التنميط الجيني للنباتات المعدلة وراثيا وحصاد البذور لاختيار أصناف الأرز المخصب بالنشا المقاوم

للبدء ، احصل على SG RNA وقم بتحويل Agrobacterium مع الحمض النووي للبلازما. زرع النباتات المعدلة وراثيا في الأواني وزراعتها لمدة شهر في دفيئة. لفحص نوع الطفرة ، اجمع ملليغرامين إلى ثلاثة ملليغرامات من الأوراق الطازجة من كل حراثة لشتلة واحدة كعينة واحدة باستخدام البروتوكولات المعمول بها.

استخرج الحمض النووي الجيني من عينات الأوراق التي تم جمعها. صمم بادئات PCR لتضخيم منطقة جين SBEIIb المحيطة بالموقع المستهدف للحمض النووي الريبي أحادي الدليل للحصول على 493 زوجا أساسيا من جزء مضخم طويل. تسلسل شظايا تفاعل البوليميراز المتسلسل مباشرة باستخدام طريقة سانجر لتحديد الطفرات.

حدد خطوط E0 التي تظهر طفرات تحول الإطار متماثل اللواقح وزرعها في دفيئة للحصول على البذور. بعد ذلك ، احصد الأوراق من الشتلات التي يبلغ عمرها أسبوعين واستخرج الحمض النووي الجيني للنبات. إجراء تفاعل البوليميراز المتسلسل الجيني باستخدام البرنامج المناسب للكشف عن وجود الهيجرومايسين والدخل الأساسي الشامل للدخل والكاسكوست في جينوم النبات.

قم بتحليل منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل باستخدام الرحلان الكهربائي للهلام لتحديد الخطوط التي لا تظهر نطاقات تشير إلى أنها خطوط E1 خالية من الجينات المعدلة وراثيا. احصد البذور من هذه الخطوط المختارة. أظهرت النباتات الطافرة مظهرا معتما تماما وشمعيا في حبيباتها ، على عكس المظهر الشفاف للحبوب البرية.

لم يلاحظ وجود فروق ذات دلالة إحصائية بين طفرات SBEIIb والنباتات البرية من حيث معدل تكوين البذور والحبوب لكل عناقيد ومحصول لكل نبات.