עבודה זו נתמכה על ידי המכון הקנדי לבריאות מחקר (MSH-95368, 89773 ו MOP-MOP-106,623 עד CZ) וקרן קנדה עבור חדשנות. SCM הוא הנמען של האגודה CIHR / הקנדי של אחווה לגסטרואנטרולוגיה דוקטורט. CZ הוא חוקר חדש CIHR.

1. הפצת Trichuris ביצים muris <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי ליצור קבוצות חדשות של ביצים Trichuris muris, להדביק 20-30 עכברים immunodeficient (למשל NOD.Cg-Prkdc SCID Il2rg tm1Wjl / SzJ (NSG) או 129S6/SvEvTac-Rag2 tm1Fwa (RAG2 - / -)) או עכברים רגישים מבחינה גנטית ( למשל. AKR / י) כי הם 6-8 שבועות עם כ 300 ביצים Trichuris muris ידי gavage הפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 32-35 ימים להקריב את העכברים בחנק CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף את הצד הגחוני של העכבר רטובה את הבטן עם אתנול 70%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלקחיים שימוש לתפוס את עור הבטן לעשות חתך קטן בעזרת מספריים. חותכים את העור כדי לחשוף את תכולת הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהה את cecum ואת המעי הגס הפרוקסימלי, ולהסיר אותם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את cecum ואת המעי הגס הפרוקסימלי של צלחת פטרי המכילה 10 ס&quot;מ השתנה Dulbecco הנשר בינוני (DMEM) עם 500 U / ml פניצילין 500 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​סטרפטומיצין (P / S). חותכים את cecum לפתוח לחשוף את לומן ואת תולעים. בעזרת מלקחיים cecum מקום בכוס של פוספט שנאגרו מלוחים (PBS) וללחוץ בעדינות כדי להסיר את הצואה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור cecum אל צלחת פטרי באמצעות מלקחיים מעוקל חלקה (Roboz RS-5047) בעדינות לשלוף תולעים למקם אותם היטב של צלחת 6 היטב המכיל 5 MLS ש DMEM + P / </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על תהליך זה עבור כל העכברים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים 6 צלחת היטב במיכל פלסטיק עם מגבת נייר לחה כדי לשמור על לחות לדגור על 37 מעלות צלזיוס למשך 4 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 4 שעות להסיר תולעים באמצעות מלקחיים מעוקל חלקה לפצל אותם לתוך 2 בארות חדשות של צלחת 6 היטב DMEM המכיל 5 מ&quot;ל + P / S. קציר את תוכן היטב את המקום המקורי של צינור 15 בז מ&quot;ל. ספין צינור ב 3000 סל&quot;ד ולהסיר ובמילואים supernatant כמו אנטיגן 4 שעה (יכול לשמש restimulation התא לאחר PBS דיאליזה, שם התשואות חלבון טיפוסי הם 10-20 מ&quot;ג לכל 20 עכברים) ו resuspend ביצה המכילים גלולה במי ברז autoclaved. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את צלחת 6 גם חזרה 37 מעלות צלזיוס למשך הלילה. הסר להיפטר התולעים. קציר את התוכן של בארות לתוך צינור בז ספין בסל&quot;ד 3000 דקות 5. הסר supernatant ובמילואים כמו אנטיגן לילה (ניתן להשתמש Trichuris Ag ELISAs אלוטיפ נוגדן ספציפי לאחר PBS דיאליזה, שם התשואות חלבון טיפוסי הם 10-20 מ&quot;ג לכל 20 עכברים) ו המכילות ביצים resuspend גלולה במי ברז autoclaved. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שלב 4 שעות וביצים לילה ולסנן את הביצים דרך המסננת 70μm להסיר שאריות תולעים מכן להעביר לתוך בקבוקון 75 ס&quot;מ 2. שמור את הבקבוק במקום חשוך מכוסה בנייר כסף במשך 6 שבועות בטמפרטורת החדר (RT). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף ביצים במי ברז autoclaved ו resuspend בגיל 50 ביצים קיימא μl 50. כדי לעשות זאת, צנטריפוגה ביצים בסל&quot;ד 3000 דקות 5 ו resuspend במים 50 מ&quot;ל ~ ברז סטרילי. הסר 50 ביצים μl מקום בשקופית זכוכית. באמצעות הגדלה 40X לספור את מספר הביצים embryonated קיימא μl 50. מדולל ביצים לתת 50 ביצים קיימא μl 50. לקבלת תמונות של ביצי קיימא עיין מחקר שנערך על ידי Kopper ו מנספילד 16. </li></ol> 2. דלקת חריפה של עכברי הניסוי עם Trichuris muris ביצים (200 ביצים / עכבר) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביצים resuspend ביסודיות להסיר נפח מספיק כדי לטפל במספר של עכברים X 2 (למשל עבור 10 עכברים לוקחים 200 μl x 10 x 2 = עכברים MLS 4 ביצים) וגם למקם אותם שפופרת 14 מ&quot;ל הצמד כובע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך את הצמד 14 מ&quot;ל צינור כובע לערבב. מביא 200 μl של ביצים לתוך מזרק 1 מ&quot;ל על מחט בגודל המתאים האכלה (עבור עכברים במשקל 25 גרם השתמשנו 18 מד 1 1 / 2 &quot;מחטים). בעורפו ב יד אחת על העכבר בעזרת היד השנייה לנהל את הביצים על ידי gavage אוראלי . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חכה 21 ימים. </li></ol> 3. ניסיוני קציר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום 21 להקריב את העכברים באמצעות ה-CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איסוף דם מעכברים ידי לנקב לב, בתוך מזרק ללא heparinized, ולאחסן ב 4 ° C. למחרת לבודד בסרום להקפיא ב -20 ° C. סרום ניתן להשתמש לצורך זיהוי של Trichuris ספציפי IgGs ו IgE על ידי ELISA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף את הצד הגחוני של העכבר רטובה את הבטן עם אתנול 70%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלקחיים שימוש לתפוס את עור הבטן לעשות חתך קטן בעזרת מספריים. חותכים את העור ואת קרום הבסיסי לחשוף את תכולת הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהה את המעי הדק, cecum והמעי הגס. תפוס את cecum עם מלקחיים ולשלוף של חלל הבטן. עם זוג נוסף של מלקחיים לדחוף המעי הדק מעל ימינה לחשוף את בלוטות לימפה mesenteric (mLNs). הסר את mLNs נזהרים שלא לחתוך את המעיים ומכניסים 15 מ&quot;ל בז המכיל 2 MLS של התקשורת. אם תרצה אלה יכולים להיות מעובדים restimulated במבחנה (4x10 6 / מ&quot;ל 1 מ&quot;ל ב 24 צלחות היטב עם αCD3/CD28 מיקרוגרם / מ&quot;ל 1 או עם 50μg/ml 4H Trichuris Ag) עבור 72 שעות לניתוח ציטוקינים על ידי ELISA ו-F תאייםנמוך cytometry. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את cecum והמעי הגס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים, לדחוף החוצה כדורי צואה מן המעי הגס הדיסטלי מקום ובכל צינור 2 Axygen מ&quot;ל. להקפיא ב -20 ° C. כדורי צואה ניתן לנתח על ידי כתם המערבי לביטוי של resistin כמו β-מולקולה (RELM-β). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הקצה של cecum (~ 0.5 ס&quot;מ). כדי להסיר צואת להחזיק קצה cecum עם מלקחיים ולשטוף עם PBS באמצעות מזרק 3 מ&quot;ל ו - 22-מחט מד בצלחת פטרי. מקום paraformaldehyde 4% טרי צינור 5 מ&quot;ל פלקון כובע הצמד. חנות ב 4 ° C. אלה יכולים להיות מוטבע פרפין, מחולק רכוב על שקופיות לניתוח היסטולוגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר חתיכת המעי הגס הפרוקסימלי (~ 1 ס&quot;מ) של RNA. שים מדגם לתוך צינור 2 Axygen מ&quot;ל עם RNAlater 500 μl. חנות ב 4 ° C. דגימות אלו ניתן לנתח ביטוי mRNA על ידי qPCR. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את שאר cecum בצלחת פטרי שכותרתו להקפיא ב -20 ° C. </li></ol> 4. ספירת Trichuris muris תולעים cecum <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר cecum מהמקפיא ומניחים בצלחת פטרי המכילות ~ 5 מ&quot;ל מים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מספריים, חותכים לפתוח cecum לחשוף את לומן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזק את cecum עם מלקחיים במרץ לנער את cecum להסיר את מרבית הצואה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת cecum אל צלחת פטרי אחר המכיל מים באמצעות מלקחיים מעוקל חלק בעדינות לגרד את IECs הרקמה הבסיסית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת cecum כדי בצלחת פטרי חדשה המכילה מים במרץ לגרד רקמות הנותרים עם מלקחיים, קורעת את הרקמה לחתיכות קטנות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במיקרוסקופ לנתח כדי לספור את כל התולעים בכל 3 של בצלחות פטרי. כפי שאתם מוצאים תולעת להסיר אותו בצלחת כדי להבטיח את התולעת אותו לא נספר פעמיים. אם תולעים פגומים (שבורות כלומר במחצית) לספור רק מסתיים עבה או דק כדי לקבל מספר מדויק. </li></ol> 5. נציג תוצאות המודל muris Trichuris זיהום מאפשר לחוקרים לכמת נטל טפיל התגובה החיסונית מערכתית, כמו גם בהיסטולוגיה לבחון את התגובה הדלקתית בתוך cecum הדיסטלית. כאשר לומן של cecum שנקטפו חשוף, תולעים Trichuris ניתן המנויים באמצעות מיקרוסקופ לנתח (איור 1A-B). פרמטרים של חסינות Trichuris כוללים גם אלוטיפ נוגדן מעבר IgG1 (המשויך חסינות מסוג Th2) אצל בעלי חיים עמידים, IgG2a (המשויך חסינות מסוג Th1) בבעלי חיים רגישים (תרשים 1C). הביטוי של הגביע תא ספציפי חלבון resistin כמו מולקולות β (RELM-β) מזוהה עם אישור של Trichuris והוא לזיהוי על ידי ניתוח כתם המערבי (איור 2). החלק הדיסטלי של cecum יכול להיות מוכתם תקופתיים חומצה שיף (PAS) כדי להעריך את התא הגביע התגובות והיקף דלקת מעיים בתגובה לזיהום (איור 3). <img src="/files/ftp_upload/2774/2774fig1.jpg" alt="איור 1"/> באיור 1. כימות חסינות Trichuris muris. (א) עמיד (B6) עכברים לגרש muris Trichuris על ידי 21 יום שלאחר זיהום. לעומת זאת, רגישים (AKR / J) עכברים נדבקים כרוני עם Trichuris, וכתוצאה מכך הקמת טפיל. כל עמודה מייצגת את הממוצע ± SEM של 4-8 חיות לכל קבוצה. (ב) תולעים נספרים באמצעות מיקרוסקופ לנתח. הפאנל למעלה מראה תולעים בבידוד, לוח התחתונה מראה תולעים בנוכחות IECs ובצואה. (ג) Trichuris ספציפי titres IgG2a נקבעים על ידי ELISA של נסיוב מדוללת (01:02 דילול, החל מהשעה 1:20 דילול ומסתיים 1:2560) על צלחות מצופה אנטיגן הפרשה Trichuris (O / N Ag, 5 מיקרוגרם / מ&quot;ל). רגישים AKR / י עכברים בעלי רמות גבוהות במיוחד של IgG2a Trichuris ספציפיים בסרום מאשר B6 עכברים עמידים. <img src="/files/ftp_upload/2774/2774fig2.jpg" alt="איור 2"/> איור 2. חיסול של Trichuris muris קשורה ביטוי הגביע תאים ספציפיים לחלבון RELM β-7. RELM-β הייצור ניתן להבחין בין כדוריות צואה מן עמידים Trichuris נגועים (B6), אבל לא רגישים (AKR / J) עכברים ידי ניתוח כתם המערבי. נתיב כל נציג של חיה אחת, (N) = תמים, (TM) = 21 יום Trichuris עכברים נגועים. <img src="/files/ftp_upload/2774/2774fig3.jpg" alt="איור 3"/> איור 3. בדיקה היסטולוגית של זיהום cecum דיסטלי הבאים Trichuris. סעיפים 5-7 מיקרומטר של cecum דיסטלי מוכתם PAS. תא וגביע היפרפלזיה ייצור ליחה ניכרות עמיד (B6), אבל לא רגישים (AKR / J) עכברים הבאים זיהום Trichuris.

<ol>
	<li>Cliffe, L. J., Grencis, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Trichuris+muris+system:+a+paradigm+of+resistance+and+susceptibility+to+intestinal+nematode+infection.">The Trichuris muris system: a paradigm of resistance and susceptibility to intestinal nematode infection.</a> Adv. Parasitol. 57, 255-307 (2004).</li><li>Else, K. J., Finkelman, F. D., Maliszewski, C. R., Grencis, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokine-mediated+regulation+of+chronic+intestinal+helminth+infection.">Cytokine-mediated regulation of chronic intestinal helminth infection.</a> J. Exp. Med. 179, 347-351 (1994).</li><li>Bancroft, A. J., Grencis, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Th1+and+Th2+cells+and+immunity+to+intestinal+helminths.">Th1 and Th2 cells and immunity to intestinal helminths.</a> Chem. Immunol. 71, 192-208 (1998).</li><li>Bancroft, A. J., McKenzie, A. N., Grencis, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+role+for+IL-13+in+resistance+to+intestinal+nematode+infection.">A critical role for IL-13 in resistance to intestinal nematode infection.</a> J. Immunol. 160, 3453-3461 (1998).</li><li>Helmby, H., Takeda, K., Akira, S., Grencis, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin+(IL)-18+promotes+the+development+of+chronic+gastrointestinal+helminth+infection+by+downregulating+IL-13.">Interleukin (IL)-18 promotes the development of chronic gastrointestinal helminth infection by downregulating IL-13.</a> J. Exp. Med. 194, 355-364 (2001).</li><li>Owyang, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin+25+regulates+type+2+cytokine-dependent+immunity+and+limits+chronic+inflammation+in+the+gastrointestinal+tract.">Interleukin 25 regulates type 2 cytokine-dependent immunity and limits chronic inflammation in the gastrointestinal tract.</a> J. Exp. Med. 203, 843-849 (2006).</li><li>Artis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RELM&#946;/FIZZ2+is+a+goblet+cell-specific+immune-effector+molecule+in+the+gastrointestinal+tract.">RELM&#946;/FIZZ2 is a goblet cell-specific immune-effector molecule in the gastrointestinal tract.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 101, 13596-13600 (2004).</li><li>Datta, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+novel+genes+in+intestinal+tissue+that+are+regulated+after+infection+with+an+intestinal+nematode+parasite.">Identification of novel genes in intestinal tissue that are regulated after infection with an intestinal nematode parasite.</a> Infect. Immun. 73, 4025-4033 (2005).</li><li>Cliffe, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+intestinal+epithelial+cell+turnover:+a+new+mechanism+of+parasite+expulsion.">Accelerated intestinal epithelial cell turnover: a new mechanism of parasite expulsion.</a> Science. 308, 1463-1465 (2005).</li><li>Artis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+weapons+in+the+war+on+worms:+identification+of+putative+mechanisms+of+immune-mediated+expulsion+of+gastrointestinal+nematodes.">New weapons in the war on worms: identification of putative mechanisms of immune-mediated expulsion of gastrointestinal nematodes.</a> Int. J. Parasitol. 36, 723-733 (2006).</li><li>Finkelman, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokine+regulation+of+host+defense+against+parasitic+gastrointestinal+nematodes:+lessons+from+studies+with+rodent+models.">Cytokine regulation of host defense against parasitic gastrointestinal nematodes: lessons from studies with rodent models.</a> Annu. Rev. Immunol. 15, 505-533 (1997).</li><li>Grencis, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enteric+helminth+infection:+immunopathology+and+resistance+during+intestinal+nematode+infection.">Enteric helminth infection: immunopathology and resistance during intestinal nematode infection.</a> Chem. Immunol. 66, 41-61 (1997).</li><li>Khan, W. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+intestinal+muscle+contraction+by+interleukin-9+(IL-9)+or+IL-9+neutralization:+correlation+with+worm+expulsion+in+murine+nematode+infections.">Modulation of intestinal muscle contraction by interleukin-9 (IL-9) or IL-9 neutralization: correlation with worm expulsion in murine nematode infections.</a> Infect. Immun. 71, 2430-2438 (2003).</li><li>Khan, W. I., Blennerhasset, P., Ma, C., Matthaei, K. I., Collins, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stat6+dependent+goblet+cell+hyperplasia+during+intestinal+nematode+infection.">Stat6 dependent goblet cell hyperplasia during intestinal nematode infection.</a> Parasite Immunol. 23, 39-42 (2001).</li><li>Akiho, H., Blennerhassett, P., Deng, Y., Collins, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+IL-4,+IL-13,+and+STAT6+in+inflammation-induced+hypercontractility+of+murine+smooth+muscle+cells.">Role of IL-4, IL-13, and STAT6 in inflammation-induced hypercontractility of murine smooth muscle cells.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 282, 226-2232 (2002).</li><li>Kopper, J. J., Mansfield, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+improved+methods+for+delivery+of+Trichuris+muris+to+the+laboratory+mouse.">Development of improved methods for delivery of Trichuris muris to the laboratory mouse.</a> Parasitol. Res. 107, 1103-1113 (2010).</li><li>Bancroft, A. J., Else, K. J., Grencis, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-level+infection+with+Trichuris+muris+significantly+affects+the+polarization+of+the+CD4+response.">Low-level infection with Trichuris muris significantly affects the polarization of the CD4 response.</a> Eur. J. Immunol. 24, 3113-3118 (1994).</li></ol>

ניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיות והתקנות שנקבעו על ידי האוניברסיטה של ​​קולומביה הבריטית.

פרוטוקול זה פרטים מנה ברמה גבוהה חריפה Trichuris muris זיהום אשר יכול להיות שונה כפי שנדרש על ידי החוקר. למשל, בעכברים אפשר להקריב ורקמות שנקטפו בימים שונים. כדי לקבוע כי העכברים הקימו בהצלחה נטל תולעת מלא הם יכולים להקריב ביום 14, ובשלב זה כל העכברים צריכים לשאת בנטל של ?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> שם מגיב </th><th> חברה </th><th> מספר קטלוגי </th><th> תגובות </th></tr><tr><td> האכלת בעלי חיים מחטים (18 x ½ 1 &quot;) </td><td> פופר </td><td> 7912 </td><td></td></tr><tr><td> מלקחיים מעוקל חלקות </td><td> Roboz </td><td> RS-5047 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Gibco </td><td> 11965 </td><td></td></tr><tr><td> NOD.Cg-Prkdc SCID Il2r gtm1Wjl / SzJ (NSG) </td><td> ג&#39;קסון מעבדות </td><td> 005557 </td><td> אלה הם העכברים השתמשנו, לעומת זאת, כל העכברים immunodeficient או זן רגיש צריך לעבוד. </td></tr><tr><td> RNAlater </td><td> Qiagen </td><td> 76104 </td><td></td></tr><tr><td> 2 מ&quot;ל צינורות </td><td> Axygen </td><td> MCT-200-C </td><td></td></tr><tr><td> 15 צינורות מ&quot;ל </td><td> בז </td><td> 352096 </td><td></td></tr><tr><td> 6 צלחות טוב </td><td> בז </td><td> 353046 </td><td></td></tr><tr><td> Paraformaldehyde </td><td> מיקרוסקופית אלקטרונים המדע </td><td> 15710 </td><td></td></tr><tr><td> α-RELMβ נוגדן </td><td> PeproTech Inc </td><td> 0694270Rb </td><td></td></tr></tbody></table>

trichuris muris infection: a model of type 2 immunity and inflammation in the gut

Trichuris muris הוא פתוגן טבעי של עכברים דומה ביולוגית antigenically למינים של Trichuris כי להדביק בני אדם ובעלי חיים 1. ביצי התולעת ניתנים על ידי gavage אוראלי, בוקעות במעי הדק הדיסטלי, לפלוש לתאי האפיתל במעי (IECs) כי קו מאורות של cecum ואת המעי הגס הפרוקסימלי ועל התבגרות תולעים שחרור ביצים לתוך הסביבה 1. מודל זה הוא כלי רב עוצמה לבחון את הגורמים CD4 + T שליטה עוזר (ה &#39;) בתא ההפעלה, כמו גם שינויים באפיתל המעי. התגובה החיסונית המתרחשת זנים טהורים עמידים, כגון C57BL / 6 BALB / c, מאופיין ציטוקינים Th2 מקוטב (IL-4, IL-5 ו-IL-13) וגירוש של תולעים בזמן Th1 הקשורים ציטוקינים (IL -12, IL-18, IFN-γ) לקדם דלקות כרוניות AKR רגישים מבחינה גנטית / עכברים J 2-6. ציטוקינים Th2 לקדם שינויים פיזיולוגיים אצל microenvironment המעי כולל תחלופה מהירה של IECs, התמיינות תאים הגביע, גיוס ושינויים בחדירות אפיתל והתכווצות שרירים חלקים, אשר כולם היו מעורבים בגירוש תולעת 7-15. כאן אנו פרט פרוטוקול עבור הפצת Trichuris ביצים muris אשר ניתן להשתמש בהם בניסויים הבאים. כמו כן אנו מספקים מדגם ניסיוני הקציר עם הצעות ניתוח שלאחר זיהום. בסך הכל, פרוטוקול זה יספק לחוקרים את הכלים הבסיסיים לביצוע muris זיהום Trichuris העכבר מודל אשר יכול לשמש כדי לענות על שאלות הנוגעות נטייה Th במערכת העיכול, כמו גם פונקציות מפעיל החיסונית של IECs.

Watch this Scientific Journal Video about Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut at JoVE.com

Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

זיהום Trichuris muris הוא מודל מעיים של חסינות Th2 שבו עכברים עמיד ליצור תגובת Th2 מגן עכברים רגישים ליצור תגובה פתולוגית Th1.

Trichuris muris זיהום: מודל של חסינות סוג 2, דלקת במעיים

Trichuris muris is a natural pathogen of mice and is biologically and antigenically similar to species of Trichuris that 
infect humans and livestock1. ...

trichuris-muris-infection-model-type-2-immunity-inflammation

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

16.2K Views.  University of British Columbia. זיהום Trichuris muris הוא מודל מעיים של חסינות Th2 שבו עכברים עמיד ליצור תגובת Th2 מגן עכברים רגישים ליצור תגובה פתולוגית Th1.

Video: Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

Functional Assessment of Intestinal Motility and Gut Wall Inflammation in Rodents: Analyses in a Standardized Model of Intestinal Manipulation

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the complex cellular and molecular of intestinal pathology. Although the tunica mucosa is often the organ of interest in many inflammatory diseases, recent works demonstrated that the muscularis externa (ME) is also a highly immunocompetent organ that harbours a dense network of resident immunocytes.1,2 These works were performed within the standardized model of intestinal manipulation (IM) that leads to inflammation of the bowel wall, mainly limited to the ME. Clinically this inflammation leads to prolonged intestinal dysmotility, known as postoperative ileus (POI) which is a frequent and unavoidable complication after abdominal surgery.3 The inflammation is characterized by liberation of proinflammatory mediators such as IL-64 or IL-1&beta; or inhibitory neurotransmitters like nitric oxide (NO).5 Subsequently, tremendous numbers of immunocytes extravasate into the ME, dominated by polymorphonuclear neutrophils (PMN) and monocytes and finally maintain POI.2 Lasting for days, this intestinal paralysis leads to an increased risk of aspiration, bacterial translocation and infectious complications up to sepsis and multi organ failure and causes a high economic burden.6
In this manuscript we demonstrate the standardized model of IM and in vivo assessment of gastrointestinal transit (GIT) and colonic transit. Furthermore we demonstrate a method for separation of the ME from the tunica mucosa followed by immunological analysis, which is crucial to distinguish between the inflammatory responses in these both highly immunoactive bowel wall compartments. All analyses are easily transferable to any other research models, affecting gastrointestinal function.

Postoperative ileus (POI) is a complication of abdominal surgery leading to increased morbidity and a prolonged hospital stay. Because prophylactic or therapeutic strategies are lacking intensified research is necessary. Therefore we established a standardized and feasible mouse model to investigate the pathophysiology of POI and to study potential therapeutic options.

הערכה תפקודית של תנועתיות מעיים ודלקת דופן מעי במכרסמים: ניתוח בדגם סטנדרטי של מניפולצית מעיים

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the ...

Medicine

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

This protocol outlines the steps required to produce a robust model of infectious disease and colitis, as well as the methods used to characterize Citrobacter rodentium infection in mice. C. rodentium is a gram negative, murine specific bacterial pathogen that is closely related to the clinically important human pathogens enteropathogenic E. coli and enterohemorrhagic E. coli. Upon infection with C. rodentium, immunocompetent mice suffer from modest and transient weight loss and diarrhea. Histologically, intestinal crypt elongation, immune cell infiltration, and goblet cell depletion are observed. Clearance of infection is achieved after 3 to 4 weeks. Measurement of intestinal epithelial barrier integrity, bacterial load, and histological damage at different time points after infection, allow the characterization of mouse strains susceptible to infection.
The virulence mechanisms by which bacterial pathogens colonize the intestinal tract of their hosts, as well as specific host responses that defend against such infections are poorly understood. Therefore the C. rodentium model of enteric bacterial infection serves as a valuable tool to aid in our understanding of these processes. Enteric bacteria have also been linked to Inflammatory Bowel Diseases (IBDs). It has been hypothesized that the maladaptive chronic inflammatory responses seen in IBD patients develop in genetically susceptible individuals following abnormal exposure of the intestinal mucosal immune system to enteric bacteria. Therefore, the study of models of infectious colitis offers significant potential for defining potentially pathogenic host responses to enteric bacteria. C. rodentium induced colitis is one such rare model that allows for the analysis of host responses to enteric bacteria, furthering our understanding of potential mechanisms of IBD pathogenesis; essential in the development of novel preventative and therapeutic treatments.

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

Citrobacter rodentium infection provides a valuable model to study enteric bacterial infections as well as host immune responses and colitis in mice. This protocol outlines the measurement of barrier integrity, pathogen load and histological damage allowing for the thorough characterization of pathogen and host contributions to murine infectious colitis.

<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; דגם עכבר: תרומות הפתוגן ומארח לומדים קוליטיס המדבק

This protocol  outlines the steps required to produce a robust model of infectious disease and  colitis, as well as the methods used to characterize ...

Cultivation of Heligmosomoides Polygyrus: An Immunomodulatory Nematode Parasite and its Secreted Products

Heligmosomoides polygyrus (formerly known as Nematospiroides dubius, and also referred to by some as H. bakeri) is a gastrointestinal helminth that employs multiple immunomodulatory mechanisms to establish chronic infection in mice and closely resembles prevalent human helminth infections. H. polygyrus has been studied extensively in the field of helminth-derived immune regulation and has been found to potently suppress experimental models of allergy and autoimmunity (both with active infection and isolated secreted products). The protocol described in this paper outlines management of the H. polygyrus life cycle for consistent production of L3 larvae, recovery of adult parasites, and collection of their excretory-secretory products (HES).

Cultivation of Heligmosomoides Polygyrus: An Immunomodulatory Nematode Parasite and its Secreted Products

Heligmosomoides polygyrus is a murine nematode with powerful immunomodulatory capabilities that closely resemble those of highly-prevalent human helminth infection. Here we describe a protocol for the long-term maintenance of the H. polygyrus lifecycle.

טיפוח<em&gt; Heligmosomoides Polygyrus:</em&gt; נמטודות טפיל מערכת חיסונית ומוצרים המופרשים

Heligmosomoides polygyrus (formerly known as Nematospiroides dubius, and also referred to by some as H. bakeri) is a gastrointestinal helminth that ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages and disadvantages. We describe here an experimental colitis model that is initiated by adoptive transfer of syngeneic splenic CD4+CD45RBhigh T cells into T and B cell deficient recipient mice. The CD4+CD45RBhigh T cell population that largely consists of na&#239;ve effector cells is capable of inducing chronic intestinal inflammation, closely resembling key aspects of human IBD. This method can be manipulated to study aspects of disease onset and progression. Additionally it can be used to study the function of innate, adaptive, and regulatory immune cell populations, and the role of environmental exposures, i.e., the microbiota, in intestinal inflammation. In this article we illustrate the methodology for inducing colitis with a step-by-step protocol. This includes a video demonstration of key technical aspects required to successfully develop this murine model of experimental colitis for research purposes.

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Here, we present a protocol to induce colonic inflammation in mice by adoptive transfer of syngeneic CD4+CD45RBhigh T cells into T and B cell deficient recipients. Clinical and histopathological features mimic human inflammatory bowel diseases. This method allows the study of the initiation of colonic inflammation and progression of disease.

אינדוקציה של Murine דלקת מעיים על ידי העברת המאמצת של מפעיל CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; גבוה</sup&gt; תאי T לעכברי immunodeficient

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Development of an Antigen-driven Colitis Model to Study Presentation of Antigens by Antigen Presenting Cells to T Cells

Inflammatory bowel disease (IBD) is a chronic inflammation which affects the gastrointestinal tract (GIT). One of the best ways to study the immunological mechanisms involved during the disease is the T cell transfer model of colitis. In this model, immunodeficient mice (RAG-/- recipients) are reconstituted with naive CD4+ T cells from healthy wild type hosts.
This model allows examination of the earliest immunological events leading to disease and chronic inflammation, when the gut inflammation perpetuates but does not depend on a defined antigen. To study the potential role of antigen presenting cells (APCs) in the disease process, it is helpful to have an antigen-driven disease model, in which a defined commensal-derived antigen leads to colitis. An antigen driven-colitis model has hence been developed. In this model OT-II CD4+ T cells, that can recognize only specific epitopes in the OVA protein, are transferred into RAG-/- hosts challenged with CFP-OVA-expressing E. coli. This model allows the examination of interactions between APCs and T cells in the lamina propria.

In this antigen-driven colitis model, OT-II CD4+ T cells expressing a red fluorescent protein were adoptively transferred into RAG-/- mice that express a green fluorescent protein in mononuclear phagocytes (MPs). The hosts were challenged with Escherichia coli (E.coli) expressing the ovalbumin protein (OVA) fused to a cyan fluorescent protein (CFP).

פיתוח מודל קוליטיס מונחה Antigen ללמוד מצגת של אנטיגנים על ידי אנטיגן הצגת תאים לתאי T

Inflammatory bowel disease (IBD) is a chronic inflammation which affects the gastrointestinal tract (GIT). One of the best ways to study the immunological ...

Injections of Lipopolysaccharide into Mice to Mimic Entrance of Microbial-derived Products After Intestinal Barrier Breach

The intestinal epithelial barrier separates the host from the microbiota that is normally tolerated or ignored. The breach of this barrier results in the entrance of bacteria or bacteria-derived products into the host, accessing the host circulation and inner organs leading to the uncontrolled inflammation as observed in patients with inflammatory bowel disease (IBD), that are characterized by an increased intestinal epithelial permeability.
To mimic the entrance of bacterial-derived compounds into the host, an endotoxemia model has been adopted in which lipopolysaccharide (LPS), a component of the outer cell wall of Gram-negative bacteria, were injected into mice. In this study, a sublethal dose of LPS was intraperitoneally injected and the mice were subsequently monitored for 8 h using a disease score. Furthermore, the expression levels of the inflammatory cytokines Il6, Il1b, and Tnfa were analyzed in the spleen, liver and colon by qPCR at different time points post LPS injection. This model could be useful for the studies involving investigation of immune responses after the invasion of microorganisms or bacterial-derived products caused by a barrier breach of body surfaces.

Here a protocol to mimic the entrance of bacterial-derived compounds after intestinal barrier breach is presented. A low sublethal dose of lipopolysaccharide was injected systemically into mice, which were monitored for 24 h post-injection. The expression of pro-inflammatory cytokines was determined at several time points in spleen, liver, and colon.

זריקות של ליפופוליסכריד לתוך עכברים לחקות כניסה של מוצרים מיקרוביאלית נגזר לאחר פריצה מכשול המעי

The intestinal epithelial barrier separates the host from the microbiota that is normally tolerated or ignored. The breach of this barrier results in the ...

Investigating Intestinal Inflammation in DSS-induced Model of IBD

Inflammatory bowel disease (IBD) encompasses a range of intestinal pathologies, the most common of which are ulcerative colitis (UC) and Crohn's Disease (CD). Both UC and CD, when present in the colon, generate a similar symptom profile which can include diarrhea, rectal bleeding, abdominal pain, and weight loss.1 Although the pathogenesis of IBD remains unknown, it is described as a multifactorial disease that involves both genetic and environmental components.2
There are numerous and variable animal models of colonic inflammation that resemble several features of IBD. Animal models of colitis range from those arising spontaneously in susceptible strains of certain species to those requiring administration of specific concentrations of colitis-inducing chemicals, such as dextran sulphate sodium (DSS). Chemical-induced models of gut inflammation are the most commonly used and best described models of IBD. Administration of DSS in drinking water produces acute or chronic colitis depending on the administration protocol.3 Animals given DSS exhibit weight loss and signs of loose stool or diarrhea, sometimes with evidence of rectal bleeding.4,5 Here, we describe the methods by which colitis development and the resulting inflammatory response can be characterized following administration of DSS. These methods include histological analysis of hematoxylin/eosin stained colon sections, measurement of pro-inflammatory cytokines, and determination of myeloperoxidase (MPO) activity, which can be used as a surrogate marker of inflammation.6
The extent of the inflammatory response in disease state can be assessed by the presence of clinical symptoms or by alteration in histology in mucosal tissue. Colonic histological damage is assessed by using a scoring system that considers loss of crypt architecture, inflammatory cell infiltration, muscle thickening, goblet cell depletion, and crypt abscess.7 Quantitatively, levels of pro-inflammatory cytokines with acute inflammatory properties, such as interleukin (IL)-1&beta;, IL-6 and tumour necrosis factor (TNF)-&alpha;,can be determined using conventional ELISA methods. In addition, MPO activity can be measured using a colorimetric assay and used as an index of inflammation.8
In experimental colitis, disease severity is often correlated with an increase in MPO activity and higher levels of pro-inflammatory cytokines. Colitis severity and inflammation-associated damage can be assessed by examining stool consistency and bleeding, in addition to assessing the histopathological state of the intestine using hematoxylin/eosin stained colonic tissue sections. Colonic tissue fragments can be used to determine MPO activity and cytokine production. Taken together, these measures can be used to evaluate the intestinal inflammatory response in animal models of experimental colitis.

Experimental models of inflammatory bowel disease have allowed us to examine the complex innate and adaptive immune responses associated with pathogenesis. Using histological scoring, quantification of pro-inflammatory cytokines and myeloperoxidase activity, one can begin to assess these responses seen in inflammatory bowel disease.

חקירת דלקת מעיים במודל DSS-Induced של IBD

Inflammatory bowel disease (IBD) encompasses a range of intestinal pathologies, the most common of which are ulcerative colitis (UC) and Crohn's Disease ...

Biology

Chronic Salmonella Infection Induced Intestinal Fibrosis

Tissue fibrosis characterized by the pathological accumulation of extracellular matrix such as collagen is the outcome of persistent inflammation and dysregulated repair. In inflammatory bowel disease (IBD), fibrosis leads to recurrent stricture formations for which there is no effective therapy other than surgical resection. Due to its late onset, the processes that drive fibrosis is less studied and largely unknown. Therefore, fibrotic complications represent a major challenge in IBD. In this protocol, a robust in vivo model of intestinal fibrosis is described where streptomycin pre-treatment of C57Bl/6 mice followed by oral gavage with vaccine grade Salmonella Typhimurium &#916;AroA mutant leads to persistent pathogen colonization and fibrosis of the cecum. Methodologies for preparing S. Typhimurium &#916;AroA for inoculation, quantifying pathogen loads in the cecum and spleen, and evaluating collagen deposition in intestinal tissues are explained. This experimental disease model is useful for examining host factors that either enhance or exacerbate CD-like intestinal fibrosis.

This protocol describes a mouse model of Salmonella driven intestinal fibrosis that resembles key pathological hallmarks of Crohn&#8217;s disease including transmural inflammation and fibrosis. This method can be used to evaluate host factors that alter fibrotic outcomes using mutant mice maintained on a C57Bl/6 genetic background.

סלמונלה כרונית זיהום דלקת מעיים פיברוזיס

Tissue fibrosis characterized by the pathological accumulation of extracellular matrix such as collagen is the outcome of persistent inflammation and ...

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a diverting enterostomy. The etiology of this disease remains ill-defined but appears to differ from that of classical inflammatory bowel diseases such as Crohn's disease and ulcerative colitis. Research aimed to decipher the pathophysiological mechanisms leading to the development of this disease has been severely hampered by the lack of an appropriate murine model. This protocol generates a murine model of DC that facilitates the study of the immune system's role and its interaction with the microbiome in the development of DC. In this model using C57BL/6 animals, distal parts of the colon are excluded from the fecal stream by creating a distal colostomy, triggering the development of mild to moderate inflammation in the excluded bowel segments and reproducing the hallmark lesions of human DC with a moderate systemic inflammatory response. In contrast to the rat model, a large number of genetically-modified murine models on the C57BL/6 background are available. The combination of these animals with our model allows the potential roles of individual cytokines, chemokines, or receptors of bioactive molecules (e.g., interleukin (IL)-17; IL-10, chemokine CXCL13, chemokine receptors CXCR5 and CCR7, and the sphingosine-1-phosphate receptor 4) to be assessed in the pathogenesis of DC. The availability of congenic mouse strains on the C57BL/6 background largely facilitates transfer experiments to establish the roles of distinct cell types involved in the etiology of DC. Finally, the model offers the opportunity to assess the influences of local interventions (e.g., modification of the local microbiome or local anti-inflammatory therapy) on mucosal immunity in affected and non-affected bowel segments and the on systemic immune homeostasis.

Murine distal colostomy provides a murine model for human diversion colitis, a predominantly lymphocytic colitis in colon segment excluded from the fecal stream.

מאתר למעי הגס הדיסטלי, מודל הרומן של הסחה קוליטיס בעכברים C57BL/6

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

פלטפורמה משופרת של מעי על שבב לתובנות אימונולוגיות

Immunocompetent Intestine-on-Chip Model for Analyzing Gut Mucosal Immune Responses

An advanced intestine-on-chip model recreating epithelial 3D organotypic villus-like and crypt-like structures has been developed. The immunocompetent model includes Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVEC), Caco-2 intestinal epithelial cells, tissue-resident macrophages, and dendritic cells, which self-organize within the tissue, mirroring characteristics of the human intestinal mucosa. A unique aspect of this platform is its capacity to integrate circulating human primary immune cells, enhancing physiological relevance. The model is designed to investigate the intestinal immune system&#39;s response to bacterial and fungal colonization and infection. Due to its enlarged cavity size, the model offers diverse functional readouts such as permeation assays, cytokine release, and immune cell infiltration, and is compatible with immunofluorescence measurement of 3D structures formed by the epithelial cell layer. It hereby provides comprehensive insights into cell differentiation and function. The intestine-on-chip platform has demonstrated its potential in elucidating complex interactions between surrogates of a living microbiota and human host tissue within a microphysiological perfused biochip platform.

מחבר זרקור: פיתוח מודלים של איברים-על-שבב חיסוניים לחקר מחלות זיהומיות

Our detailed protocol outlines the creation and use of the advanced intestine-on-chip model, which simulates human intestinal mucosa with 3D structures and various cell types, enabling in-depth analysis of immune responses and cellular functions in response to microbial colonization.

מודל מעי-על-שבב חיסוני לניתוח תגובות חיסוניות של רירית המעי

An advanced intestine-on-chip model recreating epithelial 3D organotypic villus-like and crypt-like structures has been developed. The immunocompetent ...

Trichuris muris זיהום: מודל של חסינות סוג 2, דלקת במעיים

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video