للبدء ، احصل على تركيبة معدة مسبقا وشريحة عينة من أنسجة سرطان الرئة الثابتة والبارافين. احتضانها عند 65 درجة مئوية لمدة خمس دقائق. قم بإجراء الجفاف عن طريق غمر الشريحة في الزيلين ، تليها محاليل الإيثانول ذات التركيزات المتناقصة.
ثم اغمر الشرائح في ماء معقم ثلاث مرات لمدة دقيقة واحدة لكل منها. لاسترجاع المستضد ، ضع الشريحة في صندوق تلطيخ وإصلاح. املأه بمحلول عمل عازل لإصلاح المستضد المناعي الكيميائي من درجة الحموضة ستة أو تسعة.
غطي الصندوق بغطاء ، وقم بتسخينه في فرن ميكروويف لمدة ثماني دقائق بقوة 100٪. ثم قم بتبريد الشريحة إلى درجة حرارة الغرفة. غطي الأنسجة بمحلول مانع ، ثم احتضانها في غرفة رطبة في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق.
بعد إزالة محلول الحجب ، قم بتغطية الشريحة بمحلول عمل الأجسام المضادة الأساسي ، وضعها في غرفة مرطبة. ثم احتضان هذه الغرفة لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية. بعد ذلك ، اغسل الشريحة بمحلول عمل عازل للغسيل لمدة دقيقتين.
أضف بيروكسيديز الفجل البوليمر مباشرة على الشريحة ، واحتضانها لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. بعد غسل الشريحة ، أضف محلول عمل الفلوروفور مباشرة قطرة على الشريحة ، واحتضنها لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. بمجرد غسل الشريحة ، أعط معالجة الميكروويف كما هو موضح سابقا.
عندما يتم تبريد الشريحة إلى درجة حرارة الغرفة ، اغسلها ثلاث مرات بالماء المقطر المزدوج لمدة دقيقة واحدة لكل منها. بعد ذلك ، اغمس الشريحة في محلول عمل المخزن المؤقت للغسيل لمدة دقيقتين ، وقم بإجراء حضانة الأجسام المضادة ، وبيروكسيديز الفجل ، وإضافة الفلوروفور كما هو موضح. بالنسبة للتلطيخ النووي للخلية ، قم بتغطية الشريحة بمحلول عمل DAPI واحتضانها في غرفة مرطبة لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة.
ثم اغسل الشرائح بالماء المقطر المزدوج ثلاث مرات ، دقيقة واحدة لكل منهما. قم بإزالة قطرات الماء من الشريحة. أضف 10 إلى 20 ميكرولترا من المروي المضاد للتألق إلى الشريحة ، وأغلقها بزجاج غطاء مجهري.
