وأيد هذا العمل من المنح المقدمة التشغيل لBAV من كرون والتهاب القولون مؤسسة كندا (CCFC) والمعاهد الكندية لأبحاث الصحة (CIHR). وقد تم تمويل GB من قبل منحة دراسية عليا من CIHR. BAV هو الأطفال الذين يعانون من الاضطرابات المعوية والكبد (الطفل) رئيس مؤسسة البحوث IBD الأطفال وكرسي أبحاث أمراض الجهاز الهضمي للأطفال في كندا.

1. إعداد اللقاح والليمونية rodentium بالتزقيم عن طريق الفم للفئران <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد والأوتوكلاف لوريا Bertani مرق (LB). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول C. قابلة للحياة rodentium من الأسهم المجمدة والجلسرين متتالية على لوحة LB أجار باستخدام حلقة عقيمة أو تلميح ماصة بتلقيح. احتضان عند 37 درجة مئوية خلال الليل. تطعيم 3 مل من مرق LB العقيمة في أنبوب الصقر مع ثقافة المستعمرات من لوحة LB باستخدام حلقة بتلقيح أو تلميح ماصة. وينبغي أن يتم إعداد اللقاح باستخدام تقنيات العقيم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان C. ثقافة rodentium هوائيا في 37 درجة مئوية خلال الليل في الحضانة الفوق شاكر في 200 دورة في الدقيقة. ينبغي للمرق LB تلقيح تظهر بعد غائم الثقافة بين عشية وضحاها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يميل استخدام لمبة إبرة بالتزقيم المعدة تعلق على حقنة 1 مل لتسمين كل الماوس مع 100 ميكرولتر من C. بين عشية وضحاها rodentium الثقافة. القفا بلطف الماوس، من خلال استيعاب بشدة الجلد المترهل حول الرقبة والظهرمع الإبهام والأصابع. سحب رأس الحيوان مع السبابة لشل الرأس وتصويب المريء لإدخال الإبرة تسمين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على الماوس في وضع رأسي وتوجيه نصيحة لمبة من الإبرة بالتزقيم على طول الجانب من فمه وأكثر من لغتها. تمرير الإبرة بلطف على طول سقف الفم ودفعها إلى أسفل المريء. إذا كان هناك أي مقاومة شعرت خلال هذا الإجراء، وإزالة الإبرة بالتزقيم وإعادة إدراجها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن ببطء 100 ميكرولتر من اللقاح البكتيري وإزالة الإبرة بلطف تسمين. رصد معدل التنفس وسلوك الماوس بعد إعادته إلى قفصه. </li></ol> ملاحظات: <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في الخطوات 2 و 3، وإعداد أيضا أنبوب الثقافة الصقر باستخدام تقنيات العقيم مع 3 مل من مرق LB العقيمة بين عشية وضحاها ليكون مثقف لضمان عدم وجود التلوث الجرثومي من مرق نفسه. يجب أن تظهر واضحة مرق LB بعد الثقافة بين عشية وضحاها. </li><lط&gt; برفق تستنهض الهمم الثقافة داخل أنبوب الصقر قبل التحميل الحقن لبالتزقيم بحيث يتم تسليم جرعة متساوية من البكتيريا إلى كل الماوس، في الخطوة 4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يجب التخلص من ثقافة بين عشية وضحاها إذا تم تلقيح أكثر من 24 لأنها ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جميع C. وينبغي إجراء العدوى rodentium والإسكان في الحيوانات المصابة في منشأة السلامة الأحيائية المستوى 2. </li></ul> 2. قياس نفاذية الجدار القولون الظهارية في C. rodentium الفئران المصابة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس سلامة الحاجز في نقطة الوقت المطلوب بعد العدوى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في يوم الفحص، وإعداد ما يكفي من ثيوسيانات فلوريسئين 4 كيلو دالتون (FITC)-ديكستران الذائبة في الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) إلى تركيز 80 مل -1 ملغ إلى تسمين كل الماوس مع 150 ميكرولتر وإعداد منحنى القياسية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> القفا الماوس وبالتزقيم مع 150 ميكرولتر من FITC-ديكستران. سحب الطعام من القفص في هذا الوقت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفئران بعد 4 ساعاتgavaging وجمع أكبر قدر ممكن من الدم (~ 450 ميكرولتر) من خلال ثقب في القلب. إضافة الدم إلى تركيز النهائي من سكر العنب حامض سيترات 3٪ في أنبوب microcentrifuge لردع التخثر. الموت ببطء الفئران وجمع أنسجة القولون في برنامج تلفزيوني لتحديد أعداد البكتيريا (الخطوات 3،1 حتي 3،5) والفورمالين 10٪ في لتثبيت الأنسجة وتلطيخ في نهاية المطاف المناعي (الخطوات 4،1 حتي 4،8). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدور عينات الدم في 1،000 x ج لمدة 12 دقيقة في جهاز للطرد المركزي في C. ° 4 جمع المصل ويخفف إلى 10/1 و 1 100 / في برنامج تلفزيوني. إضافة 100 ميكرولتر من كل عينة في هذه التخفيفات سنتين إلى لوحة 96 بشكل جيد في مكررات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لإعداد منحنى القياسية، تخفيف الأصلي 80 ملغ مل -1 FITC-ديكستران تستخدم لتسمين الفئران في برنامج تلفزيوني على التركيزات التالية: 800، 400، 200، 100، 50، 25، 12.5، 6.25، و 0 ميكروغرام / مل . إضافة 100 ميكرولتر من كل تركيز لوحة 96 أيضا في ثلاث نسخ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس مضان من كل عينة باستخدام مقياس التألق في لWAV الإثارةelength من 485 نانومتر و 535 نانومتر الطول الموجي الانبعاثات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحليل البيانات الخام عن طريق التآمر منحنى القياسية. إدخال البيانات الخام لكل عينة في المعادلة من خط إنشاؤها بواسطة منحنى القياسية لتحديد تركيز FITC-ديكستران في كل عينة. </li></ol> ملاحظات: <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> من فصاعدا 4 الخطوة، والحفاظ على عينات الدم على الجليد وتقليل التعرض للضوء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عند قياس سلامة طلائي الحاجز نقطة في الوقت، أو قبل، 7 أيام بعد الإصابة هو الأمثل، وشديدة تلف الأنسجة يحدث بعد هذه المرحلة. قياس سلامة الحاجز قبل قوع أضرار جسيمة يسمح لك لتحديد الاختلافات القصوى في النفاذية خلال C. عدوى rodentium بين سلالات الفئران. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضمان أن يتم اختبار السيطرة على الفئران غير المصابة أيضا لسلامة حاجز الظهارية. </li></ul> 3. قياس الحمل البكتيري في أنسجة C. rodentium الفئران المصابة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 1 مل العقيمة PBS علىالثانية أدنى من المعادن تعقيمها حبة إلى الدور 2 مل أنبوب الطرد المركزي باستخدام تقنية العقيم. سيتم وضع الأنسجة الفردية التي تم جمعها من كل حيوان في أنابيب PBS منفصلة. وزن الأنابيب قبل إضافة الأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الأعور والقولون من الماوس. فصل من الأعور والقولون وطرد محتويات اللمعية باستخدام ملقط. إضافة إلى محتويات أنبوب PBS. بعد فصل الأقسام 0.5 سم من القولون الأعور عن القاصي وتثبيت الفورمالين 10٪، وخفض فتح القولون الأعور المتبقية وطوليا ويغسل مع PBS معقمة قبل وضعها في أنابيب الأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وزن الأنابيب PBS مع الأنسجة ومن ثم التجانس العينات باستخدام الخافق حبة لمدة 6 دقائق عند 30 هرتز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام تقنيات العقيم، اضافة 180 ميكرولتر PBS معقمة لكل بئر لوحة 96 أيضا. إضافة 20 ميكرولتر من كل عينة متجانسة إلى البئر الأولى في كل صف. تخلط جيدا وتخفيف متسلسل، مضيفا 20 ميكرولتر من كل جانب السابقة للحصول على التخفيفات من 10 -1 (أولا نحنليرة لبنانية) ل10 -6. لوحة 10 ميكرولتر من كل عينة من كل تخفيف من ثلاث نسخ على لوحة أسفل LB مربع مع شبكة. احتضان بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عد الوحدات مستعمرة تشكيل (CFU)، ثم التهم متوسط ​​3، وسجل في التخفيف الذي كان يحسب كل عينة. مضاعفة متوسط ​​CFU بنسبة 50، كما تم استخدام 20 ميكرولتر من العينة الأصلية 1 مل، وعامل التخفيف الذي كان يحسب العينة مما أدى إلى CFU / مل. وأخيرا، القسمة على وزن الأنسجة لتحديد CFU / ز. </li></ol> 4. تقييم النسيجية وتلوين المناعي للأنسجة المصابة القولون <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع الأنسجة كما في الخطوة 3.2. بين عشية وضحاها في الأنسجة متجر الفورمالين، ثم تغسل مع الايثانول 70٪. تضمين الأنسجة في البارافين وقطع 5 أقسام ميكرومتر لتلطيخ. وصمة عار مع الهيماتوكسيلين ويوزين لتقييم النسيجية، والشروع في الخطوات التالية لتلطيخ المناعي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لdeparaffinize الأنسجة قبل تلطيخ، مكان الشرائح فيجرة تلطيخ coplin وضعها في حمام مائي 65 ° C لمدة 10 دقيقة. المقبل، والشرائح مكان في الزيلين لمدة أربعة يغسل من 2 دقيقة لكل منهما. وينبغي بعد ذلك أن الشرائح ميهت مع يغسل 5 دقائق بالسيارة اثنين في الإيثانول بنسبة 100٪، تليها واحدة 5 دقائق يغسل في كل مما يلي: الإيثانول 95٪، والإيثانول 75٪ و2 0 درهم. وينبغي أن يتم في هذه يغسل غطاء الدخان لتجنب التعرض لأبخرة ضارة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الشرائح مكان في جرة مع coplin قبل تحسنت الصوديوم سترات عازلة ومن ثم إلى مكان باخرة لمدة 30 دقيقة، ثم ترك الجلوس لمدة 30 دقيقة. هذه العملية يكسر البروتين عبر وصلات التثبيت الفورمالين التي شكلتها استرداد مواقع مستضدي المحتملة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يغسل مع أزيد PBS لمدة 5 دقائق، ثلاث مرات. الشرائح الجافة ومنطقة في جميع أنحاء الأنسجة علامة بالقلم PAP لخلق حاجز مسعور، والحفاظ على الكواشف تلطيخ مترجمة على الأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كتلة الأنسجة لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة مع العازلة حظر (مثل α-الماعز المصل) في غرفة الرطوبة المناعية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمييع متزمتARY الأجسام المضادة لتركيز المطلوب باستخدام الأجسام المضادة العازلة التخفيف. صب قبالة حجب العازلة وإضافة 50-100 ميكرولتر من الأجسام المضادة الأولية إلى الأنسجة. احتضان عند 4 ° C أو بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة لمدة 2 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يغسل مع أزيد PBS لمدة 5 دقائق، ثلاث مرات. إضافة 50-100 ميكرولتر من الأجسام المضادة الثانوية مخففة في التخفيف العازلة الأجسام المضادة إلى الأنسجة واحتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة 1 ساعة في الظلام. يغسل مع DH 2 O لمدة 5 دقائق، ثلاث مرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يذوى الشرائح، إضافة دابي إطالة المتوسطة الذهب المتزايدة وتطبيق ساترة. عرض الشرائح تحت المجهر مضان. </li></ol> ملاحظات: <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يمكن أن تكون بديلا PBS أزيد مع PBS الطازجة كبديل لتجنب نمو البكتيريا في غسل المتوسطة من 4 الخطوة فصاعدا. </li></ul>

<ol>
	<li>Nell, S., Seurbaum, S., Josenhans, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+microbiota+on+the+pathogenesis+of+IBD:+lessons+from+mouse+infection+models.">The impact of microbiota on the pathogenesis of IBD: lessons from mouse infection models.</a> Nature Reviews Microbiology. 8, 564-577 (2010).</li><li>Cario, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+Receptors+in+Inflammatory+Bowel+Diseases:+A+Decade+Later.">Toll-like Receptors in Inflammatory Bowel Diseases: A Decade Later.</a> Inflammatory Bowel Diseases. 16 (9), 1583-1597 (2010).</li><li>Eckmann, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+Models+of+Inflammatory+Bowel+Disease.">Animal Models of Inflammatory Bowel Disease.</a> Annals New York Academy of Sciences. , 1027-38 (2006).</li><li>Mundy, R., MacDonald, T. T., Dougan, G., Frankel, G., Wiles, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Citrobacter+rodentium+of+mice+and+man.">Citrobacter rodentium of mice and man.</a> Cellular Microbiology. 7, 1697-1706 (2005).</li><li>Luperchio, S., Schauer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+pathogenesis+of+Citrobacter+rodentium+and+transmissible+murine+colonic+hyperplasia.">Molecular pathogenesis of Citrobacter rodentium and transmissible murine colonic hyperplasia.</a> Microbes and Infection. 3 (4), 333-340 (2001).</li><li>Bergstrom, K. S., Sham, H. P., Zarepour, M., Vallance, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+host+responses+to+enteric+bacterial+pathogens:+a+balancing+act+between+resistance+and+tolerance.">Innate host responses to enteric bacterial pathogens: a balancing act between resistance and tolerance.</a> Cellular Microbiology. 14, 475-484 (2012).</li><li>MacDonald, T. T., Frankel, G., Dougan, G., Goncalves, N. S., Simmons, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+defences+to+Citrobacter+rodentium.">Host defences to Citrobacter rodentium.</a> International Journal of Medical Microbiology. 293, 87-93 (2003).</li><li>Borenshtein, D., McBee, M. E., Schauer, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utility+of+the+Citrobacter+rodentium+infection+model+in+laboratory+mice.">Utility of the Citrobacter rodentium infection model in laboratory mice.</a> Current Opinion in Gastroenterology. 24, 32-37 (2008).</li><li>Gibson, D. L., Ma, C., Rosenberger, C. M., Bergstrom, K. S. B., Valdez, Y., Huang, J. T., Khan, M. A., Vallance, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+receptor+2+plays+a+critical+role+in+maintaining+mucosal+integrity+during+Citrobacter+rodentium-induced+colitis.">Toll-like receptor 2 plays a critical role in maintaining mucosal integrity during Citrobacter rodentium-induced colitis.</a> Cellular Microbiology. 10, 388-403 (2008).</li><li>Dennis, A., Kudo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+p50+subunit+of+NF-&#954;B+is+critical+for+in+vivo+clearance+of+the+non-invasive+enteric+pathogen+Citrobacter+rodentium.">The p50 subunit of NF-&#954;B is critical for in vivo clearance of the non-invasive enteric pathogen Citrobacter rodentium.</a> Infection &amp; Immunity. 76 (11), 4978-4988 (2008).</li><li>Gibson, D. L., Ma, C., Bergstrom, K. S. B., Huang, J. T., Man, C., Vallance, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MyD88+signalling+plays+a+critical+role+in+host+defence+by+controlling+pathogen+burden+and+promoting+epithelial+cell+homeostasis+during+Citrobacter+rodentium-induced+colitis.">MyD88 signalling plays a critical role in host defence by controlling pathogen burden and promoting epithelial cell homeostasis during Citrobacter rodentium-induced colitis.</a> Cellular Microbiology. 10 (3), 618-631 (2008).</li><li>Lebeis, S. L., Bommarius, B., Parkos, C. A., Sherman, M. A., Kalman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TLR+signaling+mediated+by+MyD88+is+required+for+a+protective+innate+immune+response+by+neutrophils+to+Citrobacter+rodentium.">TLR signaling mediated by MyD88 is required for a protective innate immune response by neutrophils to Citrobacter rodentium.</a> Journal of Immunology. 179 (1), 566-577 (2007).</li><li>Bry, L., Brenner, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+role+of+T+cell+dependent+serum+antibody,+but+not+the+gut-associated+lymphoid+tissue,+for+surviving+acute+mucosal+infection+with+Citrobacter+rodentium,+an+attaching+and+effacing+pathogen.">Critical role of T cell dependent serum antibody, but not the gut-associated lymphoid tissue, for surviving acute mucosal infection with Citrobacter rodentium, an attaching and effacing pathogen.</a> Journal of Immunology. 172 (1), 433-441 (2004).</li><li>Simmons, C. P., Clare, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+role+for+B+lymphocytes+and+CD4++T+cells+in+immunity+to+infection+by+the+attaching+and+effacing+pathogen+Citrobacter+rodentium.">Central role for B lymphocytes and CD4+ T cells in immunity to infection by the attaching and effacing pathogen Citrobacter rodentium.</a> Infection &amp; Immunity. 71 (9), 5077-5086 (2003).</li><li>Ahmed, I., Chandrakesan, P., Tawfik, O., Xia, L., Anant, S., Umar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+Roles+of+Notch+and+Wnt/&#946;-Catenin+Pathways+in+the+Regulation+of+Hyperplasia+and/or+Colitis+in+Response+to+Bacterial+Infection.">Critical Roles of Notch and Wnt/&#946;-Catenin Pathways in the Regulation of Hyperplasia and/or Colitis in Response to Bacterial Infection.</a> Infection &amp; Immunity. 80 (9), 3107-3121 (2012).</li></ol>

الكتاب تعلن أنه ليس لديهم المصالح المتنافسة المالية.

الليمونية rodentium العدوى يوفر نموذجا قيما لدراسة كل الأمراض المعدية والتهاب القولون في الفئران. هذا النموذج الفريد يسمح لتوصيف كل من الاستجابات المضيفة، فضلا عن الخصائص المسببة للأمراض من البكتيريا. حدد الخطوات في هذا التفصيل بروتوكول نجاح استخدام هذا النموذج. </...

العدوى عن طريق مسببات الأمراض البكتيرية المعوية المعدية المعوية يتسبب (GI) التهاب، وكذلك الأمراض المعوية والفيزيولوجيا المرضية، بما في ذلك الإسهال والأمعاء الظهارية ضعف الجدار. ولا يزال الغموض يكتنف آليات الفوعة من مسببات الأمراض البكتيرية التي استعمار الجهاز الهضمي من مضيفيهم، وكذلك الردود التي تدافع عن المضيف محددة ضد الالتهابات مثل هذه، بدأت التطورات الحديثة في النمذجة ومع ذلك من الالتهابات البكتيرية المعوية لمساعدتنا على فهم هذه العمليات. كما تم البكتيريا المعوية المرتبطة أمراض التهاب الأمعاء (IBDs). مرض كرون في IBDs (CD) وUC هي أمراض معقدة من مرض غير معروف، يتميز التهاب الأمعاء المزمن وتلف الأنسجة. نماذج الماوس العديد من الالتهابات المعوية موجودة، من التهاب عفوية في سلالات معدلة وراثيا، مثل IL10 - / - الفئران، لمواجهة التحديات مع المركبات الكيميائية، مثل كبريتات الصوديوم ديكستران (DSS) ودinitrobenzene حمض السلفونيك (DNBS) 1. فقد تم الافتراض أن الاستجابات الالتهابية المزمنة غير القادرة على التأقلم موجودة في المرضى IBD تطوير الأفراد في وراثيا عرضة عند التعرض غير طبيعي في نظام المناعة المخاطية المعوية للبكتيريا المعوية 2، ولذلك دراسة نماذج من التهاب القولون المعدية كما يقدم إمكانية كبيرة لتحديد المضيف المحتمل المسببة للأمراض . الردود على البكتيريا المعوية التي يسببها التهاب القولون rodentium الليمونية هي واحدة من النماذج النادرة من التهاب القولون المعدية التي تميزت جيدا 1،3، مما يسمح لتحليل استجابات المضيف للبكتيريا المعوية وزيادة فهم الآليات المحتملة من IBD المرضية؛ خطوة أساسية في تطوير علاجات وقائية الرواية والعلاجية. C. rodentium هو، سلبية الغرام إرفاق الفئران والأضواء (A / E) الممرض محددة البكتيرية التي ترتبط ارتباطا وثيقا البشرية الهامةممرض للأمعاء مسببات الأمراض E. القولونية (EPEC) E. والمعوى كولاي (EHEC) 3-8. عائلة A مسببات الأمراض / E إرفاق ارتباطا وثيقا غشاء الخلية المضيفة القمي من ظهارة الأعور والقولون، وتشكيل غير الغازية مثل هيكل التمثال على الخلية المضيفة. عن طريق الفم مع التحدي C. rodentium من الكائنات الحية 8 9 10 -10 تنتج نموذجا قويا من التهاب القولون المعدية التي تتميز تضخم القولون أو استطالة للالخبايا، وحيدات النوى تسلل خلية المناعة، والقدح استنفاد الخلايا 3،4. الموقع الأولي للاستعمار، بعد ساعات قليلة من التحدي، هو في التصحيح الأعور، يليه التقدم إلى القولون البعيدة 2 إلى 3 أيام بعد الإصابة 3. في سلالات الفئران مناعيا، ويتحقق إزالة مسببات المرض 3 إلى 4 أسابيع بعد الإصابة 1،3،4. ومع ذلك، العديد من سلالات معدلة وراثيا، أي الجينات ناقصة أو خروج المغلوب وقد وجد الفئران، لعرض increa (- / -)الحوار الاقتصادي الاستراتيجي أكثر عرضة للإصابة مما أدى إلى أضرار مبالغ فيها و / أو عدوى مزمنة والتهاب 9-14. استخدام هذا النموذج التهاب القولون المعدية في هذه السلالات خروج المغلوب، وكثير تفتقر الفطرية البروتينات مما يشير، وقد تم الكشف عن البروتينات لا غنى عنها في عدة المضيف جزءا لا يتجزأ من القرار العدوى المعوية والالتهابات.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم الكاشف / المواد </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> لوريا مرق </td><td> ABM </td><td> G247 </td><td> إضافة 25 غراما من مسحوق LB ل1L من الماء. الأوتوكلاف قبل استخدام. </td></tr><tr><td> لوحة أسفل مربع مع شبكة </td><td> الصياد </td><td> 08-757-11A </td><td></td></tr><tr><td> الصقر الثقافة أنبوب </td><td> Sarstedt </td><td> 62.515.006 </td><td></td></tr><tr><td> يميل لمبة إبرة بالتزقيم المعدة </td><td> أدوات العلوم الجميلة </td><td> 18060-20 </td><td></td></tr><tr><td> 1 مل حقنة </td><td> BD العلوم البيولوجية </td><td> 309659 </td><td></td></tr><tr><td> 4 كيلو دالتون FITC-ديكستران </td><td> سيجما </td><td> FD-4 </td><td></td></tr><tr><td> حامض الستريك </td><td> سيجما </td><td> C7129 &lt;/ TD&gt; <td></td></tr><tr><td> سيترات الصوديوم </td><td> الصياد </td><td> S279-500 </td><td></td></tr><tr><td> سكر العنب </td><td> الصياد </td><td> D16.1 </td><td></td></tr><tr><td> حمض سترات الدكستروز </td><td></td><td></td><td> 20 ملم حمض ctiric، 110 ملم سترات الصوديوم، 5 ملي سكر العنب </td></tr><tr><td> 96-السوداء جيدا لوحة </td><td> الصياد </td><td> 07-200-762 </td><td></td></tr><tr><td> بكرات معدنية (5 مم) </td><td> QIAGEN </td><td> 69989 </td><td></td></tr><tr><td> الفورمالين 10٪ </td><td> الصياد </td><td> 5F93-4 </td><td></td></tr><tr><td> 5 مل قارورة </td><td> DiaMed </td><td> STK3205 </td><td></td></tr><tr><td> الهيماتوكسيلين </td><td> الصياد </td><td> H345-23 </td><td></td></tr><tr><td> يوزين </td><td> الصياد </td><td> E511-100 </td><td></td></tr><tr><td> الزيلين </td><td> الصياد </td><tد&gt; HC700-1GAL </td><td></td></tr><tr><td> توين 20 </td><td> سيجما </td><td> P5927 </td><td></td></tr><tr><td> Coplin جرة تلطيخ </td><td> VWR </td><td> 47751-792 </td><td></td></tr><tr><td> سيترات الصوديوم العازلة </td><td></td><td></td><td> 10 ملم سترات الصوديوم، 0.05٪ توين 20، الرقم الهيدروجيني 6،0 </td></tr><tr><td> حلمة الثدي القلم </td><td> Cedarlane </td><td> Mu22 </td><td></td></tr><tr><td> مصل الماعز </td><td> سيجما </td><td> G902-3 </td><td></td></tr><tr><td> ألبومين المصل البقري (BSA) </td><td> الصياد </td><td> BP1600-100 </td><td></td></tr><tr><td> تريتون X-100 </td><td> سيجما </td><td> T8532 </td><td></td></tr><tr><td> أزيد الصوديوم </td><td> سيجما </td><td> SZ002 </td><td></td></tr><tr><td> حجب العازلة </td><td></td><td></td><td> 2٪ مصل الماعز، BSA 1٪، 0.1٪ تريتون X-100، 0.05٪ توين 20، الصوديوم 0.05٪أزيد، 0.01 M PBS، ودرجة الحموضة 7.2، ومزيج المحل في 4 درجات مئوية. </td></tr><tr><td> الأجسام المضادة التخفيف العازلة </td><td></td><td></td><td> 0.1٪ تريتون X-100، 0.1٪ BSA، 0.05٪ أزيد الصوديوم، EDTA 0.04٪ </td></tr><tr><td> حجب العازلة التخفيف العازلة والأجسام المضادة لالنقل البري الدولي </td><td></td><td></td><td> نفس صفات على النحو الوارد أعلاه، ولكن دون إضافة المنظفات (تريتون X-100 وتوين 20) </td></tr><tr><td> إطالة الذهب الكاشف Antifade مع دابي </td><td> إينفيتروجن </td><td> P-36931 </td><td></td></tr><tr><td> Coverslips </td><td> الصياد </td><td> 12.54SE </td><td></td></tr><tr><td> الفوق الحضانة شاكر </td><td> Barnstead مختبر الخط </td><td> ماكس Q4000 </td><td></td></tr><tr><td> مقياس التألق </td><td> بيركن إلمر </td><td> Victor2D </td><td></td></tr><tr><td> المبردة الطرد المركزي </td><td> بيكمان كولتر </td><td> Microfuge 22R</td><td></td></tr><tr><td> سفينة بخارية </td><td> بلاك اند ديكر </td><td></td><td></td></tr><tr><td> مضان المجهر </td><td> زايس </td><td> محوري Image.Z1 </td><td></td></tr></tbody></table>

the citrobacter rodentium mouse model: studying pathogen and host contributions to infectious colitis

هذا البروتوكول يحدد الخطوات المطلوبة لإنتاج نموذج قوي من الأمراض المعدية والتهاب القولون، وكذلك الطرق المستخدمة لوصف الليمونية العدوى rodentium في الفئران. C. rodentium هو، سلبية الغرام الفئران محددة الممرض البكتيرية التي ترتبط ارتباطا وثيقا الهامة سريريا الإنسان E. ممرض للأمعاء مسببات الأمراض كولاي E. وenterohemorrhagic القولونية. على الإصابة بفيروس C. rodentium والفئران مناعيا يعانون من فقدان الوزن متواضعة وعابرة والإسهال. تشريحيا، ويلاحظ المعوية سرداب استطالة، تسلل خلية المناعة، والقدح استنفاد الخلايا. ويتحقق إزالة العدوى بعد 3 إلى 4 أسابيع. قياس الأمعاء الظهارية سلامة الحاجز، الحمل البكتيري، والأضرار النسيجية في نقاط زمنية مختلفة بعد الإصابة، والسماح للتوصيف سلالات الفئران عرضة للإصابة. ضراوة آليةS من مسببات الأمراض البكتيرية التي تستعمر الأمعاء من مضيفيهم، وكذلك الردود التي تدافع عن المضيف محددة ضد الالتهابات مثل هذه غير مفهومة تماما. لذا C. نموذج rodentium من العدوى البكتيرية المعوية بمثابة أداة قيمة للمساعدة في فهمنا لهذه العمليات. كما تم البكتيريا المعوية المرتبطة أمراض التهاب الأمعاء (IBDs). فقد تم الافتراض أن الاستجابات الالتهابية المزمنة غير القادرة على التأقلم ينظر في المرضى الذين يعانون IBD تطوير الأفراد عرضة وراثيا في أعقاب التعرض غير طبيعي في نظام المناعة المخاطية المعوية للبكتيريا المعوية. ولذلك، فإن دراسة نماذج من التهاب القولون المعدية يتيح إمكانات كبيرة لتحديد الاستجابات المحتملة المسببة للأمراض المضيفة للبكتيريا المعوية. C. rodentium الناجم عن التهاب القولون هو نموذج واحد نادرة بحيث يسمح لتحليل استجابات المضيف للبكتيريا المعوية، وتعزيز فهمنا للآليات المرضية المحتملة لIBD؛أساسيا في تطوير علاجات وقائية من الرواية والعلاجية.

خلال التجربة العدوى القياسية، يصاب ما يقرب من الفئران مع 2.5 × 8 10 CFU من خلال أنبوب تغذية في C. 100 ميكرولتر بين عشية وضحاها rodentium الثقافة. إصابة الفئران C57BL / 6 مع C. النتائج rodentium في فقدان الوزن متواضعة وعابرة والإسهال. على الرغم من أن نادر الحدوث مع C...

Watch this Scientific Journal Video about The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis at JoVE.com

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

الليمونية rodentium العدوى يوفر نموذجا قيما لدراسة الالتهابات البكتيرية المعوية وكذلك استضافة الاستجابات المناعية والتهاب القولون في الفئران. هذا البروتوكول يحدد قياس سلامة الحاجز، تحميل الممرض والأضرار النسيجية السماح للتوصيف دقيق للمساهمات الممرض والمضيف لالتهاب القولون المعدية الفئران.

ال<em&gt; الليمونية rodentium</em&gt; نموذج الفأر: دراسة العوامل الممرضة والمضيفة المساهمات في التهاب القولون المعدية

This protocol  outlines the steps required to produce a robust model of infectious disease and  colitis, as well as the methods used to characterize ...

the-citrobacter-rodentium-mouse-model-studying-pathogen-host

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

26.4K Views.  BC Children's Hospital. الليمونية rodentium العدوى يوفر نموذجا قيما لدراسة الالتهابات البكتيرية المعوية وكذلك استضافة الاستجابات المناعية والتهاب القولون في الفئران. هذا البروتوكول يحدد قياس سلامة الحاجز، تحميل الممرض والأضرار النسيجية السماح للتوصيف دقيق للمساهمات الممرض والمضي...

Video: The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

This protocol outlines the steps required to longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging tomography with integrated &mu;CT (DLIT-&mu;CT) and the subsequent use of this data to generate a four dimensional (4D) movie of the infection cycle. To develop the 4D infection movies and to validate the DLIT-&mu;CT imaging for bacterial infection studies using an IVIS Spectrum CT, we used infection with bioluminescent C. rodentium, which causes self-limiting colitis in mice. In this protocol, we outline the infection of mice with bioluminescent C. rodentium and non-invasive monitoring of colonization by daily DLIT-&mu;CT imaging and bacterial enumeration from feces for 8 days.
The use of the IVIS Spectrum CT facilitates seamless co-registration of optical and &mu;CT scans using a single imaging platform. The low dose &mu;CT modality enables the imaging of mice at multiple time points during infection, providing detailed anatomical localization of bioluminescent bacterial foci in 3D without causing artifacts from the cumulative radiation. Importantly, the 4D movies of infected mice provide a powerful analytical tool to monitor bacterial colonization dynamics in vivo.

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

Multi-modality imaging is a valuable approach for studying bacterial colonization in small animal models. This protocol outlines infection of mice with bioluminescent Citrobacter rodentium and the longitudinal monitoring of bacterial colonization using composite 3D diffuse light imaging tomography with &mu;CT imaging to create a 4D movie of C. rodentium infection.

4D التصوير تعدد الوسائط من<em&gt; الليمونية rodentium</em&gt; التهابات في الفئران

This protocol outlines the steps required to  longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including neoplastic, autoimmune, and chronic inflammatory diseases. Emerging evidence implicates pathogen-induced chronic inflammation in the development and progression of chronic diseases with a wide variety of clinical manifestations. Due to the complex and multifactorial etiology of chronic disease, designing experiments for proof of causality and the establishment of mechanistic links is nearly impossible in humans. An advantage of using animal models is that both genetic and environmental factors that may influence the course of a particular disease can be controlled. Thus, designing relevant animal models of infection represents a key step in identifying host and pathogen specific mechanisms that contribute to chronic inflammation.
Here we describe a mouse model of pathogen-induced chronic inflammation at local and systemic sites following infection with the oral pathogen Porphyromonas gingivalis, a bacterium closely associated with human periodontal disease. Oral infection of specific-pathogen free mice induces a local inflammatory response resulting in destruction of tooth supporting alveolar bone, a hallmark of periodontal disease. In an established mouse model of atherosclerosis, infection with P. gingivalis accelerates inflammatory plaque deposition within the aortic sinus and innominate artery, accompanied by activation of the vascular endothelium, an increased immune cell infiltrate, and elevated expression of inflammatory mediators within lesions. We detail methodologies for the assessment of inflammation at local and systemic sites. The use of transgenic mice and defined bacterial mutants makes this model particularly suitable for identifying both host and microbial factors involved in the initiation, progression, and outcome of disease. Additionally, the model can be used to screen for novel therapeutic strategies, including vaccination and pharmacological intervention.

Animal models have proven to be invaluable tools in defining host and pathogen specific mechanisms that contribute to the development of chronic inflammation. Here we describe a mouse model of oral infection with the human pathogen Porphyromonas gingivalis and detail methodologies to assess the progression of inflammation at local and systemic sites.

نموذج الفأر لالتهاب الناجم عن مسببات الأمراض المزمنة في مواقع المحلية والجهازية

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal features of the natural infection. This protocol describes procedures for the establishment and evaluation of systemic infection due to neuropathogenic Escherichia coli K1 in the neonatal rat. Colonization of the gastrointestinal tract leads to dissemination of the pathogen along the gut-lymph-blood-brain course of infection and the model displays strong age dependency. A strain of E. coli O18:K1 with enhanced virulence for the neonatal rat produces exceptionally high rates of colonization, translocation to the blood compartment and invasion of the meninges following transit through the choroid plexus. As in the human host, penetration of the central nervous system is accompanied by local inflammation and an invariably lethal outcome. The model is of proven utility for studies of the mechanism of pathogenesis, for evaluation of therapeutic interventions and for assessment of bacterial virulence.

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Here, a procedure is described for the establishment of systemic infection in the neonatal rat with cultures of Escherichia coli K1. This non-invasive procedure permits colonization of the gastrointestinal tract, translocation of the pathogen to the systemic circulation, and invasion of the central nervous system at the choroid plexus.

نموذج غير الغازية من ممرض للأعصاب<em&gt; الإشريكية القولونية</em&gt; العدوى في الأطفال حديثي الولادة الجرذ

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

DNBS/TNBS Colitis Models: Providing Insights Into Inflammatory Bowel Disease and Effects of Dietary Fat

Inflammatory Bowel Diseases (IBD), including Crohn&#39;s Disease and Ulcerative Colitis, have long been associated with a genetic basis, and more recently host immune responses to microbial and environmental agents. Dinitrobenzene sulfonic acid (DNBS)-induced colitis allows one to study the pathogenesis of IBD associated environmental triggers such as stress and diet, the effects of potential therapies, and the mechanisms underlying intestinal inflammation and mucosal injury. In this paper, we investigated the effects of dietary n-3 and n-6 fatty acids on the colonic mucosal inflammatory response to DNBS-induced colitis in rats. All rats were fed identical diets with the exception of different types of fatty acids [safflower oil (SO), canola oil (CO), or fish oil (FO)] for three&#160;weeks prior to exposure to intrarectal DNBS. Control rats given intrarectal ethanol continued gaining weight over the 5 day study, whereas, DNBS-treated rats fed lipid diets all lost weight with FO and CO fed rats demonstrating significant weight loss by 48&#160;hr and rats fed SO by 72&#160;hr. Weight gain resumed after 72&#160;hr post DNBS, and by 5 days post DNBS, the FO group had a higher body weight than SO or CO groups. Colonic sections collected 5&#160;days post DNBS-treatment showed focal ulceration, crypt destruction, goblet cell depletion, and mucosal infiltration of both acute and chronic inflammatory cells that differed in severity among diet groups. The SO fed group showed the most severe damage followed by the CO, and FO fed groups that showed the mildest degree of tissue injury. Similarly, colonic myeloperoxidase (MPO) activity, a marker of neutrophil activity was significantly higher in SO followed by CO fed rats, with FO fed rats having significantly lower MPO activity. These results demonstrate the use of DNBS-induced colitis, as outlined in this protocol, to determine the impact of diet in the pathogenesis of IBD.

DNBS/TNBS induced colitis offers an alternative and inexpensive method to study the pathobiology of inflammatory bowel disease. The protocol discussed in this paper outlines the successful application of DNBS to induce colitis in mice and rats and allows one to thoroughly study host-mediated intestinal responses.

DNBS / TNBS التهاب القولون نماذج: توفير نظرة ثاقبة مرض التهاب الأمعاء وآثار الدهون الغذائية

Inflammatory Bowel Diseases (IBD), including Crohn&#39;s Disease and Ulcerative Colitis, have long been associated with a genetic basis, and more recently ...

Medicine

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages and disadvantages. We describe here an experimental colitis model that is initiated by adoptive transfer of syngeneic splenic CD4+CD45RBhigh T cells into T and B cell deficient recipient mice. The CD4+CD45RBhigh T cell population that largely consists of na&#239;ve effector cells is capable of inducing chronic intestinal inflammation, closely resembling key aspects of human IBD. This method can be manipulated to study aspects of disease onset and progression. Additionally it can be used to study the function of innate, adaptive, and regulatory immune cell populations, and the role of environmental exposures, i.e., the microbiota, in intestinal inflammation. In this article we illustrate the methodology for inducing colitis with a step-by-step protocol. This includes a video demonstration of key technical aspects required to successfully develop this murine model of experimental colitis for research purposes.

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Here, we present a protocol to induce colonic inflammation in mice by adoptive transfer of syngeneic CD4+CD45RBhigh T cells into T and B cell deficient recipients. Clinical and histopathological features mimic human inflammatory bowel diseases. This method allows the study of the initiation of colonic inflammation and progression of disease.

تحريض الفئران المعوية التهاب عن طريق نقل بالتبني من المستجيب CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; عالية</sup&gt; خلايا T في الفئران العوز المناعي

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Chronic Salmonella Infected Mouse Model

The bacterial infected mouse model is a powerful model system for studying areas such as infection, inflammation, immunology, signal transduction, and tumorigenesis. Many researchers have taken advantage of the colitis induced by Salmonella typhimurium for the studies on the early phase of inflammation and infection. However, only few reports are on the chronic infection in vivo. Mice with Salmonella persistent existence in the gastrointestinal tract allow us to explore the long-term host-bacterial interaction, signal transduction, and tumorigenesis. We have established a chronic bacterial infected mouse model with Salmonella typhimurium colonization in the mouse intestine over 6 months. To use this system, it is necessary for the researcher to learn how to prepare the bacterial culture and gavage the animals. We detail a methodology for prepare bacterial culture and gavage mice. We also show how to detect the Salmonella persistence in the gastrointestinal tract. Overall, this protocol will aid researchers using the bacterial infected mouse model to address fundamentally important biological and microbiological questions.

Chronic Salmonella Infected Mouse Model

Establish a chronic bacterial infected mouse model with persistent Salmonella typhimurium colonization in intestine for 27 weeks.

مزمن السالمونيلا نموذج الفأر المصاب

The bacterial infected mouse model is a powerful model system for studying areas such as infection, inflammation, immunology, signal transduction, and ...

Biology

Cefoperazone-treated Mouse Model of Clinically-relevant Clostridium difficile Strain R20291

Clostridium difficile is an anaerobic, gram-positive, spore-forming enteric pathogen that is associated with increasing morbidity and mortality and consequently poses an urgent threat to public health. Recurrence of a C. difficile infection (CDI) after successful treatment with antibiotics is high, occurring in 20-30% of patients, thus necessitating the discovery of novel therapeutics against this pathogen. Current animal models of CDI result in high mortality rates and thus do not approximate the chronic, insidious disease manifestations seen in humans with CDI. To evaluate therapeutics against C. difficile, a mouse model approximating human disease utilizing a clinically-relevant strain is needed. This protocol outlines the cefoperazone mouse model of CDI using a clinically-relevant and genetically-tractable strain, R20291. Techniques for clinical disease monitoring, C. difficile bacterial enumeration, toxin cytotoxicity, and histopathological changes throughout CDI in a mouse model are detailed in the protocol. Compared to other mouse models of CDI, this model is not uniformly lethal at the dose administered, allowing for the observation of a prolonged clinical course of infection concordant with the human disease. Therefore, this cefoperazone mouse model of CDI proves a valuable experimental platform to assess the effects of novel therapeutics on the amelioration of clinical disease and on the restoration of colonization resistance against C. difficile.

Cefoperazone-treated Mouse Model of Clinically-relevant Clostridium difficile Strain R20291

This protocol outlines the cefoperazone mouse model of Clostridium difficile infection (CDI) using a clinically-relevant and genetically-tractable strain, R20291. Emphasis on clinical disease monitoring, C. difficile bacterial enumeration, toxin cytotoxicity, and histopathological changes throughout CDI in a mouse model are detailed in the protocol.

المعالجة سيفوبيرازون ماوس نموذج سريريا ذات صلة<em&gt; المطثية العسيرة</em&gt; سلالة R20291

Clostridium difficile is an anaerobic, gram-positive, spore-forming enteric pathogen that is associated with increasing morbidity and mortality and ...

Establishment and Characterization of UTI and CAUTI in a Mouse Model

Urinary tract infections (UTI) are highly prevalent, a significant cause of morbidity and are increasingly resistant to treatment with antibiotics. Females are disproportionately afflicted by UTI: 50% of all women will have a UTI in their lifetime. Additionally, 20-40% of these women who have an initial UTI will suffer a recurrence with some suffering frequent recurrences with serious deterioration in the quality of life, pain and discomfort, disruption of daily activities, increased healthcare costs, and few treatment options other than long-term antibiotic prophylaxis. Uropathogenic Escherichia coli (UPEC) is the primary causative agent of community acquired UTI. Catheter-associated UTI (CAUTI) is the most common hospital acquired infection accounting for a million occurrences in the US annually and dramatic healthcare costs. While UPEC is also the primary cause of CAUTI, other causative agents are of increased significance including Enterococcus faecalis. Here we utilize two well-established mouse models that recapitulate many of the clinical characteristics of these human diseases. For UTI, a C3H/HeN model recapitulates many of the features of UPEC virulence observed in humans including host responses, IBC formation and filamentation. For CAUTI, a model using C57BL/6 mice, which retain catheter bladder implants, has been shown to be susceptible to E. faecalis bladder infection. These representative models are being used to gain striking new insights into the pathogenesis of UTI disease, which is leading to the development of novel therapeutics and management or prevention strategies.

The ability to model urinary tract infections (UTI) is crucial in order to be able to understand bacterial pathogenesis and spawn the development of novel therapeutics. This work&#8217;s goal is to demonstrate mouse models of experimental UTI and catheter associated UTI that recapitulate and predict findings seen in humans.

إنشاء وتوصيف UTI وCAUTI في نموذج الفأر

Urinary tract infections (UTI) are highly prevalent, a significant cause of morbidity and are increasingly resistant to treatment with antibiotics. ...

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a diverting enterostomy. The etiology of this disease remains ill-defined but appears to differ from that of classical inflammatory bowel diseases such as Crohn's disease and ulcerative colitis. Research aimed to decipher the pathophysiological mechanisms leading to the development of this disease has been severely hampered by the lack of an appropriate murine model. This protocol generates a murine model of DC that facilitates the study of the immune system's role and its interaction with the microbiome in the development of DC. In this model using C57BL/6 animals, distal parts of the colon are excluded from the fecal stream by creating a distal colostomy, triggering the development of mild to moderate inflammation in the excluded bowel segments and reproducing the hallmark lesions of human DC with a moderate systemic inflammatory response. In contrast to the rat model, a large number of genetically-modified murine models on the C57BL/6 background are available. The combination of these animals with our model allows the potential roles of individual cytokines, chemokines, or receptors of bioactive molecules (e.g., interleukin (IL)-17; IL-10, chemokine CXCL13, chemokine receptors CXCR5 and CCR7, and the sphingosine-1-phosphate receptor 4) to be assessed in the pathogenesis of DC. The availability of congenic mouse strains on the C57BL/6 background largely facilitates transfer experiments to establish the roles of distinct cell types involved in the etiology of DC. Finally, the model offers the opportunity to assess the influences of local interventions (e.g., modification of the local microbiome or local anti-inflammatory therapy) on mucosal immunity in affected and non-affected bowel segments and the on systemic immune homeostasis.

Murine distal colostomy provides a murine model for human diversion colitis, a predominantly lymphocytic colitis in colon segment excluded from the fecal stream.

مورين كولوستومي القاصي، نموذجا جديداً من تسريب التهاب القولون في الفئران C57BL/6

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

A TNBS-Induced Rodent Model to Study the Pathogenic Role of Mechanical Stress in Crohn's Disease

Inflammatory bowel diseases (IBD) such as Crohn&#39;s disease (CD) are chronic inflammatory disorders of the gastrointestinal tract affecting approximately 20 per 1,000,000 in Europe and USA. CD is characterized by transmural inflammation, intestinal fibrosis, and luminal stenosis. Although anti-inflammatory therapies may help control inflammation, they have no efficacy on fibrosis and stenosis in CD. The pathogenesis of CD is not well understood. Current studies focus mainly on delineating dysregulated gut immune response mechanisms. While CD-associated transmural inflammation, intestinal fibrosis, and luminal stenosis all represent mechanical stress to the gut wall, the role of mechanical stress in CD is not well defined. To determine if mechanical stress plays an independent pathogenic role in CD, a protocol of TNBS-induced CD-like colitis model in rodents has been developed. This TNBS-induced transmural inflammation and fibrosis model resembles pathological hallmarks of CD in the colon. It is induced by intracolonic instillation of TNBS into the distal colon of adult Sprague-Dawley rats. In this model, transmural inflammation leads to stenosis at the TNBS instillation site (Site I). Mechanical distention is observed in the portion proximal to the instillation site (Site P), representing mechanical stress but not visible inflammation. Colonic portion distal to inflammation (Site D) presents neither inflammation nor mechanical stress. Distinctive changes of gene expression, immune response, fibrosis, and smooth muscle growth at different sites (P, I, and D) were observed, highlighting a profound impact of mechanical stress. Therefore, this model of CD-like colitis will help us better understand CD&#39;s pathogenic mechanisms, particularly the role of mechanical stress and mechanical stress-induced gene expression in immune dysregulation, intestinal fibrosis, and tissue remodeling in CD.

The present protocol describes the development of a Crohn's-like colitis model in rodents. Transmural inflammation leads to stenosis at the TNBS instillation site, and mechanical enlargement is observed in the segment proximal to the stenosis. These changes allow studying mechanical stress in colitis.

ال

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

4D التصوير تعدد الوسائط من

نموذج الفأر لالتهاب الناجم عن مسببات الأمراض المزمنة في مواقع المحلية والجهازية

نموذج غير الغازية من ممرض للأعصاب

DNBS / TNBS التهاب القولون نماذج: توفير نظرة ثاقبة مرض التهاب الأمعاء وآثار الدهون الغذائية

تحريض الفئران المعوية التهاب عن طريق نقل بالتبني من المستجيب CD4

مزمن السالمونيلا نموذج الفأر المصاب

المعالجة سيفوبيرازون ماوس نموذج سريريا ذات صلة

إنشاء وتوصيف UTI وCAUTI في نموذج الفأر

مورين كولوستومي القاصي، نموذجا جديداً من تسريب التهاب القولون في الفئران C57BL/6

نموذج القوارض الناجم عن TNBS لدراسة الدور الممرض للإجهاد الميكانيكي في مرض كرون