المؤلفان بالشكر اندريا Axtell ، إيتوه ساتوشي ، MD ، Velotta جيف ، MD ، هويت غرانت ، روبرت روبنز C. ، MD ، يو جين ، MD ، تيم دويل ، دكتوراه ، والتصوير ستانفورد الحيوانات الصغيرة الأساسية للحصول على المساعدة التقنية. الكتاب أيضا أن أشكر AM بيكفورد ، وشركة للحصول على الدعم من المعدات البيطرية. وأيد هذا البحث عن طريق المنح البحثية من المعاهد الوطنية للصحة (R01 HL - 75774 ، CA098303 R01 ، R21 HL085743 ، 1K12 HL087746) ، والتبغ كاليفورنيا بحوث أمراض ذات صلة برنامج من جامعة كاليفورنيا (15IT - 0257 و1514RT 0169) ، ومعهد كاليفورنيا للطب التجديدي (RS1 - 00183). معتمد من قبل NH الزمالة من جمعية القلب الاميركية.

1. تحريض نقص التروية Hindlimb الانفرادية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأدوات الجراحية اللازمة لهذه العملية ما يلي : ملقط وأشار غرامة ، وأشار ملقط ، مقص الربيع ، مقص جراحي ، حامل الإبرة ، وضام. مبعاد نجعل منطقتنا باستخدام مشبك لأنه أصغر من الكامشات متاحة تجاريا. تعقيم هذه الأدوات قبل الجراحة عن طريق الأوتوكلاف معقم أو الساخنة حبة. وسيتم أيضا أداة الكي ومعقمة غرامة مسحات القطن وأوضح أن هناك حاجة لهذه الجراحة. فمن المستحسن أن تكون أدوات إعادة تعقيمها في النصائح حسب الحاجة أثناء العملية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما الأدوات جاهزة ، ضع الماوس في غرفة التخدير التي تحتوي على تحريض 1-3 ٪ isoflurane في الأكسجين 100 ٪ في معدل تدفق 1L/min. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ترك الماوس في غرفة تحريض حتى لا يستجيب للمؤثرات الخارجية. ثم إزالة الحيوان من غرفة التعريفي. ينصح بمسح مخدر من مربع قبل فتح الغطاء ، لتقليل التعرض لisoflurane المشغل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم ضع الحيوانات في موقف ضعيف على الطاولة ما قبل التشغيل وتوصيله إلى التدفق المستمر للisoflurane. استخدام ماكينة حلاقة كهربائية ، وإزالة الشعر من hindlimb. تطبيق كريم إزالة الشعر لإزالة الشعر تماما. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الماوس في موقف ضعيف على وسادة ساخنة رايات على طاولة العمليات ، وتوصيله إلى التدفق المستمر للisoflurane. توسيع وتأمين hindlimb مع قطعة من الشريط. مرة واحدة في hindlimb آمن ، مسح الجلد مع ثلاثة betadine الدعك والكحول بالتناوب. للفترة المتبقية من العملية الجراحية ، واستخدام المجهر في تشريح 10X 20X أو التكبير للحصول على موسع للرأي في المنطقة hindlimb. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ملقط ومقص الجراحية الدقيقة ، وجعل شق الجلد ، وحوالي 1 سم طويلة ، من الركبة باتجاه الفخذ الإنسية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) رطب غرامة مسحات القطن وأشار ، بلطف فرشاة بعيدا الأنسجة الدهنية تحت الجلد المحيطة عضلة الفخذ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المقبل ، تطبيق مستعرض للمكواة شق طريق تشريح والنسيج تحت الجلد من الدهون لكشف الشريان الأساسي الفخذ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام مبعاد لفتح الجرح والحصول على عرض أفضل من الأوعية الدموية السفلى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام الملقط وغرامة غرامة مسحة القطن وأشار ، من خلال اختراق الغلاف بلطف على الفخذ الغشائي لفضح حزمة وعائية عصبية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم ، باستخدام مجموعة نظيف ملقط الجميلة ومسحة القطن ، وتشريح وفصل الشريان الفخذي من الوريد الفخذي والعصب في الموقع القريب قرب الفخذ. بعد التشريح ، وتمرير خيط الحرير من الدرز تحت 7-0 نهاية القريبة من شريان الفخذ. انسداد الشريان الفخذي القريبة باستخدام عقدة مزدوجة. وضع ربطة عنق على متن السفينة والداني في الجرح ممكن من أجل ترك طول لادراك التعادل الثاني وقطعة التدخل التي سيتم مقطوع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فصل الشريان الفخذي من الوريد الفخذي في الموقع البعيدة القريبة من الركبة. تمر بنوع من 7-0 الدرز تحت الغاية البعيدة من شريان الفخذ الأقرب إلى الشريان المأبضي. تسد به السفينة عقدة مزدوجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انسداد الشريان الفخذي القاصي مع مجموعة ثانية من عقدة مزدوجة القريبة فقط لأول مجموعة من عقدة. وسوف تستخدم هذه المجموعة الثانية من الغرز لتجتاح الشريان أثناء إجراء المعاملات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وبالمثل ، لأغراض تجتاح ، انسداد الشريان الفخذي القريب مع مجموعة ثانية من عقدة مزدوجة القاصي عادل لأول مجموعة من عقدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المسح الشامل لجزء من شريان الفخذ بين القاصي والداني عقدة مع مسحة القطن الناعم وأشار مقصا الربيع. توخي الحذر بعدم اختراق جدار الوريد الفخذي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة مبعاد وأغلق الجرح باستخدام خيوط Vicryl 5-0. هذه الخيوط لا تحتاج إلى إزالتها في وقت لاحق ، كما أنها تذوب من تلقاء نفسها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بمجرد أن يتم إغلاق الجرح ، ضع الحيوان على قمة منصة ساخنة ملفوفة في قفص الانتعاش ورصد مستمر حتى يستيقظ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد تعافى الحيوان لمدة 1 ساعة ، والمضي قدما في خطوة دوبلر الليزر نضح الدم من أجل تأكيد تحريض نقص التروية. </li></ol> 2. الليزر دوبلر الإرواء الدم <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لبدء نضح دوبلر الليزر خطوة ، ضع الماوس في غرفة التخدير التي تحتوي على تحريض 1-3 ٪ isoflurane في الأكسجين 100 ٪ في معدل تدفق 1L/min. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ترك الماوس في غرفة تحريض حتى لا يستجيب للمؤثرات الخارجية. ثم إزالة الحيوان من غرفة التعريفي. ينصح بمسح مخدر من مربع قبل فتح الغطاء ، لتقليل التعرض لisoflurane المشغل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الحيوانات على الطاولة ما قبل التشغيل متصلة التدفق المستمر للisoflurane. ثم إزالة الشعر من hindlimb باستخدام ماكينة حلاقة كهربائية يليه كريم إزالة الشعر عند الضرورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد إزالة الشعر ،وضع الحيوان على سطح ساخن 37 درجة مئوية لمدة 5 دقائق في إطار استمرار تدفق isoflurane. رصد درجة الحرارة الأساسية لضمان euthermia ، والتغيرات في درجات الحرارة سيؤثر بشكل ملحوظ الارواء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 5 دقائق ، ضع الحيوان في موقف ضعيف على سطح امتصاص الضوء غير عاكسة مثل قماش خضراء اللون ، وصلة إلى التدفق المستمر للisoflurane. تمديد hindlimbs. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المقبل ، بدوره على تصوير دوبلر الليزر وبرنامج اقتناء وتهيئة البرنامج. تحديد حجم ومجال الرؤية والقرار. فمن الأفضل للحفاظ على مجال الرؤية وكثافة بكسل متناسقة بين الحيوانات من أجل جعل تحليل أسهل في المستقبل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح ملف جديد. اضغط على بدء ستبدأ بالحصول على بيانات الصورة. عموما ، فإن تصوير تلقائيا بالكشف عن المسافة من الفأرة ، ولكن إذا طلب منك ، حدد المسافة من الحيوان للتصوير. وسوف تظهر ليزر حدود مجال الرؤية وتبدأ بعد ذلك الحصول على البيانات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الاستحواذ الكامل ، وسوف نبدأ في صورة تظهر مجموعة من الألوان التي تدل على مستوى التروية الدموية في الساقين. يمكن تعيين الألوان إلى طائفة معينة نضح لمقارنة البيانات بين أفضل الحيوانات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عند الحصول على البيانات غير كاملة ، وحفظ الملف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم يعود للحيوان في قفص الانتعاش ورصد مستمر حتى الحيوان مستيقظا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتحليل البيانات ، واستخدام عتبة التكيف في البرنامج التحليل لطرح أي ضجيج في الخلفية. A عتبة 0.2 عادة قيمة معقولة. 2 حدد المناطق المصالح ، أو رويس ، التي تغطي كل منطقة hindlimb. ويمكن استخدام مجموعة متنوعة من معالم لتوحيد ROI بين أطرافه والحيوانات. ثم تحديد التروية يعني وتقلب في عائدات الاستثمار. ويمكن بعد ذلك الفرق نضح ونسبة التروية الدماغية بين الأطراف والأطراف السيطرة تحدد بسهولة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن تكرار هذا الإجراء لمتابعة التغيرات في نضح hindlimb مع مرور الوقت. في نقطة الوقت المطلوب ، يمكن أن يتم التخلص من الحيوانات لتقييم وظيفة الأنسجة وبالمقارنة مع بيانات الصور الارواء. </li></ol> 3. ممثل النتائج : يظهر تشريح الأوعية الدموية hindlimb في الشكل 1 2. ويظهر رسم بياني ممثل hindlimb بعد explantation شريان الفخذ في الشكل 2. لتأكيد تحريض نقص التروية لhindlimb والليزر صورة نضح دوبلر تحليل يدل على انخفاض كبير في تدفق الدم إلى الأطراف الدماغية ، مقارنة أطرافهم السيطرة ، كما هو مبين في الشكل 3. <img src="/files/ftp_upload/old/1035_2009_1_26_9/figure1_1035.png" alt="الشكل 1" width="600" height="406" /> الشكل 1. تشريح الأوعية الدموية hindlimb. النجمية تشير إلى مواقع ربط لاستحثاث الإسكيمية hindlimb. <img src="/files/ftp_upload/old/1035_2009_1_20_7/Niiyama_HLI_Fig2.png" alt="صورة 2" width="600" height="450" /> الشكل 2. رسم تخطيطي يظهر الممثل تشريح hindlimb بعد ربط الشريان الفخذي في المواقع القريبة والبعيدة بعد ازالة شريان الفخذ. <img src="/files/ftp_upload/old/1035_2009_1_20_8/Niiyama_HLI_Fig3.png" alt="الشكل 3" width="600" height="256" /> الشكل 3. الليزر دوبلر الصور تبين تدفق الدم قبل وبعد تحريض نقص التروية لhindlimb اليسار (المشار إليها بواسطة السهم).

<ol>
	<li>Huang, N. F., Niiyama, H., De, A., Cooke, J. P., , . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+and+non-invasive+tracking+of+embryonic+stem+cell-derived+endothelial+cells+for+treatment+of+hindlimb+ischemia.">Transplantation and non-invasive tracking of embryonic stem cell-derived endothelial cells for treatment of hindlimb ischemia.</a> J Vis Exp. , (2008).</li><li>Cook, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The anatomy of the laboratory mouse. , (1976).</li><li>Niiyama, H., Kai, H., Yamamoto, T., Shimada, T., Sasaki, K., Murohara, T., Egashira, K., Imaizumi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+endogenous+monocyte+chemoattractant+protein-1+in+ischemia-induced+neovascularization.">Roles of endogenous monocyte chemoattractant protein-1 in ischemia-induced neovascularization.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 44, 661-666 (2004).</li><li>Dokun, A. O., Keum, S., Hazarika, S., Li, Y., Lamonte, G. M., Wheeler, F., Marchuk, D. A., Annex, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+quantitative+trait+locus+(LSq-1)+on+mouse+chromosome+7+is+linked+to+the+absence+of+tissue+loss+after+surgical+hindlimb+ischemia.">A quantitative trait locus (LSq-1) on mouse chromosome 7 is linked to the absence of tissue loss after surgical hindlimb ischemia.</a> Circulation. 117, 1207-1215 (2008).</li></ol>

هناك بعض المصادر لتقلب للنظر في حين تخطيط وتنفيذ نماذج hindlimb نقص التروية. أولا ، قد يكون مستوى الإسكيمية تختلف وفقا لموقع ربط فيما يتعلق بذلك من الفروع الجانبية. لذلك ، لاتساق النموذج ، ينبغي أن تخضع هذه الحيوانات على نفس المستوى من ربط الشرايين. ويرتبط مصدر آخر للتقلبات في الانتعاش الدماغية إلى سن هذه الحيوانات ، مع صغار الحيوانات (6-8 أسابيع من العمر) وجود معدلات الاسترداد بشكل أسرع وأكثر اكتمالا من أقدم الحيوانات (8-10 شهرا) ، وفقا لتقييم الدورة الدموية (أي الليزر دوبلر التروية) أو وظيفية (أي اختبار مفرغه) التدابير. للدراسات في واحد الذي هو تقييم وكيلا عائية ، فإنه قد يكون من الأفضل استخدام الحيوانات الأكبر سنا ، لأنه قد يكون لاحظ الفرق بين أكبر المجموعات التي لها التدخل العلاجي. على العكس ، للدراسات في واحد الذي هو عامل تقييم المضادة للعائية ، فإنه قد يكون من الأفضل استخدام الحيوانات الأصغر سنا لتعظيم تأثير حجم 3. إذا أجريت بشكل صحيح ، يجب أن يكون هناك الحد الأدنى من مضاعفات مثل النزيف ، العدوى ، أو وفيات. إذا كان النزيف يحدث عن اضطراب عرضية من الوريد الفخذي أو غيرها من السفن ، وضغط معتدل مع قطعة من القطن المعقم يميل يجب تطبيقها قضيب أو الشاش لموقع نزف حتى يتوقف النزيف. ينبغي معاملة الحيوانات التي تظهر عليها علامات العدوى مع وكلاء المضادة للعدوى. قد الحيوانات العارضة الغرغرينا كبيرة تحتاج إلى beeuthanized. هذا التعقيد هو أكثر شيوعا في كبار السن الحيوانات ، وكذلك في بعض السلالات ، مثل الفئران BALB ج 4 بالإضافة إلى ذلك ، قد يكون النموذج الإسكيمية hindlimb تسبب الألم الخفيف إلى المعتدل. لذا ، ينبغي أن تدار مثل المسكنات أو البوبرينورفين كاربروفين حسب الحاجة لعلاج الألم ، وفقا لتوصيات IACUC. في الختام ، لقد أثبتنا طريقة بسيطة وقابلة للتكرار لدراسة PAD في نموذج الفئران من نقص التروية hindlimb. نموذج الإسكيمية hindlimb مع تحليل ليزر التصوير دوبلر هو نظام ممتاز لدراسة أمراض الأوعية الدموية لتقييم المرشحين والعلاجية.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Surgical Tools</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Constix Cotton Swabs</td>
<td>Tool</td>
<td>Contec</td>
<td>SC-4</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Betadine (Povidone-iodine)</td>
<td>Reagent</td>
<td>PDI</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>70% alcohol</td>
<td>Reagent</td>
<td>Kendall</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phosphate Buffered Saline</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>7-0 silk suture</td>
<td>Tool</td>
<td>Genzyme</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>5-0 vicryl suture</td>
<td>Tool</td>
<td>Ethicon</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Electric shaver</td>
<td>Tool</td>
<td>GE</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cautery</td>
<td>Tool</td>
<td>Baxter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Laser Doppler and PeriScan PIM 3 System</td>
<td>Equipment</td>
<td>Perimed</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

murine model of hindlimb ischemia 

في الولايات المتحدة ، والشرايين الطرفية المرض (PAD) يصيب نحو 10 مليون شخص ، وأيضا في جميع أنحاء العالم انتشارا. وتقتصر علاجات طبية لتخفيف الأعراض. التدخلات الجراحية أو اللف مفيدة لبعض الأفراد ، ولكن على المدى الطويل وغالبا ما تكون النتائج مخيبة للآمال. نتيجة لذلك ، هناك حاجة لتطوير علاجات جديدة لعلاج PAD. ونقص التروية hindlimb الفئران إعداد نموذج للPAD ، ومفيد لاختبار علاجات جديدة. بالمقارنة مع نماذج أخرى من نقص تروية الأنسجة مثل ربط الشريان التاجي أو الدماغية ، ربط الشريان الفخذي ينص على أبسط نموذج من الأنسجة الدماغية. المزايا الأخرى لهذا النموذج هي سهولة الوصول إلى شريان الفخذ وانخفاض معدل الوفيات. في هذا الفيديو ، ونحن لشرح منهجية لهذا النموذج من الفئران الإسكيمية hindimb من جانب واحد. وسيتم وصف المواد وإجراءات محددة لإنشاء وتقييم هذا النموذج ، بما في ذلك تقييم التروية أطرافهم بواسطة الليزر دوبلر التصوير. ويمكن أيضا أن تستخدم هذا البروتوكول لزرع وتتبع غير الغازية من الخلايا ، وهو ما يتضح من هوانغ وآخرون 1.

Watch this Scientific Journal Video about Murine Model of Hindlimb Ischemia at JoVE.com

Murine Model of Hindlimb Ischemia

وأظهرت عملية جراحية لتحريض نقص التروية hindlimb من جانب واحد ، مع التأكيد على نقص التروية التصوير بواسطة الليزر دوبلر الارواء.

فأري موديل الإسكيمية Hindlimb

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide.  Medical therapies for ...

Research

JoVE Journal

Biology

Murine Model of Hindlimb Ischemia 

57.1K Views.  Stanford University. وأظهرت عملية جراحية لتحريض نقص التروية hindlimb من جانب واحد ، مع التأكيد على نقص التروية التصوير بواسطة الليزر دوبلر الارواء.

Video: Murine Model of Hindlimb Ischemia

The Hypoxic Ischemic Encephalopathy Model of Perinatal Ischemia

Hypoxic-Ischemic Encephalopathy (HIE) is the consequence of systemic asphyxia occurring at birth. Twenty five percent of neonates with HIE develop severe and permanent neuropsychological sequelae, including mental retardation, cerebral palsy, and epilepsy. The outcomes of HIE are devastating and permanent, making it critical to identify and develop therapeutic strategies to reduce brain injury in newborns with HIE. To that end, the neonatal rat model for hypoxic-ischemic brain injury has been developed to model this human condition. The HIE model was first validated by Vannucci et al 1 and has since been extensively used to identify mechanisms of brain injury resulting from perinatal hypoxia-ischemia 2 and to test potential therapeutic interventions 3,4. The HIE model is a two step process and involves the ligation of the left common carotid artery followed by exposure to a hypoxic environment. Cerebral blood flow (CBF) in the hemisphere ipsilateral to the ligated carotid artery does not decrease because of the collateral blood flow via the circle of Willis; however with lower oxygen tension, the CBF in the ipsilateral hemisphere decreases significantly and results in unilateral ischemic injury. The use of 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to stain and identify ischemic brain tissue was originally developed for adult models of rodent cerebral ischemia 5, and is used to evaluate the extent of cerebral infarctin at early time points up to 72 hours after the ischemic event 6. In this video, we demonstrate the hypoxic-ischemic injury model in postnatal rat brain and the evaluation of the infarct size using TTC staining.

The postnatal rat model for hypoxic-ischemic brain injury is a well-established model of human neonatal hypoxic ischemic encephalopathy (HIE). In this article, we describe the model of HIE in post-natal rat pups.

ونقص الأوكسجين النموذجي الاعتلال نقص التروية الدماغية قبل الولادة

Hypoxic-Ischemic Encephalopathy (HIE) is the consequence of systemic asphyxia occurring at birth. Twenty five percent of neonates with HIE develop severe ...

Embryonic Stem Cell-Derived Endothelial Cells for Treatment of Hindlimb Ischemia

Peripheral arterial disease (PAD) results from narrowing of the peripheral arteries that supply oxygenated blood and nutrients to the legs and feet, This pathology causes symptoms such as intermittent claudication (pain with walking), painful ischemic ulcerations, or even limb-threatening gangrene. It is generally believed that the vascular endothelium, a monolayer of endothelial cells that invests the luminal surface of all blood and lymphatic vessels, plays a dominant role in vascular homeostasis and vascular regeneration. As a result, stem cell-based regeneration of the endothelium may be a promising approach for treating PAD.In this video, we demonstrate the transplantation of embryonic stem cell (ESC)-derived endothelial cells for treatment of unilateral hindimb ischemia as a model of PAD, followed by non-invasive tracking of cell homing and survival by bioluminescence imaging. The specific materials and procedures for cell delivery and imaging will be described. This protocol follows another publication in describing the induction of hindlimb ischemia by Niiyama et al.1

The surgical procedure for delivery of embryonic stem cell-derived endothelial cells to the ischemic hindlimb is demonstrated, with non-invasive tracking by bioluminescence imaging.

الخلايا الجذعية الجنينية المستمدة من الخلايا البطانية لعلاج نقص التروية Hindlimb

Peripheral arterial disease (PAD) results from narrowing of the peripheral arteries that supply oxygenated blood and nutrients to the legs and feet, This ...

LAD-Ligation: A Murine Model of Myocardial Infarction

Research models of infarction and myocardial ischemia are essential to investigate the acute and chronic pathobiological and pathophysiological processes in myocardial ischemia and to develop and optimize future treatment.
Two different methods of creating myocardial ischemia are performed in laboratory rodents. The first method is to create cryo infarction, a fast but inaccurate technique, where a cryo-pen is applied on the surface of the heart (1-3). Using this method the scientist can not guarantee that the cryo-scar leads to ischemia, also a vast myocardial injury is created that shows pathophysiological side effects that are not related to myocardial infarction. The second method is the permanent ligation of the left anterior descending artery (LAD). Here the LAD is ligated with one single stitch, forming an ischemia that can be seen almost immediately. By closing the LAD, no further blood flow is permitted in that area, while the surrounding myocardial tissue is nearly not affected. This surgical procedure imitates the pathobiological and pathophysiological aspects occurring in infarction-related myocardial ischemia.
The method introduced in this video demonstrates the surgical procedure of a mouse infarction model by ligating the LAD. This model is convenient for pathobiological and pathophysiological as well as immunobiological studies on cardiac infarction. The shown technique provides high accuracy and correlates well with histological sections.

This video demonstrates how to use a fast and reliable model to study pathobiological and pathophysiological processes of myocardial ischemia.

LAD - الربط : نموذج الفئران من احتشاء عضلة القلب

Research models of infarction and myocardial ischemia are essential to investigate the acute and chronic pathobiological and pathophysiological processes ...

An Alternant Method to the Traditional NASA Hindlimb Unloading Model in Mice

The Morey-Holton hindlimb unloading (HU) method is a widely accepted National Aeronautics and Space Administration (NASA) ground-based model for studying disuse-atrophy in rodents 4-6. Our study evaluated an alternant method to the gold-standard Morey-Holton HU tail-traction technique in mice. Fifty-four female mice (4-8 mo.) were HU for 14 days (n=34) or 28 days (n=20). Recovery from HU was assessed after 3 days of normal cage ambulation following HU (n=22). Aged matched mice (n=76) served as weight-bearing controls.
Prior to HU a tail ring was formed with a 2-0 sterile surgical steel wire that was passed through the 5th, 6th, or 7th inter-vertebral disc space and shaped into a ring from which the mice were suspended. Vertebral location for the tail-ring was selected to appropriately balance animal body weight without interfering with defecation.
We determined the success of this novel HU technique by assessing body weight before and after HU, degree of soleus atrophy, and adrenal mass following HU. Body weight of the mice prior to HU (24.3 &plusmn; 2.9g) did not significantly decline immediately after 14d of HU (22.7 &plusmn; 1.9g), 28d of HU (21.3 + 2.1g) or after 3 days recovery (24.0 &plusmn; 1.8g). Soleus muscle mass significantly declined (-39.1%, and -46.6%) following HU for 14 days and 28 days respectively (p&lt;0.001). Following 3 days of recovery soleus mass significantly increased to 74% of control values. Adrenal weights of HU mice were not different compared to control mice.
The success of our novel HU method is evidenced by the maintenance of animal body weight, comparable adrenal gland weights, and soleus atrophy following HU, corresponding to expected literature values 2, 7, 8. The primary advantages of this HU method include: 1) ease of tail examination during suspension; 2) decreased likelihood of cyanotic, inflamed, and/or necrotic tails frequently observed with tail-taping and HU; 3) no possibility of mice chewing the traction tape and coming out of the suspension apparatus; and 4) rapid recovery and normal cage activity immediately after HU.

We developed an alternant hindlimb unloading model in mice. The primary advantage of our hindlimb unloading tail-ring method over the conventional Morey-Holton tail-traction technique is a simple straightforward procedure that minimizes stress upon the animal.

أسلوب Alternant لنموذج ناسا التقليدية تفريغ Hindlimb في الفئران

The Morey-Holton hindlimb unloading (HU) method is a widely accepted National Aeronautics and Space Administration (NASA) ground-based model for studying ...

An Anoxia-starvation Model for Ischemia/Reperfusion in C. elegans

Protocols for anoxia/starvation in the genetic model organism C. elegans simulate ischemia/reperfusion. Worms are separated from bacterial food and placed under anoxia for 20 hr&#160;(simulated ischemia), and subsequently moved to a normal atmosphere with food (simulated reperfusion). This experimental paradigm results in increased death and neuronal damage, and techniques are presented to assess organism viability, alterations to the morphology of touch neuron processes, as well as touch sensitivity, which represents the behavioral output of neuronal function. Finally, a method for constructing hypoxic incubators using common kitchen storage containers is described. The addition of a mass flow control unit allows for alterations to be made to the gas mixture in the custom incubators, and a circulating water bath allows for both temperature control and makes it easy to identify leaks. This method provides a low cost alternative to commercially available units.

An Anoxia-starvation Model for Ischemia/Reperfusion in C. elegans

A protocol is described that uses anoxia/starvation in C. elegans to model ischemia/reperfusion. Functional outcomes include increased mortality, visible abnormalities in GFP-labeled neuronal processes, and impaired behavioral responses that require neuronal function.

نموذج نقص الأكسجين المجاعة لنقص التروية / ضخه في<em&gt; C. ايليجانس</em

Protocols for anoxia/starvation in the genetic model organism C. elegans simulate ischemia/reperfusion. Worms are separated from bacterial food and placed ...

The Murine Choline-Deficient, Ethionine-Supplemented (CDE) Diet Model of Chronic Liver Injury

Chronic liver diseases, such as viral hepatitis, alcoholic liver disease, or non-alcoholic fatty liver disease, are characterized by continual inflammation, progressive destruction and regeneration of the hepatic parenchyma, liver progenitor cell proliferation, and fibrosis. The end-stage of every chronic liver disease is cirrhosis, a major risk factor for the development of hepatocellular carcinoma. To study processes regulating disease initiation, establishment, and progression, several animal models are used in laboratories. Here we describe a six-week time course of the choline-deficient and ethionine-supplemented (CDE) mouse model, which involves feeding six-week old male C57BL/6J mice with choline-deficient chow and 0.15% DL-ethionine-supplemented drinking water. Monitoring of animal health and a typical body weight loss curve are explained. The protocol demonstrates the gross examination of a CDE-treated liver and blood collection by cardiac puncture for subsequent serum analyses. Next, the liver perfusion technique and collection of different hepatic lobes for standard evaluations are shown, including liver histology assessments by hematoxylin and eosin or Sirius Red stainings, immunofluorescent detection of hepatic cell populations as well as transcriptome profiling of the liver microenvironment. This mouse model is suitable for studying inflammatory, fibrogenic, and liver progenitor cell dynamics induced through chronic liver disease and can be used to test potential therapeutic agents that may modulate these processes.

The Murine Choline-Deficient, Ethionine-Supplemented CDE Diet Model of Chronic Liver Injury

Here we describe a common method to induce chronic liver injury in mice by feeding of a choline-deficient and ethionine-supplemented (CDE) diet. We demonstrate health monitoring, liver perfusion, isolation, and preservation. A time course of six weeks can inform about liver injury, pathohistology, fibrosis, inflammatory, and liver progenitor cell responses.

مورين الكولين تعاني من نقص، تستكمل اثيونيني (الرفيق) النظام الغذائي النموذجي لإصابة الكبد المزمنة

Chronic liver diseases, such as viral hepatitis, alcoholic liver disease, or non-alcoholic fatty liver disease, are characterized by continual ...

A Murine Model of Vertical Sleeve Gastrectomy

Bariatric surgery, such as vertical sleeve gastrectomy (VSG), is a surgery of the gastrointestinal tract that is performed for the purpose of weight loss. Bariatric surgery is currently the most effective long-term treatment for obesity. In addition to weight loss, bariatric surgery produces additional health benefits such as remission of type 2 diabetes, remission of hypertension, and decreased risk of developing certain types of cancer. The mechanisms beyond weight loss for these benefits remain incompletely defined. Therefore, animal models of bariatric surgery are being developed and validated to identify the mechanisms leading to these benefits, with the goal of improving understanding of gastrointestinal physiology and identifying new therapeutic targets. VSG has become the most commonly performed bariatric procedure in the clinic in the United States because it is highly effective at producing weight loss and metabolic improvement, and is simpler to perform than other bariatric procedures. Therefore, we have developed and validated a murine model of VSG. This murine VSG model recapitulates many of the effects of VSG seen in humans, including improved glucose and blood pressure regulation. The method is based on isolation of the stomach, ligation of gastric vessels, and removal of 70% of the stomach by transecting along the greater curvature of the stomach. We have successfully applied this surgical protocol to various genetically modified mouse lines to define the mechanistic contributors to the benefits of VSG. Furthermore, this murine VSG model has been combined with other surgical techniques, to achieve deeper mechanistic insight. Therefore, this is a simple and versatile model for studying gastrointestinal physiology and the health benefits of bariatric surgery.

The following describes the performance of vertical sleeve gastrectomy in mice. This is a type of weight-loss surgery that involves removal of approximately 70% of the stomach.

نموذج موريني Gastrectomy الأكمام العمودي

Bariatric surgery, such as vertical sleeve gastrectomy (VSG), is a surgery of the gastrointestinal tract that is performed for the purpose of weight loss. ...

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer progression. How the chromosomal location and function of a centromere (i.e., centromere identity) are determined and participate in accurate chromosome segregation is a fundamental question. CENP-A is proposed to be the non-DNA indicator (epigenetic mark) of centromere identity, and CENP-A ubiquitylation is required for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability.
Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-CENP-A K124R mutant suggesting that ubiquitylation at a different lysine is induced because of the EYFP tagging in the CENP-A K124R mutant protein. Lysine 306 (K306) ubiquitylation in EYFP-CENP-A K124R was successfully identified, which corresponds to lysine 56 (K56) in CENP-A through mass spectrometry analysis. A caveat is discussed in the use of GFP/EYFP or the tagging of high molecular weight protein as a tool to analyze the function of a protein. Current technical limit is also discussed for the detection of ubiquitylated bands, identification of site-specific ubiquitylation(s), and visualization of ubiquitylation in living cells or a specific single cell during the whole cell cycle.
The method of mass spectrometry analysis presented here can be applied to human CENP-A protein with different tags and other centromere-kinetochore proteins. These combinatory methods consisting of several assays/analyses could be recommended for researchers who are interested in identifying functional roles of ubiquitylation.

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

CENP-A ubiquitylation is an important requirement for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability. Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A) protein.

تحليل قياس الطيف الكتلي لتحديد Ubiquitylation من EYFP الموسومة CENP-A (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

A Murine Model of a Burn Wound Reconstructed with an Allogeneic Skin Graft

Trivial superficial wounds heal without complications by primary intention. Deep wounds, such as full thickness burns, heal by secondary intention and require surgical debridement and skin grafting. Successful integration of the donor graft into a recipient wound bed depends on timely recruitment of immune cells, robust angiogenic response and new extracellular matrix formation. The development of novel therapeutic agents, which target some key processes involved in wound healing, are hindered by the lack of reliable preclinical models with optimized objective assessment of wound closure. Here, we describe an inexpensive and reproducible model of experimental full thickness burn wound reconstructed with an allogeneic skin graft. The wound is induced on the dorsum surface of anaesthetized inbred wild type mice from the BALB/C and SKH1-Hrhr backgrounds. The burn is produced using a brass template measuring 10 mm in diameter, which is preheated to 80 &#176;C and delivered at a constant pressure for 20 s. Burn eschar is excised 24 hours after the injury and replaced with a full thickness graft harvested from the tail of a genetically similar donor mouse. No specialized equipment is required for the procedure and surgical techniques are straightforward to follow. The method may be effortlessly implemented and reproduced in most research settings. Certain limitations are associated with the model. Due to technical difficulties, the harvest of thinner split thickness skin grafts is not possible. The surgical method we describe here allows for the reconstruction of burn wounds using full thickness skin grafts. It may be used to carry out preclinical therapeutic testing.

The aim of this study was to develop a murine model of burn wound healing. A thermal burn was induced on the dorsal skin of mice using a preheated brass template. Burned tissue was debrided and overlaid with a skin graft harvested from the tail of a genetically similar donor mouse.

نموذج مورين من جرح حرق أعيد بناؤها مع الكسب غير المشروع الجلد الجيني

Trivial superficial wounds heal without complications by primary intention. Deep wounds, such as full thickness burns, heal by secondary intention and ...

A Modified Surgical Model of Hind Limb Ischemia in ApoE-/- Mice using a Miniature Incision

The purpose of this study is to introduce and evaluate a modified surgical approach to induce acute ischemia in mice that can be implemented in most animal laboratories.&#160;Contrary to the conventional approach for double ligation of the femoral artery (DLFA), a smaller incision on the right inguinal region was made to expose the proximal femoral artery (FA) to perform DLFA. Then, using a 7-0 suture, the incision was dragged to the knee region to expose the distal FA. Magnetic resonance imaging (MRI) on bilateral hind limbs was used to detect FA occlusion after the surgery. At 0, 1, 3, 5, and 7 days after the surgery, functional recovery of the hind limbs was visually assessed and graded using the Tarlov scale. Histologic evaluation was performed after euthanizing the animals 7 days after DLFA. The procedures were successfully performed on the right leg in ten ApoE-/- mice, and no mice died during subsequent observation. The incision sizes in all 10 mice were less than 5 mm (4.2 &#177; 0.63 mm). MRI results showed that FA blood flow in the ischemic side was clearly blocked. The Tarlov scale results demonstrated that hind limb function significantly decreased after the procedure and slowly recovered over the following 7 days. Histologic evaluation showed a significant inflammatory response on the ischemic side and reduced microvascular density in the ischemic hind limb. In conclusion, this study introduces a modified technique using a miniature incision to perform hind limb ischemia (HLI) using DLFA.

A Modified Surgical Model of Hind Limb Ischemia in ApoE-/- Mice using a Miniature Incision

This article demonstrates an efficient surgical approach to establish acute ischemia in mice with a small incision. This approach can be applied by most research groups without any laboratory upgrades.

نموذج جراحي معدل لإقفارية الأطراف الخلفية في ApoE-/- الفئران باستخدام شق مصغر

The purpose of this study is to introduce and evaluate a modified surgical approach to induce acute ischemia in mice that can be implemented in most ...