وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة العضلات الضمور ، ورابطة (NS062320).

1. تحت الجلد إدارة الخصوم أستيل المسكارينية (mAChR) مستقبلات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد تحت ظروف معقمة الجرعة المناسبة من خصم mAChR ، (راجع ، الجدول) عن طريق تذويب المخدرات في المياه المالحة الفسيولوجية العقيمة في أنبوب 1.5mL رد فعل. الخصوم التالية استخدمت : الأتروبين ، Methoctramine ، 4 - رطبة ، AFDX - 116 ، AFDX - 384 ، MT 7. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رسم 50μl حل حقنة الانسولين في a1cc واستخدام حقنة منفصلة لكل الماوس. أيضا بإعداد الحقن التي تحتوي على المياه المالحة الفسيولوجية فقط لكل الماوس في السيطرة على المجموعة. إبقاء الحقن على الجليد حتى جاهزة للحقن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفئران مع الكيتامين - زيلازين الكوكتيل (120 ملغم / كغم من الكيتامين و 8 ملغ / كغ زيلازين) التحقق من عمق التخدير المناسبة من خلال مراقبة عدم استجابة إلى أخمص قدميه قرصة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد التخدير المناسبة ، حلق الشعر الذي يغطي المنطقة منقاري من الرأس إلى المنطقة الذيلية من الرقبة ، ومحو ما تبقى الشعر بعيدا مع الايثانول 70 ٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الفأر في ظل stereomicroscope ، وإدراج موازية لإبرة عضلية LAL حين سحب ما يصل برفق على إبرة المحقنة (الشكل 1A ، B). هذا يضمن أن يتم إدخال الإبرة في النسيج الضام المغطي ولا أضرار مباشرة في عضلة LAL نفسها. ادخال الإبرة بحيث يغطي رأس الجانب الذيلية عضلة LAL. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تبدأ ببطء جدا لحقن المحلول فوق العضلات LAL حق حين سحب الحقنة ، والوقت حقن مجموع ينبغي حوالي 1 دقيقة. إذا حقنت بشكل صحيح ، يجب حل تشكيل &quot;القبة&quot; وهذا هو ما يقرب من 1 سم في القطر ، في الجلد المغطي التي ستبقى لمدة ساعة على الأقل. سيكون هناك حل موحد حقن تغطية مناطق بأكملها منقاري والذيلية من العضلات LAL الحق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الإجراء كل 12 ساعة لمدة 1-7 أيام. لstudies1 أخرى ، استخدمنا نفس البروتوكول لحقن عوامل النمو كل 12 ساعة لمدة تصل إلى 21 يوما. لم يلاحظ أي استجابات غير طبيعية من فئران تديرها 2X مع تخدير في اليوم لمدة تصل إلى 21 يوما. </li></ol> 2. تشريح العضلات LAL <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموت ببطء مع الفئران جرعة زائدة من الصوديوم بنتوباربيتال (390 ملغ / كلغ). وأكد وفاة من خلال تقييم نقص ضربات القلب بعد إجراء بضع الصدر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دبوس باستمرار على الماوس في طبق تشريح ، حتى مع الجانب الظهري 1 دبوس في كل مخلب و 1 دبوس عن طريق الأنف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل شق الأولى من خلال الجلد فقط ، وذلك باستخدام مقص لقطع صغيرة الربيع على طول LAL اليسرى من المنطقة القريبة فقط على الأذن في المنطقة حول الكتف الأيسر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة بعناية الجلد في هذه المنطقة ، ولكن تجنب قطع قريبة جدا من الأذن اليمنى حيث أن هذا هو واحد من الإسناد لعضلة LAL الحق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد الأنسجة الدهنية المتمركزة مركزيا الشريط من الدهون على طول خط الوسط ، على السطح سطحية في الرأس ، حيث العضلات اليمنى واليسرى LAL قاء. باستخدام مقص صغير في الربيع ، وقطع 1cm إلى اليمين من الأنسجة الدهنية (نحو الأذن اليسرى) من الحافة القريبة من العضلات LAL اليسار حتى تصل إلى الكتف (الشكل 1C). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة يتم إجراء شق ، قشر العضلة الخلفية LAL الحق مع ملقط صغير للكشف عن الجانب البطنية من العضلات. قص النسيج الضام ، وبينما لفافة بعناية سحب ما يصل على عضلة LAL الحق مع ملقط (الشكل 1C). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع حوالي نهاية الذيلية للLAL الحق في قاعدة الأذن. تواصل خفض وصولا الى نهاية منقاري من الأذن اليمنى ، والحفاظ على حق سلمت LAL (الشكل 1C). فمن الأفضل لتشمل المزيد من الأنسجة في هذه الخطوة من مخاطر الإضرار LAL نفسها. إذا كانت العضلات تبدأ لتجف ، ماصة 1X PBS على العضلات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان تشريح LAL الحق في الثقافة 30mm Sylgard صحن يحتوي على 1X PBS ، حتى الجانب الظهري. دبوس بانخفاض أربعة أركان من العضلات مع دبابيس الحشرات الصغيرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ملقط ومقص صغير الربيع ، والنسيج الضام نظيفة من السطوح الظهرية والبطنية من العضلات LAL الحق. بدوره على العضلات وإعادة دبوس من أجل تنظيفه قبالة السطح البطني. لا يجوز أن يوضع 2-3 العضلات في نفس الطبق 30mm. </li></ol> 3. الثلاثي immunostaining من NMJs LAL : يوم 1 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل بداية immunostaining ، وإعداد جميع الكواشف اللازمة. سوف 1X PBS ، الأبقار مصل الزلال 2 ٪ BSA) / برنامج تلفزيوني ، 0.1M جليكاين في 2 ٪ تكون هناك حاجة إلى جيش صرب البوسنة / PBS ، 0.2 ٪ X100 تريتون في 2 ٪ BSA / برنامج تلفزيوني ، وبارافورمالدهيد 4 ٪ (PFA) في برنامج تلفزيوني 1X. قبل الميثانول بارد في الثلاجة -20 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ترك العضلات LAL معلقة في طبق جانبي ظهري حتى أثناء هذه العملية. تجاهل 1X PBS الحل وإضافة ما يكفي من 4 ٪ (PFA) لتغطية العضلات. تعيين مكان على طبق شاكر في سرعة 2 أو 3 لمدة 20 دقيقة. ما لم يذكر خلاف ذلك ، ينبغي أن توضع في طبق على شاكر للخطوات التالية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجاهل PFA 4 ٪ ، ويغسل العضلات مع 1X 3 مرات في برنامج تلفزيوني ، 10 &#39;لكل منهما. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجاهل مشاركة 1X PBS يغسل وإضافة 0.1M جليكاين في 2 ٪ BSA / PBS حل ل30 &#39;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجاهل 0.1M جليكاين حلاد إضافة 1X PBS تحتوي رودامين مترافق α - بنغاروتوكسين بتركيز لمدة 15 1:200. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجاهل α - بنغاروتوكسين حل ، ويغسل في عضلة 1X PBS ، 3 مرات 10 &#39;لكل منهما. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Permeabilize الأنسجة بإضافة الميثانول قبل تبريده ووضع الطبق في الثلاجة -20 درجة مئوية لمدة 5 دقائق بالضبط ، والهز لا الحاجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الميثانول وتغسل 3 مرات 10 &#39;مع كل برنامج تلفزيوني 1X. تجاهل الماضي وغسل كتلة الأنسجة مع 0.2 ٪ تريتون X - 100 في 2 ٪ BSA / برنامج تلفزيوني لمدة 1 ساعة. يتم تنفيذ الخطوات الغسيل وعرقلة في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان العضلات بين عشية وضحاها ، والهز ، في 4 درجات مئوية في مزيج من الأجسام المضادة الأولية مخففة في عرقلة الحل (راجع ، الجدول). </li></ol> 4. الثلاثي immunostaining من NMJs LAL : يوم 2 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل العضلات في 1X 3 مرات في برنامج تلفزيوني ، 10 &#39;كل في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة مزيج من الأجسام المضادة الثانوية في عرقلة الحل لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة (راجع ، الجدول). يجب أن تكون محمية من الضوء على العضلات من هذه الخطوة فصاعدا لمنع الصور وتبييض مضان 647 - اليكسا فلور. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل العضلات في 1X 3 مرات في برنامج تلفزيوني ، 10 &#39;لكل منهما. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنظيف قبالة أي نوع من الأنسجة الضامة المتبقية في برنامج تلفزيوني 1X ، وقطع الحدود الجانبية للعضلات LAL وجبل على شرائح تصل الجانب الظهري ، وذلك باستخدام غطاء زجاجي زلات ووسائل الإعلام في تصاعد مستمر. استخدام طلاء الأظافر واضحة لتأمين تغطية الانزلاق في المكان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حماية الشرائح من الضوء وتخزينه في -20 درجة مئوية لتصبح جاهزة للتحليل. </li></ol> 5. مبائر تصوير NMJs LAL <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويتم الحصول على صور عالية الدقة مع مبائر هدفا لايكا آبو خطة النفط 63X (1.4NA) على المجهر لايكا 4D TCS مبائر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وقد تم مسحها ضوئيا في وقت واحد والاشارات فلوريسئين اليكسا 647 مع خطوط الليزر 488 نانومتر (أرغون ، 488 نانومتر ، و 20 ميغاواط) و 633 نانومتر (HeNe ، 633 نانومتر ، و 10 ميغاواط) ، على التوالي. بالتتابع ، ثم يتم مسحها إشارة رودامين مع خط ليزر 561 نانومتر (DPSS ، 561 ، 20 ميغاواط). وقد تم جمع الأجزاء البصرية في فترات 0.3 ميكرون ، وعدد الصور في Z - طائرة متنوعة 60-80. يتم ضبط الثقب إلى 1 إيري (107.97 أم). تنسيق الصورة 1024 x 1024 (X ، Y) ، مع عامل التكبير من 1 ، إلى نتائج سرعة 400Hz في حجم صورة 234.32 234.32 س ميكرومتر ميكرومتر وحجم بكسل نانومتر 229.05 229.05 س نانومتر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم يتم استخدام برامج لايكا اقتناء TCS - NT - Z لإعادة بناء الصور في سلسلة توقعات الكثافة القصوى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويتم تعديل الصور Multipanel عن السطوع والتباين باستخدام أدوبي فوتوشوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لالعضلات LAL نموذجية ، ينبغي للمرء أن يكون قادرا على تحليل ما يقرب من 75-100 NMJs وجه خاص. يتحدد الاستقرار متشابك من المميزات مثل المحاذاة المكاني لمرحلة ما قبل ، وبعد المشبكي شبه العناصر (أي الأعصاب ، وخلايا شوان والعضلات) ، وقياسات المساحة متشابك (أي حجم المشبك). </li></ol> ممثل النتائج : في NMJ في الثدييات الكبار ، ومحور عصبي محرك واحد يفصل فروع الغرامة التي تشكل العرش متباينة جدا من محطة عصب (الشكل 2 ؛ الأخضر) على ألياف العضلات واحد ، على وجه التحديد لمجموعات apposed بعد المشبكي من AChRs النيكوتينيك (الشكل 2 ؛ الأحمر) . Perisynaptically ، محطة خلايا شوان تغطي بإحكام جميع فروع العصب محطات قبل المشبكي (الشكل 2 ؛ الأزرق). هو بشدة على السلامة الهيكلية والوظيفية لهذه المنظمة الثلاثية مضطرب من جراء التطبيق اليومي لمثبطات mAChR سلالة معينة. في المثال المقدمة هنا (الشكل 3) ، 4 - رطبة ، وهو خصم mAChR مع تقارب عالية لM1 ، M3 ، M4 و M5 mAChR فرعية ، تثير القضاء الانتقائي لمحطات العصبية من NMJs عديدة في جميع أنحاء سطح العضلات (الشكل 3B ، C). بالإضافة إلى ذلك ، محطة خلايا شوان وهادئة بشكل غير طبيعي كما يتضح من 8 وسم S100 مشرق دون تمديد العملية (الشكل 3B &quot;3C&quot;). Postsynaptically ، ألياف العضلات طبيعية وليس هناك فقدان nAChRs (الشكل 3B ، 3C &#39;). <img src="/files/ftp_upload/3124/3124fig1.jpg" alt="الشكل 1"/> الشكل 1. الموقع التشريحي وتنظيم LAL العضلات. وتظهر مواقع منقاري (rLAL) ، الذيلية (cLAL) ، والعصب لال (LALn) وشرائح endplate المقابلة (A ، أقحم). يظهر موقع واتجاه الإبرة في العضلة يتعلق LAL لإجراء الحقن (B). وتظهر نقاط شق لإجراء تشريح (C). <img src="/files/ftp_upload/3124/3124fig2.jpg" alt="الشكل 2"/> الشكل 2. الثلاثية للمنظمة NMJ. عالية التكبير وجهات النظر مبائر NMJ من الماوس. محور عصبي واحد يفصل فروع المحطة الدقيقة (A) ، تغطي بإحكام من قبل خلية شوان محطة وعملياتها (A &quot;نقطة النجمية ، إلى الهيئات محطة خلية شوان). Postsynaptically في ألياف العضلات ، هو بالضبط apposed مجموعة من AChRs النيكوتينيك لفروع العصب terminals وخلايا شوان المحطة. <img src="/files/ftp_upload/3124/3124fig3.jpg" alt="الشكل 3"/> الشكل 3. LAL تعامل مع العضلات رطبة - 4 ، وهو خصم mAChR. آراء مبائر التكبير المنخفضة والعالية للعضلات ، LAL تعامل مع السيارة أو 4 رطبة. على النقيض من السيارة العضلات معاملة (A - A NMJs &#39;&#39;&#39;)،عديدة في 4 محطات المعالجة رطبة العضلات العصب نقص (B - B&#39;&#39; &#39;، C - C&#39;&#39;&#39;). هو أسرع ومحاصر في منطقة في الشكل 2B 2C الشكل.

<ol>
	<li>Wright, M. C., Son, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ciliary+neurotrophic+factor+is+not+required+for+terminal+sprouting+and+compensatory+reinnervation+of+neuromuscular+synapses:+re-evaluation+of+CNTF+null+mice.">Ciliary neurotrophic factor is not required for terminal sprouting and compensatory reinnervation of neuromuscular synapses: re-evaluation of CNTF null mice.</a> Exp Neurol. 205, 437-448 (2007).</li><li>Gurney, M. E., Yamamoto, H., Kwon, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+motor+neuron+sprouting+in+vivo+by+ciliary+neurotrophic+factor+and+basic+fibroblast+growth+factor.">Induction of motor neuron sprouting in vivo by ciliary neurotrophic factor and basic fibroblast growth factor.</a> J Neurosci. 12, 3241-3247 (1992).</li><li>Caroni, P., Aigner, L., Schneider, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrinsic+neuronal+determinants+locally+regulate+extrasynaptic+and+synaptic+growth+at+the+adult+neuromuscular+junction.">Intrinsic neuronal determinants locally regulate extrasynaptic and synaptic growth at the adult neuromuscular junction.</a> J Cell Biol. 136, 679-692 (1997).</li><li>Witzemann, V., Brenner, H. R., Sakmann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+factors+regulate+AChR+subunit+mRNAs+at+rat+neuromuscular+synapses.">Neural factors regulate AChR subunit mRNAs at rat neuromuscular synapses.</a> J Cell Biol. 114, 125-141 (1991).</li><li>Angaut-Petit, D., Molgo, J., Connold, A. L., Faille, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+levator+auris+longus+muscle+of+the+mouse:+a+convenient+preparation+for+studies+of+short-+and+long-term+presynaptic+effects+of+drugs+or+toxins.">The levator auris longus muscle of the mouse: a convenient preparation for studies of short- and long-term presynaptic effects of drugs or toxins.</a> Neurosci Lett. 82, 83-88 (1987).</li><li>Lanuza, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-+and+postsynaptic+maturation+of+the+neuromuscular+junction+during+neonatal+synapse+elimination+depends+on+protein+kinase.">Pre- and postsynaptic maturation of the neuromuscular junction during neonatal synapse elimination depends on protein kinase.</a> C. J Neurosci Res. 67, 607-617 (2002).</li><li>Garcia, N., Santafe, M. M., Tomas, M., Lanuza, M. A., Tomas, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short-term+effects+of+beta-amyloid25-35+peptide+aggregates+on+transmitter+release+in+neuromuscular+synapses.">Short-term effects of beta-amyloid25-35 peptide aggregates on transmitter release in neuromuscular synapses.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 67, 250-259 (2008).</li><li>Wright, M. C., Cho, W. J., Son, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+patterns+of+motor+nerve+terminal+sprouting+induced+by+ciliary+neurotrophic+factor+vs.+botulinum+toxin.">Distinct patterns of motor nerve terminal sprouting induced by ciliary neurotrophic factor vs. botulinum toxin.</a> J Comp Neurol. 504, 1-16 (2007).</li><li>Wright, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+muscarinic+acetylcholine+receptor+subtypes+contribute+to+stability+and+growth,+but+not+compensatory+plasticity,+of+neuromuscular+synapses.">Distinct muscarinic acetylcholine receptor subtypes contribute to stability and growth, but not compensatory plasticity, of neuromuscular synapses.</a> J Neurosci. 29, 14942-14955 (2009).</li><li>Voss, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+ATP+inhibits+chloride+channels+in+mature+mammalian+skeletal+muscle+by+activating+P2Y1+receptors.">Extracellular ATP inhibits chloride channels in mature mammalian skeletal muscle by activating P2Y1 receptors.</a> J Physiol. 587, 5739-5752 (2009).</li><li>Murray, L. M., Gillingwater, T. H., Parson, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+mouse+cranial+muscles+to+investigate+neuromuscular+pathology+in+vivo.">Using mouse cranial muscles to investigate neuromuscular pathology in vivo.</a> Neuromuscul Disord. 20, 740-743 (2009).</li><li>Dorje, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antagonist+binding+profiles+of+five+cloned+human+muscarinic+receptor+subtypes.">Antagonist binding profiles of five cloned human muscarinic receptor subtypes.</a> J Pharmacol Exp Ther. 256, 727-733 (1991).</li><li>Caulfield, M. P., Birdsall, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+Union+of+Pharmacology.+XVII.+Classification+of+muscarinic+acetylcholine+receptors.">International Union of Pharmacology. XVII. Classification of muscarinic acetylcholine receptors.</a> Pharmacol Rev. 50, 279-290 (1998).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

الطريقة المعروضة هنا تصاريح التحقيق في أدوار غير المعترف بها في وقت سابق من mAChR - سلالة معينة يشير في الاستقرار وصيانة NMJs الثدييات. وسوف يكون هذا الأسلوب مفيدا أيضا لاختبار تأثير عوامل عصبية وكلاء الدوائية. على سبيل المثال ، وجدت أن لدينا مختبر الهدبية عامل التغذية ال...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم كاشف </th><th> شركة </th><th> فهرس العدد </th><th> تعليقات </th></tr><tr><td> الكيتامين </td><td> هوسبيرا </td><td> NDC0409 - 2051-05 </td><td> الجرعة : 120mg/kg </td></tr><tr><td> زيلازين </td><td> مختبرات لويد </td><td> LA33806 </td><td> الجرعة : 8mg/kg </td></tr><tr><td> الأتروبين </td><td> سيغما الدريخ </td><td> A0132 </td><td> (&gt; نقاء 98 ٪) ؛ الجرعة : 0.2mg/kg -- 20mg/kg </td></tr><tr><td> الأتروبين </td><td> فويجت التوزيع العالمي </td><td> AT105 </td><td> الصيدلانية الصف </td></tr><tr><td> Methoctramine </td><td> سيغما الدريخ </td><td> M105 </td><td> الجرعة : 100 -- 400M </td></tr><tr><td> 4 الرطب </td><td> سيغما الدريخ </td><td> D142 </td><td> الجرعة : 2.5mg/kg </td></tr><tr><td> AFDX - 116 </td><td> العلوم البيولوجية Tocris </td><td> 1105 </td><td> 250M </td></tr><tr><td> AFDX - 384 </td><td> العلوم البيولوجية Tocris </td><td> 1345 </td><td> 50M -- 500M </td></tr><tr><td> MT 7 </td><td> الببتيدات الدولية </td><td> PMT - 4340 - S </td><td> 0.1M -- 1M </td></tr><tr><td> التخزين المؤقت 1X الفوسفات المالحة ، ودرجة الحموضة 7.4 </td><td> Invitrogen </td><td> 10010049 </td><td></td></tr><tr><td> بارافورمالدهيد </td><td> الصياد </td><td> T353 - 500 </td><td> جعل حل 10 ٪ أول من حل 10g/100mL غير المتأينة الماء المقطر ، وجعل 4 ٪ مع 1X PBS ، وضبط درجة الحموضة إلى 7.4 </td></tr><tr><td> pentobarbitol الصوديوم </td><td> Virbac صحة الحيوان </td><td> NDC - 051311 - 050 - 01 </td><td> الجرعة : 390mg/kg </td></tr><tr><td> Sylgard </td><td> داو كورننغ </td><td> جزء # 184 </td><td> اتبع التعليمات التي تأتي مع المجموعة ، ويمكن استخدام طبق ثقافة متعددة الحجم (30mm ، 60mm ، 100mm) ، تبعا للاحتياجات </td></tr><tr><td> 0.1M جليكاين </td><td> سيغما الدريخ </td><td> G - 7126 </td><td> إضافة إلى 0.185g 25mL 2 ٪ BSA / PBS </td></tr><tr><td> 2 ٪ ألبومين المصل البقري (BSA 2 ٪) </td><td> سيغما الدريخ </td><td> A3059 - 100G </td><td> 2G الى حل جيش صرب البوسنة من 100ML 1X PBS </td></tr><tr><td> 0.2 ٪ X100 تريتون في 2 ٪ BSA / PBS (حظر مؤقت) </td><td> سيغما الدريخ </td><td> T9284 - 100ML </td><td> حل 0.2ml/100mL 2 ٪ BSA / PBS </td></tr><tr><td> α - بنغاروتوكسين </td><td> Invitrogen </td><td> T1175 </td><td> استخدامها في تركيز 1:200 </td></tr><tr><td> SMI - 312 </td><td> Monoclonals Sternberger </td><td> SMI312 </td><td> استخدامها في تركيز 1:1000 </td></tr><tr><td> SV2 </td><td> الدراسات التنموية ورم هجين الضفة </td><td> SV2 - الطافي (Supernatant) </td><td> استخدامها في تركيز 01:10 </td></tr><tr><td> S100 </td><td> داكو </td><td> Z0311 </td><td> استخدامها في تركيز 1:400 </td></tr><tr><td> FITC الماعز المضادة للماوس IgG1 </td><td> روش </td><td> 03117731001 </td><td> استخدامها في تركيز 1:200 ، ولكن إذا خلفية عالية ، محاولة 1:400 </td></tr><tr><td> الكسا - 647 فلور الماعز مترافق المضادة للأرنب </td><td> Invitrogen </td><td> A21244 </td><td> استخدامها في تركيز 1:200 </td></tr><tr><td> Vectashield الفلورسنت تصاعد وسائل الإعلام </td><td> ناقلات المختبرات </td><td> H - 1000 </td><td> هذه ليست وسائل الاعلام الثابت المحدد ، وسوف تحتاج لتأمين تغطية زلة مع طلاء الأظافر واضحة. </td></tr><tr><td> مقصات صغيرة الربيع </td><td> أدوات العلوم غرامة </td><td> 15002-08 </td><td></td></tr><tr><td> تشريح ملقط </td><td> أدوات العلوم غرامة </td><td> 11295-51 </td><td></td></tr></tbody></table>

subcutaneous administration of muscarinic antagonists and triple-immunostaining of the levator auris longus muscle in mice

وكثيرا ما تستخدم عضلات الأطراف الخلفية من القوارض ، مثل الساق الأمامية والظنبوبي ، لفي الدراسات الدوائية المجراة من الإشارات الأساسية لتشكيل وصيانة NMJs الثدييات. ومع ذلك ، فإن تغلغل المخدرات في هذه العضلات بعد تحت الجلد أو في العضل الإدارة غالبا ما تكون ناقصة او غير مستوية وNMJs كثيرة يمكن أن تبقى غير متأثرة. على الرغم من أن الإدارة النظامية مع الأجهزة مثل المضخات الصغيرة يمكن أن تحسن من آثار spatiotemporal ، لا يمكن للطبيعة الغازية لهذا النهج يسبب التباس الاستجابات الالتهابية و / أو أضرار مباشرة في العضلات. وعلاوة على ذلك ، وتحليل كامل للNMJs في العضلة الخلفية أطرافهم يمثل تحديا لأنه يتطلب وقتا طويلا sectioning immunostaining المسلسل واسعة النطاق. وLAL الماوس رقيقة ، ورقة مسطحة من العضلات الموجودة بشكل سطحي على ظهر الرقبة. فهو سريع نشل وظائف العضلات التي لتحريك الصيوان. أنه يحتوي على أجزاء منقاري والذيلية التي تنشأ من خط الوسط من الجمجمة ويمتد أفقيا إلى جزء غضروفي كل الصيوان. ويتم تزويد عضلة من قبل فرع من العصب الوجهي أن المشاريع caudally فور خروجها من الثقبة الإبرية الخشائية. لقد تم العثور على LAL وغيرها لتكون مريحة استعدادا التي توفر مزايا للتحقيق في المديين القصير والطويل الأجل في آثار المخدرات على الجسم الحي NMJs والعضلات. أولا ، وموقعها سطحية يسهل تطبيقات محلية متعددة من المخدرات تحت تخدير خفيف. الثانية ، لركاكة (2-3 طبقات من ألياف العضلات) تصاريح التصور والتحليل لNMJs كلها تقريبا داخل العضلات. ثالثا ، سهولة مع تشريح الأعصاب سليمة لها جنبا إلى جنب مع نمط تعصيب لها تصاريح التحليل التكميلي في المختبر 9،5 الكهربية. الماضي ، وربما الأهم من ذلك ، حجم صغير تطبيق (~ 50μl) تغطي بسهولة على سطح العضلة بأكملها ، ويوفر موحدة والتعرض المطول للNMJs به جميعا في المخدرات ويلغي الحاجة إلى اتباع نهج متسق 1،8.

Watch this Scientific Journal Video about Subcutaneous Administration of Muscarinic Antagonists and Triple-Immunostaining of the Levator Auris Longus Muscle in Mice at JoVE.com

Subcutaneous Administration of Muscarinic Antagonists and Triple-Immunostaining of the Levator Auris Longus Muscle in Mice

نحن تصف الإجراءات اللازمة لإدارة المتكررة من مثبطات المسكارينية يشير إلى الرافعة الأذن الطويلة (LAL) عضلات الفئران البالغين الشباب وimmunostaining لاحقة من التقاطعات في الاعصاب (NMJs) في wholemounts. عضلة LAL ومزايا فريدة للكشف عن<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; التأثيرات الدوائية على NMJs.

تحت الجلد إدارة الخصوم والمسكارينية الثلاثي Immunostaining من إبهام العضلة الرافعة أوريس في الفئران

Hind limb muscles of rodents, such as gastrocnemius and tibialis anterior, are frequently used for in vivo  pharmacological studies of the signals ...

subcutaneous-administration-muscarinic-antagonists-triple

Research

JoVE Journal

Neuroscience

13.6K Views.  Arcadia University. نحن تصف الإجراءات اللازمة لإدارة المتكررة من مثبطات المسكارينية يشير إلى الرافعة الأذن الطويلة (LAL) عضلات الفئران البالغين الشباب وimmunostaining لاحقة من التقاطعات في الاعصاب (NMJs) في wholemounts. عضلة LAL ومزايا فريدة للكشف عن في الجسم الحي التأثيرات الدوائية على NMJs....

Video: Subcutaneous Administration of Muscarinic Antagonists and Triple-Immunostaining of the Levator Auris Longus Muscle in Mice

Assessment of Ultrasonic Vocalizations During Drug Self-administration in Rats

Drug self-administration procedures are commonly used to study behavioral and neurochemical changes associated with human drug abuse, addiction and relapse. Various types of behavioral activity are commonly utilized as measures of drug motivation in animals. However, a crucial component of drug abuse relapse in abstinent cocaine users is "drug craving", which is difficult to model in animals, as it often occurs in the absence of overt behaviors. Yet, it is possible that a class of ultrasonic vocalizations (USVs) in rats may be a useful marker for affective responses to drug administration, drug anticipation and even drug craving. Rats vocalize in ultrasonic frequencies that serve as a communicatory function and express subjective emotional states. Several studies have shown that different call frequency ranges are associated with negative and positive emotional states. For instance, high frequency calls ("50-kHz") are associated with positive affect, whereas low frequency calls ("22-kHz") represent a negative emotional state. This article describes a procedure to assess rat USVs associated with daily cocaine self-administration. For this procedure, we utilized standard single-lever operant chambers housed within sound-attenuating boxes for cocaine self-administration sessions and utilized ultrasonic microphones, multi-channel recording hardware and specialized software programs to detect and analyze USVs. USVs measurements reflect emotionality of rats before, during and after drug availability and can be correlated with commonly assessed drug self-administration behavioral data such lever responses, inter-response intervals and locomotor activity. Since USVs can be assessed during intervals prior to drug availability (e.g., anticipatory USVs) and during drug extinction trials, changes in affect associated with drug anticipation and drug abstinence can also be determined. In addition, determining USV changes over the course of short- and long-term drug exposure can provide a more detailed interpretation of drug exposure effects on affective functioning.

Drug self-administration and ultrasonic vocalizations (USV) are used as behavioral assessments in animal research, but rarely in combination. The purpose of this article is to describe the advantages of recording USVs during drug self-administration procedures to assess affective responses to drug experience.

تقييم الالفاظ بالموجات فوق الصوتية خلال مخدرات الذاتي الإدارة في الفئران

Drug self-administration procedures are commonly used to study behavioral and neurochemical changes associated with human drug abuse, addiction and ...

Oral Administration of Rotenone using a Gavage and Image Analysis of Alpha-synuclein Inclusions in the Enteric Nervous System

In Parkinson's disease (PD) patients, the associated pathology follows a characteristic pattern involving inter alia the enteric nervous system (ENS) 1,2, the olfactory bulb (OB), the dorsal motor nucleus of the vagus (DMV)3, the intermediolateral nucleus of the spinal cord 4 and the substantia nigra, providing the basis for the neuropathological staging of the disease4,5. The ENS and the OB are the most exposed nervous structures and the first ones to be affected. Interestingly, PD has been related to pesticide exposure6-8. Here we show in detail two methods used in our previous study 9. In order to analyze the effects of rotenone acting locally on the ENS, we administered rotenone using a gavage to one-year old C57/BL6 mice. Rotenone is a widely used pesticide that strongly inhibits mitochondrial Complex I 10. It is highly lipophylic and poorly absorbed in the gastrointestinal tract 11. Our results showed that the administration of 5 mg/kg of rotenone did not inhibit mitochondrial Complex I activity in the muscle or the brain. Thus, suggesting that using our administration method rotenone did not cross the hepatoportal system and was acting solely on the ENS. Here we show a method to administer pesticides using a gavage and the image analysis protocol used to analyze the effects of the pesticide in alpha-synuclein accumulation in the ENS. The first part shows a method that allows intragastric administration of pesticides (rotenone) at a desired precise concentration. The second method shows a semi-automatic image analysis protocol to analyze alpha-synuclein accumulation in the ENS using an image analysis software.

Parkinson's disease has been related to the exposure to pesticides. Here we show a method to deliver pesticides using a gastric tube at the desired concentration and a method to analyze their effect in alpha-synuclein accumulation in the enteric nervous system.

الشفوي إدارة روتنون باستخدام بالتزقيم وتحليل صورة الفا synuclein الادراج في الجهاز العصبي المعوي

In Parkinson's disease (PD) patients, the associated pathology follows a characteristic pattern involving inter alia the enteric nervous system (ENS) 1,2, ...

Spectral Confocal Imaging of Fluorescently tagged Nicotinic Receptors in Knock-in Mice with Chronic Nicotine Administration

Ligand-gated ion channels in the central nervous system (CNS) are implicated in numerous conditions with serious medical and social consequences. For instance, addiction to nicotine via tobacco smoking is a leading cause of premature death worldwide (World Health Organization) and is likely caused by an alteration of ion channel distribution in the brain1. Chronic nicotine exposure in both rodents and humans results in increased numbers of nicotinic acetylcholine receptors (nAChRs) in brain tissue1-3. Similarly, alterations in the glutamatergic GluN1 or GluA1 channels have been implicated in triggering sensitization to other addictive drugs such as cocaine, amphetamines and opiates4-6.

Consequently, the ability to map and quantify distribution and expression patterns of specific ion channels is critically important to understanding the mechanisms of addiction. The study of brain region-specific effects of individual drugs was advanced by the advent of techniques such as radioactive ligands. However, the low spatial resolution of radioactive ligand binding prevents the ability to quantify ligand-gated ion channels in specific subtypes of neurons. 

Genetically encoded fluorescent reporters, such as green fluorescent protein (GFP) and its many color variants, have revolutionized the field of biology7.By genetically tagging a fluorescent reporter to an endogenous protein one can visualize proteins in vivo7-10. One advantage of fluorescently tagging proteins with a probe is the elimination of antibody use, which have issues of nonspecificity and accessibility to the target protein. We have used this strategy to fluorescently label nAChRs, which enabled the study of receptor assembly using F&ouml;rster Resonance Energy Transfer (FRET) in transfected cultured cells11.More recently, we have used the knock-in approach to engineer mice with yellow fluorescent protein tagged &alpha;4 nAChR subunits (&alpha;4YFP), enabling precise quantification of the receptor ex vivo at submicrometer resolution in CNS neurons via spectral confocal microscopy12. The targeted fluorescent knock-in mutation is incorporated in the endogenous locus and under control of its native promoter, producing normal levels of expression and regulation of the receptor when compared to untagged receptors in wildtype mice. This knock-in approach can be extended to fluorescently tag other ion channels and offers a powerful approach of visualizing and quantifying receptors in the CNS.

In this paper we describe a methodology to quantify changes in nAChR expression in specific CNS neurons after exposure to chronic nicotine. Our methods include mini-osmotic pump implantation, intracardiac perfusion fixation, imaging and analysis of fluorescently tagged nicotinic receptor subunits from &alpha;4YFP knock-in mice (Fig. 1). We have optimized the fixation technique to minimize autofluorescence from fixed brain tissue.We describe in detail our imaging methodology using a spectral confocal microscope in conjunction with a linear spectral unmixing algorithm to subtract autofluoresent signal in order to accurately obtain &alpha;4YFP fluorescence signal. Finally, we show results of chronic nicotine-induced upregulation of &alpha;4YFP receptors in the medial perforant path of the hippocampus.

We have developed a novel technique of quantifying nicotinic acetylcholine receptor changes within subcellular regions of specific subtypes of CNS neurons to better understand the mechanisms of nicotine addiction by using a combination of approaches including fluorescent protein tagging of the receptor using the knock-in approach and spectral confocal imaging.

متحد البؤر التصوير الطيفي من المستقبلات النيكوتينية الموسومة Fluorescently في نوك في الفئران مع الإدارة النيكوتين المزمن

Ligand-gated ion channels in the central nervous system (CNS) are implicated in numerous conditions with serious medical and social consequences.  For ...

Microdialysis of Ethanol During Operant Ethanol Self-administration and Ethanol Determination by Gas Chromatography

Operant self-administration methods are commonly used to study the behavioral and pharmacological effects of many drugs of abuse, including ethanol. However, ethanol is typically self-administered orally, rather than intravenously like many other drugs of abuse. The pharmacokinetics of orally administered drugs are more complex than intravenously administered drugs. Because understanding the relationship between the pharmacological and behavioral effects of ethanol requires knowledge of the time course of ethanol reaching the brain during and after drinking, we use in vivo microdialysis and gas chromatography with flame ionization detection to monitor brain dialysate ethanol concentrations over time. 
Combined microdialysis-behavioral experiments involve the use of several techniques. In this article, stereotaxic surgery, behavioral training and microdialysis, which can be adapted to test a multitude of self-administration and neurochemical centered hypotheses, are included only to illustrate how they relate to the subsequent phases of sample collection and dialysate ethanol analysis. Dialysate ethanol concentration analysis via gas chromatography with flame-ionization detection, which is specific to ethanol studies, is described in detail. Data produced by these methods reveal the pattern of ethanol reaching the brain during the self-administration procedure, and when paired with neurochemical analysis of the same dialysate samples, allows conclusions to be made regarding the pharmacological and behavioral effects of ethanol.

A method to determine the time course of ethanol concentration in the brains of rats during operant ethanol self-administration is described. Gas chromatography with flame ionization detection is used to quantify ethanol in the dialysate samples, because it has the sensitivity required for the small volumes that are generated.

Microdialysis من الإيثانول خلال فعال الإيثانول الإدارة الذاتية والايثانول تقرير بواسطة جهاز الكروماتوجرافي الغازي

Operant self-administration methods are commonly used to study the behavioral and pharmacological effects of many drugs of abuse, including ethanol.  ...

Promotion of Survival and Differentiation of Neural Stem Cells with Fibrin and Growth Factor Cocktails after Severe Spinal Cord Injury

Neural stem cells (NSCs) can self-renew and differentiate into neurons and glia. Transplanted NSCs can replace lost neurons and glia after spinal cord injury (SCI), and can form functional relays to re-connect spinal cord segments above and below a lesion. Previous studies grafting neural stem cells have been limited by incomplete graft survival within the spinal cord lesion cavity. Further, tracking of graft cell survival, differentiation, and process extension had not been optimized. Finally, in previous studies, cultured rat NSCs were typically reported to differentiate into glia when grafted to the injured spinal cord, rather than neurons, unless fate was driven to a specific cell type. To address these issues, we developed new methods to improve the survival, integration and differentiation of NSCs to sites of even severe SCI. NSCs were freshly isolated from embryonic day 14 spinal cord (E14) from a stable transgenic Fischer 344 rat line expressing green fluorescent protein (GFP) and were embedded into a fibrin matrix containing growth factors; this formulation aimed to retain grafted cells in the lesion cavity and support cell survival. NSCs in the fibrin/growth factor cocktail were implanted two weeks after thoracic level-3 (T3) complete spinal cord transections, thereby avoiding peak periods of inflammation. Resulting grafts completely filled the lesion cavity and differentiated into both neurons, which extended axons into the host spinal cord over remarkably long distances, and glia. Grafts of cultured human NSCs expressing GFP resulted in similar findings. Thus, methods are defined for improving neural stem cell grafting, survival and analysis of in vivo findings.

Fibrin matrices containing growth factors were used to retain grafted neural stem cells into sites of complete spinal cord transection. Grafted cells completely filled the lesion cavity and differentiated into multiple neural cell types, including neurons that extended axons into host spinal cord over long distances.

تعزيز بقاء وتمايز الخلايا الجذعية العصبية مع الليفين وعامل نمو الكوكتيلات بعد إصابة الحبل الشوكي الشديدة

Neural stem cells (NSCs) can self-renew and differentiate into neurons and glia. Transplanted NSCs can replace lost neurons and glia after spinal cord ...

Proprioception and Tension Receptors in Crab Limbs: Student Laboratory Exercises

The primary purpose of these procedures is to demonstrate for teaching and research purposes how to record the activity of living primary sensory neurons responsible for proprioception as they are detecting joint position and movement, and muscle tension. Electrical activity from crustacean proprioceptors and tension receptors is recorded by basic neurophysiological instrumentation, and a transducer is used to simultaneously measure force that is generated by stimulating a motor nerve. In addition, we demonstrate how to stain the neurons for a quick assessment of their anatomical arrangement or for permanent fixation. Staining reveals anatomical organization that is representative of chordotonal organs in most crustaceans. Comparing the tension nerve responses to the proprioceptive responses is an effective teaching tool in determining how these sensory neurons are defined functionally and how the anatomy is correlated to the function. Three staining techniques are presented allowing researchers and instructors to choose a method that is ideal for their laboratory.

Physiological and anatomical techniques are demonstrated to address function and structure for joint proprioceptors and muscle tension receptors in crustacean walking limbs.

استقبال الحس العميق والتوتر المستقبلات في اطراف سرطان البحر: تمارين مختبر طالبة

The primary purpose of these procedures is to demonstrate for teaching and research purposes how to record the activity of living primary sensory neurons ...

A Protocol for the Administration of Real-Time fMRI Neurofeedback Training

Neurologic disorders are characterized by abnormal cellular-, molecular-, and circuit-level functions in the brain. New methods to induce and control neuroplastic processes and correct abnormal function, or even shift functions from damaged tissue to physiologically healthy brain regions, hold the potential to dramatically improve overall health. Of the current neuroplastic interventions in development, neurofeedback training (NFT) from functional Magnetic Resonance Imaging (fMRI) has the advantages of being completely non-invasive, non-pharmacologic, and spatially localized to target brain regions, as well as having no known side effects. Furthermore, NFT techniques, initially developed using fMRI, can often be translated to exercises that can be performed outside of the scanner without the aid of medical professionals or sophisticated medical equipment. In fMRI NFT, the fMRI signal is measured from specific regions of the brain, processed, and presented to the participant in real-time. Through training, self-directed mental processing techniques, that regulate this signal and its underlying neurophysiologic correlates, are developed. FMRI NFT has been used to train volitional control over a wide range of brain regions with implications for several different cognitive, behavioral, and motor systems. Additionally, fMRI NFT has shown promise in a broad range of applications such as the treatment of neurologic disorders and the augmentation of baseline human performance. In this article, we present an fMRI NFT protocol developed at our institution for modulation of both healthy and abnormal brain function, as well as examples of using the method to target both cognitive and auditory regions of the brain.

The ability to induce and/or control neural plasticity may be critical in future treatments for neurologic disorders and the recovery from brain injury. In this paper, we present a protocol on the use of neurofeedback training with functional magnetic resonance imaging to modulate human brain function.

بروتوكول "الإدارة في الوقت الحقيقي" في الرنين المغناطيسي الوظيفي Neurofeedback التدريب

Neurologic disorders are characterized by abnormal cellular-, molecular-, and circuit-level functions in the brain. New methods to induce and control ...

Recording Brain Electromagnetic Activity During the Administration of the Gaseous Anesthetic Agents Xenon and Nitrous Oxide in Healthy Volunteers

Anesthesia arguably provides one of the only systematic ways to study the neural correlates of global consciousness/unconsciousness. However to date most neuroimaging or neurophysiological investigations in humans have been confined to the study of &#947;-Amino-Butyric-Acid-(GABA)-receptor-agonist-based anesthetics, while the effects of dissociative N-Methyl-D-Aspartate-(NMDA)-receptor-antagonist-based anesthetics ketamine, nitrous oxide (N2O) and xenon (Xe) are largely unknown. This paper describes the methods underlying the simultaneous recording of magnetoencephalography (MEG) and electroencephalography (EEG) from healthy males during inhalation of the gaseous anesthetic agents N2O and Xe. Combining MEG and EEG data enables the assessment of electromagnetic brain activity during anesthesia at high temporal, and moderate spatial, resolution. Here we describe a detailed protocol, refined over multiple recording sessions, that includes subject recruitment, anesthesia equipment setup in the MEG scanner room, data collection and basic data analysis. In this protocol each participant is exposed to varying levels of Xe and N2O in a repeated measures cross-over design. Following relevant baseline recordings participants are exposed to step-wise increasing inspired concentrations of Xe and N2O of 8, 16, 24 and 42%, and 16, 32 and 47% respectively, during which their level of responsiveness is tracked with an auditory continuous performance task (aCPT). Results are presented for a number of recordings to highlight the sensor-level properties of the raw data, the spectral topography, the minimization of head movements, and the unequivocal level dependent effects on the auditory evoked responses. This paradigm describes a general approach to the recording of electromagnetic signals associated with the action of different kinds of gaseous anesthetics, which can be readily adapted to be used with volatile and intravenous anesthetic agents. It is expected that the method outlined can contribute to the understanding of the macro-scale mechanisms of anesthesia by enabling methodological extensions involving source space imaging and functional network analysis.

Simultaneous magnetoencephalography and electroencephalography provides a useful tool to search for common and distinct macro-scale mechanisms of reductions in consciousness induced by different anesthetics. This paper illustrates the empirical methods underlying the recording of such data from healthy humans during N-Methyl-D-Aspartate-(NMDA)-receptor-antagonist-based anesthesia during inhalation of nitrous oxide and xenon.

تسجيل النشاط الكهرومغناطيسي الدماغ أثناء إدارة زينون وكلاء مخدر الغازية وأكسيد النيتروز في المتطوعين صحية

Anesthesia arguably provides one of the only systematic ways to study the neural correlates of global consciousness/unconsciousness. However to date most ...

Levator Auris Longus Preparation for Examination of Mammalian Neuromuscular Transmission Under Voltage Clamp Conditions

This protocol describes a technique to record synaptic transmission from the neuromuscular junction under current-clamp and voltage-clamp conditions. An ex vivo preparation of the levator auris longus (LAL) is used because it is a thin muscle that provides easy visualization of the neuromuscular junction for microelectrode impalement at the motor endplate. This method allows for the recording of spontaneous miniature endplate potentials and currents (mEPPs and mEPCs), nerve-evoked endplate potentials and currents (EPPs and EPCs), as well as the membrane properties of the motor endplate. Results obtained from this method include the quantal content (QC), number of vesicle release sites (n), probability of vesicle release (prel), synaptic facilitation and depression, as well as the muscle membrane time constant (&#964;m) and input resistance. Application of this technique to mouse models of human disease can highlight key pathologies in disease states and help identify novel treatment strategies. By fully voltage-clamping a single synapse, this method provides one of the most detailed analyses of synaptic transmission currently available.

Levator Auris Longus Preparation for Examination of Mammalian Neuromuscular Transmission Under Voltage Clamp Conditions

The protocol described in this paper uses the mouse levator auris longus (LAL) muscle to record spontaneous and nerve-evoked postsynaptic potentials (current-clamp) and currents (voltage-clamp) at the neuromuscular junction. Use of this technique can provide key insights into mechanisms of synaptic transmission under normal and disease conditions.

عضلة رافعة أوريس التحضير لدراسة انتقال الأعصاب الثدييات المشبك في ظروف الجهد

This protocol describes a technique to record synaptic transmission from the neuromuscular junction under current-clamp and voltage-clamp conditions. An ...

The Detection of 5-Hydroxymethylcytosine in Neural Stem Cells and Brains of Mice

Multiple&#160;DNA modifications have been identified in the mammalian genome. Of that, 5-methylcytosine and 5-hydroxymethylcytosine-mediated epigenetic mechanisms have been intensively studied. 5-hydroxymethylcytosine displays dynamic features during embryonic and postnatal development of the brain, plays a regulatory function in gene expression, and is involved in multiple neurological disorders. Here, we describe the detailed methods including immunofluorescence staining and&#160;DNA dot-blot to detect 5-hydroxymethylcytosine in cultured cells and brain tissues of mouse.

Here, we present a protocol to detect 5-hydroxymethylcytosine in cells and brain tissues, utilizing immunofluorescence staining and DNA dot-blot methods.

الكشف عن 5-هيدروكسي ميثيل سيتوسين في الخلايا الجذعية العصبية وعقول الفئران

Multiple&#160;DNA modifications have been identified in the mammalian genome. Of that, 5-methylcytosine and 5-hydroxymethylcytosine-mediated epigenetic ...