نحن ممتنون للدكتورين أرافينتهان صامويل ومارك غيرشو اللذين ساعدا في تطوير النسخة الأولية من الجهاز السلوكي وماثيو باتي الذي قام بتعديل الجهاز السلوكي. وقد دعم هذا البحث من قبل الأمين غرانت من مستشفى سينسيناتي للأطفال، JST/PRESTO، مارس من الدايمات والمعاهد الوطنية للصحة R01 GM107582 إلى F.N.H.

1. إعداد الذباب
<ol><li>تجارب الظلام الفاتح (LD)
	<ol>
<li>رفع الذباب في الحاضنات (25 درجة مئوية/40-60٪ الرطوبة النسبية (RH)) تحت ضوء 12 ساعة / الظلام 12 ساعة (LD) دورات. شدة الضوء من الحاضنات هو ~ 500-1000 لوكس.</li>
		<li>حاضنتان ضروريتان لإكمال فحوصات السلوك على مدار 24 ساعة. يجب أن يكون لكل من الحاضنات ضوء قابل للبرمجة مع وظائف ON OFF. وينبغي أن يكون لها أيضا الأبواب الصلبة التي لا نفاذية للضوء(أي لا الزجاج أو زجاج شبكي). ملاحظة: يجب تعيين حاضنة واحدة حاضنة "نهارية" وتعيينها إلى دورة LD من ضوء 12 ساعة و 12 ساعة مظلمة. وينبغي تعيين الحاضنة الثانية حاضنة "ليلية" وتعيينها إلى عكس الحاضنة الأولى مع حلول الظلام 12 ساعة يليها ضوء 12 ساعة. يجب وضع الحاضنة الليلية في الغرفة التي يمكن الوصول إليها في الظلام ، بطريقة يمكن بها الوصول بسهولة إلى الذباب الذي يعاني من ظروف ليلية للتجارب.</li>
		<li>ضع قنينات الذبابة إما في حاضنات نهارية أو ليلية. جمع الذباب فقست حديثا في قارورة جديدة، 20-30 لكل المقايسة والحفاظ في نفس الحاضنة لمدة 2-3 أيام.</li>
		<li>بعد 2-3 أيام، استخدم الذباب لل المقايسة السلوكية تفضيل درجة الحرارة.<ol>
<li>لليوم (Zeitgeber الوقت (ZT) 0-12) التجارب، وجمع الذباب من حاضنة اليوم.</li>
			<li>قبل التجارب السلوكية مباشرة، أخرج قنينات الذباب المجمعة من حاضنة اليوم.</li>
			<li>لليلة (ZT 13-24) التجارب، وجمع الذباب من حاضنة الليل.</li>
			<li>قبل التجارب السلوكية مباشرة، أخرج قنينات الذباب المجمعة من حاضنة الليل، ولفها بورق الألومنيوم ووضعها في صندوق في الغرفة المظلمة تحت مصباح أحمر. ملاحظة: نظرا لأن الفحص السلوكي لتفضيل درجة الحرارة يتم تحت الظلام للتجارب الليلية ، فيجب منع التعرض للضوء للذباب حتى نهاية التجارب السلوكية. ملاحظة: لا ينبغي أن يتعرض الذباب لثاني أكسيد الكربون في اليوم الذي ستجري فيه التجارب.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>تجارب الظلام المستمر (DD)
	<ol>
<li>
يوم DD
		<ol>
<li>من الضروري إنشاء حاضنة إضافية للتجارب النهارية ل DD، والتي نشير إليها كحاضنة "انتقالية" لبقية المخطوطة. يجب وضع حاضنة الانتقال في الغرفة التي يمكن الوصول إليها في الظلام ، بطريقة يمكن بها الوصول بسهولة إلى الذباب الذي يعاني من ظروف DD للتجارب. مثال على ذلك جدول زمني ضوء لحاضنة الانتقال سيكون ضوء ON من 1 بعد الظهر -7 مساء وضوء قبالة في 7 مساء-1 بعد الظهر(الشكل 1).</li>
			<li>جمع الذباب التي أثيرت في حاضنة اليوم. ضع قنينات الذباب في حاضنة الانتقال بين الساعة 1 ظهرا و7 مساء، عندما يكون الضوء قيد تشغيل. وبهذه الطريقة، يتعرض الذباب للضوء بشكل صحيح حتى الساعة 7 مساء، وفي ذلك الوقت يتم إيقاف تشغيل الضوء.</li>
			<li>في اليوم التالي، قبل الساعة الواحدة ظهرا، في ظل ظروف مظلمة، أخرج قنينات الذباب من حاضنة الانتقال، ولفها بورق الألومنيوم ووضعها في صندوق. احتفظ بالصندوق في أي حاضنة ليوم آخر.</li>
		</ol>
</li>
		<li>
DD ليلة
		<ol>
<li>جمع الذباب التي أثيرت في حاضنة الليل في الظلام تحت مصباح أحمر. أو بالإضافة إلى ذلك جمع الذباب عندما يكون ضوء الحاضنة الليلية على.</li>
			<li>التفاف قوارير جمعت مع رقائق الألومنيوم في الظلام في أي وقت الأضواء هي إيقاف ووضع قوارير في مربع. احتفظ بالمربع في أي حاضنة لمدة يومين آخرين(الشكل 1B). ملاحظة: نظرا لأن الفحص السلوكي لتفضيل درجة الحرارة يتم تحت الظلام للتجارب الليلية ، فيجب منع التعرض للضوء للذباب حتى نهاية التجارب السلوكية.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>تجارب الضوء الثابت (LL)
	<ol>
<li>
يوم LL
		<ol>
<li>حاضنة إضافية ضرورية للتجارب يوم LL. تحافظ هذه الحاضنة على حالة LL (25 درجة مئوية، 800 لوكس)، مع تشغيل الضوء باستمرار.</li>
			<li>جمع الذباب التي أثيرت في حاضنة اليوم. ضع قنينات الذباب في حاضنة LL في أي وقت خلال "يومها".</li>
		</ol>
</li>
		<li>
LL ليلة
		<ol>
<li>جمع الذباب التي أثيرت في حاضنة الليل. نقل قنينات الذباب من الحاضنة الليلية إلى حاضنة LL خلال الوقت الذي يكون فيه الضوء في الحاضنة الليلية ON. ملاحظة: على سبيل المثال، يتم إيقاف تشغيل الضوء في الساعة 7 صباحا في الحاضنة الليلية. نقل قنينات الذباب من الحاضنة الليلية إلى حاضنة LL قبل الساعة 7 صباحا والحفاظ على القنينات في حاضنة LL لمدة 4 أيام أخرى. ملاحظة: في اليوم 4 في LL الظروف، يتم إلغاء تذبذب النشاط الحركي15،16،في حين لا يزال يستمر TPR 3.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
</ol>2. جهاز للتفضيل درجة الحرارة المقايسة السلوكية
<ol><li>ضع غطاء زجاج شبكي (29 سم × 19.2 سم)(الشكل 4)على لوحة من الألومنيوم.</li>
	<li>مراقبة درجة حرارة الهواء بين لوحة والغطاء. يتم إرفاق ستة مسابير درجة الحرارة في مواقع مختلفة على داخل الغطاء داخل أحد الممرات (الشكل 2). ملاحظة: تأكد من أن المسابير لا تلمس لوحة الألومنيوم أو غطاء زجاج شبكي. يجب تعيين درجة حرارة الهواء إلى تدرج من 18-32 درجة مئوية.</li>
	<li>ضع الجهاز في غرفة بيئية صيانتها عند 25 درجة مئوية/65-75٪ RH. هذه الغرفة يجب أن تكون مغلقة من أي ضوء خارجي عادة ما تكون الغرفة البيئية مجهزة بموا مراوح للحفاظ على درجة حرارة ورطوبة معينة. ملاحظة: من المرجح أن الهواء من المروحة يزعج تدرج درجة الحرارة المستقر على الجهاز. لمنع ذلك، نستخدم ورقة شفافة تغطي المنطقة المحيطة بالجهاز.</li>
	<li>إعداد ميزان الحرارة ومقياس الرطوبة للتحقق من درجة الحرارة والرطوبة في الغرفة البيئية. ملاحظة: الضوء يؤثر على درجة الحرارة تفضيل Drosophila3. وينبغي توفير نفس كثافة الضوء على الجهاز بشكل موحد. شدة أضواء غرفتنا البيئية ~ 800 لوكس. ملاحظة: عند إجراء التجارب السلوكية، ضع أنبوبا متصلا بخزان CO2 أو تموين بالقرب من ثقب الجزء العلوي من الجهاز من أجل تخدير الذباب والتخلص منه.</li>
</ol>3. إعداد جهاز للاستخدام
<ol><li>بدوره على الجهاز لمدة 30 دقيقة على الأقل من أجل تحديد درجة الحرارة الانحدار بشكل صحيح على سطح لوحة (الشكل 3).</li>
	<li>قم بتغطية غطاء جهاز السلوك بطارد الماء لمنع الذباب من تسلق جدران أو سقف الغطاء. مسح طارد المياه الزائدة قبالة وترك الغطاء لمدة 25-30 دقيقة لتجف.</li>
	<li>إزالة أي تكثيف على لوحة الألومنيوم. ضع غطاء زجاج شبكي على لوحة الألومنيوم وآمن مع ستة المشابك C(الشكل 2). ملاحظة: من المهم جدا أن الغطاء مختومة بشكل جيد، إذا لزم الأمر يمكن استخدام الشريط عصا مزدوجة.</li>
	<li>اترك الغطاء لمدة 15 دقيقة على الأقل. يتم إنشاء تدرج درجة حرارة الهواء بين لوحة الألومنيوم والغطاء من 18-32 درجة مئوية.</li>
</ol>4. درجة الحرارة تفضيل السلوك المقايسة
<ol><li>تحميل الذباب في الفضاء بين لوحة الألومنيوم وغطاء زجاج شبكي للجهاز من خلال ثقوب صغيرة في وسط كل حارة من الغطاء (الشكلين 2 و 4). تغطية الثقوب مع زلات الغطاء لمنع الذباب من الهرب.</li>
	<li>للظروف المظلمة، أطفئ جميع الأضواء في الغرفة البيئية. يمكن استخدام مصباح أحمر عندما يتم وضع الذباب في الجهاز. تأكد من عدم تعرض الذباب لأي أضواء باستثناء مصباح أحمر حتى يتم إجراء التجارب السلوكية.</li>
	<li>لكل تجربة، استخدم ذبابة بالغة من 20 إلى 25 ذبابة، والتي لا يمكن إعادة استخدامها في التجارب اللاحقة. يتم إجراء الفحص السلوكي لمدة 30 دقيقة. التقاط بعض الصور مع أو بدون فلاش. يجب الحرص على عدم إحداث الكثير من الضوضاء أو أي حركات مفاجئة أثناء التجارب.</li>
	<li>سجل درجة حرارة جميع المسابير الستة على الجهاز. يحيط علما بدرجة حرارة الغرفة وكذلك الرطوبة.</li>
	<li>تخدير الذباب في الجهاز مع غاز ثاني أكسيد الكربون ، وتخفيف المشابك ، وإزالة غطاء زجاج شبكي ، وإزالة الذباب من اللوحة. بعد كل تجربة، يتم التخلص من الذباب. مسح أي تكثيف أو رطوبة من لوحة. استبدال الغطاء على لوحة وتشديد مع المشابك استعدادا للتجربة القادمة.</li>
	<li>من أجل الحصول على تمثيل لتفضيل درجة الحرارة طوال اليوم ، يتم تقسيم فترة 24 ساعة إلى ثماني مناطق زمنية ، أربع خلال النهار وأربعة في الليل. على سبيل المثال، نستخدم هذه ZT أو CT 1-3، 4-6، 7-9، 10-12، 13-15، 16-18، 19-21 و 22-24. ملاحظة: نظرا لأن الاختلافات الظاهرية الناتجة عن تأثيرات الإخفاء متوقعة مباشرة بعد تشغيل الضوء (ZT0) أو OFF (ZT12)، فإننا لا ندرس سلوك تفضيل درجة الحرارة خلال هذه الأوقات (ZT أو CT 0-1 و11.5-13 و23.5-24). يجب إجراء خمس تجارب على الأقل في كل منطقة زمنية لكي تكون النتائج سليمة إحصائيا.</li>
</ol>5. تحليل البيانات
<ol><li>حساب درجة الحرارة الانحدار على النحو التالي: تحديد حيث يتم وضع مسابير درجة الحرارة على أساس اثنين من الحكام التي يتم وضعها على الجانب العلوي والسفلي من غطاء زجاج شبكي على طول حواف(الشكل 2A).</li>
	<li>ويقدر تدرج درجة الحرارة بين مسابير درجة الحرارة لتكون خطية. استنادا إلى مواقع المسابير درجة الحرارة، فضلا عن درجات الحرارة المسجلة المقابلة لها، رسم خطوط تمثل كل درجة من درجات الحرارة في الموقف المناسب على الصور. عد عدد الذباب الموجود في كل فاصل درجة. استبعاد أي الذباب على الجدران أو سقف الغطاء.</li>
	<li>حساب النسبة المئوية للذباب في كل نطاق درجة حرارة من كل حارة. يتم حساب متوسط درجة الحرارة المفضلة عن طريق تلخيص منتجات النسبة المئوية لكل فاصل زمني من الذباب ودرجة الحرارة، كما هو موضح أدناه: ٪ من الذباب × 18.5 درجة مئوية + ٪ من الذباب × 19.5 درجة مئوية + ٪ من الذباب × 20.5 درجة مئوية ....+ ٪ من الذباب × 31.5 درجة مئوية + ٪ من الذباب × 32.5 درجة مئوية.</li>
	<li>حساب متوسط درجة الحرارة المفضلة في كل منطقة زمنية: يتم تنفيذ سلوك تفضيل درجة الحرارة >5 مرات خلال كل منطقة زمنية (ZT 1-3 و 4-6 و 7-9 و 10-12 و 13-15 و 16-18 و 19-21 و 22-24). لحساب متوسط درجة الحرارة المفضلة في كل منطقة زمنية، يتم متوسط متوسط درجة الحرارة المفضلة لكل تجربة معا. أشرطة الخطأ s.e.m. تساوي الخطأ بين التجارب.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Krauchi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+thermophysiological+cascade+leading+to+sleep+initiation+in+relation+to+phase+of+entrainment.">The thermophysiological cascade leading to sleep initiation in relation to phase of entrainment.</a> Sleep Med. Rev. 11, 439-451 (2007).</li><li>Krauchi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+human+sleep-wake+cycle+reconsidered+from+a+thermoregulatory+point+of+view.">The human sleep-wake cycle reconsidered from a thermoregulatory point of view.</a> Physiol. Behav. 90, 236-245 (2007).</li><li>Kaneko, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+Rhythm+of+Temperature+Preference+and+Its+Neural+Control+in+Drosophila.">Circadian Rhythm of Temperature Preference and Its Neural Control in Drosophila.</a> Curr. Biol. 22, 1851-1857 (2012).</li><li>Allada, R., Chung, B. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+organization+of+behavior+and+physiology+in+Drosophila.">Circadian organization of behavior and physiology in Drosophila.</a> Annu. Rev. Physiol. 72, 605-624 (2010).</li><li>Garrity, P. A., Goodman, M. B., Samuel, A. D., Sengupta, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Running+hot+and+cold:+behavioral+strategies,+neural+circuits,+and+the+molecular+machinery+for+thermotaxis+in+C.+elegans+and+Drosophila..">Running hot and cold: behavioral strategies, neural circuits, and the molecular machinery for thermotaxis in C. elegans and Drosophila..</a> Genes Dev. 24, 2365-2382 (2010).</li><li>Hamada, F. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+internal+thermal+sensor+controlling+temperature+preference+in+Drosophila.">An internal thermal sensor controlling temperature preference in Drosophila.</a> Nature. 454, 217-220 (2008).</li><li>Hong, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cAMP+signalling+in+mushroom+bodies+modulates+temperature+preference+behaviour+in+Drosophila.">cAMP signalling in mushroom bodies modulates temperature preference behaviour in Drosophila.</a> Nature. 454, 771-775 (2008).</li><li>Dillon, M. E., Wang, G., Garrity, P. A., Huey, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review:+Thermal+preference+in+Drosophila.">Review: Thermal preference in Drosophila.</a> J. Therm. Biol. 34, 109-119 (2009).</li><li>Viswanath, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Opposite+thermosensor+in+fruitfly+and.">Opposite thermosensor in fruitfly and.</a> Nature. 423, 822-823 (2003).</li><li>Gallio, M., Ofstad, T. A., Macpherson, L. J., Wang, J. W., Zuker, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+coding+of+temperature+in+the+Drosophila+brain.">The coding of temperature in the Drosophila brain.</a> Cell. 144, 614-624 (2011).</li><li>Stevenson, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relative+importance+of+behavioral+and+physiological+adjustments+controlling+body+temperature+in+terrestrial+ectotherms.">The relative importance of behavioral and physiological adjustments controlling body temperature in terrestrial ectotherms.</a> Am. Nat. 126 (3), (1985).</li><li>Refinetti, R., Menaker, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+circadian+rhythm+of+body+temperature.">The circadian rhythm of body temperature.</a> Physiol. Behav. 51, 613-637 (1992).</li><li>Duffy, J. F., Dijk, D. J., Klerman, E. B., Czeisler, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Later+endogenous+circadian+temperature+nadir+relative+to+an+earlier+wake+time+in+older+people.">Later endogenous circadian temperature nadir relative to an earlier wake time in older people.</a> Am. J. Physiol. 275, 1478-1487 (1998).</li><li>Saper, C. B., Lu, J., Chou, T. C., Gooley, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hypothalamic+integrator+for+circadian+rhythms.">The hypothalamic integrator for circadian rhythms.</a> Trends Neurosci. 28, 152-157 (2005).</li><li>Konopka, R. J., Pittendrigh, C., Orr, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocal+behaviour+associated+with+altered+homeostasis+and+photosensitivity+of+Drosophila+clock+mutants.">Reciprocal behaviour associated with altered homeostasis and photosensitivity of Drosophila clock mutants.</a> J. Neurogenet. 6, 1-10 (1989).</li><li>Qiu, J., Hardin, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=per+mRNA+cycling+is+locked+to+lights-off+under+photoperiodic+conditions+that+support+circadian+feedback+loop+function.">per mRNA cycling is locked to lights-off under photoperiodic conditions that support circadian feedback loop function.</a> Mol. Cell Biol. 16, 4182-4188 (1996).</li><li>Crocker, A., Sehgal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+analysis+of+sleep.">Genetic analysis of sleep.</a> Genes Dev. 24, 1220-1235 (1220).</li><li>Hendricks, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rest+in+Drosophila+is+a+sleep-like+state.">Rest in Drosophila is a sleep-like state.</a> Neuron. 25, 129-138 (2000).</li><li>Shaw, P. J., Cirelli, C., Greenspan, R. J., Tononi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlates+of+sleep+and+waking+in+Drosophila+melanogaster.">Correlates of sleep and waking in Drosophila melanogaster.</a> Science. 287, 1834-1837 (2000).</li><li>Parisky, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PDF+cells+are+a+GABA-responsive+wake-promoting+component+of+the+Drosophila+sleep+circuit.">PDF cells are a GABA-responsive wake-promoting component of the Drosophila sleep circuit.</a> Neuron. 60, 672-682 (2008).</li></ol>

لا يوجد شيء للكشف عنه.

هنا، نوضح تفاصيل الجهاز السلوكي تفضيل درجة الحرارة وتحليل سلوك TPR. Drosophila المعرض ملامح بارزة وقوية وقابلة للاستنساخ من TPR التي تسيطر عليها على مدار الساعة. ومع ذلك ، تشير بياناتنا إلى أن هناك عاملين على الأقل ، الضوء المحيط والعمر ، يزعجان بشكل كبير الأنماط الظاهرية السلوكية ل TPR.
<p clas...

درجة الحرارة هي إشارة بيئية في كل مكان. الحيوانات تظهر مجموعة متنوعة من السلوكيات من أجل تجنب درجات الحرارة الضارة والبحث عن تلك مريحة. Drosophila يحمل سلوك تفضيل درجة الحرارةقوية 6,7. عندما يتم تحرير الذباب في درجة حرارة الانحدار من 18-32 درجة مئوية، والذباب تجنب كل من درجات الحرارة الدافئة والباردة وأخيرا اختيار درجة حرارة مفضلة من 25 درجة مئوية في الصباح3. أجهزة استشعار درجة الحرارة الدافئة هي مجموعة من الخلايا العصبية الحرارية الحسية، والخلايا العصبية AC، والتي تعبر عن Drosophila مستقبلات عابرة المحتملة (TPR) قناة، TRPA16،9. وتقع أجهزة استشعار درجة الحرارة الباردة في شرائح الهوائي الثالث، حيث أن تأليه شرائح الهوائي الثالث يسبب عدم تجنب درجة الحرارة الباردة6. في الآونة الأخيرة، تم التعرف على البروتين TRPP بريفيدو (Brv)10. منذ يتم التعبير عن Brv في شرائح الهوائي الثالث ويتوسط الكشف عن البرد، Brv هو جزيء استشعار البرد ممكن، وهو أمر بالغ الأهمية لسلوك تفضيل درجة الحرارة. وباختصار، يستخدم الذباب جهازي استشعار درجة الحرارة هذين لتجنب درجات الحرارة الدافئة والباردة والعثور على درجة حرارة مفضلة.
في حين تولد الثدييات الحرارة لتنظيم درجة حرارة الجسم ، فإن ectotherms تكيف بشكل عام درجات حرارة جسمها مع درجة الحرارة المحيطة11. ومن المعروف أن بعض ectotherms لعرض سلوك TPR اليومية التي يعتقد أن تكون استراتيجية لectotherms لتنظيم BTR12بهم . لتحديد ما إذا كان الذباب عرض TPR، كررنا التحليل السلوكي تفضيل درجة الحرارة في نقاط مختلفة خلال فترة 24 ساعة. وجدنا أن Drosophila معرض TPR اليومية، والتي هي منخفضة في الصباح وعالية في المساء ويتبع نمط مماثل لتلك التي من BTR في البشر13.
في Drosophila، هناك ~ 150 ساعة الخلايا العصبية في الدماغ. تسمى الخلايا العصبية على مدار الساعة التي تنظم النشاط الحركي م وE مذبذبات. ومع ذلك، من المثير للاهتمام، M و E مؤشرات التذبذب لا تنظم TPR، بدلا من ذلك، أظهرنا أن الخلايا العصبية على مدار الساعة DN2 في الدماغ تنظيم TPR ولكن ليس النشاط الحركي. وتشير هذه البيانات إلى أن TPR ينظم بشكل مستقل عن النشاط الحركي. وتجدر الإشارة إلى أن الثدييات BTR يتم تنظيمها بشكل مستقل من النشاط الحركي. دراسات الاستئصال في الفئران تبين أن يتم التحكم BTR من خلال الخلايا العصبية SCN محددة التي تستهدف مجموعة فرعية مختلفة من الخلايا العصبية المنطقة دون البطينية من تلك التي تتحكم في النشاط الحركي14. لذلك ، تنظر بياناتنا في إمكانية الحفاظ على BTR الثدييات و TPR الذبابةتطوريا 3، لأن كلا من TPR الذبابة والثدييات BTR تظهر إيقاعات درجة الحرارة المعتمدة على مدار الساعة ، والتي يتم تنظيمها بشكل مستقل من النشاط الحركي.
هنا، ونحن نصف تفاصيل كيفية تحليل المقايسة السلوكية TPR في Drosophila. تسمح هذه الطريقة بالتحقيق ليس فقط في الآلية الجزيئية والدوائر العصبية ل TPR ، ولكن أيضا في كيفية دمج الدماغ للإشارات البيئية المختلفة والساعات البيولوجية الداخلية.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="578">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:172px;">Bright Lab Jr. Safelight</td>
			<td style="width:109px;">Amazon</td>
			<td style="width:153px;">#B00013J8UY</td>
			<td style="width:144px;">Red light for dark rooms</td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:172px;">Rain X</td>
			<td style="width:109px;">SOPUS products</td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td style="width:144px;">Water repellent: Apply the plexiglass cover</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:172px;">C-Clamp</td>
			<td style="width:109px;">Home Depot</td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td style="width:144px;"></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:172px;">Temperature/hygrometer</td>
			<td style="width:109px;">Fisher</td>
			<td style="width:153px;">15-077-963</td>
			<td style="width:144px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:172px;"></td>
			<td style="width:109px;"></td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td style="width:144px;"></td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:172px;">Peltier devices</td>
			<td style="width:109px;">TE Technology, Inc.</td>
			<td style="width:153px;">HP-127-1.4-1.15-71P</td>
			<td style="width:144px;"></td>
		</tr>
		<tr height="30">
			<td height="30" style="height:30px;width:172px;">Thermometer</td>
			<td style="width:109px;">Fluke</td>
			<td style="width:153px;">Fluke 52II</td>
			<td style="width:144px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:172px;">Bench top controller</td>
			<td style="width:109px;">Oven Industries</td>
			<td style="width:153px;">5R6-570-15R and 5R6-570-24R</td>
			<td style="width:144px;"></td>
		</tr>
		<tr height="36">
			<td height="36" style="height:36px;width:172px;">Temperature sensor probe</td>
			<td style="width:109px;">Oven Industries</td>
			<td style="width:153px;">TR67-32</td>
			<td style="width:144px;"></td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:172px;">Generic 480 Watt ATX power supply</td>
			<td style="width:109px;"></td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td style="width:144px;">computer cooling system</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:172px;">MCR220-QP-RES Dual 120 mm Radiator with reservoir&#160;</td>
			<td style="width:109px;">Swiftech</td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td style="width:144px;">computer cooling system</td>
		</tr>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:50px;width:172px;">MCP350 In-Line 12V DC pump</td>
			<td style="width:109px;">Swiftech</td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td style="width:144px;">computer cooling system</td>
		</tr>
		<tr height="49">
			<td height="49" style="height:49px;width:172px;">MCW50 graphics Card liquid cooler</td>
			<td style="width:109px;">Swiftech</td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td style="width:144px;">computer cooling system</td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:172px;">Scythe Kaze-Jyuni SY1225SL12SH fan</td>
			<td style="width:109px;">Crazy PC</td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td style="width:144px;">computer cooling system</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

design and analysis of temperature preference behavior and its circadian rhythm in drosophila

الساعة circadian ينظم العديد من جوانب الحياة، بما في ذلك النوم، والنشاط الحركي، ودرجة حرارة الجسم (BTR)إيقاعات 1،2. حددنا مؤخرا رواية Drosophila circadian الناتج ، ودعا إيقاع تفضيل درجة الحرارة (TPR) ، الذي ترتفع درجة الحرارة المفضلة في الذباب خلال النهار وتنخفض خلال الليل 3. والمثير للدهشة، يتم التحكم في TPR والنشاط الحركي من خلال الخلايا العصبية circadian متميزة3. Drosophila النشاط الحركي هو نتاج سلوكي circadian معروفة وقدمت مساهمات قوية لاكتشاف العديد من الجينات على مدار الساعة circadian الثدييات المحفوظة وآليات4. ولذلك، فإن فهم TPR يؤدي إلى تحديد آليات circadian الجزيئية والخلوية غير معروفة حتى الآن. هنا، نقوم بوصف كيفية إجراء وتحليل المقايسة TPR. هذه التقنية لا تسمح فقط لتشريح الآليات الجزيئية والعصبية من TPR، ولكن أيضا يوفر رؤى جديدة في الآليات الأساسية لوظائف الدماغ التي تدمج إشارات بيئية مختلفة وتنظيم السلوكيات الحيوانية. وعلاوة على ذلك، تشير بياناتنا المنشورة مؤخرا إلى أن ذبابة TPR تشترك في ميزات مع الثدييات BTR3. الدروزوفيلا هي ectotherms ، حيث يتم تنظيم درجة حرارة الجسم عادة سلوكيا. لذلك ، TPR هي استراتيجية تستخدم لتوليد درجة حرارة الجسم الإيقاعي في هذه الذباب5-8. ونحن نعتقد أن المزيد من الاستكشاف من Drosophila TPR سوف تسهل توصيف الآليات الكامنة وراء التحكم في درجة حرارة الجسم في الحيوانات.

يظهر مثال على إيقاع تفضيل درجة الحرارة في الشكل 5. إذا تم إجراء السلوك بنجاح ، يجب أن يحمل الذباب TPR حيث يفضل درجة حرارة منخفضة في الصباح ودرجة حرارة أعلى في المساء. وينبغي ملاحظة ~ 1-1.5 درجة مئوية خلال النهار في تفضيل درجة الحرارة خلال النهار، بغض النظر عن الخلفية الوراثية، حيث أظهرن...

Watch this Scientific Journal Video about Design and Analysis of Temperature Preference Behavior and its Circadian Rhythm in Drosophila at JoVE.com

Design and Analysis of Temperature Preference Behavior and its Circadian Rhythm in Drosophila

حددنا مؤخرا رواية إخراج Drosophila circadian ، إيقاع تفضيل درجة الحرارة (TPR) ، حيث ترتفع درجة الحرارة المفضلة في الذباب خلال النهار وتنخفض أثناء الليل. وينظم TPR بشكل مستقل عن آخر الناتج circadian، النشاط الحركي. هنا نحن نصف تصميم وتحليل TPR في Drosophila.

تصميم وتحليل سلوك تفضيل درجة الحرارة وإيقاعها Circadian في Drosophila

The circadian clock regulates many aspects of life, including sleep, locomotor activity, and body temperature (BTR) rhythms1,2. We recently identified a ...

design-analysis-temperature-preference-behavior-its-circadian-rhythm

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Cell Biology

Biology

Design and Analysis of Temperature Preference Behavior and its Circadian Rhythm in Drosophila

Unit 1

Alternative Signaling Routes in Gene Expression

SCIENTISTS IN ACTION

8.0K Views.  Cincinnati Childrens Hospital Medical Center. حددنا مؤخرا رواية إخراج Drosophila circadian ، إيقاع تفضيل درجة الحرارة (TPR) ، حيث ترتفع درجة الحرارة المفضلة في الذباب خلال النهار وتنخفض أثناء الليل. وينظم TPR بشكل مستقل عن آخر الناتج circadian، النشاط الحركي. هنا نحن نصف تصميم وتحليل TPR في Drosophila.

Video: Design and Analysis of Temperature Preference Behavior and its Circadian Rhythm in Drosophila

High-resolution Measurement of Odor-Driven Behavior in Drosophila Larvae

Olfactory responses in Drosophila larvae have been traditionally studied in Petri dishes comprising a single peripheral odor source. In this behavioral paradigm, the experimenter usually assumes that the rapid diffusion of odorant molecules from the source leads to the creation of a stable gradient in the dish. To establish a quantitative correlation between sensory inputs and behavioral responses, it is necessary to achieve a more thorough characterization of the odorant stimulus conditions. In this video article, we describe a new method allowing the construction of odorant gradients with stable and controllable geometries. We briefly illustrate how these gradients can be used to screen for olfactory defects (full and partial anosmia) and to study more subtle features of chemotaxis behavior.

In this video article, we describe a new method allowing the construction of odorant gradients with stable and controllable geometries. We briefly illustrate how these gradients can be used to screen for olfactory defects (full and partial anosmia) and to study more subtle features of chemotaxis behavior.

عالية الدقة قياس سلوك رائحة يحركها يرقات ذبابة الفاكهة في

Olfactory responses in Drosophila larvae have been traditionally studied in Petri dishes comprising a single peripheral odor source. In this behavioral ...

Lens Transplantation in Zebrafish and its Application in the Analysis of Eye Mutants

The lens plays an important role in the development of the optic cup[1,2]. Using the zebrafish as a model organism, questions regarding lens development can be addressed. The zebrafish is useful for genetic studies due to several advantageous characteristics, including small size, high fecundity, short lifecycle, and ease of care. Lens development occurs rapidly in zebrafish. By 72 hpf, the zebrafish lens is functionally mature [3]. Abundant genetic and molecular resources are available to support research in zebrafish. In addition, the similarity of the zebrafish eye to those of other vertebrates provides basis for its use as an excellent animal model of human defects[4-7]. Several zebrafish mutants exhibit lens abnormalities, including high levels of cell death, which in some cases leads to a complete degeneration of lens tissues [8]. To determine whether lens abnormalities are due to intrinsic causes or to defective interactions with the surrounding tissues, transplantation of a mutant lens into a wild-type eye is performed. Using fire-polished metal needles, mutant or wild-type lenses are carefully dissected from the donor animal, and transferred into the host. To distinguish wild-type and mutant tissues, a transgenic line is used as the donor. This line expresses membrane-bound GFP in all tissues, including the lens. This transplantation technique is an essential tool in the studies of zebrafish lens mutants.

Lens development involves interactions with other tissues. Several zebrafish eye mutants are characterized by an abnormally small lens size. Here we demonstrate a lens transplantation experiment to determine whether this phenotype is due to intrinsic causes or defective interactions with tissues that surround the lens.

زرع عدسة في اسماك الزرد وتطبيقاتها في تحليل المسوخ العين

The lens plays an important role in the development of the optic cup[1,2]. Using the zebrafish as a model organism, questions regarding lens development ...

Studying Mitotic Checkpoint by Illustrating Dynamic Kinetochore Protein Behavior and Chromosome Motion in Living Drosophila Syncytial Embryos

The spindle assembly checkpoint (SAC) mechanism is an active signal, which monitors the interaction between chromosome kinetochores and spindle microtubules to prevent anaphase onset until the chromosomes are properly connected. Cells use this mechanism to prevent aneuploidy or genomic instability, and hence cancers and other human diseases like birth defects and Alzheimer's1. A number of the SAC components such as Mad1, Mad2, Bub1, BubR1, Bub3, Mps1, Zw10, Rod and Aurora B kinase have been identified and they are all kinetochore dynamic proteins2. Evidence suggests that the kinetochore is where the SAC signal is initiated. The SAC prime regulatory target is Cdc20. Cdc20 is one of the essential APC/C (Anaphase Promoting Complex or Cyclosome) activators3 and is also a kinetochore dynamic protein4-6. When activated, the SAC inhibits the activity of the APC/C to prevent the destruction of two key substrates, cyclin B and securin, thereby preventing the metaphase to anaphase transition7,8. Exactly how the SAC signal is initiated and assembled on the kinetochores and relayed onto the APC/C to inhibit its function still remains elusive.
Drosophila is an extremely tractable experimental system; a much simpler and better-understood organism compared to the human but one that shares fundamental processes in common. It is, perhaps, one of the best organisms to use for bio-imaging studies in living cells, especially for visualization of the mitotic events in space and time, as the early embryo goes through 13 rapid nuclear division cycles synchronously (8-10 minutes for each cycle at 25 &deg;C) and gradually organizes the nuclei in a single monolayer just underneath the cortex9.
Here, I present a bio-imaging method using transgenic Drosophila expressing GFP (Green Fluorescent Protein) or its variant-targeted proteins of interest and a Leica TCS SP2 confocal laser scanning microscope system to study the SAC function in flies, by showing images of GFP fusion proteins of some of the SAC components, Cdc20 and Mad2, as the example.

Studying Mitotic Checkpoint by Illustrating Dynamic Kinetochore Protein Behavior and Chromosome Motion in Living Drosophila Syncytial Embryos

The kinetochore is where the SAC initiates its signal monitoring the mitotic segregation of the sister chromatids. A method is described to visualize the recruitment and turnover of one of the kinetochore proteins and its coordination with the chromosome motion in Drosophila embryos using a Leica laser scanning confocal system.

دراسة حاجز الميتوزى بواسطة يوضح الحيوي Kinetochore السلوك البروتين والحركة كروموسوم في المعيشة<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; الجنين المخلوي

The spindle assembly checkpoint (SAC) mechanism is an active signal, which monitors the interaction between chromosome kinetochores and spindle ...

Extraction and Analysis of Cortisol from Human and Monkey Hair

The stress hormone cortisol (CORT) is slowly incorporated into the growing hair shaft of humans, nonhuman primates, and other mammals. We developed and validated a method for CORT extraction and analysis from rhesus monkey hair and subsequently adapted this method for use with human scalp hair. In contrast to CORT &#34;point samples&#34; obtained from plasma or saliva, hair CORT provides an integrated measure of hypothalamic-pituitary-adrenocortical (HPA) system activity, and thus physiological stress, during the period of hormone incorporation. Because human scalp hair grows at an average rate of 1 cm/month, CORT levels obtained from hair segments several cm in length can potentially serve as a biomarker of stress experienced over a number of months.
In our method, each hair sample is first washed twice in isopropanol to remove any CORT from the outside of the hair shaft that has been deposited from sweat or sebum. After drying, the sample is ground to a fine powder to break up the hair&#39;s protein matrix and increase the surface area for extraction. CORT from the interior of the hair shaft is extracted into methanol, the methanol is evaporated, and the extract is reconstituted in assay buffer. Extracted CORT, along with standards and quality controls, is then analyzed by means of a sensitive and specific commercially available enzyme immunoassay (EIA) kit. Readout from the EIA is converted to pg CORT per mg powdered hair weight. This method has been used in our laboratory to analyze hair CORT in humans, several species of macaque monkeys, marmosets, dogs, and polar bears. Many studies both from our lab and from other research groups have demonstrated the broad applicability of hair CORT for assessing chronic stress exposure in natural as well as laboratory settings.

Cortisol (CORT) accumulates in the growing hair shaft of humans and nonhuman primates. We describe methods for extracting and analyzing hair CORT with high precision and sensitivity. Measurement of hair CORT is particularly well-suited for assessing chronic stress over periods of weeks to months.

استخراج وتحليل الكورتيزول من الإنسان والقرد الشعر

The stress hormone cortisol (CORT) is slowly incorporated into the growing hair shaft of humans, nonhuman primates, and other mammals. We developed and ...

Cytological Analysis of Spermatogenesis: Live and Fixed Preparations of Drosophila Testes

Drosophila melanogaster is a powerful model system that has been widely used to elucidate a variety of biological processes. For example, studies of both the female and male germ lines of Drosophila have contributed greatly to the current understanding of meiosis as well as stem cell biology. Excellent protocols are available in the literature for the isolation and imaging of Drosophila ovaries&#160;and testes3-12. Herein, methods for the dissection and preparation of Drosophila testes for microscopic analysis are described with an accompanying video demonstration. A protocol for isolating testes from the abdomen of adult males and preparing slides of live tissue for analysis by phase-contrast microscopy as well as a protocol for fixing and immunostaining testes for analysis by fluorescence microscopy are presented. These techniques can be applied in the characterization of Drosophila mutants that exhibit defects in spermatogenesis as well as in the visualization of subcellular localizations of proteins.

Cytological Analysis of Spermatogenesis: Live and Fixed Preparations of Drosophila Testes

Methods for isolating and preparing Drosophila testes samples (live and fixed) for imaging by phase-contrast and fluorescence microscopy are described herein.&#160;

تحليل الخلوي الحيوانات المنوية: الأعمال التحضيرية لايف والثابتة من<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; الخصية

Drosophila melanogaster is a powerful model system that has been widely used to elucidate a variety of biological processes. For example, studies of both ...

Rapid Analysis of Circadian Phenotypes in Arabidopsis Protoplasts Transfected with a Luminescent Clock Reporter

The plant circadian clock allows the anticipation of daily changes to the environment. This anticipation aids the responses to temporally predictable biotic and abiotic stress. Conversely, disruption of circadian timekeeping severely compromises plant health and reduces agricultural crop yields. It is therefore imperative that we understand the intricate regulation of circadian rhythms in plants, including the factors that affect motion of the transcriptional clockwork itself.
Testing circadian defects in the model plant Arabidopsis thaliana (Arabidopsis) traditionally involves crossing specific mutant lines to a line rhythmically expressing firefly luciferase from a circadian clock gene promoter. This approach is laborious, time-consuming, and could be fruitless if a mutant has no circadian phenotype. The methodology presented here allows a rapid initial assessment of circadian phenotypes. Protoplasts derived from mutant and wild-type Arabidopsis are isolated, transfected with a rhythmically expressed luminescent reporter, and imaged under constant light conditions for 5 days. Luminescent traces will directly reveal whether the free-running period of mutant plants is different from wild-type plants. The advantage of the method is that any Arabidopsis line can efficiently be screened, without the need for generating a stably transgenic luminescent clock marker line in that mutant background.

The circadian clock regulates about a third of the Arabidopsis transcriptome, but the percentage of genes that feed back into timekeeping remains unknown. Here we visualize a method to rapidly assess circadian phenotypes in any mutant line of Arabidopsis using luminescent imaging of a circadian reporter transiently expressed in protoplasts.

تحليل سريع من الظواهر الإيقاعية في نبات الأرابيدوبسيس جبلة مجردة Transfected مع ساعة مراسل الفلورسنت

The plant circadian clock allows the anticipation of daily changes to the environment. This anticipation aids the responses to temporally predictable ...

Observation and Quantification of Mating Behavior in the Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus

A method for observing and quantifying the mating behavior of the pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, was established under a stereomicroscope. To improve the mating efficiency of B. Xylophilus and to increase the chances of mating observation, virgin adults were cultured and used for the investigation. Eggs were obtained by keeping the nematodes in water and allowing the females to lay eggs for 10 min. The second-stage juveniles (J2) were synchronized by incubating the eggs for 24 h at 25 &#176;C in the dark, and the early J4 were obtained by culturing the J2 with grey mold, Botrytis cinerea, for another 52 h. At this time point, most J4 nematodes could be clearly distinguished as being male or female using their genital morphology. The male and female J4 were collected and cultured separately in two different Petri dishes for 24 h to get virgin adult nematodes. A virgin male and a virgin female were paired in a drop of water in the well of a concave slide. The mating behavior was filmed with a video recorder under a stereomicroscope. The whole period of the mating process was 82.8 &#177;3.91 min (mean &#177;SE) and could be divided into 4 different phases: searching, contacting, copulating, and lingering. The mean minutes of duration were 21.8 &#177; 2.0, 28.0 &#177; 1.9, 25.8 &#177; 0.7 and 7.2 &#177; 0.5, respectively. Eleven sub-behaviors were described: cruising, approaching, encountering, touching, hooping, locating, attaching, ejaculating, separating, quiescence, and roaming. Interestingly, obvious intra-sexual competition was observed when one female was grouped with 3 males or one male with 3 females. This protocol is useful and valuable, not only in investigating the mating behavior of B. xylophilus, but also in acting as a reference for ethological studies of other nematodes.

Observation and Quantification of Mating Behavior in the Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus

A protocol for investigating the mating behavior of the pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, is presented. Behavioral features of B. xylophilus are described in the mating process.

المراقبة والقياس الكمي للسلوك التزاوج في غابة الصنوبر نيماتودا،<em&gt; Bursaphelenchus xylophilus</em

A method for observing and quantifying the mating behavior of the pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, was established under a stereomicroscope. ...

Analysis of Arabidopsis thaliana Growth Behavior in Different Light Qualities

Plant biologists often need to observe the growth behavior of their chosen species. To this end, the plants need constant environmental and stable light conditions, which are preferably variable in quantity and quality so that studies under different setups can be conducted. These requirements are met by climatic chambers featuring light emitting diodes (LED) lights, which can &#8211; in contrast to fluorescent lights &#8211; be set to different wavelengths. LEDs are energy conserving and emit virtually no heat even at light intensities, which often constitutes a problem with other light sources. The presented protocol provides a step-by-step guidance of how to program a climatic chamber equipped with variable LED lights as well as describing several approaches for in depth analysis of growth phenotypes. Depending on the experimental set-up various characteristics of the growing plants can be observed and analyzed. Here we describe how to determine fresh weight, leaf area, photosynthetic activity, and stomatal density. We demonstrate that in order to obtain reliable data and draw valid conclusions it is mandatory to use a sufficient number of individuals for statistical evaluation. Taking too few plants for this kind of analysis results in high statistical errors and consequently in less clear interpretations of the data.

Analysis of Arabidopsis thaliana Growth Behavior in Different Light Qualities

Here, we present a protocol for studying plant growth behavior and especially phenotypes in a reproducible manner. We show how to provide variable and at the same time stable light conditions. Proper analyses depend on sufficient sample numbers and valid statistical evaluations.

تحليل "سلوك نمو" نبات التمويل في "نوعيات مختلفة من الضوء"

Plant biologists often need to observe the growth behavior of their chosen species. To this end, the plants need constant environmental and stable light ...

Circadian Entrainment of Drosophila Melanogaster

Nearly universal among organisms, circadian rhythms coordinate biological activity to earth&#39;s orbit around the sun. To identify factors creating this rhythm and to understand the resulting outputs, entrainment of model organisms to defined circadian time-points is required. Here we detail a procedure to entrain many Drosophila to a defined circadian rhythm. Furthermore, we detail post-entrainment steps to prepare samples for immunofluorescence, nucleic acid, or protein extraction-based analysis.

Here, we detail how to synchronize Drosophila to a circadian day. This is the first, and most important step necessary for studying biological rhythms and chronobiology.

Circadian Entrainment من دروسوفيليا ميلانوغاستر

Nearly universal among organisms, circadian rhythms coordinate biological activity to earth&#39;s orbit around the sun. To identify factors creating this ...

Dissecting, Fixing, and Visualizing the Drosophila Pupal Notum

The pupae of Drosophila melanogaster are immobile for several days during metamorphosis, during which they develop a new body with a thin transparent adult integument. Their immobility and transparency make them ideal for in vivo live imaging experiments. Many studies have focused on the dorsal epithelial monolayer of the pupal&#160;notum because of its accessibility and relatively large size. In addition to the studies of epithelial mechanics and development, the notum has been an ideal tissue to study wound healing. After an injury, the entire epithelial repair process can be captured by live imaging over 6-12 h. Despite the popularity of the notum for live imaging, very few published studies have utilized fixed notum samples. Fixation and staining are common approaches for nearly all other Drosophila tissues, taking advantage of the large repertoire of simple cellular stains and antibodies. However, the pupal notum is fragile and prone to curling and distortion after removal from the body, making it challenging to complement live imaging. This protocol offers a straightforward method for fixing and staining the pupal notum, both intact and after laser-wounding. With this technique, the ventral side of the pupa is glued down to a coverslip to immobilize the pupa, and the notum is carefully removed, fixed, and stained. The notum epithelium is mounted on a slide or between two coverslips to facilitate imaging from the tissue&#39;s dorsal or ventral side.

Dissecting, Fixing, and Visualizing the Drosophila Pupal Notum

The present protocol details the preparation and visualization of fixed tissue of the Drosophila pupal notum. It can be used for either intact or wounded tissue, and the original architecture of the tissue is preserved. The procedures for dissecting, fixing, and staining are all described in this article.

تشريح وإصلاح وتصور ذبابة الفاكهة العذراء Notum

The pupae of Drosophila melanogaster are immobile for several days during metamorphosis, during which they develop a new body with a thin transparent ...