ويتم تمويل هذا البحث من قبل المثانة AACR شيبرد هنري جرانت أبحاث السرطان (09-60-30-LI).

وقد تمت الموافقة على الاجراءات التي تجرى على الحيوانات من قبل رعاية الحيوانات المؤسسية واللجنة الاستخدام (IACUC) في جامعة كاليفورنيا في سان فرانسيسكو. 1. خلية التحضير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويزرع في سرطان المثانة خط الخلية البشرية KU-7-luc2-GFP (الفرجار العلوم الحياتية، Hopkinton، MA) في وسائل الاعلام-1640 RPMI تستكمل مع مصل بقري جنيني 10٪ و 50 جنتاميسين ميكروغرام / مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تتم المحافظة على الثقافات على 37 درجة مئوية، و 5٪ CO 2 مع وسائل الاعلام يتغير كل يومين أو ثلاثة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كانت تحصد الخلايا عن طريق الهضم التربسين وعدها باستخدام عدادة الكريات. وأعدت وتعليق خلية واحدة من 2 الخلايا X 6 10 في 50 ميكرولتر في الفوسفات مخزنة المالحة ويحرص على الجليد. </li></ol> 2. Orthotopic نموذج المثانة ورم <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> واستخدمت النساء العاريات (نيو / نو) الفئران 8-10 أسابيع من العمر (سيمونسن مختبر، Gilory، كاليفورنيا). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الستارة معقم فوق وسادة التدفئة لخدمةSA منصة العمليات الجراحية. وتعد عقيمة هلام التشحيم، 24 guage القسطرة مع الإبر مرود، محلول نترات الفضة، والمياه المعقمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هو فعل مخدر عام في الفئران مع isoflurane المستنشقة (3٪ لتحريض، 1-2٪ للصيانة) والحفاظ عليها من خلال الرؤوس. ويطبق مرهم معقم للعين للعيون الحيوان، ويتم استخدام الحرارة منصة للحفاظ على حرارة الجسم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الماوس في موقف ضعيف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فهم بلطف الفرج الحيوان مع ملقط لتحقيق الاستقرار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام قسطرة 24 guage الوريد مع مرود إزالة الإبرة، ومقسطر مجرى البول الماوس. وينبغي استخدام تزييت وافرة. مع مستلق الماوس، ويقع على مجرى البول الخلفي على الفور إلى طيات الفرج والأمامي إلى المهبل. يؤخذ في البداية وبزاوية 45 درجة من أجل يقني؛ يدخل القنية مجرى البول ويمر تحت عظم العانة. ثم يتم أخذ زاوية أكثر الضحلة لتمرير من خلال مجرى البول في المثانة. الحوض بريه لطيفتأكد من تصويب مجرى البول يمكن أن يساعد في كثير من الأحيان. يجب توخي الحذر لتجنب دفع من الصعب جدا ضد المقاومة، وهذا يمكن ان يؤدي الى ثقب مجرى البول أو المثانة. البول ينظر داخل القسطرة يؤكد موقعه داخل تجويف المثانة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح البول من تجويف القسطرة والمثانة باستخدام إبرة مرود. يتم استخدام إبرة مرود لجميع تطلعات وحقن لاحقة، وترك القسطرة في مكانها. وهذا يسمح للحقن كميات دقيقة من خلال القضاء على الفضاء الميت داخل القسطرة، ويجعل القسطرة تكرار لا لزوم لها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتنال من طبقة جلايكان من الظهارة البولية المثانة، ويتم حقن 10 ميكرولتر من نترات الفضة 0.5 م وسمح ليسكن لمدة 10 ثانية. وهذا قد يشكل راسب أبيض مع البول المتبقية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح وتجاهل محتويات راسب والمثانة باستخدام إبرة مرود. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل المثانة عن طريق حقن الماء المعقم 100 ميكروليتر. نضح والتخلص من المياه. Repeفي الغسيل مع الماء المعقم 3 مرات ليصبح المجموع 4 يغسل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يضع ربطة عنق من الحرير 4-0 حول الصماخ مجرى البول إلى انسداد مجرى البول تمهيدا لإزالة القسطرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن معدة مسبقا 2 × 10 6 KU-7-luc2-GFP الخلايا في 50 ميكرولتر باستخدام إبرة مرود. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة القسطرة في وقت واحد وإبرة مرود، وترك مجرى البول المغطي من الحرير التعادل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وسيتم الحفاظ الماوس تحت تخدير عام لمدة 2 ساعة قبل أن يتم إزالة ربطة عنق من الحرير وايقظ الحيوان. </li></ol> 3. الموجات فوق الصوتية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هو فعل تخدير عام مع isoflurane المتبخرة وحافظت عبر مخروط الأنف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وVEVO VisualSonics 770 في الجسم الحي عالية الدقة المتناهية الصغر نظام تصوير (VisualSonics المؤتمر الوطني العراقي، تورونتو، أونتاريو، كندا) مع التحقيق RMV-704 ميغاهيرتز 40 تم استخدامه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الماوس في موقف ضعيف على منصة الموجات فوق الصوتية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأمين أرجل الحيوان هندمع شريط لتجنب الحركة الزائدة خلال التلاعب في مسبار الموجات فوق الصوتية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق هلام الموجات فوق الصوتية لمنطقة الحوض الماوس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أدنى RMV-704 مسبار الموجات فوق الصوتية (40 ميغاهيرتز) على الحوض الماوس للحصول على صور عرضية أو طولية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا تم العثور على الورم، ويمكن حفظ الصور لقياس أبعاد الورم. </li></ol> 4. Bioluminescent التصوير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أداء حقن داخل الصفاق من 200 ميكروليتر (150 ملغ / كلغ) luciferin الركيزة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حث تخدير عام مع المتبخرة isoflurane والحفاظ على طريق مخروط الأنف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الفئران في موقف ضعيف في تصوير التألق الحيوي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد خمس دقائق من حقن luciferin، قياس التألق الحيوي من هذا الحيوان في الفوتونات في الثانية الواحدة. </li></ol> 5. سارنا التحضير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توليف الجيش الملكي النيبالي [أليغنوكليوتيد] على مقياس من 50-100 μmol. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يصلب تكميلية واحدة [أليغنوكليوتيد] الذين تقطعت بهم السبل أناn لsaRNAs المزدوجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مستعدون للدهون، جسيمات متناهية الصغر (الشرطة الوطنية الليبيرية)-سارنا مع دهن ionizable 1،2-dilinoleyl-4-(2 - dimethylaminoethyl) - [1،3]-dioxolane (DLinKC2-DMA)، disteroylphosphatidyl الكولين، والكولسترول، وPEG-DMG باستخدام تشكيل حويصلة عفوية إجراء صياغة كما هو موضح سابقا. 1 </li></ol> 6. داخل المثانة الإدارة وضعت من سارنا <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد تأسيس ورم المثانة orthotopic نموذج، يتم التعامل مع الفئران داخل المثانة RNA تفعيل صغيرة (سارنا) التي صيغت في جزيئات الدهون (LNPs) (الجدول 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تم تأسيس تخدير عام والمحافظة عليها مع المتبخرة isoflurane، ويتم تطبيقها العقيمة تشحيم العيون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الحيوان في موقف ضعيف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء قسطرة مجرى البول كما هو موضح سابقا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يضع ربطة عنق من الحرير 4-0 حول مجرى البول والقسطرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح كل البول من القسطرة والمثانة باستخدام حقنة فارغة وإبرة مرود. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن الشرطة الوطنية الليبيرية، سارنا intravesically لجرعة ما مجموعه 50 ميكرولتر (3 ملغ / كلغ). إزالة القسطرة في وقت واحد وإبرة مرود، وترك مجرى البول المغطي من الحرير التعادل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وسوف تظل الماوس تخدير مع مجرى البول المغطي لمدة 2 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدأ العلاج داخل المثانة مع الشرطة الوطنية الليبيرية، سارنا في يوم 4 بعد زرع ورم. عولجت فئران متسلسل، كل 3 أيام، على ما مجموعه 14 العلاجات. </li></ol> 7. ممثل النتائج يمكن رصد أورام المثانة الناجمة عن KU-7-luc2-GFP الخلايا عن طريق التصوير bioluminescent luciferase المراسل (الشكل 1A وجيم) والموجات فوق الصوتية المثانة (الشكل 1B و D). الأورام غالبا ما تكون قابلة للكشف في غضون 3-5 أيام بعد تلقيح الخلية. وجدنا نجاح زرع المثانة ورم في أكثر من 90٪ من الفئران. كما المعاملة مع الرنا المزدوج الجديلة داخل المثانة تستتبعه، ويمكن رصد تطور ورم وايعشر هذه الطرائق. بعد أن تتم التضحية الحيوانية، ويمكن أيضا نمو الورم وأكد أن استخدام GFP مضان. بشكل عام، تعني التألق الحيوي يرتبط الأبعاد بالموجات فوق الصوتية سيلة لأورام المثانة، كما يرى بصريا في أرقام 1C و 1D. ومع ذلك، بعد أن تم التضحية بالحيوانات وتأكدت الورم عن طريق GFP، وجدنا أن التألق الحيوي يرتبط بشكل وثيق مع وجود ورم قابلة للحياة من فعل قياسات بالموجات فوق الصوتية. وكان هذا واضح بشكل خاص بين الفئران التي عولجت مع سارنا (على العكس من الضوابط) لأن المتبقي ندبا في الفئران التي عولجت في كثير من الأحيان تصور بواسطة الموجات فوق الصوتية ولكن لا يمكن تفريقها عن ورم الحية. <img src="/files/ftp_upload/4207/4207fig1.jpg" alt="الشكل 1" /> الشكل 1. حركية نمو الورم من أورام المثانة. (A) التصوير ضوء بارد يقيس luciferase النشاط ضمن أورام المثانة لتأكيد مكان ونموها. (ب) في ultrasoun المثانة فيفود باستخدام مسبار 40MHz تنتج صورا ورم أبعادها يمكن قياسها بدقة. (ج) الرسوم البيانية التي توضح زيادة الورم التقدمية في أبعاد التألق الحيوي والموجات فوق الصوتية. تمثل القيم يعني (+ / - الانحراف المعياري) في الفترة من 6 قياسات الحيوانات. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/4207/4207fig1large.jpg" target="_blank">انقر هنا لعرض أكبر شخصية</a> .

<ol>
	<li>Semple, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rational+design+of+cationic+lipids+for+siRNA+delivery.">Rational design of cationic lipids for siRNA delivery.</a> Nature. 28, 172-176 (2010).</li><li>Li, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+dsRNAs+induce+transcriptional+activation+in+human+cells.">Small dsRNAs induce transcriptional activation in human cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103, 17337-17342 (2006).</li><li>Chen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antitumor+effect+of+dsRNA-induced+p21(WAF1/CIP1)+gene+activation+in+human+bladder+cancer+cells.">Antitumor effect of dsRNA-induced p21(WAF1/CIP1) gene activation in human bladder cancer cells.</a> Molecular cancer therapeutics. 7, 698-703 (2008).</li><li>Chancellor, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preliminary+results+of+myoblast+injection+into+the+urethra+and+bladder+wall:+a+possible+method+for+the+treatment+of+stress+urinary+incontinence+and+impaired+detrusor+contractility.">Preliminary results of myoblast injection into the urethra and bladder wall: a possible method for the treatment of stress urinary incontinence and impaired detrusor contractility.</a> Neurourology and urodynamics. 19, 279-287 (2000).</li><li>Hadaschik, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+validated+mouse+model+for+orthotopic+bladder+cancer+using+transurethral+tumour+inoculation+and+bioluminescence+imaging.">A validated mouse model for orthotopic bladder cancer using transurethral tumour inoculation and bioluminescence imaging.</a> BJU international. 100, 1377-1384 (2007).</li><li>Fu, C., Apelo, C. A., Torres, B., Thai, K. H., Hsieh, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+Bladder+Wall+Injection.">Mouse Bladder Wall Injection.</a> J. Vis. Exp. (53), e2523 (2011).</li><li>Dobek, G. L., Godbey, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Orthotopic+Model+of+Murine+Bladder.">An Orthotopic Model of Murine Bladder.</a> Cancer. J. Vis. Exp. (48), 2535 (2011).</li><li>Dinney, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+metastatic+variants+from+human+transitional+cell+carcinoma+passaged+by+orthotopic+implantation+in+athymic+nude+mice.">Isolation and characterization of metastatic variants from human transitional cell carcinoma passaged by orthotopic implantation in athymic nude mice.</a> The Journal of urology. 154, 1532-1538 (1995).</li></ol>

LCL هو المخترع في انتظار طلبات براءات الاختراع المتعلقة سارنا التي تم رفعها من قبل جامعة كاليفورنيا في سان فرانسيسكو ورخص للأدوية Alnylam.

نقدم لبروتوكول لإنشاء نموذج الفأر طعم أجنبي orthotopic ورم المثانة يليها العلاج داخل المثانة من الأورام مع سارنا الشرطة الوطنية الليبيرية وضعت والتي تستهدف مروجي P21 CIP1/WAF1 (P21) لتفعيل النسخي. 2، 3 والاورام الناتجة يمكن أن تكون وأكد ورصدها مع التصوير بالموجات فوق ...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليق (اختياري) </td></tr><tr><td> KU-7-لوك-GFP الخلايا </td><td> الفرجار </td><td> 128091 </td><td></td></tr><tr><td> عارية الفئران الغدة الصعترية (نيو / نو) </td><td> سيمونسن مختبرات </td><td> 6-7 أسابيع من العمر </td><td> سيم: (NCR) نيو / نو fisol </td></tr><tr><td> الموجات فوق الصوتية وحدة </td><td> Visualsonics </td><td> VEVO 770 </td><td> RMV-704 مسبار </td></tr><tr><td> تلألؤ بيولوجي وحدة </td><td> الفرجار </td><td> IVIS الطيف </td><td></td></tr><tr><td> إكسل safelet القسطرة </td><td> الصياد </td><td> 14-841-21 </td><td> 24G X ¾ &quot; </td></tr><tr><td> نترات الفضة </td><td> سيغما </td><td> S8157 </td><td></td></tr><tr><td> هاميلتون محقنة </td><td> هاميلتون المشتركMPANY </td><td> 80301 </td><td></td></tr><tr><td> الشرطة الوطنية الليبيرية، سارنا </td><td> Alnylam صيدلة </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> الجدول رقم 1. كواشف ومعدات معينة.

an orthotopic bladder tumor model and the evaluation of intravesical sarna treatment

نحن نقدم طريقة جديدة لعلاج سرطان المثانة مع تسليم intravesically RNA تفعيل صغيرة (سارنا) في الفأر طعم أجنبي orthotopic نموذج ورم المثانة. يتم تأسيس نموذج الفأر بواسطة قسطرة الإحليل تحت التخدير العام بالاستنشاق. ومن ثم قدم حرق كيميائي على الغشاء المخاطي المثانة داخل المثانة باستخدام محلول نترات الفضة لعرقلة طبقة جلايكان المثانة وتمكن خلايا لنعلق. بعد عدة يغسل بماء معقم، الإنسان سرطان المثانة KU-7-luc2-GFP الخلايا تغرس من خلال قسطرة في المثانة ليسكن لمدة 2 ساعة. ويؤكد نمو لاحق من أورام المثانة ورصدها بواسطة الموجات فوق الصوتية في الجسم الحي المثانة والتصوير bioluminescent. ثم يتم التعامل مع الأورام intravesically مع سارنا صيغت في جزيئات الدهون (LNPs). ويتم رصد نمو الورم مع الموجات فوق الصوتية والتألق الحيوي. وأظهرت جميع خطوات من هذا الإجراء في شريط الفيديو المرافق له.

Watch this Scientific Journal Video about An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment at JoVE.com

An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment

إنشاء ورم المثانة orthotopic نموذج لتقييم آثار antitumor من سارنا تسليم intravesically ونمو الورم الرصد بواسطة الموجات فوق الصوتية والتصوير bioluminescent.

ورم في المثانة Orthotopic النموذجي وتقييم المعالجة سارنا داخل المثانة

We present a novel method for treating bladder cancer with intravesically delivered small activating RNA (saRNA) in an orthotopic xenograft mouse bladder ...

an-orthotopic-bladder-tumor-model-evaluation-intravesical-sarna

Research

JoVE Journal

Medicine

14.7K Views.  University of California, San Francisco. إنشاء ورم المثانة orthotopic نموذج لتقييم آثار antitumor من سارنا تسليم intravesically ونمو الورم الرصد بواسطة الموجات فوق الصوتية والتصوير bioluminescent.

Video: An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and subsequent cell adhesion. After their bladders are transurethrally catheterized and drained, animals are again catheterized to permit insertion of a platinum wire into bladders without damaging the urethra or bladder. The catheters are made of Teflon to serve as an insulator for the wire, which will conduct electrical current into the bladder to create a burn injury. An electrocautery unit is used to deliver 2.5W to the exposed end of the wire, burning away extracellular layers and providing attachment sites for carcinoma cells that are delivered in suspension to the bladder through a subsequent catheterization. Cells remain in the bladder for 90 minutes, after which the catheters are removed and the bladders allowed to drain naturally. The development of tumor is monitored via ultrasound. Specific attention is paid to the catheterization technique in the accompanying video.

Bladder tumors are established in female mice in a minimally invasive fashion through catheterization, local cauterization, and subsequent adhesion of carcinoma cells to the burn sites.

نموذج مثلي من سرطان المثانة الفئران

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient management strategies. Orthotopic mouse models of oral cancer have been developed to facilitate the study of factors that impact invasion and serve as model system for evaluating anti-tumor therapeutics. In these systems, visualization of disseminated tumor cells within oral cavity tissues has typically been conducted by either conventional histology or with in vivo bioluminescent methods. A primary drawback of these techniques is the inherent inability to accurately visualize and quantify early tumor cell invasion arising from the primary site in three dimensions. Here we describe a protocol that combines an established model for squamous cell carcinoma of the tongue (SCOT) with two-photon imaging to allow multi-vectorial visualization of lingual tumor spread. The OSC-19 head and neck tumor cell line was stably engineered to express the F-actin binding peptide LifeAct fused to the mCherry fluorescent protein (LifeAct-mCherry). Fox1nu/nu mice injected with these cells reliably form tumors that allow the tongue to be visualized by ex-vivo application of two-photon microscopy. This technique allows for the orthotopic visualization of the tumor mass and locally invading cells in excised tongues without disruption of the regional tumor microenvironment. In addition, this system allows for the quantification of tumor cell invasion by calculating distances that invaded cells move from the primary tumor site. Overall this procedure provides an enhanced model system for analyzing factors that contribute to SCOT invasion and therapeutic treatments tailored to prevent local invasion and distant metastatic spread. This method also has the potential to be ultimately combined with other imaging modalities in an in vivo setting.

A comprehensive overview of the techniques involved in generating a mouse model of oral cancer and quantitative monitoring of tumor invasion within the tongue through multi-photon microscopy of labeled cells is presented. This system can serve as a useful platform for the molecular assessment and drug efficacy of anti-invasive compounds.

متعدد الفوتون التصوير من غزو خلايا الورم في الفأر نموذج مثلي الفم سرطان الخلايا الحرشفية

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Combination Radiotherapy in an Orthotopic Mouse Brain Tumor Model

Glioblastoma multiforme (GBM) are the most common and aggressive adult primary brain tumors1. In recent years there has been substantial progress in the understanding of the mechanics of tumor invasion, and direct intracerebral inoculation of tumor provides the opportunity of observing the invasive process in a physiologically appropriate environment2. As far as human brain tumors are concerned, the orthotopic models currently available are established either by stereotaxic injection of cell suspensions or implantation of a solid piece of tumor through a complicated craniotomy procedure3. In our technique we harvest cells from tissue culture to create a cell suspension used to implant directly into the brain. The duration of the surgery is approximately 30 minutes, and as the mouse needs to be in a constant surgical plane, an injectable anesthetic is used. The mouse is placed in a stereotaxic jig made by Stoetling (figure 1). After the surgical area is cleaned and prepared, an incision is made; and the bregma is located to determine the location of the craniotomy. The location of the craniotomy is 2 mm to the right and 1 mm rostral to the bregma. The depth is 3 mm from the surface of the skull, and cells are injected at a rate of 2 &mu;l every 2 minutes. The skin is sutured with 5-0 PDS, and the mouse is allowed to wake up on a heating pad. From our experience, depending on the cell line, treatment can take place from 7-10 days after surgery. Drug delivery is dependent on the drug composition. For radiation treatment the mice are anesthetized, and put into a custom made jig. Lead covers the mouse's body and exposes only the brain of the mouse. The study of tumorigenesis and the evaluation of new therapies for GBM require accurate and reproducible brain tumor animal models. Thus we use this orthotopic brain model to study the interaction of the microenvironment of the brain and the tumor, to test the effectiveness of different therapeutic agents with and without radiation.

The purpose of this article is to describe the use of an orthotopic glioblastoma model for chemoradiation studies. This article will go though cell processing, implanting, and radiotherapy of the mouse using an intracranial model.

العلاج الإشعاعي مجموعة في نموذج الفأر Orthotopic استئصال ورم من الدماغ

Glioblastoma multiforme (GBM) are the most common and aggressive adult primary brain tumors1. In recent years there has been substantial progress in the ...

An Orthotopic Mouse Model of Anaplastic Thyroid Carcinoma

Several types of animal models of human thyroid carcinomas have been established, including subcutaneous xenograft and orthotopic implantation of cancer cells into immunodeficient mice. Subcutaneous xenograft models have been valuable for preclinical screening and evaluation of new therapeutic treatments. There are a number of advantages to using a subcutaneous model; 1) rapid, 2) reproducible, and 3) tumor establishment, growth, and response to therapeutic agents may be monitored by visual inspection. However, substantial evidence has shed light on the short-comings of subcutaneous xenograft models1-3. For instance, medicinal treatments demonstrating curative properties in subcutaneous xenograft models often have no notable impact on the human disease. The microenvironment of the site of xenographic transplantation or injection lies at the heart of this dissimilarity.
Orthotopic tumor xenograft models provide a more biologically relevant context in which to study the disease. The advantages of implanting diseased cells or tissue into their anatomical origin equivalent within a host animal includes a suitable site for tumor-host interactions, development of disease-related metastases and the ability to examine site-specific influence on investigational therapeutic remedies. Therefore, orthotopic xenograft models harbor far more clinical value because they closely reproduce human disease. For these reasons, a number of groups have taken advantage of an orthotopic thyroid cancer model as a research tool4-7.
Here, we describe an approach that establishes an orthotopic model for the study of anaplastic thyroid carcinoma (ATC), which is highly invasive, resists treatment, and is virtually fatal in all diagnosed patients. Cultured ATC cells are prepared as a dissociated cellular suspension in a solution containing a basement membrane matrix. A small volume is slowly injected into the right thyroid gland. Overall appearance and health of the mice are monitored to ensure minimal post-operative complications and to gauge pathological penetrance of the cancer. Mice are sacrificed at 4 weeks, and tissue is collected for histological analysis. Animals may be taken at later time-points to examine more advance progression of the disease. Production of this orthotopic mouse model establishes a platform that accomplishes two objectives: 1) further our understanding of ATC pathology, and 2) screen current and future therapeutic agents for efficacy in combating ATC.

Generation of an orthotopic mouse model of anaplastic thyroid carcinoma is described here. This technique employs surgical placement of human anaplastic thyroid cancer cells into the thyroid of immunodeficient mice, thus creating a more clinically relevant setting to study disease progression as well as screen innovative therapeutic interventions.

ماوس نموذج مثلي من سرطان الغدة الدرقية كشمي

Several types of animal models of human thyroid carcinomas have been established, including subcutaneous xenograft and orthotopic implantation of cancer ...

An Orthotopic Bladder Cancer Model for Gene Delivery Studies

Bladder cancer is the second most common cancer of the urogenital tract and novel therapeutic approaches that can reduce recurrence and progression are needed. The tumor microenvironment can significantly influence tumor development and therapy response. It is therefore often desirable to grow tumor cells in the organ from which they originated. This protocol describes an orthotopic model of bladder cancer, in which MB49 murine bladder carcinoma cells are instilled into the bladder via catheterization. Successful tumor cell implantation in this model requires disruption of the protective glycosaminoglycan layer, which can be accomplished by physical or chemical means. In our protocol the bladder is treated with trypsin prior to cell instillation. Catheterization of the bladder can also be used to deliver therapeutics once the tumors are established. This protocol describes the delivery of an adenoviral construct that expresses a luciferase reporter gene. While our protocol has been optimized for short-term studies and focuses on gene delivery, the methodology of mouse bladder catheterization has broad applications.

Implantation of cancer cells into the organ of origin can serve as a useful preclinical model to evaluate novel therapies. MB49 bladder carcinoma cells can be grown within the bladder following intravesical instillation. This protocol demonstrates catheterization of the mouse bladder for the purpose of tumor implantation and adenoviral delivery.

وسرطان المثانة نموذج مثلي للدراسات توصيل الجينات

Bladder cancer is the second most common cancer of the urogenital tract and novel therapeutic approaches that can reduce recurrence and progression are ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but rather the formation of distinct metastasis, the ability to effectively model this progression pre-clinically is of high value. In this model, cells are directly implanted into the ventral lobe of the prostate in Balb/c athymic mice, and allowed to progress for 4-6 weeks. At experiment termination, several distinct endpoints can be measured, such as size and molecular characterization of the primary tumor, the presence and quantification of circulating tumor cells in the blood and bone marrow, and formation of metastasis to the lung. In addition to a variety of endpoints, this model provides a picture of a cells ability to invade and escape the primary organ, enter and survive in the circulatory system, and implant and grow in a secondary site. This model has been used effectively to measure metastatic response to both changes in protein expression as well as to response to small molecule therapeutics, in a short turnaround time.

This orthotopic model of human prostate cancer allows for quantification of tumor size, circulating tumor cells, and formation of distinct metastasis to the lung. As cells must escape the primary organ, enter the blood stream, and implant into a secondary site, this model effectively recapitulates the scenario in humans.

على الفئران نموذج مثلي من سرطان البروستاتا البشرية الانبثاث

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

Minimally Invasive Establishment of Murine Orthotopic Bladder Xenografts

Orthotopic bladder cancer xenografts are the gold standard to study molecular cellular manipulations and new therapeutic agents&#160;in vivo. Suitable cell lines are inoculated either by intravesical instillation (model of nonmuscle invasive growth) or intramural injection into the bladder wall (model of invasive growth). Both procedures are complex and highly time-consuming. Additionally, the superficial model has its shortcomings due to the lack of cell lines that are tumorigenic following instillation. Intramural injection, on the other hand, is marred by the invasiveness of the procedure and the associated morbidity for the host mouse.
With these shortcomings in mind, we modified previous methods to develop a minimally invasive approach for creating orthotopic bladder cancer xenografts. Using ultrasound guidance we have successfully performed percutaneous inoculation of the bladder cancer cell lines UM-UC1, UM-UC3 and UM-UC13 into 50 athymic nude. We have been able to demonstrate that this approach is time efficient, precise and safe. With this technique, initially a space is created under the bladder mucosa with PBS, and tumor cells are then injected into this space in a second step. Tumor growth is monitored at regular intervals with bioluminescence imaging and ultrasound. The average tumor volumes increased steadily in in all but one of our 50 mice over the study period.
In our institution, this novel approach, which allows bladder cancer xenograft inoculation in a minimally-invasive, rapid and highly precise way, has replaced the traditional model.

The established technique to inoculate primary invasive orthotopic bladder cancer xenografts requires laparotomy and mobilization of the bladder. This procedure inflicts significant morbidity on the mice, is technically challenging and time-consuming. We therefore developed a high-precision, percutaneous approach utilizing ultrasound guidance.

مؤسسة المناظير الفئران مثلي المثانة Xenografts

Orthotopic bladder cancer xenografts are the gold standard to study molecular cellular manipulations and new therapeutic agents&#160;in vivo. Suitable ...

Evaluation of Tumor-infiltrating Leukocyte Subsets in a Subcutaneous Tumor Model

Specialized immune cells that infiltrate the tumor microenvironment regulate the growth and survival of neoplasia.&#160; Malignant cells must elude or subvert anti-tumor immune responses in order to survive and flourish. Tumors take advantage of a number of different mechanisms of immune &#8220;escape,&#8221; including the recruitment of tolerogenic DC, immunosuppressive regulatory T cells (Tregs), and myeloid-derived suppressor cells (MDSC) that inhibit cytotoxic anti-tumor responses. Conversely, anti-tumor effector immune cells can slow the growth and expansion of malignancies: immunostimulatory dendritic cells, natural killer cells which harbor innate anti-tumor immunity, and cytotoxic T cells all can participate in tumor suppression. The balance between pro- and anti-tumor leukocytes ultimately determines the behavior and fate of transformed cells; a multitude of human clinical studies have borne this out. Thus, detailed analysis of leukocyte subsets within the tumor microenvironment has become increasingly important. Here, we describe a method for analyzing infiltrating leukocyte subsets present in the tumor microenvironment in a mouse tumor model. Mouse B16 melanoma tumor cells were inoculated subcutaneously in C57BL/6 mice. At a specified time, tumors and surrounding skin were resected en bloc and processed into single cell suspensions, which were then stained for multi-color flow cytometry. Using a variety of leukocyte subset markers, we were able to compare the relative percentages of infiltrating leukocyte subsets between control and chemerin-expressing tumors. Investigators may use such a tool to study the immune presence in the tumor microenvironment and when combined with traditional caliper size measurements of tumor growth, will potentially allow them to elucidate the impact of changes in immune composition on tumor growth. Such a technique can be applied to any tumor model in which the tumor and its microenvironment can be resected and processed.

This protocol describes a method for the detailed evaluation of leukocyte subsets within the tumor microenvironment in a mouse tumor model. Chemerin-expressing B16 melanoma cells were implanted subcutaneously into syngeneic mice. Cells from the tumor microenvironment were then stained and analyzed by flow cytometry, allowing for detailed leukocyte subset analyses.

تقييم-التسلل ورم خلايا الدم البيضاء مجموعات فرعية في ورم تحت الجلد نموذج

Specialized immune cells that infiltrate the tumor microenvironment regulate the growth and survival of neoplasia.&#160; Malignant cells must elude or ...

Evaluation of the Efficacy of the H. pylori Protein HP-NAP as a Therapeutic Tool for Treatment of Bladder Cancer in an Orthotopic Murine Model

Bladder cancer is one of the most common malignancies of the urogenital tract. Intravesical injection of Bacillus Calmette-Gu&#233;rin (BCG) is the gold standard treatment for the high-grade non-muscle invasive bladder cancer (NMIBC). However, since the treatment-related side effects are relevant, newer biological response modifiers with a better benefit/side effects ratio are needed.
The tumour microenvironment can influence both tumour development and therapy efficacy. In order to obtain a good model, it is desirable to implant tumour cells in the organ from which the cancer originates.
In this protocol, we describe a method for establishing a tumour in the bladder cavity of female mice and subsequent delivery of therapeutic agents; the latter are exemplified by our use of Helicobacter pylori neutrophil activating protein (HP-NAP). A preliminary chemical burn of the mucosa, followed by the injection of mouse urothelial carcinoma cell line MB49 via urethral catheterization, enables the cells to attach to the bladder mucosa. After a period, required to allow an initial proliferation of the cells, mice are treated with HP-NAP, administrated again via catheterization. The anti-tumour activity of HP-NAP is evaluated comparing the tumour volume, the extent of necrosis and the degree of vascularization between vehicle- and HP-NAP-treated animals.

Evaluation of the Efficacy of the H. pylori Protein HP-NAP as a Therapeutic Tool for Treatment of Bladder Cancer in an Orthotopic Murine Model

Here the method to establish a syngeneic mouse model of orthotopic bladder tumour to evaluate the anti-tumour efficacy of the bacterial protein HP-NAP is described.

تقييم فعالية<em&gt; H. بيلوري</em&gt; البروتين HP-NAP كأداة علاجية لعلاج سرطان المثانة في مثلي فأري موديل

Bladder cancer is one of the most common malignancies of the urogenital tract. Intravesical injection of Bacillus Calmette-Gu&#233;rin (BCG) is the gold ...

A "Patient-Like" Orthotopic Syngeneic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma Metastasis

The majority of cancer-related deaths are caused by the metastasis of the cancer rather than the primary tumor itself. Yet, the underlying mechanisms of cancer metastasis are still unclear. Animal models are essential for elucidating the mechanisms and for evaluating novel strategies for the treatment of metastatic cancers. Here, an in-depth description of a &#8220;patient-like&#8221; orthotopic syngeneic mouse model for exploring the mechanisms of metastasis of solid organ tumors is provided. The survival surgical implantation of BNL 1ME A.7R.1 mouse hepatocellular carcinoma cells directly into the liver (the organ of origin) of the inbred wild-type immune competent laboratory mouse strain, BALB/c is described. The success and reproducibility of this methodology recommends it for widespread use in elucidating the biological mechanisms of solid organ cancer metastasis.

The metastatic spread of cancer is the major cause of cancer-related deaths. We provide an in-depth description of our survival surgery methodology for establishing a &#8220;patient-like&#8221; orthotopic syngeneic mouse model system for studying the mechanisms of metastasis in solid organ tumors.

A &quot;المريض مثل&quot; مثلي مسانج نموذج الفأر من سرطان الكبد الانبثاث

The majority of cancer-related deaths are caused by the metastasis of the cancer rather than the primary tumor itself. Yet, the underlying mechanisms of ...

ورم في المثانة Orthotopic النموذجي وتقييم المعالجة سارنا داخل المثانة

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video