この作品は、 &quot;インターフェイスの炎症&quot;エクセレンスのDFG-クラスター（RA-IF、RA-D）によってサポートされていました。我々は、クリスティンWischnatの優れた技術支援に感謝しています。

1。 クラミジア·トラコマチス血清型Dストックの調製<ol><li> 4ミリリットルCとしたHeLa-229細胞を含むコンフルエント175cm 2の細胞培養フラスコを感染させるバッファをSPGのでクラミジア D。 </li><li>一定の揺れの間に37℃で1時間インキュベートする。 </li><li> 10％FCS、240μlのシクロヘキシミドと20ミリリットルDMEMを追加します。 </li><li> °C、5％CO 2、37で48時間加湿インキュベーター中でインキュベートします。 </li><li> C.をデタッチし、破壊するために、5 mlの滅菌ガラスビーズ、強い揺れを追加します。 HeLa細胞-229細胞をかくまっトラコマチス 。 </li><li>上清を収集し、滅菌したガラスビーズの別の5ミリリットルを追加します。 </li><li> 1分間ロック三回は、すべてのHeLa-229細胞を破壊し、リリースCにトラコマチス 。 </li><li> 1000年RPMIと4で5分間遠心°C細胞の破片を取り除くために。 </li><li>コンフルエントgをフラスコ8から10 175cm 2の培養細胞の感染上清を回収HeLa細胞229細胞とrown。 </li><li> 4 mlのSPGバッファと37℃で一時間前の​​感染から4 mlの上清°一定に振とうしながらCを持つすべてのフラスコをインキュベートします。 </li><li> 1時間10％FCS、37℃、5％CO 2で48時間インキュベートし、続いて230μLシクロヘキシミドと15ミリリットルDMEMを追加した後。 </li><li> 5ミリリットル滅菌ガラスビーズを追加し、Cを切り離し、破壊するために振るHeLa細胞-229細胞をかくまっトラコマチス 。 </li><li>上清を収集し、滅菌したガラスビーズの別の5ミリリットルを追加します。 </li><li> 1分間ロック三回は、すべてのHeLa-229細胞を破壊し、リリースCにトラコマチス 。 </li><li> 4 1000 RPMIで5分間遠心°Cは、細胞の破片を取り除くために。 </li><li>上清を収集します。 </li><li> 50ミリリットルのファルコンチューブに上清を40ml、11000 RPMI 99分間遠心を記入してください。 </li><li>遠心分離後、上清を捨て、1 mlのSPGバッファーでペレットを洗浄する。 </li><li>ホモジナイズペレット-70 1、5ミリリットルエッペンドルフチュー​​ブ、店舗°Cを使用するまでに1 mlのSPGとアリコートを20μlインチ準備された株式の生物学的活性が確立されたHeLa-229細胞感染モデルにおいて確認された。 </li></ol> 2。ヒト卵管の調製<ol><li>すぐにRPMI準備まで、4で抗生物質を含まない°C、5％FCSを含むで手術後に子宮摘出術を受ける女性から店のヒト卵管（HFT）。プロトコルは、リューベック大学（09から153）の倫理委員会によって承認されました。研究に含まれていた女性（53歳まで34）は前のCの既往はなかったクラミジア感染症。卵管の組織は、帝王切開時または黄体期に症候性子宮筋腫による子宮中の母親のリクエストに応じて周産期滅菌で採取した。すべてのHFTは、Cに対して陰性であったPCR法によるクラミジア 。 </li><li>を含むRPMIを含むペトリ皿にHFTを分析抗生物質を含まない5％FCS。全体の処理中に組織が乾燥を防ぐために、メディア内に浸漬する必要があります。 </li><li>カットオフと手術中に破壊された結合組織と組織を破棄します。 </li><li>解剖した後に小さなメスで慎重にHFTを開きます。 </li><li>さらなる実験が1cm×1 cmに0.5cmの大きさに×0.5 cmの組織片を準備します。 </li><li>抗生物質を含まない5％FCSを含むRPMI 1ミリリットルの感染ストアHFT標本のために。 HFT検体はC.の5.5x10 5 IFU（インクルージョン形成単位）に感染していたトラコマチス 。 </li><li> 37 HFT試料をインキュベート°C、5％CO 2、21％O 2と同様に37°C、5％CO 2および2％で24時間O 2。 </li><li>インキュベーション時間の後に4で少なくとも3日間モンティの固定の標本や店舗を集める°SEM / TEMの準備までのC。 </li></ol> 3。 TEM用HFT試料の調製<ol><li>のためにTEMはモンティの固定から標本を削除して、4×5 mmの部分に2×2ミリメートルを切る。残りの組織は、SEMに使用することができます。 </li><li> 1時間カコジル酸ナトリウム緩衝液、pH 7.35の部分を洗う。 </li><li>アクアdestに1％（w / v）の四酸化オスミウムでインキュベートする。一晩。 </li><li>カコジル酸ナトリウム緩衝液、pH 7.35で6x5分を洗浄することによって過剰な四酸化オスミウムを削除します。 </li><li>水の中のエタノールの濃度を増加させ（v / v）の（2時間で30％、2時間、40％、2時間の50％、2時間で60％、夜70％以上、2の80％でインキュベートすることにより水を除去H、1時間の90％、1時間の95％、1時間の100％。 </li><li>酸化プロピレンの2×15分間エタノールを洗い流し、その後、50％の混合物（v / v）のプロピレンの新たに調製したアラルダイト（すべてのコンポーネントを含む）に転送し、一晩インキュベートする。 </li><li>少なくとも1時間、新たに調製したアラルダイト（すべてのコンポーネントを含む）に転送されます。 </li><li>平坦な埋め込み金型に移し、アラルダイトで記入してください。 </li><li>アラルダイト硬化のためにしましょう60°Cで少なくとも48時間</li><li>埋め込まれたサンプルのトリミング後のガラスナイフまたは基くダイヤモンドナイフを使用して、ウルトラミクロトームで、半薄切片（700 nm）をカットし、リチャードソン染色で染色される。 </li><li>ダイヤモンドナイフと銅グリッド（例えば150平方メッシュ）への転送を用いた超薄切片（約70 nm）を切り取ります。 </li><li>アクアdestに0.5％（w / v）の酢酸ウラニルで超薄切片を染色する。 3％（w / v）のアクアdestにクエン酸鉛に続く。自動セクション·シュタイナーインチまた、セクションはアクアdestに酢酸ウラニルの飽和遠心分離ソリューションにグリッド15分を残して、手動で染色することができます。アクアdestに0.3％クエン酸鉛（w / v）に続く。 </li></ol> 4。 SEMのHFT検体の調製<ol><li> SEMのためにモンティの固定、1.5×1cmのコルクシートや昆虫針を使用してフィックスの位置で上向きに直面している上皮と東洋から標本を削除します。 </li><li>適当な金属バスケットにコルクに試料を移し、カコジル酸ナトリウム緩衝液、pH 7.35で30分間洗浄する。 </li><li>アセトン/水混合物の濃度の増加（v / v）の6時間で30％、6時間の40％、8時間で60％、夜70％以上、2時間、80％、90％の試料をインキュベートすることによって水を除去一晩で2時間、100％（試料が連続的に水没しておくことは非常に慎重である）。 </li><li>臨界点乾燥（温度40℃、圧力80バール）により新鮮な100％アセトンおよび乾燥標本に転送されます。 </li><li>導電性カーボンセメントを用いた導電性カーボンのタブを備えたSEM試料マウントに上向き上皮で針、コルクと接着剤の試験片を取り外します。マウントと導電性カーボンのタブの間に導電性を高めるために液体の導電性の銀を使用しています。 </li><li>スパッタコーターを用いて試料の導電性白金、金またはパラジウムコーティングを準備します。 </li></ol> 5。リチャードソンのステインセミ薄切片の染色<ol><li>スライド上半薄切片を乾燥させます。 </li><li> 1〜2分間60℃で染色溶液でセクションを染色。 </li><li>アクアdestに洗ってください。 </li><li>乾燥したセクションとカバースリップ。 </li></ol> 6。代表的な結果人間の卵管の感染症モデルの中で我々は、非感染コントロール（ 図1）とCの間の上皮形態の違いを視覚化することができましたマティス -正常酸素条件下で感染したチューブ（ 図2）。特徴的な形態の違いが非感染コントロールでは検出できなかった卵管上皮細胞の病原体誘起膨潤および溶解を示唆した。半薄切片を透過型電子顕微鏡を用いて、我々は細胞内のCを証明することができました非感染コントロール（ 図4）にヒト卵管組織（ 図3、5）感染はなく、ex vivoでのクラミジア封入体形成。酸素濃度として女性の生殖管のtionsは、我々はまた、低酸素条件下で我々のモデルを検討し、炎症過程で生理的条件下で11、さらに減少の下で既に低くなっています。予備的な結果は、モデルが酸素濃度を変化させることでクラミジアの成長と子孫を分析するのに有用であることを示します。クラミジアによって誘導される上皮細胞の損傷は感染症（ 図6）の前に卵管の無謀な準備と処理を介して媒介される成果物から分離する必要があります。 <img src="/files/ftp_upload/4036/4036fig1.jpg" alt="図1" /> 一日のインキュベーション後、非感染ヒト卵の図1走査型電子顕微鏡（SEM）は、コントロール培地（緑色の矢印が繊毛細胞、青色の矢印を表示、非繊毛細胞を示す）。 <img src="/files/ftp_upload/4036/4036fig2.jpg" alt="図2" /> 図2走査電子マイクロ<html> ex vivoでのC.トラコマティス感染したヒト卵管一日感染後（白い矢印マーク破裂インクルージョン）のコピー（SEM）。 <img src="/files/ftp_upload/4036/4036fig3.jpg" alt="図3" /> 図3。セミ薄いセクションでは、Cと人間の卵管の感染後に典型的な細胞内封入体（白矢印）1Dを表示クラミジアエクスビボ 。 <img src="/files/ftp_upload/4036/4036fig4.jpg" alt="図4" /> 図4：コントロール培地中で一日のインキュベーション後、非感染ヒト卵管の透過型電子顕微鏡（TEM）。 <img src="/files/ftp_upload/4036/4036fig5.jpg" alt="図5" /> 図5 のex vivoでの透過型電子顕微鏡（TEM） クラミジアは、ヒトの卵管一日感染後（白矢印はクラミジア封入体にマークを付ける）を感染させた。 ve_content &quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/4036/4036fig6.jpg" alt="図6" /> 図6。無謀な準備と検体の取り扱い（白い矢印マークは、上皮組織の破壊）を使用して破損して卵管上皮の走査電子顕微鏡（SEM）。

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</ol>

利害の衝突が宣言されません。

感染組織への病原体によって誘発される損害の可視化は困難とマウスの実験手順にしばしば制限されています。我々 は 、C を分析するために人間の卵管にex vivoでの感染モデルを確立上部の雌の生殖器のクラミジア感染症。この方法を使用することによって、我々はC.を可視化することができましたマティス -一日後の感染内の人間卵管上皮に起因する損傷。携帯電話の腫れや溶解はC で観察された典型的な形態変化であったマティス -非感染コントロールの感染卵管はありません。 TEM分析は、再分化した小学校の体だけでなく、永続性を示している可能性があります拡大して網目状の本体と小さい介在物の大型介在物を示す、クラミジアは、感染した組織内に典型的な細胞内発育周期を実装することを明らかにした。しかし、単独で形態学的画像は、REPLを区別するのに十分ではありません減少し代謝を特徴としていicatingと永続的な感染症は、抗菌剤10に抵抗を増加させた。 感染した卵管の上皮の破壊は 、Cの破壊のいずれかによるものであるマティス -細胞内の発育サイクルや感染小学校団体のリリースや炎症性サイトカイン8のリリースが完了した後、感染した上皮細胞。病原体によって誘発される組織の損傷および Cに対する宿主によって誘導される免疫反応クラミジアは、上皮細胞機能の喪失、線維芽細胞のリモデリングおよび in vivo 8,11 で最後に卵管不妊につながる大きな要因であると考えられている。 このモデルの大きな制限の1つは、最初のCに二次的効果の分析を阻害する炎症性細胞の不在である卵管上皮のクラミジア感染症。しかし、このモデルはapです。異なる環境条件（例えば、酸素含有量）と急性Cの最初のホスト·免疫応答を調査するためにpropriate クラミジア感染症8,9。さらに計画ではC.に対する抗菌薬のテストのためのモデルを確立することです。全体の人間の卵管にクラミジアと2光子レーザー走査顕微鏡による卵管上皮で観察された別の発達段階の代謝状態を特徴づける。

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> PAA </td><td> E15-843 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI </td><td> PAA </td><td> R15-8​​02 </td><td></td></tr><tr><td> FCS </td><td> PAA </td><td> A15-101 </td><td></td></tr><tr><td>シクロヘキシミド</td><td>シグマ - アルドリッチ</td><td></td><td></td></tr><tr><td> SPGのバッファ</td><td>さまざまな</td><td></td><td>以下のレシピを参照してください。 </td></tr><tr><td>モンティの固定</td><td>さまざまな</td><td></td><td>以下のレシピを参照してください。 </td></tr><tr><td>カコジル酸ナトリウム緩衝液</td><td>さまざまな</td><td></td><td>以下のレシピを参照してください。 </td></tr><tr><td> Richardsonの染色</td><td>さまざまな</td><td></td><td>以下のレシピを参照してください。 </td></tr></tbody></table>レシピ： 1。 SPGのバッファ<ol><li> 75グラムのショ糖を追加します。 </li><li> 2.47グラムリン酸二ナトリウムを追加します。 </li><li> 0.36グラムナトリウム、リン酸を追加します。 </li><li> 0.72グラムグルタミン酸を追加します。 </li><li>アクアdestが1 lに記入してください。 </li><li> 7.3にpHを調整します。 </li></ol> 2。 0.1 Mカコジル酸ナトリウム緩衝液、7.35。 <ol><li> 42.80グラムジメチルヒ酸ナトリウム塩を追加します。 </li><li> 68.46グラムのショ糖を追加します。 </li><li>アクアdestが1 lに記入してください。 0.2 Mカコジル酸ナトリウム緩衝液を取得します。 </li><li>アクアをdestで希釈した溶液を使用する前に。所望の濃度にし、必要に応じて7.35にpHを調整します。 </li></ol> 3。モンティの固定<ol><li> 156ミリリットル0.12 Mカコジル酸ナトリウム緩衝液を追加します。 3.2アクアdestに25ミリリットル25パーセントタルジアルデヒドを追加します。 </li><li> 19ミリリットルを追加します。アクアdestに10％のパラホルムアルデヒド。 </li><li>アクアdestに3ミリリットル三パーセントCaCl 2を追加します。 </li><li> 7.35にpHを調整し、水をdestに記入してください。 312ミリリットル最終的な解決に。 </li></ol> 4。リチャードソンの染色<ol><li>アクアdestの1％水溶液ホウ砂溶液と1％アズールIIで1％メチレンブルーの等しい部分を混在させること。 </li></ol>

a human fallopian tube model for investigation of c. trachomatis infections

クラミジアトラコマチス（C.トラコマティス ）と生殖器感染症は最も頻繁には、世界中の女性に性的に病気を送信されます。病原体の非効率的なクリアランスや永続性は上部生殖管の感染を昇順と感染組織1,2に慢性炎症性損傷を引き起こすことになっているにつながる可能性があります。その結果、骨盤内炎症性疾患（PID）、卵管閉塞と不妊のような重篤な臨床的後遺症は3,4を発生する可能性があります。 Cとの研究のほとんどクラミジアは、上皮細胞株（例えば、HEp-2細胞およびHeLa-229）または、マウスで実施されている。しかし、細胞培養ベースのモデルと同様に、彼らはどちらもネイティブの組織の生理機能やCの病態を反映しません。 in vivoで 5 のクラミジア性器感染症。さらに制限が事実によって与えられている中央のシグナル伝達カスケード（例えば、IFN-γmediat細胞内のクラミジア増殖を制御ED JAK / STATシグナル伝達経路）は、基本的にマウスとヒト6,7の間で異なる。我々や他したがって、Cの間の直接的な相互作用を調査するために全体の臓器卵管モデルを確立クラミジアと人間の卵管細胞のex vivoで 8,9。 この目的のために、子宮摘出術を受ける女性からのヒト卵管は、Cで収集し、感染したトラコマチス 24時間感染後以内に血清D.、 クラミジア·トラコマチスを検出するために走査型電子顕微鏡（SEM）および透過型電子顕微鏡（TEM）を用いて分析試料は同様にCなどの上皮損傷を媒介卵組織内のクラミジア封入体形成。

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A Human Fallopian Tube Model for Investigation of C. trachomatis Infections

我々は、説明します<em&gt; ex vivoでの感染</em人間の卵管細胞を用いた細菌の病原体からの直接的な相互作用の可視化のために&gt;モデル。全体の臓器組織モデルは、調査するために設立されました<em&gt; C.トラコマチス</em&quot;生命のような&quot;条件下での女性の卵管へ&gt;誘導病理。

の調査のための人間の卵管モデル<em&gt; C.トラコマチス</em&gt;感染症

Genital tract infections with Chlamydia trachomatis (C. trachomatis) are the most frequent transmitted sexually disease in women worldwide. Inefficient ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

A Human Fallopian Tube Model for Investigation of C. trachomatis Infections

12.9K ビュー.  University of Lübeck. 我々は、説明します ex vivoでの感染モデル。全体の臓器組織モデルは、調査するために設立されました C.トラコマチス誘導病理。

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Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

Trichuris muris is a natural pathogen of mice and is biologically and antigenically similar to species of Trichuris that 
infect humans and livestock1. Infective eggs are given by oral gavage, hatch in the distal small intestine, invade the intestinal epithelial cells (IECs) 
that line the crypts of the cecum and proximal colon and upon maturation the worms release eggs into the environment1. This model is a powerful tool to 
examine factors that control CD4+ T helper (Th) cell activation as well as changes in the intestinal epithelium. The immune response that occurs in 
resistant inbred strains, such as C57BL/6 and BALB/c, is characterized by Th2 polarized cytokines (IL-4, IL-5 and IL-13) and expulsion of worms while Th1-associated 
cytokines (IL-12, IL-18, IFN-&gamma;) promote chronic infections in genetically susceptible AKR/J mice2-6. Th2 cytokines promote physiological changes in 
the intestinal microenvironment including rapid turnover of IECs, goblet cell differentiation, recruitment and changes in epithelial permeability and smooth muscle 
contraction, all of which have been implicated in worm expulsion7-15. Here we detail a protocol for propagating Trichuris muris eggs which can 
be used in subsequent experiments. We also provide a sample experimental harvest with suggestions for post-infection analysis. Overall, this protocol will provide 
researchers with the basic tools to perform a Trichuris muris mouse infection model which can be used to address questions pertaining to Th proclivity in 
the gastrointestinal tract as well as immune effector functions of IECs.

Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

Trichuris muris infection is an intestinal model of Th2 immunity where resistant mice generate a protective Th2 response and susceptible mice generate a pathological Th1 response.

ネズミ鞭虫感染症：腸内のタイプ2免疫と炎症のモデル

Trichuris muris is a natural pathogen of mice and is biologically and antigenically similar to species of Trichuris that 
infect humans and livestock1. ...

免疫・感染学

Urinary Tract Infection in a Small Animal Model: Transurethral Catheterization of Male and Female Mice

Urinary tract infections (UTI) are extremely common worldwide, incurring significant morbidity and healthcare-associated expenses. Small animal models, which accurately reflect disease establishment and progression, permit dissection of host-pathogen interactions and generation of immunity to infection. In mice, intravesical instillation of uropathogenic E. coli, the causative agent in more than 85% of community acquired UTI, recapitulates many of the stages of infection observed in humans. Until recently, however, UTI could only be modeled in female animals. This limitation has hindered the study of sex-related differences in UTI, as well as other bladder pathologies, such as cancer. Here, we describe a method to instill male mice that allows direct comparison between female and male animals and provide a detailed protocol to assess bladder tissue by flow cytometry as a means to better understand host responses to infection. Together, these approaches will aid in the identification of host factors that contribute to sex biases observed in UTI and other bladder-associated diseases.

The established model of transurethral catheterization of mice allows the study of bladder pathologies, including urinary tract infection, but can only be performed in females. A new model of male transurethral instillation, presented here, will enable research in an area marked by strong clinical and epidemiological differences between the sexes.

小動物モデルにおける尿路感染症: 雌雄マウスの尿道カテーテル

Urinary tract infections (UTI) are extremely common worldwide, incurring significant morbidity and healthcare-associated expenses. Small animal models, ...

An Efficient Method for Extracting Human Fallopian Tube Epithelia for Single-cell Analyses

Human fallopian tubes are intrinsic to reproduction. The purpose of the fallopian tubes is to allow for the transit of sperm, the ovum, and if fertilization is successful, the embryo. The epithelial cells that line the inner surface of fallopian tubes are integral to both normal and abnormal fallopian tube processes, including disease initiation. After menopause, fallopian tubes cease to have a significant role in the body and the intraepithelial cell makeup changes. We describe a method in which these epithelial cells can be isolated from fresh fallopian tubes with minimal stromal cell contamination into a single-cell suspension. These cells can be grown in culture or used for further analysis such as flow cytometry and single-cell RNA sequencing. This isolation protocol can be achieved in 4-6 h and yields viable cells that can be used for immediate downstream analysis. This efficient protocol facilitates the isolation of fallopian tube epithelial cells with an enriched epithelial population.

This protocol describes a one-day method for the isolation of human fallopian tube epithelial cells. Isolated epithelial cells can be plated in 2-dimensional (2D) culture or dissociated into single-cell suspensions and utilized in downstream experiments, including flow cytometry and single-cell RNA sequencing.

ヒト卵管上皮をシングルセル解析で効率的に抽出する方法

Human fallopian tubes are intrinsic to reproduction. The purpose of the fallopian tubes is to allow for the transit of sperm, the ovum, and if ...

がん研究

Ex Vivo Culture of Primary Human Fallopian Tube Epithelial Cells

Epithelial ovarian cancer is a leading cause of female cancer mortality in the United States. In contrast to other women-specific cancers, like breast and uterine carcinomas, where death rates have fallen in recent years, ovarian cancer cure rates have remained relatively unchanged over the past two decades 1. This is largely due to the lack of appropriate screening tools for detection of early stage disease where surgery and chemotherapy are most effective 2, 3. As a result, most patients present with advanced stage disease and diffuse abdominal involvement. This is further complicated by the fact that ovarian cancer is a heterogeneous disease with multiple histologic subtypes 4, 5. Serous ovarian carcinoma (SOC) is the most common and aggressive subtype and the form most often associated with mutations in the BRCA genes. Current experimental models in this field involve the use of cancer cell lines and mouse models to better understand the initiating genetic events and pathogenesis of disease 6, 7. Recently, the fallopian tube has emerged as a novel site for the origin of SOC, with the fallopian tube (FT) secretory epithelial cell (FTSEC) as the proposed cell of origin 8, 9. There are currently no cell lines or culture systems available to study the FT epithelium or the FTSEC. Here we describe a novel ex vivo culture system where primary human FT epithelial cells are cultured in a manner that preserves their architecture, polarity, immunophenotype, and response to physiologic and genotoxic stressors. This ex vivo model provides a useful tool for the study of SOC, allowing a better understanding of how tumors can arise from this tissue, and the mechanisms involved in tumor initiation and progression.

Ex Vivo Culture of Primary Human Fallopian Tube Epithelial Cells

The fallopian tube (FT) is emerging as an alternative site of origin for serous ovarian carcinoma (SOC). This protocol describes a novel method for the isolation and ex vivo culture of fallopian tube epithelial cells. This system recapitulates the in vivo epithelium and allows the study of SOC pathogenesis.

初代ヒト卵管上皮細胞のex vivoでの文化

Epithelial ovarian cancer is a leading cause of female cancer mortality in the United States. In contrast to other women-specific cancers, like breast and ...

生物学

Tubal Cytology of the Fallopian Tube as a Promising Tool for Ovarian Cancer Early Detection

Currently, it is widely accepted that the vast majority of ovarian high-grade serous carcinoma (HGSC) originate from the fallopian tube. However, due to the lack of markers or tools for the ovarian cancer identification, the early detection of HGSC remains challenging. Direct sampling of the fallopian tube can enhance sensitivity for detection of neoplastic cells when the tumor is not grossly visible. We developed a procedure to collect fallopian tube cells directly from freshly received surgical specimens, which has shown excellent correlation with histological findings. This approach lays a foundation for the future utility of minimally invasive laparoscopic screening in high-risk patient populations.

We explored a tubal cytologic method by sampling the fallopian tube directly post-surgical excision as a tool of ovarian cancer early detection. Here, we present a protocol to collect fallopian tube cells from freshly received surgical specimens.

卵巣癌早期発見のための有望なツールとしてのファロピウス管の管細胞診

Currently, it is widely accepted that the vast majority of ovarian high-grade serous carcinoma (HGSC) originate from the fallopian tube. However, due to ...

医学

A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence

Necrotic enteritis was studied in chickens using various in vivo infection models. Most of these use a combination of predisposing factors, such as coccidiosis and diet, with gavage or administration via the feed using Clostridium perfringens. In these models, the comparison of multiple C. perfringens strains for virulence studies requires a large number of hosts to obtain significant results. Mortality during the course of the study can be high depending on the experimental model, hence raising ethical concerns regarding animal welfare in research. The development of new infection models requiring fewer animals to study pathogenesis, yet providing statistically significant and valid results, is important in reducing animal use in research. Intestinal ligated loop models have been used to study clostridial infections in various species such as mice, rabbits and calves. Following surgical procedures to create ligated loop segments, C. perfringens strains are injected directly into the loops to establish a close contact between the bacteria and the intestinal mucosa. Samples of the small intestine and luminal contents are taken at the termination of the procedures after a few hours. Multiple bacterial strains can be inoculated in each animal, hence reducing the number of required subjects in the experiments. Also, procedures are performed under general anesthesia to reduce animal pain. In chickens, this model would be more appropriate than oral administration to compare C. perfringens strain pathogenicity because fewer animals are needed, no predisposing factors are required to induce the disease, and pain is controlled by analgesics. The intestinal ligated loop model is poorly described in chickens and standardization is essential for its optimal use. This manuscript provides all the necessary steps to create numerous intestinal ligated loops in chickens and brings information on the critical points to obtain valid results.

A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence

Here we present a protocol to surgically create &#39;intestinal ligated loops&#39; in chicken small intestines. This procedure allows for the comparison of multiple Clostridium perfringens strains&#39; virulence in situ in a single host. This method markedly decreases the number of chickens usually necessary for similar in vivo experiments.

ウェルシュ病原性を研究する麻酔特定病原体フリー鶏における腸管結紮ループ モデル

Necrotic enteritis was studied in chickens using various in vivo infection models. Most of these use a combination of predisposing factors, such as ...

Comprehensive Approach for Microbial Isolation from Hidradenitis Suppurativa Tunnels

Hidradenitis Suppurativa (HS) is a debilitating condition marked by painful nodules and abscesses, progressing to sinus tracts (tunnels) within the skin's dermal layers, causing significant discomfort, foul-smelling discharge, disfigurement, contractures, and scarring, which severely diminish the quality of life. HS is associated with alterations in the skin microbiome, impacting immune regulation and the skin's defense against harmful bacteria. Despite its prevalence, the contribution of the HS microbiome to disease pathology and the limited response to treatment remains largely unknown. To date, multiple 16S rRNA sequencing studies on HS tissue have only achieved genus-level granularity, identifying an increase in Gram-negative anaerobes and a decrease in skin commensals. A deeper understanding of microbial dysbiosis in individuals with HS is essential for optimizing treatment strategies. This requires a two-pronged approach to assessing the HS microbiome, including the isolation of bacterial species, which are often underutilized in translational studies focused on skin disorders. Isolating individual microorganisms from HS tissue is crucial for elucidating the role of bacteria in HS pathogenesis. Here, we highlight reproducible methods to successfully isolate anaerobic pathogens from HS tunnel tissue, providing the initial and most critical step in understanding bacterial role in HS. This method paves the way for targeted research into microbial contributions to HS and for developing more effective, personalized treatment strategies that address the complex microbial burden of this chronic condition.

We showcase a method to successfully isolate fastidious and anaerobic organisms from cutaneous sinus tracts (tunnels) in tissues excised from patients with Hidradenitis Suppurativa.

化膿性汗腺炎トンネルからの微生物分離のための包括的アプローチ

Hidradenitis Suppurativa (HS) is a debilitating condition marked by painful nodules and abscesses, progressing to sinus tracts (tunnels) within the skin's ...

Papanicolaou Staining: A Technique to Visualize the Cytological Features of Tubal Cells

Source: Chen, H. et al. <a href="https://www.jove.com/v/55887">Tubal Cytology of the Fallopian Tube as a Promising Tool for Ovarian Cancer Early Detection.</a> J. Vis. Exp. (2017).
In this video, we demonstrate a modified protocol of Papanicolaou staining to study tubal cytology. This technique can be used to visualize the cytological features of malignant and non-malignant fallopian tube epithelial cells.

パパニコロウ染色:卵管細胞の細胞学的特徴を可視化する技術

Source: Chen, H. et al. Tubal Cytology of the Fallopian Tube as a Promising Tool for Ovarian Cancer Early Detection. J. Vis. Exp. (2017).
In this video, ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

生物学的手法

染色技術

細胞染色

Transurethral Catheterization and Bacterial Inoculation to Generate a Urinary Tract Infection Model in Male Mice

Source: Zychlinsky Scharff, A., et al. <a href="https://app.jove.com/v/54432">Urinary Tract Infection in a Small Animal Model: Transurethral Catheterization of Male and Female Mice.</a> J. Vis. Exp. (2017).
This video demonstrates the establishment of uropathogenic Escherichia coli infection in a female mouse bladder through transurethral catheter instillation. The injected bacteria successfully establish a urinary tract infection within the bladder, providing a valuable platform for studying healthcare-associated diseases related to the urinary tract.

雄マウスにおける尿路感染症モデルを生成するための経尿道的カテーテル法と細菌接種

All procedures involving animal models have been reviewed by the local institutional animal care committee and the JoVE veterinary review board.
1. ...

免疫学

免疫病理学

宿主-病原体相互作用モデル

Establishment of a Urinary Tract Infection Model in Female Mice

Source: Zychlinsky Scharff, A. et al., <a href="https://app.jove.com/v/54432">Urinary Tract Infection in a Small Animal Model: Transurethral Catheterization of Male and Female Mice.</a>&#160;J. Vis. Exp. (2017)
This video demonstrates the establishment of uropathogenic Escherichia coli infection in a female mouse bladder through transurethral catheter instillation. The injected bacteria successfully establish a urinary tract infection within the bladder, providing a valuable platform for studying healthcare-associated diseases related to the urinary tract.

の調査のための人間の卵管モデル

要約

さらに動画を探す

ネズミ鞭虫感染症：腸内のタイプ2免疫と炎症のモデル

小動物モデルにおける尿路感染症: 雌雄マウスの尿道カテーテル

ヒト卵管上皮をシングルセル解析で効率的に抽出する方法

初代ヒト卵管上皮細胞のex vivoでの文化

卵巣癌早期発見のための有望なツールとしてのファロピウス管の管細胞診

ウェルシュ病原性を研究する麻酔特定病原体フリー鶏における腸管結紮ループモデル

化膿性汗腺炎トンネルからの微生物分離のための包括的アプローチ

パパニコロウ染色:卵管細胞の細胞学的特徴を可視化する技術

雄マウスにおける尿路感染症モデルを生成するための経尿道的カテーテル法と細菌接種

雌マウスにおける尿路感染症モデルの確立

の調査のための人間の卵管モデル

要約

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ネズミ鞭虫感染症：腸内のタイプ2免疫と炎症のモデル

小動物モデルにおける尿路感染症: 雌雄マウスの尿道カテーテル

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ウェルシュ病原性を研究する麻酔特定病原体フリー鶏における腸管結紮ループ モデル

化膿性汗腺炎トンネルからの微生物分離のための包括的アプローチ

パパニコロウ染色:卵管細胞の細胞学的特徴を可視化する技術

雄マウスにおける尿路感染症モデルを生成するための経尿道的カテーテル法と細菌接種

雌マウスにおける尿路感染症モデルの確立

ウェルシュ病原性を研究する麻酔特定病原体フリー鶏における腸管結紮ループモデル