وأيد هذا العمل من قبل الكتلة، DFG التميز &quot;التهاب في واجهات&quot; (RA-إذا، RA-D). ونحن ممتنون للمساعدة فنية ممتازة من Wischnat كريستين.

1. إعداد ألبوم المتدثرة الحثرية D ضرب مصلي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> متموجة تصيب 175 زراعة الخلايا التي تحتوي على 2 قارورة هيلا-229 الخلايا مع جيم مل 4 D الحثرية في الإشتراكي العازلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان لمدة ساعة عند 37 درجة مئوية خلال الهز المستمر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 20 مل DMEM مع FCS 10٪ و 240 سيكلوهيكسيميد ميكرولتر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان في حاضنة مرطب لمدة 48 ساعة عند 37 درجة مئوية و 5٪ CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 5 حبات مل زجاجية معقمة، هزة قوية لفصل وتدمير C. الحثرية ايواء هيلا-229 الخلايا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> طاف جمع وإضافة آخر 5 مل من الخرز الزجاجي ومعقمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صخرة ثلاث مرات لمدة 1 دقيقة لتدمير كل-229 هيلا الخلايا وجيم الافراج الحثرية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الطرد المركزي لمدة 5 دقائق في rpmi 1000 و 4 درجات مئوية للتخلص من الحطام الخلوي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع طاف للعدوى من 8 إلى 10 175 سم ثقافة الخلية 2 قوارير ز متكدسةrown مع خلايا 229 هيلا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان كل قارورة مع عازلة مل 4 الإشتراكي و 4 طاف مل من الإصابة السابقة لمدة ساعة عند 37 درجة مئوية مع الهز المستمر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد ساعة واحدة إضافة 15 مل DMEM مع FCS 10٪ و 230 سيكلوهيكسيميد ميكرولتر تليها حضانة ح 48 إلى 37 درجة مئوية و 5٪ CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 5 مل الخرز الزجاجي عقيم، هز لفصل وتدمير C. الحثرية ايواء هيلا-229 الخلايا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع وطاف وإضافة آخر 5 مل من الخرز الزجاجي ومعقمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صخرة ثلاث مرات لمدة 1 دقيقة لتدمير كل-229 هيلا الخلايا وجيم الافراج الحثرية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الطرد المركزي لمدة 5 دقائق في rpmi 1000 في 4 درجات مئوية للتخلص من الحطام الخلوي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع وطاف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملء 40 مل من طاف في 50 مل من أنابيب الصقر، الطرد المركزي لمدة 99 دقيقة مع 11000 rpmi. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الطرد المركزي تجاهل طاف ويغسل بيليه مع 1 مل الإشتراكي العازلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجانسبيليه في SPG 1 مل وقسامة ميكرولتر 20 في 1 و 5 مخزن إيبندورف مل، أنبوب في -70 درجة مئوية حتى استخدامها. وقد أكد النشاط البيولوجي للسهم المعدة في تأسيس هيلا-229 خلية نموذج عدوى. </li></ol> 2. إعداد قناة فالوب الإنسان <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> متجر الإنسان قناة فالوب (HFT) من النساء اللواتي خضعن لاستئصال الرحم مباشرة بعد عملية جراحية في RPMI تحتوي على السفح 5٪ بدون المضادات الحيوية في 4 درجات مئوية حتى إعداد. وتمت الموافقة على البروتوكول من قبل لجنة أخلاقية من جامعة لوبيك (09-153). ويتعين على المرأة التي شملتها الدراسة (سن 34 حتى 53) لا يوجد تاريخ من قبل C. الحثرية عدوى. وقد تم جمع الأنسجة من قناتي فالوب في تعقيم الفترة المحيطة بالولادة بناء على طلب الأمهات خلال عمليات الولادة القيصرية أو أثناء استئصال الرحم بسبب الأورام الليفية الرحمية أعراض في مرحلة الجسم الأصفر. وقد تم اختبار جميع HFT سلبية على C. الحثرية بواسطة PCR. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح HFT في طبق بتري تحتوي على RPMI مع5 FCS٪ بدون مضادات حيوية. وينبغي أثناء معالجة كله أن يغطس في الأنسجة في وسائل الاعلام لمنع جفاف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطعت وتجاهل النسيج الضام والأنسجة التي دمرت خلال عملية جراحية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد تشريح فتح HFT بعناية مع مشرط صغير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لمزيد من التجارب تعد قطعة من النسيج في حجم 0،5 سم x 0.5 سم يصل إلى 1 سم × 1 سم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لمتجر عدوى عينة HFT في 1 مل RPMI تحتوي على السفح 5٪ بدون مضادات حيوية. أصيب العينات HFT مع 5.5x10 5 IFU (وحدات إدراج تشكيل) من جيم الحثرية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان HFT عينة في 37 درجة مئوية، وأول أكسيد الكربون بنسبة 5٪ 2 و٪ 21 O 2، وكذلك في 37 درجة مئوية، وأول أكسيد الكربون بنسبة 5٪ و 2٪ 2 O 2 لمدة 24 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد فترة حضانة جمع العينات وتخزينها في مونتي مثبت لثلاثة أيام على الأقل في 4 درجات مئوية حتى SEM / تيم إعداد. </li></ol> 3. إعداد نموذج لHFT TEM <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للتيم إزالة عينة من مثبت مونتي وقطع 2 × 2 مم إلى 4 قطع 5 × ملم. ويمكن استخدام النسيج المتبقي لوزارة شؤون المرأة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل القطع مع عازلة كاكوديلات الصوديوم، ودرجة الحموضة 7.35 لمدة 1 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان في 1٪ (W / V) رباعي أكسيد الأوزميوم في دست المائية. بين عشية وضحاها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الزائدة رباعي أكسيد الأوزميوم بواسطة غسل دقيقة 6x5 في عازلة كاكوديلات الصوديوم، ودرجة الحموضة 7.35. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة المياه عن طريق احتضان في زيادة تركيزات الايثانول في الماء (V / V) (30٪ لمدة 2 ساعة، و 40٪ لمدة 2 ساعة، 50٪ لمدة 2 ساعة، و 60٪ لمدة 2 ساعة، 70٪ بين ليلة، و 80٪ لمدة 2 ح، 90٪ لمدة 1 ساعة، 95٪ لمدة 1 ساعة، و 100٪ لمدة 1 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغسل الايثانول لمدة 2 دقيقة 15 × في أكسيد البروبيلين ونقل بعد ذلك إلى خليط من 50٪ (V / V) araldite الطازجة (بما فيها جميع المكونات) في البروبيلين واحتضان بين عشية وضحاها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل إلى araldite الطازجة (بما فيها جميع المكونات) ما لا يقل عن 1 س. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل إلى قوالب تضمين شقة وملء مع araldite. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح لتتصلب aralditeما لا يقل عن 48 ساعة على 60 درجة مئوية </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد التشذيب من عينة قطع جزءا لا يتجزأ من الشرائح الرقيقة نصف (700 نانومتر) على مشراح مستدق باستخدام السكاكين والزجاج أو سكين الماس histo وصمة عار وصمة عار مع ريتشاردسون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع رقيقة جدا أقسام (حوالي 70 مترا) باستخدام سكين الماس ونقلها لشبكات النحاس (على سبيل المثال شبكة مربع 150). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وصمة عار رقيقة جدا مع أقسام خلات اليورانيل 0.5٪ (W / V) في دست المائية. تليها 3٪ (W / V) سترات الرصاص في ماء مقطر. في الملطخ قسم تلقائي. بدلا من ذلك، يمكن ملطخة المقاطع يدويا من خلال ترك شبكات 15 دقيقة على حل طرده مركزيا المشبعة من خلات اليورانيل في دست المائية. تليها سترات الرصاص بنسبة 0.3٪ (W / V) في دست المائية. </li></ol> 4. إعداد عينة HFT لوزارة شؤون المرأة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لوزارة شؤون المرأة وإزالة عينة من مثبت مونتي، مع توجيه ظهارة متجهة لأعلى على 1.5 × 1 سم ورقة الفلين وتحديد موقف باستخدام الإبر الحشرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل العينة على الفلين إلى سلال معدنية مناسبة ويغسل لمدة 30 دقيقة في المخزن كاكوديلات الصوديوم، ودرجة الحموضة 7.35. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة المياه عن طريق احتضان عينة في زيادة تركيز الأسيتون / المياه مخاليط (V / V) 30٪ لمدة 6 ساعات، و 40٪ لمدة 6 ساعات، 60٪ لمدة 8 ساعات، 70٪ بين ليلة، و 80٪ لمدة 2 ساعة، و 90٪ لل 2 ساعة و 100٪ على مدى ليلة (لنكون حذرين للغاية للحفاظ على العينات المغمورة باستمرار). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل إلى الأسيتون الطازجة بنسبة 100٪ وعينة الجافة عن طريق التجفيف نقطة حرجة (درجة الحرارة 40 درجة مئوية، وضغط 80 بار). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الإبر، والفلين وعينة الغراء مع ظهارة متجهة لأعلى جبل في عينة ووزارة شؤون المرأة مجهزة التبويب الكربون باستخدام موصل موصل الاسمنت الكربون. استخدام الفضة موصل سائل لتعزيز الموصلية بين جبل والتبويب الكربون موصل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يعد طلاء من البلاتين، الذهب أو البلاديوم موصل للعينة باستخدام تفل المغطي. </li></ol> 5. تلطيخ من الشرائح الرقيقة نصف مع اللطخة ريتشاردسون <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اسمحوا المقاطع رقيقة شبه الجافة على الشريحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وصمة عار المقاطع مع تلطيخ حل في 60 درجة مئوية لمدة 1-2 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغسل في ماء مقطر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جفاف الفروع وساترة. </li></ol> 6. ممثل النتائج داخل الإنسان قناة فالوب نموذج عدوى كنا قادرين على تصور الفروق في التشكل الظهارية بين الضوابط غير المصابة (الشكل 1) وجيم لل الحثرية - أنابيب المصاب (الشكل 2) تحت حالة normoxic. ضمني الاختلافات الشكلية المميزة الممرض الناجم عن تورم وتحلل الخلايا الظهارية قناة فالوب التي لا يمكن الكشف عنها في غير المصابة الضوابط. باستخدام الشرائح الرقيقة شبه وانتقال المجهر الإلكتروني كنا قادرين على اثبات جيم بين الخلايا الحثرية تشكيل إدراجها في الجسم الحي السابقين إصابة النسيج البشري قناة فالوب (الشكل 3، 5) ولكن ليس في غير المصابة الضوابط (الشكل 4). كما تركيزات الأكسجينستعقد في المسالك التناسلية للإناث هي بالفعل منخفضة في ظل الظروف الفسيولوجية 11، ومزيد من الانخفاض خلال عملية التحقيق التهابات نحن أيضا لدينا نموذج في ظل ظروف نقص الأوكسجين. النتائج الأولية تشير إلى هذا النموذج هو مفيد لتحليل النمو الناجمة عن المتدثرة وآله تحت بدرجات تركيز الأوكسجين. الكلاميديا ​​الناجم عن تلف الخلايا الظهارية لابد من فصلها عن القطع الأثرية التي توسطت من خلال إعداد غافل والتعامل معها من قبل قناة فالوب عدوى (الشكل 6). <img src="/files/ftp_upload/4036/4036fig1.jpg" alt="الشكل 1" /> الشكل 1. مسح المجهر الإلكتروني (SEM) من فالوب غير المصابة الإنسان بعد يوم واحد في الحضانة وسط سيطرة (السهم الأخضر تظهر خلية مهدبة، السهم الأزرق تظهر غير مهدبة الخلية). <img src="/files/ftp_upload/4036/4036fig2.jpg" alt="الشكل 2" /> الشكل 2. مسح الإلكترون MICROS<html> نسخة (SEM) لالحثرية السابق جيم فيفو إصابة قناة فالوب الإنسان أحد إصابة آخر يوم (أبيض إدراج علامة السهم تمزق). <img src="/files/ftp_upload/4036/4036fig3.jpg" alt="الشكل (3)" /> الشكل 3. أقسام رقيقة نصف تظهر شوائب داخل الخلايا نموذجي (السهام البيضاء) 1D بعد العدوى من قناة فالوب الإنسان مع جيم الحثرية خارج الحي. <img src="/files/ftp_upload/4036/4036fig4.jpg" alt="الشكل 4" /> الشكل 4. نقل المجهر الإلكتروني (تيم) من أنبوب فالوب غير المصابة الإنسان بعد يوم واحد في الحضانة وسط سيطرة. <img src="/files/ftp_upload/4036/4036fig5.jpg" alt="الشكل 5" /> المجهر الإلكتروني الرقم 5. انتقال (تيم) لجيم المجراة سابقا الحثرية إصابة قناة فالوب الإنسان أحد إصابة آخر يوم (السهام البيضاء بمناسبة الادراج المتدثرة). ve_content &quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/4036/4036fig6.jpg" alt="الشكل (6)" /> الشكل 6. مسح المجهر الإلكتروني (SEM) من ظهارة قناة فالوب تضررت من خلال إعداد غافل والتعامل معها من عينة (أبيض السهام علامة دمر نسيج طلائي).

<ol>
	<li>Dean, D., Suchland, R. J., Stamm, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+long-term+cervical+persistence+of+Chlamydia+trachomatis+by+omp1+genotyping.">Evidence for long-term cervical persistence of Chlamydia trachomatis by omp1 genotyping.</a> J. Infect. Dis. 182, 909-916 (2000).</li><li>Campbell, L. A., Patton, D. L., Moore, D. E., Cappuccio, A. L., Mueller, B. A., Wang, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+Chlamydia+trachomatis+deoxyribonucleic+acid+in+women+with+tubal+infertility.">Detection of Chlamydia trachomatis deoxyribonucleic acid in women with tubal infertility.</a> Fertil. Steril. 59, 45-50 (1993).</li><li>Peipert, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+practice.+Genital+chlamydial+infections.">Clinical practice. Genital chlamydial infections.</a> N. Engl. J. Med. 349, 2424-2430 (2003).</li><li>Mardh, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tubal+factor+infertility,+with+special+regard+to+chlamydial+salpingitis.">Tubal factor infertility, with special regard to chlamydial salpingitis.</a> Curr. Opin. Infect. Dis. 17, 49-52 (2004).</li><li>Ertel, A., Verghese, A., Byers, S. W., Ochs, M., Tozeren, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathway-specific+differences+between+tumor+cell+lines+and+normal+and+tumor+tissue+cells.">Pathway-specific differences between tumor cell lines and normal and tumor tissue cells.</a> Mol. Cancer. 5, 55 (2006).</li><li>Roshick, C., Wood, H., Caldwell, H. D., McClarty, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+gamma+interferon-mediated+antichlamydial+defense+mechanisms+in+human+and+mouse+cells.">Comparison of gamma interferon-mediated antichlamydial defense mechanisms in human and mouse cells.</a> Infect. Immun. 74, 225-238 (2006).</li><li>Mestas, J., Hughes, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+not+men:+differences+between+mouse+and+human+immunology.">Of mice and not men: differences between mouse and human immunology.</a> J. Immunol. 172, 2731-2738 (2004).</li><li>Hvid, M., Baczynska, A., Deleuran, B., Fedder, J., Knudsen, H. J., Christiansen, G., Birkelund, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-1+is+the+initiator+of+Fallopian+tube+destruction+during+Chlamydia+trachomatis+infection.">Interleukin-1 is the initiator of Fallopian tube destruction during Chlamydia trachomatis infection.</a> Cell Microbiol. 9, 2795-2803 (2007).</li><li>Roth, A., Konig, P., van, Z. G., Klinger, M., Hellwig-Burgel, T., Daubener, W., Bohlmann, M. K., Rupp, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia+abrogates+antichlamydial+properties+of+IFN-gamma+in+human+fallopian+tube+cells+in+vitro+and+ex+vivo.">Hypoxia abrogates antichlamydial properties of IFN-gamma in human fallopian tube cells in vitro and ex vivo.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 19502-19507 (2010).</li><li>Wyrick, P. B., Knight, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-exposure+of+infected+human+endometrial+epithelial+cells+to+penicillin+in+vitro+renders+Chlamydia+trachomatis+refractory+to+azithromycin.">Pre-exposure of infected human endometrial epithelial cells to penicillin in vitro renders Chlamydia trachomatis refractory to azithromycin.</a> J. Antimicrob. Chemother. 54, 79-85 (2004).</li><li>Van Voorhis, W. C., Barrett, L. K., Sweeney, Y. T., Kuo, C. C., Patton, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repeated+Chlamydia+trachomatis+infection+of+Macaca+nemestrina+fallopian+tubes+produces+a+Th1-like+cytokine+response+associated+with+fibrosis+and+scarring.">Repeated Chlamydia trachomatis infection of Macaca nemestrina fallopian tubes produces a Th1-like cytokine response associated with fibrosis and scarring.</a> Infect. Immun. 65, 2175-2182 (1997).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

تصور من العوامل المسببة للأمراض التي يسببها ضرر للأنسجة المصابة هي شاقة ومحدود في كثير من الأحيان إلى الإجراءات التجريبية في الفئران. أنشأنا وجود عدوى فيفو السابقين نموذج في قناة فالوب الإنسان لتحليل C. التهابات في المسالك الحثرية العلوي الأعضاء التناسلية للإناث. من خلال استخدام هذا الأسلوب، كنا قادرين على تصور C. الحثرية - الأضرار التي يسببها الإنسان لظهارة قناة فالوب خلال يوم واحد إصابة آخر. وكان تورم الخلوية وتحلل التغيرات المورفولوجية النموذجية التي لوحظت في C. الحثرية - قناة فالوب المصابة ولكن ليس في غير المصابة الضوابط. وكشفت التحليلات أن تيم متدثرات تطبيق نموذجي دورة تنموية داخل الخلايا داخل أنسجة المصابة، والتي تبين مشتملات كبير مع إعادة متباينة الهيئات الابتدائية ولكن أيضا أصغر الادراج مع الهيئات شبكي الموسعة التي قد تدل على استمرار. ومع ذلك، فإن الصورة الشكلية وحدها لا تكفي للتمييز بين النسخ المماثزيادة الالتهابات icating والمستمرة، التي تتميز بها عملية التمثيل الغذائي المنخفض ومقاومة مضادات الميكروبات 10. تدمير الخلايا الطلائية في قناة فالوب المصابة هي إما بسبب تعطل C. الحثرية - الخلايا الظهارية المصابة بعد الانتهاء من دورة النمو داخل الخلايا وإطلاق الهيئات الابتدائية المعدية أو إطلاق سراح المؤيد للالتهابات السيتوكينات 8. العوامل المسببة للأمراض التي يسببها تلف الأنسجة والمضيف الناجم عن ردود فعل مناعية ضد C. ومن المفترض أن تكون الحثرية العوامل الرئيسية التي تؤدي إلى فقدان وظائف الخلايا الظهارية، وإعادة عرض الليفية والعقم الأنبوبي أخيرا 8،11 في الجسم الحي. واحدة من القيود الرئيسية لهذا النموذج هو عدم وجود خلايا التهابية مما يعوق تحليل الآثار الثانوية للجيم الأولي عدوى الحثرية لظهارة قناة فالوب. ومع ذلك، فإن النموذج هو أبتكبده للتحقيق في ظروف بيئية مختلفة (على سبيل المثال محتوى الأكسجين) وأولي المضيف استجابة مناعية في جيم الحاد التهابات الحثرية 8،9. خطط أخرى هي لوضع نموذج لاختبار مضادات الميكروبات ضد C. الحثرية في أنابيب فالوب كامل الإنسان وإلى تميز الولايات التمثيل الغذائي من المراحل التنموية المختلفة التي لوحظت في ظهارة الأنبوبي بواسطة 2-فوتون ليزر المسح المجهري.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> PAA </td><td> E15-843 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI </td><td> PAA </td><td> R15-802 </td><td></td></tr><tr><td> FCS </td><td> PAA </td><td> A15-101 </td><td></td></tr><tr><td> سيكلوهيكسيميد </td><td> سيغما - الدريتش </td><td></td><td></td></tr><tr><td> الإشتراكي الواق </td><td> مختلف </td><td></td><td> انظر الوصفة أدناه </td></tr><tr><td> مونتي مثبت </td><td> مختلف </td><td></td><td> انظر الوصفة أدناه </td></tr><tr><td> الصوديوم كاكوديلات العازلة </td><td> مختلف </td><td></td><td> انظر الوصفة أدناه </td></tr><tr><td> Richardson وصمة عار </td><td> مختلف </td><td></td><td> انظر الوصفة أدناه </td></tr></tbody></table> وصفات: 1. الإشتراكي الواق <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة السكروز 75 ز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة فوسفات الصوديوم 2،47 غرام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة فوسفات أحادية الصوديوم 0،36 غرام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة حمض الغلوتاميك 0.72 غرام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شغل إلى 1 لتر ماء مقطر مع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط درجة الحموضة إلى 7.3. </li></ol> 2. 0.1 كاكوديلات الصوديوم M العازلة، ودرجة الحموضة 7.35. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة حامض 42.80 dimethylarsenic ز ملح الصوديوم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 68.46 السكروز ز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شغل إلى 1 لتر ماء مقطر مع. للحصول على 0.2 كاكوديلات الصوديوم العازلة M. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل استخدام محلول مخفف مع ماء مقطر. والمطلوب التركيز وضبط درجة الحموضة إلى 7،35 إذا لزم الأمر. </li></ol> 3. مونتي مثبت <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 156 مل من الصوديوم 0.12 M العازلة كاكوديلات. 3.2 أضف 25 مل glutardialdehyde 25٪ في ماء مقطر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 19 مل10٪ لامتصاص العرق في دست المائية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أضف 3 مل CaCl 3٪ 2 في دست المائية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط درجة الحموضة إلى 7،35 وملء مع ماء مقطر. إلى حل نهائي 312 مل. </li></ol> 4. ريتشاردسون وصمة عار <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلط أجزاء متساوية من زرقة الميثيلين 1٪ في 1٪ حل البوراكس مائي و 1٪ الثاني دازور في دست المائية. </li></ol>

a human fallopian tube model for investigation of c. trachomatis infections

التهابات الجهاز التناسلي مع الكلاميديا ​​(سي. الحثرية) هي الأكثر شيوعا التي تنتقل عن طريق الاتصال الجنسي مرض في النساء على مستوى العالم. قد التخليص غير فعال أو استمرار مسببات الأمراض تؤدي إلى الصعود التهابات الجهاز التناسلي العلوي ويفترض أن يسبب ضررا للالتهابات المزمنة إلى 1،2 الأنسجة المصابة. ونتيجة لذلك، قد عقابيل سريرية شديدة مثل مرض التهاب الحوض (PID)، الانسداد الأنبوبي والعقم تحدث 3،4. معظم الأبحاث مع جيم وقد أجريت الحثرية في خطوط الخلايا الظهارية (مثل التهاب الكبد-2 الخلايا وهيلا 229) أو في الفئران. ومع ذلك، كما هو الحال مع خلية ثقافة النماذج القائمة، فإنها لا تعكس أيا من علم وظائف الأعضاء من الأنسجة الأصلية ولا الفيزيولوجيا المرضية من C. التهابات الجهاز التناسلي الحثرية في الجسم الحي 5. ونظرا للقيود مزيد من حقيقة أن أجهزة الطرد المركزي وسط إشارات (مثل الإنترفيرون γ mediatإد JAK / STAT مسار الإشارات) التي تتحكم في نمو الخلايا المتدثرة تختلف جوهريا بين الفئران والبشر 6،7. نحن وغيرنا وبالتالي، أنشأت كل نموذج هيئة قناة فالوب للتحقيق التفاعل المباشر بين C. الحثرية والبشرية فالوب السابقين خلايا الجسم الحي أنبوب 8،9. لهذا الغرض، جمعت قناة فالوب الإنسان من النساء اللواتي خضعن لاستئصال الرحم والمصابين بفيروس C. الحثرية ضرب مصلي د. في غضون 24 ساعة إصابة آخر، عينة حيث حللت باستخدام المجهر الإلكتروني (SEM) والمجهر الإلكتروني انتقال (تيم) للكشف عن الكلاميديا ​​تتوسط ضرر الظهارية، فضلا عن جيم الحثرية تشكيل إدراجها في نسيج فالوب.

Watch this Scientific Journal Video about A Human Fallopian Tube Model for Investigation of C. trachomatis Infections at JoVE.com

A Human Fallopian Tube Model for Investigation of C. trachomatis Infections

وصفنا 1<em&gt; خارج الحي عدوى</em&gt; نموذج لرؤية التفاعلات المباشرة من مسببات الأمراض البكتيرية مع خلايا قناة فالوب. وقد تم تأسيسها في الأنسجة الجهاز كله نموذج للتحقيق<em&gt; C. الحثرية</em&gt; علم الأمراض التي يسببها إلى قناة فالوب الإناث في ظل ظروف &quot;الحياة مثل&quot;.

والإنسان النموذجي قناة فالوب للتحقيق في<em&gt; C. الحثرية</em&gt; الإصابات

Genital tract infections with Chlamydia trachomatis (C. trachomatis) are the most frequent transmitted sexually disease in women worldwide. Inefficient ...

a-human-fallopian-tube-model-for-investigation-c-trachomatis

Research

JoVE Journal

Medicine

A Human Fallopian Tube Model for Investigation of C. trachomatis Infections

12.8K Views.  University of Lübeck. وصفنا 1 خارج الحي عدوى نموذج لرؤية التفاعلات المباشرة من مسببات الأمراض البكتيرية مع خلايا قناة فالوب. وقد تم تأسيسها في الأنسجة الجهاز كله نموذج للتحقيق C. الحثرية علم الأمراض التي يسببها إلى قناة فالوب الإناث في ظل ظروف "الحياة مثل".

Video: A Human Fallopian Tube Model for Investigation of C. trachomatis Infections

Processing of Human Reduction Mammoplasty and Mastectomy Tissues for Cell Culture

Experimental examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated by in vitro culture systems that more accurately model in vivo biology. The use of human derived material for studying cellular differentiation, aging, senescence, and immortalization is particularly advantageous given the many significant molecular differences in these properties between human and commonly utilized rodent cells1-2. Mammary cells present a convenient model system because large quantities of normal and abnormal tissues are available due to the frequency of reduction mammoplasty and mastectomy surgeries.
The mammary gland consists of a complex admixture of many distinct cell types, e.g., epithelial, adipose, mesenchymal, endothelial. The epithelial cells are responsible for the differentiated mammary function of lactation, and are also the origin of the vast majority of human breast cancers. We have developed methods to process mammary gland surgical discard tissues into pure epithelial components as well as mesenchymal cells3. The processed material can be stored frozen indefinitely, or initiated into primary culture. Surgical discard material is transported to the laboratory and manually dissected to enrich for epithelial containing tissue. Subsequent digestion of the dissected tissue using collagenase and hyaluronidase strips stromal material from the epithelia at the basement membrane. The resulting small pieces of the epithelial tree (organoids) can be separated from the digested stroma by sequential filtration on membranes of fixed pore size. Depending upon pore size, fractions can be obtained consisting of larger ductal/alveolar pieces, smaller alveolar clusters, or stromal cells. We have observed superior growth when cultures are initiated as organoids rather than as dissociated single cells. Placement of organoids in culture using low-stress inducing media supports long-term growth of normal HMEC with markers of multiple lineage types (myoepithelial, luminal, progenitor)4-5. Sufficient numbers of cells can be obtained from one individual's tissue to allow extensive experimental examination using standardized cell batches, as well as interrogation using high throughput modalities.
Cultured HMEC have been employed in a wide variety of studies examining the normal processes governing growth, differentiation, aging, and senescence, and how these normal processes are altered during immortal and malignant transformation4-15,16. The effects of growth in the presence of extracellular matrix material, other cell types, and/or 3D culture can be compared with growth on plastic5,15. Cultured HMEC, starting with normal cells, provide an experimentally tractable system to examine factors that may propel or prevent human aging and carcinogenesis.

A method to process human mammary surgical discard material is described. Processed tissue, in the form of organoids, can be stored frozen indefinitely or placed in culture for long-term growth. This method enables experimental examination of normal human epithelial cell biology, and the effects of exogenous perturbations.

تجهيز رأب الثدي لحد من استئصال الثدي والأنسجة البشرية للثقافة الخليوي

Experimental  examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how  normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated ...

Murine Model of Wound Healing

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. Impaired wound healing, which occurs in diabetic patients for example, can lead to severe unfavorable outcomes such as amputation. There is, therefore, an increasing impetus to develop novel agents that promote wound repair. The testing of these has been limited to large animal models such as swine, which are often impractical. Mice represent the ideal preclinical model, as they are economical and amenable to genetic manipulation, which allows for mechanistic investigation. However, wound healing in a mouse is fundamentally different to that of humans as it primarily occurs via contraction. Our murine model overcomes this by incorporating a splint around the wound. By splinting the wound, the repair process is then dependent on epithelialization, cellular proliferation and angiogenesis, which closely mirror the biological processes of human wound healing. Whilst requiring consistency and care, this murine model does not involve complicated surgical techniques and allows for the robust testing of promising agents that may, for example, promote angiogenesis or inhibit inflammation. Furthermore, each mouse acts as its own control as two wounds are prepared, enabling the application of both the test compound and the vehicle control on the same animal. In conclusion, we demonstrate a practical, easy-to-learn, and robust model of wound healing, which is comparable to that of humans.

A murine model of cutaneous wound healing that can be used to assess therapeutic compounds in physiological and pathophysiological settings.

نموذج الفئران من التئام الجروح

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but rather the formation of distinct metastasis, the ability to effectively model this progression pre-clinically is of high value. In this model, cells are directly implanted into the ventral lobe of the prostate in Balb/c athymic mice, and allowed to progress for 4-6 weeks. At experiment termination, several distinct endpoints can be measured, such as size and molecular characterization of the primary tumor, the presence and quantification of circulating tumor cells in the blood and bone marrow, and formation of metastasis to the lung. In addition to a variety of endpoints, this model provides a picture of a cells ability to invade and escape the primary organ, enter and survive in the circulatory system, and implant and grow in a secondary site. This model has been used effectively to measure metastatic response to both changes in protein expression as well as to response to small molecule therapeutics, in a short turnaround time.

This orthotopic model of human prostate cancer allows for quantification of tumor size, circulating tumor cells, and formation of distinct metastasis to the lung. As cells must escape the primary organ, enter the blood stream, and implant into a secondary site, this model effectively recapitulates the scenario in humans.

على الفئران نموذج مثلي من سرطان البروستاتا البشرية الانبثاث

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As such, primary or &#39;neuronal-like&#39; cell culture systems are commonly utilized. While&#160;these systems are relatively easy to work with, and are useful model systems in which various functional outcomes (such as cell death) can be readily quantified, the examined outcomes and pathways in cultured immature neurons (such as excitotoxicity-mediated cell death pathways) are not necessarily the same as those observed in mature brain, or in intact tissue. Therefore, there is the need to develop models in which cellular mechanisms in mature neural tissue can be examined. We have developed an in vitro technique that can be used to investigate a variety of molecular pathways in intact nervous tissue. The technique described herein utilizes rat cortical tissue, but this technique can be adapted to use tissue from a variety of species (such as mouse, rabbit, guinea pig, and chicken) or brain regions (for example, hippocampus, striatum, etc.). Additionally, a variety of stimulations/treatments can be used (for example, excitotoxic, administration of inhibitors, etc.). In conclusion, the brain slice model described herein can be used to examine a variety of molecular mechanisms involved in excitotoxicity-mediated brain injury.

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

We have developed a brain slice model which can be used to examine molecular mechanisms involved in excitotoxicity-mediated brain injury.&#160;This technique generates viable mature brain tissue and reduces animal numbers required for experimentation, whilst keeping the neuronal circuitry, cellular interactions, and postsynaptic compartments partly intact.

excitotoxic المواد تحفيز الدماغ باعتبارها Microslices<em&gt; في المختبر</em&gt; نموذج من السكتة الدماغية

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. Moreover, by rupture of the defective vascular wall, atherosclerosis induces occlusive thrombus formation, which represents the main cause of myocardial infarction or stroke and the most frequent cause of death. Despite the advances in the cardiovascular field, many questions remain unanswered, and additional basic research is essential to improve our understanding of the molecular mechanisms during atherosclerosis and its effects. Due to limited clinical studies, there is a need for representative animal models recreating atherosclerotic conditions such as neointima formation after stent implantation, balloon angioplasty, or endarterectomy. Since the mouse presents many advantages and is the most frequently used model for studying molecular processes, the current study proposes an invasive procedure of endothelial denudation, also known as the wire-injury model, which is representative of the human condition of neointima formation in arteries after revascularization procedures.

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The &quot;Wire-Injury&quot; Model

This study describes an invasive procedure for the induction of accelerated atherosclerosis in mice. In comparison to other methods using electric- or cryo-induced injury, mechanical-induced injury mimics the human condition of restenosis after revascularization therapies and is ideal for the study of the molecular mechanisms involved.

تحريض تصلب الشرايين المتسارع في الفئران: نموذج "الأسلاك- إصابة"

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo and noninvasively in humans via phosphorus-31 magnetic resonance spectroscopy (31PMRS). However, the approach has not been widely adopted in translational and clinical research, with variations in methodology and limited guidance from the literature. Increased optimization, standardization, and dissemination of methods for in vivo 31PMRS would facilitate the development of targeted therapies to improve OXPHOS capacity and could ultimately favorably impact cardiovascular health. 31PMRS produces a noninvasive, in vivo measure of OXPHOS capacity in human skeletal muscle, as opposed to alternative measures obtained from explanted and potentially altered mitochondria via muscle biopsy. It relies upon only modest additional instrumentation beyond what is already in place on magnetic resonance scanners available for clinical and translational research at most institutions. In this work, we outline a method to measure in vivo skeletal muscle OXPHOS. The technique is demonstrated using a 1.5 Tesla whole-body MR scanner equipped with the suitable hardware and software for 31PMRS, and we explain a simple and robust protocol for in-magnet resistive exercise to rapidly fatigue the quadriceps muscle. Reproducibility and feasibility are demonstrated in volunteers as well as subjects over a wide range of functional capacities.

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

This work demonstrates the feasibility of an in vivo phosphorus-31 magnetic resonance spectroscopy (31PMRS) technique to quantify mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity in human skeletal muscle.

الفوسفور 31 الرنين المغناطيسي الطيفي: أداة لقياس<em&gt; في فيفو</em&gt; القدرة الميتوكوندريا الفسفرة التأكسدية في العضلات الهيكلية البشرية

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo ...

Tubal Cytology of the Fallopian Tube as a Promising Tool for Ovarian Cancer Early Detection

Currently, it is widely accepted that the vast majority of ovarian high-grade serous carcinoma (HGSC) originate from the fallopian tube. However, due to the lack of markers or tools for the ovarian cancer identification, the early detection of HGSC remains challenging. Direct sampling of the fallopian tube can enhance sensitivity for detection of neoplastic cells when the tumor is not grossly visible. We developed a procedure to collect fallopian tube cells directly from freshly received surgical specimens, which has shown excellent correlation with histological findings. This approach lays a foundation for the future utility of minimally invasive laparoscopic screening in high-risk patient populations.

We explored a tubal cytologic method by sampling the fallopian tube directly post-surgical excision as a tool of ovarian cancer early detection. Here, we present a protocol to collect fallopian tube cells from freshly received surgical specimens.

توبال علم الخلايا من أنبوب فالوب كأداة واعدة لسرطان المبيض الكشف المبكر

Currently, it is widely accepted that the vast majority of ovarian high-grade serous carcinoma (HGSC) originate from the fallopian tube. However, due to ...

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

Mitochondria are the powerhouses of cells and produce cellular energy in the form of ATP. Mitochondrial dysfunction contributes to biological aging and a wide variety of disorders including metabolic diseases, premature aging syndromes, and neurodegenerative diseases such as Alzheimer's disease (AD) and Parkinson's disease (PD). Maintenance of mitochondrial health depends on mitochondrial biogenesis and the efficient clearance of dysfunctional mitochondria through mitophagy. Experimental methods to accurately detect autophagy/mitophagy, especially in animal models, have been challenging to develop. Recent progress towards the understanding of the molecular mechanisms of mitophagy has enabled the development of novel mitophagy detection techniques. Here, we introduce several versatile techniques to monitor mitophagy in human cells, Caenorhabditis elegans (e.g., Rosella and DCT-1/ LGG-1 strains), and mice (mt-Keima). A combination of these mitophagy detection techniques, including cross-species evaluation, will improve the accuracy of mitophagy measurements and lead to a better understanding of the role of mitophagy in health and disease.

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

Mitophagy, the process of clearing damaged mitochondria, is necessary for mitochondrial homeostasis and health maintenance. This article presents some of the latest mitophagy detection methods in human cells, Caenorhabditis elegans, and mice.

في المختبر و في فيفو كشف ميتوفاجي في الخلايا البشرية، ايليجانس جيموالفئران

Mitochondria are the powerhouses of cells and produce cellular energy in the form of ATP. Mitochondrial dysfunction contributes to biological aging and a ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

متساوي القياس كونتراكتيليتي القياس الشريان المساريقي العلوي الماوس باستخدام أسلاك ميوجرافي

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

A Non-Invasive Method for Generating the Cyclic Loading-Induced Intra-Articular Cartilage Lesion Model of the Rat Knee

The pathophysiology of primary osteoarthritis (OA) remains unclear. However, a specific subclassification of OA in relatively younger age groups is likely correlated with a history of articular cartilage damage and ligament avulsion. Surgical animal models of OA of the knee play an important role in understanding the onset and progression of post-traumatic OA and aid in the development of novel therapies for this disease. However, non-surgical models have been recently considered to avoid traumatic inflammation that could affect the evaluation of the intervention. 
In this study, an intra-articular cartilage lesion rat model induced by in vivo cyclic compressive loading was developed, which allowed researchers to (1) determine the optimal magnitude, speed, and duration of load that could cause focal cartilage damage; (2) assess post-traumatic spatiotemporal pathological changes in chondrocyte vitality; and (3) evaluate the histological expression of destructive or protective molecules that are involved in the adaptation and repair mechanisms against joint compressive loads. This report describes the experimental protocol for this novel cartilage lesion in a rat model.

Here, we present the cyclic loading-induced intra-articular cartilage lesion model of the rat knee, generated by 60 cyclic compressions over 20 N, resulting in damage to the femoral condylar cartilage in rats.

طريقة غير جراحية لتوليد نموذج آفة الغضروف داخل المفصل الناجم عن التحميل الدوري لركبة الجرذ

The pathophysiology of primary osteoarthritis (OA) remains unclear. However, a specific subclassification of OA in relatively younger age groups is likely ...