الكتاب نود أن ننوه بتمويل من المعاهد الوطنية للصحة 3R01AI080289 - 02S1 ، وجامعة هارفارد مركز باحث زمالة أبحاث الإيدز تحت المعاهد الوطنية للصحة / NIAID 2P30AI060354 - 07.

1. الخلايا البلعمية الثقافة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثقافة THP - 1 10 في الخلايا RPMI 1640 تستكمل مع مصل بقري جنيني 10 ٪ وتعليق ثابتة في قوارير تي. ينبغي الحفاظ على كثافة خلايا أدناه 0.5x10 6 / مليلتر من أجل الحفاظ على مستويات ثابتة من التعبير FcγR وأداء الفحص. </li></ol> 2. إعداد مستضد Biotinylated <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب كمية سلفو NHS - LC عدة كاشف البيوتين اللازمة لbiotinylate المستضد الهدف من الفائدة وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل كاشف biotinylation في الماء وعلى الفور إضافة إلى احتساب كمية المستضد في العازلة التي لا تحتوي على الأمينات الأولية. السماح للتفاعل والمضي قدما لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة ، والخلط في بعض الأحيان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الزائدة ، والبيوتين unconjugated عن طريق تبادل عازلة في تركيز وحدة Amicon الطرد المركزي لقطع الوزن الجزيئي المناسبة للاحتفاظ targeر مستضد. إضافة نموذج إلى الغرفة العليا من وحدة التركيز وإضافة إلى تقديم برنامج تلفزيوني إجمالي حجم ما يصل الى 15 مل خط التعبئة. الطرد المركزي في 4000 ليصل حجم XG وصولا الى ما يقرب من 1.5 ملل. تكرار هذه العملية مرتين سيزيل 99 ٪ من البيوتين مجانا لضمان أقصى قدر من طلاء مستضد إلى الخرز. </li></ol> 3. إعداد الخرز مستضد المشبعة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغسل حبات 100 ميكرولتر من 1 مم neutravidin الفلورسنت مرتين في 1 مل 0.1 ٪ PBS - BSA بعد الغزل في أسفل microcentrifuge بسرعة عالية. تغسل حبات Resuspend في 100 ميكروليتر PBS ، جيش صرب البوسنة ، وقسامة في 10 الأنابيب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتحديد الظروف التي تشبع طلاء مستضد الخرز ، والجمع بين 10 ماي تعليق العمل في حبة غسلها مع تركيزات مختلفة من المستضد biotinylated في شقين الخطوات. احتضان بين عشية وضحاها في 4 درجة مئوية في أنبوب microcentrifuge على المدورة. </li></ol> ملاحظة : يجب تحديد التشبع من الخرز تجريبيا. ويمكن تحقيق هذامن خلال تحديد حبة طلاء الظروف التي تسفر البلعمة القصوى عندما يتم لاحقا opsonized الخرز مع الأجسام المضادة وحيدة النسيلة السيطرة. <ol start="3" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة المستضد غير منضم عن طريق الغسيل مع 1 مل PBS - BSA والطرد المركزي بسرعة عالية حتى حبات من مكعبات. إزالة برنامج تلفزيوني ، وكرر جيش صرب البوسنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend مستضد المغلفة الخرز في الحجم النهائي من 1 مل في برنامج تلفزيوني ، جيش صرب البوسنة. ويمكن تخزين حبات لمدة تصل الى اسبوع على 4 درجات مئوية قبل الاستخدام. </li></ol> 4. تحضير عينات جسم <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يمكن تنقية العينات السريرية الضد من البلازما باستخدام البطيخ تنقية مفتش طقم جل وفقا لتعليمات الشركات المصنعة. ويمكن تخزين المنقى IgG في 4 درجات مئوية لتصبح جاهزة للاستخدام. </li></ol> ملاحظة : يجب دائما الاحتياطات المناسبة بشأن التعامل مع العينات البشرية التي اتخذت. <ol start="2" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد تركيز الأجسام المضادة التي المنقى الامتصاصية في A280 ، وتمييع عينات إلى 1 مغ / مل في برنامج تلفزيوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد يفترضإيف والسلبية الأضداد وحيدة النسيلة التي تحكم التخفيف إلى 1 مغ / مل في برنامج تلفزيوني. </li></ol> 5. الطلاء التجربة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend وغسلها ، مستضد حل حبة المشبعة أعد vortexing أعلاه ، ونقل 10 ميكرولتر جيدا في كل لوحة من 96 جولة القاع أيضا. يجب توخي الحذر لتستنهض الهمم باستمرار تعليق حبة لضمان بأعداد متساوية من الخرز الفلورسنت تضاف إلى كل بئر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة تركيزات مختلفة من الأجسام المضادة التي تهم كل بئر ، وخلق منحنى الجرعة والاستجابة لكل الأجسام المضادة. وسوف تختلف بين تركيزات الأمثل اعتمادا على عينات من عيار الأضداد الحاضر ، ولكن مجموعة من 0،01-100 ميكروغرام / مل تركيز النهائي سوف توفر تغطية جيدة وتسمح بتحديد نطاق تركيز الاهتمام. تضاف ضمان الأضداد في أحجام أكبر لا يتجاوز 20 ميكرولتر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الخرز واحتضان الضد عينات لمدة 2 ساعة على 37 درجة مئوية للسماح للأضداد opsonize حبات &lt;/ لى&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد تعليق من الخلايا في THP 1 - 2.5 × 5 10 الخلايا / مل ، وإضافة 200 ميكروليتر من هذا التعليق على كل جانب ، ليصبح المجموع 5 × 10 4 - 1 THP الخلايا في كل بئر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية ، و 5 ٪ CO 2 ، في حاضنة ثابتة ، والخرز الخلايا مما يسمح لتكوير عبر الجاذبية. </li></ol> ملاحظة : قد يكون إشارة إلى تحسن الضوضاء عن طريق تحديد حبة الأمثل : الأضداد : THP - 1 نسب لمصدر خلية مستضد الضد ومعين. 6. تحليل تدفق Cytometric <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة 100 ميكرولتر من طاف من كل رفاهية الحرص على عدم تعكير صفو بيليه الخلية. يمكن حفظ إذا طاف المطلوب قرارات إفراز خلوى أو غيرها من التحليلات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للتثبيت ، إضافة 100 ميكرولتر من بارافورمالدهيد 4 ٪ لكل جيدا والماصة لresuspend ومزيج الخلايا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يمكن إجراء تحليل تدفق عالية الإنتاجية cytometric باستخدام LSR دينار بحريني الثاني مجهزا لوحة HTS القارئ.</li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> برنامج برنامج لخلط كل بئر ثلاث مرات (100 حجم مزيج ميكرولتر) وتحليل 30 ميكروليتر أو أحداث خلية على الأقل عام 2000 ، من كل عينة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن تحليل البيانات التي تم جمعها في FlowJo أو برامج مماثلة. قياسات مفيدة تشمل في المئة من + حبة ، أو خلايا فلوري ، الذي يوفر قدرا من عدد الخلايا البلعمية الحاضر ، فضلا عن كثافة مضان من الخلايا البلعمية ، والتي توفر مقياسا لعدد من الخرز phagocytosed. ضرب هذه القيم يولد متكامل يعني كثافة الفلورسنت ، أو iMFI. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن حساب متوسط ​​عدد حبات phagocytosed كل خلية بلعمية بقسمة iMFI من مضان يعني من 1 حبة. </li></ol> 7. ممثل النتائج ينبغي أن يكون هناك تمايز واضح لعينات من المواد الضد المتضررة وغير المتضررة. الشكل 1A يعرض رسوم بيانية FACS عينة من الأجسام المضادة من فيروس نقص المناعة البشرية نيجاtive (تتبع الأسود) وموضوعا بفيروس نقص المناعة البشرية (تتبع الرمادي) ، ويدل على زيادة البلعمة يقودها وجود مستضد محددة الأجسام المضادة. حساسية الأمثل للمقايسة يعتمد على التشبع من الخرز مع مستضد biotinylated. ويعرض الشكل 1B البلعمة احظ عندما كان opsonized حبات مغلفة مع كميات متفاوتة من المستضد مع الأجسام المضادة وحيدة النسيلة التحكم 3 (بما في ذلك الأجسام المضادة غير ملزم ، مثلثات) ، ويؤسس 2μg مستضد / ميكروليتر الخرز بوصفها تركيز تشبع لهذا المستضد. ويرد منحنى الجرعة والاستجابة في الشكل 2 ، ويدل على القدرة التفاضلية للعينات الخاضعة للحث على الضد البلعمة على جسم نطاق تركيز 0،05-5 ميكروغرام / مل. قد يكون الدافع وراء هذا الفرق البلعمة من قبل أي من الاختلافات في خصائص المجال أو عيار التيسير فرعية مثل مفتش الحكومة والدولة ارتباط بالغليكوزيل. عندما THP - 1 الخلايا طماجد بواسطة المجهر الفلورسنت ، وهناك أدلة واضحة على البلعمة حبة. الشكل 3 يعرض two 63x تزال صور THP - 1 الخلايا بعد الحضانة مع opsonized الأضداد (الخضراء) وغير opsonized الخرز (الحمراء) ، مما يدل على عدم وجود امتصاص أكلة في غياب الأجسام المضادة. عندما يتم تنفيذ الوقت الفاصل المجهري ، وامتصاص الأجسام المضادة المحددة أكلة من الخرز فلوري هو أكثر إثارة للانتباه (فيلم 1 ، 20X التكبير). وقد أكد العمل السابق استيعاب حبات المرتبطة الخلايا ، والتجارب الأولية مع حيدات اتفقت بشكل جيد مع عشرات أكلة (قيم iMFI) في هذا الاختبار إنتاجية عالية (لا تظهر البيانات). <img src="/files/ftp_upload/3588/3588fig1.jpg" alt="الشكل 1"/> الشكل 1. مراقبة جودة الفحص. 1A ، رسوم بيانية الخلوي تدفق البلعمة لعينة من الأجسام المضادة لموضوع فيروس نقص المناعة البشرية السلبية (تتبع الأسود) وموضوعا بفيروس نقص المناعة البشرية (تتبع الرمادي).1B : التصميم التجريبي من الشروط طلاء حبة الأمثل لمستضد العينة. مستضد محددة الاجسام المضادة (دائرة ، مربع) شرح البلعمة القصوى من الخرز مغطاة&gt; 2 ميكروغرام مستضد / ميكروليتر من الخرز ، في حين أن الأجسام المضادة المكافحة (المثلث) يدل على أي نشاط البلعمة. <img src="/files/ftp_upload/3588/3588fig2.jpg" alt="الشكل 2"/> الشكل 2. البلعمة منحنى الاستجابة للجرعة. عينات من فيروس نقص المناعة السريرية الأضداد إيجابية (دون علاج ، والمعالجة ، واظهار السيطرة على تكاثر الفيروس في غياب العلاج المضاد للفيروس) وفيروس نقص المناعة البشرية محرك الموضوعات السلبية البلعمة من gp120 (فيروس نقص المناعة البشرية المغلف) حبات مغلفة بشكل مختلف. <img src="/files/ftp_upload/3588/3588fig3.jpg" alt="الشكل 3"/> الشكل 3. التطبع كفاءة. المجهري يؤكد استيعاب الأجسام المضادة opsonized الخرز (الأخضر) ، بينما غير opsonized الخرز البقاء في سولution (63x التكبير). فيلم 1. أجري الزمن الفاصل بين الأضداد من المجهري يحركها البلعمة على مدار 14 ساعة ، ويسمح التصور من نشاط الخلايا البلعمية من THP - 1 تستخدم في فحص عالية الإنتاجية. الخرز الفلورية الخضراء هي الضد opsonized والخرز الحمراء الفلورسنت توفير الرقابة السلبية. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/3588/3588movie1.mov">اضغط هنا لمشاهدة الفيلم.</a>

<ol>
	<li>Cartron, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+activity+of+humanized+anti-CD20+monoclonal+antibody+and+polymorphism+in+IgG+Fc+receptor+FcgammaRIIIa+gene.">Therapeutic activity of humanized anti-CD20 monoclonal antibody and polymorphism in IgG Fc receptor FcgammaRIIIa gene.</a> Blood. 99, 754-758 (2002).</li><li>Ahmad, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+a+correlation+between+antibody-dependent+cellular+cytotoxicity-mediating+anti-HIV-1+antibodies+and+prognostic+predictors+of+HIV+infection.">Evidence for a correlation between antibody-dependent cellular cytotoxicity-mediating anti-HIV-1 antibodies and prognostic predictors of HIV infection.</a> J. Clin. Immunol. 21, 227-233 (2001).</li><li>Hashimoto, G., Wright, P. F., Karzon, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibody-dependent+cell-mediated+cytotoxicity+against+influenza+virus-infected+cells.">Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity against influenza virus-infected cells.</a> J. Infect Dis. 148, 785-794 (1983).</li><li>Anthony, R. M., Nimmerjahn, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Th	.">Th	.</a> Curr. Opin. Organ Transplant. , (2010).</li><li>Takai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fc+receptors+and+their+role+in+immune+regulation+and+autoimmunity.">Fc receptors and their role in immune regulation and autoimmunity.</a> J. Clin. Immunol. 25, 1-18 (2005).</li><li>Jefferis, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibody+therapeutics:+isotype+and+glycoform+selection.">Antibody therapeutics: isotype and glycoform selection.</a> Expert. Opin. Biol. Ther. 7, 1401-1413 (2007).</li><li>Halstead, S. B., O'Rourke, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+viruses+and+mononuclear+phagocytes.+I.+Infection+enhancement+by+non-neutralizing+antibody.">Dengue viruses and mononuclear phagocytes. I. Infection enhancement by non-neutralizing antibody.</a> J. Exp. Med. 146, 201-217 (1977).</li><li>Subramaniam, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+absence+of+serum+IgM+enhances+the+susceptibility+of+mice+to+pulmonary+challenge+with+Cryptococcus+neoformans.">The absence of serum IgM enhances the susceptibility of mice to pulmonary challenge with Cryptococcus neoformans.</a> J. Immunol. 184, 5755-5767 (2010).</li><li>Ackerman, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+robust,+high-throughput+assay+to+determine+the+phagocytic+activity+of+clinical+antibody+samples.">A robust, high-throughput assay to determine the phagocytic activity of clinical antibody samples.</a> J. Immunol. Methods. 366, 8-19 (2011).</li><li>Tsuchiya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+characterization+of+a+human+acute+monocytic+leukemia+cell+line+(THP-1.">Establishment and characterization of a human acute monocytic leukemia cell line (THP-1.</a> Int. J. Cancer. 26, 171-176 (1980).</li><li>Ward, E. S., Ghetie, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effector+functions+of+immunoglobulins:+implications+for+therapy.">The effector functions of immunoglobulins: implications for therapy.</a> Ther. Immunol. 2, 77-94 (1995).</li><li>Winiarska, M., Glodkowska-Mrowka, E., Bil, J., Golab, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+the+antitumor+effects+of+anti-CD20+antibodies.">Molecular mechanisms of the antitumor effects of anti-CD20 antibodies.</a> Front. Biosci. 16, 277-306 (2011).</li><li>Takai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fc+receptors:+their+diverse+functions+in+immunity+and+immune+disorders.">Fc receptors: their diverse functions in immunity and immune disorders.</a> Springer Semin. Immunopathol. 28, 303-304 (2006).</li><li>Yamaguchi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycoform-dependent+conformational+alteration+of+the+Fc+region+of+human+immunoglobulin+G1+as+revealed+by+NMR+spectroscopy.">Glycoform-dependent conformational alteration of the Fc region of human immunoglobulin G1 as revealed by NMR spectroscopy.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1760, 693-700 (2006).</li><li>Anthony, R. M., Ravetch, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+role+for+the+IgG+Fc+glycan:+the+anti-inflammatory+activity+of+sialylated+IgG.">A novel role for the IgG Fc glycan: the anti-inflammatory activity of sialylated IgG.</a> Fcs. J. Clin. Immunol. 30, S9-S14 (2010).</li><li>Nimmerjahn, F., Anthony, R. M., Ravetch, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Agalactosylated+IgG+antibodies+depend+on+cellular+Fc+receptors+for+in+vivo+activity.">Agalactosylated IgG antibodies depend on cellular Fc receptors for in vivo activity.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 104, 8433-8437 (2007).</li><li>Marchette, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+immune+status+on+dengue+2+virus+replication+in+cultured+leukocytes+from+infants+and+children.">Effect of immune status on dengue 2 virus replication in cultured leukocytes from infants and children.</a> Infect. Immun. 24, 47-50 (1979).</li><li>Fust, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutralizing+and+enhancing+antibodies+measured+in+complement-restored+serum+samples+from+HIV-1-infected+individuals+correlate+with+immunosuppression+and+disease.">Neutralizing and enhancing antibodies measured in complement-restored serum samples from HIV-1-infected individuals correlate with immunosuppression and disease.</a> AIDS. 8, 603-609 (1994).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

في مقايسة الموصوفة هنا يسمح عالية الإنتاجية تحليل عينات من أكلة النشاط الضد السريرية باستخدام خط خلية الوحيدات استخدمت طويلا لدراسة العمليات أكلة لوحة (10) ومقرها التدفق الخلوي الآلي. هذا الاختبار هو مفيد أكثر من غيرها في قدرتها على تميز بدقة مجموعات فرعية محددة مستضد الضد ، والسماح ليس فقط لدراسة الاختلافات في البلعمة مدفوعا أضداد محددة المرض من الموضوعات المختلفة ، ولكن أيضا دراسة خصوصيات مستضد متعددة داخل نفس الموضوع. لأن الأجسام المضادة لخلايا تجنيد المستجيب الفطرية ، بما في ذلك وحيدات الخلايا الأخرى تقديم المستضد الآثار بشدة نتيجة المرض 11-13 ، ومتغيرة تبعا بيولوجيا الهندسة الضد ، مفتش فرعية ، وارتباط بالغليكوزيل Asparagine297 في المجال التيسير 14-16 ، هذا الأسلوب يتيح لل تقييم آلية الضد الحاسمة للعمل. وعلاوة على ذلك ، لأن الأجسام المضادة ميدييتم استغلالها من قبل بعض البلعمة ated مسببات الأمراض أثناء العدوى 7،17،18 ، وهذا يبشر بالخير في مقايسة تقييم عملية من الأجسام المضادة التي تعتمد على تعزيز ، ويسلط الضوء على الطبيعة المزدوجة للبلعمة باعتبارها وقائية محتملة ، يحتمل أن تكون ضارة ، وكذلك الأضداد النشاط. ويمكن الاستفادة من مقايسة وصف لتحليل الأجسام المضادة من العينات السريرية للسكان المريض ، ولكن أيضا من يتم تطعيمهم ، ويمكن تكييفها لاستخدام المصل بدلا من مفتش المنقى. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن تحليل إفراز خلوى ردا على البلعمة من طاف والثقافة ، ويمكن تحديد تأثير FCR معينة باستخدام FCR حجب الأضداد ، والسماح ليس فقط الاختلافات في القدرة أكلة يتم تحديدها ، ولكن يشير الى المصب الأحداث ، مع إلقاء الضوء في الآلية ، ويمكن أن يساعد على حل وتحسين فهم هذه الآلية المناعية.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم الكاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> EZ - ارتباط مايكرو سلفو - NHS - LC - Biotinylation كيت </td><td> الحرارية Scientfic </td><td> 21935 </td><td></td></tr><tr><td> Amicon الترا - 15 وحدة تصفية الطرد المركزي مع Ultracel 50 الغشاء </td><td> ميليبور </td><td> UFC905024 </td><td> قد تختلف حجم وحدة التصفية وفقا لحجم المستضد </td></tr><tr><td> المسمى FluoSpheres NeutrAvidin المجهرية ، 1.0 ميكرون ، فلوري الأصفر والأخضر (505/515) </td><td> Invitrogen </td><td> F - 8776 </td><td> مصنعين إنتاج هذا المنتج في مختلف الألوان </td></tr><tr><td> البطيخ تنقية مفتش جل كيت </td><td> الحرارية </td><td> 45212 </td><td> وينبغي الحرص على التأكد من نقاء العينات بواسطة SDS أب صفحة. </td></tr></tbody></table>

determining the phagocytic activity of clinical antibody samples

وبفعل الضد يحركها البلعمة عبر إشراك مستقبلات القطعة Fc على البالعات المهنية ، ويمكن أن تساهم في إزالة الألغام على حد سواء فضلا عن باثولوجيا المرض. بينما منذ فترة طويلة من خصائص المجالات متغير من الأجسام المضادة تعتبر حاسمة لفي وظائف الجسم الحي ، أصبح من قدرة الأجسام المضادة لتجنيد الخلايا المناعية الفطرية عبر عن تقديره لهم مجالات التيسير على نحو متزايد باعتباره عاملا رئيسيا في مدى فعاليتها ، سواء في تحديد المؤتلف وحيدة النسيلة العلاج الأضداد ، وكذلك في سياق العدوى الطبيعية أو التطعيم 1-3. الأهم من ذلك ، على الرغم من التسميات على النحو مجال المستمر ، ومجال التيسير الضد لا يملك وظيفة ثابتة ، وغير منظم بقوة فرعية مفتش (IgG1 - 4) ، وارتباط بالغليكوزيل في الهليونين 297 4-6. وبالتالي ، فإن هذا الأسلوب لدراسة الفروق الفنية للمستضد محددة الأجسام المضادة في عينات سريرية سيسهل العلاقة من وعاء أكلةential من الأجسام المضادة لحساسية المرض ، والدولة للعدوى ، والتقدم ، أو نتيجة سريرية. علاوة على ذلك ، هذه الوظيفة المستجيب له أهمية خاصة في ضوء قدرة موثقة من الأجسام المضادة لتعزيز العدوى عن طريق توفير وصول الممرضات الى خلايا البلعمة المضيف عبر مستقبلات القطعة Fc يحركها 7. بالإضافة إلى ذلك ، هناك بعض الأدلة على أن امتصاص أكلة في مأمن من المجمعات يمكن أن تؤثر على الاستقطاب Th1/Th2 للاستجابة المناعية 8. هنا ، نحن تصف مقايسة مصممة للكشف عن الاختلافات في البلعمة الضد التي يسببها ، والتي قد يكون سببها فرعية مفتش التفاضلية ، في هيكل غليكان Asn297 ، فضلا عن القدرة على تكوين أجسام مضادة مناعية مجمعات محددة المستضد بطريقة عالية الإنتاجية . ولهذه الغاية ، والمغلفة 1 ميكرومتر مع حبات الفلورسنت مستضد ، ثم حضنت مع عينات سريرية الأضداد ، وتوليد المستضدات محددة الفلورسنت مجمعات المناعي. هذه antiboثم يتم تحضين DY - opsonized الخرز مع خط خلية الوحيدات معربا عن FcγRs متعددة ، بما في ذلك تفعيل والمثبطة. يمكن إخراج مقايسة تشمل النشاط أكلة ، خلوى إفراز ، وأنماط استخدام FcγRs ، ونحن مصممون بطريقة موحدة ، مما يجعل هذا النظام مفيد للغاية لتحليل الاختلافات في هذه المهمة التي تعتمد على الضد المستجيب في كل من العدوى واللقاحات لحماية بوساطة 9.

Watch this Scientific Journal Video about Determining the Phagocytic Activity of Clinical Antibody Samples at JoVE.com

Determining the Phagocytic Activity of Clinical Antibody Samples

نقدم مقايسة تدفق عالية الإنتاجية cytometric لتحديد النشاط من أكلة مستضد محددة الأجسام المضادة من العينات السريرية ، وذلك باستخدام الفلورية مستضد المغلفة الخرز وخط خلية الوحيدات التعبير عن مستقبلات القطعة Fc متعددة الاستخدام توفير مستقبل والقرارات في النشاط أكلة موحدة و أزياء استنساخه عن أي مستضد من الفائدة.

تحديد نشاط أكلة العينات السريرية جسم

Antibody-driven phagocytosis is induced via the engagement of Fc receptors on professional phagocytes, and can contribute to both clearance as well as ...

determining-the-phagocytic-activity-of-clinical-antibody-samples

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

23.3K Views.  Ragon Institute of MGH, MIT, and Harvard. نقدم مقايسة تدفق عالية الإنتاجية cytometric لتحديد النشاط من أكلة مستضد محددة الأجسام المضادة من العينات السريرية ، وذلك باستخدام الفلورية مستضد المغلفة الخرز وخط خلية الوحيدات التعبير عن مستقبلات القطعة Fc متعددة الاستخدام توفير مستقبل والقرارات في النشاط أكلة مو...

Video: Determining the Phagocytic Activity of Clinical Antibody Samples

Determining the Reactivity and Titre of Serum using a Haemagglutination Assay

Haemagglutination is a specific form of agglutination and is used when antibodies bind to red blood cells, which act as a particulate antigen. Red blood cells are particularly useful targets as they are readily available and agglutination is observable using the naked eye. This technique is commonly used to determine the titre of an antibody (Ab), for blood grouping and viral quantification. In this video, the steps involved in preparing and performing a haemagglutination assay is demonstrated using antibodies specific to blood group A-antigens added to red blood cells (Revercells). The antiserum is serially diluted in a 96 well U-bottom microtitre tray, to which is added a suspension of Revercells. The samples are mixed and then incubated at 37&deg;C for 60 minutes. After this time, the samples can then be easily scored for  ve, +ve and intermediate (-/+) haemagglutination reactions. This approach allows for the reactivity and titre of a serum sample to be assessed using a rapid and simple technique. The video will cover the theory behind the assay, how the results are read and interpreted, how the titre is determined, how the assay can be modified and any issues associated with the use of this technique.

Haemagglutination is a form of agglutination where antibodies bind to red blood cells. Red blood cells are both readily available and the results are readily observable using the naked eye. This video demonstrates the steps involved in a haemagglutination assay, interpreting the results and determining the titre.

تحديد التفاعل وعيار من المصل باستخدام الفحص Haemagglutination

Haemagglutination is a specific form of agglutination and is used when antibodies bind to red blood cells, which act as a particulate antigen. Red blood ...

Using a Pan-Viral Microarray Assay (Virochip) to Screen Clinical Samples for Viral Pathogens

The diagnosis of viral causes of many infectious diseases is difficult due to the inherent sequence diversity of viruses as well as the ongoing emergence of novel viral pathogens, such as SARS coronavirus and 2009 pandemic H1N1 influenza virus, that are not detectable by traditional methods. To address these challenges, we have previously developed and validated a pan-viral microarray platform called the Virochip with the capacity to detect all known viruses as well as novel variants on the basis of conserved sequence homology1. Using the Virochip, we have identified the full spectrum of viruses associated with respiratory infections, including cases of unexplained critical illness in hospitalized patients, with a sensitivity equivalent to or superior to conventional clinical testing2-5. The Virochip has also been used to identify novel viruses, including the SARS coronavirus6,7, a novel rhinovirus clade5, XMRV (a retrovirus linked to prostate cancer)8, avian bornavirus (the cause of a wasting disease in parrots)9, and a novel cardiovirus in children with respiratory and diarrheal illness10. The current version of the Virochip has been ported to an Agilent microarray platform and consists of ~36,000 probes derived from over ~1,500 viruses in GenBank as of December of 2009. Here we demonstrate the steps involved in processing a Virochip assay from start to finish (~24 hour turnaround time), including sample nucleic acid extraction, PCR amplification using random primers, fluorescent dye incorporation, and microarray hybridization, scanning, and analysis.

Using a Pan-Viral Microarray Assay Virochip to Screen Clinical Samples for Viral Pathogens

The Virochip is a pan-viral microarray designed to simultaneously detect all known viruses as well as novel viruses on the basis of conserved sequence homology. Here we demonstrate how to run a Virochip assay to analyze clinical samples for the presence of both known and unknown viruses.

باستخدام الفحص ميكروأري عموم الفيروسي (Virochip) إلى الشاشة العينات السريرية لمسببات الأمراض الفيروسية

The diagnosis of viral causes of many infectious diseases is difficult due to the inherent sequence diversity of viruses as well as the ongoing emergence ...

Multiplex Detection of Bacteria in Complex Clinical and Environmental Samples using Oligonucleotide-coupled Fluorescent Microspheres

Bacterial vaginosis (BV) is a recurring polymicrobial syndrome that is characterized by a change in the "normal" microbiota from Lactobacillus-dominated to a microbiota dominated by a number of bacterial species, including Gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae, and others1-3. This condition is associated with a range of negative health outcomes, including HIV acquisition4, and it can be difficult to manage clinically5. Furthermore, diagnosis of BV has relied on the use of Gram stains of vaginal swab smears that are scored on various numerical criteria6,7. While this diagnostic is simple, inexpensive, and well suited to resource-limited settings, it can suffer from problems related to subjective interpretations and it does not give a detailed profile of the composition of the vaginal microbiota8. Recent deep sequencing efforts have revealed a rich, diverse vaginal microbiota with clear differences between samples taken from individuals that are diagnosed with BV compared to those individuals that are considered normal9,10, which has resulted in the identification of a number of potential targets for molecular diagnosis of BV11,12. These studies have provided a wealth of useful information, but deep sequencing is not yet practical as a diagnostic method in a clinical setting. We have recently described a method for rapidly profiling the vaginal microbiota in a multiplex format using oligonucleotide-coupled fluorescent beads with detection on a Luminex platform13. This method, like current Gram stain-based methods, is rapid and simple but adds the additional advantage of exploiting molecular knowledge arising from sequencing studies in probe design. This method therefore provides a way to profile the major microorganisms that are present in a vaginal swab that can be used to diagnose BV with high specificity and sensitivity compared to Gram stain while providing additional information on species presence and abundance in a semi-quantitative and rapid manner. This multiplex method is expandable well beyond the range of current quantitative PCR assays for particular organisms, which is currently limited to 5 or 6 different assays in a single sample14. Importantly, the method is not limited to the detection of bacteria in vaginal swabs and can be easily adapted to rapidly profile nearly any microbial community of interest. For example, we have recently begun to apply this methodology to the development of diagnostic tools for use in wastewater treatment plants.

We describe a multiplex method for the detection of microorganisms within a sample using oligonucleotide-coupled fluorescent beads. Amplicon from all organisms within a sample is hybridized to a panel of probe-coupled beads. A Luminex or Bio-Plex instrument is used to query each bead for bead type and hybridization signal.

كشف متعددة من البكتيريا الموجودة في مجمع العينات السريرية والبيئية باستخدام قليل النوكليوتيد ، بالإضافة نيون المجهرية

Bacterial vaginosis (BV) is a recurring polymicrobial syndrome that is characterized by a change in the "normal" microbiota from Lactobacillus-dominated ...

Determining Optimal Cytotoxic Activity of Human Her2neu Specific CD8 T cells by Comparing the Cr51 Release Assay to the xCELLigence System

Cytotoxic CD8 T cells constitute a subgroup of T cells that are capable of inducing the death of infected or malignant host cells1. These cells express a specialized receptor, called the T cell receptor (TCR), which can recognize a specific antigenic peptide bound to HLA class I molecules2. Engagement of infected cells or tumor cells through their HLA class I molecule results in production of lytic molecules such as granzymes and perforin resulting in target cell death. While it is useful to determine frequencies of antigen-specific CD8 T cells using assays such as the ELIspot or flow cytometry, it is also helpful to ascertain the strength of CD8 T cell responses using cytotoxicity assays3. The most recognizable assay for assessing cytotoxic function is the Chromium Release Assay (CRA), which is considered a standard assay 4. The CRA has several limitations, including exposure of cells to gamma radiation, lack of reproducibility, and a requirement for large numbers of cells. Over the past decade, there has been interest in adopting new strategies to overcome these limitations. Newer approaches include those that measure caspase 
release 4, BLT esterase activity 5 and surface expression of CD107 6. The impedance-based assay, using the Roche xCelligence system, was examined in the present paper for its potential as an alternative to the CRA. Impedance or opposition to an electric current occurs when adherent tumor cells bind to electrode plates. Tumor cells detach following killing and electrical impedance is reduced which can be measured by the xCelligence system. The ability to adapt the impedance-based approach to assess cell-mediated killing rests on the observation that T cells do not adhere tightly to most surfaces and do not appear to have much impact on impedance thus diminishing any concern of direct interference of the T cells with the measurement. Results show that the impedance-based assay can detect changes in the levels of antigen-specific cytotoxic CD8 T cells with increased sensitivity relative to the standard CRA. Based on these results, impedance-based approaches may be good alternatives to CRAs or other approaches that aim to measure cytotoxic CD8 T cell functionality.

The chromium release assay, a common assay for detecting cytotoxic T cell activity, has several limitations. Using antigen-specific CD8 T cells and the human breast cancer tumor line, SKBR3, in the present article, an impedance-based approach was examined for the capability of detecting cell killing.

تحديد نشاط السامة للخلايا الأمثل للHer2neu CD8 خلايا تي محددة الإنسان من خلال مقارنة الفحص الإصدار Cr51 إلى نظام xCELLigence

Cytotoxic CD8 T cells constitute a subgroup of T  cells that are capable of inducing the death of infected or malignant host  cells1. These cells express ...

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne relapsing fever (Borrelia spp.), Rocky Mountain Spotted fever (Rickettsia rickettsii), ehrlichiosis (Ehrlichia chaffeensis and E. equi), anaplasmosis (Anaplasma phagocytophilum), encephalitis (tick-borne encephalitis virus), babesiosis (Babesia spp.), Colorado tick fever (Coltivirus), and tularemia (Francisella tularensis) 1-8. To be properly transmitted into the host these infectious agents differentially regulate gene expression, interact with tick proteins, and migrate through the tick 3,9-13. For example, the Lyme disease agent, Borrelia burgdorferi, adapts through differential gene expression to the feast and famine stages of the tick's enzootic cycle 14,15. Furthermore, as an Ixodes tick consumes a bloodmeal Borrelia replicate and migrate from the midgut into the hemocoel, where they travel to the salivary glands and are transmitted into the host with the expelled saliva 9,16-19.
As a tick feeds the host typically responds with a strong hemostatic and innate immune response 11,13,20-22. Despite these host responses, I. scapularis can feed for several days because tick saliva contains proteins that are immunomodulatory, lytic agents, anticoagulants, and fibrinolysins to aid the tick feeding 3,11,20,21,23. The immunomodulatory activities possessed by tick saliva or salivary gland extract (SGE) facilitate transmission, proliferation, and dissemination of numerous tick-borne pathogens 3,20,24-27. To further understand how tick-borne infectious agents cause disease it is essential to dissect actively feeding ticks and collect tick saliva. This video protocol demonstrates dissection techniques for the collection of hemolymph and the removal of salivary glands from actively feeding I. scapularis nymphs after 48 and 72 hours post mouse placement. We also demonstrate saliva collection from an adult female I. scapularis tick.

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

The collection of infected tick hemolymph, salivary glands, and saliva is important to study how tick-borne pathogens cause disease. In this protocol we demonstrate how to collect hemolymph and salivary glands from feeding Ixodes scapularis nymphs. We also demonstrate saliva collection from female I. scapularis adults.

اللعاب، الغدد اللعابية، وجمع اللمف الدموي من القراد اللبود الكتفي

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne ...

Fluorescence Microscopy Methods for Determining the Viability of Bacteria in Association with Mammalian Cells

Central to the field of bacterial pathogenesis is the ability to define if and how microbes survive after exposure to eukaryotic cells. Current protocols to address these questions include colony count assays, gentamicin protection assays, and electron microscopy. Colony count and gentamicin protection assays only assess the viability of the entire bacterial population and are unable to determine individual bacterial viability. Electron microscopy can be used to determine the viability of individual bacteria and provide information regarding their localization in host cells. However, bacteria often display a range of electron densities, making assessment of viability difficult. This article outlines protocols for the use of fluorescent dyes that reveal the viability of individual bacteria inside and associated with host cells. These assays were developed originally to assess survival of Neisseria gonorrhoeae in primary human neutrophils, but should be applicable to any bacterium-host cell interaction. These protocols combine membrane-permeable fluorescent dyes (SYTO9 and 4&#39;,6-diamidino-2-phenylindole [DAPI]), which stain all bacteria, with membrane-impermeable fluorescent dyes (propidium iodide and SYTOX Green), which are only accessible to nonviable bacteria. Prior to eukaryotic cell permeabilization, an antibody or fluorescent reagent is added to identify extracellular bacteria. Thus these assays discriminate the viability of bacteria adherent to and inside eukaryotic cells. A protocol is also provided for using the viability dyes in combination with fluorescent antibodies to eukaryotic cell markers, in order to determine the subcellular localization of individual bacteria. The bacterial viability dyes discussed in this article are a sensitive complement and/or alternative to traditional microbiology techniques to evaluate the viability of individual bacteria and provide information regarding where bacteria survive in host cells.

Central to the field of bacterial pathogenesis is the ability to define if and how microbes survive after exposure to eukaryotic cells. This article outlines protocols for the use of fluorescent dyes that reveal the viability of individual bacteria inside and associated with host cells.

مضان المجهري طرق لتحديد الجدوى من البكتيريا في جمعية مع خلايا الثدييات

Central to the field of bacterial pathogenesis is the ability to define if and how microbes survive after exposure to eukaryotic cells. Current protocols ...

Scalable High Throughput Selection From  Phage-displayed Synthetic Antibody Libraries

The demand for antibodies that fulfill the needs of both basic and clinical research applications is high and will dramatically increase in the future. However, it is apparent that traditional monoclonal technologies are not alone up to this task. This has led to the development of alternate methods to satisfy the demand for high quality and renewable affinity reagents to all accessible elements of the proteome. Toward this end, high throughput methods for conducting selections from phage-displayed synthetic antibody libraries have been devised for applications involving diverse antigens and optimized for rapid throughput and success. Herein, a protocol is described in detail that illustrates with video demonstration the parallel selection of Fab-phage clones from high diversity libraries against hundreds of targets using either a manual 96 channel liquid handler or automated robotics system. Using this protocol, a single user can generate hundreds of antigens, select antibodies to them in parallel and validate antibody binding within 6-8 weeks. Highlighted are: i) a viable antigen format, ii) pre-selection antigen characterization, iii) critical steps that influence the selection of specific and high affinity clones, and iv) ways of monitoring selection effectiveness and early stage antibody clone characterization. With this approach, we have obtained synthetic antibody fragments (Fabs) to many target classes including single-pass membrane receptors, secreted protein hormones, and multi-domain intracellular proteins. These fragments are readily converted to full-length antibodies and have been validated to exhibit high affinity and specificity. Further, they have been demonstrated to be functional in a variety of standard immunoassays including Western blotting, ELISA, cellular immunofluorescence, immunoprecipitation and related assays. This methodology will accelerate antibody discovery and ultimately bring us closer to realizing the goal of generating renewable, high quality antibodies to the proteome.

A method is described with visual accompaniment for conducting scalable, high throughput selections from phage-displayed combinatorial synthetic antibody libraries against hundreds of antigens simultaneously. Using this parallel approach, we have isolated antibody fragments that exhibit high affinity and specificity for diverse antigens that are functional in standard immunoassays.

تحجيم إنتاجية عالية التحديد من المكتبات الأجسام المضادة الاصطناعية-عرض فاجي

The demand for antibodies that fulfill the needs of both basic and clinical research applications is high and will dramatically increase in the future. ...

A Rapid Strategy for the Isolation of New Faustoviruses from Environmental Samples Using Vermamoeba vermiformis

The isolation of giant viruses is of great interest in this new era of virology, especially since these giant viruses are related to protists. Giant viruses may be potentially pathogenic for many species of protists. They belong to the recently described order of Megavirales. The new lineage Faustovirus that has been isolated from sewage samples is distantly related to the mammalian pathogen African swine fever virus. This virus is also specific to its amoebal host, Vermamoeba vermiformis, a protist common in health care water systems. It is crucial to continue isolating new Faustovirus genotypes in order to enlarge its genotype collection and study its pan-genome. We developed new strategies for the isolation of additional strains by improving the use of antibiotic and antifungal combinations in order to avoid bacterial and fungal contaminations of the amoeba co-culture and favoring the virus multiplication. We also implemented a new starvation medium to maintain V. vermiformis in optimal conditions for viruses co-culture. Finally, we used flow cytometry rather than microscopic observation, which is time-consuming, to detect the cytopathogenic effect. We obtained two isolates from sewage samples, proving the efficiency of this method and thus widening the collection of Faustoviruses, to better understand their environment, host specificity and genetic content.

A Rapid Strategy for the Isolation of New Faustoviruses from Environmental Samples Using Vermamoeba vermiformis

We describe here the latest advances in viral isolation for the characterization of new genotypes of Faustovirus, a new asfarvirus-related lineage of giant viruses. This protocol can be applied to the high throughput isolation of viruses, especially giant viruses infecting amoeba.

استراتيجية السريع لعزل Faustoviruses الجديد من العينات البيئية عن طريق<em&gt; الدودي Vermamoeba</em

The isolation of giant viruses is of great interest in this new era of virology, especially since these giant viruses are related to protists. Giant ...

Fast and Specific Assessment of the Halogenating Peroxidase Activity in Leukocyte-enriched Blood Samples

In this paper a protocol for the quick and standardized enrichment of leukocytes from small whole blood samples is described. This procedure is based on the hypotonic lysis of erythrocytes and can be applied to human samples as well as to blood of non-human origin. The small initial sample volume of about 50 to 100 &#181;l makes this method applicable to recurrent blood sampling from small laboratory animals. Moreover, leukocyte enrichment is achieved within minutes and with low material efforts regarding chemicals and instrumentation, making this method applicable in multiple laboratory environments.
Standardized purification of leukocytes is combined with a highly selective staining method to evaluate halogenating peroxidase activity of the heme peroxidases, myeloperoxidase (MPO) and eosinophil peroxidase (EPO), i.e., the formation of hypochlorous and hypobromous acid (HOCl and HOBr). While MPO is strongly expressed in neutrophils, the most abundant immune cell type in human blood as well as in monocytes, the related enzyme EPO is exclusively expressed in eosinophils. The halogenating activity of these enzymes is addressed by using the almost HOCl- and HOBr-specific dye aminophenyl fluorescein (APF) and the primary peroxidase substrate hydrogen peroxide. Upon subsequent flow cytometry analysis all peroxidase-positive cells (neutrophils, monocytes, eosinophils) are distinguishable and their halogenating peroxidase activity can be quantified. Since APF staining may be combined with the application of cell surface markers, this protocol can be extended to specifically address leukocyte sub-fractions. The method is applicable to detect HOCl and HOBr production both in human and in rodent leukocytes.
Given the widely and diversely discussed immunological role of these enzymatic products in chronic inflammatory diseases, this protocol may contribute to a better understanding of the immunological relevance of leukocyte-derived heme peroxidases.

This protocol describes the quick enrichment of leukocytes from small blood samples for a subsequent specific determination of the halogenating peroxidase activity within the cells. The method can be applied to human and non-human material and may contribute to the evaluation of new inflammatory markers.

تقييم سريع ومحدد من Halogenating البيروكسيد آخر في عينات الدم التخصيب خلايا الدم البيضاء

In this paper a protocol for the quick and standardized enrichment of leukocytes from small whole blood samples is described. This procedure is based on ...

Assessing Retinal Microglial Phagocytic Function In Vivo Using a Flow Cytometry-based Assay

Microglia are the tissue resident macrophages of the central nervous system (CNS) and they perform a variety of functions that support CNS homeostasis, including phagocytosis of damaged synapses or cells, debris, and/or invading pathogens. Impaired phagocytic function has been implicated in the pathogenesis of diseases such as Alzheimer's and age-related macular degeneration, where amyloid-&#946; plaque and drusen accumulate, respectively. Despite its importance, microglial phagocytosis has been challenging to assess in vivo. Here, we describe a simple, yet robust, technique for precisely monitoring and quantifying the in vivo phagocytic potential of retinal microglia. Previous methods have relied on immunohistochemical staining and imaging techniques. Our method uses flow cytometry to measure microglial uptake of fluorescently labeled particles after intravitreal delivery to the eye in live rodents. This method replaces conventional practices that involve laborious tissue sectioning, immunostaining, and imaging, allowing for more precise quantification of microglia phagocytic function in just under six hours. This procedure can also be adapted to test how various compounds alter microglial phagocytosis in physiological settings. While this technique was developed in the eye, its use is not limited to vision research.

Assessing Retinal Microglial Phagocytic Function In Vivo Using a Flow Cytometry-based Assay

Microglial phagocytosis is critical for the maintenance of tissue homeostasis and inadequate phagocytic function has been implicated in pathology. However, assessing microglia function in vivo is technically challenging. We have developed a simple but robust technique for precisely monitoring and quantifying the phagocytic potential of microglia in a physiological setting.

تقييم الشبكية دبقية أكلة وظيفة<em&gt; في فيفو</em&gt; باستخدام الفحص القائمة على الخلوي التدفق

Microglia are the tissue resident macrophages of the central nervous system (CNS) and they perform a variety of functions that support CNS homeostasis, ...