فإن الكتاب أود أن أشكر الدكتور Lubor BORSIG (معهد علم وظائف الأعضاء في جامعة زيوريخ) لنصيحته على تقنية نضح الرئة. وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من Krebsliga من زيورخ Kanton، والتر وL. جوانا مؤسسة وولف، زيوريخ، وهي مؤسسة Hochstrasser ليديا، زيورخ، ومؤسسة العلوم الوطنية السويسرية، SNF، وسويسرا، وVEREIN Balgrist Schweizerischer، والجامعة من زيوريخ.

1. الإرواء الرئة في الوضع الطبيعي وتثبيت <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفئران مخزنة عن طريق الحقن IP من الفوسفات ميكرولتر 150 ~ المالحة (PBS) التي تحتوي على 112،5 مغ / كغ (وزن الجسم) الكيتامين، 16.5 زيلازين ملغ / كغ، و 15 ملغ / كغ آسيبرومازين. (أو آخر التخدير التي تحتوي على مسكنات الألم المناسبة) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما ردود الفعل من الماوس لم تعد احظ اصلاحها على طاولة العمليات مرة أخرى إلى أسفل والرطب الفراء مع الايثانول 70٪ إلى أسفل الشعر البقعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح الجلد من البطن حتى العنق وتسحبه على الجانبين أو إزالته. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح الغشاء البريتوني والصدر وإلى حجم وافرة. منع تمزق الأوعية الكبيرة (مثل الوريد الوداجي) لتجنب انخفاض الكفاءة من نضح لاحقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع الوريد الأجوف الذنبية تحت الكبد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام حقنة 20 مل مزودة 21G - 24G إبرة لحقن ببطء 10-15 مل PBS إلى البطين الأيمن من القلب النابض حتى الرئة بيضاء تماما ويتوقف القلب (توقف الانقباض). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قرصة قبالة الأوعية الدموية فوق الكبد والحجاب الحاجز مع المشبك الأوعية الدموية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام حقنة 10 مل مزودة 21G - 24G إبرة لحقن ~ 2 مل من بارافورمالدهيد 3٪ (PFA) في برنامج تلفزيوني إلى البطين الأيمن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كشف القصبة الهوائية خارج القفص الصدري. استخدام نفس الحقنة لحقن ~ 3 مل من PFA 3٪ في برنامج تلفزيوني الجمجمة (خارج القفص الصدري) في القصبة الهوائية حتى يتم نفخ الرئة. مباشرة بعد إزالة الإبرة، قرصة قبالة القصبة الهوائية الذيلية من ثقب مع المشبك الأوعية الدموية والانتظار لمدة 10 دقيقة للسماح التثبيت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> القطع الأوعية الدموية فوق المشبك الأوعية الدموية، وإزالة المشبك وحقن 2 مل PBS ~ إلى البطين الأيمن لإزالة PFA الزائدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثقب الأجزاء السفلى من الفص جميع بإبرة الرئة، وإزالة المشبك الأوعية الدموية في القصبة الهوائية وحقن 3-5 مل من محلول PolyFreeze تضمين المتوسطة / PBS 01:01 الذيلية في القصبة الهوائية للثقب الأول حتى PFA في رئةيتم استبدال فصوص من الحل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة بعناية الرئة عن طريق سحب القلب مع ملقط وtransecting الأربطة النسيج الضام، والأوعية الدموية والقصبة الهوائية و. الحفاظ على القلب متصلا إلى الرئتين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اعتمادا على كيفية المضي قدما في الرئة تحليل الأنسجة تواصل مع البروتوكولات المحددة في القسمين 2 أو 3. إذا كنت تريد أن تفعل كل التحليلات، إزالة أحد الفص الرئة والمضي قدما كما هو موضح تحت 3. معالجة فصوص المتبقية متصلة القلب كما هو موضح تحت 2. </li></ol> 2. التصور من الخلايا الموسومة lacZ الورم النقيلي في الفصوص الرئة بالكامل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الرئة في كوب من البلاستيك مع غطاء محكم وإغلاق اصلاحها مع الفورمالديهايد 2٪ في برنامج تلفزيوني في درجة حرارة الغرفة لمدة 30-60 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة تثبيت الحل واغسل 3 مرات مع برنامج تلفزيوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة ما لا يقل عن 10 مل الطازجة 5-برومو-4-كلورو-3-β-indolyl-D-غالاكتوزيد (X-غال) تلطيخ الحل (محلول المخزون X-غال [40 ملغ / مل فيثنائي ميثيل فورماميد] 1:40 مخففة في الحل تلوين الأساسية؛ درجة الحموضة 7.1 (الجدول 1)؛ بعيدا عن الضوء). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع قطعة من الشاش على رأس الرئة السباحة للحفاظ عليها تماما في الحل ووضع غطاء فضفاض فقط على وعاء للسماح بتبادل الهواء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان في C ° 37 ساعة لمدة 3-5 محمية من الضوء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة X-غال الحل، شطف مرة واحدة مع برنامج تلفزيوني لإزالة بقايا X-غال الحل (اختياري) وإضافة PFA 4٪. </li></ol> 3. التصور من الخلايا الموسومة lacZ الورم النقيلي في الرئة Cryosections <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملء مسبق قالب المسمى التضمين إلى 3/1 مع غير مخفف PolyFreeze المتوسطة التضمين. وضع الفص الرئة على رأس وملء مع تضمين المتوسطة حتى يتم تغطيتها بالكامل الفص. محاولة لمنع الفقاعات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان جزءا لا يتجزأ من الرئتين في C ° 4 لمدة 20 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجميد ثم الرئتين جزءا لا يتجزأ ببطء في خليط من الثلج الجاف ونظير البنتان وتخزينها في -80 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 7-10 ميكرون قطع البردأقسام على ناظم البرد وجبل لهم على شرائح المجهر SuperFrostPlus. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان المقاطع على الفور مع حل تلطيخ X-غال عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة في غرفة مرطب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف الشرائح في 2 مرات لمدة 5 دقائق PBS ثم في الماء المقطر لفترة وجيزة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكافحة وصمة عار مع الأحمر بسرعة 10-30 النووية للثانية، وشطف في الماء المقطر وتركيب الشرائح مع اللقاحات جبل. </li></ol> 4. ممثل النتائج عصاي وآخرون ذكرت في المقال الأصلي على نموذج دن LM8 المستمدة من الماوس OS أن الأورام الأولية SC المستمدة من الخلايا دان الوالدين، تختلف عن تلك المستمدة من النقيلي غاية LM8 خط الخلية الفرعية، لا تشكل عفويا الانبثاث الرئة كشف في مسانج الفئران C3H 14. مع تقنيات ذكرت هنا، أعيد التدقيق فيها ونحن تشكيل الانبثاث في نماذج الماوس OS Dunn/LM8. ونحن قد استفادت من دان lacZ-transduced مستقرة والخلية LM8ق وبروتوكول لنضح الرئة في الموقع وتثبيت في الفئران. صور ممثل الرئتين perfused وغير perfused-حقن تحت الجلد من الفئران مع lacZ-transduced وغير transduced ترد تحكم دان والخلايا LM8 في الشكل 1. في حقنها بخلايا الفئران دن السيطرة، ظلت الانبثاث المجهري العيانية وغير قابل للكشف في الرئتين غير perfused وperfused (الشكل 1A، من الأول إلى الرابع). ولكن، ومن المثير للاهتمام، في الفئران حقن مع دن-lacZ الخلايا، كشفت X-غال تلطيخ الأزرق micrometastatic بؤر من الخلايا وحيدة الخلية أو مجموعات صغيرة (&lt;0.1 مم) على سطح غير perfused الرئتين (الشكل 1A، والسادس). داخل نضح الموضع وتثبيت للالرئتين زيادة تحسين الكشف من دن-lacZ micrometastases (الشكل 1A، والثامن). ومع ذلك، لم يكن لوحظ ثمرة لبؤر العيانية (الشكل 1A، والخامس، والسابع). &lt;/ P&gt; في الفئران حقنها بخلايا LM8 السيطرة، شفافة، بالكاد يمكن كشفها macrometastatic البؤر تم الاعتراف أكبر من 0.1 مم وقطرها في غير perfused الرئتين (1B الشكل الأول). لم نضح من الرئة (1B الشكل، والثالث) لا تحسين الكشف عن بؤر. ومع ذلك، في الفئران حقن مع LM8-lacZ خلايا متعددة X-غال الملون الأزرق الكلي تم الكشف عن (1B الشكل، والخامس) وmicrometastases (1B الشكل، والسادس) على سطح غير perfused الأجهزة. وعلاوة على ذلك، نضح في الرئتين زيادة تحسين الكشف الكلي وmicrometastases (1B الشكل، السابع - الثامن). ونتيجة لذلك، أصبح الصغيرة وmacrometastases مرئية في أعلى كثافة وعدد أكبر، ويرجع ذلك أساسا إلى الشفافية من الأنسجة perfused التي بؤر تحت السطح الجهاز أيضا أصبح مرئية. وح إضافيةوأكد التحليل باستخدام istological cryosections من أنسجة الرئة والكشف الانبثاث الرئة تحسين حقن الفئران في lacZ-transduced مع دان والخلايا LM8. في الفئران مع أورام الأولية المستمدة من دن-lacZ أو الخلايا LM8-lacZ، على عكس الأورام في الفئران مع الخلايا الأولية من السيطرة منها، أو واحد حتى micrometastases بؤر الخلايا والمعترف بها في أقسام الرئة (الشكل 2). وعلاوة على ذلك، كانت أكثر وضوحا أيضا macrometastases بوضوح في الفئران حقن مع LM8-lacZ الخلايا في الحيوانات من حقن الخلايا سيطرة LM8 (الشكل 2C، D). <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/4162/4162fig1.jpg" /> الشكل 1. الكشف عن الانبثاث عفوية غير transduced (من الأول إلى الرابع) وlacZ-transduced (الخامس إلى الثامن) دان (A) وLM8 (B) في الخلايا غير perfused (الأول والثاني، والخامس، والسادس) وperfused (الثالث، الرابع، السابع، الثامن) الرئتين في فئران C3H. الانبثاث في ممثل X-غال ستاكله الرئتين INED (الخامس والسابع في ألف وباء) ومنها لقطات مقربة (السادس، والثامن في A و B) تظهر زرقاء. يشار إلى بؤر Macrometastatic (&gt; 0.1 ملم) في أجهزة حقن الفئران بخلايا LM8 غير الموسومة (من الأول إلى الرابع في الإفطار) من خلال العلامات النجمية. هو مبين في مناطق شكا من وثيقة تمثل لكامل الرئتين. تشير على نطاق والحانات 1 مم في صور الرئتين كله و0.1 ملم في شكا من وثيقة. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/4162/4162fig1large.jpg" target="_blank">اضغط هنا لمشاهدتها بشكل اكبر شخصية</a> . <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/4162/4162fig2.jpg" /> الشكل 2. الكشف عن ودان LM8 micrometastases في cryosections الرئة. وحضنت أقسام الأنسجة أكتوبر الرئة جزءا لا يتجزأ من الحل-X غال في تلطيخ C ° 37 لمدة 24 ساعة في غرفة ومرطب ثم counterstained مع الأحمر سريع النووية. الأسهم تشير إلى بؤر micrometastatic المعترف بها في أقسام الرئة من الفئران حقن مع دن-lacZ (B) أو LM8-lacZ الخلايا (D). Mظلت icrometastases لا يمكن الكشف عنها في أقسام الرئة من الفئران حقن مع المنظمات غير transduced دان (A) أو LM8 خلايا (C). تشير على نطاق والحانات 0.1 ملم.

<ol>
	<li>Frese, K. K., Tuveson, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maximizing+mouse+cancer+models.">Maximizing mouse cancer models.</a> Nature. 7, 645-658 (2007).</li><li>Coussens, L. M., Fingleton, B., Matrisian, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix+metalloproteinase+inhibitors+and+cancer:+trials+and+tribulations.">Matrix metalloproteinase inhibitors and cancer: trials and tribulations.</a> Science (New York, N.Y.). 295, 2387-2392 (2002).</li><li>Fass, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+and+cancer:+a+review.">Imaging and cancer: a review.</a> Mol Oncol. 2, 115-152 (2008).</li><li>Puaux, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+imaging+techniques+to+monitor+tumor+growth+and+cancer+progression+in+living+animals.">A comparison of imaging techniques to monitor tumor growth and cancer progression in living animals.</a> Int. J. Mol. Imaging. 2011, 321538 (2011).</li><li>Malek, A., Catapano, C. V., Czubayko, F., Aigner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sensitive+polymerase+chain+reaction-based+method+for+detection+and+quantification+of+metastasis+in+human+xenograft+mouse+models.">A sensitive polymerase chain reaction-based method for detection and quantification of metastasis in human xenograft mouse models.</a> Clinical &#38; experimental metastasis. 27, 261-271 (2010).</li><li>Schmidt, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+spontaneous+metastasis+in+an+aggressive+breast+carcinoma+model+using+flow+cytometry.">Characterization of spontaneous metastasis in an aggressive breast carcinoma model using flow cytometry.</a> Clinical &#38; experimental metastasis. 17, 537-544 (1999).</li><li>Horwitz, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Substrates+for+Cytochemical+Demonstration+of+Enzyme+Activity.+I.+Some+Substituted+3-Indolyl-Beta-D-Glycopyranosides.">Substrates for Cytochemical Demonstration of Enzyme Activity. I. Some Substituted 3-Indolyl-Beta-D-Glycopyranosides.</a> J. Med. Chem. 7, 574-575 (1964).</li><li>Kruger, A., Schirrmacher, V., Khokha, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+bacterial+lacZ+gene:+an+important+tool+for+metastasis+research+and+evaluation+of+new+cancer+therapies.">The bacterial lacZ gene: an important tool for metastasis research and evaluation of new cancer therapies.</a> Cancer metastasis reviews. 17, 285-294 (1998).</li><li>Arlt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increase+in+gelatinase-specificity+of+matrix+metalloproteinase+inhibitors+correlates+with+antimetastatic+efficacy+in+a+T-cell+lymphoma+model.">Increase in gelatinase-specificity of matrix metalloproteinase inhibitors correlates with antimetastatic efficacy in a T-cell lymphoma model.</a> Cancer research. 62, 5543-5550 (2002).</li><li>Arlt, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+inhibition+of+intra-peritoneal+tumor+growth+and+dissemination+of+human+ovarian+carcinoma+cells+in+nude+mice+by+anti-L1-cell+adhesion+molecule+monoclonal+antibody+treatment.">Efficient inhibition of intra-peritoneal tumor growth and dissemination of human ovarian carcinoma cells in nude mice by anti-L1-cell adhesion molecule monoclonal antibody treatment.</a> Cancer research. 66, 936-943 (2006).</li><li>Banke, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effective+inhibition+of+experimental+metastasis+and+prolongation+of+survival+in+mice+by+a+potent+factor+Xa-specific+synthetic+serine+protease+inhibitor+with+weak+anticoagulant+activity.">Effective inhibition of experimental metastasis and prolongation of survival in mice by a potent factor Xa-specific synthetic serine protease inhibitor with weak anticoagulant activity.</a> Thrombosis and haemostasis. 94, 1084-1093 (2005).</li><li>Borsig, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heparin+and+cancer+revisited:+mechanistic+connections+involving+platelets,+P-selectin,+carcinoma+mucins,+and+tumor+metastasis.">Heparin and cancer revisited: mechanistic connections involving platelets, P-selectin, carcinoma mucins, and tumor metastasis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 98, 3352-3357 (2001).</li><li>Arlt, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LacZ+transgene+expression+in+the+subcutaneous+Dunn/LM8+osteosarcoma+mouse+model+allows+for+the+identification+of+micrometastasis.">LacZ transgene expression in the subcutaneous Dunn/LM8 osteosarcoma mouse model allows for the identification of micrometastasis.</a> J. Orthop. Res. 29, 938-946 (2011).</li><li>Asai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+characterization+of+a+murine+osteosarcoma+cell+line+(LM8)+with+high+metastatic+potential+to+the+lung.">Establishment and characterization of a murine osteosarcoma cell line (LM8) with high metastatic potential to the lung.</a> International journal of cancer. 76, 418-422 (1998).</li><li>Arlt, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+antineoplastic+antibiotic+taurolidine+promotes+lung+and+liver+metastasis+in+two+syngeneic+osteosarcoma+mouse+models+and+exhibits+severe+liver+toxicity.">The antineoplastic antibiotic taurolidine promotes lung and liver metastasis in two syngeneic osteosarcoma mouse models and exhibits severe liver toxicity.</a> International journal of cancer. , (2011).</li><li>Steinmann, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antimetastatic+activity+of+honokiol+in+osteosarcoma.">Antimetastatic activity of honokiol in osteosarcoma.</a> Cancer. , (2011).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

النتائج المعروضة هنا في النموذج Dunn/LM8 OS الماوس إثبات قوة الأسلوب المنشأة حديثا يجمع بين تلطيخ X-غال من lacZ الموسومة الخلايا السرطانية مع نضح في الموقع / التثبيت من أنسجة الرئة. هذا المزيج من الطريقتين يسمح عالية الحساسية كشف الآفات micrometastatic وصولا الى مستوى خلية واحدة ويحسن أيضا من التصور macrometastases على سطح الرئة (الشكل 1)، وكذلك في أقسام الرئة (الشكل 2). في حين أن تلطيخ X-غال كما يسمح للكشف عن (الصغرى) الانبثاث في الأجهزة الأخرى، نضح في الموقع / تثبيت يحسن الكشف عن بؤر المنتشر في الأنسجة الأخرى من الرئة قليلا فقط بسبب لون الدم الطبيعية والأنسجة المتصلة هذه الأجهزة 13. حتى إذا تم توجيه نضح إلى جهاز آخر، مثل الكبد، وإزالة الدم جزئيا فقط تحسين الرهان على النقيضوين X-غال تلطيخ واللون الطبيعي للجهاز. ومع ذلك، فإن هذه الطريقة تنطبق على أي نوع من الخلايا الموسومة lacZ الأورام، وتحسين الكشف بشكل كبير من ورم خبيث الرئة وصولا الى مستوى micrometastases وحيدة الخلية النائمة وتمكن من القياس الكمي سهلة وموثوق بها من micrometastases الكلي و. وجود قيود على هذا الأسلوب وجميع التقنيات الأخرى التي تعتمد على الجينات مراسل، بما في ذلك البروتينات الفلورية ووسيفيراز، هو استقرار للتعبير التحوير. كما هو مبين في الشكل 2D، ملطخة ليس كل الخلايا السرطانية داخل البؤر macrometastatic الأزرق، مما يشير إلى عدم وجود بيتا غالاكتوزيداز النشاط. وهذا قد يكون متعلق ب نخر، ولكن من الأرجح بسبب خسارة التعبير التحوير. لاحظنا أن الخلايا دان وLM8 هي فعالة جدا في تنظيم لأسفل من الجينات المحورة وlacZ الأخرى حتى في ظل اختيار المستمر للتعبير. ولذلك نحن تحولت في الدراسات الحديثة إلى K12 الفئرانوK7M2 وملتحقا الإنسان، وSaOS 143B-2 خلية عظمية خطوط، التي حافظت على كل lacZ مستقرة التعبير في المختبر وكذلك في الجسم الحي ما يصل الى 100٪ مع مرور الوقت. ويضمن استقرارا مرة lacZ التعبير عن ذلك، يمكن تطبيق هذه التقنية في الدراسات مع الجينات التلاعب الخلايا السرطانية، على سبيل المثال ميكانيكي للتحقيق في عملية استعمار الأنسجة 13 وكذلك لتطوير واختبار علاجات جديدة تهدف إلى القضاء على الآفات النقيلي 15 ، 16. وعلاوة على ذلك، يمكن أن تكون بمثابة مؤشر لتحسين تقنيات التصوير الإشعاعي الحالي، مثل PET، CT (الصغرى) والتصوير بالرنين المغناطيسي، وتستخدم للكشف المبكر عن آفات النقيلي. في دراسة حديثة PET (غير منشورة) مع استشفاف مختلفة ونحن في الجسم الحي التحقق من الكشف عن الانبثاث الرئة فيفو السابقين في وقت لاحق مع بروتوكول صفها. في دراسة مستمرة مع الحيوانات صغيرة جديدة الصغرى CT (SkyScan) نحن حتى الآن ABجنيه للكشف عن الانبثاث الرئة في الجسم الحي وصولا الى حجم 0.5 مم وفيفو السابقين وصولا الى 0.3 مم، ولكن نحن نهدف بدرجة وضوح 0.1 ملم. ومن المثير للاهتمام، وهذا هو الحد الأقصى لحجم التي وضعناها للتمييز الكلي من micrometastases مع أسلوب مجتمعة في الموقع ونضح تلطيخ X-غال. هذا يؤكد مرة أخرى حساسية وفائدة هذه التقنية سهلة وفعالة من حيث التكلفة.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> Narketan10 (الكيتامين) </td><td> Vétoquinol AG </td><td></td><td> 100 ملغ / مل حل </td></tr><tr><td> Xylazin (زيلازين) </td><td> سترولي فارما AG </td><td></td><td> 20 ملغ / مل حل </td></tr><tr><td> Prequilan (آسيبرومازين) </td><td> Fatro سبا </td><td></td><td> 10 ملغ / مل حل </td></tr><tr><td> بلدغ نوع مليقط الأوعية الدموية المشبك </td><td> أدوات العلوم الجميلة </td><td> 18051-35 </td><td> المنحني، 35 ملم </td></tr><tr><td> كأس بلاستيك مع غطاء </td><td> Semadeni </td><td> 2988 </td><td> 25 أكواب مل مع الأغطية </td></tr><tr><td> 5-برومو-4-كلورو-3-β-indolyl-D-غالاكتوزيد (X-غال)؛ مسحوق </td><td> Axxora </td><td> ALX-582-002-G005 </td><td> تذوب في N، N-ثنائي methylformamide إلى 40 ملغ / مل، مخزن ضوء محمية في -20 ° C </td></tr><tr><td> حل تلطيخ الأساسية، معايرتها لدرجة الحموضة 7.1، تخزين ضوء محمية في 4 درجات مئوية لمدة كحد أقصى. 1 شهر </td><td> عصامي </td><td></td><td> 100 مل / L 10xPBS، 1.64 جم / L K3Fe (CN) 6، 2.1 جم / L K4Fe (CN) 6، 2 مل / L 1M MgCl2، 2 مل / L 10٪ NP40، 1 مل / L 10٪ الصوديوم Deoxycholate </td></tr><tr><td> PolyFreeze التضمين المتوسطة </td><td> Polysciences؛ الموزع السويسري: برونشويغ </td><td> 19636-1 </td><td></td></tr><tr><td> تضمين القالب </td><td> Polysciences </td><td> 18646A-1 </td><td></td></tr><tr><td> لايكا CM1850 ناظم البرد </td><td> لايكا مايكروسيستمز </td><td></td><td></td></tr><tr><td> الشرائح SuperFrost </td><td> منزل </td><td> J1800AMNZ </td><td></td></tr><tr><td> الأحمر سريع النووية - كبريتات الألومنيوم الحل </td><td> قسم صفاء فالديك GMBH &amp; KG شركة صributor: Medite </td><td> 84-0241-00 </td><td></td></tr><tr><td> اللقاحات جبل </td><td> الكترون الحرارية، الموزع السويسري: Histocom </td><td> 9990412 </td><td></td></tr></tbody></table> الجدول 1. الكواشف والمعدات.

improved visualization of lung metastases at single cell resolution in mice by combined in-situ perfusion of lung tissue and x-gal staining of lacz-tagged tumor cells

ورم خبيث هو السبب الرئيسي للوفاة في معظم أنواع السرطان، وبالتالي التركيز الرئيسي في أبحاث السرطان. ومع ذلك، والكشف عن طريق التصوير الإشعاعي micrometastases والنجاح في القضاء عليها العلاجية تبقى محدودة. بينما النماذج الحيوانية أثبتت أنها لا تقدر بثمن أدوات لأبحاث السرطان 1، رصد / تصور micrometastases لا يزال يشكل تحديا والتقييم غير دقيق من انتشار النقيلي في الدراسات قبل السريرية يؤدي إلى نتائج مخيبة للآمال يحتمل في التجارب السريرية 2. وبالتالي، هناك اهتمام كبير في صقل أساليب الكشف أخيرا للسماح للتكرار وموثوق بها من الانبثاث وصولا الى مستوى خلية واحدة في الأنسجة الطبيعية. التركيز الرئيسي لذلك على التقنيات، التي تسمح للكشف عن الخلايا السرطانية في الجسم الحي، مثل التصوير المقطعي الكمبيوتر الصغيرة (المتناهية الصغر CT)، التصوير المقطعي بوزيترون الانبعاثات (PET)، تلألؤ بيولوجي أو التصوير مضان &lt;سوب&gt; 3،4. نحن حاليا الأمثل لهذه التقنيات في رصد الجسم الحي للنمو الورم الرئيسي والانبثاث في نماذج مختلفة عظمية. ويمكن أيضا بعض من هذه التقنيات يمكن استخدامها لتحليل فيفو السابقين من ورم خبيث بجانب الطرق التقليدية مثل qPCR 5، 6 أو FACS أنواع مختلفة من تلطيخ النسيجية. كمقياس، وضعنا في هذه الدراسة على ترنسفكأيشن مستقرة أو تنبيغ الخلايا السرطانية مع الجينات lacZ ترميز الانزيم البكتيرية β-غالاكتوزيداز أن يؤيض الركيزة مولد اللون 5-برومو-4-كلورو-3-indolyl بيتا-D galactopyranoside-(X-غال) إلى صبغ غير قابلة للذوبان الأزرق النيلي 7 و يسمح حساسة للغاية وانتقائية تلطيخ الأزرق النسيجية من الخلايا السرطانية في الأنسجة الحية السابقين الماوس وصولا الى مستوى خلية واحدة كما هو موضح هنا. هذا هو أداة منخفضة التكلفة وليس المعدات المكثف، والذي يسمح التحقق من صحة الانبثاث الدقيق للدراسات 8 في تقييم جديد لticancer العلاجات 9-11. وهناك عامل يحد من X-غال تلطيخ هو النقيض منخفضة لمثل الدم الحمراء ذات الصلة تلطيخ الأنسجة أوعية دموية أيضا. يمكن في أنسجة الرئة يمكن حل هذه المشكلة عن طريق نضح الرئة في الوضع الطبيعي، وهي تقنية تم إنشاؤها مؤخرا من قبل BORSIG وآخرون ال 12 الذين perfused الرئتين من الفئران تحت التخدير لمسح عليها من الدم وإصلاح وتضمينها في الموقع تحت التضخم من خلال القصبة الهوائية. هذا الأسلوب كما يمنع انهيار الرئة ويحافظ بالتالي مورفولوجية الحويصلات الهوائية الرئة الوظيفية، مما يحسن من نوعية الأنسجة للتحليل النسيجي. في هذه الدراسة، ونحن تصف بروتوكول جديد، والذي يستفيد من مجموعة من X-غال تلطيخ الخلايا lacZ، معربا عن الورم وفي الموقع. التروية وتثبيت من أنسجة الرئة يسمح هذا البروتوكول المكررة عالية الحساسية الكشف عن الخلايا المتنقل واحدة في الرئة ومكنتنا في دراسة حديثة لدetect &quot;نائمة&quot; micrometastases الرئة في نموذج الفأر 13، التي وصفت في الأصل أن تكون غير النقيلي 14.

Watch this Scientific Journal Video about Improved Visualization of Lung Metastases at Single Cell Resolution in Mice by Combined In-situ Perfusion of Lung Tissue and X-Gal Staining of lacZ-Tagged Tum

Improved Visualization of Lung Metastases at Single Cell Resolution in Mice by Combined In-situ Perfusion of Lung Tissue and X-Gal Staining of lacZ-Tagged Tumor Cells

بروتوكول رواية ذكرت في هذه الدراسة الكشف يسمح الانتقائي لالانبثاث الرئة في قرار خلية واحدة في الفئران عن طريق الجمع بين<em&gt; في الموقع</em&gt; نضح الرئة وتثبيت وX-غال من تلطيخ<em&gt; lacZ</em&gt; الموسومة الخلايا السرطانية.

تحسين التصور الانبثاث الرئة في قرار خلية واحدة في الفئران عن طريق الجمع بين<em&gt; في الوضع الطبيعي</em&gt; الإرواء من أنسجة الرئة وX-غال تلوين لل<em&gt; lacZ</em&gt; الكلمات الدلالية الخلايا السرطانية،

Metastasis is the main cause of death in the majority of cancer types and consequently a main focus in cancer research. However, the detection of ...

improved-visualization-lung-metastases-at-single-cell-resolution-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

Improved Visualization of Lung Metastases at Single Cell Resolution in Mice by Combined In-situ Perfusion of Lung Tissue and X-Gal Staining of lacZ-Tagged Tumor Cells

17.2K Views.  Balgrist University Hospital, Zurich. بروتوكول رواية ذكرت في هذه الدراسة الكشف يسمح الانتقائي لالانبثاث الرئة في قرار خلية واحدة في الفئران عن طريق الجمع بين في الموقع نضح الرئة وتثبيت وX-غال من تلطيخ lacZ الموسومة الخلايا السرطانية.

Video: Improved Visualization of Lung Metastases at Single Cell Resolution in Mice by Combined In-situ Perfusion of Lung Tissue and X-Gal Staining of lacZ-Tagged Tumor Cells

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed lung transplantation in humans to become more readily available by enabling the ability to assess organs and expand the donor pool. As this technology expands and improves, the ability to potentially evaluate and improve the quality of substandard lungs prior to transplant is a critical need. In order to more rigorously evaluate these approaches, a reproducible animal model needs to be established that would allow for testing of improved techniques and management of the donated lungs as well as to the lung-transplant recipient. In addition, an EVLP animal model of associated pathologies, e.g., ventilation induced lung injury (VILI), would provide a novel method to evaluate treatments for these pathologies. Here, we describe the development of a rat EVLP lung program and refinements to this method that allow for a reproducible model for future expansion. We also describe the application of this EVLP system to model VILI in rat lungs. The goal is to provide the research community with key information and &#8220;pearls of wisdom&#8221;/techniques that arose from trial and error and are critical to establishing an EVLP system that is robust and reproducible.

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed lung transplantation in humans to become more readily available by enabling the ability to assess organs and expand the donor pool. Here, we describe the development of a rat EVLP program and refinements that allow for a reproducible model for future expansion.

طريقة معزولة<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; الإرواء الرئة في الفئران نموذج: الدروس المستفادة من تطوير برنامج EVLP الجرذ

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed ...

Primary Tumor and MEF Cell Isolation to Study Lung Metastasis

In breast tumorigenesis, the metastatic stage of the disease poses the greatest threat to the affected individual. Normal breast cells with altered genotypes now possess the ability to invade and survive in other tissues. In this protocol, mouse mammary tumors are removed and primary cells are prepared from tumors. The cells isolated from this procedure are then available for gene profiling experiments. For successful metastasis, these cells must be able to intravasate, survive in circulation, extravasate to distant organs, and survive in that new organ system. The lungs are the typical target of breast cancer metastasis. A set of genes have been discovered that mediates the selectivity of metastasis to the lung. Here we describe a method of studying lung metastasis from a genetically engineered mouse model.. Furthermore, another protocol for analyzing mouse embryonic fibroblasts (MEFs) from the mouse embryo is included. MEF cells from the same animal type provide a clue of non-cancer cell gene expression. Together, these techniques are useful in studying mouse mammary tumorigenesis, its associated signaling mechanisms and pathways of the abnormalities in embryos.

The goal of this protocol is to study breast tumorigenesis. With this technique, mouse mammary tumors are removed and primary cells are prepared from tumors. A lung extraction protocol is included for studying lung metastasis. Furthermore, another protocol for analyzing mouse embryonic fibroblasts from the mouse embryo is included.

ورم الابتدائي وMEF عزل الخلايا لدراسة الرئة الانبثاث

In breast tumorigenesis, the metastatic stage of the disease poses the greatest threat to the affected individual. Normal breast cells with altered ...

Evaluation of Lung Metastasis in Mouse Mammary Tumor Models by Quantitative Real-time PCR

Metastatic disease is the spread of malignant tumor cells from the primary cancer site to a distant organ and is the primary cause of cancer associated death 1. Common sites of metastatic spread include lung, lymph node, brain, and bone 2. Mechanisms that drive metastasis are intense areas of cancer research. Consequently, effective assays to measure metastatic burden in distant sites of metastasis are instrumental for cancer research. Evaluation of lung metastases in mammary tumor models is generally performed by gross qualitative observation of lung tissue following dissection. Quantitative methods of evaluating metastasis are currently limited to ex vivo and in vivo imaging based techniques that require user defined parameters. Many of these techniques are at the whole organism level rather than the cellular level 3-6. Although newer imaging methods utilizing multi-photon microscopy are able to evaluate metastasis at the cellular level 7, these highly elegant procedures are more suited to evaluating mechanisms of dissemination rather than quantitative assessment of metastatic burden. Here, a simple in vitro method to quantitatively assess metastasis is presented. Using quantitative Real-time PCR (QRT-PCR), tumor cell specific mRNA can be detected within the mouse lung tissue.

This protocol describes how to use quantitative Real-time PCR (QRT-PCR) to detect tumor cell specific mRNA representing metastasis within the mouse lung tissue.

تقييم الرئة الانبثاث في ماوس الثديية ورم المجموعات بواسطة الكمي في الوقت الحقيقي PCR

Metastatic disease is the spread of malignant tumor cells from the primary cancer site to a distant organ and is the primary cause of cancer associated ...

Open Tracheostomy Gastric Acid Aspiration Murine Model of Acute Lung Injury Results in Maximal Acute Nonlethal Lung Injury

Acid pneumonitis is a major cause of sterile acute lung injury (ALI) in humans. Acid pneumonitis spans the clinical spectrum from asymptomatic to acute respiratory distress syndrome (ARDS), characterized by neutrophilic alveolitis, and injury to both alveolar epithelium and vascular endothelium. Clinically, ARDS is defined by acute onset of hypoxemia, bilateral patchy pulmonary infiltrates and non-cardiogenic pulmonary edema. Human studies have provided us with valuable information about the physiological and inflammatory changes in the lung caused by ARDS, which has led to various hypotheses about the underling mechanisms. Unfortunately, difficulties determining the etiology of ARDS, as well as a wide range of pathophysiology have resulted in a lack of critical information that could be useful in developing therapeutic strategies.
Translational animal models are valuable when their pathogenesis and pathophysiology accurately reproduce a concept proven in both in vitro and clinical settings. Although large animal models (e.g., sheep) share characteristics of the anatomy of human trachea-bronchial tree, murine models provide a host of other advantages including: low cost; short reproductive cycle lending itself to greater data acquisition; a well understood immunologic system; and a well characterized genome leading to the availability of a variety of gene deletion and transgenic strains. A robust model of low pH induced ARDS requires a murine ALI that targets mainly the alveolar epithelium, secondarily the vascular endothelium, as well as the small airways leading to the alveoli. Furthermore, a reproducible injury with wide differences between different injurious and non-injurious insults is important.
The murine gastric acid aspiration model presented here using hydrochloric acid employs an open tracheostomy and recreates a pathogenic scenario that reproduces the low pH pneumonitis injury in humans. Additionally, this model can be used to examine interaction of a low pH insult with other pulmonary injurious entities (e.g., food particles, pathogenic bacteria).

This protocol induces acute lung injury in a mouse that has close fidelity to the pathogenesis of acid pneumonitis observed in humans. We generate a maximal acute nonlethal low pH lung injury and account for differences in rodent-human anatomic respiratory structure using an open tracheostomy coupled with circumferential pressure release.

فتح القصبة الهوائية المعدة حمض الطموح فأري موديل الحاد الرئة إصابة النتائج في القصوى الحاد غير قاتل الرئة الإصابات

Acid pneumonitis is a major cause of sterile acute lung injury (ALI) in humans. Acid pneumonitis spans the clinical spectrum from asymptomatic to acute ...

Generation of Human 3D Lung Tissue Cultures (3D-LTCs) for Disease Modeling

Translation of novel discoveries to human disease is limited by the availability of human tissue-based models of disease. Precision-cut lung slices (PCLS) used as 3D lung tissue cultures (3D-LTCs) represent an elegant and biologically highly relevant 3D cell culture model, which highly resemble in situ tissue due to their complexity, biomechanics and molecular composition. Tissue slicing is widely applied in various animal models. 3D-LTCs derived from human PCLS can be used to analyze responses to novel drugs, which might further help to better understand the mechanisms and functional effects of drugs in human tissue. The preparation of PCLS from surgically resected lung tissue samples of patients, who experienced lung lobectomy, increases the accessibility of diseased and peritumoral tissue. Here, we describe a detailed protocol for the generation of human PCLS from surgically resected soft-elastic patient lung tissue. Agarose was introduced into the bronchoalveolar space of the resectates, thus preserving lung structure and increasing the tissue&#39;s stiffness, which is crucial for subsequent slicing. 500 &#181;m thick slices were prepared from the tissue block with a vibratome. Biopsy punches taken from PCLS ensure comparable tissue sample sizes and further increase the amount of tissue samples. The generated lung tissue cultures can be applied in a variety of studies in human lung biology, including the pathophysiology and mechanisms of different diseases, such as fibrotic processes at its best at (sub-)cellular levels. The highest benefit of the 3D-LTC ex vivo model is its close representation of the in situ human lung in respect of 3D tissue architecture, cell type diversity and lung anatomy as well as the potential for assessment of tissue from individual patients, which is relevant to further develop novel strategies for precision medicine.

Generation of Human 3D Lung Tissue Cultures 3D-LTCs for Disease Modeling

Here, we present a protocol for the preparation of agarose-filled human precision-cut lung slices from resected patient tissue that are suitable for generating 3D lung tissue cultures to model human lung diseases in biological and biomedical studies.

جيل زرع الأنسجة البشرية الرئة 3D (3D-الصلب) للنمذجة المرض

Translation of novel discoveries to human disease is limited by the availability of human tissue-based models of disease. Precision-cut lung slices (PCLS) ...

Quantitative Analysis of Cellular Composition in Advanced Atherosclerotic Lesions of Smooth Muscle Cell Lineage-Tracing Mice

Atherosclerosis remains the leading cause of death worldwide and, despite countless preclinical studies describing promising therapeutic targets, novel interventions have remained elusive. This is likely due, in part, to a reliance on preclinical prevention models investigating the effects of genetic manipulations or pharmacological treatments on atherosclerosis development rather than the established disease. Also, results of these studies are often confounding because of the use of superficial lesion analyses and a lack of characterization of lesion cell populations. To help overcome these translational hurdles, we propose an increased reliance on intervention models that employ investigation of changes in cellular composition at a single cell level by immunofluorescent staining and confocal microscopy. To this end, we describe a protocol for testing a putative therapeutic agent in a murine intervention model including a systematic approach for animal dissection, embedding, sectioning, staining, and quantification of brachiocephalic artery lesions. In addition, due to the phenotypic diversity of cells within late-stage atherosclerotic lesions, we describe the importance of using cell-specific, inducible lineage tracing mouse systems and how this can be leveraged for unbiased characterization of atherosclerotic lesion cell populations. Together, these strategies may assist vascular biologists to more accurately model therapeutic interventions and analyze atherosclerotic disease and will hopefully translate into a higher rate of success in clinical trials.

We propose a standardized protocol to characterize the cellular composition of late-stage murine atherosclerotic lesions including systematic methods of animal dissection, tissue embedding, sectioning, staining, and analysis of brachiocephalic arteries from atheroprone smooth muscle cell lineage tracing mice.

التحليل الكمي لتكوينها الخلوي في الآفات تصلب الشرايين المتقدمة للعضلات الملساء خلية تتبع النسب الفئران

Atherosclerosis remains the leading cause of death worldwide and, despite countless preclinical studies describing promising therapeutic targets, novel ...

Inducing Acute Lung Injury in Mice by Direct Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. Various approaches have been described, such as the inhalation of aerosolized LPS as well as nasal or intratracheal instillation. The presented protocol describes a detailed step-by-step procedure to induce ALI in mice by direct intratracheal LPS instillation and perform FACS analysis of blood samples, bronchoalveolar lavage (BAL) fluid, and lung tissue. After intraperitoneal sedation, the trachea is exposed and LPS is administered via a 22 G venous catheter. A robust and reproducible inflammatory reaction with leukocyte invasion, upregulation of proinflammatory cytokines, and disruption of the alveolo-capillary barrier is induced within hours to days, depending on the LPS dosage used. Collection of blood samples, BAL fluid, and lung harvesting, as well as the processing for FACS analysis, are described in detail in the protocol. Although the use of the sterile LPS is not suitable to study pharmacologic interventions in infectious diseases, the described approach offers minimal invasiveness, simple handling, and good reproducibility to answer mechanistic immunological questions. Furthermore, dose titration as well as the use of alternative LPS preparations or mouse strains allow modulation of the clinical effects, which can exhibit different degrees of ALI severity or early vs. late onset of disease symptoms.

Presented here is a step-by-step procedure to induce acute lung injury in mice by direct intratracheal lipopolysaccharide instillation and to perform FACS analysis of blood samples, bronchoalveolar lavage fluid, and lung tissue. Minimal invasiveness, simple handling, good reproducibility, and titration of disease severity are advantages of this approach.

إحداث إصابات الرئة الحادة في الفئران عن طريق التبيل المباشر للكيس الشحمي داخل الرغامى

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. ...

Normothermic Negative Pressure Ventilation Ex Situ Lung Perfusion: Evaluation of Lung Function and Metabolism

Lung transplantation (LTx) remains the standard of care for end-stage lung disease. A shortage of suitable donor organs and concerns over donor organ quality exacerbated by excessive geographic transportation distance and stringent donor organ acceptance criteria pose limitations to current LTx efforts. Ex situ lung perfusion (ESLP) is an innovative technology that has shown promise in attenuating these limitations. The physiologic ventilation and perfusion of the lungs outside of the inflammatory milieu of the donor body affords ESLP several advantages over traditional cold static preservation (CSP). There is evidence that negative pressure ventilation (NPV) ESLP is superior to positive pressure ventilation (PPV) ESLP, with PPV inducing more significant ventilator-induced lung injury, pro-inflammatory cytokine production, pulmonary edema, and bullae formation. The NPV advantage is perhaps due to the homogenous distribution of intrathoracic pressure across the entire lung surface. The clinical safety and feasibility of a custom NPV-ESLP device have been demonstrated in a recent clinical trial involving extender criteria donor (ECD) human lungs. Herein, the use of this custom device is described in a juvenile porcine model of normothermic NPV-ESLP over a 12 h duration, paying particular attention to management techniques. Pre-surgical preparation, including ESLP software initialization, priming, and de-airing of the ESLP circuit, and the addition of anti-thrombotic, anti-microbial, and anti-inflammatory agents, is specified. The intraoperative techniques of central line insertion, lung biopsy, exsanguination, blood collection, cardiectomy, and pneumonectomy are described. Furthermore, particular focus is paid to anesthetic considerations, with anesthesia induction, maintenance, and dynamic modifications outlined. The protocol also specifies the custom device's initialization, maintenance, and termination of perfusion and ventilation. Dynamic organ management techniques, including alterations in ventilation and metabolic parameters to optimize organ function, are thoroughly described. Finally, the physiological and metabolic assessment of lung function is characterized and depicted in the representative results.

Normothermic Negative Pressure Ventilation Ex Situ Lung Perfusion: Evaluation of Lung Function and Metabolism

This paper describes a porcine model of negative pressure ventilation ex situ lung perfusion, including procurement, attachment, and management on the custom-made platform. Focus is made on anesthetic and surgical techniques, as well as troubleshooting.

تهوية الضغط السلبي Normothermic خارج التروية الرئوية في الموقع : تقييم وظائف الرئة والتمثيل الغذائي

Lung transplantation (LTx) remains the standard of care for end-stage lung disease. A shortage of suitable donor organs and concerns over donor organ ...

Lung Rapid Recovery Procurement Combined with Abdominal Normothermic Regional Perfusion in Controlled Donation after Circulatory Death

Controlled donation after circulatory death (cDCD) has contributed to increasing donor numbers all over the world. Experiences published in the last years confirm that the outcomes after lung transplantation from cDCD are similar to those from brain death donors; however, the utilization of lungs from asystole donors remains low. Several reasons may be involved: different legal frameworks among countries and centers with different premortem interventions, inadequate lung donor care before procurement, or even poor experience with cDCD procedures and protocols.
Initially, the rapid recovery technique was commonly employed for the procurement of thoracic and abdominal organs in cDCD, but, in the last decade, abdominal normothermic regional perfusion (ANRP) with extracorporeal membrane oxygenation devices has become a useful method to restore blood flow to abdominal organs, allowing their quality improvement and their functional assessment prior to transplantation. This makes the donation procedure more complex and generates doubts about injury to the grafts due to dual temperature.
The aim of this article is to describe a protocol based on a single center experience with Maastricht III donors combining lung cooling rapid recovery in the thorax and abdominal normothermic regional perfusion. Tips and tricks focused on premortem interventions and lung procurement procedure techniques are explained. This may help to minimize the reluctance among professionals to use this combined technique and encourage other donor centers to use it, despite the increased complexity of the procedure.

The protocol combines a lung cooling rapid recovery technique with abdominal normothermic regional perfusion for abdominal graft procurement in controlled asystole donors, which is a safe and useful method to expand the donor pool.

شراء التعافي السريع للرئة جنبا إلى جنب مع التروية الإقليمية للبطن في التبرع الخاضع للرقابة بعد موت الدورة الدموية

Controlled donation after circulatory death (cDCD) has contributed to increasing donor numbers all over the world. Experiences published in the last years ...

تصوير الرئة المبتكر باستخدام أقسام اهتزازية مدمجة في الأغاروز

Automated Vibratome Sectioning of Agarose-Embedded Lung Tissue for Multiplex Fluorescence Imaging

Due to its inherent structural fragility, the lung is regarded as one of the more difficult tissues to process for microscopic readouts. To add structural support for sectioning, pieces of lung tissue are commonly embedded in paraffin or OCT compound and cut with a microtome or cryostat, respectively. A more recent technique, known as precision-cut lung slices, adds structural support to fresh lung tissue through agarose infiltration and provides a platform to maintain primary lung tissue in culture. However, due to epitope masking and tissue distortion, none of these techniques adequately lend themselves to the development of reproducible advanced light imaging readouts that would be compatible across multiple antibodies and species. 
To this end, we have developed a tissue-processing pipeline, which utilizes agarose embedding of fixed lung tissue, coupled to automated vibratome sectioning. This facilitated the generation of lung sections from 200 &#181;m to 70 &#181;m thick, in mouse, pig, and human lungs, which require no antigen retrieval, and represent the least "processed" version of the native isolated tissue. Using these slices, we reveal a multiplex imaging readout capable of generating high-resolution images whose spatial protein expression can be used to quantify and better understand the mechanisms underlying lung injury and regeneration.

تسليط الضوء على المؤلف: دراسة التعبير المكاني للبروتين باستخدام أقسام أنسجة الرئة المضمنة في الأغاروز 

We have developed a tissue-processing technique utilizing a vibratome and agarose-embedded lung tissue to generate lung sections, thereby permitting the acquisition of high-resolution images of lung architecture. We employed immunofluorescence staining to observe spatial protein expression using specific lung structural markers.

التقسيم الاهتزازي الآلي لأنسجة الرئة المضمنة في الأغاروز للتصوير الفلوري المتعدد

Due to its inherent structural fragility, the lung is regarded as one of the more difficult tissues to process for microscopic readouts. To add structural ...