<html> مقدمة يجب أن الكائنات المعرض مجموعة واسعة من السلوكيات على الاستجابة للمحفزات يهدد والتغيرات في البيئة. غير مدروسة الاستجابة اللاإرادي في الفقاريات والكفاح أو استجابة الرحلة التي الجهاز العصبي السمبثاوي تستعد فسيولوجيا البيئة الداخلية (كاربنتر ، 1976 ؛. نيكولز وآخرون ، 2001). ومن خلال التغيرات الفسيولوجية التي يمكن أن تنظم كائن استجابة الضغوط وتغيير السلوك للرد على هجوم وشيك أو التغير البيئي. تبين الأدلة أن يرتبط بإحكام نظام القلب والأوعية الدموية مع الجهاز التنفسي وبالتالي تمكين البيئة الداخلية للرد وتنفيذ استجابة. ومن المعروف جيدا أن السيطرة اللاإرادي من الجهاز التنفسي والقلب والأوعية الدموية يمكن أن تنظم توافر الأكسجين والمواد المغذية إلى الأنسجة المستهدفة المحددة اللازمة للاستجابة السلوكية وشيكة. في الفقاريات ، فإن الاستجابة الفسيولوجية اللاإرادي وحتى تطورت بشكل جيد ، بل يبدو من المرجح أن اللافقاريات المعقدة سوف تمتلك بالمثل نظام الاستجابة المتقدمة (Schapker وآخرون ، 2002 ؛. Zavarzin ، 1941). على الرغم من الفقاريات واللافقاريات ومنهجية مختلفة جدا ؛ اللافقاريات متطورة تتطلب استجابة سريعة القلب والأوعية الدموية والجهاز التنفسي للرد في معركة أو طريقة الطيران. لافقاريات كثيرة ، يمكن كميا استجابة متعاطفة مثل الفسيولوجية. يعود تاريخها إلى عام 1927 ، وقد أجريت العديد من الدراسات في وقت مبكر جدا في اللافقاريات ، وذلك باستخدام المفصليات تحديدا في عام (إلكسندروفيتش ، 1932 ؛ أورلوف ، 1927 ؛ Zavarzin ، 1941). ومن المعروف أن جراد المعرض مجموعة واسعة من السلوكيات السريع وكذلك القدرة على تقييم والاستجابة للمؤثرات البيئية. وقد لاحظت دراسات في وقت مبكر جدا استجابة متعاطفة مثل لاستجابة فورية وسريعة للمواقف الدفاع (بيث ، 1897 ؛ هكسلي ، 1880 ؛ Shuranova وآخرون ، 2006 ؛. يرسما ، 1961). قلب جراد الكبار العصبية تسيطر منذ فوز والإيقاع وفقا للنظام العصبي المركزي (إلكسندروفيتش ، 1932 ؛ Yamagishi وهيروس ، 1997 ؛. Yamagishi وآخرون ، 1997 ؛ يلكنز ، 1999). بشكل روتيني ، وقياس معدل ضربات القلب حيوان (HR) يوفر مقياسا مباشرا لاستثارة والاستعداد للبيئة الداخلية. في جراد البحر ، ويلاحظ زيادة في الموارد البشرية خلال المواقف الدفاعية عندما قدم مع الحافز تهدد المتصورة (Listerman وآخرون ، 2000). وظهر أيضا هذا النوع من استجابة الجهاز العصبي في الكركند الشوكي (يازاوا وKatsuyama ، 2001). هو أيضا نظام التهوية للرقابة neuronally مع مولد نمط التنفس الصناعي المركزية (VPG) المسؤولة عن امتصاص الاكسجين عبر الخياشيم بفعل الضخ من اثنين من لواحق المتخصصة scaphognathites يسمى (مندلسون ، 1971). A scaphognathite واحد يقيم في كل غرفة خيشومي في نهايات الأمامي وتوجه المياه عبر الخياشيم من قبل حركة إيقاعية (باستور ، 1968). وVPG ، مثل مع القلب ، ويمكن عن طريق التضمين عوامل كثيرة. العمل السابق في السلطعون ، يظهر السرطان الماجستير ويمكن تغيير إيقاع القلب والتنفس الصناعي عن طريق التحكم من خلال الخلايا العصبية المركزية الأمر (يلكنز وآخرون ، 1974). بالإضافة إلى ذلك ، يعرف نشاط VPG مع تغير في الاستجابة الداخلية والتفاعلات الاجتماعية مع التغيرات البيئية أو في القشريات (Burmistrov وShuranova ، 1996 ؛ Cuadras ، 1979 ، 1980 ؛ لي وآخرون ، 2000 ؛. Listerman وآخرون. ، 2000 ؛ مكماهون ويلكنز ، 1983 ؛ Schapker وآخرون ، 2002 ؛. Shuranova وآخرون ، 2002 ؛. يلكنز ، 1976). كما رأينا في جراد البحر ، ويمكن للنشاط اجهزة التنفس الصناعي (VR) تختلف تبعا للحالة الداخلية والتغيرات في الواقع الافتراضي يمكن تسجيلها خلال محفزات خارجية غير متوقعة (Shuranova وآخرون ، 1993 ؛. Shuranova وآخرون ، 2002). يرجع ذلك إلى الاعتماد على الموارد البشرية وجدوى وتدابير VR ، فإن الأسئلة في المستقبل أن يطلب لا حصر لها. كما لوحظ سابقا ، وقد تم إنجاز عمل لدراسة استجابة اللاإرادي خلال التفاعلات الاجتماعية والاضطرابات البيئية. ومن المثير للاهتمام ، وتترك الكثير من المناطق لاستكشاف مثل فحص الاستجابة اللاإرادي أثناء التغيرات الهرمونية الطبيعية و / أو غيرها من العمليات الفسيولوجية التي تحدث في الكائن الحي. قد الاتجاهات المحتملة في المستقبل أيضا دراسة متعاطفة مثل الاستجابات خلال التزاوج والشمية استقبال الكيميائية. الأهم من ذلك ، قد الاستجابات الفسيولوجية توفير قدر أكبر من نظرة ثاقبة استجابة الكائن الحي للبيئة مقارنة الملاحظات السلوكية منذ الحيوانات لا تستجيب دائما سلوكيا عندما يكونون يعدون أنفسهم داخليا. وبالتالي ، فإن القياس الفسيولوجي يوفر مؤشر البيولوجية لتقييم حالة كائن حي الداخلية وهو ما قد يفسر التغيرات الشاملة في كائن حي. طرق &gt; الكهربائية للتسجيل (رسم القلب) إجراءات القلب ومعدلات التهوية قبل البدء في سلك جراد البحر ، ويلزم إعداد أسلاك. قطع اثنين معزول أسلاك الفولاذ المقاوم للصدأ (0.005 بوصة وقطرها مع طلاء 0.008 بوصة ؛ AM الأنظمة ، Carlsburg ، WA) لفترة كافية لإدراجه في جراد البحر والوصول بشكل كاف كاشف مقاومة (UFI ، نموذج 2991). إزالة العزل (~ 0.5 مم) من خلال اطلاق النار على كل من طرفي الأسلاك التي سيتم إدراجها في درع. يجب أن نكون حذرين recoated تقم بإزالة الكثير من العزل كسلك عارية على السطح الخارجي للحيوان لمنع تسجيلات قصيرة مقاومة الدائرة. ثم ، باستخدام ملقط ثني ينتهي أحرق من الأسلاك في الزاوية 90 لالتنسيب إلى درع. تأكد من أن إدراج جزء من السلك ليست طويلة جدا لأن ذلك قد يلحق ضررا في الأعضاء الداخلية. عن جدوى إدخال الأسلاك في أنبوب بلاستيكي (الذي يحمي الأسلاك) ، فمن الأفضل أن تطور فضفاضة الأسلاك معا. إذا كان القلب وتسجيل معدلات التهوية ، كرر الخطوات أعلاه مرة ثانية ، ومجموعتين من الأسلاك ويمكن مضفر فضفاضة معا قبل التنسيب في أنابيب بلاستيكية. لا شك أن يعين الأسلاك للقلب ومعدل التهوية وذلك لعدم الخلط بين الاسلاك التي يعلقونها على مقاومة التي كشف للتسجيل. فمن الأفضل لتسمية قطع الأسلاك أو زوج واحد أقصر من الأخرى في البداية. لمجد وآمن الأسلاك جراد البحر ، فمن الأفضل التفاف مخالب والساقين (ترك الظهر وتعرض جانب واحد) في قطعة قماش مبللة أو مناشف ورقية للقضاء على إصابة الشخص و / أو جراد البحر (الشكل 1). <img src="/files/ftp_upload/1594/1594fig1.jpg" style="float:left;" alt="الشكل 1" /> الشكل 1. التفاف على chelipeds والساقين من جراد البحر. وسوف يلتف حول جراد في منشفة ورقية مبللة منع إصابة الشخص وجراد البحر و. وسوف التفاف تعوق قدرة جراد البحر لنقل chelipeds والساقين. للبدء في عملية الأسلاك ، فمن الأفضل أن تبدأ في غرفة الخيشومية منذ درع سمك يختلف مع كل جراد البحر والقوة الزائدة يمكن أن تسبب تلفا للأعضاء الداخلية ، وبالتالي من خلال البدء في غرفة الخياشيم ، والضغط الزائد هو أقل عرضة للقتل وجراد البحر بالمقارنة مع غرفة القفص الصدري. يتم إجراء ثقب الأولى باستخدام نقطة غرامة مشرط والكبيرة بما يكفي لسلك يمكن إدراجه تحت إهاب في منطقة منقاري للغرفة الخيشومية (أي غرفة prebranchial لرصد معدل التنفس ؛ Schapker وآخرون ، 2002). وسوف حفرة كبيرة وخسارة مفرطة الدملمف ولن الختم صحيح ، وهذا سيزيد من احتمال الأسلاك لن تبقى في الحفرة المعينة. مرة واحدة في السلك هو في مكان ، وانخفاض كمية صغيرة من الغراء (استر cyanoacrylate) والتسريع (HobbyTown الولايات المتحدة الأمريكية ، لكسينغتون ، كنتاكي) على السلك. استخدام الغراء سريع التجفيف يقلل من الإجهاد التعامل مع الحيوانات. كن حذرا لوضع كمية صغيرة فقط من على دواسة البنزين في إهاب لأن هذا هو سامة للجراد ، وسوف يتسبب في الوفاة. فمن الأفضل للقضاء على الفور أي مسرع الزائد قبالة مع منشفة ورقية. كرر هذه الخطوات السلك الثاني في غرفة الخياشيم. وتوضع هذه الأسلاك تمتد بين سنتين وscaphognathite (الجهاز التنفسي) لضمان قياس مقاومة قوية دقيقة خلال كل حركة scaphognathite (الشكل 2). للحصول على تسجيل دقيق ، تأكد أن لا يتم وضع السلك الثاني خارج الغرفة والخياشيم إلى غرفة القفص الصدري. <img src="/files/ftp_upload/1594/1594fig2.jpg" style="float:left;" alt="الشكل 2" /> الشكل 2. وضع أسلاك الفولاذ المقاوم للصدأ في غرفة الخياشيم. النقط البيضاء على درع تمثل نقطة لأسلاك الفولاذ المقاوم للصدأ لتوضع تحت بشرة. أسلاك تمتد scaphognathite والحركة من خلال قياس المعاوقة الحيوية. الخطوات لمعدل ضربات القلب في غرفة الأسلاك الصدري هو نفس أعلاه باستثناء توضع الأسلاك تحت درع الظهرية مباشرة على القلب ، وتمتد في قلب ترتيب منقاري - الذيلية (الشكل 3). وسوف يضمن هذا الموضع قوية قياس المعاوقة دقيقة أثناء كل انقباض القلب (Listerman وآخرون ، 2001). <img src="/files/ftp_upload/1594/1594fig3.jpg" style="float:left;" alt="الشكل 3" /> الشكل 3. وضع أسلاك الفولاذ المقاوم للصدأ في غرفة القفص الصدري. النقط البيضاء على درع تمثل نقطة لأسلاك الفولاذ المقاوم للصدأ لتوضع تحت بشرة. أسلاك تمتد القلب في ترتيب منقاري - الذيلية. هذا سيسمح لاتخاذ تدابير من الانكماش القلب من خلال مقاومة الحيوية. بمجرد وضع جميع الأسلاك الأربعة كاملة ، مزيج لاصقة الفورية (ايستمان ، 5 مين ه التجفيفpoxy) ومعطف الثقوب لكل موقع ، وكذلك أسلاك. حالما يتم تغطية وافية الأسلاك وحفر ثقوب ، استخدام الايبوكسي المتبقية لعقد أنابيب بلاستيكية إلى الجزء الخلفي من جراد البحر. وهذا سيضمن أن لا تكون الأسلاك انسحبت من ثقوب في handlings المستقبل. منذ الايبوكسي يستغرق بضع دقائق ليجف ، أو مكان عقد جراد البحر في وعاء من دون ماء حتى الايبوكسي لم يعد لزجة لمسة. بمجرد أن يجف الايبوكسي ، وغسل جراد البحر في المياه لإزالة المواد الكيميائية الزائدة ووضعها مرة أخرى في بيئة المائية. لضمان صحة جراد البحر ، فمن الأفضل لتغيير المياه في ساعة واحدة تقريبا لإزالة أي مواد كيميائية لم تتم إزالة سابقا. كما لوحظ وجدنا من المحققين السابقة ، ان معالجة طويلة يغير القياسات الفسيولوجية بسبب الإجهاد لمدة 24 ساعة من وقت إلى 3 أيام (يلكنز وآخرون ، 1985) ؛ لذلك ، ينبغي أن تترك الحيوانات لمدة 2 إلى 3 أيام قبل أي التجريب . لتسجيل رسم القلب ، وربط الأسلاك من جراد البحر لكشف مقاومة. يجب أن يرفق السلكين تغطي القلب (HR قياس) للكشف عن مقاومة واحدة وكذلك لالسلكين تغطي scaphognathite (قياس VR). تدابير للكشف عن مقاومة المقاومة الديناميكية بين السلكين الفولاذ المقاوم للصدأ. وتسجل هذه الاشارات من خلال ربط كاشف على الخط لPowerLab عبر واجهة PowerLab/4SP (صكوك م). ويتم قياس جميع الأحداث ومعايرتها مع برنامج PowerLab الإصدار 5.5.6 الرسم البياني (AD الآلات ، واستراليا). لنبدأ ، تعيين نسبة الاستحواذ على 4 كيلوهرتز. فإن الانحرافات الكبيرة ومعدل ضربات القلب تمثل التهوية. لسهولة الفرز في كل الموارد البشرية / VR ، يمكن تطبيق الدالة تمهيد لمجموعة البيانات. إذا كانت ممهدة 100 نقطة (أي متوسط) سوف تتبع الناتجة تصور سوى دقات القلب. يمكن تحديد معدل ضربات القلب التي تهم مباشرة للتغلب على كل ما يزيد على 10 - S فترات وتحويلها بعد ذلك الى يدق في الدقيقة (BPM).

<ol>
	<li>Alexandrowicz, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+innervation+of+the+heart+of+Crustacea.">The innervation of the heart of Crustacea.</a> I. Decapoda. Wuart. J. Microsc. Sci. 75, 181-249 (1932).</li><li>Bethe, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vergleichende+Untersuchungen+uber+die+Funtionen+des+Zentrainervensystems+der+Arthropoden.">Vergleichende Untersuchungen uber die Funtionen des Zentrainervensystems der Arthropoden.</a> Pfluger s Arch. Ges. Physiol. 68, 449-545 (1897).</li><li>Burmistrov, Y. M., Shuranova, Z. P., Abramson, C. I., Shuranova, Z. P., Burmistrov, Y. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Russian Contributions to Invertebrate Behavior. , 111-144 (1996).</li><li>Carpenter, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+autonomic+nervous+system.">The autonomic nervous system.</a> Human Neuroanatomy. , 191-212 (1976).</li><li>Cuadras, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+rate+and+agonistic+behavior+in+unrestrained+crabs.">Heart rate and agonistic behavior in unrestrained crabs.</a> Mar. Behav. Physiol. 6, 189-196 (1979).</li><li>Cuadras, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+responses+to+visual+detection+of+movement,+mechanostimulation+and+cheliped+improsed+movement+in+hermit+crabs.">Cardiac responses to visual detection of movement, mechanostimulation and cheliped improsed movement in hermit crabs.</a> Comp. Biochem. Physiol. A. 66, 113-1171 (1980).</li><li>Huxley, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Crayfish: An introduction to the study of zoology. , (1977).</li><li>Li, H., Listerman, L. R., Doshi, D., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+heart+rate+to+measure+intrinsic+state+of+blind+cave+crayfish+during+social+interactions.">Use of heart rate to measure intrinsic state of blind cave crayfish during social interactions.</a> Comp. Bichem. Physiol. 127A, 55-70 (2000).</li><li>Listerman, L. R., Deskins, J., Bradacs, H., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+rate+within+male+crayfish:+social+interactions+and+effects+of+5-HT.">Heart rate within male crayfish: social interactions and effects of 5-HT.</a> Comp. Biochem. Physiol. 125, 251-263 (2000).</li><li>McMahon, B. R., Wilkens, J. L., Mantel, L., Bliss, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ventilation,+perfusion+and+oxygen+uptake.">Ventilation, perfusion and oxygen uptake.</a> Biology of Crustacea. 6, 289-372 (1983).</li><li>Mendelson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillator+neurons+in+crustacean+ganglia.">Oscillator neurons in crustacean ganglia.</a> Science. 171, 1170-1173 (1971).</li><li>Nicholls, J. G., Martin, A. R., Wallace, B. G., Fuchs, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> From Neuron to Brain. , 315-317 (2001).</li><li>Orlov, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Das+Magenganglion+des+Flu&#946;krebses,+Ein+Beitrag+zur+vergleichenden+Histologis+des+sympathischen+Nervensystem.">Das Magenganglion des Flu&#946;krebses, Ein Beitrag zur vergleichenden Histologis des sympathischen Nervensystem.</a> Z. Mikrosk. Anat. Forschung. 8, 67-102 (1927).</li><li>Pasztor, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neurophysiology+of+respiration+in+decapod+Crustacea:+The+motor+system.">The neurophysiology of respiration in decapod Crustacea: The motor system.</a> Can. J. Zool. 46, 585-596 (1968).</li><li>Schapker, H., Breithaupt, T., Shuranova, Z., Burmistrov, Y., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+rate+and+ventilatory+correlative+measures+in+crayfish+during+environmental+disturbances+and+social+interactions.">Heart rate and ventilatory correlative measures in crayfish during environmental disturbances and social interactions.</a> Comp. Biochem. Physiol., A. 131, 397-407 (2002).</li><li>Shuranova, Z. P., Vekhov, A. V., Burmistrov, Y. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+behavioral+reactions+of+fresh-water+crayfish+to+sensory+exposures:+the+autonomic+components.">The behavioral reactions of fresh-water crayfish to sensory exposures: the autonomic components.</a> Zh. Vyssh Nerv. Deiat Im I P Pavlova. 43, 1159-1169 (1993).</li><li>Shuranova, Z. P., Burmistrov, Y. M., Wiese, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ventilatory+activity+in+free+moving+crayfish+is+indicative+of+its+functional+state+and+perceiving+external+stimuli.">Ventilatory activity in free moving crayfish is indicative of its functional state and perceiving external stimuli.</a> The Crustacean Nervous System. , 526-535 (2002).</li><li>Shuranova, Z. P., Burmistrov, Y. M., Strawn, J. R., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+an+autonomic+nervous+system+in+decapod+crustaceans.">Evidence for an autonomic nervous system in decapod crustaceans.</a> Inter. J. Zool. Res. 2, 242-283 (2006).</li><li>Wiersma, C. A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reflexes+and+the+central+nervous+system.">Reflexes and the central nervous system.</a> The physiology of Crustacea, vol II, Sense organs, integration, and behavior. , 241-279 (1961).</li><li>Wilkens, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+control+of+respiration+in+decapod+Crustacea.+Fed.">Neuronal control of respiration in decapod Crustacea. Fed.</a> Fed. Proc. 35, 2000-2006 (1976).</li><li>Wilkens, J. L., Wilkens, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+control+of+cardiac+and+scaphognathite+pacemakers+in+the+crab+Cancer+magister.">Central control of cardiac and scaphognathite pacemakers in the crab Cancer magister.</a> J. Comp. Physiol. 90, 89-104 (1974).</li><li>Wilkens, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+control+of+cardiac+rhythmicity+and+of+blood+distribution+in+crustaceans.">The control of cardiac rhythmicity and of blood distribution in crustaceans.</a> Comp. Biochem. Physiol. A. 124, 531-538 (1999).</li><li>Yamagishi, H., Ando, H., Makioka, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myogenic+heartbeat+in+the+primitive+crustacean+Triops+longicaudatus.">Myogenic heartbeat in the primitive crustacean Triops longicaudatus.</a> Biol. Bull. 193, 350-358 (1997).</li><li>Yazawa, T., Katsuyama, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+and+repetitive+cardiac+slowdown+in+the+freely+moving+spiny+lobster,+Panulirus+japonicas.">Spontaneous and repetitive cardiac slowdown in the freely moving spiny lobster, Panulirus japonicas.</a> J. Comp. Physiol. 187, 817-824 (2001).</li><li>Zavarzin, A. A., Zavarzin, A. A., Izbrannye, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Ocherki po evol utsionnoj gistologii nervnoj sistemy (Essays on the evolutionary histology of the nervous system). III, (1950).</li></ol>

<table border="1">
<tbody>
<tr>
<td>Material Name</td>
<td>Type</td>
<td>Company</td>
<td>Catalogue Number</td>
</tr>	
<tr>
<td>Scalpel (Stainless steel surgical blades No. 11 for No. 3 handle)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
</tr>
<tr>
<td>Stainless steel wire (diameter 0.005 inches with the coating 0.008 inches; A-M Systems, Carlsburg, WA)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
</tr>
<tr>
<td>Impedance detector (UFI, model 2991)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
</tr>
<tr>
<td>Plastic tubing (Tygon Tubing ID .0812, OD .1492, Cole-Parmer Instrument Company)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
</tr>
<tr>
<td>Fast-drying glue (cyanoacrylate ester, HobbyTown USA, Lexington, KY)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
</tr>
<tr>
<td>Accelerator (HobbyTown USA, Lexington, KY)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
</tr>
<tr>
<td>Adhesive (Eastman, 5-min drying epoxy)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
</tr>
<tr>
<td><a href="http://www.adinstruments.com/products/hardware/corporate/product/ML866/" target="_blank">PowerLab via a PowerLab/4SP interface (AD Instruments)</a>.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
</tr>
<tr>
<td><a href="http://www.adinstruments.com/products/software/research/LabChart-Software/" target="_blank">PowerLab Chart software version 5.5.6 (AD Instruments, Australia)</a></td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
</tr>
<tr>
<td><a href="http://www.adinstruments.com/products/software/research/LabChart-Software/" target="_blank">Chart software version 3.5.6 (AD Instruments, Australia)</a></td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
</tr>
</tbody>
		</table>

measures of heart and ventilatory rates in freely moving crayfish

استجابة الخوف ، والطيران أو القتال بمثابة الأساس الفسيولوجية الأساسية لدراسة الوعي كائن حي لبيئته في إطار هجوم وشيك المفترس. على الرغم من أنه ليس من المعروف ما إذا كانت تمتلك اللافقاريات نظام العصبي متطابقة إلى أن من الفقاريات ، تبين الأدلة اللافقاريات لديها استجابة متعاطفة مثل لتنظيم البيئة الداخلية وعلى استعداد للعمل الكائن سلوكيا لمنبهات معينة. وعلاوة على ذلك ، يمكن قياس هذه الاستجابة الفسيولوجية وعمليا بمثابة مؤشر بيولوجي للدولة الحيوان الداخلية. ويمكن قياس الاستجابة الفسيولوجية تكون ذات صلة مباشرة الى الضغوطات الداخلية والخارجية من خلال التغييرات في تنسيق الجهاز العصبي المركزي للرقابة نظم القلب والأوعية الدموية والجهاز التنفسي. بشكل أكثر تحديدا ، ورصد معدلات التهوية القلب والقابلة للقياس الكمي توفير تدابير للاستجابة الضغوط ليست دائما وحظ سلوكيا. جراد البحر والكائنات نموذجا جيدا للقلب وقياس معدل التنفس نظرا لإمكانية تسجيل ، فضلا عن التاريخ الغني المعروف في التشكل من جراد البحر ويعود تاريخها إلى هكسلي في عام 1888 ، والسلوكيات مدروسة نموذجي.

Watch this Scientific Journal Video about Measures of Heart and Ventilatory Rates in Freely Moving Crayfish at JoVE.com

Measures of Heart and Ventilatory Rates in Freely Moving Crayfish

اللافقاريات تظهر تعاطفا اللاإرادي مثل استجابة مماثلة لتلك التي وصفها لالفقاريات. تنسيق نظم القلب والأوعية الدموية والتنفسية يسمح لقياس مؤشر البيولوجية التي لتقييم حالة الكائن الداخلية.

تدابير القلب والتنفس الصناعي في أسعار التحرك بحرية جراد البحر

The fear, flight or fight response serves as the fundamental physiological basis for examining an organism's awareness of its environment under an ...

measures-of-heart-and-ventilatory-rates-in-freely-moving-crayfish

Research

JoVE Journal

Biology

15.2K Views.  University of Kentucky. اللافقاريات تظهر تعاطفا اللاإرادي مثل استجابة مماثلة لتلك التي وصفها لالفقاريات. تنسيق نظم القلب والأوعية الدموية والتنفسية يسمح لقياس مؤشر البيولوجية التي لتقييم حالة الكائن الداخلية.

Video: Measures of Heart and Ventilatory Rates in Freely Moving Crayfish

Implantation of Engineered Tissue in the Rat Heart

Rodent surgery is often an important component in assessing the utility of engineered tissues. A wide variety of surgical procedures can be performed in common laboratory rats or mice and these quite frequently serve as an intermediate step between bench-top experiments and large animal testing or human trials. Given that rodents provide an established, cost-effective, and physiologically-relevant model system in which to test novel combinations of scaffolding materials and cells, they are particularly well-suited for cardiovascular tissue engineering studies. Presently, we describe an open-heart surgical procedure to implant engineered tissue containing myogenic progenitor cells in the atrioventricular (AV) groove of a rat heart. These implants are intended to create an electrical conduit between the right atrium and right ventricle with the ultimate goal of providing an alternative treatment to conventional pacemaker implantation in pediatric patients with complete heart block[1]. The engineered tissue is implanted in the AV-groove by means of a thoracotomy. For our purposes, Lewis rats are anesthetized and invasively ventilated to maintain positive airway pressure during the sterile surgical procedure. The approach to the heart is performed by a right thoracotomy through an antero-lateral incision at the 5th intercostal space. The tissue construct is fixed in the AV groove using a single 7-0 Prolene suture and positioned between the right ventricle and atrium at the ventral portion of the heart. The epicardium is partially removed to allow direct contact between the recipient myocardial cells and those contained in the engineered tissue. Following implantation, the chest wall is closed in layers, any pneumothorax is evacuated, and the animal is extubated and treated with analgesic.

Here, we describe a cardiac surgical procedure to implant engineered tissue in the atrioventricular (AV)-groove of an adult Lewis rat.

زرع الأنسجة المهندسة في قلب فأر

Rodent surgery is often an important component in assessing the utility of engineered tissues. A wide variety of surgical procedures can be performed in ...

Recordings of Neural Circuit Activation in Freely Behaving Animals

The relationship between patterns of neural activity and corresponding behavioral expression is difficult to establish in unrestrained animals. Traditional non-invasive methods require at least partially restrained research subjects, and they only allow identification of large numbers of simultaneously activated neurons. On the other hand, small ensembles of neurons or individual neurons can only be measured using single-cell recordings obtained from largely reduced preparations. Since the expression of natural behavior is limited in restrained and dissected animals, the underlying neural mechanisms that control such behavior are difficult to identify. 
Here, I present a non-invasive physiological technique that allows measuring neural circuit activation in freely behaving animals. Using a pair of wire electrodes inside a water-filled chamber, the bath electrodes record neural and muscular field potentials generated by juvenile crayfish during natural or experimentally evoked escape responses. The primary escape responses of crayfish are mediated by three different types of tail-flips which move the animals away from the point of stimulation. Each type of tail-flip is controlled by its own neural circuit; the two fastest and most powerful escape responses require activation of different sets of large &#8220;command&#8221; neurons. In combination with behavioral observations, the bath electrode recordings allow unambiguous identification of these neurons and the associated neural circuits. Thus activity of neural circuitry underlying naturally occurring behavior can be measured in unrestrained animals and in different behavioral contexts.

Non-invasive measurements of neural activity patterns in freely behaving animals are obtained by combining neurophysiological recordings with high speed videography.

تسجيلات لتنشيط الدائرة العصبية في التصرف بحرية حيوانات

The relationship between patterns of neural activity and corresponding behavioral expression is difficult to establish in unrestrained animals. ...

Historical View and Physiology Demonstration at the NMJ of the Crayfish Opener Muscle

Here we present some of the key important discoveries made with the opener neuromuscular (NMJ) preparation of crustaceans and illustrate that there is still much to learn from this model preparation. In understanding the history one can appreciate why even today this NMJ still offers a rich playground to address questions regarding pre- and post-synaptic function and plasticity. The viability and ease of access to the terminal for intracellular as well as extracellular electrophysiology and imaging are significant advantages. The mechanisms behind the modulation of vesicular kinetics and fusion within the high- and low-output terminals are begging for investigation. The preparation also offers a testable model system for computational assessments and manipulations to examine key variables in theoretical models of synaptic function, for example calcium dynamics during short-term facilitation. The synaptic complexity of active zone and statistical nature of quantal release is also an open area for future investigation both experimentally and computationally.

The opener muscle of the crayfish leg is presented for its historical importance and experimental versatility in muscle phenotype, synaptic physiology and plasticity.

عرض تاريخي والتظاهر في فسيولوجيا NMJ من جراد البحر العضلات فتاحة

Here we present some of the key important discoveries made with the opener neuromuscular (NMJ) preparation of crustaceans and illustrate that there is ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

The morphogenesis of the Drosophila embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell shape changes during embryonic development. One of the challenges faced in studying this structure is that the lumen of the heart tube, as well as the membrane features that are crucial to heart tube formation, are difficult to visualize in whole mount embryos, due to the small size of the heart tube and intra-lumenal space relative to the embryo. The use of transmission electron microscopy allows for higher magnification of these structures and gives the advantage of examining the embryos in cross section, which easily reveals the size and shape of the lumen. In this video, we detail the process for reliable fixation, embedding, and sectioning of late stage Drosophila embryos in order to visualize the heart tube lumen as well as important cellular structures including cell-cell junctions and the basement membrane.

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

We describe a process for fixation, embedding, sectioning, and imaging of late stage Drosophila embryos for Trasmission Electron Microscopy of the embryonic heart tube. This technique allows for the visualization of the heart tube lumen as well as the basement membrane, which lines the lumen of the heart.

إعداد الأجنة المجهري للإلكترون من ذبابة الفاكهة أنبوب القلب الجنينية

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Quantification of &gamma;H2AX Foci in Response to Ionising Radiation

DNA double-strand breaks (DSBs), which are induced by either endogenous metabolic processes or by exogenous sources, are one of the most critical DNA lesions with respect to survival and preservation of genomic integrity. An early response to the induction of DSBs is phosphorylation of the H2A histone variant, H2AX, at the serine-139 residue, in the highly conserved C-terminal SQEY motif, forming &gamma;H2AX1. Following induction of DSBs, H2AX is rapidly phosphorylated by the phosphatidyl-inosito 3-kinase (PIKK) family of proteins, ataxia telangiectasia mutated (ATM), DNA-protein kinase catalytic subunit and ATM and RAD3-related (ATR)2. Typically, only a few base-pairs (bp) are implicated in a DSB, however, there is significant signal amplification, given the importance of chromatin modifications in DNA damage signalling and repair. Phosphorylation of H2AX mediated predominantly by ATM spreads to adjacent areas of chromatin, affecting approximately 0.03% of total cellular H2AX per DSB2,3. This corresponds to phosphorylation of approximately 2000 H2AX molecules spanning ~2 Mbp regions of chromatin surrounding the site of the DSB and results in the formation of discrete &gamma;H2AX foci which can be easily visualized and quantitated by immunofluorescence microscopy2. The loss of &gamma;H2AX at DSB reflects repair, however, there is some controversy as to what defines complete repair of DSBs; it has been proposed that rejoining of both strands of DNA is adequate however, it has also been suggested that re-instatement of the original chromatin state of compaction is necessary4-8. The disappearence of &gamma;H2AX involves at least in part, dephosphorylation by phosphatases, phosphatase 2A and phosphatase 4C5,6. Further, removal of &gamma;H2AX by redistribution involving histone exchange with H2A.Z has been implicated7,8. Importantly, the quantitative analysis of &gamma;H2AX foci has led to a wide range of applications in medical and nuclear research. Here, we demonstrate the most commonly used immunofluorescence method for evaluation of initial DNA damage by detection and quantitation of &gamma;H2AX foci in &gamma;-irradiated adherent human keratinocytes9.

Quantification of &#947;H2AX Foci in Response to Ionising Radiation

Quantification of DNA double-strand streaks using &gamma;H2AX formation as a molecular marker has become an invaluable tool in radiation biology. Here we demonstrate the use of an immunofluorescence assay for quantification of &gamma;H2AX foci after exposure of cells to radiation.

الكمي بؤر γH2AX في الاستجابة للإشعاع المؤين

DNA double-strand breaks (DSBs), which are induced by either endogenous metabolic processes or by exogenous sources, are one of the most critical DNA ...

Quantitation of &gamma;H2AX Foci in Tissue Samples

DNA double-strand breaks (DSBs) are particularly lethal and genotoxic lesions, that can arise either by endogenous (physiological or pathological) processes or by exogenous factors, particularly ionizing radiation and radiomimetic compounds. Phosphorylation of the H2A histone variant, H2AX, at the serine-139 residue, in the highly conserved C-terminal SQEY motif, forming &gamma;H2AX, is an early response to DNA double-strand breaks1. This phosphorylation event is mediated by the phosphatidyl-inosito 3-kinase (PI3K) family of proteins, ataxia telangiectasia mutated (ATM), DNA-protein kinase catalytic subunit and ATM and RAD3-related (ATR)2. Overall, DSB induction results in the formation of discrete nuclear &gamma;H2AX foci which can be easily detected and quantitated by immunofluorescence microscopy2. Given the unique specificity and sensitivity of this marker, analysis of &gamma;H2AX foci has led to a wide range of applications in biomedical research, particularly in radiation biology and nuclear medicine. The quantitation of &gamma;H2AX foci has been most widely investigated in cell culture systems in the context of ionizing radiation-induced DSBs. Apart from cellular radiosensitivity, immunofluorescence based assays have also been used to evaluate the efficacy of radiation-modifying compounds. In addition, &gamma;H2AX has been used as a molecular marker to examine the efficacy of various DSB-inducing compounds and is recently being heralded as important marker of ageing and disease, particularly cancer3. Further, immunofluorescence-based methods have been adapted to suit detection and quantitation of &gamma;H2AX foci ex vivo and in vivo4,5. Here, we demonstrate a typical immunofluorescence method for detection and quantitation of &gamma;H2AX foci in mouse tissues.

Quantitation of &#947;H2AX Foci in Tissue Samples

Quantitation of DNA double-strand breaks on the basis of &gamma;H2AX foci has become an invaluable tool, particularly in radiation biology, for the evaluation of tissue radiosensitivity and effects of radiation modifying compounds. Here we demonstrate the use of an immunofluorescence assay for quantitation of &gamma;H2AX foci in tissue samples.

الكميات بؤر γH2AX في عينات الأنسجة

DNA double-strand breaks (DSBs) are particularly lethal and genotoxic lesions, that can arise either by endogenous (physiological or pathological) ...

Evaluation of the Spatial Distribution of &gamma;H2AX following Ionizing Radiation

An early molecular response to DNA double-strand breaks (DSBs) is phosphorylation of the Ser-139 residue within the terminal SQEY motif of the histone H2AX1,2. This phosphorylation of H2AX is mediated by the phosphatidyl-inosito 3-kinase (PI3K) family of proteins, ataxia telangiectasia mutated (ATM), DNA-protein kinase catalytic subunit and ATM and RAD3-related (ATR)3. The phosphorylated form of H2AX, referred to as &gamma;H2AX, spreads to adjacent regions of chromatin from the site of the DSB, forming discrete foci, which are easily visualized by immunofluorecence microscopy3. Analysis and quantitation of &gamma;H2AX foci has been widely used to evaluate DSB formation and repair, particularly in response to ionizing radiation and for evaluating the efficacy of various radiation modifying compounds and cytotoxic compounds4.
Given the exquisite specificity and sensitivity of this de novo marker of DSBs, it has provided new insights into the processes of DNA damage and repair in the context of chromatin. For example, in radiation biology the central paradigm is that the nuclear DNA is the critical target with respect to radiation sensitivity. Indeed, the general consensus in the field has largely been to view chromatin as a homogeneous template for DNA damage and repair. However, with the use of &gamma;H2AX as molecular marker of DSBs, a disparity in &gamma;-irradiation-induced &gamma;H2AX foci formation in euchromatin and heterochromatin has been observed5-7. Recently, we used a panel of antibodies to either mono-, di- or tri- methylated histone H3 at lysine 9 (H3K9me1, H3K9me2, H3K9me3) which are epigenetic imprints of constitutive heterochromatin and transcriptional silencing and lysine 4 (H3K4me1, H3K4me2, H3K4me3), which are tightly correlated actively transcribing euchromatic regions, to investigate the spatial distribution of &gamma;H2AX following ionizing radiation8. In accordance with the prevailing ideas regarding chromatin biology, our findings indicated a close correlation between &gamma;H2AX formation and active transcription9. Here we demonstrate our immunofluorescence method for detection and quantitation of &gamma;H2AX foci in non-adherent cells, with a particular focus on co-localization with other epigenetic markers, image analysis and 3D-modeling.

Evaluation of the Spatial Distribution of &#947;H2AX following Ionizing Radiation

Microscopic analysis of &gamma;H2AX foci, which form following the phosphorylation of H2AX at Ser-139 in response to DNA double-strand breaks, has become an invaluable tool in radiation biology. Here we used an antibody to mono-methylated histone H3 at lysine 4 as an epigenetic marker of actively transcribing euchromatin, to evaluate the spatial distribution of radiation-induced &gamma;H2AX formation within the nucleus.

تقييم التوزيع المكاني للγH2AX التالية الإشعاعات المؤينة

An early molecular response to DNA double-strand breaks (DSBs) is phosphorylation of the Ser-139 residue within the terminal SQEY motif of the histone ...

Clonogenic Assay: Adherent Cells

The clonogenic (or colony forming) assay has been established for more than 50 years; the original paper describing the technique was published in 19561. Apart from documenting the method, the initial landmark study generated the first radiation-dose response curve for X-ray irradiated mammalian (HeLa) cells in culture1. Basically, the clonogenic assay enables an assessment of the differences in reproductive viability (capacity of cells to produce progeny; i.e. a single cell to form a colony of 50 or more cells) between control untreated cells and cells that have undergone various treatments such as exposure to ionising radiation, various chemical compounds (e.g. cytotoxic agents) or in other cases genetic manipulation. The assay has become the most widely accepted technique in radiation biology and has been widely used for evaluating the radiation sensitivity of different cell lines. Further, the clonogenic assay is commonly used for monitoring the efficacy of radiation modifying compounds and for determining the effects of cytotoxic agents and other anti-cancer therapeutics on colony forming ability, in different cell lines. A typical clonogenic survival experiment using adherent cells lines involves three distinct components, 1) treatment of the cell monolayer in tissue culture flasks, 2) preparation of single cell suspensions and plating an appropriate number of cells in petri dishes and 3) fixing and staining colonies following a relevant incubation period, which could range from 1-3 weeks, depending on the cell line. Here we demonstrate the general procedure for performing the clonogenic assay with adherent cell lines with the use of an immortalized human keratinocyte cell line (FEP-1811)2. Also, our aims are to describe common features of clonogenic assays including calculation of the plating efficiency and survival fractions after exposure of cells to radiation, and to exemplify modification of radiation-response with the use of a natural antioxidant formulation.

The applicability of the clonogenic assay for evaluating reproductive viability has been established for more than 50 years. Here we demonstrate the general procedure for performing the clonogenic assay with adherent cells.

مولد الرمع الفحص : خلايا منتسب

The clonogenic (or colony forming) assay has been established for more than 50 years; the original paper describing the technique was published in 19561. ...

Assessment of Calcium Sparks in Intact Skeletal Muscle Fibers

Maintaining homeostatic Ca2+ signaling is a fundamental physiological process in living cells. Ca2+ sparks are the elementary units of Ca2+ signaling in the striated muscle fibers that appear as highly localized Ca2+ release events mediated by ryanodine receptor (RyR) Ca2+ release channels on the sarcoplasmic reticulum (SR) membrane. Proper assessment of muscle Ca2+ sparks could provide information on the intracellular Ca2+&#160;handling properties of healthy and diseased striated muscles. Although Ca2+ sparks events are commonly seen in resting cardiomyocytes, they are rarely observed in resting skeletal muscle fibers; thus there is a need for methods to generate and analyze sparks in skeletal muscle fibers.
Detailed here is an experimental protocol for measuring Ca2+ sparks in isolated flexor digitorm brevis (FDB) muscle fibers using fluorescent Ca2+ indictors and laser scanning confocal microscopy. In this approach, isolated FDB fibers are exposed to transient hypoosmotic stress followed by a return to isotonic physiological solution. Under these conditions, a robust Ca2+ sparks response is detected adjacent to the sarcolemmal membrane in young healthy FDB muscle fibers. Altered Ca2+ sparks response is detected in dystrophic or aged skeletal muscle fibers. This approach has recently demonstrated that membrane-delimited signaling involving cross-talk between inositol (1,4,5)-triphosphate receptor (IP3R) and RyR contributes to Ca2+ spark activation in skeletal muscle. In summary, our studies using osmotic stress induced Ca2+ sparks showed that this intracellular response reflects a muscle signaling mechanism in physiology and aging/disease states, including mouse models of muscle dystrophy (mdx mice) or amyotrophic lateral sclerosis (ALS model).

Described here is a method to directly measure calcium sparks, the elementary units of Ca2+ release from sarcoplasmic reticulum&#160;in intact skeletal muscle fibers. This method utilizes osmotic-stress-mediated triggering of Ca2+ release from ryanodine receptor in isolated muscle fibers. The dynamics and homeostatic capacity of intracellular Ca2+ signaling can be employed to assess muscle function in health and disease.

تقييم الكالسيوم سباركس السليمة في ألياف العضلات الهيكلية

Maintaining homeostatic Ca2+ signaling is a fundamental physiological process in living cells. Ca2+ sparks are the elementary units of Ca2+ signaling in ...

Measurement of mRNA Decay Rates in Saccharomyces cerevisiae Using rpb1-1 Strains

mRNA steady state levels vary depending on environmental conditions. Regulation of the steady state accumulation levels of an mRNA ensures that the correct amount of protein is synthesized for the cell&#8217;s specific growth conditions. One approach for measuring mRNA decay rates is inhibiting transcription and subsequently monitoring the disappearance of the already present mRNA. The rate of mRNA decay can then be quantified, and an accurate half-life can be determined utilizing several techniques. In S. cerevisiae, protocols that measure mRNA half-lives have been developed and include inhibiting transcription of mRNA using strains that harbor a temperature sensitive allele of RNA polymerase II, rpb1-1. Other techniques for measuring mRNA half-lives include inhibiting transcription with transcriptional inhibitors such as thiolutin or 1,10-phenanthroline, or alternatively, by utilizing mRNAs that are under the control of a regulatable promoter such as the galactose inducible promoter and the TET-off system. Here, we describe measurement of S. cerevisiae mRNA decay rates using the temperature sensitive allele of RNA polymerase II. This technique can be used to measure mRNA decay rates of individual mRNAs or genome-wide.

Measurement of mRNA Decay Rates in Saccharomyces cerevisiae Using rpb1-1 Strains

The steady state level of specific mRNAs is determined by the rate of synthesis and decay of the mRNA. Genome-wide mRNA degradation rates or the decay rates of specific mRNAs can be measured by determining mRNA half-lives. This protocol focuses on measurement of mRNA decay rates in Saccharomyces cerevisiae.

قياس مرنا تسوس الأسعار<em&gt; خميرة الخباز</em&gt; استخدام<em&gt; rpb1-1</em&gt; سلالات

mRNA steady state levels vary depending on environmental conditions. Regulation of the steady state accumulation levels of an mRNA ensures that the ...