Fotokonversiyon Kullanarak Akciğer Metastazlarından Tümör Hücresi Yayılımının İzlenmesi

Özet

Akciğer metastazlarından tümör hücresi yayılımını incelemek için, akciğer metastazlarının seçici fotokonversiyonu için cerrahi bir protokol ve ardından üçüncül organlarda redissemine tümör hücrelerinin tanımlanması için bir yöntem sunuyoruz.

Özet

Metastaz - kanserin sistemik yayılımı - kansere bağlı ölümlerin önde gelen nedenidir. Metastaz genellikle primer tümörden gelen hücrelerin metastazları yaydığı ve tohumladığı tek yönlü bir süreç olarak düşünülse de, mevcut metastazlardaki tümör hücreleri de "metastazdan metastaz" veya "metastazdan metastaza tohumlama" olarak bilinen bir süreçte üçüncül bölgelerde yenidenyayılabilir ve yeni lezyonlara yol açabilir. Metastazdan metastaza tohumlama, metastatik yükü artırabilir ve hastanın yaşam kalitesini ve sağkalımını azaltabilir. Bu nedenle, bu fenomenin arkasındaki süreçleri anlamak, metastatik kanserli hastalar için tedavi stratejilerini geliştirmek için çok önemlidir.

Kısmen lojistik ve teknolojik sınırlamalar nedeniyle metastazdan metastaza tohumlama hakkında çok az şey bilinmektedir. Metastaz-metastaz tohumlama üzerine yapılan çalışmalar, öncelikle, metastaz-metastaz tohumlama olaylarının tam zamanlamasını veya bunları neyin teşvik ettiğini veya önlediğini inceleyen araştırmacılar için pratik olmayabilecek sıralama yöntemlerine dayanmaktadır. Bu, metastazdan metastaza tohumlama çalışmasını kolaylaştıran metodolojilerin eksikliğini vurgulamaktadır. Bunu ele almak için, akciğer metastazlarının seçici fotokonversiyonu için bir murin cerrahi protokolü geliştirdik ve burada açıkladık, akciğerden üçüncül bölgelere yeniden yayılan tümör hücrelerinin spesifik işaretlenmesine ve kader takibine izin verdik. Bildiğimiz kadarıyla, genomik analiz gerektirmeyen akciğerlerden tümör hücresi yeniden yayılımını ve metastazdan metastaza tohumlamayı incelemek için tek yöntem budur.

Giriş

Metastaz, kansere bağlı ölümlerin önde gelen nedenidir¹. Metastatik kanser, primer tümörden gelen hücreler vücuda yayıldığında ve uzak organlarda klinik olarak saptanabilir tümörlere çoğaldığında ortaya çıkar ^2,3.

Metastaz genellikle tümör hücrelerinin primer tümörden yayıldığı ve uzak organları kolonize ettiği tek yönlü bir süreç olarak düşünülse de⁴, artan klinik ve deneysel kanıtlar daha karmaşık, çok yönlü bir sürecin oyunda olduğunu göstermektedir. Dolaşımdaki tümör hücrelerinin primer tümörü yeniden tohumlayabildiği gösterilmişti....

Protokol

Bu protokolde açıklanan tüm prosedürler, Albert Einstein Tıp Fakültesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından önceden onay da dahil olmak üzere, omurgalı hayvanların kullanımına ilişkin yönergelere ve düzenlemelere uygun olarak gerçekleştirilmiştir.

Ameliyattan önce, farelerde akciğer metastazları, fotokonvertibl / foto-değiştirilebilir bir protein eksprese eden kanser hücreleri kullanılarak üretilecektir; Akciğer metastazı oluşumu için çeşitli protokoller yayınlanmıştır 26,27,28.

1. Ameliyata hazırl....

Tartışmalar

Bu yazıda, akciğerdeki tümör hücrelerinin selektif fototransformasyonu için bir cerrahi protokol tanımlanmıştır. Bu teknik, araştırmacıların akciğerdeki tümör hücrelerini seçici olarak işaretlemelerini ve daha sonraki bir zaman noktasında onları vücutta yeniden tanımlayarak kaderlerini izlemelerini sağlar ve akciğer metastazlarından metastaz çalışmasını kolaylaştırır. Bu protokolü kullanarak, fotokonversiyon ile ameliyat geçiren farelerin beyin, karaciğer ve fotokonversiyon olmayan s.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
0-30 V, 0-3 A Power Supply	MPJA	9616 PS
12 VDC, 1.2 A Unregulated Plug Supply	MPJA	17563 PD
28 G 1 mL BD Insulin Syringe	BD	329410
400 nm light emitting diode array lamp	LedEngin Inc.	897-LZPD0UA00	Photoconversion lamp, custom-built (individual parts included below)
5-0 braided silk suture with RB-1 cutting needle	Ethicon, Inc.	774B
9 cm 2-0 silk tie	Ethicon, Inc.	LA55G
Baytril 100 (enrofloxacin)	Bayer (Santa Cruz Biotechnology)	sc-362890Rx	Antibiotic used in drinking water
Buprenorphine	Hospira	0409-2012-32	Analgesic
Cables (Cable Assemblies) 2.1 DC JACK-STRAIGHT 72"  BLACK/ZIP CORD	Mouser	172-7426-E
Cables (Cable Assemblies) 2.5 JK-ST 72" ZIP CD	Mouser	172-0250
Chlorhexidine solution	Durvet	7-45801-10258-3	Chlorhexidine Disinfectant Solution
Compressed air canister	Falcon	DPSJB-12
Extra Fine Micro Dissecting Scissors 4" Straight Sharp/Sharp 24 mm	Roboz Surgical	RS-5912	Sharp Micro Dissecting Scissors
Fiber-optic illuminator	O.C. White Company	FL3000	Used during mouse intubation
Gemini Cautery Kit	Harvard Apparatus	726067	Cautery pen
Germinator 500	CellPoint Scientific	GER 5287-120V	Bead Sterilizer
Graefe forceps	Roboz	RS-5135
High power LEDs - single color ultraviolet 90 watts	Mouser	LZP-D0UA00
Infrared heat lamp	Braintree Scientific	HL-1
Isoflurane SOL 250 mL PVL	Covetrus	29405	Anesthetic
Isoflurane vaporizer	SurgiVet	VCT302
Jacobson needle holder with lock	Kalson Surgical	T1-140
Labeling tape	Fisher Scientific	S68702
LED Lighting Reflectors CREE MP-L SNGL LENS REFLECTOR & LOC PIN	Mouser	928-C11395TM
Long cotton tip applicators	Medline Industries	MDS202055
Masscool / Soccket 478 / Intel Pentium 4/Celeron up to 3.4GHz / Ball Bearing / Copper Core / CPU Cooling Fan	CompUSA	#S457-1023
Micro Dissecting Scissors 4" Straight Blunt/Blunt	Roboz Surgical	RS-5980	Blunt Micro Dissecting Scissors
Murine ventilator	Kent Scientific	PS-02	PhysioSuite
Nair Hair Removal Lotion	Amazon	B001RVMR7K	Depilatory cream
Personnet mini retractor	Roboz	RS-6504	Retractor
Phosphate Buffered Saline 1x	Fisher Scientific	14190144	PBS
pLenti.CAG.H2B-Dendra2.W	Addgene	51005	Dendra2 lentivirus
Puralube	Henry Schein Animal Health	008897	Eye Lubricant
Rodent intubation stand	Braintree Scientific	RIS 100
Small animal lung inflation bulb	Harvard Apparatus	72-9083
SurgiSuite Multi-Functional Surgical Platform for Mice, with Warming	Kent Scientific	SURGI-M02	Heated surgical platform
Test Leads 48" TEST LEAD BANANA - Black	Mouser	565-1440-48-0
Test Leads 48" TEST LEAD BANANA - Red	Mouser	565-1440-48-2
Tracheal catheter	Exelint International	26746	22 G catheter
Wound closing system veterinary kit	Clay Adams	IN015	Veterinary surgical stapling kit