Name: Video: Videomorphometric Analysis of Hypoxic Pulmonary Vasoconstriction of Intra-pulmonary Arteries Using Murine Precision Cut Lung Slices
Uploaded: 2014-01-14T14:15:00
Duration: 13 min 32 s

هذا البحث برعاية نظام التميز العنقودي لأمراض القلب والرئة.

<ol>
	<li>Weissmann, N., Akkayagil, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+features+of+hypoxic+pulmonary+vasoconstriction+in+mice.">Basic features of hypoxic pulmonary vasoconstriction in mice.</a> Respir. Physiol. Neurobiol. 139, 191-202 (2004).</li><li>Leach, R. M., Hill, H. M., Snetkov, V. A., Robertson, T. P., Ward, J. P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Divergent+roles+of+glycolysis+and+the+mitochondrial+electron+transport+chain+in+hypoxic+pulmonary+vasoconstriction+of+the+rat:+identity+of+the+hypoxic+sensor.">Divergent roles of glycolysis and the mitochondrial electron transport chain in hypoxic pulmonary vasoconstriction of the rat: identity of the hypoxic sensor.</a> J. Physiol. 536, 211-224 (2001).</li><li>Tabuchi, A., Mertens, M., Kuppe, H., Pries, A. R., Kuebler, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+microscopy+of+the+murine+pulmonary+microcirculation.">Intravital microscopy of the murine pulmonary microcirculation.</a> J. Appl. Physiol. 104 (2), 338-3346 (2008).</li><li>Sylvester, J. T., Shimoda, L. A., Aaronson, P. I., Ward, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxic+pulmonary+vasoconstriction.">Hypoxic pulmonary vasoconstriction.</a> Physiol. Rev. 92 (1), 367-520 (2012).</li><li>Schumacker, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+cell+hypoxia:+role+of+mitochondrial+reactive+oxygen+species+signaling+in+triggering+responses.">Lung cell hypoxia: role of mitochondrial reactive oxygen species signaling in triggering responses.</a> Proc. Am. Thorac. Soc. 8 (6), 477-4784 (2011).</li><li>Paddenberg, R., K&#246;nig, P., Faulhammer, P., Goldenberg, A., Pfeil, U., Kummer, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxic+vasoconstriction+of+partial+muscular+intra-acinar+pulmonary+arteries+in+murine+precision+cut+lung+slices.">Hypoxic vasoconstriction of partial muscular intra-acinar pulmonary arteries in murine precision cut lung slices.</a> Respir. Res. 29 (7), 93-109 (2006).</li><li>Paddenberg, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+complex+II+is+essential+for+hypoxia-induced+pulmonary+vasoconstriction+of+intra-+but+not+of+pre-acinar+arteries.">Mitochondrial complex II is essential for hypoxia-induced pulmonary vasoconstriction of intra- but not of pre-acinar arteries.</a> Cardiovasc. Res. 93 (4), 702-710 (2012).</li><li>Wang, L., Yin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxic+pulmonary+vasoconstriction+requires+connexin+40-mediated+endothelial+signal+conduction.">Hypoxic pulmonary vasoconstriction requires connexin 40-mediated endothelial signal conduction.</a> J. Clin. Invest. 122 (11), 4218-4230 (2012).</li><li>Archer, S. L., Huang, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+distribution+of+electrophysiologically+distinct+myocytes+in+conduit+and+resistance+arteries+determines+their+response+to+nitric+oxide+and.">Differential distribution of electrophysiologically distinct myocytes in conduit and resistance arteries determines their response to nitric oxide and.</a> 78, 431-442 (1996).</li><li>Yamaguchi, K., Suzuki, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Response+of+intra-acinar+pulmonary+microvessels+to+hypoxia,+hypercapnic+acidosis,+and+isocapnic+acidosis.">Response of intra-acinar pulmonary microvessels to hypoxia, hypercapnic acidosis, and isocapnic acidosis.</a> Circ. Res. 82, 722-728 (1998).</li><li>Bennie, R. E., Packer, C. S., Powell, D. R., Jin, N., Rhoades, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biphasic+contractile+response+of+pulmonary+artery+to+hypoxia.">Biphasic contractile response of pulmonary artery to hypoxia.</a> Am. J. Physiol. 261(2 Pt. 1, 156-163 (1991).</li><li>Glazier, J. B., Murray, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sites+of+pulmonary+vasomotor+reactivity+in+the+dog+during+alveolar+hypoxia+and+serotonin+and+histamine+infusion).">Sites of pulmonary vasomotor reactivity in the dog during alveolar hypoxia and serotonin and histamine infusion).</a> J. Clin. Invest. 50 (12), 2550-2558 (1971).</li><li>Bhattacharya, J., Staub, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+measurement+of+microvascular+pressures+in+the+isolated+perfused+dog+lung.">Direct measurement of microvascular pressures in the isolated perfused dog lung.</a> Science. 210, 327-328 (1980).</li><li>Kuebler, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+imaging+assessment+of+pulmonary+vascular+responses.">Real-time imaging assessment of pulmonary vascular responses.</a> Proc. Am. Thorac. Soc. 8 (6), 458-4565 (2011).</li><li>Martin, C., Uhlig, S., Ullrich, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Videomicroscopy+of+methacholine-induced+contraction+of+individual+airways+in+precision-cut+lung+slices.">Videomicroscopy of methacholine-induced contraction of individual airways in precision-cut lung slices.</a> Eur. Respir. J. 9 (12), 2479-2487 (1996).</li><li>Grimminger, F., Spriestersbach, R., Weissmann, N., Walmrath, D., Seeger, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+generation+and+hypoxic+vasoconstriction+in+buffer-perfused+rabbit+lungs.">Nitric oxide generation and hypoxic vasoconstriction in buffer-perfused rabbit lungs.</a> J. Appl. Physiol. 78, 1509-1515 (1995).</li><li>Ng, L. C., Kyle, B. D., Lennox, A. R., Shen, X. M., Hatton, W. J., Hume, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+culture+alters+Ca2++entry+pathways+activated+by+store-depletion+or+hypoxia+in+canine+pulmonary+arterial+smooth+muscle+cells.">Cell culture alters Ca2+ entry pathways activated by store-depletion or hypoxia in canine pulmonary arterial smooth muscle cells.</a> Am. J. Physiol. Cell Physiol. 294 (1), 313-323 (2008).</li><li>Fehr, D. M., Larach, D. R., Zangari, K. A., Schuler, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Halothane+constricts+bovine+pulmonary+arteries+by+release+of+intracellular+calcium.">Halothane constricts bovine pulmonary arteries by release of intracellular calcium.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 277 (2), 706-713 (1996).</li><li>Oshima, Y., Ishibe, Y., Okazaki, N., Sato, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isoflurane+inhibits+endothelium-mediated+nitric+oxide+relaxing+pathways+in+the+isolated+perfused+rabbit+lung.">Isoflurane inhibits endothelium-mediated nitric oxide relaxing pathways in the isolated perfused rabbit lung.</a> Can. J. Anaesth. 44 (10), 1108-1114 (1997).</li><li>Sanderson, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+lung+physiology+in+health+and+disease+with+lung+slices.">Exploring lung physiology in health and disease with lung slices.</a> Pulm. Pharmacol. Ther. 24 (5), 452-465 (2011).</li><li>Davies, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Replacing Animal Models: A Practical Guide to Creating and Using Culture-based Biomimetic Alternatives (Google eBook. , 57-68 (2012).</li><li>M&#252;ller-Redetzky, H. C., Kummer, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intermedin+stabilized+endothelial+barrier+function+and+attenuated+ventilator-induced+lung+injury+in+mice).">Intermedin stabilized endothelial barrier function and attenuated ventilator-induced lung injury in mice).</a> PLoS One. 7 (5), (2012).</li><li>Russell, W. M. S., Burch, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Principles+of+Humane+Experimental+Technique.">The Principles of Humane Experimental Technique.</a> Universities Federation for Animal Welfare. , (1959).</li><li>Held, H. D., Martin, C., Uhlig, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+airway+and+vascular+responses+in+murine+lungs.">Characterization of airway and vascular responses in murine lungs.</a> Br. J. Pharmacol. 126 (5), 1191-1199 (1999).</li><li>K&#246;hler, D., Sch&#246;nhofer, B., Voshaar, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pneumologie:+Ein+Leitfaden+f&#252;r+rationales+Handeln+in+Klinik+und+Praxis.">Pneumologie: Ein Leitfaden f&#252;r rationales Handeln in Klinik und Praxis.</a> Thieme Verlag. , 198-19 (2009).</li><li>Will, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Pulmonary+Circulation.">The Pulmonary Circulation.</a> in Health and Disease. Elsevier Science, p49. , (1987).</li><li>Faro, R., Moreno, L., Hislop, A. A., Sturton, G., Mitchell, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+endothelium+dependent+vasodilation+emerges+after+birth+in+mice.">Pulmonary endothelium dependent vasodilation emerges after birth in mice.</a> Eur. J. Pharmacol. 567 (3), 240-244 (2007).</li><li>Wright, J. L., Churg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short-term+exposure+to+cigarette+smoke+induces+endothelial+dysfunction+in+small+intrapulmonary+arteries:+analysis+using+guinea+pig+precision+cut+lung+slices.">Short-term exposure to cigarette smoke induces endothelial dysfunction in small intrapulmonary arteries: analysis using guinea pig precision cut lung slices.</a> J. Appl. Physiol. 104, 1462-1469 (2008).</li></ol>

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

الرئة الماوس التهوية والمتغلغلة معزولة هو نموذج ممتاز لتحليل الاستجابة الفسيولوجية للنظام الأوعية الدموية الرئوية على التغيرات في إمدادات الأوكسجين وغيرها يسمح للقياس المستمر للضغط الشرياني الرئوي1. ومع ذلك، لا يسمح هذا النموذج بتحديد وتحليل تلك القطاعات الوعائية (القطاعات) التي تظهر أقوى استجابة لنقص الأكسيجة. هذه هي ميزة تحليلنا المرئي للمجسم PCLS الذي يسهل قياس فيروس الورم الحليمي البشري للشرايين الفردية ذات الأقطار الداخلية من 20-100 ميكرومتر. وعلى النقيض من أنظمة زراعة الخلايا، فإن جميع أنواع الخلايا موجودة في تكوينها الأصلي لمصفوفة الأنسجة. وعلاوة على ذلك، رئة واحدة كافية لإعداد العديد من PCLS، بحيث يمكن على الأقل جزئيا التجارب يمكن توحيدها باستخدام أقسام من نفس الماوس. وفقا لمفهوم 3R (الحد من وصقل واستبدال الحيوانات المختبرية في علوم الحياة) من راسل و بورش23 هذه الحقيقة يجادل أيضا لاستخدام PCLS.
ومع ذلك ، يجب على المرء أن نضع في اعتبارنا ، أن الأنسجة معطوبة عن طريق القطع مع الهزاز والإشارات الطولية على سبيل المثال عن طريق الخلايا البطانية كما افترض كوبلر وآخرون. 14 لم يعد ممكنا.
في البداية ، تم تطبيق PCLS بشكل رئيسي للدراسات الكيميائية الحيوية والصيدلانية والسمية ، ولكن في هذه الأثناء يتم استخدامها أيضا لقياس انقباض الشعب الهوائية ، ووظيفة المخاض واستجابات الأوعية الدموية (للمراجعة انظر Sanderson20 و Davies21). عقد وآخرون. وقد أجريت دراسة التي قارنت نماذج الرئة الماوس المتغلغلة والتهوية معزولة وPCLS24. ووجدوا من خلال تحليل استجابات الشعب الهوائية والأوعية الرئوية لمجموعة متنوعة من الوسطاء الداخليين أن الخصائص الهامة للرئة بأكملها تم الحفاظ عليها في PCLS.
في PCLS ، لا يتم إنشاء حالات نقص الأكز عبر الشعب الهوائية كما هو الحال في الرئة السليمة ولكن عن طريق حضانة قسم الرئة في الوسط المصاب بنقص الأكز الغازي. قمنا بتحليل ضغط الأكسجين الجزئي (pO2)من الغازات المسبقة المتوسطة مع 1٪ O2، 5.3٪ CO2، 93.7٪ N2 ومع 21٪ O2، 5.3٪ CO2، 73.7٪ N2، على التوالي ، باستخدام محلل غاز الدم. مباشرة قبل إطعامه في غرفة التشويش ، كان PO2 من MEM الغازي نقص الأكاسيد 40 مم زئبق ومتوسط 160 مم زئبق6.  في الرئة سليمة يحدث فيروس الورم الحليمي البشري عندما يسقط PO2 السنفي أقل من 50 ملم زئبق25، وهو الوضع الذي يمكن أن يحاكي بوضوح عن طريق تطبيق وسيط نقص الأكز والغاز. تتطابق بياناتنا حول مدى فيروس الورم الحليمي البشري بشكل جيد مع النتائج التي تم الحصول عليها باستخدام نهج تجريبي مختلف. ياماغوتشي وآخرون. وقد طبقت الرئتين الفئران معزولة لفحص microvessels مع قطرها من 20-30 ميكرومتر عن طريق الليزر confocal في الوقت الحقيقي المسح المجهري التلألؤ مقرونة كاميرا عالية الحساسية مع صورة مكثف10. ولاحظوا انخفاضا متوسطا في القطر قدره 2.7 ميكرومتر بعد تعرض الرئتين لنقص الأكسيجة. يمكن للمرء أن يحسب أن انخفاض 20٪ من المساحة الإنارة ونحن نقيسها في نظامنا يتوافق مع حوالي 15٪ انخفاض في القطر.
في تجاربنا قمنا بتصنيف الشرايين على أنها أوعية ما قبل وداخل الأسينار ، على التوالي ، بأقطار داخلية تتراوح بين 40-100 ميكرومتر و 20-40 ميكرومتر. في البشر يحدث الانتقال من الشرايين العضلية إلى غير العضلية في نطاق قطر 70-100 ميكرومتر. في الفئران ، وخلايا العضلات الملساء موجودة وصولا الى قطر خارجي قدره 20 ميكرومتر26. لهذا السبب فإنه ليس من الممكن لتحليل الشرايين مع أقطار أقل من 20 ميكرومتر لأنها لا يمكن الاعتماد عليها يمكن تحديدها على أساس صورة النقيض المرحلة. في الطرف الآخر من المقياس ، لا يكاد تجد الأوعية التي يزيد قطرها عن 100 ميكرومتر في PCLS ويتم تجريدها عادة من الأنسجة المحيطة بها.
في الواقع ، تتم مناقشة عدد من المرشحين الجزيئية كمستشعر (أجهزة) الأكسجين الجزيئي أو كعنصر من سلسلة الإشارات الناتجة عن فيروس الورم الحليمي البشري (للمراجعة انظر Sylvester et al. 4). مرة واحدة مناسبة الفئران خروج المغلوب المتاحة يمكن استخدامها videomorphometry لتحليل vasoreactivity من الشرايين قبل وداخل acinar بالمقارنة مع الحيوانات البرية نوع. ومع ذلك، تم استخدام PCLS أيضا لقضايا أخرى: فارو وآخرون. استخدمت لهم لتوصيف تطور تمدد التمدد المعتمد على الانثيوم في الرئة بعد الولادة29 واستخدمت PCLS المعدة من الخنازير الغينية المعرضة للدخان أو الهواء يوميا لمدة 2 أسابيع لإثبات تأثير دخان السجائر على النشاط الوعائي عن طريق تحريض الخلل البطاني30.
الخطوات الهامة داخل البروتوكول
في تجاربنا صنفنا الشرايين على أنها ما قبل الأسينار (أقطار داخلية من 40-100 ميكرومتر) وداخل الأسينار (أقطار داخلية من 20-40 ميكرومتر). خاصة بالنسبة لإعداد أقسام الرئة التي ينبغي استخدامها لتحليل الأوعية الكبيرة من المهم إضافة نيتروسسايد الصوديوم إلى العازلة التغلغل. يمنع هذا الدواء تقلص الأوعية أثناء إعداد العينة وبالتالي تمزقها من الأنسجة المحيطة مما يؤدي إلى توسع الأوعية غير المكتمل. نيتروبروسايد الصوديوم في العازلة perfusion ليست مهمة جدا لإعداد قسم الرئة التي ينبغي استخدامها لتحليل الشرايين الصغيرة لأنها راسية بقوة إلى الحاجز السنفي.
يجب أن تبدأ جميع التجارب مع الحضانات التي يتم اختبار التفاعل من الشرايين. نادرا ما حصلنا على تحضيرات الرئة التي لم يكن من الممكن اكتشاف استجابة الأوعية للمتعاقدين أو المتوسعات. نحن لا نعرف السبب في ذلك: قد يكون حجم الآغاروز شغلها في الرئتين كانت كبيرة جدا أو منخفضة جدا بحيث قطع الجهاز إلى PCLS لم يكن الأمثل. بدلا من ذلك ، يمكن تخيل أن الآغروز كان يبرد بسرعة كبيرة أثناء إجراء التقطير مما أدى إلى إجهاد القص الضار. في حالة أنه في PCLS الفردية لا يوجد شريان قابل للحياة يمكن الكشف عنها، يجب التخلص من القسم واستبداله واحد آخر.
تم اتخاذ القرار بشأن صلاحية الشريان بناء على الاستجابة ل U46619. تطبيق U46619 بتركيز 0.1 ميكرومتر يحفز تضيق الأوعية الذي - بعد بعض التمارين الرياضية - مرئي مباشرة في تسلسل الصورة على الشاشة. نظرا لوجود بعض التباينات في النشاط الوعائي ، فإننا نحقق في تأثير الدواء على فيروس الورم الحليمي البشري عن طريق قياس vasoresponse في أقسام الرئة المعرضة للدواء أو للوسط وحده بدوره.
فيروس الورم الحليمي البشري من الشريان الفردي غالبا ما يكون بالكاد يمكن الكشف عنها في المجهر، وفي المتوسط يؤدي إلى الحد من المنطقة الإنارة من حوالي 20-30٪. ومع ذلك ، فإن التغيرات الصغيرة في قطر الشريان لها مدخلات متميزة على مقاومة التدفق. وفقا لمعادلة "R = 1/r4" مع R = المقاومة و r = نصف قطرها ، فإن مقاومة التدفق تتناسب عكسيا مع القوة الرابعة لنصف القطر. اسمحوا لي أن أعطي مثالا: "الشريان المثالي" الذي يعرض مقطع عرضي دائري يبلغ قطره 40 ميكرومتر (r = 20 ميكرومتر) تبلغ مساحته الإنارة حوالي 1260 ميكرومتر2. عندما يتم تخفيض المساحة الإنارة بنسبة 20٪، يمكننا حساب أن قطر السفينة ينخفض بنسبة 10.5٪ إلى 35.8 ميكرومتر (ص = 17.9 ميكرومتر). وفقا للمعادلة المذكورة أعلاه، فإن مقاومة تدفق هذه السفينة زيادة من 6.25 × 10-6 إلى 9.71 × 10-6 وهذا هو بنحو 55٪. في حالة انخفاض مساحة الإنارة بنسبة 30٪ سينخفض نصف القطر بنحو 16٪، ولكن مقاومة التدفق ستزيد بنحو 100٪. على الرغم من أن هذه الحسابات هي تبسيط مفرط حيث يفترض تدفق الدم صفح وشكل وعاء من أنبوب جامدة أنه يوحي بتأثير تغييرات طفيفة بالفعل من القطر على مقاومة التدفق.

في معظم الأسرة الوعائية الجهازية نقص الأكسيجة يحفز توسع الأوعية الدموية، بالمقارنة مع تضيق الأوعية الناجم عن نقص الأكسيجة في الأوعية الدموية الرئوية. تسمى هذه الاستجابة الخاصة بالرئة لتوتر الأكسجين المنخفض استئصال الأوعية الرئوية نقص الأكاكس (HPV) ، وت يبدأ في غضون ثوان ويعكس بسرعة بعد التبديل إلى التهوية ال نورموكسيك. على الرغم من أن فيروس الورم الحليمي البشري معروف منذ أكثر من 60 عاما ، إلا أن مستشعر الأكسجين الخلوي (أجهزة) وسلسلة الإشارات (السلاسل) التي تؤدي إلى استئصال الأوعية لا تزال قيد المناقشة. هناك إجماع واسع نسبيا على أن الأكسدة التي تثيرها نقص الأكسيا وتغييرات ROS ضرورية لفيروس الورم الحليمي البشري وتطور ارتفاع ضغط الدم الرئوي (تمت مراجعتها في Sylvester et al. 4 وشوماكر وآخرون. 5). تدعم البيانات الخاصة بنا دورا مركزيا للمعقد الثاني من سلسلة الجهاز التنفسي الميتوكوندريا في فيروس الورم الحليمي البشري6,7. مؤخرا، وانغ وآخرون. قدم مفهوم جديد تماما لاستشعار الأكسجين وفيروس الورم الحليمي البشري: استنادا إلى بياناتهم يقترحون أن نقص الأكسوجة السنفية تشعر به الشعيرات الدموية المجاورة مما يسبب إزالة الاستقطاب الغشائي للخلايا البطانية. يتم نشر الاستجابة عبر connexion 40 تقاطعات الفجوة من الخلايا البطانية مما يؤدي إلى انقباض خلايا العضلات الملساء من الشرايين المنبع8.
شرايين الرئة تعمل جنبا إلى جنب مع الشعب الهوائية، فرع معهم، وانخفاض مستمر في القطر، وأخيرا توريد الدم إلى نظام الشعرية الموجودة في الجدران الحويصلات. يتكون هذا الدوران الشرياني من أجزاء متميزة تشريحيا ووظيفيا. تتبع شرايين القناة القريبة ، التي تتميز بوفرة من الألياف المرنة في الجدران ، شرايين عضلية بالكامل داخل الرئة تتحكم إلى حد كبير في مقاومة الأوعية الدموية الرئوية. خطوة بخطوة، هذه الشرايين العبور إلى شرائح حيث تصبح طبقة العضلات غير مكتملة، وأخيرا الأوعية خالية من الخلايا النشطة مناعية العضلات الملساء. الشريان داخل acinar تغذية acinus الرئوي الفردية مع الدم يمثل جزء العضلات جزئيا6. وبالمثل، فإن الجهاز الشرياني الرئوي لا يمثل بنية موحدة فيما يتعلق بالاستجابة لنقص الأكز ولكن المعارض تميز التنوع الإقليمي9,10. على سبيل المثال ، في الشرايين الرئوية القريبة المعزولة عن قصور الأكسيجة الفئران يؤدي إلى استجابة ثنائية المراحل ، مما يعرض انكماشا سريعا أوليا لمدة قصيرة - بعد استرخاء غير مكتمل - يتبعه انكماش بطيء ثان ولكنه مستمر11. في شرايين المقاومة المعزولة عن بارنشيما الرئة الفئران كقسم الرابع والخامس من الشرايين الرئوية (القطر الخارجي <300 ميكرومتر)، نقص الأكسيجة يسبب انقباض أحادي الطور9. بالفعل في عام 1971 وخلص Glazier وموراي من قياسات التغيرات في تركيز خلايا الدم الحمراء الشعرية في رئات الأمراض التهوية مع خليط الغاز نقص الأكاكس أن الزيادة الناجمة عن نقص الأكسيجة في مقاومة الأوعية الدموية وقعت أساسا المنبع من الشعيرات الدموية12. في الوقت الحاضر ، يمثل المجهر داخل الرئتين السليمتين للفئران المخدرة والتهوية الميكانيكية أداة قوية لتحليل الخلايا المجهرية الرئوية13،14. إن استئصال نافذة دائرية في الجدار الصدري يتيح الوصول المجهري إلى سطح الرئة ويسمح بتحليل الأوعية الرئوية دون الجنبية التي يصل قطرها إلى 50 ميكرومتر. من خلال الجمع بين هذه التقنية مع ضخ FITC-dextran، تابوشي وآخرون. أظهرت أن الشرايين متوسطة الحجم فقط مع أقطار 30-50 ميكرومتر تظهر استجابة ملحوظة لنقص الأكxia التي استمرت على مدى فترة 60 دقيقة مع توهين طفيفة بعد 30 دقيقة. في المقابل، أظهرت الشرايين الصغيرة ذات أقطار 20-30 ميكرومتر استجابة طفيفة فقط لنقص الأكxia3. ومع ذلك، لا تسمح هذه التقنية بتحليل الشرايين التي يبلغ قطرها أكبر من 50 ميكرومترا نظرا لأن هذه الأوعية تقع عميقا جدا في أنسجة الرئة.
من أجل سد الفجوة في تحليل الشرايين الرئوية الكبيرة والصغيرة جدا (مثل الأوعية تحت الجنبية) من الرئتين مورين، اعتمدنا الطريقة التي وصفها مارتن وآخرون. لتحليل التفاعل من الشعب الهوائية15. استنادا إلى تقنية غرس هلام الآغروز ، فإنه يسهل إعداد شرائح الرئة المقطوعة بدقة (PCLS) من هذا العضو الناعم والمرن نسبيا. داخل شرايين PCLS العرضية مع القطر الداخلي بين 20-100 ميكرومتر يمكن ملاحظتها مباشرة عن طريق التنظير بالفيديو. يسمح تطبيق الأدوية أثناء حضانة الفينول الخماسي الكلور بتحليل آثارها على فيروس الورم الحليمي البشري. ومن الأهمية بمكان أن هذه التقنية يمكن أيضا أن تطبق على الماوس المعدلة وراثيا. بناء على موقعها داخل الرئة، ونحن نصنف الشرايين والأوعية قبل وداخل acinar، مع أقطار داخلية من 20-40 ميكرومتر و 40-100 ميكرومتر، على التوالي. تحت وجهة نظر وظيفية الشريان داخل acinar تزويد acinus الرئوية الفردية مع الدم والشريان قبل acinar هو أقسام الأوعية السابقة. تسجيل الصور على كاميرا رقمية يسمح للقياس الكمي اللاحقة من vasoreaction. سمة واضحة من هذا النموذج PCLS هو عدم وجود القص الإجهاد بناء على البطانة. في المقابل ، في الأوعية المشبعة فيروس الورم الحليمي البشري الحاد يؤدي إلى ارتفاع في إجهاد القص وبالتالي تحفيز الآليات الثانوية مثل NO release16. بالإضافة إلى ذلك ، فإن استخدام PCLS يسمح بقياسات فيروس الورم الحليمي البشري دون تأثيرات عصبية أو هرمونية خارج الرئة. على النقيض من نظم زراعة الخلايا ، على سبيل المثال أعدت من الخلايا العضلية الملساء الشريان الرئوي ال17، يتم الحفاظ على العمارة النسيجية لجدار السفينة تماما تقريبا.
وباختصار، يوفر هذا البروتوكول طريقة مفيدة لتحليل أجهزة استشعار الأكسجين الجزيئية المحتملة و / أو المسارات الخلوية المسؤولة عن فيروس الورم الحليمي البشري للشرايين داخل الرئة ذات الأقطار الداخلية بين 20-100 ميكرومتر في ظل ظروف خالية من إجهاد القص.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="817">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Vibratome &#34;Microm HM 650 V&#34;</td>
			<td style="width:225px;">Microm/Thermo Fisher Scientific, Schwerte, Germany</td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Microwave oven</td>
			<td style="width:225px;">Bosch, Frankfurt, Germany</td>
			<td style="width:209px;">HMT 702C</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Heating cabinet</td>
			<td style="width:225px;">Heraeus/Thermo Fisher Scientific, Schwerte, Germany</td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Flow-through superfusion chamber&#160;</td>
			<td style="width:225px;">Hugo Sachs Elektronik, March, Germany</td>
			<td style="width:209px;">PCLS-Bath Type: 847 SN:4017</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Upright inverted microscope equipped with 4X, 10X, 20X, and 40X objectives&#160;</td>
			<td style="width:225px;">Leica, Wetzlar, Germany</td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">CCD-camera&#160;</td>
			<td style="width:225px;">Stemmer Imaging, Puchheim, Germany</td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:62px;width:216px;">Peristaltic pump Minipuls 3</td>
			<td style="width:225px;">Gilson, Limburg-Offheim, Germany</td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="83">
			<td height="83" style="height:83px;width:216px;">Water bath &#8220;Universal Wasserbad Isotem 205&#8221;</td>
			<td style="width:225px;">Thermo Fisher Scientific, Schwerte, Germany</td>
			<td style="width:209px;">9452450</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:62px;width:216px;">Gas tight tubes Tygon R3603-13 &#160; &#160; &#160;&#216;i: 3/32 in, &#216;a: 5/32 in, wall: 1/32 in</td>
			<td style="width:225px;">VWR, Darmstadt, Germany</td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Various scissors and forceps</td>
			<td style="width:225px;"></td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Sewing cotton</td>
			<td style="width:225px;"></td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">2 ml Syringe&#160;</td>
			<td style="width:225px;">Braun-Melsungen AG, Melsungen, Germany</td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">50 ml Syringe</td>
			<td style="width:225px;">Braun-Melsungen AG, Melsungen, Germany</td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="88">
			<td height="88" style="height:88px;width:216px;">Flexible plastic pipe of an IV indwelling cannula &#8220;IntrocanR-W&#8221; (cannula 20 G x 1 &#188; in, 1.1 x 32 mm)</td>
			<td style="width:225px;">Braun-Melsungen AG, Melsungen, Germany</td>
			<td style="width:209px;">4254112B</td>
			<td style="width:167px;">For instillation of the agarose into the lung</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Cannula 21 G x 4 &#190; in; 0.8 x 120 mm</td>
			<td style="width:225px;">Braun-Melsungen AG, Melsungen, Germany</td>
			<td style="width:209px;">4665643</td>
			<td style="width:167px;">For bubbling of the medium</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Cannula Nr. 17, 24 G x 1, 0.55 x 25 mm&#160;</td>
			<td style="width:225px;">Terumo, Eschborn, Germany</td>
			<td style="width:209px;">NN 2425 88DSF18</td>
			<td style="width:167px;">For lung perfusion</td>
		</tr>
		<tr height="58">
			<td height="58" style="height:58px;width:216px;">Normoxic gas mixture (21% O2, 5.3% CO2, 73.7% N2)</td>
			<td style="width:225px;">Linde, Hildesheim, Germany</td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="58">
			<td height="58" style="height:58px;width:216px;">Hypoxic gas mixture (1% O2, 5.3% CO2, 93.7% N2)</td>
			<td style="width:225px;">Linde, Hildesheim, Germany</td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">HEPES</td>
			<td style="width:225px;">Sigma, Deisenhofen, Germany</td>
			<td style="width:209px;">H 4034</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">NaCl</td>
			<td style="width:225px;">Roth, Karlsruhe, Germany</td>
			<td style="width:209px;">3957.1</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">KCl</td>
			<td style="width:225px;">Merck, Darmstadt, Germany&#160;</td>
			<td style="width:209px;">1.04936.0500</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">MgCl2&#8226;6H2O</td>
			<td style="width:225px;">Merck, Darmstadt, Germany&#160;</td>
			<td style="width:209px;">1.05833.0250</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">CaCl2&#8226;2H2O</td>
			<td style="width:225px;">Merck, Darmstadt, Germany&#160;</td>
			<td style="width:209px;">1.02382.0500</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Glucose D-(+)</td>
			<td style="width:225px;">Sigma, Deisenhofen, Germany</td>
			<td style="width:209px;">G 7021</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Low melting point agarose&#160;</td>
			<td style="width:225px;">Bio-Rad, Munich, Germany</td>
			<td style="width:209px;">161-3111</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Heparin-sodium</td>
			<td style="width:225px;">Ratiopharm, Ulm, Germany</td>
			<td style="width:209px;">5120046</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Phenolred-free minimal essential medium (MEM)</td>
			<td style="width:225px;">Invitrogen, Darmstadt, Germany</td>
			<td style="width:209px;">5120046</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">70% EtOH for desinfection</td>
			<td style="width:225px;">Stockmeier Chemie, Dillenburg, Germany</td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Superglue</td>
			<td style="width:225px;">UHU, B&#252;hl/Baden, Germany or from a supermarket</td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">U46619 (a thromboxane analog)</td>
			<td style="width:225px;">Calbiochem/Merck, Darmstadt, Germany</td>
			<td style="width:209px;">538944</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Sodium nitroprusside (Nipruss)</td>
			<td style="width:225px;">Schwarz Pharma, Monheim, Germany</td>
			<td style="width:209px;">5332804</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Optimas 6.5 software&#160;</td>
			<td style="width:225px;">Stemmer, Puchheim, Germany</td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">SPSS 19</td>
			<td style="width:225px;">AskNet,&#160; Karlsruhe, Germany</td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

videomorphometric analysis of hypoxic pulmonary vasoconstriction of intra-pulmonary arteries using murine precision cut lung slices

نقص الأكسياج السنخي الحاد يسبب التهاب الأوعية الدموية الرئوي (HPV) - المعروف أيضا باسم آلية فون يولر-Liljestrand - الذي يعمل على مطابقة تغلغل الرئة مع التهوية. وحتى الآن، لا تفهم الآليات الأساسية فهما كاملا. الجزء الوعائي الرئيسي المساهم في فيروس الورم الحليمي البشري هو الشريان داخل الأسينار. هذا القسم الأوعية مسؤولة عن إمدادات الدم من acinus الفردية, الذي يعرف بأنه جزء من الرئة البعيدة إلى الشعب الهوائية الطرفية. تقع الشرايين داخل الأسينار في الغالب في ذلك الجزء من الرئة الذي لا يمكن الوصول إليه بشكل انتقائي من خلال عدد من التقنيات الشائعة الاستخدام مثل قياس ضغط الشريان الرئوي في الرئتين المعزولتين أو التسجيلات القوة من شرائح الشريان الرئوي القريبة تشريح1,2. يقتصر تحليل الأوعية دون الجنبية عن طريق المسح المجهري بالليزر الكونفوجال في الوقت الحقيقي على السفن التي يصل قطرها إلى 50ميكرومترا 3.
نحن نقدم تقنية لدراسة فيروس الورم الحليمي البشري من الشرايين داخل الرئة مورين في حدود 20-100 ميكرومتر الأقطار الداخلية. وهو يستند إلى التحليل المرئي للشرايين المقطعية في شرائح الرئة المقطوعة بدقة (PCLS). تسمح هذه الطريقة بالقياس الكمي ل فاسوريانيتي للشرايين الصغيرة داخل الأسينار ذات القطر الداخلي بين 20-40 ميكرومتر والتي تقع في gussets من الحاجز الحويصلات بجوار القنوات السنخية والشرايين الأكبر قبل الأسينار ذات الأقطار الداخلية بين 40-100 ميكرومتر والتي تعمل بجوار القصبات الهوائية والشعب الهوائية. على النقيض من التصوير في الوقت الحقيقي للأوعية دون الجنبية في الفئران المخدرة والتهوية ، يحدث التحليل المرئي المتبلور ل PCLS في ظل ظروف خالية من إجهاد القص. في نموذجنا التجريبي كلا القطاعين الشرياني يحمل فيروس الورم الحليمي البشري أحادي الطور عندما تتعرض للغاز المتوسط مع 1٪ O2 والاستجابة يتلاشى بعد 30-40 دقيقة في نقص الأكسيجة.

في الشكل 1 يتم إعطاء نتائج قياس فيروس الورم الحليمي البشري من الشريان قبل الأسينار كبيرة وفي الشكل 2 من الشرايين داخل acinar الصغيرة. في صور النقيضالمرحلة (الشكلان 1A و 2A)يصبح من الواضح أنه من الممكن التمييز بين هاتين الفئتين من الشرايين استنادا إلى موقعها داخل أنسجة الرئة: الشرايين ما قبل الأسينور تعمل في حي قريب من القصبات الهوائية والشعب الهوائية (الشكل 1A) ، في حين تقع الشرايين داخل الأسينار في gussets من الحاجز السنخي وتحيط بها الحويصلة الهوائية (الشكل 2A). مع القليل من الممارسة فمن الممكن أن نرى التغييرات في المنطقة الإنارة استجابة لU46619 على صور النقيضالمرحلة (الشكلين 1A و 2A). ومع ذلك، غالبا ما يكون التهاب الأوعية الرئوية hypoxic غير واضح ويصبح واضحا إلا بعد التقييم الكامل للتغيرات في المناطق الإنارة(الشكل 1B، 1C، 2B، و، 2C). لسبب تعليمي أعطينا مثالا على الشريان قبل acinar الذي يظهر تضيق الأوعية وضوحا بشكل غير عادي. في المتوسط، يؤدي فيروس الورم الحليمي البشري إلى انخفاض بنسبة 20-30٪ في المنطقة الإنارة.
في الشكل 2 تظهر تسجيلات الشرايين الصغيرة داخل الأسينار المحتضنة بوسيطة غازية نقص الأكاكس مع أو بدون 50 ميكرومتر بيناسيديل (فتاحة غير انتقائية لقنوات البوتاسيوم الحساسة ل ATP الميتوكوندريا) ويصبح التأثير المثبط للدواء مرئيا بوضوح. الجزء الأخير من التجربة يدل على انتقائية عمل الدواء على فيروس الورم الحليمي البشري: لا يتم تغيير استئصال الأوعية الناجم عن الجلطات التناظرية U46619 بإضافة pinacidil. في الواقع ، فإن منحنى الشريان كشف pinacidil يعمل أقل بشكل واضح من الاثنين الآخرين ، ولكن مدى انخفاض المنطقة الإنارة بواسطة U46619 وحده قابل للمقارنة. في هذه الحالة كان الارتداد غير الكامل لفيروس الورم الحليمي البشري هو الذي يسبب الفرق بين المنحنيات. في هذا الرسم البياني أيضا يتم تضمين الشريان المعرضة للوسط الغاز normoxic كتحكم إضافي. في ظل هذه الحالة، لا يمكن الكشف عن أي تغييرات في المنطقة الإنارة.
في الشكل 3 تظهر بيانات السلسلة الكاملة من القياسات حول تأثير pinacidil على فيروس الورم الحليمي البشري. وللمقارنة بين المجموعتين للاختلافات الإحصائية، تم تحليل مجموعات البيانات الخاصة بالنقاط الزمنية المشار إليها باستخدام اختبار كروسكال واليس واختبار مان ويتني. تم إلغاء فيروس الورم الحليمي البشري بوضوح في وجود pinacidil في حين أن الانكماش الناجم عن U46619 لم يتغير.
وبدلا من ذلك، يمكن تحديد الاختلافات بين المجموعات بالمقارنة مع المنطقة الواقعة تحت المنحنى كما هو موضح في مولر - ريدتزكي وآخرين. 22
<img alt="Figure 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50970/50970fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50970/50970fig1.jpg"> الشكل 1 - الأرقام 1- الأرقام 1 قياس فيروس الورم الحليمي البشري من الشريان قبل الأسينار كبيرة. (أ) صور التباين المرحلي من الشريان قبل acinar مقطعة (أ) الذي يمتد في حي قريب من الشعب الهوائية المقطعة(B). يتم التقاط الصور في النقاط الزمنية المشار إليها في (B) من قبل دوائر: في بداية القياس (أ)، في نهاية العلاج مع U46619 (ب)، في نهاية التعرض لNipsruss (ج)، بعد 30 أو 40 دقيقة في المتوسط الغازي نقص الأكاسيد (د، ه)، بعد الغسيل مع وسيط الغازات الترموكسية (و)، وبعد التطبيق النهائي للU46619 (ز). في الرسم البياني(B)يتم رسم تغييرات المنطقة الإنارة مع الوقت في حين يتم تعريف المنطقة الإنارة في بداية التجربة على أنها 100٪ ويتم إعطاء التمدد الوعائي / التمدد كقيم نسبية. في هذه الحالة نقص الأكسيجة يؤدي إلى انخفاض 60٪ من المنطقة الإنارة. (ج)للحصول على عرض أوضح للاستجابة نقص الأكز، لم يتم تضمين المرحلة الأولية من التجربة التي تم اختبار فاسوريتشيتيك، ولكن القيمة التي تم الحصول عليها مباشرة قبل التعرض لانخفاض الأكسجين يتم تعيين 100٪ (انظر أيضا الشكل 2). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50970/50970fig1highres.jpg" target="_blank">انقر هنا لعرض صورة أكبر.</a>
<img alt="Figure 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50970/50970fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50970/50970fig2.jpg"> الشكل 2 - الأرقام 2- الأرقام التي تم تأثير pinacidil (فتاحة غير انتقائية من قنوات البوتاسيوم الحساسة ATP الميتوكوندريا؛ ميتوكاتب) على فيروس الورم الحليمي البشري من الشرايين الصغيرة داخل الأسينار. (أ)تقع الشرايين داخل acinar (أ) في gussets من الحاجز الحويصلات. ألف = الحويصلات. وترد تسلسل الشروط الفردية المطبقة في هذه التجارب في العنوان الرئيسي للرسم البياني(ب). يتم تنفيذ التعرض لنقص الأكسيد في وجود أو عدم وجود 50 ميكرومتر بيناسيديل. تتم حضانات التحكم مع وسيطة الغاز normoxic. يتم التقاط الصور المبينة في (A) في بداية القياس (أ، أ،أ))، في نهاية العلاج مع U46619 (ب، ب'، ب")، في نهاية التعرض ل Nipruss (c, c', c")، بعد 30 أو 40 دقيقة في وسط الغاز نقص الأكاسيد أو نورموكسيك (د، د،د"؛ ه، ه،ه")، بعد غسل مع وسيط الغاز normoxic (و، و'، و")، وبعد التطبيق النهائي لU46619 (ز، g'، g"). للحصول على عرض أوضح للاستجابة ل normoxia / نقص الأكسيجة / نقص الأكسيجة + pinacidil ، يتم تعيين القيم التي تم الحصول عليها مباشرة قبل التعرض للوسط normoxic / hypoxic الغاز بنسبة 100 ٪ (C). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50970/50970fig2highres.jpg" target="_blank">انقر هنا لعرض صورة أكبر.</a>
<img alt="Figure 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50970/50970fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50970/50970fig3.jpg"> الشكل 3 - الأرقام 3- الأرقام التي يمكن أن تثبيط فيروس الورم الحليمي البشري عن طريق pinacidil. يتم تلخيص وتسجيلات الشرايين الصغيرة داخل الأسينار المعرضة لوسط غازي نقص الأكدمة مع أو بدون pinacidil 50 ميكرومتر وتقدم كوسيلة ± SEM. في (أ) يتم إعطاء التسجيلات الكاملة ، في (ب) تظهر البيانات النسبية فيما يتعلق بالقيمة في بداية الحضانة نقص الأكز. لا يمكن الكشف عن النشاط الوعائي في PCLS التي تتعرض لوسط hypoxic الغازية التي تحتوي على pinacidil. لا يتأثر استئصال الأوعية الناجم عن U46619 بالمخدرات. "n" بين قوسين يشير إلى عدد الشرايين / عدد الحيوانات التي تم صنع PCLS منها. وبعبارة أخرى، يصف الرقم الأول عدد أقسام الرئة التي تم تحليلها، ويعطي الرقم الثاني عدد الفئران التي تم إعداد هذه الأقسام منها. في الوقت المحدد نقاط يتم اختبار الاختلافات بين المجموعتين لأهمية. n.s.: ليست كبيرة، *: p≤0.05، **: p≤0.01، ***: p≤0.001. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50970/50970fig3highres.jpg" target="_blank">انقر هنا لعرض صورة أكبر.</a>
<img alt="Figure 4" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50970/50970fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50970/50970fig4.jpg"> الشكل 4 - الأرقام 4- الأرقام التي تم ال نظرة عامة تخطيطية للطريقة. لفترة وجيزة، يتم قتل الفئران عن طريق خلع عنق الرحم. بعد فتح الصدر، تمتلئ الرئتين مع agarose نقطة انصهار منخفضة وبعد تهدئة خفض إلى 200 ميكرومتر قطع شرائح الرئة الدقة سميكة (PCLS). بعد إزالة agarose في 37 درجة مئوية يتم نقل PCLS واحد في غرفة التدفق من خلال التخبط الذي يتعرض للوسط normoxic أو الغاز المتوسط مع 1٪ O2. يتم تسجيل Vasoreactivity كتغيرات في المنطقة الإنارة. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50970/50970fig4highres.jpg" target="_blank">انقر هنا لعرض صورة أكبر.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Videomorphometric Analysis of Hypoxic Pulmonary Vasoconstriction of Intra-pulmonary Arteries Using Murine Precision Cut Lung Slices at JoVE.com

Videomorphometric Analysis of Hypoxic Pulmonary Vasoconstriction of Intra-pulmonary Arteries Using Murine Precision Cut Lung Slices

التهاب الأوعية الدموية الرئوية نقص الأكاكس (HPV) هو ظاهرة فسيولوجية هامة يتم من خلالها مطابقة تغلغل الرئة نقص الأكسيجة في السن الهوائية للتهوية. الجزء الوعائي الرئيسي المساهم في فيروس الورم الحليمي البشري هو الشريان داخل الأسينار. هنا، نقوم بوصف بروتوكولنا لتحليل فيروس الورم الحليمي البشري للأوعية الرئوية المورينية التي يتراوح قطرها بين 20 و100 ميكرومتر.

تحليل مجسم الفيديو لنقص الأكسجين الرئوي من الشرايين داخل الرئة باستخدام مورين الدقة قطع شرائح الرئة

Acute alveolar hypoxia causes pulmonary vasoconstriction (HPV) - also known as von Euler-Liljestrand mechanism - which serves to match lung perfusion to ...

videomorphometric-analysis-hypoxic-pulmonary-vasoconstriction-intra

Research

JoVE Journal

Medicine

10.5K Views.  Justus-Liebig-University. التهاب الأوعية الدموية الرئوية نقص الأكاكس (HPV) هو ظاهرة فسيولوجية هامة يتم من خلالها مطابقة تغلغل الرئة نقص الأكسيجة في السن الهوائية للتهوية. الجزء الوعائي الرئيسي المساهم في فيروس الورم الحليمي البشري هو الشريان داخل الأسينار. هنا، نقوم بوصف بروتوكولنا لتحل?...

Video: Videomorphometric Analysis of Hypoxic Pulmonary Vasoconstriction of Intra-pulmonary Arteries Using Murine Precision Cut Lung Slices

Bronchial Thermoplasty:  A Novel Therapeutic Approach to Severe Asthma

Bronchial thermoplasty is a non-drug procedure for severe persistent asthma that delivers thermal energy to the airway wall in a precisely controlled manner to reduce excessive airway smooth muscle. Reducing airway smooth muscle decreases the ability of the airways to constrict, thereby reducing the frequency of asthma attacks. Bronchial thermoplasty is delivered by the Alair System and is performed in three outpatient procedure visits, each scheduled approximately three weeks apart. The first procedure treats the airways of the right lower lobe, the second treats the airways of the left lower lobe and the third and final procedure treats the airways in both upper lobes. After all three procedures are performed the bronchial thermoplasty treatment is complete.
Bronchial thermoplasty is performed during bronchoscopy with the patient under moderate sedation. All accessible airways distal to the mainstem bronchi between 3 and 10 mm in diameter, with the exception of the right middle lobe, are treated under bronchoscopic visualization. Contiguous and non-overlapping activations of the device are used, moving from distal to proximal along the length of the airway, and systematically from airway to airway as described previously. Although conceptually straightforward, the actual execution of bronchial thermoplasty is quite intricate and procedural duration for the treatment of a single lobe is often substantially longer than encountered during routine bronchoscopy. As such, bronchial thermoplasty should be considered a complex interventional bronchoscopy and is intended for the experienced bronchoscopist. Optimal patient management is critical in any such complex and longer duration bronchoscopic procedure. This article discusses the importance of careful patient selection, patient preparation, patient management, procedure duration, postoperative care and follow-up to ensure that bronchial thermoplasty is performed safely.
Bronchial thermoplasty is expected to complement asthma maintenance medications by providing long-lasting asthma control and improving asthma-related quality of life of patients with severe asthma. In addition, bronchial thermoplasty has been demonstrated to reduce severe exacerbations (asthma attacks) emergency rooms visits for respiratory symptoms, and time lost from work, school and other daily activities due to asthma.

Bronchial thermoplasty is a non-drug procedure for severe persistent asthma that delivers thermal energy to the airway wall in a precisely controlled manner to reduce excessive airway smooth muscle. Reducing airway smooth muscle decreases the ability of the airways to constrict, thereby reducing the frequency of asthma attacks.

القصبي Thermoplasty : رواية نهج علاجي لمرض الربو الحاد

Bronchial thermoplasty is a non-drug procedure for severe persistent asthma that delivers thermal energy to the airway wall in a precisely controlled ...

Angiogenesis in the Ischemic Rat Lung

The adult lung is perfused by both the systemic bronchial artery and the entire venous return flowing through the pulmonary arteries. In most lung pathologies, it is the smaller systemic vasculature that responds to a need for enhanced lung perfusion and shows robust neovascularization. Pulmonary vascular ischemia induced by pulmonary artery obstruction has been shown to result in rapid systemic arterial angiogenesis in man as well as in several animal models. Although the histologic assessment of the time course of bronchial artery proliferation in rats was carefully described by Weibel 1, mechanisms responsible for this organized growth of new vessels are not clear. We provide surgical details of inducing left pulmonary artery ischemia in the rat that leads to bronchial neovascularization. Quantification of the extent of angiogenesis presents an additional challenge due to the presence of the two vascular beds within the lung. Methods to determine functional angiogenesis based on labeled microsphere injections are provided.

The lung is perfused by both the systemic bronchial artery and pulmonary arteries. In most lung pathologies, it is the smaller systemic vasculature that shows robust neovascularization. Cessation of pulmonary blood flow promotes brisk bronchial angiogenesis. We provide surgical details of inducing left pulmonary artery ischemia that promotes bronchial neovascularization.

الأوعية الدموية في الرئة الجرذ الدماغية

The  adult lung is perfused by both the systemic bronchial artery and the entire  venous return flowing through the pulmonary arteries. In most lung ...

Increasing Pulmonary Artery Pulsatile Flow Improves Hypoxic Pulmonary Hypertension in Piglets

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a disease affecting distal pulmonary arteries (PA). These arteries are deformed, leading to right ventricular failure. Current treatments are limited. Physiologically, pulsatile blood flow is detrimental to the vasculature. In response to sustained pulsatile stress, vessels release nitric oxide (NO) to induce vasodilation for self-protection. Based on this observation, this study developed a protocol to assess whether an artificial pulmonary pulsatile blood flow could induce an NO-dependent decrease in pulmonary artery pressure. One group of piglets was exposed to chronic hypoxia for 3 weeks and compared to a control group of piglets. Once a week, the piglets underwent echocardiography to assess PAH severity. At the end of hypoxia exposure, the piglets were subjected to a pulsatile protocol using a pulsatile catheter. After being anesthetized and prepared for surgery, the jugular vein of the piglet was isolated and the catheter was introduced through the right atrium, the right ventricle and the pulmonary artery, under radioscopic control. Pulmonary artery pressure (PAP) was measured before (T0), immediately after (T1) and 30 min after (T2) the pulsatile protocol. It was demonstrated that this pulsatile protocol is a safe and efficient method of inducing a significant reduction in mean PAP via an NO-dependent mechanism. These data open up new avenues for the clinical management of PAH.

Pulmonary hypertension is associated with a significant reduction in pulmonary artery pulsatility, contractility and elasticity, contributing to an increase in pulmonary artery pressure and pulmonary resistance. Using a hypoxic piglet model, this study demonstrated that improving pulmonary artery plasticity using a newly developed pulsatile catheter improves hypoxic pulmonary hypertension.

زيادة الشريان الرئوي نابض تدفق يحسن نقص الأوكسجين ارتفاع ضغط الدم الرئوي في الخنازير

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a disease affecting distal pulmonary arteries (PA). These arteries are deformed, leading to right ventricular ...

Use of Electromagnetic Navigational Transthoracic Needle Aspiration (E-TTNA) for Sampling of Lung Nodules

Lung nodule evaluation represents a clinical challenge especially in patients with intermediate risk for malignancy. Multiple technologies are presently available to sample nodules for pathological diagnosis. Those technologies can be divided into bronchoscopic and non-bronchoscopic interventions. Electromagnetic navigational bronchoscopy is being extensively used for the endobronchial approach to peripheral lung nodules but has been hindered by anatomic challenges resulting in a 70% diagnostic yield. Electromagnetic navigational guided transthoracic needle lung biopsy is novel non-bronchoscopic method that uses a percutaneous electromagnetic tip tracked needle to obtain core biopsy specimens. Electromagnetic navigational transthoracic needle aspiration complements bronchoscopic techniques potentially allowing the provider to maximize the diagnostic yield during one single procedure. This article describes a novel integrated diagnostic approach to pulmonary lung nodules. We propose the use of endobronchial ultrasound transbronchial needle aspiration (EBUS-TBNA) for mediastinal staging; radial EBUS, navigational bronchoscopy and E-TTNA during one single procedure to maximize diagnostic yield and minimize the number of invasive procedures needed to obtain a diagnosis. This manuscript describes in detail how the navigation transthoracic procedure is performed. Additional clinical studies are needed to determine the clinical utility of this novel technology.

Use of Electromagnetic Navigational Transthoracic Needle Aspiration E-TTNA for Sampling of Lung Nodules

We describe the novel use of electromagnetic navigational guided transthoracic needle aspiration for the pathologic assessment of human lung nodules.

استخدام الكهرومغناطيسية الملاحية عبر الصدر إبرة الطموح (E-TTNA) لأخذ عينات من العقيدات الرئة

Lung nodule evaluation represents a clinical challenge especially in patients with intermediate risk for malignancy. Multiple technologies are presently ...

Real-time X-ray Imaging of Lung Fluid Volumes in Neonatal Mouse Lung

At birth, the lung undergoes a profound phenotypic switch from secretion to absorption, which allows for adaptation to breathing independently. Promoting and sustaining this phenotype is critically important in normal alveolar growth and gas exchange throughout life. Several in vitro studies have characterized the role of key regulatory proteins, signaling molecules, and steroid hormones that can influence the rate of lung fluid clearance. However, in vivo examinations must be performed to evaluate whether these regulatory factors play important physiological roles in regulating perinatal lung liquid absorption. As such, the utilization of real time X-ray imaging to determine perinatal lung fluid clearance, or pulmonary edema, represents a technological advancement in the field. Herein, we explain and illustrate an approach to assess the rate of alveolar lung fluid clearance and alveolar flooding in C57BL/6 mice at post natal day 10 using X-ray imaging and analysis. Successful implementation of this protocol requires prior approval from institutional animal care and use committees (IACUC), an in vivo small animal X-ray imaging system, and compatible molecular imaging software.

We present a protocol to assess the rate of alveolar fluid clearance or pulmonary edema in neonatal mouse lung using X-ray imaging technology.

في الوقت الحقيقي الأشعة السينية التصوير من الرئة أحجام السوائل في الأطفال حديثي الولادة الرئة ماوس

At birth, the lung undergoes a profound phenotypic switch from secretion to absorption, which allows for adaptation to breathing independently. Promoting ...

Using Micro-computed Tomography for the Assessment of Tumor Development and Follow-up of Response to Treatment in a Mouse Model of Lung Cancer

Lung cancer is the most lethal cancer in the world. Intensive research is ongoing worldwide to identify new therapies for lung cancer. Several mouse models of lung cancer are being used to study the mechanism of cancer development and to experiment with various therapeutic strategies. However, the absence of a real-time technique to identify the development of tumor nodules in mice lungs and to monitor the changes in their size in response to various experimental and therapeutic interventions hampers the ability to obtain an accurate description of the course of the disease and its timely response to treatments. In this study, a method using a micro-computed tomography (CT) scanner for the detection of the development of lung tumors in a mouse model of lung adenocarcinoma is described. Next, we show that monthly follow-up with micro-CT can identify dynamic changes in the lung tumor, such as the appearance of additional nodules, increase in the size of previously detected nodules, and decrease in the size or complete resolution of nodules in response to treatment. Finally, the accuracy of this real-time assessment method was confirmed with end-point histological quantification. This technique paves the way for planning and conducting more complex experiments on lung cancer animal models, and it enables us to better understand the mechanisms of carcinogenesis and the effects of different treatment modalities while saving time and resources.

We describe a method for the detection of tumor nodule development in the lungs of an adenocarcinoma mouse model using micro-computed tomography and its use for monitoring changes in nodule size over time and in response to treatment. The accuracy of the assessment was confirmed with end-point histological quantification.

باستخدام التصوير المقطعي الصغيرة لتقييم التنمية الورم ومتابعة الاستجابة للعلاج في نموذج الفأر من سرطان الرئة

Lung cancer is the most lethal cancer in the world. Intensive research is ongoing worldwide to identify new therapies for lung cancer. Several mouse ...

Murine Echocardiography of Left Atrium, Aorta, and Pulmonary Artery

The present methodology teaches the investigator how to measure and use the LAV as a surrogate of chronic elevations in Left Ventricular diastolic pressure through echocardiography, as well as to obtain measurements of the Aorta and PA diameter in mice.
Mice older than 10 d of age can be analyzed using the present technique. The technique is composed of 3 main steps: set-up, image acquisition, and image analysis. The set-up step consists of getting the mouse anesthetized with 1% isoflurane, shaving it, and taping it in a supine position to a heated EKG board where the image acquisition will take place. The image acquisition step consists of learning to identify the cardiac structures and obtaining all the required images with its correspondent probe and axis in order to be able to calculate volumes and diameters. The image analysis step consists of measuring the previously acquired images with the aid of computer software.
Advantages of the proposed technique include a fast (15 min) procedure that would allow the researcher to evaluate interventions in a non-invasive, non-terminal approach and therefore follow the same mouse over time; each mouse can be used as its own control. This fact plus having the same operator perform all the acquisition and analysis for the entire experiment minimizes the limitation of operator-dependency. The present methodology is useful for mouse researchers in cardiovascular and pulmonary medicine.

The following protocol describes the methodology for the acquisition and analysis of echocardiographic images used to obtain the Left Atrial Volume (LAV), Aorta (Ao) diameter, and Pulmonary Artery (PA) diameter in mice. This technique is a non-invasive, non-terminal procedure that allows assessment of the cardiopulmonary function.

فأري ضربات القلب من الأذين الأيسر، الأورطي، والشريان الرئوي

The present methodology teaches the investigator how to measure and use the LAV as a surrogate of chronic elevations in Left Ventricular diastolic ...

Absorption of Nasal and Bronchial Fluids: Precision Sampling of the Human Respiratory Mucosa and Laboratory Processing of Samples

The methods of nasal absorption (NA) and bronchial absorption (BA) use synthetic absorptive matrices (SAM) to absorb the mucosal lining fluid (MLF) of the human respiratory tract. NA is a non-invasive technique which absorbs fluid from the inferior turbinate, and causes minimal discomfort. NA has yielded reproducible results with the ability to frequently repeat sampling of the upper airway. 
By comparison, alternative methods of sampling the respiratory mucosa, such as nasopharyngeal aspiration (NPA) and conventional swabbing, are more invasive and may result in greater data variability. Other methods have limitations, for instance, biopsies and bronchial procedures are invasive, sputum contains many dead and dying cells and requires liquefaction, exhaled breath condensate (EBC) contains water and saliva, and lavage samples are dilute and variable.
BA can be performed through the working channel of a bronchoscope in clinic. Sampling is well tolerated and can be conducted at multiple sites in the airway. BA results in MLF samples being less dilute than bronchoalveolar lavage (BAL) samples.
This article demonstrates the techniques of NA and BA, as well as the laboratory processing of the resulting samples, which can be tailored to the desired downstream biomarker being measured. These absorption techniques are useful alternatives to the conventional sampling techniques used in clinical respiratory research.

This manuscript describes the use of nasal and bronchial absorption techniques, specifically using synthetic absorptive matrices (SAM) to sample the mucosal lining fluid (MLF) of the upper and lower airway. These methods provide better standardization and tolerability than existing respiratory sampling techniques.

امتصاص السوائل الآنف والشعب الهوائية: دقة أخذ العينات البشرية الغشاء المخاطي للجهاز التنفسي وتجهيز مختبر عينات

The methods of nasal absorption (NA) and bronchial absorption (BA) use synthetic absorptive matrices (SAM) to absorb the mucosal lining fluid (MLF) of the ...

Quantitative Mapping of Specific Ventilation in the Human Lung using Proton Magnetic Resonance Imaging and Oxygen as a Contrast Agent

Specific ventilation imaging (SVI) is a functional magnetic resonance imaging technique capable of quantifying specific ventilation &#8213; the ratio of the fresh gas entering a lung region divided by the region&#8217;s end-expiratory volume &#8213; in the human lung, using only inhaled oxygen as a contrast agent. Regional quantification of specific ventilation has the potential to help identify areas of pathologic lung function. Oxygen in solution in tissue shortens the tissue&#8217;s longitudinal relaxation time (T1), and thus a change in tissue oxygenation can be detected as a change in T1-weighted signal with an inversion recovery acquired image. Following an abrupt change between two concentrations of inspired oxygen, the rate at which lung tissue within a voxel equilibrates to a new steady-state reflects the rate at which resident gas is being replaced by inhaled gas. This rate is determined by specific ventilation. To elicit this sudden change in oxygenation, subjects alternately breathe 20-breath blocks of air (21% oxygen) and 100% oxygen while in the MRI scanner. A stepwise change in inspired oxygen fraction is achieved through use of a custom three-dimensional (3D)-printed flow bypass system with a manual switch during a short end-expiratory breath hold. To detect the corresponding change in T1, a global inversion pulse followed by a single shot fast spin echo sequence was used to acquire two-dimensional T1-weighted images in a 1.5&#160;T MRI scanner, using an eight-element torso coil. Both single slice and multi-slice imaging are possible, with slightly different imaging parameters. Quantification of specific ventilation is achieved by correlating the time-course of signal intensity for each lung voxel with a library of simulated responses to the air/oxygen stimulus. SVI estimations of specific ventilation heterogeneity have been validated against multiple breath washout and proved to accurately determine the heterogeneity of the specific ventilation distribution.

Specific ventilation imaging is a functional magnetic resonance imaging technique that allows for quantification of regional specific ventilation in the human lung, using inhaled oxygen as a contrast agent. Here, we present a protocol to collect and analyze specific ventilation imaging data.

الخرائط الكمية للتهوية الخاصة في الرئة البشرية باستخدام التصوير بالرنين المغناطيسي البروتون والأكسجين كعامل تباين

Specific ventilation imaging (SVI) is a functional magnetic resonance imaging technique capable of quantifying specific ventilation &#8213; the ratio of ...

Murine Precision-Cut Liver Slices as an Ex Vivo Model of Liver Biology

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic fatty liver disease, metabolic liver disease, and liver cancer) requires experimental manipulation of animal models and in vitro cell cultures. Both techniques have limitations, such as the requirement of large numbers of animals for in vivo manipulation. However, in vitro cell cultures do not reproduce the structure and function of the multicellular hepatic environment. The use of precision-cut liver slices is a technique in which uniform slices of viable mouse liver are maintained in laboratory tissue culture for experimental manipulation. This technique occupies an experimental niche that exists between animal studies and in vitro cell culture methods. The presented protocol describes a straightforward and reliable method to isolate and culture precision-cut liver slices from mice. As an application of this technique, ex vivo liver slices are treated with bile acids to simulate cholestatic liver injury and ultimately assess the mechanisms of hepatic fibrogenesis.

This protocol provides a simple and reliable method for the production of viable precision-cut liver slices from mice. The ex vivo tissue samples can be maintained under laboratory tissue culture conditions for multiple days, providing a flexible model to examine liver pathobiology.

المورين الدقة قطع شرائح الكبد كنموذج السابق فيفو بيولوجيا الكبد

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic ...