Yazarlar Andrea Axtell, Satoshi Itoh, MD, Jeff Velotta, MD, Hibe Hoyt, Robert C. Robbins, MD, Jin Yu, MD, Tim Doyle, Doktora ve teknik yardım için Stanford Küçük Hayvan Imaging Core teşekkür ederim. Yazarlar ayrıca veteriner ekipman desteği için teşekkür ederiz. AM Bickford, Inc. Bu araştırma, Ulusal Sağlık Enstitüleri araştırma hibeler (R01 HL-75.774, R01 CA098303, R21 HL085743 1K12 HL087746), California University of California (15IT-0257 ve 1514RT-0169) Tütün İlgili Hastalık Araştırma Programı tarafından desteklenen ve Rejeneratif Tıp California Institute (RS1-00.183). NH bir burs Amerikan Kalp Derneği tarafından desteklenmektedir.

1. Tek taraflı Hindlimb İskemi indüksiyonu <ol><li> Bu işlem için gerekli cerrahi aletler şunlardır: ince sivri forseps, sivri forseps, yaylı makas, cerrahi makas, iğne tutucu ve retraktörü. Piyasada bulunan retraktörlere daha küçüktür, çünkü bir ataç kullanarak kendi retraktörü olun. Bu araçların bir otoklav veya sıcak bir boncuk sterilizatör cerrahi öncesi sterilize edin. Koter aracı ve steril ince sivri pamuklu de bu ameliyat için gerekli olacaktır. Bu araçlar, işlem sırasında gerekli ipuçlarını yeniden sterilize edilmesi tavsiye edilir. </li><li> Araçları hazır olduğunuzda, anestezi indüksiyon odasına 1L/min bir akış hızında% 100 oksijen izofluran% 1-3 içeren fare yerleştirin. </li><li> Dış uyaranlara tepkisiz kadar indüksiyon odasında fare bırakın. Ardından indüksiyon odasından hayvan çıkarın. Izofluran için operatör maruziyeti azaltmak için, kapağı açmadan önce anestezi kutusundan temizlemek için tavsiye edilir. </li><li> Sonra öncesi işletim masaya yatar pozisyonda hayvan ve izofluran bir sürekli akış bağlayın. Bir elektrikli tıraş makinesi, saç hindlimb çıkarın. Iyice saç kaldırmak için saç dökücü krem ​​uygulayın. </li><li> Fare dökümlü ısıtılmış yüzey üzerinde ameliyat masasına supin pozisyonda yerleştirin ve izofluran bir sürekli akış bağlayın. Genişletir ve bir parça bant ile hindlimb güvenli. Hindlimb güvenli sonra, üç alternatif betadin ve alkol scrubs ile cilt silin. Cerrahi işlemin geri kalanı için, 10X veya 20X büyütme hindlimb bölgenin büyütülmüş bir görünüm elde etmek için bir diseksiyon mikroskobu kullanın. </li><li> İnce forseps ve cerrahi makas kullanarak, diz medial uyluk doğru yaklaşık 1 cm uzunluğunda, deride bir kesi yapmak. </li><li> Fosfat kullanarak tamponlu salin (PBS) uyluk kas çevreleyen cilt altı yağ dokusu uzak fırça hafif, ince sivri pamuklu nemlendirilmiş. </li><li> Sonra, enine koter insizyon ve derialtı yağ dokusu aracılığıyla incelemek için altta yatan femoral arterden ortaya çıkarmak için de geçerlidir. </li><li> Yara açmak ve bir retraktörü alt ekstremite vaskülatürü daha iyi bir görünüm elde etmek için kullanın. </li><li> Nörovasküler demet maruz membranöz femoral kılıf aracılığıyla nazik, ince forseps ve sivri uçlu ince bir pamuklu çubukla delmeyin kullanma. </li><li> Sonra, ince forseps ve pamuklu temiz bir kümesini kullanarak, incelemek ve kasık yakın proksimal yerde femoral ven ve sinir femoral arterden ayrı. Diseksiyonu sonra, femoral arter proksimal ucunun altında 7-0 ipek sütür bir iplikçik geçmektedir. Çift knot kullanarak proksimal femoral arterden tıkamaktadır. Ikinci kravat ve transeksiyon olacak bir müdahale segmentinde uzunluğu bırakmak için mümkün olduğunca yara proksimal olarak gemide kravat yerleştirin. </li><li> Femoral arter, distal yerde diz yakın femoral ven ayırın. Popliteal arter proksimal femoral arter distal ucu altında 7-0 dikiş teli geçirin. Çift knot kullanarak geminin tıkamaktadır. </li><li> Knot ilk seti sadece proksimal çift knot ikinci bir set ile distal femoral arterden tıkamaktadır. Bu ikinci dikişlerle işlem prosedürü sırasında arter sürükleyici için kullanılacaktır. </li><li> Benzer şekilde, sürükleyici amaçlar için, knot ilk seti sadece distal çift deniz mili ikinci bir set ile proksimal femoral arterden tıkamaktadır. </li><li> Ince uçlu bir pamuklu çubukla ve bir çift yaylı makas ile distal ve proksimal knot arasında femoral arter segment transect. Femoral ven duvarı delmek için dikkatli kullanın. </li><li> Retraktörü çıkarın ve 5-0 vicryl sütürler kullanarak kesi yakın. Bu dikişler kendi erimesi gibi, daha sonraki bir zamanda kaldırılması gerekmez. </li><li> Kesi kapatıldıktan sonra, kurtarma kafes dökümlü ısıtmalı bir ped üstünde hayvan ve uyanık kadar sürekli izlemek. </li><li> 1 saat süreyle hayvan kurtarıldı sonra, iskemi indüksiyon onaylamak için lazer Doppler kan perfüzyon adım ile devam edin. </li></ol> 2. Lazer Doppler Kan Perfüzyon <ol><li> Lazer Doppler perfüzyon adım başlamak için fare 1L/min bir akış hızında% 100 oksijen izofluran% 1-3 içeren anestezi indüksiyon odasına koyun. </li><li> Dış uyaranlara tepkisiz kadar indüksiyon odasında fare bırakın. Ardından indüksiyon odasından hayvan çıkarın. Izofluran için operatör maruziyeti azaltmak için, kapağı açmadan önce anestezi kutusundan temizlemek için tavsiye edilir. </li><li> Izofluran sürekli akışına bağlı öncesi ameliyat masasında hayvan yerleştirin. Sonra gerekli saç dökücü krem ​​takip elektrikli tıraş makinesi kullanarak hindlimb saç kaldırmak. </li><li> Saç çıkardıktan sonra,izofluran sürekli akış altında 5 dakika süreyle 37 ° C ısıtılmış yüzey üzerindeki hayvan koyun. Euthermia sağlamak için sıcaklık değişiklikleri belirgin perfüzyon etkileyecek gibi, çekirdek sıcaklığının izleyin. </li><li> 5 dakika sonra, yeşil renkli bir bez gibi bir sürekli akış izofluran bağlı olmayan bir yansıtıcı yüzey, ışık emici yatar pozisyonda hayvan koyun. Arka ayaklarında uzatın. </li><li> Sonra, lazer Doppler görüntüleyici ve kazanım yazılım açmak ve yazılım başlatılamadı. Görünümü ve çözünürlük alanın boyutunu belirtin. Bu gelecek analizi kolaylaştırmak için hayvanlar arasında tutarlı bir görünüm ve piksel yoğunluğu alanında tutmak en iyisidir. </li><li> Yeni bir dosya açın. Görüntü verilerini elde başlamak için tuşuna basın. Genellikle, fare mesafe görüntüleyici otomatik olarak algılar, ancak istenirse, görüntüleyici hayvan uzaklığı belirtmek. Lazer görüş alanı sınırları ve daha sonra veri elde başlayacaktır. </li><li> Satın alma tamamlandıktan sonra, görüntü, bacaklarda kan perfüzyonunun düzeyinin göstergesi renkleri bir dizi göstermeye başlayacaktır. Renkler daha iyi hayvanlar arasındaki verileri karşılaştırmak için belirli bir perfüzyon aralığı ayarlanabilir. </li><li> Veri toplama işlemi tamamlandığında, dosyayı kaydedin. </li><li> Sonra hayvan kurtarma kafes ve hayvan uyanık kadar sürekli izlemek. </li><li> Verileri analiz etmek, herhangi bir arka plan gürültü çıkarmak için analiz yazılımı eşik ayarı kullanın. Bir eşik 0.2 genellikle makul bir değerdir. 2 ve her hindlimb alanı kapsayacak ilgi bölgelerde, ya da ROI&#39;ler, seçin. Çeşitli yerlerinden, bacaklarda ve hayvanlar arasındaki yatırım getirisi standartlaştırmak için kullanılabilir. Sonra yatırım getirisi ortalama perfüzyon ve değişkenlik belirler. Iskemik ekstremite ve kontrol bacak arasında perfüzyon farkı ve perfüzyon oranı daha sonra kolayca tespit edilebilir. </li><li> Bu prosedür, zaman içinde hindlimb perfüzyon değişiklikleri takip tekrar edilebilir. Istenilen bir zaman noktasında, hayvan doku fonksiyon ve perfüzyon görüntü verilerini karşılaştırma değerlendirilmesi için ötenazi olabilir. </li></ol> 3. Temsilcisi Sonuçlar: Şekil 1 2 hindlimb damarsal anatomi gösterilmiştir. Femoral arterden eksplantasyonu sonra hindlimb bir temsilci diyagramı Şekil 2&#39;de gösterilmiştir. Hindlimb iskemi indüksiyon onaylamak için Şekil 3&#39;te gösterildiği gibi, lazer Doppler perfüzyon görüntü analizi, kontrol uzuv karşılaştırıldığında, iskemik ekstremite kan akışını dramatik bir azalma gösterir. <img src="/files/ftp_upload/old/1035_2009_1_26_9/figure1_1035.png" alt="Şekil 1" width="600" height="406" /> Şekil 1 hindlimb damarsal anatomisi. Asteriskler hindlimb iskemi indüksiyonu için ligasyonu yerleri göstermektedir. <img src="/files/ftp_upload/old/1035_2009_1_20_7/Niiyama_HLI_Fig2.png" alt="Resim 2" width="600" height="450" /> Şekil 2, femoral arter çıkarıldıktan sonra proksimal ve distal sitelerde femoral arter ligasyonu sonra hindlimb anatomisini gösteren Temsilcisi bir diyagram. <img src="/files/ftp_upload/old/1035_2009_1_20_8/Niiyama_HLI_Fig3.png" alt="Şekil 3" width="600" height="256" /> Şekil 3. sol hindlimb (ok ile gösterilen) iskemi indüksiyon öncesi ve sonrası kan akışını gösteren Laser Doppler görüntüleri.

<ol>
	<li>Huang, N. F., Niiyama, H., De, A., Cooke, J. P., , . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+and+non-invasive+tracking+of+embryonic+stem+cell-derived+endothelial+cells+for+treatment+of+hindlimb+ischemia.">Transplantation and non-invasive tracking of embryonic stem cell-derived endothelial cells for treatment of hindlimb ischemia.</a> J Vis Exp. , (2008).</li><li>Cook, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The anatomy of the laboratory mouse. , (1976).</li><li>Niiyama, H., Kai, H., Yamamoto, T., Shimada, T., Sasaki, K., Murohara, T., Egashira, K., Imaizumi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+endogenous+monocyte+chemoattractant+protein-1+in+ischemia-induced+neovascularization.">Roles of endogenous monocyte chemoattractant protein-1 in ischemia-induced neovascularization.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 44, 661-666 (2004).</li><li>Dokun, A. O., Keum, S., Hazarika, S., Li, Y., Lamonte, G. M., Wheeler, F., Marchuk, D. A., Annex, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+quantitative+trait+locus+(LSq-1)+on+mouse+chromosome+7+is+linked+to+the+absence+of+tissue+loss+after+surgical+hindlimb+ischemia.">A quantitative trait locus (LSq-1) on mouse chromosome 7 is linked to the absence of tissue loss after surgical hindlimb ischemia.</a> Circulation. 117, 1207-1215 (2008).</li></ol>

Planlama ve hindlimb iskemi modelleri yaparken göz önünde değişkenlik bazı kaynaklar vardır. İlk olarak, iskemi yan dalları ile ilgili ligasyonu konuma göre değişebilir. Bu nedenle, modelin tutarlılığı için, hayvanların aynı düzeyde arter ligasyonu geçmelidir. Başka bir kaynaktan, yaşlı hayvanların (8-10 aylık) çok daha hızlı ve daha tam iyileşme oranları olan genç hayvanlarda (6-8 hafta), iskemik kurtarma değişkenlik hayvanların yaşı ile ilgili olarak (yani hemodinamik tarafından değerlendirildi lazer Doppler perfüzyon) veya fonksiyonel (yani koşu bandı test) ölçer. Terapötik bir müdahale ile gruplar arasında büyük bir fark görülebilir, çünkü biri anjiyogenik ajan değerlendirmek olduğu çalışmalar için, eski hayvan kullanmak için tercih edilebilir. Tersine, bir bir anti-anjiogenik faktör değerlendirirken olduğu çalışmalar için, en üst düzeye çıkarmak için etki büyüklüğü 3 genç hayvanlar tercih olabilir. Doğru şekilde gerçekleştirilmemesi durumunda, kanama, enfeksiyon, ya da ölüm gibi minimal komplikasyon olması gerekir. Eğer kanama femoral ven veya diğer gemiler, steril bir pamuk ile orta basınç yanlışlıkla kesintiye uğraması ile oluşur uçlu bir aplikatör veya gazlı bez kanama site kanama durana kadar uygulanmalıdır. Enfeksiyon belirtileri gösteren hayvanlar, anti-enfektif ajanlar ile tedavi edilmelidir. Önemli kangren sergileyen Hayvanlar beeuthanized gerekebilir. Bu komplikasyon, yaşlı hayvanlarda daha sık görülür ve BALB c farelerde 4 olarak bazı suşları, . Buna ek olarak, hindlimb iskemi modeli, orta derecede ağrısı hafif neden olabilir. Bu nedenle, buprenorfin veya carprofen gibi analjezikler ağrı tedavisi için gerekli IACUC tavsiyelere göre, idare edilmelidir. Sonuç olarak, biz hindlimb iskemi bir fare modeli PAD eğitimi için basit ve tekrarlanabilir bir yöntem ortaya koymuştur. Hindlimb iskemi modeli lazer Doppler görüntüleme analizi ile vasküler patolojilerin incelenmesi ve tedavi adayları değerlendirmek için mükemmel bir sistem.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Surgical Tools</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Constix Cotton Swabs</td>
<td>Tool</td>
<td>Contec</td>
<td>SC-4</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Betadine (Povidone-iodine)</td>
<td>Reagent</td>
<td>PDI</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>70% alcohol</td>
<td>Reagent</td>
<td>Kendall</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phosphate Buffered Saline</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>7-0 silk suture</td>
<td>Tool</td>
<td>Genzyme</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>5-0 vicryl suture</td>
<td>Tool</td>
<td>Ethicon</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Electric shaver</td>
<td>Tool</td>
<td>GE</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cautery</td>
<td>Tool</td>
<td>Baxter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Laser Doppler and PeriScan PIM 3 System</td>
<td>Equipment</td>
<td>Perimed</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

murine model of hindlimb ischemia 

Amerika Birleşik Devletleri&#39;nde yaklaşık 10 milyon bireylerin, periferik arter hastalığı (PAH) etkiler, hem de dünya çapında yaygın. Tıbbi tedaviler semptomatik rahatlama için sınırlıdır. Cerrahi ya da endovasküler girişimlerin bazı kişiler için faydalı, ancak uzun vadeli sonuçlar genellikle hayal kırıklığı. Sonuç olarak, PAD tedavisinde yeni tedaviler geliştirmek için bir ihtiyaç var. Fare hindlimb iskemi hazırlık PAD bir model ve yeni tedavilerin test etmek için yararlıdır. Doku iskemisi, koroner veya serebral arter ligasyonu gibi diğer modeller ile kıyaslandığında, femoral arter ligasyonu, basit bir model için iskemik doku sağlar. Bu modelin diğer avantajları femoral arter ve düşük ölüm oranı erişim kolaylığı. Bu video, tek taraflı hindimb iskemi fare modeli için metodoloji ortaya koymaktadır. Ekstremite perfüzyon lazer Doppler görüntüleme yöntemi ile değerlendirilmesi de dahil olmak üzere, model oluşturma ve değerlendirilmesi için özel malzemeler ve usulleri açıklanacaktır. Bu protokol aynı zamanda Huang ve ark tarafından gösterilmiştir hücreleri, 1 nakli ve non-invazif izleme için kullanılabilir .

Watch this Scientific Journal Video about Murine Model of Hindlimb Ischemia at JoVE.com

Murine Model of Hindlimb Ischemia

Lazer Doppler perfüzyon sintigrafisi ile iskemi onayı ile tek taraflı hindlimb iskemi indüksiyonu için cerrahi işlem olduğunu göstermiştir.

Murin Model Hindlimb İskemi

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide.  Medical therapies for ...

Research

JoVE Journal

Biology

Murine Model of Hindlimb Ischemia 

57.3K Görüntüleme.  Stanford University. Lazer Doppler perfüzyon sintigrafisi ile iskemi onayı ile tek taraflı hindlimb iskemi indüksiyonu için cerrahi işlem olduğunu göstermiştir.

Video: Murine Model of Hindlimb Ischemia

The Hypoxic Ischemic Encephalopathy Model of Perinatal Ischemia

Hypoxic-Ischemic Encephalopathy (HIE) is the consequence of systemic asphyxia occurring at birth. Twenty five percent of neonates with HIE develop severe and permanent neuropsychological sequelae, including mental retardation, cerebral palsy, and epilepsy. The outcomes of HIE are devastating and permanent, making it critical to identify and develop therapeutic strategies to reduce brain injury in newborns with HIE. To that end, the neonatal rat model for hypoxic-ischemic brain injury has been developed to model this human condition. The HIE model was first validated by Vannucci et al 1 and has since been extensively used to identify mechanisms of brain injury resulting from perinatal hypoxia-ischemia 2 and to test potential therapeutic interventions 3,4. The HIE model is a two step process and involves the ligation of the left common carotid artery followed by exposure to a hypoxic environment. Cerebral blood flow (CBF) in the hemisphere ipsilateral to the ligated carotid artery does not decrease because of the collateral blood flow via the circle of Willis; however with lower oxygen tension, the CBF in the ipsilateral hemisphere decreases significantly and results in unilateral ischemic injury. The use of 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to stain and identify ischemic brain tissue was originally developed for adult models of rodent cerebral ischemia 5, and is used to evaluate the extent of cerebral infarctin at early time points up to 72 hours after the ischemic event 6. In this video, we demonstrate the hypoxic-ischemic injury model in postnatal rat brain and the evaluation of the infarct size using TTC staining.

The postnatal rat model for hypoxic-ischemic brain injury is a well-established model of human neonatal hypoxic ischemic encephalopathy (HIE). In this article, we describe the model of HIE in post-natal rat pups.

Perinatal İskemi Hipoksik İskemik Ensefalopati Modeli

Hypoxic-Ischemic Encephalopathy (HIE) is the consequence of systemic asphyxia occurring at birth. Twenty five percent of neonates with HIE develop severe ...

Biyoloji

Embryonic Stem Cell-Derived Endothelial Cells for Treatment of Hindlimb Ischemia

Peripheral arterial disease (PAD) results from narrowing of the peripheral arteries that supply oxygenated blood and nutrients to the legs and feet, This pathology causes symptoms such as intermittent claudication (pain with walking), painful ischemic ulcerations, or even limb-threatening gangrene. It is generally believed that the vascular endothelium, a monolayer of endothelial cells that invests the luminal surface of all blood and lymphatic vessels, plays a dominant role in vascular homeostasis and vascular regeneration. As a result, stem cell-based regeneration of the endothelium may be a promising approach for treating PAD.In this video, we demonstrate the transplantation of embryonic stem cell (ESC)-derived endothelial cells for treatment of unilateral hindimb ischemia as a model of PAD, followed by non-invasive tracking of cell homing and survival by bioluminescence imaging. The specific materials and procedures for cell delivery and imaging will be described. This protocol follows another publication in describing the induction of hindlimb ischemia by Niiyama et al.1

The surgical procedure for delivery of embryonic stem cell-derived endothelial cells to the ischemic hindlimb is demonstrated, with non-invasive tracking by bioluminescence imaging.

Embriyonik Kök Hücre Tedavi Hindlimb İskemi Türetilmiş Endotel Hücreleri

Peripheral arterial disease (PAD) results from narrowing of the peripheral arteries that supply oxygenated blood and nutrients to the legs and feet, This ...

LAD-Ligation: A Murine Model of Myocardial Infarction

Research models of infarction and myocardial ischemia are essential to investigate the acute and chronic pathobiological and pathophysiological processes in myocardial ischemia and to develop and optimize future treatment.
Two different methods of creating myocardial ischemia are performed in laboratory rodents. The first method is to create cryo infarction, a fast but inaccurate technique, where a cryo-pen is applied on the surface of the heart (1-3). Using this method the scientist can not guarantee that the cryo-scar leads to ischemia, also a vast myocardial injury is created that shows pathophysiological side effects that are not related to myocardial infarction. The second method is the permanent ligation of the left anterior descending artery (LAD). Here the LAD is ligated with one single stitch, forming an ischemia that can be seen almost immediately. By closing the LAD, no further blood flow is permitted in that area, while the surrounding myocardial tissue is nearly not affected. This surgical procedure imitates the pathobiological and pathophysiological aspects occurring in infarction-related myocardial ischemia.
The method introduced in this video demonstrates the surgical procedure of a mouse infarction model by ligating the LAD. This model is convenient for pathobiological and pathophysiological as well as immunobiological studies on cardiac infarction. The shown technique provides high accuracy and correlates well with histological sections.

This video demonstrates how to use a fast and reliable model to study pathobiological and pathophysiological processes of myocardial ischemia.

LAD-ligasyon murin Model: Miyokard Enfarktüsü

Research models of infarction and myocardial ischemia are essential to investigate the acute and chronic pathobiological and pathophysiological processes ...

An Alternant Method to the Traditional NASA Hindlimb Unloading Model in Mice

The Morey-Holton hindlimb unloading (HU) method is a widely accepted National Aeronautics and Space Administration (NASA) ground-based model for studying disuse-atrophy in rodents 4-6. Our study evaluated an alternant method to the gold-standard Morey-Holton HU tail-traction technique in mice. Fifty-four female mice (4-8 mo.) were HU for 14 days (n=34) or 28 days (n=20). Recovery from HU was assessed after 3 days of normal cage ambulation following HU (n=22). Aged matched mice (n=76) served as weight-bearing controls.
Prior to HU a tail ring was formed with a 2-0 sterile surgical steel wire that was passed through the 5th, 6th, or 7th inter-vertebral disc space and shaped into a ring from which the mice were suspended. Vertebral location for the tail-ring was selected to appropriately balance animal body weight without interfering with defecation.
We determined the success of this novel HU technique by assessing body weight before and after HU, degree of soleus atrophy, and adrenal mass following HU. Body weight of the mice prior to HU (24.3 &plusmn; 2.9g) did not significantly decline immediately after 14d of HU (22.7 &plusmn; 1.9g), 28d of HU (21.3 + 2.1g) or after 3 days recovery (24.0 &plusmn; 1.8g). Soleus muscle mass significantly declined (-39.1%, and -46.6%) following HU for 14 days and 28 days respectively (p&lt;0.001). Following 3 days of recovery soleus mass significantly increased to 74% of control values. Adrenal weights of HU mice were not different compared to control mice.
The success of our novel HU method is evidenced by the maintenance of animal body weight, comparable adrenal gland weights, and soleus atrophy following HU, corresponding to expected literature values 2, 7, 8. The primary advantages of this HU method include: 1) ease of tail examination during suspension; 2) decreased likelihood of cyanotic, inflamed, and/or necrotic tails frequently observed with tail-taping and HU; 3) no possibility of mice chewing the traction tape and coming out of the suspension apparatus; and 4) rapid recovery and normal cage activity immediately after HU.

We developed an alternant hindlimb unloading model in mice. The primary advantage of our hindlimb unloading tail-ring method over the conventional Morey-Holton tail-traction technique is a simple straightforward procedure that minimizes stress upon the animal.

Fare Geleneksel NASA Hindlimb Boşaltma Model bir Alternant Yöntemi

The Morey-Holton hindlimb unloading (HU) method is a widely accepted National Aeronautics and Space Administration (NASA) ground-based model for studying ...

An Anoxia-starvation Model for Ischemia/Reperfusion in C. elegans

Protocols for anoxia/starvation in the genetic model organism C. elegans simulate ischemia/reperfusion. Worms are separated from bacterial food and placed under anoxia for 20 hr&#160;(simulated ischemia), and subsequently moved to a normal atmosphere with food (simulated reperfusion). This experimental paradigm results in increased death and neuronal damage, and techniques are presented to assess organism viability, alterations to the morphology of touch neuron processes, as well as touch sensitivity, which represents the behavioral output of neuronal function. Finally, a method for constructing hypoxic incubators using common kitchen storage containers is described. The addition of a mass flow control unit allows for alterations to be made to the gas mixture in the custom incubators, and a circulating water bath allows for both temperature control and makes it easy to identify leaks. This method provides a low cost alternative to commercially available units.

An Anoxia-starvation Model for Ischemia/Reperfusion in C. elegans

A protocol is described that uses anoxia/starvation in C. elegans to model ischemia/reperfusion. Functional outcomes include increased mortality, visible abnormalities in GFP-labeled neuronal processes, and impaired behavioral responses that require neuronal function.

Iskemi / reperfüzyon içinde bir anoksisi-açlık Modeli<em&gt; C. elegans</em

Protocols for anoxia/starvation in the genetic model organism C. elegans simulate ischemia/reperfusion. Worms are separated from bacterial food and placed ...

The Murine Choline-Deficient, Ethionine-Supplemented (CDE) Diet Model of Chronic Liver Injury

Chronic liver diseases, such as viral hepatitis, alcoholic liver disease, or non-alcoholic fatty liver disease, are characterized by continual inflammation, progressive destruction and regeneration of the hepatic parenchyma, liver progenitor cell proliferation, and fibrosis. The end-stage of every chronic liver disease is cirrhosis, a major risk factor for the development of hepatocellular carcinoma. To study processes regulating disease initiation, establishment, and progression, several animal models are used in laboratories. Here we describe a six-week time course of the choline-deficient and ethionine-supplemented (CDE) mouse model, which involves feeding six-week old male C57BL/6J mice with choline-deficient chow and 0.15% DL-ethionine-supplemented drinking water. Monitoring of animal health and a typical body weight loss curve are explained. The protocol demonstrates the gross examination of a CDE-treated liver and blood collection by cardiac puncture for subsequent serum analyses. Next, the liver perfusion technique and collection of different hepatic lobes for standard evaluations are shown, including liver histology assessments by hematoxylin and eosin or Sirius Red stainings, immunofluorescent detection of hepatic cell populations as well as transcriptome profiling of the liver microenvironment. This mouse model is suitable for studying inflammatory, fibrogenic, and liver progenitor cell dynamics induced through chronic liver disease and can be used to test potential therapeutic agents that may modulate these processes.

The Murine Choline-Deficient, Ethionine-Supplemented CDE Diet Model of Chronic Liver Injury

Here we describe a common method to induce chronic liver injury in mice by feeding of a choline-deficient and ethionine-supplemented (CDE) diet. We demonstrate health monitoring, liver perfusion, isolation, and preservation. A time course of six weeks can inform about liver injury, pathohistology, fibrosis, inflammatory, and liver progenitor cell responses.

Fare Kolin eksikliği, Ethionine desteklenmiştir (özgür) diyet kronik karaciğer yaralanma modeli

Chronic liver diseases, such as viral hepatitis, alcoholic liver disease, or non-alcoholic fatty liver disease, are characterized by continual ...

A Murine Model of Vertical Sleeve Gastrectomy

Bariatric surgery, such as vertical sleeve gastrectomy (VSG), is a surgery of the gastrointestinal tract that is performed for the purpose of weight loss. Bariatric surgery is currently the most effective long-term treatment for obesity. In addition to weight loss, bariatric surgery produces additional health benefits such as remission of type 2 diabetes, remission of hypertension, and decreased risk of developing certain types of cancer. The mechanisms beyond weight loss for these benefits remain incompletely defined. Therefore, animal models of bariatric surgery are being developed and validated to identify the mechanisms leading to these benefits, with the goal of improving understanding of gastrointestinal physiology and identifying new therapeutic targets. VSG has become the most commonly performed bariatric procedure in the clinic in the United States because it is highly effective at producing weight loss and metabolic improvement, and is simpler to perform than other bariatric procedures. Therefore, we have developed and validated a murine model of VSG. This murine VSG model recapitulates many of the effects of VSG seen in humans, including improved glucose and blood pressure regulation. The method is based on isolation of the stomach, ligation of gastric vessels, and removal of 70% of the stomach by transecting along the greater curvature of the stomach. We have successfully applied this surgical protocol to various genetically modified mouse lines to define the mechanistic contributors to the benefits of VSG. Furthermore, this murine VSG model has been combined with other surgical techniques, to achieve deeper mechanistic insight. Therefore, this is a simple and versatile model for studying gastrointestinal physiology and the health benefits of bariatric surgery.

The following describes the performance of vertical sleeve gastrectomy in mice. This is a type of weight-loss surgery that involves removal of approximately 70% of the stomach.

Dikey kol gastrektomi fare modeli

Bariatric surgery, such as vertical sleeve gastrectomy (VSG), is a surgery of the gastrointestinal tract that is performed for the purpose of weight loss. ...

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer progression. How the chromosomal location and function of a centromere (i.e., centromere identity) are determined and participate in accurate chromosome segregation is a fundamental question. CENP-A is proposed to be the non-DNA indicator (epigenetic mark) of centromere identity, and CENP-A ubiquitylation is required for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability.
Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-CENP-A K124R mutant suggesting that ubiquitylation at a different lysine is induced because of the EYFP tagging in the CENP-A K124R mutant protein. Lysine 306 (K306) ubiquitylation in EYFP-CENP-A K124R was successfully identified, which corresponds to lysine 56 (K56) in CENP-A through mass spectrometry analysis. A caveat is discussed in the use of GFP/EYFP or the tagging of high molecular weight protein as a tool to analyze the function of a protein. Current technical limit is also discussed for the detection of ubiquitylated bands, identification of site-specific ubiquitylation(s), and visualization of ubiquitylation in living cells or a specific single cell during the whole cell cycle.
The method of mass spectrometry analysis presented here can be applied to human CENP-A protein with different tags and other centromere-kinetochore proteins. These combinatory methods consisting of several assays/analyses could be recommended for researchers who are interested in identifying functional roles of ubiquitylation.

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

CENP-A ubiquitylation is an important requirement for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability. Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A) protein.

EYFP etiketli CENP-A (EYFP-CENP-A) Ubiquitylation tanımlamak için Kütle Spektrometresi Analizi

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

A Murine Model of a Burn Wound Reconstructed with an Allogeneic Skin Graft

Trivial superficial wounds heal without complications by primary intention. Deep wounds, such as full thickness burns, heal by secondary intention and require surgical debridement and skin grafting. Successful integration of the donor graft into a recipient wound bed depends on timely recruitment of immune cells, robust angiogenic response and new extracellular matrix formation. The development of novel therapeutic agents, which target some key processes involved in wound healing, are hindered by the lack of reliable preclinical models with optimized objective assessment of wound closure. Here, we describe an inexpensive and reproducible model of experimental full thickness burn wound reconstructed with an allogeneic skin graft. The wound is induced on the dorsum surface of anaesthetized inbred wild type mice from the BALB/C and SKH1-Hrhr backgrounds. The burn is produced using a brass template measuring 10 mm in diameter, which is preheated to 80 &#176;C and delivered at a constant pressure for 20 s. Burn eschar is excised 24 hours after the injury and replaced with a full thickness graft harvested from the tail of a genetically similar donor mouse. No specialized equipment is required for the procedure and surgical techniques are straightforward to follow. The method may be effortlessly implemented and reproduced in most research settings. Certain limitations are associated with the model. Due to technical difficulties, the harvest of thinner split thickness skin grafts is not possible. The surgical method we describe here allows for the reconstruction of burn wounds using full thickness skin grafts. It may be used to carry out preclinical therapeutic testing.

The aim of this study was to develop a murine model of burn wound healing. A thermal burn was induced on the dorsal skin of mice using a preheated brass template. Burned tissue was debrided and overlaid with a skin graft harvested from the tail of a genetically similar donor mouse.

Allojenik Deri Grefti ile Yeniden Yapılandırılan Yanık Yarasının Murine Modeli

Trivial superficial wounds heal without complications by primary intention. Deep wounds, such as full thickness burns, heal by secondary intention and ...

A Modified Surgical Model of Hind Limb Ischemia in ApoE-/- Mice using a Miniature Incision

The purpose of this study is to introduce and evaluate a modified surgical approach to induce acute ischemia in mice that can be implemented in most animal laboratories.&#160;Contrary to the conventional approach for double ligation of the femoral artery (DLFA), a smaller incision on the right inguinal region was made to expose the proximal femoral artery (FA) to perform DLFA. Then, using a 7-0 suture, the incision was dragged to the knee region to expose the distal FA. Magnetic resonance imaging (MRI) on bilateral hind limbs was used to detect FA occlusion after the surgery. At 0, 1, 3, 5, and 7 days after the surgery, functional recovery of the hind limbs was visually assessed and graded using the Tarlov scale. Histologic evaluation was performed after euthanizing the animals 7 days after DLFA. The procedures were successfully performed on the right leg in ten ApoE-/- mice, and no mice died during subsequent observation. The incision sizes in all 10 mice were less than 5 mm (4.2 &#177; 0.63 mm). MRI results showed that FA blood flow in the ischemic side was clearly blocked. The Tarlov scale results demonstrated that hind limb function significantly decreased after the procedure and slowly recovered over the following 7 days. Histologic evaluation showed a significant inflammatory response on the ischemic side and reduced microvascular density in the ischemic hind limb. In conclusion, this study introduces a modified technique using a miniature incision to perform hind limb ischemia (HLI) using DLFA.

A Modified Surgical Model of Hind Limb Ischemia in ApoE-/- Mice using a Miniature Incision

This article demonstrates an efficient surgical approach to establish acute ischemia in mice with a small incision. This approach can be applied by most research groups without any laboratory upgrades.

ApoE'de Hind Limb iskemisinin Modifiye Cerrahi Modeli-/- Minyatür Kesi Kullanan Fareler

The purpose of this study is to introduce and evaluate a modified surgical approach to induce acute ischemia in mice that can be implemented in most ...