وأيد هذا العمل من المنح المقدمة التشغيل لBAV من كرون والتهاب القولون مؤسسة كندا (CCFC) والمعاهد الكندية لأبحاث الصحة (CIHR). وقد تم تمويل GB من قبل منحة دراسية عليا من CIHR. BAV هو الأطفال الذين يعانون من الاضطرابات المعوية والكبد (الطفل) رئيس مؤسسة البحوث IBD الأطفال وكرسي أبحاث أمراض الجهاز الهضمي للأطفال في كندا.

1. إعداد اللقاح والليمونية rodentium بالتزقيم عن طريق الفم للفئران <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد والأوتوكلاف لوريا Bertani مرق (LB). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول C. قابلة للحياة rodentium من الأسهم المجمدة والجلسرين متتالية على لوحة LB أجار باستخدام حلقة عقيمة أو تلميح ماصة بتلقيح. احتضان عند 37 درجة مئوية خلال الليل. تطعيم 3 مل من مرق LB العقيمة في أنبوب الصقر مع ثقافة المستعمرات من لوحة LB باستخدام حلقة بتلقيح أو تلميح ماصة. وينبغي أن يتم إعداد اللقاح باستخدام تقنيات العقيم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان C. ثقافة rodentium هوائيا في 37 درجة مئوية خلال الليل في الحضانة الفوق شاكر في 200 دورة في الدقيقة. ينبغي للمرق LB تلقيح تظهر بعد غائم الثقافة بين عشية وضحاها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يميل استخدام لمبة إبرة بالتزقيم المعدة تعلق على حقنة 1 مل لتسمين كل الماوس مع 100 ميكرولتر من C. بين عشية وضحاها rodentium الثقافة. القفا بلطف الماوس، من خلال استيعاب بشدة الجلد المترهل حول الرقبة والظهرمع الإبهام والأصابع. سحب رأس الحيوان مع السبابة لشل الرأس وتصويب المريء لإدخال الإبرة تسمين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على الماوس في وضع رأسي وتوجيه نصيحة لمبة من الإبرة بالتزقيم على طول الجانب من فمه وأكثر من لغتها. تمرير الإبرة بلطف على طول سقف الفم ودفعها إلى أسفل المريء. إذا كان هناك أي مقاومة شعرت خلال هذا الإجراء، وإزالة الإبرة بالتزقيم وإعادة إدراجها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن ببطء 100 ميكرولتر من اللقاح البكتيري وإزالة الإبرة بلطف تسمين. رصد معدل التنفس وسلوك الماوس بعد إعادته إلى قفصه. </li></ol> ملاحظات: <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في الخطوات 2 و 3، وإعداد أيضا أنبوب الثقافة الصقر باستخدام تقنيات العقيم مع 3 مل من مرق LB العقيمة بين عشية وضحاها ليكون مثقف لضمان عدم وجود التلوث الجرثومي من مرق نفسه. يجب أن تظهر واضحة مرق LB بعد الثقافة بين عشية وضحاها. </li><lط&gt; برفق تستنهض الهمم الثقافة داخل أنبوب الصقر قبل التحميل الحقن لبالتزقيم بحيث يتم تسليم جرعة متساوية من البكتيريا إلى كل الماوس، في الخطوة 4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يجب التخلص من ثقافة بين عشية وضحاها إذا تم تلقيح أكثر من 24 لأنها ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جميع C. وينبغي إجراء العدوى rodentium والإسكان في الحيوانات المصابة في منشأة السلامة الأحيائية المستوى 2. </li></ul> 2. قياس نفاذية الجدار القولون الظهارية في C. rodentium الفئران المصابة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس سلامة الحاجز في نقطة الوقت المطلوب بعد العدوى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في يوم الفحص، وإعداد ما يكفي من ثيوسيانات فلوريسئين 4 كيلو دالتون (FITC)-ديكستران الذائبة في الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) إلى تركيز 80 مل -1 ملغ إلى تسمين كل الماوس مع 150 ميكرولتر وإعداد منحنى القياسية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> القفا الماوس وبالتزقيم مع 150 ميكرولتر من FITC-ديكستران. سحب الطعام من القفص في هذا الوقت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفئران بعد 4 ساعاتgavaging وجمع أكبر قدر ممكن من الدم (~ 450 ميكرولتر) من خلال ثقب في القلب. إضافة الدم إلى تركيز النهائي من سكر العنب حامض سيترات 3٪ في أنبوب microcentrifuge لردع التخثر. الموت ببطء الفئران وجمع أنسجة القولون في برنامج تلفزيوني لتحديد أعداد البكتيريا (الخطوات 3،1 حتي 3،5) والفورمالين 10٪ في لتثبيت الأنسجة وتلطيخ في نهاية المطاف المناعي (الخطوات 4،1 حتي 4،8). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدور عينات الدم في 1،000 x ج لمدة 12 دقيقة في جهاز للطرد المركزي في C. ° 4 جمع المصل ويخفف إلى 10/1 و 1 100 / في برنامج تلفزيوني. إضافة 100 ميكرولتر من كل عينة في هذه التخفيفات سنتين إلى لوحة 96 بشكل جيد في مكررات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لإعداد منحنى القياسية، تخفيف الأصلي 80 ملغ مل -1 FITC-ديكستران تستخدم لتسمين الفئران في برنامج تلفزيوني على التركيزات التالية: 800، 400، 200، 100، 50، 25، 12.5، 6.25، و 0 ميكروغرام / مل . إضافة 100 ميكرولتر من كل تركيز لوحة 96 أيضا في ثلاث نسخ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس مضان من كل عينة باستخدام مقياس التألق في لWAV الإثارةelength من 485 نانومتر و 535 نانومتر الطول الموجي الانبعاثات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحليل البيانات الخام عن طريق التآمر منحنى القياسية. إدخال البيانات الخام لكل عينة في المعادلة من خط إنشاؤها بواسطة منحنى القياسية لتحديد تركيز FITC-ديكستران في كل عينة. </li></ol> ملاحظات: <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> من فصاعدا 4 الخطوة، والحفاظ على عينات الدم على الجليد وتقليل التعرض للضوء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عند قياس سلامة طلائي الحاجز نقطة في الوقت، أو قبل، 7 أيام بعد الإصابة هو الأمثل، وشديدة تلف الأنسجة يحدث بعد هذه المرحلة. قياس سلامة الحاجز قبل قوع أضرار جسيمة يسمح لك لتحديد الاختلافات القصوى في النفاذية خلال C. عدوى rodentium بين سلالات الفئران. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضمان أن يتم اختبار السيطرة على الفئران غير المصابة أيضا لسلامة حاجز الظهارية. </li></ul> 3. قياس الحمل البكتيري في أنسجة C. rodentium الفئران المصابة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 1 مل العقيمة PBS علىالثانية أدنى من المعادن تعقيمها حبة إلى الدور 2 مل أنبوب الطرد المركزي باستخدام تقنية العقيم. سيتم وضع الأنسجة الفردية التي تم جمعها من كل حيوان في أنابيب PBS منفصلة. وزن الأنابيب قبل إضافة الأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الأعور والقولون من الماوس. فصل من الأعور والقولون وطرد محتويات اللمعية باستخدام ملقط. إضافة إلى محتويات أنبوب PBS. بعد فصل الأقسام 0.5 سم من القولون الأعور عن القاصي وتثبيت الفورمالين 10٪، وخفض فتح القولون الأعور المتبقية وطوليا ويغسل مع PBS معقمة قبل وضعها في أنابيب الأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وزن الأنابيب PBS مع الأنسجة ومن ثم التجانس العينات باستخدام الخافق حبة لمدة 6 دقائق عند 30 هرتز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام تقنيات العقيم، اضافة 180 ميكرولتر PBS معقمة لكل بئر لوحة 96 أيضا. إضافة 20 ميكرولتر من كل عينة متجانسة إلى البئر الأولى في كل صف. تخلط جيدا وتخفيف متسلسل، مضيفا 20 ميكرولتر من كل جانب السابقة للحصول على التخفيفات من 10 -1 (أولا نحنليرة لبنانية) ل10 -6. لوحة 10 ميكرولتر من كل عينة من كل تخفيف من ثلاث نسخ على لوحة أسفل LB مربع مع شبكة. احتضان بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عد الوحدات مستعمرة تشكيل (CFU)، ثم التهم متوسط ​​3، وسجل في التخفيف الذي كان يحسب كل عينة. مضاعفة متوسط ​​CFU بنسبة 50، كما تم استخدام 20 ميكرولتر من العينة الأصلية 1 مل، وعامل التخفيف الذي كان يحسب العينة مما أدى إلى CFU / مل. وأخيرا، القسمة على وزن الأنسجة لتحديد CFU / ز. </li></ol> 4. تقييم النسيجية وتلوين المناعي للأنسجة المصابة القولون <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع الأنسجة كما في الخطوة 3.2. بين عشية وضحاها في الأنسجة متجر الفورمالين، ثم تغسل مع الايثانول 70٪. تضمين الأنسجة في البارافين وقطع 5 أقسام ميكرومتر لتلطيخ. وصمة عار مع الهيماتوكسيلين ويوزين لتقييم النسيجية، والشروع في الخطوات التالية لتلطيخ المناعي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لdeparaffinize الأنسجة قبل تلطيخ، مكان الشرائح فيجرة تلطيخ coplin وضعها في حمام مائي 65 ° C لمدة 10 دقيقة. المقبل، والشرائح مكان في الزيلين لمدة أربعة يغسل من 2 دقيقة لكل منهما. وينبغي بعد ذلك أن الشرائح ميهت مع يغسل 5 دقائق بالسيارة اثنين في الإيثانول بنسبة 100٪، تليها واحدة 5 دقائق يغسل في كل مما يلي: الإيثانول 95٪، والإيثانول 75٪ و2 0 درهم. وينبغي أن يتم في هذه يغسل غطاء الدخان لتجنب التعرض لأبخرة ضارة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الشرائح مكان في جرة مع coplin قبل تحسنت الصوديوم سترات عازلة ومن ثم إلى مكان باخرة لمدة 30 دقيقة، ثم ترك الجلوس لمدة 30 دقيقة. هذه العملية يكسر البروتين عبر وصلات التثبيت الفورمالين التي شكلتها استرداد مواقع مستضدي المحتملة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يغسل مع أزيد PBS لمدة 5 دقائق، ثلاث مرات. الشرائح الجافة ومنطقة في جميع أنحاء الأنسجة علامة بالقلم PAP لخلق حاجز مسعور، والحفاظ على الكواشف تلطيخ مترجمة على الأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كتلة الأنسجة لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة مع العازلة حظر (مثل α-الماعز المصل) في غرفة الرطوبة المناعية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمييع متزمتARY الأجسام المضادة لتركيز المطلوب باستخدام الأجسام المضادة العازلة التخفيف. صب قبالة حجب العازلة وإضافة 50-100 ميكرولتر من الأجسام المضادة الأولية إلى الأنسجة. احتضان عند 4 ° C أو بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة لمدة 2 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يغسل مع أزيد PBS لمدة 5 دقائق، ثلاث مرات. إضافة 50-100 ميكرولتر من الأجسام المضادة الثانوية مخففة في التخفيف العازلة الأجسام المضادة إلى الأنسجة واحتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة 1 ساعة في الظلام. يغسل مع DH 2 O لمدة 5 دقائق، ثلاث مرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يذوى الشرائح، إضافة دابي إطالة المتوسطة الذهب المتزايدة وتطبيق ساترة. عرض الشرائح تحت المجهر مضان. </li></ol> ملاحظات: <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يمكن أن تكون بديلا PBS أزيد مع PBS الطازجة كبديل لتجنب نمو البكتيريا في غسل المتوسطة من 4 الخطوة فصاعدا. </li></ul>

<ol>
	<li>Nell, S., Seurbaum, S., Josenhans, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+microbiota+on+the+pathogenesis+of+IBD:+lessons+from+mouse+infection+models.">The impact of microbiota on the pathogenesis of IBD: lessons from mouse infection models.</a> Nature Reviews Microbiology. 8, 564-577 (2010).</li><li>Cario, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+Receptors+in+Inflammatory+Bowel+Diseases:+A+Decade+Later.">Toll-like Receptors in Inflammatory Bowel Diseases: A Decade Later.</a> Inflammatory Bowel Diseases. 16 (9), 1583-1597 (2010).</li><li>Eckmann, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+Models+of+Inflammatory+Bowel+Disease.">Animal Models of Inflammatory Bowel Disease.</a> Annals New York Academy of Sciences. , 1027-38 (2006).</li><li>Mundy, R., MacDonald, T. T., Dougan, G., Frankel, G., Wiles, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Citrobacter+rodentium+of+mice+and+man.">Citrobacter rodentium of mice and man.</a> Cellular Microbiology. 7, 1697-1706 (2005).</li><li>Luperchio, S., Schauer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+pathogenesis+of+Citrobacter+rodentium+and+transmissible+murine+colonic+hyperplasia.">Molecular pathogenesis of Citrobacter rodentium and transmissible murine colonic hyperplasia.</a> Microbes and Infection. 3 (4), 333-340 (2001).</li><li>Bergstrom, K. S., Sham, H. P., Zarepour, M., Vallance, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+host+responses+to+enteric+bacterial+pathogens:+a+balancing+act+between+resistance+and+tolerance.">Innate host responses to enteric bacterial pathogens: a balancing act between resistance and tolerance.</a> Cellular Microbiology. 14, 475-484 (2012).</li><li>MacDonald, T. T., Frankel, G., Dougan, G., Goncalves, N. S., Simmons, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+defences+to+Citrobacter+rodentium.">Host defences to Citrobacter rodentium.</a> International Journal of Medical Microbiology. 293, 87-93 (2003).</li><li>Borenshtein, D., McBee, M. E., Schauer, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utility+of+the+Citrobacter+rodentium+infection+model+in+laboratory+mice.">Utility of the Citrobacter rodentium infection model in laboratory mice.</a> Current Opinion in Gastroenterology. 24, 32-37 (2008).</li><li>Gibson, D. L., Ma, C., Rosenberger, C. M., Bergstrom, K. S. B., Valdez, Y., Huang, J. T., Khan, M. A., Vallance, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+receptor+2+plays+a+critical+role+in+maintaining+mucosal+integrity+during+Citrobacter+rodentium-induced+colitis.">Toll-like receptor 2 plays a critical role in maintaining mucosal integrity during Citrobacter rodentium-induced colitis.</a> Cellular Microbiology. 10, 388-403 (2008).</li><li>Dennis, A., Kudo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+p50+subunit+of+NF-&#954;B+is+critical+for+in+vivo+clearance+of+the+non-invasive+enteric+pathogen+Citrobacter+rodentium.">The p50 subunit of NF-&#954;B is critical for in vivo clearance of the non-invasive enteric pathogen Citrobacter rodentium.</a> Infection &amp; Immunity. 76 (11), 4978-4988 (2008).</li><li>Gibson, D. L., Ma, C., Bergstrom, K. S. B., Huang, J. T., Man, C., Vallance, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MyD88+signalling+plays+a+critical+role+in+host+defence+by+controlling+pathogen+burden+and+promoting+epithelial+cell+homeostasis+during+Citrobacter+rodentium-induced+colitis.">MyD88 signalling plays a critical role in host defence by controlling pathogen burden and promoting epithelial cell homeostasis during Citrobacter rodentium-induced colitis.</a> Cellular Microbiology. 10 (3), 618-631 (2008).</li><li>Lebeis, S. L., Bommarius, B., Parkos, C. A., Sherman, M. A., Kalman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TLR+signaling+mediated+by+MyD88+is+required+for+a+protective+innate+immune+response+by+neutrophils+to+Citrobacter+rodentium.">TLR signaling mediated by MyD88 is required for a protective innate immune response by neutrophils to Citrobacter rodentium.</a> Journal of Immunology. 179 (1), 566-577 (2007).</li><li>Bry, L., Brenner, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+role+of+T+cell+dependent+serum+antibody,+but+not+the+gut-associated+lymphoid+tissue,+for+surviving+acute+mucosal+infection+with+Citrobacter+rodentium,+an+attaching+and+effacing+pathogen.">Critical role of T cell dependent serum antibody, but not the gut-associated lymphoid tissue, for surviving acute mucosal infection with Citrobacter rodentium, an attaching and effacing pathogen.</a> Journal of Immunology. 172 (1), 433-441 (2004).</li><li>Simmons, C. P., Clare, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+role+for+B+lymphocytes+and+CD4++T+cells+in+immunity+to+infection+by+the+attaching+and+effacing+pathogen+Citrobacter+rodentium.">Central role for B lymphocytes and CD4+ T cells in immunity to infection by the attaching and effacing pathogen Citrobacter rodentium.</a> Infection &amp; Immunity. 71 (9), 5077-5086 (2003).</li><li>Ahmed, I., Chandrakesan, P., Tawfik, O., Xia, L., Anant, S., Umar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+Roles+of+Notch+and+Wnt/&#946;-Catenin+Pathways+in+the+Regulation+of+Hyperplasia+and/or+Colitis+in+Response+to+Bacterial+Infection.">Critical Roles of Notch and Wnt/&#946;-Catenin Pathways in the Regulation of Hyperplasia and/or Colitis in Response to Bacterial Infection.</a> Infection &amp; Immunity. 80 (9), 3107-3121 (2012).</li></ol>

الكتاب تعلن أنه ليس لديهم المصالح المتنافسة المالية.

الليمونية rodentium العدوى يوفر نموذجا قيما لدراسة كل الأمراض المعدية والتهاب القولون في الفئران. هذا النموذج الفريد يسمح لتوصيف كل من الاستجابات المضيفة، فضلا عن الخصائص المسببة للأمراض من البكتيريا. حدد الخطوات في هذا التفصيل بروتوكول نجاح استخدام هذا النموذج. </...

العدوى عن طريق مسببات الأمراض البكتيرية المعوية المعدية المعوية يتسبب (GI) التهاب، وكذلك الأمراض المعوية والفيزيولوجيا المرضية، بما في ذلك الإسهال والأمعاء الظهارية ضعف الجدار. ولا يزال الغموض يكتنف آليات الفوعة من مسببات الأمراض البكتيرية التي استعمار الجهاز الهضمي من مضيفيهم، وكذلك الردود التي تدافع عن المضيف محددة ضد الالتهابات مثل هذه، بدأت التطورات الحديثة في النمذجة ومع ذلك من الالتهابات البكتيرية المعوية لمساعدتنا على فهم هذه العمليات. كما تم البكتيريا المعوية المرتبطة أمراض التهاب الأمعاء (IBDs). مرض كرون في IBDs (CD) وUC هي أمراض معقدة من مرض غير معروف، يتميز التهاب الأمعاء المزمن وتلف الأنسجة. نماذج الماوس العديد من الالتهابات المعوية موجودة، من التهاب عفوية في سلالات معدلة وراثيا، مثل IL10 - / - الفئران، لمواجهة التحديات مع المركبات الكيميائية، مثل كبريتات الصوديوم ديكستران (DSS) ودinitrobenzene حمض السلفونيك (DNBS) 1. فقد تم الافتراض أن الاستجابات الالتهابية المزمنة غير القادرة على التأقلم موجودة في المرضى IBD تطوير الأفراد في وراثيا عرضة عند التعرض غير طبيعي في نظام المناعة المخاطية المعوية للبكتيريا المعوية 2، ولذلك دراسة نماذج من التهاب القولون المعدية كما يقدم إمكانية كبيرة لتحديد المضيف المحتمل المسببة للأمراض . الردود على البكتيريا المعوية التي يسببها التهاب القولون rodentium الليمونية هي واحدة من النماذج النادرة من التهاب القولون المعدية التي تميزت جيدا 1،3، مما يسمح لتحليل استجابات المضيف للبكتيريا المعوية وزيادة فهم الآليات المحتملة من IBD المرضية؛ خطوة أساسية في تطوير علاجات وقائية الرواية والعلاجية. C. rodentium هو، سلبية الغرام إرفاق الفئران والأضواء (A / E) الممرض محددة البكتيرية التي ترتبط ارتباطا وثيقا البشرية الهامةممرض للأمعاء مسببات الأمراض E. القولونية (EPEC) E. والمعوى كولاي (EHEC) 3-8. عائلة A مسببات الأمراض / E إرفاق ارتباطا وثيقا غشاء الخلية المضيفة القمي من ظهارة الأعور والقولون، وتشكيل غير الغازية مثل هيكل التمثال على الخلية المضيفة. عن طريق الفم مع التحدي C. rodentium من الكائنات الحية 8 9 10 -10 تنتج نموذجا قويا من التهاب القولون المعدية التي تتميز تضخم القولون أو استطالة للالخبايا، وحيدات النوى تسلل خلية المناعة، والقدح استنفاد الخلايا 3،4. الموقع الأولي للاستعمار، بعد ساعات قليلة من التحدي، هو في التصحيح الأعور، يليه التقدم إلى القولون البعيدة 2 إلى 3 أيام بعد الإصابة 3. في سلالات الفئران مناعيا، ويتحقق إزالة مسببات المرض 3 إلى 4 أسابيع بعد الإصابة 1،3،4. ومع ذلك، العديد من سلالات معدلة وراثيا، أي الجينات ناقصة أو خروج المغلوب وقد وجد الفئران، لعرض increa (- / -)الحوار الاقتصادي الاستراتيجي أكثر عرضة للإصابة مما أدى إلى أضرار مبالغ فيها و / أو عدوى مزمنة والتهاب 9-14. استخدام هذا النموذج التهاب القولون المعدية في هذه السلالات خروج المغلوب، وكثير تفتقر الفطرية البروتينات مما يشير، وقد تم الكشف عن البروتينات لا غنى عنها في عدة المضيف جزءا لا يتجزأ من القرار العدوى المعوية والالتهابات.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم الكاشف / المواد </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> لوريا مرق </td><td> ABM </td><td> G247 </td><td> إضافة 25 غراما من مسحوق LB ل1L من الماء. الأوتوكلاف قبل استخدام. </td></tr><tr><td> لوحة أسفل مربع مع شبكة </td><td> الصياد </td><td> 08-757-11A </td><td></td></tr><tr><td> الصقر الثقافة أنبوب </td><td> Sarstedt </td><td> 62.515.006 </td><td></td></tr><tr><td> يميل لمبة إبرة بالتزقيم المعدة </td><td> أدوات العلوم الجميلة </td><td> 18060-20 </td><td></td></tr><tr><td> 1 مل حقنة </td><td> BD العلوم البيولوجية </td><td> 309659 </td><td></td></tr><tr><td> 4 كيلو دالتون FITC-ديكستران </td><td> سيجما </td><td> FD-4 </td><td></td></tr><tr><td> حامض الستريك </td><td> سيجما </td><td> C7129 &lt;/ TD&gt; <td></td></tr><tr><td> سيترات الصوديوم </td><td> الصياد </td><td> S279-500 </td><td></td></tr><tr><td> سكر العنب </td><td> الصياد </td><td> D16.1 </td><td></td></tr><tr><td> حمض سترات الدكستروز </td><td></td><td></td><td> 20 ملم حمض ctiric، 110 ملم سترات الصوديوم، 5 ملي سكر العنب </td></tr><tr><td> 96-السوداء جيدا لوحة </td><td> الصياد </td><td> 07-200-762 </td><td></td></tr><tr><td> بكرات معدنية (5 مم) </td><td> QIAGEN </td><td> 69989 </td><td></td></tr><tr><td> الفورمالين 10٪ </td><td> الصياد </td><td> 5F93-4 </td><td></td></tr><tr><td> 5 مل قارورة </td><td> DiaMed </td><td> STK3205 </td><td></td></tr><tr><td> الهيماتوكسيلين </td><td> الصياد </td><td> H345-23 </td><td></td></tr><tr><td> يوزين </td><td> الصياد </td><td> E511-100 </td><td></td></tr><tr><td> الزيلين </td><td> الصياد </td><tد&gt; HC700-1GAL </td><td></td></tr><tr><td> توين 20 </td><td> سيجما </td><td> P5927 </td><td></td></tr><tr><td> Coplin جرة تلطيخ </td><td> VWR </td><td> 47751-792 </td><td></td></tr><tr><td> سيترات الصوديوم العازلة </td><td></td><td></td><td> 10 ملم سترات الصوديوم، 0.05٪ توين 20، الرقم الهيدروجيني 6،0 </td></tr><tr><td> حلمة الثدي القلم </td><td> Cedarlane </td><td> Mu22 </td><td></td></tr><tr><td> مصل الماعز </td><td> سيجما </td><td> G902-3 </td><td></td></tr><tr><td> ألبومين المصل البقري (BSA) </td><td> الصياد </td><td> BP1600-100 </td><td></td></tr><tr><td> تريتون X-100 </td><td> سيجما </td><td> T8532 </td><td></td></tr><tr><td> أزيد الصوديوم </td><td> سيجما </td><td> SZ002 </td><td></td></tr><tr><td> حجب العازلة </td><td></td><td></td><td> 2٪ مصل الماعز، BSA 1٪، 0.1٪ تريتون X-100، 0.05٪ توين 20، الصوديوم 0.05٪أزيد، 0.01 M PBS، ودرجة الحموضة 7.2، ومزيج المحل في 4 درجات مئوية. </td></tr><tr><td> الأجسام المضادة التخفيف العازلة </td><td></td><td></td><td> 0.1٪ تريتون X-100، 0.1٪ BSA، 0.05٪ أزيد الصوديوم، EDTA 0.04٪ </td></tr><tr><td> حجب العازلة التخفيف العازلة والأجسام المضادة لالنقل البري الدولي </td><td></td><td></td><td> نفس صفات على النحو الوارد أعلاه، ولكن دون إضافة المنظفات (تريتون X-100 وتوين 20) </td></tr><tr><td> إطالة الذهب الكاشف Antifade مع دابي </td><td> إينفيتروجن </td><td> P-36931 </td><td></td></tr><tr><td> Coverslips </td><td> الصياد </td><td> 12.54SE </td><td></td></tr><tr><td> الفوق الحضانة شاكر </td><td> Barnstead مختبر الخط </td><td> ماكس Q4000 </td><td></td></tr><tr><td> مقياس التألق </td><td> بيركن إلمر </td><td> Victor2D </td><td></td></tr><tr><td> المبردة الطرد المركزي </td><td> بيكمان كولتر </td><td> Microfuge 22R</td><td></td></tr><tr><td> سفينة بخارية </td><td> بلاك اند ديكر </td><td></td><td></td></tr><tr><td> مضان المجهر </td><td> زايس </td><td> محوري Image.Z1 </td><td></td></tr></tbody></table>

the citrobacter rodentium mouse model: studying pathogen and host contributions to infectious colitis

هذا البروتوكول يحدد الخطوات المطلوبة لإنتاج نموذج قوي من الأمراض المعدية والتهاب القولون، وكذلك الطرق المستخدمة لوصف الليمونية العدوى rodentium في الفئران. C. rodentium هو، سلبية الغرام الفئران محددة الممرض البكتيرية التي ترتبط ارتباطا وثيقا الهامة سريريا الإنسان E. ممرض للأمعاء مسببات الأمراض كولاي E. وenterohemorrhagic القولونية. على الإصابة بفيروس C. rodentium والفئران مناعيا يعانون من فقدان الوزن متواضعة وعابرة والإسهال. تشريحيا، ويلاحظ المعوية سرداب استطالة، تسلل خلية المناعة، والقدح استنفاد الخلايا. ويتحقق إزالة العدوى بعد 3 إلى 4 أسابيع. قياس الأمعاء الظهارية سلامة الحاجز، الحمل البكتيري، والأضرار النسيجية في نقاط زمنية مختلفة بعد الإصابة، والسماح للتوصيف سلالات الفئران عرضة للإصابة. ضراوة آليةS من مسببات الأمراض البكتيرية التي تستعمر الأمعاء من مضيفيهم، وكذلك الردود التي تدافع عن المضيف محددة ضد الالتهابات مثل هذه غير مفهومة تماما. لذا C. نموذج rodentium من العدوى البكتيرية المعوية بمثابة أداة قيمة للمساعدة في فهمنا لهذه العمليات. كما تم البكتيريا المعوية المرتبطة أمراض التهاب الأمعاء (IBDs). فقد تم الافتراض أن الاستجابات الالتهابية المزمنة غير القادرة على التأقلم ينظر في المرضى الذين يعانون IBD تطوير الأفراد عرضة وراثيا في أعقاب التعرض غير طبيعي في نظام المناعة المخاطية المعوية للبكتيريا المعوية. ولذلك، فإن دراسة نماذج من التهاب القولون المعدية يتيح إمكانات كبيرة لتحديد الاستجابات المحتملة المسببة للأمراض المضيفة للبكتيريا المعوية. C. rodentium الناجم عن التهاب القولون هو نموذج واحد نادرة بحيث يسمح لتحليل استجابات المضيف للبكتيريا المعوية، وتعزيز فهمنا للآليات المرضية المحتملة لIBD؛أساسيا في تطوير علاجات وقائية من الرواية والعلاجية.

خلال التجربة العدوى القياسية، يصاب ما يقرب من الفئران مع 2.5 × 8 10 CFU من خلال أنبوب تغذية في C. 100 ميكرولتر بين عشية وضحاها rodentium الثقافة. إصابة الفئران C57BL / 6 مع C. النتائج rodentium في فقدان الوزن متواضعة وعابرة والإسهال. على الرغم من أن نادر الحدوث مع C...

Watch this Scientific Journal Video about The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis at JoVE.com

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

الليمونية rodentium العدوى يوفر نموذجا قيما لدراسة الالتهابات البكتيرية المعوية وكذلك استضافة الاستجابات المناعية والتهاب القولون في الفئران. هذا البروتوكول يحدد قياس سلامة الحاجز، تحميل الممرض والأضرار النسيجية السماح للتوصيف دقيق للمساهمات الممرض والمضيف لالتهاب القولون المعدية الفئران.

ال<em&gt; الليمونية rodentium</em&gt; نموذج الفأر: دراسة العوامل الممرضة والمضيفة المساهمات في التهاب القولون المعدية

This protocol  outlines the steps required to produce a robust model of infectious disease and  colitis, as well as the methods used to characterize ...

the-citrobacter-rodentium-mouse-model-studying-pathogen-host

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

26.3K Views.  BC Children's Hospital. الليمونية rodentium العدوى يوفر نموذجا قيما لدراسة الالتهابات البكتيرية المعوية وكذلك استضافة الاستجابات المناعية والتهاب القولون في الفئران. هذا البروتوكول يحدد قياس سلامة الحاجز، تحميل الممرض والأضرار النسيجية السماح للتوصيف دقيق للمساهمات الممرض والمضي...

Video: The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

Use of an Optical Trap for Study of Host-Pathogen Interactions for Dynamic Live Cell Imaging

Dynamic live cell imaging allows direct visualization of real-time interactions between cells of the immune system1, 2; however, the lack of spatial and temporal control between the phagocytic cell and microbe has rendered focused observations into the initial interactions of host response to pathogens difficult. Historically, intercellular contact events such as phagocytosis3 have been imaged by mixing two cell types, and then continuously scanning the field-of-view to find serendipitous intercellular contacts at the appropriate stage of interaction. The stochastic nature of these events renders this process tedious, and it is difficult to observe early or fleeting events in cell-cell contact by this approach. This method requires finding cell pairs that are on the verge of contact, and observing them until they consummate their contact, or do not. To address these limitations, we use optical trapping as a non-invasive, non-destructive, but fast and effective method to position cells in culture.
Optical traps, or optical tweezers, are increasingly utilized in biological research to capture and physically manipulate cells and other micron-sized particles in three dimensions4. Radiation pressure was first observed and applied to optical tweezer systems in 19705, 6, and was first used to control biological specimens in 19877. Since then, optical tweezers have matured into a technology to probe a variety of biological phenomena8-13.
We describe a method14 that advances live cell imaging by integrating an optical trap with spinning disk confocal microscopy with temperature and humidity control to provide exquisite spatial and temporal control of pathogenic organisms in a physiological environment to facilitate interactions with host cells, as determined by the operator. Live, pathogenic organisms like Candida albicans and Aspergillus fumigatus, which can cause potentially lethal, invasive infections in immunocompromised individuals15, 16 (e.g. AIDS, chemotherapy, and organ transplantation patients), were optically trapped using non-destructive laser intensities and moved adjacent to macrophages, which can phagocytose the pathogen. High resolution, transmitted light and fluorescence-based movies established the ability to observe early events of phagocytosis in living cells. To demonstrate the broad applicability in immunology, primary T-cells were also trapped and manipulated to form synapses with anti-CD3 coated microspheres in vivo, and time-lapse imaging of synapse formation was also obtained. By providing a method to exert fine spatial control of live pathogens with respect to immune cells, cellular interactions can be captured by fluorescence microscopy with minimal perturbation to cells and can yield powerful insight into early responses of innate and adaptive immunity.

A method is described to individually select, manipulate, and image live pathogens using an optical trap coupled to a spinning disk microscope. The optical trap provides spatial and temporal control of organisms and places them adjacent to host cells. Fluorescence microscopy captures dynamic intercellular interactions with minimal perturbation to cells.

استخدام اعتراض البصرية لدراسة التفاعلات المرضي المضيف الحيوي للخلية الحية التصوير

Dynamic live cell imaging allows direct visualization of real-time interactions between cells of the immune system1, 2; however, the lack of spatial and ...

Use of the EpiAirway Model for Characterizing Long-term Host-pathogen Interactions

Nontypeable Haemophilus influenzae (NTHi) are human-adapted Gram-negative bacteria that can cause recurrent and chronic infections of the respiratory mucosa 1; 2. To study the mechanisms by which these organisms survive on and inside respiratory tissues, a model in which successful long-term co-culture of bacteria and human cells can be performed is required. We use primary human respiratory epithelial tissues raised to the air-liquid interface, the EpiAirway model (MatTek, Ashland, MA). These are non-immortalized, well-differentiated, 3-dimensional tissues that contain tight junctions, ciliated and nonciliated cells, goblet cells that produce mucin, and retain the ability to produce cytokines in response to infection. 
This biologically relevant in vitro model of the human upper airway can be used in a number of ways; the overall goal of this method is to perform long-term co-culture of EpiAirway tissues with NTHi and quantitate cell-associated and internalized bacteria over time. As well, mucin production and the cytokine profile of the infected co-cultures can be determined. This approach improves upon existing methods in that many current protocols use submerged monolayer or Transwell cultures of human cells, which are not capable of supporting bacterial infections over extended periods3. For example, if an organism can replicate in the overlying media, this can result in unacceptable levels of cytotoxicity and loss of host cells, arresting the experiment. The EpiAirway model allows characterization of long-term host-pathogen interactions. Further, since the source for the EpiAirway is normal human tracheo-bronchial cells rather than an immortalized line, each is an excellent representation of actual human upper respiratory tract tissue, both in structure and in function4.
For this method, the EpiAirway tissues are weaned off of anti-microbial and anti-fungal compounds for 2 days prior to delivery, and all procedures are performed under antibiotic-free conditions. This necessitates special considerations, since both bacteria and primary human tissues are used in the same biosafety cabinet, and are co-cultured for extended periods.

This method allows characterization of extended bacterial co-culture with EpiAirways, primary human respiratory epithelial tissue grown at the air-liquid interface, a biologically relevant in vitro model. The approach can be used with any microbe that is amenable to long-term co-culture.

استخدام نموذج لوصف EpiAirway طويل الأجل المضيف الممرض التفاعلات

Nontypeable Haemophilus influenzae  (NTHi) are human-adapted Gram-negative bacteria that can cause recurrent and chronic infections of the respiratory ...

A Comparative Approach to Characterize the Landscape of Host-Pathogen Protein-Protein Interactions

Significant efforts were gathered to generate large-scale comprehensive protein-protein interaction network maps. This is instrumental to understand the pathogen-host relationships and was essentially performed by genetic screenings in yeast two-hybrid systems. The recent improvement of protein-protein interaction detection by a Gaussia luciferase-based fragment complementation assay now offers the opportunity to develop integrative comparative interactomic approaches necessary to rigorously compare interaction profiles of proteins from different pathogen strain variants against a common set of cellular factors.
This paper specifically focuses on the utility of combining two orthogonal methods to generate protein-protein interaction datasets: yeast two-hybrid (Y2H) and a new assay, high-throughput Gaussia princeps protein complementation assay (HT-GPCA) performed in mammalian cells.
A large-scale identification of cellular partners of a pathogen protein is performed by mating-based yeast two-hybrid screenings of cDNA libraries using multiple pathogen strain variants. A subset of interacting partners selected on a high-confidence statistical scoring is further validated in mammalian cells for pair-wise interactions with the whole set of pathogen variants proteins using HT-GPCA. This combination of two complementary methods improves the robustness of the interaction dataset, and allows the performance of a stringent comparative interaction analysis. Such comparative interactomics constitute a reliable and powerful strategy to decipher any pathogen-host interplays.

This article focuses on the identification of high-confident interaction datasets between host and pathogen proteins using a combination of two orthogonal methods: yeast two-hybrid followed by a high-throughput interaction assay in mammalian cells called HT-GPCA.

A المنهج المقارن لتوصيف المشهد من المضيف الممرض البروتين البروتين التفاعلات

Significant efforts were gathered to generate  large-scale comprehensive protein-protein interaction network maps. This is  instrumental to understand the ...

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

This protocol outlines the steps required to longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging tomography with integrated &mu;CT (DLIT-&mu;CT) and the subsequent use of this data to generate a four dimensional (4D) movie of the infection cycle. To develop the 4D infection movies and to validate the DLIT-&mu;CT imaging for bacterial infection studies using an IVIS Spectrum CT, we used infection with bioluminescent C. rodentium, which causes self-limiting colitis in mice. In this protocol, we outline the infection of mice with bioluminescent C. rodentium and non-invasive monitoring of colonization by daily DLIT-&mu;CT imaging and bacterial enumeration from feces for 8 days.
The use of the IVIS Spectrum CT facilitates seamless co-registration of optical and &mu;CT scans using a single imaging platform. The low dose &mu;CT modality enables the imaging of mice at multiple time points during infection, providing detailed anatomical localization of bioluminescent bacterial foci in 3D without causing artifacts from the cumulative radiation. Importantly, the 4D movies of infected mice provide a powerful analytical tool to monitor bacterial colonization dynamics in vivo.

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

Multi-modality imaging is a valuable approach for studying bacterial colonization in small animal models. This protocol outlines infection of mice with bioluminescent Citrobacter rodentium and the longitudinal monitoring of bacterial colonization using composite 3D diffuse light imaging tomography with &mu;CT imaging to create a 4D movie of C. rodentium infection.

4D التصوير تعدد الوسائط من<em&gt; الليمونية rodentium</em&gt; التهابات في الفئران

This protocol outlines the steps required to  longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging ...

Using Click Chemistry to Measure the Effect of Viral Infection on Host-Cell RNA Synthesis

Many RNA viruses have evolved the ability to inhibit host cell transcription as a means to circumvent cellular defenses. For the study of these viruses, it is therefore important to have a quick and reliable way of measuring transcriptional activity in infected cells. Traditionally, transcription has been measured either by incorporation of radioactive nucleosides such as 3H-uridine followed by detection via autoradiography or scintillation counting, or incorporation of halogenated uridine analogs such as 5-bromouridine (BrU) followed by detection via immunostaining. The use of radioactive isotopes, however, requires specialized equipment and is not feasible in a number of laboratory settings, while the detection of BrU can be cumbersome and may suffer from low sensitivity.
The recently developed click chemistry, which involves a copper-catalyzed triazole formation from an azide and an alkyne, now provides a rapid and highly sensitive alternative to these two methods. Click chemistry is a two step process in which nascent RNA is first labeled by incorporation of the uridine analog 5-ethynyluridine (EU), followed by detection of the label with a fluorescent azide. These azides are available as several different fluorophores, allowing for a wide range of options for visualization.
This protocol describes a method to measure transcriptional suppression in cells infected with the Rift Valley fever virus (RVFV) strain MP-12 using click chemistry. Concurrently, expression of viral proteins in these cells is determined by classical intracellular immunostaining. Steps 1 through 4 detail a method to visualize transcriptional suppression via fluorescence microscopy, while steps 5 through 8 detail a method to quantify transcriptional suppression via flow cytometry. This protocol is easily adaptable for use with other viruses.

This method describes the use of click chemistry to measure changes in host cell transcription after infection with the Rift Valley fever virus (RVFV) strain MP-12. Results can be visualized qualitatively via fluorescence microscopy or obtained quantitatively through flow cytometry. This method is adaptable for use with other viruses.

باستخدام الكيمياء فوق لقياس تأثير عدوى فيروسية في خلية المضيف RNA التجميعي

Many RNA viruses have evolved the ability to inhibit host cell transcription as a means to circumvent cellular defenses. For the study of these viruses, ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including neoplastic, autoimmune, and chronic inflammatory diseases. Emerging evidence implicates pathogen-induced chronic inflammation in the development and progression of chronic diseases with a wide variety of clinical manifestations. Due to the complex and multifactorial etiology of chronic disease, designing experiments for proof of causality and the establishment of mechanistic links is nearly impossible in humans. An advantage of using animal models is that both genetic and environmental factors that may influence the course of a particular disease can be controlled. Thus, designing relevant animal models of infection represents a key step in identifying host and pathogen specific mechanisms that contribute to chronic inflammation.
Here we describe a mouse model of pathogen-induced chronic inflammation at local and systemic sites following infection with the oral pathogen Porphyromonas gingivalis, a bacterium closely associated with human periodontal disease. Oral infection of specific-pathogen free mice induces a local inflammatory response resulting in destruction of tooth supporting alveolar bone, a hallmark of periodontal disease. In an established mouse model of atherosclerosis, infection with P. gingivalis accelerates inflammatory plaque deposition within the aortic sinus and innominate artery, accompanied by activation of the vascular endothelium, an increased immune cell infiltrate, and elevated expression of inflammatory mediators within lesions. We detail methodologies for the assessment of inflammation at local and systemic sites. The use of transgenic mice and defined bacterial mutants makes this model particularly suitable for identifying both host and microbial factors involved in the initiation, progression, and outcome of disease. Additionally, the model can be used to screen for novel therapeutic strategies, including vaccination and pharmacological intervention.

Animal models have proven to be invaluable tools in defining host and pathogen specific mechanisms that contribute to the development of chronic inflammation. Here we describe a mouse model of oral infection with the human pathogen Porphyromonas gingivalis and detail methodologies to assess the progression of inflammation at local and systemic sites.

نموذج الفأر لالتهاب الناجم عن مسببات الأمراض المزمنة في مواقع المحلية والجهازية

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Experimental Infection with Listeria monocytogenes as a Model for Studying Host Interferon-&#947; Responses

L. monocytogenes is a gram-positive bacterium that is a cause of food borne disease in humans. Experimental infection of mice with this pathogen has been highly informative on the role of innate and adaptive immune cells and specific cytokines in host immunity against intracellular pathogens. Production of IFN-&#947; by innate cells during sublethal infection with L. monocytogenes is important for activating macrophages and early control of the pathogen1-3. In addition, IFN-&#947; production by adaptive memory lymphocytes is important for priming the activation of innate cells upon reinfection4. The L. monocytogenes infection model thus serves as a great tool for investigating whether new therapies that are designed to increase IFN-&#947; production have an impact on IFN-&#947; responses in vivo and have productive biological effects such as increasing bacterial clearance or improving mouse survival from infection. Described here is a basic protocol for how to conduct intraperitoneal infections of C57BL/6J mice with the EGD strain of L. monocytogenes and to measure IFN-&#947; production by NK cells, NKT cells, and adaptive lymphocytes by flow cytometry. In addition, procedures are described to: (1) grow and prepare the bacteria for inoculation, (2) measure bacterial load in the spleen and liver, and (3) measure animal survival to endpoints. Representative data are also provided to illustrate how this infection model can be used to test the effect of specific agents on IFN-&#947; responses to L. monocytogenes and survival of mice from this infection.

Experimental Infection with &lt;em&gt;Listeria monocytogenes&lt;/em&gt; as a Model for Studying Host Interferon-&amp;#947; Responses

This protocol describes how to inoculate C57BL/6J mice with the EGD strain of Listeria monocytogenes (L. monocytogenes) and to measure interferon-&#947; (IFN-&#947;) responses by natural killer (NK) cells, natural killer T (NKT) cells, and adaptive T lymphocytes post-infection. This protocol also describes how to conduct survival studies in mice after infection with a modified LD50 dose of the pathogen.

العدوى التجريبية مع<em&gt; المستوحدة الليستيريا</em&gt; نموذجا لدراسة المضيف الردود انترفيرون γ

L. monocytogenes is a gram-positive bacterium that is a cause of food borne disease in humans. Experimental infection of mice with this pathogen has been ...

An Ex Vivo Chicken Primary Bursal-cell Culture Model to Study Infectious Bursal Disease Virus Pathogenesis

Infectious bursal disease virus (IBDV) is a birnavirus of economic importance to the poultry industry. The virus infects B cells, causing morbidity, mortality, and immunosuppression in infected birds. In this study, we describe the isolation of chicken primary bursal cells from the bursa of Fabricius, the culture and infection of the cells with IBDV, and the quantification of viral replication. The addition of chicken CD40 ligand significantly increased cell proliferation fourfold over six days of culture and significantly enhanced cell viability. Two strains of IBDV, a cell-culture adapted strain, D78, and a very virulent strain, UK661, replicated well in the ex vivo cell cultures. This model will be of use in determining how cells respond to IBDV infection and will permit a reduction in the number of infected birds used in IBDV pathogenesis studies. The model can also be expanded to include other viruses and could be applied to different species of birds.

An Ex Vivo Chicken Primary Bursal-cell Culture Model to Study Infectious Bursal Disease Virus Pathogenesis

Here we describe the isolation of chicken primary bursal cells from the bursa of Fabricius, the culture and infection of the cells with infectious bursal disease virus, and the quantification of viral replication.

نموذج السابقين فيفو الابتدائي بورسال خلية ثقافة دجاج لدراسة الأمراض المعدية بورسال الفيروسات المرضية

Infectious bursal disease virus (IBDV) is a birnavirus of economic importance to the poultry industry. The virus infects B cells, causing morbidity, ...

Using a Bacterial Pathogen to Probe for Cellular and Organismic-level Host Responses

There are a variety of strategies bacterial pathogens employ to survive and proliferate once inside the eukaryotic cell. The so-called 'cytosolic' pathogens (Listeria monocytogenes, Shigella flexneri, Burkholderia pseudomallei, Francisella tularensis, and Rickettsia spp.) gain access to the infected cell cytosol by physically and enzymatically degrading the primary vacuolar membrane. Once in the cytosol, these pathogens both proliferate as well as generate sufficient mechanical forces to penetrate the plasma membrane of the host cell in order to infect new cells. Here, we show how this terminal step of the cellular infection cycle of L. monocytogenes (Lm) can be quantified by both colony-forming unit assays and flow cytometry and give examples of how both pathogen- and host-encoded factors impact this process. We also show a close correspondence of Lm infection dynamics of cultured cells infected in vitro and those of hepatic cells derived from mice infected in vivo. These function-based assays are relatively simple and can be readily scaled up for discovery-based high-throughput screens for modulators of eukaryotic cell function.

We describe both in vitro and in vivo infection assays that can be used to analyze the activities of host-encoding factors.

استخدام مسببات الأمراض بكتيرية للتحقيق لاستجابات المضيف الخلوية ومستوى أورجانيسميك

There are a variety of strategies bacterial pathogens employ to survive and proliferate once inside the eukaryotic cell. The so-called 'cytosolic' ...

Evaluation of Host-Pathogen Responses and Vaccine Efficacy in Mice

Vaccines are a 20th century medical marvel. They have dramatically reduced the morbidity and mortality caused by infectious diseases and contributed to a striking increase in life expectancy around the globe. Nonetheless, determining vaccine efficacy remains a challenge. Emerging evidence suggests that the current acellular vaccine (aPV) for Bordetella pertussis (B. pertussis) induces suboptimal immunity. Therefore, a major challenge is designing a next-generation vaccine that induces protective immunity without the adverse side effects of a whole-cell vaccine (wPV). Here we describe a protocol that we used to test the efficacy of a promising, novel adjuvant that skews immune responses to a protective Th1/Th17 phenotype and promotes a better clearance of a B. pertussis challenge from the murine respiratory tract. This article describes the protocol for mouse immunization, bacterial inoculation, tissue harvesting, and analysis of immune responses. Using this method, within our model, we have successfully elucidated crucial mechanisms elicited by a promising, next-generation acellular pertussis vaccine. This method can be applied to any infectious disease model in order to determine vaccine efficacy.

Here we present an elegant protocol for in vivo evaluation of vaccine effectiveness and host immune responses. This protocol can be adapted for vaccine models that study viral, bacterial, or parasitic pathogens.

تقييم استجابات المضيف الممرض ونجاعة اللقاح في الفئران

Vaccines are a 20th century medical marvel. They have dramatically reduced the morbidity and mortality caused by infectious diseases and contributed to a ...