حضانة حبات كونكانافالين-أ المعزولة بالأرومة العضلية للفأر مع الأجسام المضادة لفحص CUT & Tag

للبدء ، ماصة ثلاثة ميكرولترات من الجسم المضاد H3K4me1 في أنبوب يحتوي على 150 ميكرولتر من المخزن المؤقت للجسم المضاد. ماصة الجسم المضاد المخفف في كل أنبوب من شريط أنبوب PCR ثمانية يحتوي على الخلايا العضلية للفأر المعزولة في حبات Concanavalin A. اقلب الأنابيب عدة مرات لخلط المحتويات جيدا.

ثم ضع الأنابيب طوال الليل على شاكر الحركة المتأرجح عند أربع درجات مئوية. في اليوم التالي ، بعد توضيح العينات على رف مغناطيسي ، ماصة من المادة الطافية. أضف 50 ميكرولترا من الجسم المضاد الثانوي المخفف إلى كل أنبوب عينة بعد شفط المادة الطافية.

امزج أنابيب العينة عن طريق الانقلاب واحتضانها على شاكر حركة متأرجح لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. تخلص من طاف العينة الموضحة. ثم ماصة 200 ميكرولتر من DIG Wash Buffer في كل أنبوب.

ضع الأنابيب مرة أخرى على الرف المغناطيسي وأخرج الماصة من المادة الطافية. بعد ذلك ، أضف 100 ميكرولتر من 300 DIG buffer تحتوي على pA / G-Tn5a في كل أنبوب. بمجرد اكتمال الحضانة ، ضع الأنابيب مرة أخرى على الرف المغناطيسي.

ثم ماصة خارج طاف أوضح. أضف الآن 200 ميكرولتر من 300 DIG Buffer في كل أنبوب. ضع أنابيب العينة على شاكر لمدة ثلاث دقائق في درجة حرارة الغرفة.

بعد الغسيل الأخير ، قم بإخراج المادة الطافية تماما من كل أنبوب موضح مغناطيسيا. ثم أضف 50 ميكرولتر من المخزن المؤقت للعلامات. أخيرا ، احتضان الأنابيب في جهاز PCR عند 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة دون استخدام وظيفة تسخين الغطاء للأداة.