저자 안드레아 액스텔, 사토시 이토, MD, 제프 Velotta, MD, 그랜트 호이트, 로버트 C. 로빈스, MD, 진 유, MD, 팀 도일, 박사, 그리고 기술 지원을위한 스탠포드 작은 동물 이미징 핵심 주셔서 감사합니다. 저자는 또한, 수의 장비의 지원을 오전 비크포드 (주) 감사합니다. 이 연구는 국립 보건원에서 연구 기금 (R01 HL - 75774, R01 CA098303, R21 HL085743, 1K12 HL087746), 캘리포니아 대학 (15IT - 0257 및 1514RT - 0169)의 캘리포니아 담배 관련 질병 연구 프로그램에 의해 지원되었다 및 재생 의료 (RS1 - 00183)의 캘리포니아 연구소. NH는 미국 심장 협회에서 친교에 의해 지원됩니다.

1. 일방적 Hindlimb의 국소 빈혈의 유도 <ol><li> 이 작업에 필요한 수술 도구는 다음과 같습니다 좋은 지적 포셉, 지적 포셉, 스프링 가위, 외과 가위, 바늘 홀더, 그리고 견인기 있습니다. 그것이 상용 견인기보다 작은이기 때문에 우리는 클립을 사용하여 우리 자신의 견인기합니다. 압력솥이나 핫 구슬 살균기 사전 수술 이러한 도구를 소독. 소작 도구 및 살균 좋은 지적 목화 면봉도이 수술을 위해 필요한 것입니다. 이것은 도구로 절차를 수행하는 동안 필요한 끝을 다시 소독하는 것이 좋습니다. </li><li> 도구가 준비되면 1L/min의 흐름 속도 100 % 산소 isoflurane 1~3%을 포함하고있는 마취 유도 챔버에 마우스를 놓으십시오. </li><li> 그것이 외부 자극에 응답하지 않는 때까지 유도 챔버에 마우스를 둡니다. 그런 다음 유도 챔버에서 동물을 제거합니다. 그것은 isoflurane에 운영자 노출을 감소하기 위해 뚜껑을 여는하기 전에 상자에서 마취를 플러시하는 것이 좋습니다. </li><li> 그런 다음 미리 운영 테이블에 위로 향한 위치에 동물을 배치하고 isoflurane의 지속적인 흐름에 연결합니다. 전기 면도기를 사용 hindlimb에서 머리를 제거합니다. 철저하게 머리를 제거하는 제모 크림을 적용합니다. </li><li> 운영 테이블에 draped 온수 패드 위에 부정사 위치에 마우스를 놓고, isoflurane의 지속적인 흐름에 연결합니다. 확장 테이프의 조각으로 hindlimb을 확보. hindlimb가 안전되면 세 번갈아 betadine 및 알코올 스크럽으로 피부를 닦아냅니다. 수술의 나머지 부분은 hindlimb 지역의 확대를 얻을 10X 20X 확대 또는 해부 현미경을 사용합니다. </li><li> 좋은 포셉, 외과 가위를 사용하여 중간 허벅지 향해 무릎에서 약 1cm 길이, 피부의 절개합니다. </li><li> 인산염을 사용하면 생리를 버퍼 (PBS) 허벅지 근육을 둘러싸고있는 피하 지방 조직을 부드럽게 브러시 거리, 괜찮아요 지적 목화 면봉을 moistened. </li><li> 다음 절개 및 기​​본 대퇴 동맥을 나타내기 위해 피하 지방 조직을 통해 해부하다에 transversely 소작을 적용합니다. </li><li> 상처를 열고 아래쪽 끝단 vasculature의 더 나은 전망을 얻기 위해 견인기을 사용합니다. </li><li> neurovascular 번들을 폭로하는 막의 대퇴 칼집을 통해 부드럽게 잘 포셉과 좋은 지적 면봉, 피어스를 사용하여. </li><li> 그런 다음, 고급 포셉 및 면봉의 클린 세트를 사용하여 절개하다 그리고 사타구니 근처에있는 근위 위치에서 대퇴 정맥과 신경의 대퇴 동맥을 분리. 절개 후, 대퇴 동맥의 근위 끝 아래 7-0 실크 봉합사의 가닥을 전달합니다. 더블 노트를 사용하여 근위 대퇴 동맥을 막다. 두 번째 넥타이 가로 것입니다 개입 세그먼트 길이를 떠나하기 위해 가능한 한 상처에서 근위로 선박에 넥타이를 놓으십시오. </li><li> 무릎에 가까운 말초 위치에서 대퇴 정맥에서 대퇴 동맥을 분리합니다. 오금 동맥 근위 대퇴 동맥의 말초 끝에 아래 7-0 봉합사의 가닥을 전달합니다. 더블 노트를 사용하여 혈관을 막다. </li><li> 노트의 첫 번째 집합에서 불과 근위 더블 노트의 두 번째 세트와 함께 말초 대퇴 동맥을 막다. 봉합의이 두 번째는 거래 절차를 수행하는 동안 동맥을 재밌 위해 사용됩니다. </li><li> 마찬가지로, 재밌 목적 노트의 첫 번째 집합에 단지 말초 더블 노트의 두 번째 세트와 함께 근위 대퇴 동맥을 막다. </li><li> 좋은 지적 면봉과 봄 가위로 말초 및 근위 매듭 사이의 대퇴 동맥의 세그먼트를 가로로 쪼개다. 피어스 대퇴 정맥 벽하지 않는주의하십시오. </li><li> 견인기를 제거하고 5-0 Vicryl 봉합을 사용하여 절개를 닫습니다. 그들이 스스로 해산 이러한 봉합은 나중에 제거할 필요가 없습니다. </li><li> 절개가 폐쇄되면, 복구 새장에 draped 온수 패드의 상단에있는 동물을 장소와 정신까지 지속적으로 모니터합니다. </li><li> 동물은 1 시간 동안 회복 후 국소 빈혈의 유도를 확인하기 위해 레이저 도플러 혈액 관류 단계로 진행하십시오. </li></ol> 2. 레이저 도플러 혈액 관류 <ol><li> 레이저 도플러 재관류 단계를 시작하려면 1L/min의 흐름 속도 100 % 산소 isoflurane 1-3%을 포함하고있는 마취 유도 챔버에 마우스를 놓으십시오. </li><li> 그것이 외부 자극에 응답하지 않는 때까지 유도 챔버에 마우스를 둡니다. 그런 다음 유도 챔버에서 동물을 제거합니다. 그것은 isoflurane에 운영자 노출을 감소하기 위해 뚜껑을 여는하기 전에 상자에서 마취를 플러시하는 것이 좋습니다. </li><li> isoflurane의 지속적인 흐름에 연결된 사전 운영 테이블에있는 동물을 놓으십시오. 그런 다음 필요에 따라 제모 크림 다음 전기 면도기를 사용하여 hindlimb에서 머리를 제거합니다. </li><li> 머리를 제거 후,isoflurane의 지속적인 흐름에 따라 5 분 37 ° C 온수 표면에 동물을 놓으십시오. 온도 변화가 현저하게 재관류에 영향을하므로, euthermia을 보장하기 위해 핵심 온도를 모니터링합니다. </li><li> 5 분 후에, isoflurane의 지속적인 흐름에 연결된 같은 녹색 색 헝겊으로 비 반사 빛을 흡수 표면에있는 위로 향한 위치에 동물을 놓으십시오. hindlimbs를 확장합니다. </li><li> 다음, 레이저 도플러 영상기 및 수집 소프트웨어를 켜고 소프트웨어를 초기화합니다. 전망 및 해결 분야의 크기를 지정합니다. 그것은 미래의 분석을 쉽게하기 위해 동물 사이에보기 및 픽셀 밀도 분야가 일관성이 유지하는 것이 좋습니다. </li><li> 새 파일을 엽니다. 이미지 데이터를 획득 시작 시작 버튼을 누르십시오. 일반적으로, 영상기 자동으로 마우스의 거리를 감지하지만, 메시지가 표시되면, 영상기에 동물의 거리를 지정합니다. 레이저 볼 분야의 경계를 표시하고 데이터를 수집하기 시작합니다. </li><li> 인수가 완료되면 이미지가 다리에 혈액 관류의 수준을 나타내는 아르 색상의 범위를 보여주기 시작합니다. 색상은 더 나은 동물 사이의 데이터를 비교하기 위해 특정 재관류 범위로 설정할 수 있습니다. </li><li> 데이터 수집이 완료되면 파일을 저장합니다. </li><li> 그런 다음 복구 케이지에 동물을 반환 정신 때까지 지속적으로 동물을 모니터링합니다. </li><li> 데이터를 분석하려면, 어떤 배경 잡음을 빼야하는 분석 소프트웨어에서 임계값 조정을 사용합니다. 0.2의 임계값은 일반적으로 합리적인 가치입니다. 각 hindlimb 영역을 커버 2의 관심 지역, 또는 로아를 선택합니다. 랜드마크의 다양한 손발과 동물 사이의 투자 수익 (ROI)을 표준화하는 데 사용할 수 있습니다. 그런 다음 투자 수익 (ROI)의 의미 재관류와 다양성을 결정합니다. 허혈성 사지 및 제어 사지 사이의 재관류 차이 및 재관류 비율은 다음을 쉽게 확인할 수 있습니다. </li><li> 이 절차는 시간이 지남에 따라 hindlimb 재관류의 변화에​​ 따라 반복 수 있습니다. 원하는 시점에서, 동물은 조직 기능과 재관류 이미지 데이터에 대한 비교 평가 euthanized 수 있습니다. </li></ol> 3. 대표 결과 : hindlimb vasculature의 해부 그림 1 2에 표시됩니다. 대퇴 동맥 explantation 후 hindlimb의 대표 다이어그램 그림 2에 표시됩니다. 그림 3과 같이 hindlimb에 국소 빈혈의 유도를 확인하려면, 레이저 도플러 재관류 이미지 분석, 제어 사지 비교, 허혈성 사지에 혈액의 흐름에서 극적인 감소를 보여줍니다. <img src="/files/ftp_upload/old/1035_2009_1_26_9/figure1_1035.png" alt="그림 1" width="600" height="406" /> 그림 1. hindlimb의 vasculature의 해부학. 별표 hindlimb 국소 빈혈의 유도에 대한 결합의 위치를​​ 나타냅니다. <img src="/files/ftp_upload/old/1035_2009_1_20_7/Niiyama_HLI_Fig2.png" alt="이미지 2" width="600" height="450" /> 그림 2. 대퇴 동맥의 제거 후 근위 및 말초 사이트에있는 대퇴 동맥의 결합 후 hindlimb의 해부를 보여주는 대표 다이어그램. <img src="/files/ftp_upload/old/1035_2009_1_20_8/Niiyama_HLI_Fig3.png" alt="그림 3" width="600" height="256" /> 왼쪽 hindlimb (화살표로 표시)에 국소 빈혈의 유도 전후 혈액 흐름을 보여주는 그림 3. 레이저 도플러 이미지.

<ol>
	<li>Huang, N. F., Niiyama, H., De, A., Cooke, J. P., , . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+and+non-invasive+tracking+of+embryonic+stem+cell-derived+endothelial+cells+for+treatment+of+hindlimb+ischemia.">Transplantation and non-invasive tracking of embryonic stem cell-derived endothelial cells for treatment of hindlimb ischemia.</a> J Vis Exp. , (2008).</li><li>Cook, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The anatomy of the laboratory mouse. , (1976).</li><li>Niiyama, H., Kai, H., Yamamoto, T., Shimada, T., Sasaki, K., Murohara, T., Egashira, K., Imaizumi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+endogenous+monocyte+chemoattractant+protein-1+in+ischemia-induced+neovascularization.">Roles of endogenous monocyte chemoattractant protein-1 in ischemia-induced neovascularization.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 44, 661-666 (2004).</li><li>Dokun, A. O., Keum, S., Hazarika, S., Li, Y., Lamonte, G. M., Wheeler, F., Marchuk, D. A., Annex, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+quantitative+trait+locus+(LSq-1)+on+mouse+chromosome+7+is+linked+to+the+absence+of+tissue+loss+after+surgical+hindlimb+ischemia.">A quantitative trait locus (LSq-1) on mouse chromosome 7 is linked to the absence of tissue loss after surgical hindlimb ischemia.</a> Circulation. 117, 1207-1215 (2008).</li></ol>

계획 및 hindlimb 국소 빈혈 모델을 수행하는 동안 고려해야 할 다양성의 일부 소스가 있습니다. 첫째, 국소 빈혈의 수준은 사이드 지점의와 관련하여 결합의 위치에 따라 다를 수 있습니다. 따라서 모델의 일관성을 위해, 동물 동맥 내고 같은 수준을 받아야한다. 허혈성 회복 다양성의 또 다른 원본이 세 동물 (80~10개월 세)보다 빠르고보다 완벽한 복구 속도를 가지고 젊은 동물 (6~8주 세)와 함께, 동물의 연령과 관련이로 hemodynamic (예에 의해 평가 레이저 도플러 재관류) 또는 기능 (예 : 러닝 머신 테스트) 측정합니다. 그룹 사이에 큰 차이가 치료 개입과 함께 관찰 수 있기 때문에 하나 angiogenic 에이전트를 평가되는 연구는, 기존의 동물을 사용하는 것이 바람직있을 수 있습니다. 반대로 하나가 안티 angiogenic 요인을 평가하고있는 연구, 그것은 효과가 크기 3 극대화하기 위해 어린 동물을 사용하는 것이 바람직있을 수 있습니다. 올바르게 수행할 경우, 출혈, 감염, 또는 사망 등과 같은 최소한의 합병증이있을 것입니다. 출혈은 대퇴 정맥 또는 다른 선박, 멸균 면봉과 적당한 압력의 사고로 장애가 발생하면 출혈이 멈출 때까지 작은 주걱이나 거즈가 출혈의 사이트에 적용해야 날붙이. 감염의 징후를 보여주는 동물은 안티 - infective 에이전트로 치료해야합니다. 중요한 진물을 전시 동물 beeuthanized해야 할 수도 있습니다. 이 합병증은 나이가 동물보다 일반적인 있으며, 이러한 BALB C 마우스 4와 같은 몇 가지 변종, 인치 또한, hindlimb의 국소 빈혈 모델은 중간 고통에 온화 발생할 수 있습니다. 통증 치료를 위해 필요한만큼 따라서 같은 buprenorphine 또는 carprofen과 같은 진통제는 IACUC의 권고에 따라 관리되어야합니다. 결론적으로, 우리는 hindlimb 국소 빈혈의 murine 모델 PAD 공부를위한 간단하고 재현성 방법을 증명하고있다. 레이저 도플러 영상 분석 hindlimb의 국소 빈혈 모델은 혈관 pathologies를 공부 및 치료 후보를 평가하기위한 훌륭한 시스템입니다.

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Surgical Tools</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Constix Cotton Swabs</td>
<td>Tool</td>
<td>Contec</td>
<td>SC-4</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Betadine (Povidone-iodine)</td>
<td>Reagent</td>
<td>PDI</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>70% alcohol</td>
<td>Reagent</td>
<td>Kendall</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phosphate Buffered Saline</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>7-0 silk suture</td>
<td>Tool</td>
<td>Genzyme</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>5-0 vicryl suture</td>
<td>Tool</td>
<td>Ethicon</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Electric shaver</td>
<td>Tool</td>
<td>GE</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cautery</td>
<td>Tool</td>
<td>Baxter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Laser Doppler and PeriScan PIM 3 System</td>
<td>Equipment</td>
<td>Perimed</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

murine model of hindlimb ischemia 

미국에서는, 말초 동맥 질환 (PAD)는 만 10 개인에 영향을, 또한 세계적으로 유행이다. 증상 완화 의료 치료가 제한됩니다. 수술이나 endovascular 개입 어떤 개인 유용하지만 장기적인 결과는 종종 실망입니다. 그 결과, PAD를 치료하는 새로운 치료법을 개발하기위한 필요가있다. murine hindlimb의 국소 빈혈 준비는 PAD의 모델, 새로운 치료법을 테스트하는 데 유용합니다. 이러한 관상이나 대뇌 동맥 내고 같은 조직 국소 빈혈의 다른 모델에 비해, 대퇴 동맥 내고는 허혈성 조직의 간단한 모델을 제공합니다. 이 모델의 다른 장점은 대퇴 동맥과 낮은 사망률에 대한 접근의 용이성입니다. 이 비디오에서는, 우리는 일방적 hindimb의 국소 빈혈의 murine 모델에 대한 방법론을 보여줍니다. 모델을 생성하고 평가하기위한 구체적인 자료와 절차는 레이저 도플러 영상으로 사지 재관류의 평가를 포함하여 설명한다. 이 프로토콜은 또한 황 외 의해 증명 세포. 1의 이식과 비침습 추적 이용하실 수 있습니다.

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Murine Model of Hindlimb Ischemia

일방적 hindlimb의 국소 빈혈의 유도에 대한 수술은 레이저 도플러 재관류 이미징에 의해 국소 빈혈의 확인과 증명합니다.

Hindlimb 국소 빈혈의 Murine 모델

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide.  Medical therapies for ...

Research

JoVE Journal

Biology

Murine Model of Hindlimb Ischemia 

57.2K 조회수.  Stanford University. 일방적 hindlimb의 국소 빈혈의 유도에 대한 수술은 레이저 도플러 재관류 이미징에 의해 국소 빈혈의 확인과 증명합니다.

비디오: Murine Model of Hindlimb Ischemia

The Hypoxic Ischemic Encephalopathy Model of Perinatal Ischemia

Hypoxic-Ischemic Encephalopathy (HIE) is the consequence of systemic asphyxia occurring at birth. Twenty five percent of neonates with HIE develop severe and permanent neuropsychological sequelae, including mental retardation, cerebral palsy, and epilepsy. The outcomes of HIE are devastating and permanent, making it critical to identify and develop therapeutic strategies to reduce brain injury in newborns with HIE. To that end, the neonatal rat model for hypoxic-ischemic brain injury has been developed to model this human condition. The HIE model was first validated by Vannucci et al 1 and has since been extensively used to identify mechanisms of brain injury resulting from perinatal hypoxia-ischemia 2 and to test potential therapeutic interventions 3,4. The HIE model is a two step process and involves the ligation of the left common carotid artery followed by exposure to a hypoxic environment. Cerebral blood flow (CBF) in the hemisphere ipsilateral to the ligated carotid artery does not decrease because of the collateral blood flow via the circle of Willis; however with lower oxygen tension, the CBF in the ipsilateral hemisphere decreases significantly and results in unilateral ischemic injury. The use of 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to stain and identify ischemic brain tissue was originally developed for adult models of rodent cerebral ischemia 5, and is used to evaluate the extent of cerebral infarctin at early time points up to 72 hours after the ischemic event 6. In this video, we demonstrate the hypoxic-ischemic injury model in postnatal rat brain and the evaluation of the infarct size using TTC staining.

The postnatal rat model for hypoxic-ischemic brain injury is a well-established model of human neonatal hypoxic ischemic encephalopathy (HIE). In this article, we describe the model of HIE in post-natal rat pups.

Perinatal 국소 빈혈의 Hypoxic 허혈성 뇌증 모델

Hypoxic-Ischemic Encephalopathy (HIE) is the consequence of systemic asphyxia occurring at birth. Twenty five percent of neonates with HIE develop severe ...

연구

생물학

Embryonic Stem Cell-Derived Endothelial Cells for Treatment of Hindlimb Ischemia

Peripheral arterial disease (PAD) results from narrowing of the peripheral arteries that supply oxygenated blood and nutrients to the legs and feet, This pathology causes symptoms such as intermittent claudication (pain with walking), painful ischemic ulcerations, or even limb-threatening gangrene. It is generally believed that the vascular endothelium, a monolayer of endothelial cells that invests the luminal surface of all blood and lymphatic vessels, plays a dominant role in vascular homeostasis and vascular regeneration. As a result, stem cell-based regeneration of the endothelium may be a promising approach for treating PAD.In this video, we demonstrate the transplantation of embryonic stem cell (ESC)-derived endothelial cells for treatment of unilateral hindimb ischemia as a model of PAD, followed by non-invasive tracking of cell homing and survival by bioluminescence imaging. The specific materials and procedures for cell delivery and imaging will be described. This protocol follows another publication in describing the induction of hindlimb ischemia by Niiyama et al.1

The surgical procedure for delivery of embryonic stem cell-derived endothelial cells to the ischemic hindlimb is demonstrated, with non-invasive tracking by bioluminescence imaging.

Hindlimb 국소 빈혈의 치료를위한 배아 줄기 세포 유래 내피 세포

Peripheral arterial disease (PAD) results from narrowing of the peripheral arteries that supply oxygenated blood and nutrients to the legs and feet, This ...

LAD-Ligation: A Murine Model of Myocardial Infarction

Research models of infarction and myocardial ischemia are essential to investigate the acute and chronic pathobiological and pathophysiological processes in myocardial ischemia and to develop and optimize future treatment.
Two different methods of creating myocardial ischemia are performed in laboratory rodents. The first method is to create cryo infarction, a fast but inaccurate technique, where a cryo-pen is applied on the surface of the heart (1-3). Using this method the scientist can not guarantee that the cryo-scar leads to ischemia, also a vast myocardial injury is created that shows pathophysiological side effects that are not related to myocardial infarction. The second method is the permanent ligation of the left anterior descending artery (LAD). Here the LAD is ligated with one single stitch, forming an ischemia that can be seen almost immediately. By closing the LAD, no further blood flow is permitted in that area, while the surrounding myocardial tissue is nearly not affected. This surgical procedure imitates the pathobiological and pathophysiological aspects occurring in infarction-related myocardial ischemia.
The method introduced in this video demonstrates the surgical procedure of a mouse infarction model by ligating the LAD. This model is convenient for pathobiological and pathophysiological as well as immunobiological studies on cardiac infarction. The shown technique provides high accuracy and correlates well with histological sections.

This video demonstrates how to use a fast and reliable model to study pathobiological and pathophysiological processes of myocardial ischemia.

내사 - 결합 : 심근 경색의 Murine 모델

Research models of infarction and myocardial ischemia are essential to investigate the acute and chronic pathobiological and pathophysiological processes ...

An Alternant Method to the Traditional NASA Hindlimb Unloading Model in Mice

The Morey-Holton hindlimb unloading (HU) method is a widely accepted National Aeronautics and Space Administration (NASA) ground-based model for studying disuse-atrophy in rodents 4-6. Our study evaluated an alternant method to the gold-standard Morey-Holton HU tail-traction technique in mice. Fifty-four female mice (4-8 mo.) were HU for 14 days (n=34) or 28 days (n=20). Recovery from HU was assessed after 3 days of normal cage ambulation following HU (n=22). Aged matched mice (n=76) served as weight-bearing controls.
Prior to HU a tail ring was formed with a 2-0 sterile surgical steel wire that was passed through the 5th, 6th, or 7th inter-vertebral disc space and shaped into a ring from which the mice were suspended. Vertebral location for the tail-ring was selected to appropriately balance animal body weight without interfering with defecation.
We determined the success of this novel HU technique by assessing body weight before and after HU, degree of soleus atrophy, and adrenal mass following HU. Body weight of the mice prior to HU (24.3 &plusmn; 2.9g) did not significantly decline immediately after 14d of HU (22.7 &plusmn; 1.9g), 28d of HU (21.3 + 2.1g) or after 3 days recovery (24.0 &plusmn; 1.8g). Soleus muscle mass significantly declined (-39.1%, and -46.6%) following HU for 14 days and 28 days respectively (p&lt;0.001). Following 3 days of recovery soleus mass significantly increased to 74% of control values. Adrenal weights of HU mice were not different compared to control mice.
The success of our novel HU method is evidenced by the maintenance of animal body weight, comparable adrenal gland weights, and soleus atrophy following HU, corresponding to expected literature values 2, 7, 8. The primary advantages of this HU method include: 1) ease of tail examination during suspension; 2) decreased likelihood of cyanotic, inflamed, and/or necrotic tails frequently observed with tail-taping and HU; 3) no possibility of mice chewing the traction tape and coming out of the suspension apparatus; and 4) rapid recovery and normal cage activity immediately after HU.

We developed an alternant hindlimb unloading model in mice. The primary advantage of our hindlimb unloading tail-ring method over the conventional Morey-Holton tail-traction technique is a simple straightforward procedure that minimizes stress upon the animal.

마우스의 전통 NASA Hindlimb 하역 모델 Alternant 방법

The Morey-Holton hindlimb unloading (HU) method is a widely accepted National Aeronautics and Space Administration (NASA) ground-based model for studying ...

An Anoxia-starvation Model for Ischemia/Reperfusion in C. elegans

Protocols for anoxia/starvation in the genetic model organism C. elegans simulate ischemia/reperfusion. Worms are separated from bacterial food and placed under anoxia for 20 hr&#160;(simulated ischemia), and subsequently moved to a normal atmosphere with food (simulated reperfusion). This experimental paradigm results in increased death and neuronal damage, and techniques are presented to assess organism viability, alterations to the morphology of touch neuron processes, as well as touch sensitivity, which represents the behavioral output of neuronal function. Finally, a method for constructing hypoxic incubators using common kitchen storage containers is described. The addition of a mass flow control unit allows for alterations to be made to the gas mixture in the custom incubators, and a circulating water bath allows for both temperature control and makes it easy to identify leaks. This method provides a low cost alternative to commercially available units.

An Anoxia-starvation Model for Ischemia/Reperfusion in C. elegans

A protocol is described that uses anoxia/starvation in C. elegans to model ischemia/reperfusion. Functional outcomes include increased mortality, visible abnormalities in GFP-labeled neuronal processes, and impaired behavioral responses that require neuronal function.

허혈 / 재관류에 대한 산소 결핍 - 기아 모델<em&gt; C. 엘레</em

Protocols for anoxia/starvation in the genetic model organism C. elegans simulate ischemia/reperfusion. Worms are separated from bacterial food and placed ...

The Murine Choline-Deficient, Ethionine-Supplemented (CDE) Diet Model of Chronic Liver Injury

Chronic liver diseases, such as viral hepatitis, alcoholic liver disease, or non-alcoholic fatty liver disease, are characterized by continual inflammation, progressive destruction and regeneration of the hepatic parenchyma, liver progenitor cell proliferation, and fibrosis. The end-stage of every chronic liver disease is cirrhosis, a major risk factor for the development of hepatocellular carcinoma. To study processes regulating disease initiation, establishment, and progression, several animal models are used in laboratories. Here we describe a six-week time course of the choline-deficient and ethionine-supplemented (CDE) mouse model, which involves feeding six-week old male C57BL/6J mice with choline-deficient chow and 0.15% DL-ethionine-supplemented drinking water. Monitoring of animal health and a typical body weight loss curve are explained. The protocol demonstrates the gross examination of a CDE-treated liver and blood collection by cardiac puncture for subsequent serum analyses. Next, the liver perfusion technique and collection of different hepatic lobes for standard evaluations are shown, including liver histology assessments by hematoxylin and eosin or Sirius Red stainings, immunofluorescent detection of hepatic cell populations as well as transcriptome profiling of the liver microenvironment. This mouse model is suitable for studying inflammatory, fibrogenic, and liver progenitor cell dynamics induced through chronic liver disease and can be used to test potential therapeutic agents that may modulate these processes.

The Murine Choline-Deficient, Ethionine-Supplemented CDE Diet Model of Chronic Liver Injury

Here we describe a common method to induce chronic liver injury in mice by feeding of a choline-deficient and ethionine-supplemented (CDE) diet. We demonstrate health monitoring, liver perfusion, isolation, and preservation. A time course of six weeks can inform about liver injury, pathohistology, fibrosis, inflammatory, and liver progenitor cell responses.

Murine 콜린 불충분 한, Ethionine 보충 (CDE) 다이어트 만성 간 상해의 모델

Chronic liver diseases, such as viral hepatitis, alcoholic liver disease, or non-alcoholic fatty liver disease, are characterized by continual ...

A Murine Model of Vertical Sleeve Gastrectomy

Bariatric surgery, such as vertical sleeve gastrectomy (VSG), is a surgery of the gastrointestinal tract that is performed for the purpose of weight loss. Bariatric surgery is currently the most effective long-term treatment for obesity. In addition to weight loss, bariatric surgery produces additional health benefits such as remission of type 2 diabetes, remission of hypertension, and decreased risk of developing certain types of cancer. The mechanisms beyond weight loss for these benefits remain incompletely defined. Therefore, animal models of bariatric surgery are being developed and validated to identify the mechanisms leading to these benefits, with the goal of improving understanding of gastrointestinal physiology and identifying new therapeutic targets. VSG has become the most commonly performed bariatric procedure in the clinic in the United States because it is highly effective at producing weight loss and metabolic improvement, and is simpler to perform than other bariatric procedures. Therefore, we have developed and validated a murine model of VSG. This murine VSG model recapitulates many of the effects of VSG seen in humans, including improved glucose and blood pressure regulation. The method is based on isolation of the stomach, ligation of gastric vessels, and removal of 70% of the stomach by transecting along the greater curvature of the stomach. We have successfully applied this surgical protocol to various genetically modified mouse lines to define the mechanistic contributors to the benefits of VSG. Furthermore, this murine VSG model has been combined with other surgical techniques, to achieve deeper mechanistic insight. Therefore, this is a simple and versatile model for studying gastrointestinal physiology and the health benefits of bariatric surgery.

The following describes the performance of vertical sleeve gastrectomy in mice. This is a type of weight-loss surgery that involves removal of approximately 70% of the stomach.

수직 소매 위절제술의 Murine 모델

Bariatric surgery, such as vertical sleeve gastrectomy (VSG), is a surgery of the gastrointestinal tract that is performed for the purpose of weight loss. ...

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer progression. How the chromosomal location and function of a centromere (i.e., centromere identity) are determined and participate in accurate chromosome segregation is a fundamental question. CENP-A is proposed to be the non-DNA indicator (epigenetic mark) of centromere identity, and CENP-A ubiquitylation is required for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability.
Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-CENP-A K124R mutant suggesting that ubiquitylation at a different lysine is induced because of the EYFP tagging in the CENP-A K124R mutant protein. Lysine 306 (K306) ubiquitylation in EYFP-CENP-A K124R was successfully identified, which corresponds to lysine 56 (K56) in CENP-A through mass spectrometry analysis. A caveat is discussed in the use of GFP/EYFP or the tagging of high molecular weight protein as a tool to analyze the function of a protein. Current technical limit is also discussed for the detection of ubiquitylated bands, identification of site-specific ubiquitylation(s), and visualization of ubiquitylation in living cells or a specific single cell during the whole cell cycle.
The method of mass spectrometry analysis presented here can be applied to human CENP-A protein with different tags and other centromere-kinetochore proteins. These combinatory methods consisting of several assays/analyses could be recommended for researchers who are interested in identifying functional roles of ubiquitylation.

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

CENP-A ubiquitylation is an important requirement for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability. Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A) protein.

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

A Murine Model of a Burn Wound Reconstructed with an Allogeneic Skin Graft

Trivial superficial wounds heal without complications by primary intention. Deep wounds, such as full thickness burns, heal by secondary intention and require surgical debridement and skin grafting. Successful integration of the donor graft into a recipient wound bed depends on timely recruitment of immune cells, robust angiogenic response and new extracellular matrix formation. The development of novel therapeutic agents, which target some key processes involved in wound healing, are hindered by the lack of reliable preclinical models with optimized objective assessment of wound closure. Here, we describe an inexpensive and reproducible model of experimental full thickness burn wound reconstructed with an allogeneic skin graft. The wound is induced on the dorsum surface of anaesthetized inbred wild type mice from the BALB/C and SKH1-Hrhr backgrounds. The burn is produced using a brass template measuring 10 mm in diameter, which is preheated to 80 &#176;C and delivered at a constant pressure for 20 s. Burn eschar is excised 24 hours after the injury and replaced with a full thickness graft harvested from the tail of a genetically similar donor mouse. No specialized equipment is required for the procedure and surgical techniques are straightforward to follow. The method may be effortlessly implemented and reproduced in most research settings. Certain limitations are associated with the model. Due to technical difficulties, the harvest of thinner split thickness skin grafts is not possible. The surgical method we describe here allows for the reconstruction of burn wounds using full thickness skin grafts. It may be used to carry out preclinical therapeutic testing.

The aim of this study was to develop a murine model of burn wound healing. A thermal burn was induced on the dorsal skin of mice using a preheated brass template. Burned tissue was debrided and overlaid with a skin graft harvested from the tail of a genetically similar donor mouse.

Trivial superficial wounds heal without complications by primary intention. Deep wounds, such as full thickness burns, heal by secondary intention and ...

A Modified Surgical Model of Hind Limb Ischemia in ApoE-/- Mice using a Miniature Incision

The purpose of this study is to introduce and evaluate a modified surgical approach to induce acute ischemia in mice that can be implemented in most animal laboratories.&#160;Contrary to the conventional approach for double ligation of the femoral artery (DLFA), a smaller incision on the right inguinal region was made to expose the proximal femoral artery (FA) to perform DLFA. Then, using a 7-0 suture, the incision was dragged to the knee region to expose the distal FA. Magnetic resonance imaging (MRI) on bilateral hind limbs was used to detect FA occlusion after the surgery. At 0, 1, 3, 5, and 7 days after the surgery, functional recovery of the hind limbs was visually assessed and graded using the Tarlov scale. Histologic evaluation was performed after euthanizing the animals 7 days after DLFA. The procedures were successfully performed on the right leg in ten ApoE-/- mice, and no mice died during subsequent observation. The incision sizes in all 10 mice were less than 5 mm (4.2 &#177; 0.63 mm). MRI results showed that FA blood flow in the ischemic side was clearly blocked. The Tarlov scale results demonstrated that hind limb function significantly decreased after the procedure and slowly recovered over the following 7 days. Histologic evaluation showed a significant inflammatory response on the ischemic side and reduced microvascular density in the ischemic hind limb. In conclusion, this study introduces a modified technique using a miniature incision to perform hind limb ischemia (HLI) using DLFA.

A Modified Surgical Model of Hind Limb Ischemia in ApoE-/- Mice using a Miniature Incision

This article demonstrates an efficient surgical approach to establish acute ischemia in mice with a small incision. This approach can be applied by most research groups without any laboratory upgrades.

ApoE에서 뒷다리 허혈의 변형 된 수술 모델-/- 소형 절개를 사용하여 마우스

The purpose of this study is to introduce and evaluate a modified surgical approach to induce acute ischemia in mice that can be implemented in most ...