وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الكندية لأبحاث الصحة (MSH - 95368 ، 89773 وMOP - MOP - 106623 لتشيكوسلوفاكيا) ، والمؤسسة الكندية للإبداع. SCM هو المستفيد من جمعية CIHR / الكندي للزمالة أمراض الجهاز الهضمي ما بعد الدكتوراه. CZ هو محقق CIHR جديد.

1. نشر المسلكة البيض الفأرية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتوليد دفعات جديدة من بيض الفأرية المسلكة ، 20-30 تصيب الفئران العوز المناعي (مثل NOD.Cg - Prkdc SCID Il2rg tm1Wjl / SzJ (NSG) أو 129S6/SvEvTac-Rag2 tm1Fwa (RAG2 -- / --)) أو الفئران المعرضة وراثيا ( على سبيل المثال. عكر / J) التي هي 6-8 أسابيع من العمر مع ما يقرب من 300 بيضة المسلكة الفأرية بالتزقيم عن طريق الفم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 32-35 يوما التضحية الفئران خنقا 2 CO. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كشف الجانب البطني للفأرة والرطب في البطن مع الايثانول 70 ٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملقط به فهم جلد البطن وإحداث شق صغير باستخدام المقص. قطع الجلد لكشف محتويات البطن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد الأعور والداني الأمعاء كبيرة ، وإزالتها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الأعور والأمعاء الغليظة الداني في طبق بتري 10 سم تحتوي على التعديل Dulbecco النسر متوسطة (DMEM) مع 500 U / البنسلين مل و 500 ميكروغرام / مل الستربتوميسين (P / S). قطع الأعور فتح لكشف التجويف والديدان و. باستخدام الملقط الأعور مكان في كوب من الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) ويهز بلطف لإزالة البراز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عودة إلى طبق بتري الأعور واستخدام الملقط منحني سلس (RS - 5047 Roboz) برفق من الديدان ووضعها في بئر من لوحة تحتوي على 5 6 جيدا مليليتر من DMEM + P / S. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر هذه العملية لجميع الفئران. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع 6 لوحة جيدا في وعاء تثبرور بمنشفة مبللة ورقة للحفاظ على الرطوبة واحتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 4 ساعات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 4 ساعات إزالة الديدان باستخدام الملقط المنحنية على نحو سلس وتقسيمها إلى 2 آبار جديدة من لوحة تحتوي على 6 جيدا DMEM 5mL + P / S. حصاد محتويات البئر والمكان الأصلي في أنبوب 15 مل الصقر. تدور أنبوب في 3000 دورة في الدقيقة ، وإزالة وطاف الاحتياطي كما مستضد ساعة 4 (يمكن أن تستخدم لغسيل الكلى restimulation الخلية بعد برنامج تلفزيوني ، حيث غلة البروتين النموذجية هي 20 ملغ في 10-20 الفئران) والتي تحتوي على البيض resuspend بيليه في مياه الحنفية تعقيمها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع لوحة 6 جيدا مرة أخرى عند 37 درجة مئوية خلال الليل. إزالة والتخلص من الديدان. حصاد محتويات الآبار في أنبوب الصقر وتدور بسرعة 3000 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق. إزالة طاف والاحتياطي كما مستضد بين عشية وضحاها (يمكن استخدامها في حج المسلكة محددة ELISAs isotype الضد بعد الغسيل الكلوي في برنامج تلفزيوني ، حيث غلة البروتين النموذجية هي 20 ملغ في 10-20 الفئران) والتي تحتوي على البيض resuspend بيليه في مياه الحنفية تعقيمها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الجمع بين 4 ساعات والبيض بين عشية وضحاها وتصفية البيض من خلال مصفاة 70μm لإزالة أي بقايا الديدان ثم نقل إلى القارورة 75 2 سم. إبقاء القارورة في مكان مظلم المشمولة في احباط لمدة 6 أسابيع في درجة حرارة الغرفة (RT). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل البيض في ماء الصنبور وتعقيمها resuspend على 50 بيضة قابلة للحياة في 50 ميكرولتر. للقيام بذلك ، الطرد المركزي البيض في 3000 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق وresuspend 50ml ~ في مياه الحنفية العقيمة. إزالة 50 ميكرولتر البيض وتوضع على شريحة زجاجية. استخدام التكبير 40X حساب عدد البيض المحتوي قابلة للحياة في 50 ميكرولتر. تمييع البيض 50 بيضة لإعطاء قابلة للحياة في 50 ميكرولتر. لوحات من البيض مجدية الرجاء راجع الدراسة التي أجراها كوبر ومانسفيلد 16. </li></ol> 2. عدوى حادة من فئران التجارب مع المسلكة الفأرية البيض (200 بيضة / الماوس) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> resuspend البيض جيدا حجم وإزالة ما يكفي لعلاج عدد من الفئران X 2 (مثل الفئران لمدة 10 ميكرولتر تأخذ 200 × 10 × 2 = الفئران 4 مليليتر من البيض) ووضعها في أنبوب 14 مل غطاء مبكرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اقلب المفاجئة مل 14 أنبوب الغطاء لالمزيج. طرح 200 ميكرولتر من البيض في حقنة 1 مل على إبرة حجم التغذية المناسبة (بالنسبة للفئران وزنها 25 غراما استخدمنا قياس 18 1 1 / 2 &quot;الإبر) في ناحية القفا واستخدام الماوس من جهة أخرى إدارة البيض بواسطة التغذية عن طريق الفم . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الانتظار 21 يوما. </li></ol> 3. الحصاد التجريبي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في يوم 21 التضحية الفئران باستخدام ثاني أكسيد الكربون 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع الدم من ثقب في القلب من قبل الفئران ، في حقنة غير heparinized ، وتخزينها في 4 درجات مئوية. في اليوم التالي عزل المصل وتجميد عند -20 درجة مئوية. ويمكن استخدام المصل للكشف عن المسلكة محددة من قبل الجماعات الحكومية الدولية وإيج إليسا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كشف الجانب البطني للفأرة والرطب في البطن مع الايثانول 70 ٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملقط به فهم جلد البطن وإحداث شق صغير باستخدام المقص. قطع الجلد والأغشية الكامنة لكشف محتويات البطن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التعرف على الأمعاء الدقيقة ، الأعور والقولون. الاستيلاء على الأعور مع ملقط والانسحاب من تجويف البطن. مع زوج آخر من الأمعاء الدقيقة ملقط دفع إلى اليمين تعريض الغدد الليمفاوية المساريقي (mLNs). إزالة mLNs الحرص على عدم قطع في الأمعاء والمكان في 15 مل تحتوي على الصقر 2 ملل من وسائل الإعلام. يمكن إذا أن المطلوب معالجة هذه وrestimulated في المختبر (4x10 6 / مل في 1 مل في 24 لوحات جيدة مع αCD3/CD28 ميكروغرام / 1 مل أو مع حج 50μg/ml المسلكة 4H) لمدة 72 ساعة للتحليل بواسطة ELISA وخلوى و جوانيانخفاض الخلوي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخلص من الأعور والقولون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام الملقط ، طرد من القولون البرازية الكريات القاصي ومكان في أنبوب Axygen 2 مل. التجميد في -20 درجة مئوية. ويمكن تحليلها بواسطة الكريات البرازية طخة الغربية للتعبير عن resistin مثل β جزيء (RELM - β). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة غيض من الأعور (~ 0،5 سم). لإزالة البراز عقد الأعور غيض مع ملقط والاحمرار مع برنامج تلفزيوني باستخدام حقنة 3 مل و 22 قياس إبرة في طبق بتري. في مكان جديد بارافورمالدهيد 4 ٪ في 5 مل غطاء أنبوب فالكون مبكرة. المحل في 4 درجات مئوية. يمكن لهذه أن تكون جزءا لا يتجزأ من البرافين ، مقطوع والتي شنت على الشرائح للتحليل النسيجي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة جزء من القولون الداني (~ 1 سم) عن الحمض النووي الريبي. وضعت العينة في أنبوب Axygen 2 مل مع 500 RNAlater ميكرولتر. المحل في 4 درجات مئوية. ويمكن تحليل هذه العينات للتعبير مرنا بواسطة qPCR. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع بقية الأعور في طبق بتري وصفت والتجميد في -20 درجة مئوية. </li></ol> 4. تعداد الديدان الفأرية المسلكة في الأعور <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الأعور من الثلاجة وضعها في طبق بتري تحتوي على ~ الماء 5 مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام مقص ، قص الأعور فتح لكشف التجويف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عقد الأعور مع ملقط ويهز بقوة الأعور لإزالة غالبية البراز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الأعور إلى آخر طبق بتري تحتوي على المياه واستخدام الملقط منحني سلس كشط بلطف قبالة IECS النسيج الأساسي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأعور نقل إلى طبق بتري جديدة تحتوي على الماء وكشط بقوة الأنسجة المتبقية مع ملقط ، تمزيق النسيج الى قطع صغيرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام مجهر تشريح لحساب كل من الديدان في كل 3 من أطباق بتري. كما تجد دودة إزالته من طبق لضمان الدودة نفسها لا يحسب مرتين. في حالة تلف الديدان (كسر أي في النصف) العد تنتهي إلا رقيقة أو سميكة للحصول على عدد دقيقة. </li></ol> 5. ممثل النتائج العدوى الفأرية المسلكة النموذج يسمح للباحثين لتحديد عبء طفيلي والاستجابات المناعية الجهازية ، وكذلك لدراسة تشريحيا للاستجابة التهابية داخل الأعور القاصي. عندما يتعرض لمعة من الأعور المقطوع ، ويمكن تعداد الديدان المسلكة باستخدام مجهر تشريح (الشكل 1A - B). معلمات من الحصانة لتشمل أيضا المسلكة isotype التحول إلى الضد IgG1 (المقترنة TH2 من نوع الحصانة) في الحيوانات مقاومة ، وIgG2a (المقترنة TH1 من نوع الحصانة) في الحيوانات الحساسة (الشكل 1C). ويرتبط التعبير عن القدح خلية محددة resistin البروتين مثل جزيء β (RELM - β) مع إزالة المسلكة واكتشافها عن طريق تحليل لطخة غربية (الشكل 2). يمكن أن تكون ملطخة الجزء الأعلى من الأعور مع حمض دورية شيف (PAS) لتقييم الاستجابات الخلية القدح ومدى التهاب في الامعاء في الاستجابة للعدوى (الشكل 3). <img src="/files/ftp_upload/2774/2774fig1.jpg" alt="الشكل 1"/> الشكل 1. الكمي من الحصانة لالفأرية المسلكة. (أ) مقاومة (B6) طرد الفئران التي الفأرية المسلكة 21 يوما بعد العدوى. على النقيض من ذلك ، فإنهم يصابون بالالتهاب المزمن عرضة (عكر / J) الفئران مع المسلكة ، مما أدى إلى إنشاء الطفيلي. كل شريط يمثل يعني ± SEM من الحيوانات 4-8 في المجموعة. (ب) تحسب الديدان باستخدام مجهر تشريح. اللوحة العلوية يظهر الديدان في عزلة ، لوحة أسفل يظهر الديدان في حضور IECS والبراز. (C) ويتم تحديد المسلكة محددة عيارات IgG2a ELISA بواسطة المصل المخفف (1:2 التخفيف ، ابتداء من الساعة 1:20 وتنتهي في التخفيف 1:2560) على لوحات مغطاة مستضد المسلكة مطرح (O / N حج ، 5 ميكروغرام / مل). عرضة عكر / J الفئران لديهم مستويات أعلى بشكل ملحوظ من المسلكة محددة IgG2a المصل من الفئران المقاومة B6. <img src="/files/ftp_upload/2774/2774fig2.jpg" alt="الشكل 2"/> الشكل 2. ويرتبط تطهير الفأرية المسلكة مع التعبير عن القدح خلية محددة بروتين RELM β - 7. ويمكن الكشف عن RELM - β انتاج الكريات من البراز من المسلكة المصابة مقاومة (B6) ، ولكن ليس عرضة (عكر / J) الفئران عن طريق تحليل لطخة غربية. حارة كل من ممثل لحيوان واحد ، (N) = السذاجة ، (TM) = 21 يوما المسلكة الفئران المصابة. <img src="/files/ftp_upload/2774/2774fig3.jpg" alt="الشكل 3"/> الشكل 3. الفحص النسيجي للعدوى الأعور المسلكة التالية القاصي. المقاطع 5-7 ميكرومتر من الأعور القاصي ملطخة PAS. كأس تضخم الخلايا وإنتاج المخاط واضحة في مقاومة (B6) ولكن ليس عرضة (عكر / J) الفئران بعد العدوى المسلكة.

<ol>
	<li>Cliffe, L. J., Grencis, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Trichuris+muris+system:+a+paradigm+of+resistance+and+susceptibility+to+intestinal+nematode+infection.">The Trichuris muris system: a paradigm of resistance and susceptibility to intestinal nematode infection.</a> Adv. Parasitol. 57, 255-307 (2004).</li><li>Else, K. J., Finkelman, F. D., Maliszewski, C. R., Grencis, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokine-mediated+regulation+of+chronic+intestinal+helminth+infection.">Cytokine-mediated regulation of chronic intestinal helminth infection.</a> J. Exp. Med. 179, 347-351 (1994).</li><li>Bancroft, A. J., Grencis, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Th1+and+Th2+cells+and+immunity+to+intestinal+helminths.">Th1 and Th2 cells and immunity to intestinal helminths.</a> Chem. Immunol. 71, 192-208 (1998).</li><li>Bancroft, A. J., McKenzie, A. N., Grencis, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+role+for+IL-13+in+resistance+to+intestinal+nematode+infection.">A critical role for IL-13 in resistance to intestinal nematode infection.</a> J. Immunol. 160, 3453-3461 (1998).</li><li>Helmby, H., Takeda, K., Akira, S., Grencis, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin+(IL)-18+promotes+the+development+of+chronic+gastrointestinal+helminth+infection+by+downregulating+IL-13.">Interleukin (IL)-18 promotes the development of chronic gastrointestinal helminth infection by downregulating IL-13.</a> J. Exp. Med. 194, 355-364 (2001).</li><li>Owyang, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin+25+regulates+type+2+cytokine-dependent+immunity+and+limits+chronic+inflammation+in+the+gastrointestinal+tract.">Interleukin 25 regulates type 2 cytokine-dependent immunity and limits chronic inflammation in the gastrointestinal tract.</a> J. Exp. Med. 203, 843-849 (2006).</li><li>Artis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RELM&#946;/FIZZ2+is+a+goblet+cell-specific+immune-effector+molecule+in+the+gastrointestinal+tract.">RELM&#946;/FIZZ2 is a goblet cell-specific immune-effector molecule in the gastrointestinal tract.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 101, 13596-13600 (2004).</li><li>Datta, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+novel+genes+in+intestinal+tissue+that+are+regulated+after+infection+with+an+intestinal+nematode+parasite.">Identification of novel genes in intestinal tissue that are regulated after infection with an intestinal nematode parasite.</a> Infect. Immun. 73, 4025-4033 (2005).</li><li>Cliffe, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+intestinal+epithelial+cell+turnover:+a+new+mechanism+of+parasite+expulsion.">Accelerated intestinal epithelial cell turnover: a new mechanism of parasite expulsion.</a> Science. 308, 1463-1465 (2005).</li><li>Artis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+weapons+in+the+war+on+worms:+identification+of+putative+mechanisms+of+immune-mediated+expulsion+of+gastrointestinal+nematodes.">New weapons in the war on worms: identification of putative mechanisms of immune-mediated expulsion of gastrointestinal nematodes.</a> Int. J. Parasitol. 36, 723-733 (2006).</li><li>Finkelman, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokine+regulation+of+host+defense+against+parasitic+gastrointestinal+nematodes:+lessons+from+studies+with+rodent+models.">Cytokine regulation of host defense against parasitic gastrointestinal nematodes: lessons from studies with rodent models.</a> Annu. Rev. Immunol. 15, 505-533 (1997).</li><li>Grencis, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enteric+helminth+infection:+immunopathology+and+resistance+during+intestinal+nematode+infection.">Enteric helminth infection: immunopathology and resistance during intestinal nematode infection.</a> Chem. Immunol. 66, 41-61 (1997).</li><li>Khan, W. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+intestinal+muscle+contraction+by+interleukin-9+(IL-9)+or+IL-9+neutralization:+correlation+with+worm+expulsion+in+murine+nematode+infections.">Modulation of intestinal muscle contraction by interleukin-9 (IL-9) or IL-9 neutralization: correlation with worm expulsion in murine nematode infections.</a> Infect. Immun. 71, 2430-2438 (2003).</li><li>Khan, W. I., Blennerhasset, P., Ma, C., Matthaei, K. I., Collins, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stat6+dependent+goblet+cell+hyperplasia+during+intestinal+nematode+infection.">Stat6 dependent goblet cell hyperplasia during intestinal nematode infection.</a> Parasite Immunol. 23, 39-42 (2001).</li><li>Akiho, H., Blennerhassett, P., Deng, Y., Collins, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+IL-4,+IL-13,+and+STAT6+in+inflammation-induced+hypercontractility+of+murine+smooth+muscle+cells.">Role of IL-4, IL-13, and STAT6 in inflammation-induced hypercontractility of murine smooth muscle cells.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 282, 226-2232 (2002).</li><li>Kopper, J. J., Mansfield, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+improved+methods+for+delivery+of+Trichuris+muris+to+the+laboratory+mouse.">Development of improved methods for delivery of Trichuris muris to the laboratory mouse.</a> Parasitol. Res. 107, 1103-1113 (2010).</li><li>Bancroft, A. J., Else, K. J., Grencis, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-level+infection+with+Trichuris+muris+significantly+affects+the+polarization+of+the+CD4+response.">Low-level infection with Trichuris muris significantly affects the polarization of the CD4 response.</a> Eur. J. Immunol. 24, 3113-3118 (1994).</li></ol>

وقد أجريت تجارب على الحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية واللوائح التي وضعتها جامعة كولومبيا البريطانية.

تفاصيل هذا البروتوكول معيار جرعة عالية العدوى الحادة الفأرية المسلكة التي يمكن تعديلها على النحو المطلوب من قبل المحقق. على سبيل المثال ، يمكن التضحية وأنسجة الفئران التي تحصد في أيام مختلفة. يمكن أن تقرر أن الفئران قد أنشأت بنجاح كامل عبء دودة يمكن التضحية أنه?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم كاشف </th><th> شركة </th><th> فهرس العدد </th><th> تعليقات </th></tr><tr><td> إبر تغذية الحيوان (18 × 1 ½ &quot;) </td><td> بوبر </td><td> 7912 </td><td></td></tr><tr><td> منحني سلس الملقط </td><td> Roboz </td><td> RS - 5047 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Gibco </td><td> 11965 </td><td></td></tr><tr><td> NOD.Cg - Prkdc SCID Il2r gtm1Wjl / SzJ (NSG) </td><td> جاكسون مختبرات </td><td> 005557 </td><td> هذه هي الفئران التي استخدمناها ، ومع ذلك ، ينبغي لأي الفئران العوز المناعي أو سلالة معرضة العمل. </td></tr><tr><td> RNAlater </td><td> Qiagen </td><td> 76104 </td><td></td></tr><tr><td> 2 مل أنابيب </td><td> Axygen </td><td> MCT - 200 - C </td><td></td></tr><tr><td> 15 مل أنابيب </td><td> صقر </td><td> 352096 </td><td></td></tr><tr><td> 6 لوحات جيدة </td><td> صقر </td><td> 353046 </td><td></td></tr><tr><td> بارافورمالدهيد </td><td> الإلكترون المجهر العلوم </td><td> 15710 </td><td></td></tr><tr><td> α - RELMβ الأضداد </td><td> PeproTech المؤتمر الوطني العراقي </td><td> 0694270Rb </td><td></td></tr></tbody></table>

trichuris muris infection: a model of type 2 immunity and inflammation in the gut

المسلكة الفأرية هو الممرض من الفئران الطبيعية والبيولوجية ومستضديا مشابهة نوعا من المسلكة التي تصيب البشر والحيوانات 1. تعطى البيض بالتزقيم المعدية عن طريق الفم ، يفقس في الأمعاء الصغيرة البعيدة ، غزو الخلايا الظهارية في الأمعاء (IECS) التي تبطن الخبايا من الأعور والقولون والداني على نضوج الديدان الإفراج البيض في البيئة 1. هذا النموذج هو أداة قوية لدراسة العوامل التي تحكم CD4 + T تنشيط الخلايا المساعد (ث) ، وكذلك تغييرات في ظهارة الأمعاء. وتتميز الاستجابة المناعية التي تحدث في سلالات مقاومة الفطرية ، مثل C57BL / 6 و BALB / ج ، من خلال الاستقطاب السيتوكينات TH2 (IL - 4 ، IL - 5 و IL - 13) وطرد الديدان بينما TH1 المرتبطة السيتوكينات (IL -12 ، IL - 18 ، IFN - γ) تعزيز الالتهابات المزمنة في عكر عرضة وراثيا / الفئران J 2-6. السيتوكينات TH2 تعزيز التغيرات الفسيولوجية في المكروية المعوية بما في ذلك سرعة دوران IECS ، القدح تمايز الخلايا ، والتوظيف ، والتغيرات في نفاذية الظهارية وسلس تقلص العضلات ، والتي تورطت في طرد الدودة 7-15. نحن هنا بالتفصيل بروتوكولا لنشر المسلكة الفأرية البيض والتي يمكن استخدامها في التجارب اللاحقة. ونحن نقدم أيضا عينة تجريبية الحصاد مع اقتراحات لمرحلة ما بعد الإصابة التحليل. عموما ، سوف توفر للباحثين هذا البروتوكول مع الأدوات الأساسية لتنفيذ ماوس الفأرية المسلكة نموذج العدوى التي يمكن استخدامها لمعالجة المسائل المتعلقة الميل ث في الجهاز الهضمي فضلا عن وظائف المناعة في IECS المستجيب.

Watch this Scientific Journal Video about Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut at JoVE.com

Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

المسلكة الفأرية العدوى المعوية هو نموذج الحصانة TH2 حيث توليد فئران مقاومة للاستجابة وقائية TH2 والفئران عرضة توليد المرضية TH1 الاستجابة.

المسلكة الفأرية العدوى : نموذج من الحصانة من النوع 2 والتهاب في القناة الهضمية

Trichuris muris is a natural pathogen of mice and is biologically and antigenically similar to species of Trichuris that 
infect humans and livestock1. ...

trichuris-muris-infection-model-type-2-immunity-inflammation

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

16.2K Views.  University of British Columbia. المسلكة الفأرية العدوى المعوية هو نموذج الحصانة TH2 حيث توليد فئران مقاومة للاستجابة وقائية TH2 والفئران عرضة توليد المرضية TH1 الاستجابة.

Video: Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae by Latex Agglutination

Latex agglutination reagents are widely used in microbial diagnosis, identification and serotyping. Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) is a major cause of morbidity and mortality world-wide. Current vaccines target the pneumococcal capsule, and there are over 90 capsular serotypes. Serotyping pneumococcal isolates is therefore important for assessing the impact of vaccination programs and for epidemiological purposes. The World Health Organization has recommended latex agglutination as an alternative method to the &#8216;gold standard&#8217; Quellung test for serotyping pneumococci. Latex agglutination is a relatively simple, quick and inexpensive method; and is therefore suitable for resource-poor settings as well as laboratories with high-volume workloads. Latex agglutination reagents can be prepared in-house utilizing commercially-sourced antibodies that are passively attached to latex particles. This manuscript describes a method of production and quality control of latex agglutination reagents, and details a sequential testing approach which is time- and cost-effective. 
This method of production and quality control may also be suitable for other testing purposes.

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae by Latex Agglutination

Latex agglutination testing is a simple, rapid and inexpensive method for serotyping Streptococcus pneumoniae, and has also been widely applied in diagnostic microbiology. This manuscript describes the in-house production of latex agglutination reagents, quality control procedures and the application of this technique to pneumococcal serotyping.

المحفظة المصلي من<em&gt; العقدية الرئوية</em&gt; من جانب تراص اللاتكس

Latex agglutination reagents are widely used in microbial diagnosis, identification and serotyping. Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) is a major ...

Isolation, Characterization and Functional Examination of the Gingival Immune Cell Network

Immune cell networks in tissues play a vital role in mediating local immunity and maintaining tissue homeostasis, yet little is known of the resident immune cell populations in the oral mucosa and gingiva. We have established a technique for the isolation and study of immune cells from murine gingival tissues, an area of constant microbial exposure and a vulnerable site to a common inflammatory disease, periodontitis. Our protocol allows for a detailed phenotypic characterization of the immune cell populations resident in the gingiva, even at steady state. Our procedure also yields sufficient cells with high viability for use in functional studies, such as the assessment of cytokine secretion ex vivo. This combination of phenotypic and functional characterization of the gingival immune cell network should aid towards investigating the mechanisms involved in oral immunity and periodontal homeostasis, but will also advance our understanding of the mechanisms involved in local immunopathology.

We have established a technique for the isolation, phenotypic characterization and functional analysis of immune cells from murine gingiva.

عزل وتوصيف والفحص الوظيفي لشبكة خلية اللثة المناعي

Immune cell networks in tissues play a vital role in mediating local immunity and maintaining tissue homeostasis, yet little is known of the resident ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of inflammation. They are key players in the innate immune system and play major roles in cancer biology. Neutrophils have been proposed as key mediators of malignant transformation, tumor progression, angiogenesis and in the modulation of the antitumor immunity; through their release of soluble factors or their interaction with tumor cells. To characterize the specific functions of neutrophils, a fast and reliable method is coveted for in vitro isolation of neutrophils from human blood. Here, a density gradient separation method is demonstrated to isolate neutrophils as well as mononuclear cells from the blood. The procedure consists of layering the density gradient solution such as Ficoll carefully above the diluted blood obtained from patients diagnosed with chronic lymphocytic leukemia (CLL), followed by centrifugation, isolation of mononuclear layer, separation of neutrophils from RBCsby dextran then lysis of residual erythrocytes. This method has been shown to isolate neutrophils &#8805; 90 % pure. To mimic the tumor microenvironment, 3-dimensional (3D) experiments were performed using basement membrane matrix such as Matrigel. Given the short half-life of neutrophils in vitro, 3D experiments with fresh human neutrophils cannot be performed. For this reason promyelocytic HL60 cells are differentiated along the granulocytic pathway using the differentiation inducers dimethyl sulfoxide (DMSO) and retinoic acid (RA). The aim of our experiments is to study the role of neutrophils on the sensitivity of lymphoma cells to anti-lymphoma agents. However these methods can be generalized to study the interactions of neutrophils or neutrophil-like cells with a large range of cell types in different situations.

Neutrophils are the most abundant type of white blood cells. The isolation of neutrophils from human blood by density gradient separation method and the differentiation of human promyelocytic (HL60) cells along the granulocytic pathway are described here; to test their role on sensitivity of lymphoma cells to anti-lymphoma agents.

عزل وتحليل العدلة لتحديد ما دورها في الغدد اللمفاوية حساسية الخلية وكلاء العلاجية

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

Applying Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET) to Examine Effector Translocation Efficiency by Coxiella burnetii during siRNA Silencing

Coxiella burnetii, the causative agent of Q fever, is an intracellular pathogen that relies on a Type IV Dot/Icm Secretion System to establish a replicative niche. A cohort of effectors are translocated through this system into the host cell to manipulate host processes and allow the establishment of a unique lysosome-derived vacuole for replication. The method presented here involves the combination of two well-established techniques: specific gene silencing using siRNA and measurement of effector translocation using a FRET-based substrate that relies on &#946;-lactamase activity. Applying these two approaches, we can begin to understand the role of host factors in bacterial secretion system function and effector translocation. In this study we examined the role of Rab5A and Rab7A, both important regulators of the endocytic trafficking pathway. We demonstrate that silencing the expression of either protein results in a decrease in effector translocation efficiency. These methods can be easily modified to examine other intracellular and extracellular pathogens that also utilize secretion systems. In this way, a global picture of host factors involved in bacterial effector translocation may be revealed.

Applying Fluorescence Resonance Energy Transfer FRET to Examine Effector Translocation Efficiency by Coxiella burnetii during siRNA Silencing

Investigating the interactions between bacterial pathogens and their hosts is an important area of biological research. Here, we describe the necessary techniques to measure effector translocation by Coxiella burnetii during siRNA gene silencing using BlaM substrate.

تطبيق نقل الإسفار الرنين الطاقة (الحنق) لدراسة المستجيب إزفاء الكفاءة من قبل<em&gt; الكوكسيلا البورنيتية</em&gt; أثناء سيرنا إسكات

Coxiella burnetii, the causative agent of Q fever, is an intracellular pathogen that relies on a Type IV Dot/Icm Secretion System to establish a ...

A Non-invasive and Technically Non-intensive Method for Induction and Phenotyping of Experimental Bacterial Pneumonia in Mice

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant preclinical advances in our understanding of the underlying cellular and molecular pathogenesis. In vivo mouse models capture the integrated physiology and resilience of the host defense response in a manner not revealed by alternative, simplified ex vivo approaches. Several methods have been described in the literature for intrapulmonary inoculation of bacteria in mice, including aerosolization, intranasal delivery, peroral endotracheal cannulation under &#39;blind&#39; and visualized conditions, and transcutaneous endotracheal cannulation. All methods have relative merits and limitations. Herein, we describe in detail a non-invasive, technically non-intensive, inexpensive, and rapid method for intratracheal delivery of bacteria that involves aspiration (i.e., inhalation) by the mouse of an infectious inoculum pipetted into the oropharynx while under general anesthesia. This method can be used for pulmonary delivery of a wide variety of non-caustic biological and chemical agents, and is relatively easy to learn, even for laboratories with minimal prior experience with pulmonary procedures. In addition to describing the aspiration pneumonia method, we also provide step-by-step procedures for assaying the subsequent in vivo pulmonary innate immune response of the mouse, in particular, methods for quantifying bacterial clearance and the cellular immune response of the infected airway. This integrated and simple approach to pneumonia assessment allows for rapid and robust evaluation of the effect of genetic and environmental manipulations upon pulmonary innate immunity.

Several methods have been described in the literature for modeling bacterial pneumonia in mice. Herein, we describe a non-invasive, inexpensive, rapid method for inducing pneumonia via aspiration (i.e., inhalation) of a bacterial inoculum pipetted into the oropharynx. Downstream methods for assessment of the pulmonary innate immune response are also detailed.

والطريقة غير الغازية ومن الناحية الفنية غير كثيفة للتحريض وPhenotyping التجريبية البكتيرية والالتهاب الرئوي في الفئران

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant ...

Precision-cut Mouse Lung Slices to Visualize Live Pulmonary Dendritic Cells

Inhalation of allergens and pathogens elicits multiple changes in a variety of immune cell types in the lung. Flow cytometry is a powerful technique for quantitative analysis of cell surface proteins on immune cells, but it provides no information on the localization and migration patterns of these cells within the lung. Similarly,&#160;chemotaxis assays can be performed to study the potential of cells to respond to chemotactic factors in vitro, but these assays do not reproduce the complex environment of the intact lung. In contrast to these aforementioned techniques, the location of individual cell types within the lung can be readily visualized by generating Precision-cut Lung Slices (PCLS), staining them with commercially available, fluorescently tagged antibodies, and visualizing the sections by confocal microscopy. PCLS can be used for both live and fixed lung tissue, and the slices can encompass areas as large as a cross section of an entire lobe. We have used this protocol to successfully visualize the location of a wide variety of cell types in the lung, including distinct types of dendritic cells, macrophages, neutrophils, T cells and B cells, as well as structural cells such as lymphatic, endothelial, and epithelial cells. The ability to visualize cellular interactions, such as those between dendritic cells and T cells, in live, three-dimensional lung tissue, can reveal how cells move within the lung and interact with one another at steady state and during inflammation. Thus, when used in combination with other procedures, such as flow cytometry and quantitative PCR, PCLS can contribute to a comprehensive understanding of cellular events that underlie allergic and inflammatory diseases of the lung.

We describe a method for generating Precision-cut Lung Slices (PCLS) and immunostaining them to visualize the localization of various immune cell types in the lung. Our protocol can be extended to visualize the location and function of many different cell types under a variety of conditions.

الرئة ماوس شرائح لتصور لايف الخلايا الجذعية الرئوي قطع الدقة

Inhalation of allergens and pathogens elicits multiple changes in a variety of immune cell types in the lung. Flow cytometry is a powerful technique for ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against currently circulating strains. In addition to their use in treating seasonal influenza, the NA inhibitors have been stockpiled by a number of countries for use in the event of a pandemic. It is therefore important to monitor the susceptibility of circulating influenza viruses to this class of antivirals. There are different types of assays that can be used to assess the susceptibility of influenza viruses to the NA inhibitors, but the enzyme inhibition assays using either a fluorescent substrate or a chemiluminescent substrate are the most widely used and recommended. This protocol describes the use of a fluorescence-based assay to assess influenza virus susceptibility to NA inhibitors. The assay is based on the NA enzyme cleaving the 2&#8242;-(4-Methylumbelliferyl)-&#945;-D-N-acetylneuraminic acid (MUNANA) substrate to release the fluorescent product 4-methylumbelliferone (4-MU). Therefore, the inhibitory effect of an NA inhibitor on the influenza virus NA is determined based on the concentration of the NA inhibitor that is required to reduce 50% of the NA activity, given as an IC50 value.

We describe the use of a phenotypic fluorescence-based neuraminidase inhibition assay to assess the susceptibility of influenza A and B viruses to the neuraminidase inhibitor class of antivirals.

مضان القائم على النورامينيداز تثبيط الفحص لتقييم مدى حساسية فيروسات الأنفلونزا إلى والنورامينيداز المانع فئة من الأدوية المضادة للفيروسات

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...

Effects of Taste Signaling Protein Abolishment on Gut Inflammation in an Inflammatory Bowel Disease Mouse Model

Inflammatory bowel disease (IBD) is one of the immune-related gastrointestinal disorders, including ulcerative colitis and Crohn's disease, that affects the life quality of millions of people worldwide. IBD symptoms include abdominal pain, diarrhea, and rectal bleeding, which may result from the interactions among gut microbiota, food components, intestinal epithelial cells, and immune cells. It is of particular importance to assess how each key gene expressed in intestinal epithelial and immune cells affects inflammation in the colon. G protein-coupled taste receptors, including G protein subunit &#945;-gustducin and other signaling proteins, have been found in the intestines. Here, we use &#945;-gustducin as a representative and describe a dextran sulfate sodium (DSS)-induced IBD model to evaluate the effect of gustatory gene mutations on gut mucosal immunity and inflammation. This method combines gene knockout technology with the chemically induced IBD model, and thus can be applied to assess the outcome of gustatory gene nullification as well as other genes that may exuberate or dampen the DSS-induced immune response in the colon. Mutant mice are administered with DSS for a certain period during which their body weight, stool, and rectal bleeding are monitored and recorded. At different timepoints during administration, some mice are euthanized, then the sizes and weights of their spleens and colons are measured and gut tissues are collected and processed for histological and gene expression analyses. The data show that the &#945;-gustducin knockout results in excessive weight loss, diarrhea, intestinal bleeding, tissue damage, and inflammation vs. wild-type mice. Since the severity of induced inflammation is affected by mouse strains, housing environment, and diet, optimization of DSS concentration and administration duration in a pilot experiment is particularly important. By adjusting these factors, this method can be applied to assess both anti- and pro-inflammatory effects.

Here we present a protocol to investigate the effect of the nullification of gustation-related genes on immune responses in a dextran sulfate sodium (DSS)-induced inflammatory bowel disease (IBD) mouse model.

آثار الذوق مما يشير إلى إلغاء البروتين على التهاب الأمعاء في طراز ماوس مرض التهاب الأمعاء

Inflammatory bowel disease (IBD) is one of the immune-related gastrointestinal disorders, including ulcerative colitis and Crohn's disease, that affects ...

Establishment of Viral Infection and Analysis of Host-Virus Interaction in Drosophila Melanogaster

Virus spreading is a major cause of epidemic diseases. Thus, understanding the interaction between the virus and the host is very important to extend our knowledge of prevention and treatment of viral infection. The fruit fly Drosophila melanogaster has proven to be one of the most efficient and productive model organisms to screen for antiviral factors and investigate virus-host interaction, due to powerful genetic tools and highly conserved innate immune signaling pathways. The procedure described here demonstrates a nano-injection method to establish viral infection and induce systemic antiviral responses in adult flies. The precise control of the viral injection dose in this method enables high experimental reproducibility. Protocols described in this study include the preparation of flies and the virus, the injection method, survival rate analysis, the virus load measurement, and an antiviral pathway assessment. The influence effects of viral infection by the flies' background were mentioned here. This infection method is easy to perform and quantitatively repeatable; it can be applied to screen for host/viral factors involved in virus-host interaction and to dissect the crosstalk between innate immune signaling and other biological pathways in response to viral infection.

Establishment of Viral Infection and Analysis of Host-Virus Interaction in Drosophila Melanogaster

This protocol describes how to establish viral infection in vivo in Drosophila melanogaster using the nano-injection method and basic techniques to analyze virus-host interaction.

إنشاء العدوى الفيروسية، وتحليل التفاعل المضيف للفيروسات في Melanogaster المورفولوجية

Virus spreading is a major cause of epidemic diseases. Thus, understanding the interaction between the virus and the host is very important to extend our ...

The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis

Candida species are common fungal commensals of humans colonizing the skin, mucosal surfaces, and gastrointestinal tract. Under certain conditions, Candida can overgrow their natural niches resulting in debilitating mucosal infections as well as life-threatening systemic infections, which are a major focus of investigation due to their associated high mortality rates. Animal models of disseminated infection exist for studying disease progression and dissecting the characteristics of Candida pathogenicity. Of these, the Galleria mellonella waxworm infection model provides a cost-effective experimental tool for high-throughput investigations of systemic virulence. Many other bacterial and eukaryotic infectious agents have been effectively studied in G. mellonella to understand pathogenicity, making it a widely accepted model system. Yet, variation in the method used to infect G. mellonella can alter phenotypic outcomes and complicate interpretation of the results. Here, we outline the benefits and drawbacks of the waxworm model to study systemic Candida pathogenesis and detail an approach to improve reproducibility. Our results highlight the range of mortality kinetics in G. mellonella and describe the variables which can modulate these kinetics. Ultimately, this method stands as an ethical, rapid, and cost-effective approach to study virulence in a model of disseminated candidiasis.

The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis

Galleria mellonella serves as an invertebrate model for disseminated candidiasis. Here, we detail the infection protocol and provide supporting data for the model&#39;s effectiveness.

نموذج العدوى واكسوورم Galleria mellonella "نشر داء المبيضات"

Candida species are common fungal commensals of humans colonizing the skin, mucosal surfaces, and gastrointestinal tract. Under certain conditions, ...