفة في هذا البروتوكول. باختصار ، يتم تخدير الماوس ، ويتم إزالة الشعر من الصدر الأيسر. ثم يتم تنبيب الفأر وتهويته ، مما يسمح للفأر بتلقي الأكسجين أثناء فتح التجويف الصدري. تتم إزالة الأنسجة الرخوة لفضح القفص الصدري ، ويتم إجراء شق في العضلة ال?.......

Discussion

في هذه الورقة ، نصف بروتوكولا جراحيا للتحويل الضوئي الانتقائي للخلايا السرطانية في الرئة. تمكن هذه التقنية الباحثين من تحديد الخلايا السرطانية في الرئة بشكل انتقائي وتتبع مصيرها عن طريق إعادة تحديدها في جميع أنحاء الجسم في وقت لاحق ، مما يسهل دراسة ورم خبيث من نقائل الرئة. باستخدام هذا ال.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
0-30 V, 0-3 A Power Supply	MPJA	9616 PS
12 VDC, 1.2 A Unregulated Plug Supply	MPJA	17563 PD
28 G 1 mL BD Insulin Syringe	BD	329410
400 nm light emitting diode array lamp	LedEngin Inc.	897-LZPD0UA00	Photoconversion lamp, custom-built (individual parts included below)
5-0 braided silk suture with RB-1 cutting needle	Ethicon, Inc.	774B
9 cm 2-0 silk tie	Ethicon, Inc.	LA55G
Baytril 100 (enrofloxacin)	Bayer (Santa Cruz Biotechnology)	sc-362890Rx	Antibiotic used in drinking water
Buprenorphine	Hospira	0409-2012-32	Analgesic
Cables (Cable Assemblies) 2.1 DC JACK-STRAIGHT 72"  BLACK/ZIP CORD	Mouser	172-7426-E
Cables (Cable Assemblies) 2.5 JK-ST 72" ZIP CD	Mouser	172-0250
Chlorhexidine solution	Durvet	7-45801-10258-3	Chlorhexidine Disinfectant Solution
Compressed air canister	Falcon	DPSJB-12
Extra Fine Micro Dissecting Scissors 4" Straight Sharp/Sharp 24 mm	Roboz Surgical	RS-5912	Sharp Micro Dissecting Scissors
Fiber-optic illuminator	O.C. White Company	FL3000	Used during mouse intubation
Gemini Cautery Kit	Harvard Apparatus	726067	Cautery pen
Germinator 500	CellPoint Scientific	GER 5287-120V	Bead Sterilizer
Graefe forceps	Roboz	RS-5135
High power LEDs - single color ultraviolet 90 watts	Mouser	LZP-D0UA00
Infrared heat lamp	Braintree Scientific	HL-1
Isoflurane SOL 250 mL PVL	Covetrus	29405	Anesthetic
Isoflurane vaporizer	SurgiVet	VCT302
Jacobson needle holder with lock	Kalson Surgical	T1-140
Labeling tape	Fisher Scientific	S68702
LED Lighting Reflectors CREE MP-L SNGL LENS REFLECTOR & LOC PIN	Mouser	928-C11395TM
Long cotton tip applicators	Medline Industries	MDS202055
Masscool / Soccket 478 / Intel Pentium 4/Celeron up to 3.4GHz / Ball Bearing / Copper Core / CPU Cooling Fan	CompUSA	#S457-1023
Micro Dissecting Scissors 4" Straight Blunt/Blunt	Roboz Surgical	RS-5980	Blunt Micro Dissecting Scissors
Murine ventilator	Kent Scientific	PS-02	PhysioSuite
Nair Hair Removal Lotion	Amazon	B001RVMR7K	Depilatory cream
Personnet mini retractor	Roboz	RS-6504	Retractor
Phosphate Buffered Saline 1x	Fisher Scientific	14190144	PBS
pLenti.CAG.H2B-Dendra2.W	Addgene	51005	Dendra2 lentivirus
Puralube	Henry Schein Animal Health	008897	Eye Lubricant
Rodent intubation stand	Braintree Scientific	RIS 100
Small animal lung inflation bulb	Harvard Apparatus	72-9083
SurgiSuite Multi-Functional Surgical Platform for Mice, with Warming	Kent Scientific	SURGI-M02	Heated surgical platform
Test Leads 48" TEST LEAD BANANA - Black	Mouser	565-1440-48-0
Test Leads 48" TEST LEAD BANANA - Red	Mouser	565-1440-48-2
Tracheal catheter	Exelint International	26746	22 G catheter
Wound closing system veterinary kit	Clay Adams	IN015	Veterinary surgical stapling kit