עבודה זו נתמכה על ידי המכון הקנדי לבריאות מחקר (MSH-95368, 89773 ו MOP-MOP-106,623 עד CZ) וקרן קנדה עבור חדשנות. SCM הוא הנמען של האגודה CIHR / הקנדי של אחווה לגסטרואנטרולוגיה דוקטורט. CZ הוא חוקר חדש CIHR.

1. הפצת Trichuris ביצים muris <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי ליצור קבוצות חדשות של ביצים Trichuris muris, להדביק 20-30 עכברים immunodeficient (למשל NOD.Cg-Prkdc SCID Il2rg tm1Wjl / SzJ (NSG) או 129S6/SvEvTac-Rag2 tm1Fwa (RAG2 - / -)) או עכברים רגישים מבחינה גנטית ( למשל. AKR / י) כי הם 6-8 שבועות עם כ 300 ביצים Trichuris muris ידי gavage הפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 32-35 ימים להקריב את העכברים בחנק CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף את הצד הגחוני של העכבר רטובה את הבטן עם אתנול 70%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלקחיים שימוש לתפוס את עור הבטן לעשות חתך קטן בעזרת מספריים. חותכים את העור כדי לחשוף את תכולת הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהה את cecum ואת המעי הגס הפרוקסימלי, ולהסיר אותם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את cecum ואת המעי הגס הפרוקסימלי של צלחת פטרי המכילה 10 ס&quot;מ השתנה Dulbecco הנשר בינוני (DMEM) עם 500 U / ml פניצילין 500 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​סטרפטומיצין (P / S). חותכים את cecum לפתוח לחשוף את לומן ואת תולעים. בעזרת מלקחיים cecum מקום בכוס של פוספט שנאגרו מלוחים (PBS) וללחוץ בעדינות כדי להסיר את הצואה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור cecum אל צלחת פטרי באמצעות מלקחיים מעוקל חלקה (Roboz RS-5047) בעדינות לשלוף תולעים למקם אותם היטב של צלחת 6 היטב המכיל 5 MLS ש DMEM + P / </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על תהליך זה עבור כל העכברים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים 6 צלחת היטב במיכל פלסטיק עם מגבת נייר לחה כדי לשמור על לחות לדגור על 37 מעלות צלזיוס למשך 4 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 4 שעות להסיר תולעים באמצעות מלקחיים מעוקל חלקה לפצל אותם לתוך 2 בארות חדשות של צלחת 6 היטב DMEM המכיל 5 מ&quot;ל + P / S. קציר את תוכן היטב את המקום המקורי של צינור 15 בז מ&quot;ל. ספין צינור ב 3000 סל&quot;ד ולהסיר ובמילואים supernatant כמו אנטיגן 4 שעה (יכול לשמש restimulation התא לאחר PBS דיאליזה, שם התשואות חלבון טיפוסי הם 10-20 מ&quot;ג לכל 20 עכברים) ו resuspend ביצה המכילים גלולה במי ברז autoclaved. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את צלחת 6 גם חזרה 37 מעלות צלזיוס למשך הלילה. הסר להיפטר התולעים. קציר את התוכן של בארות לתוך צינור בז ספין בסל&quot;ד 3000 דקות 5. הסר supernatant ובמילואים כמו אנטיגן לילה (ניתן להשתמש Trichuris Ag ELISAs אלוטיפ נוגדן ספציפי לאחר PBS דיאליזה, שם התשואות חלבון טיפוסי הם 10-20 מ&quot;ג לכל 20 עכברים) ו המכילות ביצים resuspend גלולה במי ברז autoclaved. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שלב 4 שעות וביצים לילה ולסנן את הביצים דרך המסננת 70μm להסיר שאריות תולעים מכן להעביר לתוך בקבוקון 75 ס&quot;מ 2. שמור את הבקבוק במקום חשוך מכוסה בנייר כסף במשך 6 שבועות בטמפרטורת החדר (RT). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף ביצים במי ברז autoclaved ו resuspend בגיל 50 ביצים קיימא μl 50. כדי לעשות זאת, צנטריפוגה ביצים בסל&quot;ד 3000 דקות 5 ו resuspend במים 50 מ&quot;ל ~ ברז סטרילי. הסר 50 ביצים μl מקום בשקופית זכוכית. באמצעות הגדלה 40X לספור את מספר הביצים embryonated קיימא μl 50. מדולל ביצים לתת 50 ביצים קיימא μl 50. לקבלת תמונות של ביצי קיימא עיין מחקר שנערך על ידי Kopper ו מנספילד 16. </li></ol> 2. דלקת חריפה של עכברי הניסוי עם Trichuris muris ביצים (200 ביצים / עכבר) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביצים resuspend ביסודיות להסיר נפח מספיק כדי לטפל במספר של עכברים X 2 (למשל עבור 10 עכברים לוקחים 200 μl x 10 x 2 = עכברים MLS 4 ביצים) וגם למקם אותם שפופרת 14 מ&quot;ל הצמד כובע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך את הצמד 14 מ&quot;ל צינור כובע לערבב. מביא 200 μl של ביצים לתוך מזרק 1 מ&quot;ל על מחט בגודל המתאים האכלה (עבור עכברים במשקל 25 גרם השתמשנו 18 מד 1 1 / 2 &quot;מחטים). בעורפו ב יד אחת על העכבר בעזרת היד השנייה לנהל את הביצים על ידי gavage אוראלי . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חכה 21 ימים. </li></ol> 3. ניסיוני קציר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום 21 להקריב את העכברים באמצעות ה-CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איסוף דם מעכברים ידי לנקב לב, בתוך מזרק ללא heparinized, ולאחסן ב 4 ° C. למחרת לבודד בסרום להקפיא ב -20 ° C. סרום ניתן להשתמש לצורך זיהוי של Trichuris ספציפי IgGs ו IgE על ידי ELISA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף את הצד הגחוני של העכבר רטובה את הבטן עם אתנול 70%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלקחיים שימוש לתפוס את עור הבטן לעשות חתך קטן בעזרת מספריים. חותכים את העור ואת קרום הבסיסי לחשוף את תכולת הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהה את המעי הדק, cecum והמעי הגס. תפוס את cecum עם מלקחיים ולשלוף של חלל הבטן. עם זוג נוסף של מלקחיים לדחוף המעי הדק מעל ימינה לחשוף את בלוטות לימפה mesenteric (mLNs). הסר את mLNs נזהרים שלא לחתוך את המעיים ומכניסים 15 מ&quot;ל בז המכיל 2 MLS של התקשורת. אם תרצה אלה יכולים להיות מעובדים restimulated במבחנה (4x10 6 / מ&quot;ל 1 מ&quot;ל ב 24 צלחות היטב עם αCD3/CD28 מיקרוגרם / מ&quot;ל 1 או עם 50μg/ml 4H Trichuris Ag) עבור 72 שעות לניתוח ציטוקינים על ידי ELISA ו-F תאייםנמוך cytometry. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את cecum והמעי הגס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים, לדחוף החוצה כדורי צואה מן המעי הגס הדיסטלי מקום ובכל צינור 2 Axygen מ&quot;ל. להקפיא ב -20 ° C. כדורי צואה ניתן לנתח על ידי כתם המערבי לביטוי של resistin כמו β-מולקולה (RELM-β). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הקצה של cecum (~ 0.5 ס&quot;מ). כדי להסיר צואת להחזיק קצה cecum עם מלקחיים ולשטוף עם PBS באמצעות מזרק 3 מ&quot;ל ו - 22-מחט מד בצלחת פטרי. מקום paraformaldehyde 4% טרי צינור 5 מ&quot;ל פלקון כובע הצמד. חנות ב 4 ° C. אלה יכולים להיות מוטבע פרפין, מחולק רכוב על שקופיות לניתוח היסטולוגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר חתיכת המעי הגס הפרוקסימלי (~ 1 ס&quot;מ) של RNA. שים מדגם לתוך צינור 2 Axygen מ&quot;ל עם RNAlater 500 μl. חנות ב 4 ° C. דגימות אלו ניתן לנתח ביטוי mRNA על ידי qPCR. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את שאר cecum בצלחת פטרי שכותרתו להקפיא ב -20 ° C. </li></ol> 4. ספירת Trichuris muris תולעים cecum <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר cecum מהמקפיא ומניחים בצלחת פטרי המכילות ~ 5 מ&quot;ל מים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מספריים, חותכים לפתוח cecum לחשוף את לומן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזק את cecum עם מלקחיים במרץ לנער את cecum להסיר את מרבית הצואה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת cecum אל צלחת פטרי אחר המכיל מים באמצעות מלקחיים מעוקל חלק בעדינות לגרד את IECs הרקמה הבסיסית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת cecum כדי בצלחת פטרי חדשה המכילה מים במרץ לגרד רקמות הנותרים עם מלקחיים, קורעת את הרקמה לחתיכות קטנות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במיקרוסקופ לנתח כדי לספור את כל התולעים בכל 3 של בצלחות פטרי. כפי שאתם מוצאים תולעת להסיר אותו בצלחת כדי להבטיח את התולעת אותו לא נספר פעמיים. אם תולעים פגומים (שבורות כלומר במחצית) לספור רק מסתיים עבה או דק כדי לקבל מספר מדויק. </li></ol> 5. נציג תוצאות המודל muris Trichuris זיהום מאפשר לחוקרים לכמת נטל טפיל התגובה החיסונית מערכתית, כמו גם בהיסטולוגיה לבחון את התגובה הדלקתית בתוך cecum הדיסטלית. כאשר לומן של cecum שנקטפו חשוף, תולעים Trichuris ניתן המנויים באמצעות מיקרוסקופ לנתח (איור 1A-B). פרמטרים של חסינות Trichuris כוללים גם אלוטיפ נוגדן מעבר IgG1 (המשויך חסינות מסוג Th2) אצל בעלי חיים עמידים, IgG2a (המשויך חסינות מסוג Th1) בבעלי חיים רגישים (תרשים 1C). הביטוי של הגביע תא ספציפי חלבון resistin כמו מולקולות β (RELM-β) מזוהה עם אישור של Trichuris והוא לזיהוי על ידי ניתוח כתם המערבי (איור 2). החלק הדיסטלי של cecum יכול להיות מוכתם תקופתיים חומצה שיף (PAS) כדי להעריך את התא הגביע התגובות והיקף דלקת מעיים בתגובה לזיהום (איור 3). <img src="/files/ftp_upload/2774/2774fig1.jpg" alt="איור 1"/> באיור 1. כימות חסינות Trichuris muris. (א) עמיד (B6) עכברים לגרש muris Trichuris על ידי 21 יום שלאחר זיהום. לעומת זאת, רגישים (AKR / J) עכברים נדבקים כרוני עם Trichuris, וכתוצאה מכך הקמת טפיל. כל עמודה מייצגת את הממוצע ± SEM של 4-8 חיות לכל קבוצה. (ב) תולעים נספרים באמצעות מיקרוסקופ לנתח. הפאנל למעלה מראה תולעים בבידוד, לוח התחתונה מראה תולעים בנוכחות IECs ובצואה. (ג) Trichuris ספציפי titres IgG2a נקבעים על ידי ELISA של נסיוב מדוללת (01:02 דילול, החל מהשעה 1:20 דילול ומסתיים 1:2560) על צלחות מצופה אנטיגן הפרשה Trichuris (O / N Ag, 5 מיקרוגרם / מ&quot;ל). רגישים AKR / י עכברים בעלי רמות גבוהות במיוחד של IgG2a Trichuris ספציפיים בסרום מאשר B6 עכברים עמידים. <img src="/files/ftp_upload/2774/2774fig2.jpg" alt="איור 2"/> איור 2. חיסול של Trichuris muris קשורה ביטוי הגביע תאים ספציפיים לחלבון RELM β-7. RELM-β הייצור ניתן להבחין בין כדוריות צואה מן עמידים Trichuris נגועים (B6), אבל לא רגישים (AKR / J) עכברים ידי ניתוח כתם המערבי. נתיב כל נציג של חיה אחת, (N) = תמים, (TM) = 21 יום Trichuris עכברים נגועים. <img src="/files/ftp_upload/2774/2774fig3.jpg" alt="איור 3"/> איור 3. בדיקה היסטולוגית של זיהום cecum דיסטלי הבאים Trichuris. סעיפים 5-7 מיקרומטר של cecum דיסטלי מוכתם PAS. תא וגביע היפרפלזיה ייצור ליחה ניכרות עמיד (B6), אבל לא רגישים (AKR / J) עכברים הבאים זיהום Trichuris.

<ol>
	<li>Cliffe, L. J., Grencis, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Trichuris+muris+system:+a+paradigm+of+resistance+and+susceptibility+to+intestinal+nematode+infection.">The Trichuris muris system: a paradigm of resistance and susceptibility to intestinal nematode infection.</a> Adv. Parasitol. 57, 255-307 (2004).</li><li>Else, K. J., Finkelman, F. D., Maliszewski, C. R., Grencis, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokine-mediated+regulation+of+chronic+intestinal+helminth+infection.">Cytokine-mediated regulation of chronic intestinal helminth infection.</a> J. Exp. Med. 179, 347-351 (1994).</li><li>Bancroft, A. J., Grencis, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Th1+and+Th2+cells+and+immunity+to+intestinal+helminths.">Th1 and Th2 cells and immunity to intestinal helminths.</a> Chem. Immunol. 71, 192-208 (1998).</li><li>Bancroft, A. J., McKenzie, A. N., Grencis, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+role+for+IL-13+in+resistance+to+intestinal+nematode+infection.">A critical role for IL-13 in resistance to intestinal nematode infection.</a> J. Immunol. 160, 3453-3461 (1998).</li><li>Helmby, H., Takeda, K., Akira, S., Grencis, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin+(IL)-18+promotes+the+development+of+chronic+gastrointestinal+helminth+infection+by+downregulating+IL-13.">Interleukin (IL)-18 promotes the development of chronic gastrointestinal helminth infection by downregulating IL-13.</a> J. Exp. Med. 194, 355-364 (2001).</li><li>Owyang, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin+25+regulates+type+2+cytokine-dependent+immunity+and+limits+chronic+inflammation+in+the+gastrointestinal+tract.">Interleukin 25 regulates type 2 cytokine-dependent immunity and limits chronic inflammation in the gastrointestinal tract.</a> J. Exp. Med. 203, 843-849 (2006).</li><li>Artis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RELM&#946;/FIZZ2+is+a+goblet+cell-specific+immune-effector+molecule+in+the+gastrointestinal+tract.">RELM&#946;/FIZZ2 is a goblet cell-specific immune-effector molecule in the gastrointestinal tract.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 101, 13596-13600 (2004).</li><li>Datta, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+novel+genes+in+intestinal+tissue+that+are+regulated+after+infection+with+an+intestinal+nematode+parasite.">Identification of novel genes in intestinal tissue that are regulated after infection with an intestinal nematode parasite.</a> Infect. Immun. 73, 4025-4033 (2005).</li><li>Cliffe, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+intestinal+epithelial+cell+turnover:+a+new+mechanism+of+parasite+expulsion.">Accelerated intestinal epithelial cell turnover: a new mechanism of parasite expulsion.</a> Science. 308, 1463-1465 (2005).</li><li>Artis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+weapons+in+the+war+on+worms:+identification+of+putative+mechanisms+of+immune-mediated+expulsion+of+gastrointestinal+nematodes.">New weapons in the war on worms: identification of putative mechanisms of immune-mediated expulsion of gastrointestinal nematodes.</a> Int. J. Parasitol. 36, 723-733 (2006).</li><li>Finkelman, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokine+regulation+of+host+defense+against+parasitic+gastrointestinal+nematodes:+lessons+from+studies+with+rodent+models.">Cytokine regulation of host defense against parasitic gastrointestinal nematodes: lessons from studies with rodent models.</a> Annu. Rev. Immunol. 15, 505-533 (1997).</li><li>Grencis, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enteric+helminth+infection:+immunopathology+and+resistance+during+intestinal+nematode+infection.">Enteric helminth infection: immunopathology and resistance during intestinal nematode infection.</a> Chem. Immunol. 66, 41-61 (1997).</li><li>Khan, W. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+intestinal+muscle+contraction+by+interleukin-9+(IL-9)+or+IL-9+neutralization:+correlation+with+worm+expulsion+in+murine+nematode+infections.">Modulation of intestinal muscle contraction by interleukin-9 (IL-9) or IL-9 neutralization: correlation with worm expulsion in murine nematode infections.</a> Infect. Immun. 71, 2430-2438 (2003).</li><li>Khan, W. I., Blennerhasset, P., Ma, C., Matthaei, K. I., Collins, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stat6+dependent+goblet+cell+hyperplasia+during+intestinal+nematode+infection.">Stat6 dependent goblet cell hyperplasia during intestinal nematode infection.</a> Parasite Immunol. 23, 39-42 (2001).</li><li>Akiho, H., Blennerhassett, P., Deng, Y., Collins, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+IL-4,+IL-13,+and+STAT6+in+inflammation-induced+hypercontractility+of+murine+smooth+muscle+cells.">Role of IL-4, IL-13, and STAT6 in inflammation-induced hypercontractility of murine smooth muscle cells.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 282, 226-2232 (2002).</li><li>Kopper, J. J., Mansfield, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+improved+methods+for+delivery+of+Trichuris+muris+to+the+laboratory+mouse.">Development of improved methods for delivery of Trichuris muris to the laboratory mouse.</a> Parasitol. Res. 107, 1103-1113 (2010).</li><li>Bancroft, A. J., Else, K. J., Grencis, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-level+infection+with+Trichuris+muris+significantly+affects+the+polarization+of+the+CD4+response.">Low-level infection with Trichuris muris significantly affects the polarization of the CD4 response.</a> Eur. J. Immunol. 24, 3113-3118 (1994).</li></ol>

ניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיות והתקנות שנקבעו על ידי האוניברסיטה של ​​קולומביה הבריטית.

פרוטוקול זה פרטים מנה ברמה גבוהה חריפה Trichuris muris זיהום אשר יכול להיות שונה כפי שנדרש על ידי החוקר. למשל, בעכברים אפשר להקריב ורקמות שנקטפו בימים שונים. כדי לקבוע כי העכברים הקימו בהצלחה נטל תולעת מלא הם יכולים להקריב ביום 14, ובשלב זה כל העכברים צריכים לשאת בנטל של ?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> שם מגיב </th><th> חברה </th><th> מספר קטלוגי </th><th> תגובות </th></tr><tr><td> האכלת בעלי חיים מחטים (18 x ½ 1 &quot;) </td><td> פופר </td><td> 7912 </td><td></td></tr><tr><td> מלקחיים מעוקל חלקות </td><td> Roboz </td><td> RS-5047 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Gibco </td><td> 11965 </td><td></td></tr><tr><td> NOD.Cg-Prkdc SCID Il2r gtm1Wjl / SzJ (NSG) </td><td> ג&#39;קסון מעבדות </td><td> 005557 </td><td> אלה הם העכברים השתמשנו, לעומת זאת, כל העכברים immunodeficient או זן רגיש צריך לעבוד. </td></tr><tr><td> RNAlater </td><td> Qiagen </td><td> 76104 </td><td></td></tr><tr><td> 2 מ&quot;ל צינורות </td><td> Axygen </td><td> MCT-200-C </td><td></td></tr><tr><td> 15 צינורות מ&quot;ל </td><td> בז </td><td> 352096 </td><td></td></tr><tr><td> 6 צלחות טוב </td><td> בז </td><td> 353046 </td><td></td></tr><tr><td> Paraformaldehyde </td><td> מיקרוסקופית אלקטרונים המדע </td><td> 15710 </td><td></td></tr><tr><td> α-RELMβ נוגדן </td><td> PeproTech Inc </td><td> 0694270Rb </td><td></td></tr></tbody></table>

trichuris muris infection: a model of type 2 immunity and inflammation in the gut

Trichuris muris הוא פתוגן טבעי של עכברים דומה ביולוגית antigenically למינים של Trichuris כי להדביק בני אדם ובעלי חיים 1. ביצי התולעת ניתנים על ידי gavage אוראלי, בוקעות במעי הדק הדיסטלי, לפלוש לתאי האפיתל במעי (IECs) כי קו מאורות של cecum ואת המעי הגס הפרוקסימלי ועל התבגרות תולעים שחרור ביצים לתוך הסביבה 1. מודל זה הוא כלי רב עוצמה לבחון את הגורמים CD4 + T שליטה עוזר (ה &#39;) בתא ההפעלה, כמו גם שינויים באפיתל המעי. התגובה החיסונית המתרחשת זנים טהורים עמידים, כגון C57BL / 6 BALB / c, מאופיין ציטוקינים Th2 מקוטב (IL-4, IL-5 ו-IL-13) וגירוש של תולעים בזמן Th1 הקשורים ציטוקינים (IL -12, IL-18, IFN-γ) לקדם דלקות כרוניות AKR רגישים מבחינה גנטית / עכברים J 2-6. ציטוקינים Th2 לקדם שינויים פיזיולוגיים אצל microenvironment המעי כולל תחלופה מהירה של IECs, התמיינות תאים הגביע, גיוס ושינויים בחדירות אפיתל והתכווצות שרירים חלקים, אשר כולם היו מעורבים בגירוש תולעת 7-15. כאן אנו פרט פרוטוקול עבור הפצת Trichuris ביצים muris אשר ניתן להשתמש בהם בניסויים הבאים. כמו כן אנו מספקים מדגם ניסיוני הקציר עם הצעות ניתוח שלאחר זיהום. בסך הכל, פרוטוקול זה יספק לחוקרים את הכלים הבסיסיים לביצוע muris זיהום Trichuris העכבר מודל אשר יכול לשמש כדי לענות על שאלות הנוגעות נטייה Th במערכת העיכול, כמו גם פונקציות מפעיל החיסונית של IECs.

Watch this Scientific Journal Video about Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut at JoVE.com

Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

זיהום Trichuris muris הוא מודל מעיים של חסינות Th2 שבו עכברים עמיד ליצור תגובת Th2 מגן עכברים רגישים ליצור תגובה פתולוגית Th1.

Trichuris muris זיהום: מודל של חסינות סוג 2, דלקת במעיים

Trichuris muris is a natural pathogen of mice and is biologically and antigenically similar to species of Trichuris that 
infect humans and livestock1. ...

trichuris-muris-infection-model-type-2-immunity-inflammation

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

16.2K Views.  University of British Columbia. זיהום Trichuris muris הוא מודל מעיים של חסינות Th2 שבו עכברים עמיד ליצור תגובת Th2 מגן עכברים רגישים ליצור תגובה פתולוגית Th1.

Video: Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae by Latex Agglutination

Latex agglutination reagents are widely used in microbial diagnosis, identification and serotyping. Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) is a major cause of morbidity and mortality world-wide. Current vaccines target the pneumococcal capsule, and there are over 90 capsular serotypes. Serotyping pneumococcal isolates is therefore important for assessing the impact of vaccination programs and for epidemiological purposes. The World Health Organization has recommended latex agglutination as an alternative method to the &#8216;gold standard&#8217; Quellung test for serotyping pneumococci. Latex agglutination is a relatively simple, quick and inexpensive method; and is therefore suitable for resource-poor settings as well as laboratories with high-volume workloads. Latex agglutination reagents can be prepared in-house utilizing commercially-sourced antibodies that are passively attached to latex particles. This manuscript describes a method of production and quality control of latex agglutination reagents, and details a sequential testing approach which is time- and cost-effective. 
This method of production and quality control may also be suitable for other testing purposes.

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae by Latex Agglutination

Latex agglutination testing is a simple, rapid and inexpensive method for serotyping Streptococcus pneumoniae, and has also been widely applied in diagnostic microbiology. This manuscript describes the in-house production of latex agglutination reagents, quality control procedures and the application of this technique to pneumococcal serotyping.

קופסית Serotyping של<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; על ידי לאטקס התלכדות

Latex agglutination reagents are widely used in microbial diagnosis, identification and serotyping. Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) is a major ...

Isolation, Characterization and Functional Examination of the Gingival Immune Cell Network

Immune cell networks in tissues play a vital role in mediating local immunity and maintaining tissue homeostasis, yet little is known of the resident immune cell populations in the oral mucosa and gingiva. We have established a technique for the isolation and study of immune cells from murine gingival tissues, an area of constant microbial exposure and a vulnerable site to a common inflammatory disease, periodontitis. Our protocol allows for a detailed phenotypic characterization of the immune cell populations resident in the gingiva, even at steady state. Our procedure also yields sufficient cells with high viability for use in functional studies, such as the assessment of cytokine secretion ex vivo. This combination of phenotypic and functional characterization of the gingival immune cell network should aid towards investigating the mechanisms involved in oral immunity and periodontal homeostasis, but will also advance our understanding of the mechanisms involved in local immunopathology.

We have established a technique for the isolation, phenotypic characterization and functional analysis of immune cells from murine gingiva.

בידוד, אפיון בחינה פונקציונלית של הרשת הסלולרית חניכיימיים החיסון

Immune cell networks in tissues play a vital role in mediating local immunity and maintaining tissue homeostasis, yet little is known of the resident ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of inflammation. They are key players in the innate immune system and play major roles in cancer biology. Neutrophils have been proposed as key mediators of malignant transformation, tumor progression, angiogenesis and in the modulation of the antitumor immunity; through their release of soluble factors or their interaction with tumor cells. To characterize the specific functions of neutrophils, a fast and reliable method is coveted for in vitro isolation of neutrophils from human blood. Here, a density gradient separation method is demonstrated to isolate neutrophils as well as mononuclear cells from the blood. The procedure consists of layering the density gradient solution such as Ficoll carefully above the diluted blood obtained from patients diagnosed with chronic lymphocytic leukemia (CLL), followed by centrifugation, isolation of mononuclear layer, separation of neutrophils from RBCsby dextran then lysis of residual erythrocytes. This method has been shown to isolate neutrophils &#8805; 90 % pure. To mimic the tumor microenvironment, 3-dimensional (3D) experiments were performed using basement membrane matrix such as Matrigel. Given the short half-life of neutrophils in vitro, 3D experiments with fresh human neutrophils cannot be performed. For this reason promyelocytic HL60 cells are differentiated along the granulocytic pathway using the differentiation inducers dimethyl sulfoxide (DMSO) and retinoic acid (RA). The aim of our experiments is to study the role of neutrophils on the sensitivity of lymphoma cells to anti-lymphoma agents. However these methods can be generalized to study the interactions of neutrophils or neutrophil-like cells with a large range of cell types in different situations.

Neutrophils are the most abundant type of white blood cells. The isolation of neutrophils from human blood by density gradient separation method and the differentiation of human promyelocytic (HL60) cells along the granulocytic pathway are described here; to test their role on sensitivity of lymphoma cells to anti-lymphoma agents.

בידוד נויטרופילים וניתוח כדי לקבוע את תפקידם רגישות תאים לימפומה לסוכנים טיפוליים

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

Applying Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET) to Examine Effector Translocation Efficiency by Coxiella burnetii during siRNA Silencing

Coxiella burnetii, the causative agent of Q fever, is an intracellular pathogen that relies on a Type IV Dot/Icm Secretion System to establish a replicative niche. A cohort of effectors are translocated through this system into the host cell to manipulate host processes and allow the establishment of a unique lysosome-derived vacuole for replication. The method presented here involves the combination of two well-established techniques: specific gene silencing using siRNA and measurement of effector translocation using a FRET-based substrate that relies on &#946;-lactamase activity. Applying these two approaches, we can begin to understand the role of host factors in bacterial secretion system function and effector translocation. In this study we examined the role of Rab5A and Rab7A, both important regulators of the endocytic trafficking pathway. We demonstrate that silencing the expression of either protein results in a decrease in effector translocation efficiency. These methods can be easily modified to examine other intracellular and extracellular pathogens that also utilize secretion systems. In this way, a global picture of host factors involved in bacterial effector translocation may be revealed.

Applying Fluorescence Resonance Energy Transfer FRET to Examine Effector Translocation Efficiency by Coxiella burnetii during siRNA Silencing

Investigating the interactions between bacterial pathogens and their hosts is an important area of biological research. Here, we describe the necessary techniques to measure effector translocation by Coxiella burnetii during siRNA gene silencing using BlaM substrate.

החלת העברת אנרגית תהודת קרינה (סריג) לבחינת יעילות טרנסלוקציה מפעיל ידי<em&gt; Burnetii Coxiella</em&gt; במהלך siRNA השתקה

Coxiella burnetii, the causative agent of Q fever, is an intracellular pathogen that relies on a Type IV Dot/Icm Secretion System to establish a ...

A Non-invasive and Technically Non-intensive Method for Induction and Phenotyping of Experimental Bacterial Pneumonia in Mice

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant preclinical advances in our understanding of the underlying cellular and molecular pathogenesis. In vivo mouse models capture the integrated physiology and resilience of the host defense response in a manner not revealed by alternative, simplified ex vivo approaches. Several methods have been described in the literature for intrapulmonary inoculation of bacteria in mice, including aerosolization, intranasal delivery, peroral endotracheal cannulation under &#39;blind&#39; and visualized conditions, and transcutaneous endotracheal cannulation. All methods have relative merits and limitations. Herein, we describe in detail a non-invasive, technically non-intensive, inexpensive, and rapid method for intratracheal delivery of bacteria that involves aspiration (i.e., inhalation) by the mouse of an infectious inoculum pipetted into the oropharynx while under general anesthesia. This method can be used for pulmonary delivery of a wide variety of non-caustic biological and chemical agents, and is relatively easy to learn, even for laboratories with minimal prior experience with pulmonary procedures. In addition to describing the aspiration pneumonia method, we also provide step-by-step procedures for assaying the subsequent in vivo pulmonary innate immune response of the mouse, in particular, methods for quantifying bacterial clearance and the cellular immune response of the infected airway. This integrated and simple approach to pneumonia assessment allows for rapid and robust evaluation of the effect of genetic and environmental manipulations upon pulmonary innate immunity.

Several methods have been described in the literature for modeling bacterial pneumonia in mice. Herein, we describe a non-invasive, inexpensive, rapid method for inducing pneumonia via aspiration (i.e., inhalation) of a bacterial inoculum pipetted into the oropharynx. Downstream methods for assessment of the pulmonary innate immune response are also detailed.

שיטה לא פולשנית הטכנית ללא עתירי עבור אינדוקצית phenotyping של דלקת ריאות חיידקית הניסויית עכברים

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant ...

Precision-cut Mouse Lung Slices to Visualize Live Pulmonary Dendritic Cells

Inhalation of allergens and pathogens elicits multiple changes in a variety of immune cell types in the lung. Flow cytometry is a powerful technique for quantitative analysis of cell surface proteins on immune cells, but it provides no information on the localization and migration patterns of these cells within the lung. Similarly,&#160;chemotaxis assays can be performed to study the potential of cells to respond to chemotactic factors in vitro, but these assays do not reproduce the complex environment of the intact lung. In contrast to these aforementioned techniques, the location of individual cell types within the lung can be readily visualized by generating Precision-cut Lung Slices (PCLS), staining them with commercially available, fluorescently tagged antibodies, and visualizing the sections by confocal microscopy. PCLS can be used for both live and fixed lung tissue, and the slices can encompass areas as large as a cross section of an entire lobe. We have used this protocol to successfully visualize the location of a wide variety of cell types in the lung, including distinct types of dendritic cells, macrophages, neutrophils, T cells and B cells, as well as structural cells such as lymphatic, endothelial, and epithelial cells. The ability to visualize cellular interactions, such as those between dendritic cells and T cells, in live, three-dimensional lung tissue, can reveal how cells move within the lung and interact with one another at steady state and during inflammation. Thus, when used in combination with other procedures, such as flow cytometry and quantitative PCR, PCLS can contribute to a comprehensive understanding of cellular events that underlie allergic and inflammatory diseases of the lung.

We describe a method for generating Precision-cut Lung Slices (PCLS) and immunostaining them to visualize the localization of various immune cell types in the lung. Our protocol can be extended to visualize the location and function of many different cell types under a variety of conditions.

Precision-לחתוך פרוסות ריאת עכבר לדמיין תאי דנדריטים ריאה חיים

Inhalation of allergens and pathogens elicits multiple changes in a variety of immune cell types in the lung. Flow cytometry is a powerful technique for ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against currently circulating strains. In addition to their use in treating seasonal influenza, the NA inhibitors have been stockpiled by a number of countries for use in the event of a pandemic. It is therefore important to monitor the susceptibility of circulating influenza viruses to this class of antivirals. There are different types of assays that can be used to assess the susceptibility of influenza viruses to the NA inhibitors, but the enzyme inhibition assays using either a fluorescent substrate or a chemiluminescent substrate are the most widely used and recommended. This protocol describes the use of a fluorescence-based assay to assess influenza virus susceptibility to NA inhibitors. The assay is based on the NA enzyme cleaving the 2&#8242;-(4-Methylumbelliferyl)-&#945;-D-N-acetylneuraminic acid (MUNANA) substrate to release the fluorescent product 4-methylumbelliferone (4-MU). Therefore, the inhibitory effect of an NA inhibitor on the influenza virus NA is determined based on the concentration of the NA inhibitor that is required to reduce 50% of the NA activity, given as an IC50 value.

We describe the use of a phenotypic fluorescence-based neuraminidase inhibition assay to assess the susceptibility of influenza A and B viruses to the neuraminidase inhibitor class of antivirals.

קרינה המבוססת Assay Neuraminidase העיכוב להעריך את הרגישות של שפעת וירוסים אל Neuraminidase המונע המחלקה של תרופות אנטי-ויראליות

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...

Effects of Taste Signaling Protein Abolishment on Gut Inflammation in an Inflammatory Bowel Disease Mouse Model

Inflammatory bowel disease (IBD) is one of the immune-related gastrointestinal disorders, including ulcerative colitis and Crohn's disease, that affects the life quality of millions of people worldwide. IBD symptoms include abdominal pain, diarrhea, and rectal bleeding, which may result from the interactions among gut microbiota, food components, intestinal epithelial cells, and immune cells. It is of particular importance to assess how each key gene expressed in intestinal epithelial and immune cells affects inflammation in the colon. G protein-coupled taste receptors, including G protein subunit &#945;-gustducin and other signaling proteins, have been found in the intestines. Here, we use &#945;-gustducin as a representative and describe a dextran sulfate sodium (DSS)-induced IBD model to evaluate the effect of gustatory gene mutations on gut mucosal immunity and inflammation. This method combines gene knockout technology with the chemically induced IBD model, and thus can be applied to assess the outcome of gustatory gene nullification as well as other genes that may exuberate or dampen the DSS-induced immune response in the colon. Mutant mice are administered with DSS for a certain period during which their body weight, stool, and rectal bleeding are monitored and recorded. At different timepoints during administration, some mice are euthanized, then the sizes and weights of their spleens and colons are measured and gut tissues are collected and processed for histological and gene expression analyses. The data show that the &#945;-gustducin knockout results in excessive weight loss, diarrhea, intestinal bleeding, tissue damage, and inflammation vs. wild-type mice. Since the severity of induced inflammation is affected by mouse strains, housing environment, and diet, optimization of DSS concentration and administration duration in a pilot experiment is particularly important. By adjusting these factors, this method can be applied to assess both anti- and pro-inflammatory effects.

Here we present a protocol to investigate the effect of the nullification of gustation-related genes on immune responses in a dextran sulfate sodium (DSS)-induced inflammatory bowel disease (IBD) mouse model.

ההשפעות של טעם איתות חלבון ביטול על דלקת מעיים במודל עכבר מחלות מעי דלקתיות

Inflammatory bowel disease (IBD) is one of the immune-related gastrointestinal disorders, including ulcerative colitis and Crohn's disease, that affects ...

Establishment of Viral Infection and Analysis of Host-Virus Interaction in Drosophila Melanogaster

Virus spreading is a major cause of epidemic diseases. Thus, understanding the interaction between the virus and the host is very important to extend our knowledge of prevention and treatment of viral infection. The fruit fly Drosophila melanogaster has proven to be one of the most efficient and productive model organisms to screen for antiviral factors and investigate virus-host interaction, due to powerful genetic tools and highly conserved innate immune signaling pathways. The procedure described here demonstrates a nano-injection method to establish viral infection and induce systemic antiviral responses in adult flies. The precise control of the viral injection dose in this method enables high experimental reproducibility. Protocols described in this study include the preparation of flies and the virus, the injection method, survival rate analysis, the virus load measurement, and an antiviral pathway assessment. The influence effects of viral infection by the flies' background were mentioned here. This infection method is easy to perform and quantitatively repeatable; it can be applied to screen for host/viral factors involved in virus-host interaction and to dissect the crosstalk between innate immune signaling and other biological pathways in response to viral infection.

Establishment of Viral Infection and Analysis of Host-Virus Interaction in Drosophila Melanogaster

This protocol describes how to establish viral infection in vivo in Drosophila melanogaster using the nano-injection method and basic techniques to analyze virus-host interaction.

הקמתה של זיהום נגיפי וניתוח של התערבות מארח-וירוס דרוזופילה Melanogaster

Virus spreading is a major cause of epidemic diseases. Thus, understanding the interaction between the virus and the host is very important to extend our ...

The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis

Candida species are common fungal commensals of humans colonizing the skin, mucosal surfaces, and gastrointestinal tract. Under certain conditions, Candida can overgrow their natural niches resulting in debilitating mucosal infections as well as life-threatening systemic infections, which are a major focus of investigation due to their associated high mortality rates. Animal models of disseminated infection exist for studying disease progression and dissecting the characteristics of Candida pathogenicity. Of these, the Galleria mellonella waxworm infection model provides a cost-effective experimental tool for high-throughput investigations of systemic virulence. Many other bacterial and eukaryotic infectious agents have been effectively studied in G. mellonella to understand pathogenicity, making it a widely accepted model system. Yet, variation in the method used to infect G. mellonella can alter phenotypic outcomes and complicate interpretation of the results. Here, we outline the benefits and drawbacks of the waxworm model to study systemic Candida pathogenesis and detail an approach to improve reproducibility. Our results highlight the range of mortality kinetics in G. mellonella and describe the variables which can modulate these kinetics. Ultimately, this method stands as an ethical, rapid, and cost-effective approach to study virulence in a model of disseminated candidiasis.

The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis

Galleria mellonella serves as an invertebrate model for disseminated candidiasis. Here, we detail the infection protocol and provide supporting data for the model&#39;s effectiveness.

לדוגמא Galleria mellonella Waxworm זיהום קנדידה המופץ

Candida species are common fungal commensals of humans colonizing the skin, mucosal surfaces, and gastrointestinal tract. Under certain conditions, ...