המחברים מבקשים להודות במימון NIH 3R01AI080289-02S1, וכן אוניברסיטת הרווארד מרכז האיידס מחקר מלומד אחוות תחת NIH / NIAID 2P30AI060354-07.

1. התרבות תאים Phagocytic <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות THP-1 תאים 10 ב RPMI 1640 בתוספת סרום 10% שור העובר כמו השעיה נייח בתוך צלוחיות טי. צפיפות התאים יש לשמור מתחת 0.5x10 6 / mL על מנת לשמור על רמות עקבי הביטוי FcγR וביצועים assay. </li></ol> 2. הכן Antigen Biotinylated <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב את הסכום של ערכת sulfo-NHS ביוטין מגיב LC צורך biotinylate את אנטיגן המטרה של עניין על פי הוראות היצרן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ממיסים את מגיב biotinylation במים ומיד להוסיף את הסכום מחושב אנטיגן ב חיץ שאינו מכיל אמינים ראשוניים. אפשר התגובה להמשיך במשך שעה 1 בטמפרטורת החדר, ערבוב מדי פעם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסרת עודפי ביוטין, unconjugated על ידי חילופי חיץ יחידת Amicon צנטריפוגלי ריכוז של הפסקת המשקל הראוי מולקולרית כדי לשמר את targeאנטיגן לא. הוסף מדגם לתא העליון של יחידת ריכוז להוסיף PBS להביא את הנפח הכולל עד לקו 15 מ&quot;ל למלא. צנטריפוגה XG ב 4000 להביא את עוצמת הקול של כ 1.5-MLS. חוזרים על תהליך זה פעמיים תסיר 99% ביוטין החופשי כדי להבטיח ציפוי מקסימלי של אנטיגן כדי חרוזים. </li></ol> 3. הכינו חרוזים Antigen רווי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטפי 100 μl של 1 מ&quot;מ חרוזי ניאון neutravidin פעמיים 1 מ&quot;ל 0.1% PBS-BSA לאחר שצנח ב microcentrifuge במהירות גבוהה. Resuspend שטף חרוזים ב μl 100 PBS-BSA, ו 10 aliquot לתוך צינורות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לקבוע ציפוי אנטיגן התנאים להרוות את החרוזים, לשלב 10 ul של ההשעיה חרוז נשטף עם ריכוזים שונים של אנטיגן biotinylated בשני פי שלבים. דגירה לילה ב 4 ° C בצינור microcentrifuge על הכתף. </li></ol> הערה: הרוויה של חרוזים צריכה להיקבע באופן ניסיוני. ניתן להשיגעל ידי זיהוי ציפוי חרוז התנאים phagocytosis תשואה מקסימאלית כאשר החרוזים הם opsonized לאחר מכן עם נוגדנים חד שבטיים שליטה. <ol start="3" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר אנטיגן מאוגד על ידי שטיפה עם 1 מ&quot;ל PBS-BSA ו צנטריפוגה במהירות גבוהה עד חרוזים הם pelleted. הסר PBS-BSA וחזור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend אנטיגן מצופים חרוזים בנפח סופי של 1 מ&quot;ל PBS ב-BSA. חרוזים ניתן לאחסן עד שבוע ב 4 ° C לפני השימוש. </li></ol> 4. הכן דוגמאות נוגדן <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגימות נוגדנים קלינית יכולה להיות מטוהרים מן הפלזמה באמצעות ג&#39;ל מלון ערכת IgG טיהור בהתאם להוראות היצרנים. מטוהרים IgG ניתן לאחסן 4 ° C עד מוכן לשימוש. </li></ol> הערה: אמצעי זהירות נאות בדבר הטיפול דגימות האדם חייב תמיד נלקח. <ol start="2" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קבע את הריכוז של נוגדנים מטוהרים על ידי ספיגת ב A280, ו לדלל דגימות 1 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​ב PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן להניחive ושליליות נוגדנים חד שבטיים לשלוט על ידי דילול עד 1 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​ב PBS. </li></ol> 5. ציפוי הניסוי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend שטף, רווי אנטיגן פתרון חרוז מוכן ידי vortexing לעיל, והעברת 10 μl היטב לתוך כל צלחת 96 מסביב לתחתית היטב. יש להקפיד להמשיך להתסיס את ההשעיה חרוז על מנת להבטיח מספר שווה של חרוזים פלורסנט מתווספים גם כל אחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת ריכוזים שונים של נוגדנים עניין גם כל יצירת עקומת מנה תגובה עבור כל נוגדן. ריכוז אופטימלי יהיה שונה בין דגימות בהתאם כייל נוגדנים של ההווה, אלא מגוון של 0.01-100 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​בריכוז הסופי תספק כיסוי טוב לאפשר זיהוי של טווח הריכוז של עניין. ודא נוגדנים מתווספים בכמויות לא יותר μl 20. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חרוזים דגירה דגימות נוגדנים עבור 2 שעות 37 ° C כדי לאפשר נוגדנים כדי opsonize את החרוזים. &lt;/ Li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן השעיית THP-1 תאים ב 2.5 x 10 5 תאים / מ&quot;ל, ולהוסיף 200 μl של השעיה זו אחד טוב, עבור סכום כולל של 5 x 10 4 THP-1 תאים בכל טוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה לילה בשעה 37 ° C, 5% CO 2, חממה נייח, תאים המאפשר וחרוזים על גלולה באמצעות כוח הכבידה. </li></ol> הערה: אות לרעש יכול להיות משופרת על ידי קביעת חרוז אופטימלי: נוגדן: THP-1 יחס התא מקור אנטיגן לבין נוגדנים נתון. 6. תזרים Cytometric ניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסרה של 100 μl של supernatant מכל טוב נזהר לא להפריע תא גלולה. Supernatant ניתן לשמור אם הפרשת ציטוקינים קביעות או ניתוחים אחרים הרצוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור קיבעון, להוסיף 100 μl של paraformaldehyde 4% טוב כל pipet כדי resuspend ומערבבים תאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפוקה גבוהה ניתוח תזרים cytometric יכול להתבצע באמצעות LSR BD II מצויד בקורא צלחת HTS.</li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תוכנה תוכנית לערבב היטב כל שלוש פעמים (100 נפח לערבב μl) ולנתח 30 μl, או לפחות 2000 אירועי תא, של כל דגימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נתונים שנאספו ניתן לנתח FlowJo או תוכנה דומה. מדדים שימושי כוללים את אחוז + חרוז, או תאים פלורסנט, אשר מספק מדד של מספר תאים phagocytic הנוכחי, כמו גם את עוצמת הקרינה של תאים phagocytic, אשר מספק מדד של מספר חרוזים phagocytosed. הכפלה של ערכים אלה יוצרת אינטנסיביות משולב ניאון מתכוון, או iMFI. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המספר הממוצע של חרוזים phagocytosed על ידי כל תא phagocytic יכול להיות מחושב על ידי חלוקת iMFI על ידי הקרינה ממוצע של 1 חרוז. </li></ol> 7. נציג תוצאות צריכה להיות הבחנה ברורה של דגימות נוגדנים מן הנבדקים מושפעים מעושה. איור 1 א מציג את היסטוגרמות FACS המדגם נוגדן של נגה-HIVtive (זכר שחור) נושא HIV חיובי (זכר אפור), מדגים את phagocytosis גדל מונע על ידי נוכחות של אנטיגן ספציפי נוגדנים. רגישות אופטימלית של assay תלויה הרוויה של חרוזים עם אנטיגן biotinylated. איור 1B מציגה את phagocytosis נצפתה כאשר חרוזים מצופים עם כמויות שונות של אנטיגן היו opsonized עם 3 נוגדנים חד שבטיים מלאה (כולל נוגדנים בלתי מחייב, משולשים), וקובע 2μg אנטיגן / μl חרוזים כמו ריכוז להרוות עבור אנטיגן זה. עקומת מנה תגובה מוצגת באיור 2, מדגים את קיבולת ההפרש של דגימות נוגדנים הנושא לגרום phagocytosis על פני טווח נוגדן ריכוז של 0.05-5 מיקרוגרם / מ&quot;ל. Phagocytosis זה ההפרש עשוי להיות מונע על ידי אחד ההבדלים titer או נכסים Fc תחום כגון תת IgG המדינה glycosylation. כאשר THP-1 התאים לימאגד ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטי, יש עדות ברורה phagocytosis חרוז. איור 3 מציג שתי 63x עדיין תמונות של THP-1 תאים לאחר הדגרה עם נוגדן opsonized (ירוק) ולא opsonized (אדום) חרוזים, מפגין את חוסר ספיגת phagocytic בהעדר נוגדנים. כאשר לשגות מיקרוסקופיה זמן מתבצע, את ספיגת נוגדנים ספציפיים phagocytic של חרוזי ניאון מדהימה יותר (סרט 1, הגדלה 20x). עבודות קודמות אישרה הפנמה של חרוזים הקשורים התאים, וניסויים עם מונוציטים העיקרי הסכימו היטב assay זה תפוקה גבוהה (מידע לא מוצג) עם עשרות phagocytic (ערכי iMFI). <img src="/files/ftp_upload/3588/3588fig1.jpg" alt="איור 1"/> באיור 1. בקרת איכות Assay. 1A, cytometry זרימה היסטוגרמות של phagocytosis למדגם נוגדן מהנושא HIV שלילי (זכר שחור) נושא HIV חיובי (זכר אפור).1B: קביעה ניסויית של תנאים אופטימליים ציפוי חרוז עבור אנטיגן מדגם. Antigen ספציפית נוגדנים חד שבטיים (עיגול, מרובע) להפגין phagocytosis מקסימלי של חרוזים מצופים מיקרוגרם&gt; 2 אנטיגן / μl של חרוזים, ואילו נוגדן שליטה (משולש) מדגים שום פעילות phagocytic. <img src="/files/ftp_upload/3588/3588fig2.jpg" alt="איור 2"/> באיור 2. מנה תגובה phagocytosis Curve. נוגדן דגימות קליניות מ-HIV חיובי (מטופל, מטופלים, ו מפגין שליטה שכפול נגיפי בהעדר טיפול אנטי retroviral) ו-HIV phagocytosis נושאים שלילי הכונן של gp120 (המעטפה HIV) חרוזים מצופים דיפרנציאלי. <img src="/files/ftp_upload/3588/3588fig3.jpg" alt="איור 3"/> באיור 3. הפנמה יעילה. מיקרוסקופית מאשרת את ההפנמה של נוגדנים opsonized חרוזים (ירוק), ואילו אי - opsonized חרוזים להישאר סולution (63x הגדלה). סרט 1. זמן לשגות מיקרוסקופיה של phagocytosis נוגדן מונחה בוצעה במשך 14 שעות, מאפשרת הדמיה של פעילות phagocytic של THP-1 תאים מנוצל assay תפוקה גבוהה. חרוזים הניאון הירוק נוגדן opsonized, חרוזי ניאון אדום לספק שליטה שלילית. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/3588/3588movie1.mov">לחץ כאן כדי לראות את הסרט.</a>

<ol>
	<li>Cartron, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+activity+of+humanized+anti-CD20+monoclonal+antibody+and+polymorphism+in+IgG+Fc+receptor+FcgammaRIIIa+gene.">Therapeutic activity of humanized anti-CD20 monoclonal antibody and polymorphism in IgG Fc receptor FcgammaRIIIa gene.</a> Blood. 99, 754-758 (2002).</li><li>Ahmad, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+a+correlation+between+antibody-dependent+cellular+cytotoxicity-mediating+anti-HIV-1+antibodies+and+prognostic+predictors+of+HIV+infection.">Evidence for a correlation between antibody-dependent cellular cytotoxicity-mediating anti-HIV-1 antibodies and prognostic predictors of HIV infection.</a> J. Clin. Immunol. 21, 227-233 (2001).</li><li>Hashimoto, G., Wright, P. F., Karzon, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibody-dependent+cell-mediated+cytotoxicity+against+influenza+virus-infected+cells.">Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity against influenza virus-infected cells.</a> J. Infect Dis. 148, 785-794 (1983).</li><li>Anthony, R. M., Nimmerjahn, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Th	.">Th	.</a> Curr. Opin. Organ Transplant. , (2010).</li><li>Takai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fc+receptors+and+their+role+in+immune+regulation+and+autoimmunity.">Fc receptors and their role in immune regulation and autoimmunity.</a> J. Clin. Immunol. 25, 1-18 (2005).</li><li>Jefferis, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibody+therapeutics:+isotype+and+glycoform+selection.">Antibody therapeutics: isotype and glycoform selection.</a> Expert. Opin. Biol. Ther. 7, 1401-1413 (2007).</li><li>Halstead, S. B., O'Rourke, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+viruses+and+mononuclear+phagocytes.+I.+Infection+enhancement+by+non-neutralizing+antibody.">Dengue viruses and mononuclear phagocytes. I. Infection enhancement by non-neutralizing antibody.</a> J. Exp. Med. 146, 201-217 (1977).</li><li>Subramaniam, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+absence+of+serum+IgM+enhances+the+susceptibility+of+mice+to+pulmonary+challenge+with+Cryptococcus+neoformans.">The absence of serum IgM enhances the susceptibility of mice to pulmonary challenge with Cryptococcus neoformans.</a> J. Immunol. 184, 5755-5767 (2010).</li><li>Ackerman, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+robust,+high-throughput+assay+to+determine+the+phagocytic+activity+of+clinical+antibody+samples.">A robust, high-throughput assay to determine the phagocytic activity of clinical antibody samples.</a> J. Immunol. Methods. 366, 8-19 (2011).</li><li>Tsuchiya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+characterization+of+a+human+acute+monocytic+leukemia+cell+line+(THP-1.">Establishment and characterization of a human acute monocytic leukemia cell line (THP-1.</a> Int. J. Cancer. 26, 171-176 (1980).</li><li>Ward, E. S., Ghetie, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effector+functions+of+immunoglobulins:+implications+for+therapy.">The effector functions of immunoglobulins: implications for therapy.</a> Ther. Immunol. 2, 77-94 (1995).</li><li>Winiarska, M., Glodkowska-Mrowka, E., Bil, J., Golab, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+the+antitumor+effects+of+anti-CD20+antibodies.">Molecular mechanisms of the antitumor effects of anti-CD20 antibodies.</a> Front. Biosci. 16, 277-306 (2011).</li><li>Takai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fc+receptors:+their+diverse+functions+in+immunity+and+immune+disorders.">Fc receptors: their diverse functions in immunity and immune disorders.</a> Springer Semin. Immunopathol. 28, 303-304 (2006).</li><li>Yamaguchi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycoform-dependent+conformational+alteration+of+the+Fc+region+of+human+immunoglobulin+G1+as+revealed+by+NMR+spectroscopy.">Glycoform-dependent conformational alteration of the Fc region of human immunoglobulin G1 as revealed by NMR spectroscopy.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1760, 693-700 (2006).</li><li>Anthony, R. M., Ravetch, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+role+for+the+IgG+Fc+glycan:+the+anti-inflammatory+activity+of+sialylated+IgG.">A novel role for the IgG Fc glycan: the anti-inflammatory activity of sialylated IgG.</a> Fcs. J. Clin. Immunol. 30, S9-S14 (2010).</li><li>Nimmerjahn, F., Anthony, R. M., Ravetch, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Agalactosylated+IgG+antibodies+depend+on+cellular+Fc+receptors+for+in+vivo+activity.">Agalactosylated IgG antibodies depend on cellular Fc receptors for in vivo activity.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 104, 8433-8437 (2007).</li><li>Marchette, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+immune+status+on+dengue+2+virus+replication+in+cultured+leukocytes+from+infants+and+children.">Effect of immune status on dengue 2 virus replication in cultured leukocytes from infants and children.</a> Infect. Immun. 24, 47-50 (1979).</li><li>Fust, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutralizing+and+enhancing+antibodies+measured+in+complement-restored+serum+samples+from+HIV-1-infected+individuals+correlate+with+immunosuppression+and+disease.">Neutralizing and enhancing antibodies measured in complement-restored serum samples from HIV-1-infected individuals correlate with immunosuppression and disease.</a> AIDS. 8, 603-609 (1994).</li></ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

Assay המתואר כאן מאפשר תפוקה גבוהה ניתוח של הפעילות phagocytic של דגימות נוגדנים קליני על ידי ניצול קו תא monocytic מנוצל זמן ללמוד תהליכים phagocytic 10 ועל סמך הצלחת לזרום אוטומטית cytometry. Assay זה יתרון על פני אחרים ביכולתה בדיוק לאפיין אנטיגן ספציפי לערמונית תת נוגדנים, מה שמאפשר לא רק למחקר הבדלים phagocytosis מונע על ידי נוגדנים ספציפיים למחלה של נושאים שונים, אלא גם מחקר ספציפיות אנטיגן מרובים בתוך אותו נושא. בגלל גיוס נוגדן של תאים מפעיל מולדת, כולל מונוציטים ותאים אחרים מציגים אנטיגן חזק משפיע על התוצאה 11-13 מחלה, והוא משתנה בהתאם לגיאומטריה נוגדן ביולוגי, תת IgG ו glycosylation ב Asparagine297 של תחום Fc 14-16, שיטה זו מספקת עבור הערכה של מנגנון נוגדן קריטי פעולה. יתר על כן, בגלל נוגדנים Mediphagocytosis ated מנוצלת על ידי פתוגנים מסוימים במהלך זיהום 7,17,18, assay זה טומן בחובו הבטחה בהערכת תהליך של שיפור נוגדנים תלויי, מדגיש את האופי הכפול של phagocytosis כמו מגן בפוטנציה, כמו גם פוטנציאל מזיק פעילות הנוגדנים. Assay המתואר יכול להיות מנוצל כדי לנתח נוגדנים דגימות קליניות של אוכלוסיות חולים, אלא גם של vaccinees, וניתן להתאים לנצל בסרום ולא מטוהרים IgG. בנוסף, הפרשת ציטוקינים בתגובה phagocytosis ניתן לנתח מן supernatant התרבות, את ההשפעה של FCR מסוים ניתן לקבוע באמצעות FCR-חסימת נוגדנים, מה שמאפשר לא רק הבדלי העוצמה phagocytic שייקבע, אך הזרם איתות אירועים, עם תובנה לתוך מנגנון, ועשויים לסייע לפתור ולשפר הבנה של מנגנון זה החיסונית.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> EZ-Link Sulfo Micro-NHS-LC-Biotinylation Kit </td><td> Thermo Scientfic </td><td> 21935 </td><td></td></tr><tr><td> Amicon Ultra-15 יחידת מסנן צנטריפוגלי עם קרום Ultracel 50 </td><td> Millipore </td><td> UFC905024 </td><td> גודל יחידת סינון עשויים להשתנות בהתאם לגודל אנטיגן </td></tr><tr><td> FluoSpheres NeutrAvidin שכותרתו microspheres, 1.0 מיקרומטר, צהוב, ירוק ניאון (505/515) </td><td> Invitrogen </td><td> F-8776 </td><td> היצרנים לייצר את המוצר הזה, בצבעים שונים </td></tr><tr><td> מלון ג&#39;ל IgG טיהור Kit </td><td> Thermo </td><td> 45212 </td><td> יש להקפיד לבדוק את טוהר דגימות Ab על ידי SDS-page. </td></tr></tbody></table>

determining the phagocytic activity of clinical antibody samples

נוגדן מונחה phagocytosis מושרה באמצעות מעורבות של רצפטורים Fc על phagocytes מקצועי, יכולים לתרום גם אישור כמו גם הפתולוגיה של המחלה. בעוד את המאפיינים של תחומים משתנה של נוגדנים כבר מזמן נחשב קריטי בתפקוד vivo, את היכולת של הנוגדנים לגייס תאים חיסוניים מולדים דרך תחומים Fc שלהם הפך יותר ויותר מוערך כגורם מרכזי יעילותם, הן ההגדרה של רקומביננטי נוגדנים חד שבטיים לטיפול, כמו גם במהלך זיהום טבעי או חיסון 1-3. חשוב לציין, למרות המינוח שלה מושלם מתמיד, את תחום הנוגדנים Fc אין פונקציה קבועה, והיא מווסתת במידה רבה על ידי תת IgG (IgG1-4) ו glycosylation ב Asparagine 297 4-6. לכן, שיטה זו ללמוד ההבדלים תפקודית של אנטיגן ספציפי הנוגדנים בדגימות קליניות יאפשר המתאם של הסיר phagocyticential של נוגדנים הרגישות המדינה, מחלת דלקת, התקדמות, או התוצאה הקלינית. יתר על כן, פונקציה זו מפעיל חשוב במיוחד לאור היכולת מתועד של נוגדנים כדי לשפר את זיהום על ידי מתן גישה פתוגנים לתאי המארח דרך phagocytosis קולטן מונחה Fc 7. בנוסף, יש כמה עדויות לכך ספיגת phagocytic של קומפלקסים החיסונית יכול להשפיע על הקיטוב Th1/Th2 של התגובה החיסונית 8. כאן, אנו מתארים assay נועד לזהות הבדלים phagocytosis-נוגדן המושרה, אשר עלולה להיגרם על ידי תת IgG ההפרש, מבנה glycan ב Asn297, כמו גם את היכולת החיסונית ליצירת קומפלקסים של אנטיגן ספציפי לערמונית נוגדנים באופן תפוקה גבוהה . לשם כך, חרוזים פלורסנט 1 מיקרומטר הם מצופים אנטיגן, אז מודגרות עם דגימות נוגדנים קליני, שהניבו פלורסנט אנטיגן ספציפי לערמונית מתחמי החיסונית. אלה antibody-opsonized חרוזים מודגרת אז עם קו התא monocytic להביע FcγRs מרובות, כולל הן מעכבות והפעלה. התפוקה Assay יכול לכלול פעילות phagocytic, הפרשת ציטוקינים, ודפוסי השימוש FcγRs, ו נקבעים באופן אחיד, מה שהופך את מערכת שימושי מאוד עבור ניתוח ההבדלים בתפקוד נוגדנים תלויי זה מפעיל זיהום והן החיסון בתיווך הגנה 9.

Watch this Scientific Journal Video about Determining the Phagocytic Activity of Clinical Antibody Samples at JoVE.com

Determining the Phagocytic Activity of Clinical Antibody Samples

אנו מציגים assay תפוקה גבוהה תזרים cytometric כדי לקבוע את פעילות phagocytic של אנטיגן ספציפי של נוגדנים דגימות קליניות, ניצול פלורסנט אנטיגן מצופים חרוזים קו תא monocytic לבטא קולטנים מרובים Fc-מתן השימוש הקולטן קביעות פעילות phagocytic בבית סטנדרטי אופנה לשחזור עבור כל אנטיגן של עניין.

קביעת פעילות Phagocytic דוגמאות של נוגדן קלינית

Antibody-driven phagocytosis is induced via the engagement of Fc receptors on professional phagocytes, and can contribute to both clearance as well as ...

determining-the-phagocytic-activity-of-clinical-antibody-samples

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

23.3K Views.  Ragon Institute of MGH, MIT, and Harvard. אנו מציגים assay תפוקה גבוהה תזרים cytometric כדי לקבוע את פעילות phagocytic של אנטיגן ספציפי של נוגדנים דגימות קליניות, ניצול פלורסנט אנטיגן מצופים חרוזים קו תא monocytic לבטא קולטנים מרובים Fc-מתן השימוש הקולטן קביעות פעילות phagocytic בבית סטנדרטי אופנה לשחזור עבור כל אנטיגן של ענ...

Video: Determining the Phagocytic Activity of Clinical Antibody Samples

Determining the Reactivity and Titre of Serum using a Haemagglutination Assay

Haemagglutination is a specific form of agglutination and is used when antibodies bind to red blood cells, which act as a particulate antigen. Red blood cells are particularly useful targets as they are readily available and agglutination is observable using the naked eye. This technique is commonly used to determine the titre of an antibody (Ab), for blood grouping and viral quantification. In this video, the steps involved in preparing and performing a haemagglutination assay is demonstrated using antibodies specific to blood group A-antigens added to red blood cells (Revercells). The antiserum is serially diluted in a 96 well U-bottom microtitre tray, to which is added a suspension of Revercells. The samples are mixed and then incubated at 37&deg;C for 60 minutes. After this time, the samples can then be easily scored for  ve, +ve and intermediate (-/+) haemagglutination reactions. This approach allows for the reactivity and titre of a serum sample to be assessed using a rapid and simple technique. The video will cover the theory behind the assay, how the results are read and interpreted, how the titre is determined, how the assay can be modified and any issues associated with the use of this technique.

Haemagglutination is a form of agglutination where antibodies bind to red blood cells. Red blood cells are both readily available and the results are readily observable using the naked eye. This video demonstrates the steps involved in a haemagglutination assay, interpreting the results and determining the titre.

קביעת ריאקטיביות Titre של סרום באמצעות Assay Haemagglutination

Haemagglutination is a specific form of agglutination and is used when antibodies bind to red blood cells, which act as a particulate antigen. Red blood ...

Using a Pan-Viral Microarray Assay (Virochip) to Screen Clinical Samples for Viral Pathogens

The diagnosis of viral causes of many infectious diseases is difficult due to the inherent sequence diversity of viruses as well as the ongoing emergence of novel viral pathogens, such as SARS coronavirus and 2009 pandemic H1N1 influenza virus, that are not detectable by traditional methods. To address these challenges, we have previously developed and validated a pan-viral microarray platform called the Virochip with the capacity to detect all known viruses as well as novel variants on the basis of conserved sequence homology1. Using the Virochip, we have identified the full spectrum of viruses associated with respiratory infections, including cases of unexplained critical illness in hospitalized patients, with a sensitivity equivalent to or superior to conventional clinical testing2-5. The Virochip has also been used to identify novel viruses, including the SARS coronavirus6,7, a novel rhinovirus clade5, XMRV (a retrovirus linked to prostate cancer)8, avian bornavirus (the cause of a wasting disease in parrots)9, and a novel cardiovirus in children with respiratory and diarrheal illness10. The current version of the Virochip has been ported to an Agilent microarray platform and consists of ~36,000 probes derived from over ~1,500 viruses in GenBank as of December of 2009. Here we demonstrate the steps involved in processing a Virochip assay from start to finish (~24 hour turnaround time), including sample nucleic acid extraction, PCR amplification using random primers, fluorescent dye incorporation, and microarray hybridization, scanning, and analysis.

Using a Pan-Viral Microarray Assay Virochip to Screen Clinical Samples for Viral Pathogens

The Virochip is a pan-viral microarray designed to simultaneously detect all known viruses as well as novel viruses on the basis of conserved sequence homology. Here we demonstrate how to run a Virochip assay to analyze clinical samples for the presence of both known and unknown viruses.

באמצעות assay הפאן ויראלי microarray (Virochip) אל מסך דוגמאות קליניות עבור פתוגנים ויראליים

The diagnosis of viral causes of many infectious diseases is difficult due to the inherent sequence diversity of viruses as well as the ongoing emergence ...

Multiplex Detection of Bacteria in Complex Clinical and Environmental Samples using Oligonucleotide-coupled Fluorescent Microspheres

Bacterial vaginosis (BV) is a recurring polymicrobial syndrome that is characterized by a change in the "normal" microbiota from Lactobacillus-dominated to a microbiota dominated by a number of bacterial species, including Gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae, and others1-3. This condition is associated with a range of negative health outcomes, including HIV acquisition4, and it can be difficult to manage clinically5. Furthermore, diagnosis of BV has relied on the use of Gram stains of vaginal swab smears that are scored on various numerical criteria6,7. While this diagnostic is simple, inexpensive, and well suited to resource-limited settings, it can suffer from problems related to subjective interpretations and it does not give a detailed profile of the composition of the vaginal microbiota8. Recent deep sequencing efforts have revealed a rich, diverse vaginal microbiota with clear differences between samples taken from individuals that are diagnosed with BV compared to those individuals that are considered normal9,10, which has resulted in the identification of a number of potential targets for molecular diagnosis of BV11,12. These studies have provided a wealth of useful information, but deep sequencing is not yet practical as a diagnostic method in a clinical setting. We have recently described a method for rapidly profiling the vaginal microbiota in a multiplex format using oligonucleotide-coupled fluorescent beads with detection on a Luminex platform13. This method, like current Gram stain-based methods, is rapid and simple but adds the additional advantage of exploiting molecular knowledge arising from sequencing studies in probe design. This method therefore provides a way to profile the major microorganisms that are present in a vaginal swab that can be used to diagnose BV with high specificity and sensitivity compared to Gram stain while providing additional information on species presence and abundance in a semi-quantitative and rapid manner. This multiplex method is expandable well beyond the range of current quantitative PCR assays for particular organisms, which is currently limited to 5 or 6 different assays in a single sample14. Importantly, the method is not limited to the detection of bacteria in vaginal swabs and can be easily adapted to rapidly profile nearly any microbial community of interest. For example, we have recently begun to apply this methodology to the development of diagnostic tools for use in wastewater treatment plants.

We describe a multiplex method for the detection of microorganisms within a sample using oligonucleotide-coupled fluorescent beads. Amplicon from all organisms within a sample is hybridized to a panel of probe-coupled beads. A Luminex or Bio-Plex instrument is used to query each bead for bead type and hybridization signal.

Multiplex זיהוי של חיידקים דוגמאות מורכבות קלינית הסביבה באמצעות oligonucleotide מצמידים פלורסנט microspheres

Bacterial vaginosis (BV) is a recurring polymicrobial syndrome that is characterized by a change in the "normal" microbiota from Lactobacillus-dominated ...

Determining Optimal Cytotoxic Activity of Human Her2neu Specific CD8 T cells by Comparing the Cr51 Release Assay to the xCELLigence System

Cytotoxic CD8 T cells constitute a subgroup of T cells that are capable of inducing the death of infected or malignant host cells1. These cells express a specialized receptor, called the T cell receptor (TCR), which can recognize a specific antigenic peptide bound to HLA class I molecules2. Engagement of infected cells or tumor cells through their HLA class I molecule results in production of lytic molecules such as granzymes and perforin resulting in target cell death. While it is useful to determine frequencies of antigen-specific CD8 T cells using assays such as the ELIspot or flow cytometry, it is also helpful to ascertain the strength of CD8 T cell responses using cytotoxicity assays3. The most recognizable assay for assessing cytotoxic function is the Chromium Release Assay (CRA), which is considered a standard assay 4. The CRA has several limitations, including exposure of cells to gamma radiation, lack of reproducibility, and a requirement for large numbers of cells. Over the past decade, there has been interest in adopting new strategies to overcome these limitations. Newer approaches include those that measure caspase 
release 4, BLT esterase activity 5 and surface expression of CD107 6. The impedance-based assay, using the Roche xCelligence system, was examined in the present paper for its potential as an alternative to the CRA. Impedance or opposition to an electric current occurs when adherent tumor cells bind to electrode plates. Tumor cells detach following killing and electrical impedance is reduced which can be measured by the xCelligence system. The ability to adapt the impedance-based approach to assess cell-mediated killing rests on the observation that T cells do not adhere tightly to most surfaces and do not appear to have much impact on impedance thus diminishing any concern of direct interference of the T cells with the measurement. Results show that the impedance-based assay can detect changes in the levels of antigen-specific cytotoxic CD8 T cells with increased sensitivity relative to the standard CRA. Based on these results, impedance-based approaches may be good alternatives to CRAs or other approaches that aim to measure cytotoxic CD8 T cell functionality.

The chromium release assay, a common assay for detecting cytotoxic T cell activity, has several limitations. Using antigen-specific CD8 T cells and the human breast cancer tumor line, SKBR3, in the present article, an impedance-based approach was examined for the capability of detecting cell killing.

קביעת פעילות ציטוטוקסית אופטימלית של CD8 תאי T ספציפי אדם Her2neu על ידי השוואת Assay שחרור Cr51 למערכת xCELLigence

Cytotoxic CD8 T cells constitute a subgroup of T  cells that are capable of inducing the death of infected or malignant host  cells1. These cells express ...

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne relapsing fever (Borrelia spp.), Rocky Mountain Spotted fever (Rickettsia rickettsii), ehrlichiosis (Ehrlichia chaffeensis and E. equi), anaplasmosis (Anaplasma phagocytophilum), encephalitis (tick-borne encephalitis virus), babesiosis (Babesia spp.), Colorado tick fever (Coltivirus), and tularemia (Francisella tularensis) 1-8. To be properly transmitted into the host these infectious agents differentially regulate gene expression, interact with tick proteins, and migrate through the tick 3,9-13. For example, the Lyme disease agent, Borrelia burgdorferi, adapts through differential gene expression to the feast and famine stages of the tick's enzootic cycle 14,15. Furthermore, as an Ixodes tick consumes a bloodmeal Borrelia replicate and migrate from the midgut into the hemocoel, where they travel to the salivary glands and are transmitted into the host with the expelled saliva 9,16-19.
As a tick feeds the host typically responds with a strong hemostatic and innate immune response 11,13,20-22. Despite these host responses, I. scapularis can feed for several days because tick saliva contains proteins that are immunomodulatory, lytic agents, anticoagulants, and fibrinolysins to aid the tick feeding 3,11,20,21,23. The immunomodulatory activities possessed by tick saliva or salivary gland extract (SGE) facilitate transmission, proliferation, and dissemination of numerous tick-borne pathogens 3,20,24-27. To further understand how tick-borne infectious agents cause disease it is essential to dissect actively feeding ticks and collect tick saliva. This video protocol demonstrates dissection techniques for the collection of hemolymph and the removal of salivary glands from actively feeding I. scapularis nymphs after 48 and 72 hours post mouse placement. We also demonstrate saliva collection from an adult female I. scapularis tick.

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

The collection of infected tick hemolymph, salivary glands, and saliva is important to study how tick-borne pathogens cause disease. In this protocol we demonstrate how to collect hemolymph and salivary glands from feeding Ixodes scapularis nymphs. We also demonstrate saliva collection from female I. scapularis adults.

רוק, בלוטות הרוק, וכן אוסף Hemolymph מ קרציות קרצית Scapularis

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne ...

Fluorescence Microscopy Methods for Determining the Viability of Bacteria in Association with Mammalian Cells

Central to the field of bacterial pathogenesis is the ability to define if and how microbes survive after exposure to eukaryotic cells. Current protocols to address these questions include colony count assays, gentamicin protection assays, and electron microscopy. Colony count and gentamicin protection assays only assess the viability of the entire bacterial population and are unable to determine individual bacterial viability. Electron microscopy can be used to determine the viability of individual bacteria and provide information regarding their localization in host cells. However, bacteria often display a range of electron densities, making assessment of viability difficult. This article outlines protocols for the use of fluorescent dyes that reveal the viability of individual bacteria inside and associated with host cells. These assays were developed originally to assess survival of Neisseria gonorrhoeae in primary human neutrophils, but should be applicable to any bacterium-host cell interaction. These protocols combine membrane-permeable fluorescent dyes (SYTO9 and 4&#39;,6-diamidino-2-phenylindole [DAPI]), which stain all bacteria, with membrane-impermeable fluorescent dyes (propidium iodide and SYTOX Green), which are only accessible to nonviable bacteria. Prior to eukaryotic cell permeabilization, an antibody or fluorescent reagent is added to identify extracellular bacteria. Thus these assays discriminate the viability of bacteria adherent to and inside eukaryotic cells. A protocol is also provided for using the viability dyes in combination with fluorescent antibodies to eukaryotic cell markers, in order to determine the subcellular localization of individual bacteria. The bacterial viability dyes discussed in this article are a sensitive complement and/or alternative to traditional microbiology techniques to evaluate the viability of individual bacteria and provide information regarding where bacteria survive in host cells.

Central to the field of bacterial pathogenesis is the ability to define if and how microbes survive after exposure to eukaryotic cells. This article outlines protocols for the use of fluorescent dyes that reveal the viability of individual bacteria inside and associated with host cells.

שיטות מיקרוסקופית הקרינה לקביעת הכדאיות של חיידקים באיגוד עם תאי יונקים

Central to the field of bacterial pathogenesis is the ability to define if and how microbes survive after exposure to eukaryotic cells. Current protocols ...

Scalable High Throughput Selection From  Phage-displayed Synthetic Antibody Libraries

The demand for antibodies that fulfill the needs of both basic and clinical research applications is high and will dramatically increase in the future. However, it is apparent that traditional monoclonal technologies are not alone up to this task. This has led to the development of alternate methods to satisfy the demand for high quality and renewable affinity reagents to all accessible elements of the proteome. Toward this end, high throughput methods for conducting selections from phage-displayed synthetic antibody libraries have been devised for applications involving diverse antigens and optimized for rapid throughput and success. Herein, a protocol is described in detail that illustrates with video demonstration the parallel selection of Fab-phage clones from high diversity libraries against hundreds of targets using either a manual 96 channel liquid handler or automated robotics system. Using this protocol, a single user can generate hundreds of antigens, select antibodies to them in parallel and validate antibody binding within 6-8 weeks. Highlighted are: i) a viable antigen format, ii) pre-selection antigen characterization, iii) critical steps that influence the selection of specific and high affinity clones, and iv) ways of monitoring selection effectiveness and early stage antibody clone characterization. With this approach, we have obtained synthetic antibody fragments (Fabs) to many target classes including single-pass membrane receptors, secreted protein hormones, and multi-domain intracellular proteins. These fragments are readily converted to full-length antibodies and have been validated to exhibit high affinity and specificity. Further, they have been demonstrated to be functional in a variety of standard immunoassays including Western blotting, ELISA, cellular immunofluorescence, immunoprecipitation and related assays. This methodology will accelerate antibody discovery and ultimately bring us closer to realizing the goal of generating renewable, high quality antibodies to the proteome.

A method is described with visual accompaniment for conducting scalable, high throughput selections from phage-displayed combinatorial synthetic antibody libraries against hundreds of antigens simultaneously. Using this parallel approach, we have isolated antibody fragments that exhibit high affinity and specificity for diverse antigens that are functional in standard immunoassays.

גבוהה Scalable תפוקה בחירה מספריות נוגדן סינטטיים-מוצג הפאג

The demand for antibodies that fulfill the needs of both basic and clinical research applications is high and will dramatically increase in the future. ...

A Rapid Strategy for the Isolation of New Faustoviruses from Environmental Samples Using Vermamoeba vermiformis

The isolation of giant viruses is of great interest in this new era of virology, especially since these giant viruses are related to protists. Giant viruses may be potentially pathogenic for many species of protists. They belong to the recently described order of Megavirales. The new lineage Faustovirus that has been isolated from sewage samples is distantly related to the mammalian pathogen African swine fever virus. This virus is also specific to its amoebal host, Vermamoeba vermiformis, a protist common in health care water systems. It is crucial to continue isolating new Faustovirus genotypes in order to enlarge its genotype collection and study its pan-genome. We developed new strategies for the isolation of additional strains by improving the use of antibiotic and antifungal combinations in order to avoid bacterial and fungal contaminations of the amoeba co-culture and favoring the virus multiplication. We also implemented a new starvation medium to maintain V. vermiformis in optimal conditions for viruses co-culture. Finally, we used flow cytometry rather than microscopic observation, which is time-consuming, to detect the cytopathogenic effect. We obtained two isolates from sewage samples, proving the efficiency of this method and thus widening the collection of Faustoviruses, to better understand their environment, host specificity and genetic content.

A Rapid Strategy for the Isolation of New Faustoviruses from Environmental Samples Using Vermamoeba vermiformis

We describe here the latest advances in viral isolation for the characterization of new genotypes of Faustovirus, a new asfarvirus-related lineage of giant viruses. This protocol can be applied to the high throughput isolation of viruses, especially giant viruses infecting amoeba.

אסטרטגית ראפיד עבור הבידוד של ניו Faustoviruses ממדגמים סביבת שימוש<em&gt; Vermiformis Vermamoeba</em

The isolation of giant viruses is of great interest in this new era of virology, especially since these giant viruses are related to protists. Giant ...

Fast and Specific Assessment of the Halogenating Peroxidase Activity in Leukocyte-enriched Blood Samples

In this paper a protocol for the quick and standardized enrichment of leukocytes from small whole blood samples is described. This procedure is based on the hypotonic lysis of erythrocytes and can be applied to human samples as well as to blood of non-human origin. The small initial sample volume of about 50 to 100 &#181;l makes this method applicable to recurrent blood sampling from small laboratory animals. Moreover, leukocyte enrichment is achieved within minutes and with low material efforts regarding chemicals and instrumentation, making this method applicable in multiple laboratory environments.
Standardized purification of leukocytes is combined with a highly selective staining method to evaluate halogenating peroxidase activity of the heme peroxidases, myeloperoxidase (MPO) and eosinophil peroxidase (EPO), i.e., the formation of hypochlorous and hypobromous acid (HOCl and HOBr). While MPO is strongly expressed in neutrophils, the most abundant immune cell type in human blood as well as in monocytes, the related enzyme EPO is exclusively expressed in eosinophils. The halogenating activity of these enzymes is addressed by using the almost HOCl- and HOBr-specific dye aminophenyl fluorescein (APF) and the primary peroxidase substrate hydrogen peroxide. Upon subsequent flow cytometry analysis all peroxidase-positive cells (neutrophils, monocytes, eosinophils) are distinguishable and their halogenating peroxidase activity can be quantified. Since APF staining may be combined with the application of cell surface markers, this protocol can be extended to specifically address leukocyte sub-fractions. The method is applicable to detect HOCl and HOBr production both in human and in rodent leukocytes.
Given the widely and diversely discussed immunological role of these enzymatic products in chronic inflammatory diseases, this protocol may contribute to a better understanding of the immunological relevance of leukocyte-derived heme peroxidases.

This protocol describes the quick enrichment of leukocytes from small blood samples for a subsequent specific determination of the halogenating peroxidase activity within the cells. The method can be applied to human and non-human material and may contribute to the evaluation of new inflammatory markers.

הערכה מהירה וספציפית של פעילות Halogenating Peroxidase בדגימות דם ליקוציט מועשר

In this paper a protocol for the quick and standardized enrichment of leukocytes from small whole blood samples is described. This procedure is based on ...

Assessing Retinal Microglial Phagocytic Function In Vivo Using a Flow Cytometry-based Assay

Microglia are the tissue resident macrophages of the central nervous system (CNS) and they perform a variety of functions that support CNS homeostasis, including phagocytosis of damaged synapses or cells, debris, and/or invading pathogens. Impaired phagocytic function has been implicated in the pathogenesis of diseases such as Alzheimer's and age-related macular degeneration, where amyloid-&#946; plaque and drusen accumulate, respectively. Despite its importance, microglial phagocytosis has been challenging to assess in vivo. Here, we describe a simple, yet robust, technique for precisely monitoring and quantifying the in vivo phagocytic potential of retinal microglia. Previous methods have relied on immunohistochemical staining and imaging techniques. Our method uses flow cytometry to measure microglial uptake of fluorescently labeled particles after intravitreal delivery to the eye in live rodents. This method replaces conventional practices that involve laborious tissue sectioning, immunostaining, and imaging, allowing for more precise quantification of microglia phagocytic function in just under six hours. This procedure can also be adapted to test how various compounds alter microglial phagocytosis in physiological settings. While this technique was developed in the eye, its use is not limited to vision research.

Assessing Retinal Microglial Phagocytic Function In Vivo Using a Flow Cytometry-based Assay

Microglial phagocytosis is critical for the maintenance of tissue homeostasis and inadequate phagocytic function has been implicated in pathology. However, assessing microglia function in vivo is technically challenging. We have developed a simple but robust technique for precisely monitoring and quantifying the phagocytic potential of microglia in a physiological setting.

להערכת תפקוד רשתית microglial Phagocytic<em&gt; In vivo</em&gt; שימוש cytometry זרימה מבוסס Assay

Microglia are the tissue resident macrophages of the central nervous system (CNS) and they perform a variety of functions that support CNS homeostasis, ...