وأيد البحوث في المختبر عن طريق المنح من جمعية الألمانية للبحوث (DFG HA 3125/3-2، DFG HA 3125/4-2) والوزارة الاتحادية للتعليم والبحوث (BMBF) علم الجينوم العدوى الطبية (FKZ 0315828A) إلى SH.

التجارب العدوى الحيوانية وصفها هنا يجب أن يؤديها بما يتفق بدقة مع (مثل قانون الصحة الأوروبية لاتحاد الجمعيات مختبر الحيوان العلوم (FELASA)) المحلية والدولية والمبادئ التوجيهية واللوائح لاستخدام الحيوانات الفقارية. التجارب يجب أن يكون وافق عليها المجلس المحلي الأخلاقية والمؤسسية جنة رعاية الحيوان. جميع التجارب مع S. وتجرى الرئوية في المختبر أو الإصابات الحيوانية في الدرجة الثانية للسلامة الأحيائية مجلس الوزراء. 1. إعداد المخزون المعدية من إضاءة الحيوية Pneumocococi <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الثقافات الأسهم المكورات الرئوية في تود هيويت مرق تستكمل مع 1٪ (ث / ت) خلاصة الخميرة وتركيز النهائي من 20٪ الجلسرين للصيانة في 80 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لوحة كمية صغيرة من ثقافة الأسهم المكورات الرئوية مجمدة على لوحة أجار الدم واحتضان البكتيريا لمدة 10 ساعة عند 37 درجة مئوية في 5٪ CO 2. Tانه وحة آغار الدم يحتوي على المضادات الحيوية المناسبة مثل الكانامايسين (150 ميكروغرام / مل) لينقول الإدراج من الكاسيت الجينات في جينوم luxABCDE. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دون زراعة، مستعمرة جديدة على لوحة آغار الدم الجديد لمدة أقصاها 10 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطعيم THY المتوسطة تستكمل مع 10٪ (V / V) الحرارة المعطل (30 دقيقة عند 56 درجة مئوية) مصل بقري جنيني (FBS) مع المكورات الرئوية وبدء الثقافة في لOD 600 من 0.05-0.07. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان المكورات الرئوية دون الانفعالات عند 37 درجة مئوية و 5٪ CO 2 حتى يصل إلى ثقافة OD 600 من 0،35-0،40. سوف يستغرق ما بين 3-4 النمو ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصاد المكورات الرئوية بواسطة الطرد المركزي في 3،750 x ج لمدة 10 دقيقة و resuspend المكورات الرئوية للإضاءة الحيوية في الفوسفات مخزنة المالحة 7.4 درجة الحموضة (PBS) تستكمل مع FBS 0.5٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط اللقاح إلى التركيز المطلوب في PBS/10٪ FBS. جرعة العدوى يعتمد على سلالة الرئوية المستخدمة والخلفية الوراثية من هيئة التصنيع العسكريه. لتصيب الأباعد CD-1 الفئران الأنف مع S. وكس الرئوية D39 ينبغي تعديل جرعة العدوى إلى 1 × 10 7 كفو في تعليق 20 ميكرولتر تستكمل مع 90 وحدات هيالورونيداز. لا تهزه أو دوامة المكورات الرئوية، لأن هذا من شأنه أن يؤدي انحلال ذاتي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقق من تركيز اللقاح عن طريق طلي 10 أضعاف التخفيفات المسلسل على أجار الدم وتعداد المستعمرات بعد نمو بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية في 5٪ CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التحقق من تلألؤ بيولوجي من اللقاح المكورات الرئوية عن طريق قياس تلألؤ بيولوجي باستخدام نظام التصوير الضوئي. </li></ol> 2. الأنف والعدوى داخل الصفاق من الفئران مع إضاءة الحيوية الرئوية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الفئران الإناث الأباعد في سن 7-10 أسابيع لالتهاب رئوي حاد ونموذج الإنتان. وينبغي أن يكون وزن هذه الفئران بين 20-30 غرام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفئران عن طريق الحقن داخل الصفاق الكيتامين وزيلازين. إعداد خليط 1.0 ملغالكيتامين و 0.1 ملغ زيلازين في 100 ميكرولتر العقيمة 0.9٪ (ث / ت) كلوريد الصوديوم للفئران مع وزن الجسم من 20 غراما. وهذا يتفق مع جرعة من 50 ملغ / كغ من وزن الجسم للالكيتامين و 5 ملغ / كغ من وزن الجسم لزيلازين. أن تكون دقيقة، وزن الفئران قبل حقن التخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن الخليط في تجويف داخل الصفاق ووضع الحيوانات مرة أخرى إلى القفص حتى يتصرف التخدير والحيوانات مخدر. والتنفس من الفئران تصبح بطيئة جدا ومنتظمة. الفئران يجب أن تكون مخدر تماما، بحيث التلقيح داخل الأنف واستنشاق تعليق البكتيرية لا يؤدي إلى العطس وبالتالي فقدان اللقاح. هذا يمكن تقييمها من قبل معسر الماوس في نهاية الذيل، وسوف ماوس مخدر بالكامل تفتقر الاستجابة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختيار بلطف صعودا ماوس مخدر مع الاستمرار على الماوس بين الأصابع والإبهام مع الأنف تستقيم (الشكل 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ماصة مع نصائح ضيقة طويلة (جل لودرنصائح) وإسقاط المكورات الرئوية للإضاءة الحيوية في قطرات صغيرة متعددة على فتحتي الأنف (10 ميكرولتر / الأنف) من الفأرة 26-29. سوف الماوس يستنشق كرها البكتيريا. عقد الماوس 1-2 دقيقة تستقيم ومراقبة ما إذا كان الماوس العطس أو تحافظ على اللقاح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تصيب 7-10 أسبوع من العمر CD-1 الفئران الأنف مع جرعة العدوى من 1 × 10 7 أو 7.5 × 10 7 المكورات الرئوية من سلالة D39 وTIGR4، على التوالي، لرصد العدوى في الوقت الحقيقي. حد الكشف عن النظام دون أي امتصاص الأنسجة المضيف هو ما يقرب من 1 × 10 6 البكتيريا للإضاءة الحيوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تصيب الغشاء البريتونى الفئران (IP) لتقييم وbioimage الفوعة من المكورات الرئوية في نموذج عدوى تعفن الدم الماوس. استخدام 5 × 10 3 كفو في 100 ميكرولتر من سلالة D39 و 1 × 10 4 من سلالة TIGR4. لا يتم تخدير الفئران عند استخدام الطريق IP. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطعيم السيطرة على الفئران مع برنامج تلفزيوني. <img alt="الشكل 1" fo:conteNT-العرض = &quot;5IN&quot; FO: SRC = &quot;/ files/ftp_upload/51174/51174fig1highres.jpg&quot; سرك = &quot;/ files/ftp_upload/51174/51174fig1.jpg&quot; العرض = &quot;500px&quot; /&gt; الشكل 1. عدوى الأنف من CD-1 الفئران مع S. الرئوية. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51174/51174fig1highres.jpg" target="_blank">اضغط هنا لمشاهدة صورة بشكل اكبر</a> . </li></ol> 3. تصور المكورات الرئوية نشر في الرئة والدم باستخدام نظام التصوير نشر صورة المكورات الرئوية بعد العدوى داخل الأنف من الفئران الإناث CD1 الأباعد في الوقت الحقيقي باستخدام نظام التصوير في الجسم الحي. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التبديل على نظام التصوير والبدء في برنامج تحليل الصور الموجودة على الكمبيوتر preconfigurated. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نظام التصوير تهيئة تلقائيا ويتم تبريد كاميرا CCD الحرارية لل90 درجة مئوية قبل ممارسة النشاط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعتمد الإعدادات وbinning على عدد من الفئران قياسفي وقت واحد وعلى قوة إشارة للإضاءة الحيوية. مجال الرؤية (فوف) لرصد تلألؤ بيولوجي من الحيوانات هو متغير ويتراوح بين التكبير فوف من 22.5 سم إلى قياس خمسة فئران، ومجال الرؤية من 3.9 سم لقياس ماوس واحدة أو أجزاء من الحيوانات مثل الصدر أو الرأس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تستخدم بشكل روتيني ومدة التعرض من 1 دقيقة، وعلى درجة متوسطة من binning، ومجال الرؤية من 22.5 سم (مجموعة D). أولا، اختيار وضع التصوير الانارة ومن ثم تعيين المعلمات التصوير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انبعاث إشارة قد تعتمد على السلالة البكتيرية وسلالة الماوس المستخدمة، والصباغ من الفأرة. حلق الصدر من الفئران عند استخدام مثل C57BL / 6 الفئران، والتي يمكن أن تكون مفيدة عند التصوير تطوير الالتهاب الرئوي في هذه الفئران. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صورة المصابة الفئران على فترات زمنية prechosen. قياس تلألؤ بيولوجي من الفئران في نموذج الالتهاب الرئوي الحاد في فترات زمنية من 8-12 ساعة كحد أقصى. رصد أيضا رفاهية الفئران المصابة بواسطة observiنانوغرام مظهرها، والسلوك، وتقرير لفقدان الوزن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفئران في غرفة المخدرة من نظام التخدير لمعدات التصوير قبل القياسات في الغرفة. بدء استنشاق خليط من الأكسجين وisoflurane ووانتظر حتى تنفس الفئران ببطء وبشكل منتظم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الحيوانات تخدير في غرفة التصوير من النظام والحفاظ على الفئران في موقف ضعيف. الكاميرا CCD على الجزء العلوي من الغرفة سوف ثم صورة الجهاز التنفسي الفئران. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الحيوانات مع أنوفهم في لأنابيب للسماح استنشاق مواد التخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يسمح دخول isoflurane والى غرفة التصوير عن طريق أنابيب الغاز للحفاظ على التخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتفعيل اتفاقية مكافحة التصحر الكاميرا على رأس الغرفة والبدء في التصوير الضوئي للإضاءة الحيوية، اضغط على &quot;اكتساب&quot; في برامج التصوير. على الفور صورة من الفئران في غرفة مغلقة يظهر على الشاشة. بعد دقيقة واحدة من<html> القياس تراكب البيانات تلألؤ بيولوجي ويظهر في الصورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وقف التخدير بعد ظهور تراكب الصور في نافذة البرنامج ووضع الفئران مرة أخرى إلى أقفاصها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويتم رصد الفئران لتحقيق الانتعاش. <img alt="الرقم 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51174/51174fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51174/51174fig2.jpg" width="500px" /> الشكل 2. التخدير ورصد الفئران المصابة مع المكورات الرئوية للإضاءة الحيوية باستخدام التخدير IVIS ونظام IVIS الطيف، على التوالي. A) نظام IVIS الطيف التصوير. B) نظام التخدير IVIS مع غرفة الحضانة. C) الفئران تخدير في غرفة الحضانة دال) الفئران تقع داخل غرفة التصوير IVIS الطيف مع أنوفهم استنشاق مخدر._blank &quot;&gt; اضغط هنا لمشاهدة صورة أكبر. </li></ol> 4. الكمي وتقييم ضوء بارد من الفئران المصابة مع إضاءة الحيوية S. الرئوية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد شدة تلألؤ بيولوجي من الفئران أو من المنطقة المحددة من الفئران عن طريق قياس انبعاث الفوتون الإجمالي (الفوتونات / ثانية) باستخدام برنامج تحليل الصور. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام القيم من انبعاث الفوتون التي يتم توفيرها في ورقة بيانات Excel إلى إعداد الرسم البياني. منذ تباين البيانات غالبا ما تكون مرتفعة في الفئران مجمعة، إنشاء رسم بياني مربع الخط الطولي لعرض الاختلافات في الفئران المصابة مع سلالات المكورات الرئوية المختلفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توفير الفوتونات في الفئران أو بدلا من ذلك نتائج على أنه متوسط ​​الاشعاع (الفوتونات / ثانية / سم 2 / ريال سعودي) من المساحة المحددة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بيانات قياس العائد على الاستثمار (منطقة المصالح) في وضع الفوتون يمكن كميا مقارنة عبر مختلف في نظم التصوير الجسم الحي مع مختلف وجاءإعدادات را، منذ القياسات في وحدات من وهج تلقائيا تأخذ في الاعتبار إعدادات الكاميرا (مثل الوقت والتكامل، binning، و / إيقاف، ومجال الرؤية). </li></ol>

<ol>
	<li>Niederman, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+management+of+adults+with+community-acquired+pneumonia.+Diagnosis,+assessment+of+severity,+antimicrobial+therapy,+and+prevention.">Guidelines for the management of adults with community-acquired pneumonia. Diagnosis, assessment of severity, antimicrobial therapy, and prevention.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 163, 1730-1754 (2001).</li><li>WHO, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+global+burden+of+disease:+2004+update.">The global burden of disease: 2004 update.</a> World Health Organization. , (2008).</li><li>Bogaert, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colonisation+by+Streptococcus+pneumoniae+and+Staphylococcus+aureus+in+healthy+children.">Colonisation by Streptococcus pneumoniae and Staphylococcus aureus in healthy children.</a> Lancet. 363, 1871-1872 (2004).</li><li>Gamez, G., Hammerschmidt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combat+pneumococcal+infections:+adhesins+as+candidates+for+protein-based+vaccine+development.">Combat pneumococcal infections: adhesins as candidates for protein-based vaccine development.</a> Curr. Drug Targets. 13, 323-337 (2012).</li><li>Mook-Kanamori, B. B., Geldhoff, M., vander Poll, T., Dvan de Beek, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+and+pathophysiology+of+pneumococcal+meningitis.">Pathogenesis and pathophysiology of pneumococcal meningitis.</a> Clin. Microbiol. Rev. 24, 557-591 (2011).</li><li>Musher, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+contagious+are+common+respiratory+tract+infections.">How contagious are common respiratory tract infections.</a> N. Engl. J. Med. 348, 1256-1266 (2003).</li><li>Brueggemann, A. B., Pai, R., Crook, D. W., Beall, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vaccine+escape+recombinants+emerge+after+pneumococcal+vaccination+in+the+United+States.">Vaccine escape recombinants emerge after pneumococcal vaccination in the United States.</a> PLoS Pathog. 3, (2007).</li><li>Munoz-Almagro, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emergence+of+invasive+pneumococcal+disease+caused+by+nonvaccine+serotypes+in+the+era+of+7-valent+conjugate+vaccine.">Emergence of invasive pneumococcal disease caused by nonvaccine serotypes in the era of 7-valent conjugate vaccine.</a> Clin. Infect. Dis. 46, 174-182 (2008).</li><li>Whitney, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+conjugate+pneumococcal+vaccines.">Impact of conjugate pneumococcal vaccines.</a> Pediatr. Infect. Dis. J. 24, 729-730 (2005).</li><li>Whitney, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decline+in+invasive+pneumococcal+disease+after+the+introduction+of+protein-polysaccharide+conjugate+vaccine.">Decline in invasive pneumococcal disease after the introduction of protein-polysaccharide conjugate vaccine.</a> N. Engl. J. Med. 348, 1737-1746 (2003).</li><li>Lynch, J. P., Zhanel, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Streptococcus+pneumoniae:+epidemiology+and+risk+factors,+evolution+of+antimicrobial+resistance,+and+impact+of+vaccines.">Streptococcus pneumoniae: epidemiology and risk factors, evolution of antimicrobial resistance, and impact of vaccines.</a> Curr. Opin. Pulm. Med. 16, 217-225 (2010).</li><li>Singleton, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invasive+pneumococcal+disease+caused+by+nonvaccine+serotypes+among+Alaska+native+children+with+high+levels+of+7-valent+pneumococcal+conjugate+vaccine+coverage.">Invasive pneumococcal disease caused by nonvaccine serotypes among Alaska native children with high levels of 7-valent pneumococcal conjugate vaccine coverage.</a> JAMA. 297, 1784-1792 (2007).</li><li>Dockrell, D. H., Whyte, M. K., Mitchell, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pneumococcal+pneumonia:+mechanisms+of+infection+and+resolution.">Pneumococcal pneumonia: mechanisms of infection and resolution.</a> Chest. 142, 482-491 (2012).</li><li>Lieberman, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parallel+bacterial+evolution+within+multiple+patients+identifies+candidate+pathogenicity+genes.">Parallel bacterial evolution within multiple patients identifies candidate pathogenicity genes.</a> Nat. Genet. 43, 1275-1280 (2011).</li><li>Yang, J., Tauschek, M., Robins-Browne, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+bacterial+virulence+by+AraC-like+regulators+that+respond+to+chemical+signals.">Control of bacterial virulence by AraC-like regulators that respond to chemical signals.</a> Trends Microbiol. 19, 128-135 (2011).</li><li>Young, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolutionary+dynamics+of+Staphylococcus+aureus+during+progression+from+carriage+to+disease.">Evolutionary dynamics of Staphylococcus aureus during progression from carriage to disease.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 109, 4550-4555 (2012).</li><li>Kadioglu, A., Weiser, J. N., Paton, J. C., Andrew, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+Streptococcus+pneumoniae+virulence+factors+in+host+respiratory+colonization+and+disease.">The role of Streptococcus pneumoniae virulence factors in host respiratory colonization and disease.</a> Nat. Rev. Microbiol. 6, 288-301 (2008).</li><li>Voss, S., Gamez, G., Hammerschmidt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+pneumococcal+microbial+surface+components+recognizing+adhesive+matrix+molecules+on+colonization.">Impact of pneumococcal microbial surface components recognizing adhesive matrix molecules on colonization.</a> Mol. Oral Microbiol. 27, 246-256 (2012).</li><li>Koppe, U., Suttorp, N., Opitz, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recognition+of+Streptococcus+pneumoniae+by+the+innate+immune+system.">Recognition of Streptococcus pneumoniae by the innate immune system.</a> Cell. Microbiol. 14, 460-466 (2012).</li><li>Paterson, G. K., Mitchell, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+immunity+and+the+pneumococcus.">Innate immunity and the pneumococcus.</a> Microbiology. 152, 285-293 (2006).</li><li>Gerber, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+Streptococcus+pneumoniae+meningitis+mimicking+several+features+of+human+disease.">A mouse model of Streptococcus pneumoniae meningitis mimicking several features of human disease.</a> Acta Neuropathol. 101, 499-508 (2001).</li><li>Gingles, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+genetic+resistance+in+invasive+pneumococcal+infection:+identification+and+study+of+susceptibility+and+resistance+in+inbred+mouse+strains.">Role of genetic resistance in invasive pneumococcal infection: identification and study of susceptibility and resistance in inbred mouse strains.</a> Infect. Immun. 69, 426-434 (2001).</li><li>Holmes, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pavA+gene+of+Streptococcus+pneumoniae+encodes+a+fibronectin-binding+protein+that+is+essential+for+virulence.">The pavA gene of Streptococcus pneumoniae encodes a fibronectin-binding protein that is essential for virulence.</a> Mol. Microbiol. 41, 1395-1408 (2001).</li><li>Koedel, U., Klein, M., Pfister, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+understandings+on+the+pathophysiology+of+bacterial+meningitis.">New understandings on the pathophysiology of bacterial meningitis.</a> Curr. Opin. Infect. Dis. 23, 217-223 (2010).</li><li>Medina, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+model+of+pneumococcal+pneumonia.">Murine model of pneumococcal pneumonia.</a> Methods Mol. Biol. 602, 405-410 (2010).</li><li>Hartel, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+glutamine+transporters+on+pneumococcal+fitness+under+infection-related+conditions.">Impact of glutamine transporters on pneumococcal fitness under infection-related conditions.</a> Infect. Immun. 79, 44-58 (2011).</li><li>Hermans, P. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+streptococcal+lipoprotein+rotamase+A+(SlrA)+is+a+functional+peptidyl-prolyl+isomerase+involved+in+pneumococcal+colonization.">The streptococcal lipoprotein rotamase A (SlrA) is a functional peptidyl-prolyl isomerase involved in pneumococcal colonization.</a> J. Biol. Chem. 281, 968-976 (2006).</li><li>Jensch, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PavB+is+a+surface-exposed+adhesin+of+Streptococcus+pneumoniae+contributing+to+nasopharyngeal+colonization+and+airways+infections.">PavB is a surface-exposed adhesin of Streptococcus pneumoniae contributing to nasopharyngeal colonization and airways infections.</a> Mol. Microbiol. 77, 22-43 (2010).</li><li>Kadioglu, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pneumococcal+protein+PavA+is+important+for+nasopharyngeal+carriage+and+development+of+sepsis.">Pneumococcal protein PavA is important for nasopharyngeal carriage and development of sepsis.</a> Mol. Oral Microbiol. 25, 50-60 (2010).</li><li>Orihuela, C. J., Gao, G., Francis, K. P., Yu, J., Tuomanen, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-specific+contributions+of+pneumococcal+virulence+factors+to+pathogenesis.">Tissue-specific contributions of pneumococcal virulence factors to pathogenesis.</a> J. Infect. Dis. 190, 1661-1669 (2004).</li><li>Francis, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+pneumococcal+infections+in+the+lungs+of+live+mice+using+bioluminescent+Streptococcus+pneumoniae+transformed+with+a+novel+gram-positive+lux+transposon.">Visualizing pneumococcal infections in the lungs of live mice using bioluminescent Streptococcus pneumoniae transformed with a novel gram-positive lux transposon.</a> Infect. Immun. 69, 3350-3358 (2001).</li><li>Basavanna, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+methionine+acquisition+and+synthesis+on+Streptococcus+pneumoniae+growth+and+virulence.">The effects of methionine acquisition and synthesis on Streptococcus pneumoniae growth and virulence.</a> PLoS One. 8, (2013).</li><li>Hartel, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+central+carbon+metabolism+of+Streptococcus+pneumoniae+by+isotopologue+profiling.">Characterization of central carbon metabolism of Streptococcus pneumoniae by isotopologue profiling.</a> J. Biol. Chem. 287, 4260-4274 (2012).</li><li>Hammerschmidt, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+host+immune+regulator+factor+H+interacts+via+two+contact+sites+with+the+PspC+protein+of+Streptococcus+pneumoniae+and+mediates+adhesion+to+host+epithelial+cells.">The host immune regulator factor H interacts via two contact sites with the PspC protein of Streptococcus pneumoniae and mediates adhesion to host epithelial cells.</a> J. Immunol. 178, 5848-5858 (2007).</li><li>Voss, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+choline-binding+protein+PspC+of+Streptococcus+pneumoniae+interacts+with+the+C-terminal+heparin-binding+domain+of+vitronectin.">The choline-binding protein PspC of Streptococcus pneumoniae interacts with the C-terminal heparin-binding domain of vitronectin.</a> J. Biol. Chem. , (2013).</li><li>Cartwright, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pneumococcal+disease+in+western+Europe:+burden+of+disease,+antibiotic+resistance+and+management.">Pneumococcal disease in western Europe: burden of disease, antibiotic resistance and management.</a> Eur. J. Pediatr. 161, 188-195 (2002).</li><li>vander Linden, M., Al-Lahham, A., Nicklas, W., Reinert, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+characterization+of+pneumococcal+isolates+from+pets+and+laboratory+animals.">Molecular characterization of pneumococcal isolates from pets and laboratory animals.</a> PLoS One. 4, (2009).</li><li>Brehm, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sequence+of+the+adenine+methylase+gene+of+the+Streptococcus+faecalis+plasmid+pAM+beta+1.">Sequence of the adenine methylase gene of the Streptococcus faecalis plasmid pAM beta 1.</a> Nucleic Acids Res. 15, 3177 (1987).</li></ol>

والكتاب ليس لديهم ما يكشف.

<html> كل التجارب التي أجريت على الحيوانات أن تتم الموافقة عليها من قبل السلطات المحلية واللجان الأخلاق. في التجارب المجراة في العدوى البكتيرية الحمل في مختلف المنافذ مجموعة من الحيوانات المصابة لابد من تحديد نقاط مختلفة في الوقت بعد الإصابة. في ظل هذه الظروف التج?...

التهابات الجهاز التنفسي التي تسببها الفيروسات أو البكتيريا لا تزال واحدة من المشاكل المكتسبة من المجتمع أو السريرية الأكثر شيوعا في جميع أنحاء العالم مما تسبب في ما يقرب من ثلث جميع وفاة في العالم. الأنواع البكتيرية الرئيسية هي المستدمية النزلية والعقدية الرئوية 2. ومع ذلك، هذه الأنواع البكتيرية عادة ما تكون المكونات المشتركة من النباتات الطبيعية الجهاز التنفسي. وبالتالي نقل البكتيرية هي أيضا من بعض المخاطر لمرض الغازية واعتمادا على الحالة المناعية أو الاستعداد للأفراد. يتم تشغيل الاستعمار أعراض للعدوى الغازية. العقدية الرئوية هو الممرض الرئيسي للالتهاب الرئوي المكتسبة من المجتمع (CAP) واحدة من أكثر الأسباب شيوعا للتجرثم الدم لدى البشر. في الأفراد الأصحاء S. الرئوية (المكورات الرئوية) وغالبا ما تكون أعراض المستعمرين وغير ضارة من الجهاز التنفسي العلوي، حيث تصدى لهم مع بكتيريا غير إمراضيةمن الفلورا ولكن أيضا مع مسببات الأمراض مثل المستدمية النيابة. أو المكورات العنقودية الذهبية والسطر الأول من نظام الدفاع المناعي للإنسان. معدلات نقل أعلى في الأطفال الصغار (37٪) وأعلى حتى داخل مراكز الرعاية النهارية مزدحمة (58٪) 3-5. أصغر السكان وكبار السن، وحصل على المكورة الرئوية عن طريق نقل الهباء الجوي من الناقلين وإفرازات البلعوم 6، تنتمي إلى الفئات المعرضة لمخاطر عالية والتطعيم باستخدام أحد قاحات المكورات الرئوية (PCV10 أو قاح PCV13 في الأطفال و 23 التكافؤ السكاريد PPSV23 في البالغين) ويوصى في الولايات المتحدة (الولايات المتحدة) والعديد من البلدان الأوروبية 4. يغطي PPSV23 الأنماط المصلية المسؤولة عن ~ 90٪ من أمراض المكورات الرئوية bacteremic في الولايات المتحدة وأوروبا، والوقاية من الأمراض الرئوية الغازية بالتالي بكفاءة (IPD) في البالغين، في حين تغطي PCVs الأنماط المصلية الأكثر انتشارا في الأطفال. بالتالي، IPD بسبب أنواع اللقاح (VT) هي reduظهرت الأنماط المصلية دائرة الهندسة المدنية ولكن nonvaccine عرض إمكانات الفوعة العالية والمقاومة للمضادات الحيوية 4،7-12. البلعوم الأنفي كما الخزان هو نقطة الانطلاق لالمكورات الرئوية ينتشر في الجيوب الأنفية أو التهابات الأذن الوسطى الشروع المحلية الضارة. الأهم من ذلك، تنتشر مباشرة عبر مجرى الهواء إلى شعب هوائية والرئة مما يؤدي إلى مهددة للحياة CAP 4،13 المكورات الرئوية. وغالبا ما يصحب التهابات الرئة مع الأنسجة وتدمير الحاجز، وبالتالي تمكين الممرض أن تنتشر في الدم وتسبب IPD. حوادث CAP وIPD هي أعلى في الأشخاص المناعة أو في النقيضين من العمر 4،13. الظروف المسؤولة عن التحويل من المتعايشة على الممرض مع الفوعة العالية لا تزال قيد النقاش. ولكن، إلى جانب التغيرات في قابلية المضيف والتكيف التطوري ترافق مع ارتفاع الفوعة وزيادة في المقاومة للمضادات الحيوية وقد اقترحت أن يكون لها تأثير حاسم على PNEالتهابات umococcal 14-16. وهبت الممرض مع تعدد adhesins التوسط اتصال حميم إلى الخلايا الظهارية المخاطية. بعد التغلب على مخاط مجرى الهواء، مما يسهل الالتزام المكورات الرئوية إلى الخلايا المضيفة عبر التفاعل المباشر من adhesins المعرضة للسطح مع المستقبلات الخلوية وذلك من خلال استغلال مكونات المصفوفة خارج الخلية أو البروتينات في الدم كما سد جزيئات 4،17،18. كما تم تجهيز مسببات الأمراض الرئوية تنوعا أيضا مع العوامل التي تدخل في التهرب من المضيف المناعي آليات الدفاع. وعلاوة على ذلك، لديهم القدرة على التكيف مع مختلف الأوساط المضيفة مثل الرئة، والدم، والسائل النخاعي (CSF)، على التوالي 5،17،19،20. يتم التحقيق في تأثير العوامل البكتيرية والمرضية على المضيف التهابات الردود في النماذج الحيوانية التجريبية من الالتهاب الرئوي، وتجرثم الدم، أو التهاب السحايا 21-25. على الرغم من كونه الممرض الإنسان، وهذه النماذج نحنليرة لبنانية تأسيس فك tropism المكورات الرئوية الأنسجة، آليات الفوعة، أو protectivity المرشحين لقاح المكورات الرئوية. الخلفية الوراثية للسلالات الفطرية الماوس يحدد القابلية للالمكورات الرئوية. تم العثور على BALB / ج الفئران المصابة الأنف مع المكورات الرئوية لتكون مقاومة، في حين كانت CBA / الكالسيوم وSJL الفئران أكثر عرضة ضد الالتهابات الرئوية 22. هذا يعني أنه، على غرار البشر، والخلفية الوراثية وآليات الدفاع المضيف تحديد نتيجة العدوى. وبالتالي، من الضروري لكشف مواضع المقاومة في جينوم الفئران أقل عرضة للعدوى المكورات الرئوية بذل المزيد من الجهود. وقد أدت النتائج إلى تغييرات في الجسم الحي في بروتوكولات الفوعة. بدلا من الفئران الفطرية BALB / ج غالبا ما تستخدم في الماضي، وغالبا ما تستخدم في الوقت الحاضر CD-1/MF1 سلالات الفئران الأباعد عرضة لدراسة تأثير الخسارة من وظيفة الفوعة المكورات الرئوية أو الملاءمة عوامل 26-28. علاوة على ذلك، توفرمن المكورات الرئوية للإضاءة الحيوية وتقنيات التصوير الضوئي يسمح في الوقت الحقيقي تلألؤ بيولوجي bioimaging من الالتهابات. في المكورات الرئوية تم إدراج الأمثل luxABCDE كاسيت الجين (البلازميد بول-A تينيسي 4001 كم luxABCDE ص) في موقع التكامل واحد من كروموسوم من قبل ينقول الطفرات. وقد استخدمت المكورات الرئوية للإضاءة الحيوية لتقييم التوهين من المسوخ المكورات الرئوية نقص في الفوعة أو الملاءمة العوامل وإزفاء بهم من موقع واحد التشريحية ل26،28-31 آخر. ونحن هنا نقدم بروتوكول للالتهابات الرئوية bioimaging في الفئران التهاب رئوي أو نموذج الإنتان. يمكن بسهولة رصد والتضخيم، ونشر المكورات الرئوية للإضاءة الحيوية في الفئران المصابة الأنف أو الغشاء البريتونى مع مرور الوقت باستخدام نظام التصوير الضوئي ونفس الحيوان عند نقاط زمنية مختلفة.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="985">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Todd Hewitt broth</td>
			<td style="width:280px;">Carl Roth, Karlsruhe, Germany</td>
			<td style="width:129px;">X936.1</td>
			<td style="width:280px;"> </td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Yeast extract</td>
			<td style="width:280px;">Carl Roth, Karlsruhe, Germany</td>
			<td style="width:129px;">2363.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Blood agar plates</td>
			<td style="width:280px;">Oxoid, Wesel, Germany</td>
			<td style="width:129px;">PB5039A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Kanamycin</td>
			<td style="width:280px;">Carl Roth, Karlsruhe, Germany</td>
			<td style="width:129px;">T832.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Erythromycin</td>
			<td style="width:280px;">Sigma-Aldrich,Taufkirchen, Germany</td>
			<td style="width:129px;">E6376</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td style="width:280px;">PAA Laboratories, Coelbe, Germany</td>
			<td style="width:129px;">A11-151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">CD-1 mice, female</td>
			<td style="width:280px;">Charles River, Sulzfeld, Germany</td>
			<td style="width:129px;">CD1SIFE06W08W</td>
			<td>female CD-1 mice, six to eight weeks old</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ketamin 500mg, Curamed injection solution</td>
			<td>Schwabe-Curamed, Karlsruhe, Germany</td>
			<td style="width:129px;"> </td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Rompun 2%, injection solution</td>
			<td>Bayer Animal Health, Monheim, Germany</td>
			<td style="width:129px;"> </td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BD Plastipak 1 ml syringes</td>
			<td>Becton Dickinson, Heidelberg, Germany</td>
			<td style="width:129px;">300015</td>
			<td>sterile Luer-Lok&#8482; syringes with needle</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Gel Loader Tips</td>
			<td style="width:280px;">peqlab</td>
			<td style="width:129px;">81-13790</td>
			<td>M&#181;ltiFlex&#8482; Tips</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Hyaluronidase</td>
			<td style="width:280px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:129px;">H3884-100mg</td>
			<td>Hyaluronidase Type IV-S from Bovine test</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Oxygen</td>
			<td style="width:280px;">Air Liquide, D&#252;sseldorf, Germany</td>
			<td style="width:129px;">M1001L50R2A001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Isofluoran</td>
			<td style="width:280px;">Baxter, Unterschlei&#223;heim, Germany</td>
			<td style="width:129px;"> </td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">pGEM-T Easy</td>
			<td style="width:280px;">Promega, Mannheim, Germany</td>
			<td style="width:129px;"> </td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Oligonucleotides </td>
			<td style="width:280px;">Eurofins MWG, Ebersberg, Germany</td>
			<td style="width:129px;"> </td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Qiaprep Spin Midiprep Kit </td>
			<td style="width:280px;">Qiagen, Hilden, Germany</td>
			<td style="width:129px;">27104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:296px;">PCR DNA purification kit</td>
			<td style="width:280px;">Qiagen, Hilden, Germany</td>
			<td style="width:129px;">28106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:296px;">Equipment</td>
			<td style="width:280px;"> </td>
			<td style="width:129px;"> </td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:296px;">Living Image 4.1 software</td>
			<td style="width:280px;">Caliper Life Sciences/PerkinElmer, Rodgau, Germany</td>
			<td style="width:129px;"> </td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:296px;">XGI-8 Gas Anesthesia System</td>
			<td style="width:280px;">Caliper Life Sciences/PerkinElmer, Rodgau, Germany</td>
			<td style="width:129px;"> </td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:296px;">IVIS Spectrum Imaging System </td>
			<td style="width:280px;">Caliper Life Sciences/PerkinElmer, Rodgau, Germany</td>
			<td style="width:129px;"> </td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Biophotometer</td>
			<td style="width:280px;">Eppendorf AG, Hamburg, Germany</td>
			<td style="width:129px;"> </td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

following in real time the impact of pneumococcal virulence factors in an acute mouse pneumonia model using bioluminescent bacteria

الالتهاب الرئوي هو واحد من مشاكل الرعاية الصحية الرئيسية في البلدان النامية والبلدان الصناعية ويترافق مع معدلات الاعتلال والوفيات كبيرة. على الرغم من التقدم في المعرفة من هذا المرض، وتوافر وحدات العناية المركزة (ICU)، واستخدام العوامل المضادة للجراثيم قوية واللقاحات فعالة، لا تزال معدلات وفيات عالية 1. العقدية الرئوية هو الممرض الرئيسي للالتهاب الرئوي المكتسبة من المجتمع (CAP) واحد من الأسباب الأكثر شيوعا لتجرثم الدم لدى البشر. وقد تم تجهيز هذا الممرض مع عتاد من adhesins المعرضة للسطح وعوامل الفوعة تساهم في الالتهاب الرئوي والأمراض الرئوية الغازية (IPD). تقييم دور في الجسم الحي من اللياقة البدنية أو الفوعة العوامل البكتيرية أمر في غاية الأهمية لكشف S. الآليات الإمراضية الرئوية. وتستخدم نماذج الفئران من الالتهاب الرئوي، وتجرثم الدم، والتهاب السحايا لتحديد تأثير العوامل المتنوعة في المكورات الرئويةخمتلفة مراحل العدوى. نحن هنا وصف بروتوكول لرصد في الوقت الحقيقي نشر المكورات الرئوية في الفئران بعد الأنف أو التهابات داخل الصفاق مع البكتيريا للإضاءة الحيوية. أظهرت النتائج تكاثر ونشر المكورات الرئوية في الجهاز التنفسي السفلي والدم، الأمر الذي يمكن تصور وتقييمها باستخدام نظام التصوير وبرامج التحليل المرفقة.

اقتناء وامتصاص الميثيونين هو من الأهمية المركزية لالمكورات الرئوية للحفاظ على اللياقة البدنية في مكانه المضيفة 32،33. يتم ترميز ميثيونين ABC البروتين الدهني نقل في D39 من قبل الحزب الديمقراطي الاشتراكي _ 0151 الجين (TIGR4: sp_0149) واسمه MetQ 32. المكورات ا...

Watch this Scientific Journal Video about Following in Real Time the Impact of Pneumococcal Virulence Factors in an Acute Mouse Pneumonia Model Using Bioluminescent Bacteria at JoVE.com

Following in Real Time the Impact of Pneumococcal Virulence Factors in an Acute Mouse Pneumonia Model Using Bioluminescent Bacteria

العقدية الرئوية هي الرائدة الممرض تسبب الالتهاب الرئوي الحاد المكتسبة من المجتمع ومسؤولة عن أكثر من 2 مليون حالة وفاة في جميع أنحاء العالم. تأثير العوامل البكتيرية المتورطين في اللياقة البدنية أو الفوعة يمكن رصدها في الوقت الحقيقي في الماوس الالتهاب الرئوي الحاد أو تجرثم نموذج باستخدام البكتيريا للإضاءة الحيوية.

التالية في الوقت الحقيقي تأثير العوامل الالتهاب الرئوي الحاد الفوعة في نموذج الفأر الالتهاب الرئوي عن طريق البكتيريا للإضاءة الحيوية

Pneumonia is one of the major health care problems in developing and industrialized countries and is associated with considerable morbidity and mortality. ...

following-real-time-impact-pneumococcal-virulence-factors-an-acute

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

14.9K Views.  University of Greifswald.  العقدية الرئوية هي الرائدة الممرض تسبب الالتهاب الرئوي الحاد المكتسبة من المجتمع ومسؤولة عن أكثر من 2 مليون حالة وفاة في جميع أنحاء العالم. تأثير العوامل البكتيرية المتورطين في اللياقة البدنية أو الفوعة يمكن رصدها في الوقت الحقيقي في...

Video: Following in Real Time the Impact of Pneumococcal Virulence Factors in an Acute Mouse Pneumonia Model Using Bioluminescent Bacteria

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of infection with influenza virus alone. Instead, most individuals are thought to have succumbed to a secondary bacterial infection, predominately caused by the bacterium Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus). The synergistic relationship between infections caused by influenza virus and the pneumococcus has subsequently been observed during the 1957 Asian influenza virus pandemic, as well as during seasonal outbreaks of the virus (reviewed in 1, 2). Here, we describe a protocol used to investigate the mechanism(s) that may be involved in increased morbidity as a result of concurrent influenza A virus and S. pneumoniae infection. We have developed an infant murine model to reliably and reproducibly demonstrate the effects of influenza virus infection of mice colonised with S. pneumoniae. Using this protocol, we have provided the first insight into the kinetics of pneumococcal transmission between co-housed, neonatal mice using in vivo imaging 3.

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

A concurrent infection with influenza A virus is one of the factors implicated in the induction of invasive pneumococcal disease during asymptomatic Streptococcus pneumoniae carriage. Here we describe a mixed infection method using infant mice to investigate the synergism between these two respiratory pathogens.

باستخدام التصوير Bioluminescent بالتحقيق في التآزر بين العقدية الرئوية والأنفلونزا من الفيروسات في الفئران الرضع

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

Adherence of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) to the epithelial lining of the nasopharynx can result in colonization and is considered a prerequisite for pneumococcal infections such as pneumonia and otitis media. In vitro adherence assays can be used to study the attachment of pneumococci to epithelial cell monolayers and to investigate potential interventions, such as the use of probiotics, to inhibit pneumococcal&#160;colonization.&#160;The protocol described here is used to investigate the effects of the probiotic Streptococcus salivarius on the adherence of pneumococci to the human epithelial cell line CCL-23 (sometimes referred to as HEp-2 cells). The assay involves three main steps: 1) preparation of epithelial and bacterial cells, 2) addition of bacteria to epithelial cell monolayers, and 3) detection of adherent pneumococci by viable counts (serial dilution and plating) or quantitative real-time PCR (qPCR). This technique is relatively straightforward and does not require specialized equipment other than a tissue culture setup. The assay can be used to test other probiotic species and/or potential inhibitors of pneumococcal colonization and can be easily modified to address other scientific questions regarding pneumococcal adherence and invasion.

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

In vitro adherence assays can be used to study the attachment of Streptococcus pneumoniae to epithelial cell monolayers and to investigate potential interventions such as the use of probiotics for inhibiting pneumococcal colonization.

التحقيق في آثار البروبيوتيك على المكورات الرئوية الاستعمار باستخدام<em&gt; في المختبر</em&gt; الالتزام الفحص

Adherence of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) to the epithelial lining of the nasopharynx can result in colonization and is considered a ...

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae Using the Quellung Reaction

There are over 90 different capsular serotypes of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus). As well as being a tool for understanding pneumococcal epidemiology, capsular serotyping can provide useful information for vaccine efficacy and impact studies.&#160;The Quellung reaction is the gold standard method for pneumococcal capsular serotyping. The method involves testing a pneumococcal cell suspension with pooled and specific antisera directed against the capsular polysaccharide. The antigen-antibody reactions are observed microscopically. The protocol has three main steps: 1) preparation of a bacterial cell suspension, 2) mixing of cells and antisera on a glass slide, and 3) reading the Quellung reaction using a microscope. The Quellung reaction is reasonably simple to perform and can be applied wherever a suitable microscope and antisera are available.

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae Using the Quellung Reaction

The Quellung reaction is the gold standard technique for serotyping Streptococcus pneumoniae. This technique utilizes a microscope and specific pneumococcal antisera and is commonly used in reference and research laboratories worldwide.

المحفظة المصلي من<em&gt; العقدية الرئوية</em&gt; باستخدام تفاعل الانتباج

There are over 90 different capsular serotypes of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus). As well as being a tool for understanding pneumococcal ...

An Ex vivo Model of an Oligodendrocyte-directed T-Cell Attack in Acute Brain Slices

Death of oligodendrocytes accompanied by destruction of neurons and axons are typical histopathological findings in cortical and subcortical grey matter lesions in inflammatory demyelinating disorders like multiple sclerosis (MS). In these disorders, mainly CD8+ T-cells of putative specificity for myelin- and oligodendrocyte-related antigens are found, so that neuronal apoptosis in grey matter lesions may be a collateral effect of these cells. Different types of animal models are established to study the underlying mechanisms of the mentioned pathophysiological processes. However, although they mimic some aspects of MS, it is impossible to dissect the exact mechanism and time course of &#8216;&#8216;collateral&#8217;&#8217; neuronal cell death. To address this course, here we show a protocol to study the mechanisms and time response of neuronal damage following an oligodendrocyte-directed CD8+ T cell attack. To target only the myelin sheath and the oligodendrocytes, in vitro activated oligodendrocyte-specific CD8+ T-cells are transferred into acutely isolated brain slices. After a defined incubation period, myelin and neuronal damage can be analysed in different regions of interest. Potential applications and limitations of this model will be discussed.

An Ex vivo Model of an Oligodendrocyte-directed T-Cell Attack in Acute Brain Slices

To address mechanisms of demyelination and neuronal apoptosis in cortical lesions of inflammatory demyelinating disorders, different animal models are used. We here describe an ex vivo approach by using oligodendrocyte-specific CD8+ T-cells on brain slices, resulting in oligodendroglial and neuronal death. Potential applications and limitations of the model are discussed.

ل<em&gt; السابقين فيفو</em&gt; نموذج لهجوم T-خلية الموجه دبقية قليلة التغصن في الدماغ الحادة شرائح

Death of oligodendrocytes accompanied by destruction of neurons and axons are typical histopathological findings in cortical and subcortical grey matter ...

Applying an Inducible Expression System to Study Interference of Bacterial Virulence Factors with Intracellular Signaling

The technique presented here allows one to analyze at which step a target protein, or alternatively a small molecule, interacts with the components of a signaling pathway. The method is based, on the one hand, on the inducible expression of a specific protein to initiate a signaling event at a defined and predetermined step in the selected signaling cascade. Concomitant expression, on the other hand, of the gene of interest then allows the investigator to evaluate if the activity of the expressed target protein is located upstream or downstream of the initiated signaling event, depending on the readout of the signaling pathway that is obtained. Here, the apoptotic cascade was selected as a defined signaling pathway to demonstrate protocol functionality. Pathogenic bacteria, such as Coxiella burnetii, translocate effector proteins that interfere with host cell death induction in the host cell to ensure bacterial survival in the cell and to promote their dissemination in the organism. The C. burnetii effector protein CaeB effectively inhibits host cell death after induction of apoptosis with UV-light or with staurosporine. To narrow down at which step CaeB interferes with the propagation of the apoptotic signal, selected proteins with well-characterized pro-apoptotic activity were expressed transiently in a doxycycline-inducible manner. If CaeB acts upstream of these proteins, apoptosis will proceed unhindered. If CaeB acts downstream, cell death will be inhibited. The test proteins selected were Bax, which acts at the level of the mitochondria, and caspase 3, which is the major executioner protease. CaeB interferes with cell death induced by Bax expression, but not by caspase 3 expression. CaeB, thus, interacts with the apoptotic cascade between these two proteins.

The method described here is used to induce the apoptotic signaling cascade at defined steps in order to dissect the activity of an anti-apoptotic bacterial effector protein. This method can also be used for inducible expression of pro-apoptotic or toxic proteins, or for dissecting interference with other signaling pathways.

تطبيق نظام التعبير محرض لدراسة التدخل من العوامل البكتيرية الفوعة مع اشارة بين الخلايا

The technique presented here allows one to analyze at which step a target protein, or alternatively a small molecule, interacts with the components of a ...

Evaluating Virulence and Pathogenesis of Aeromonas Infection in a Caenorhabditis elegans Model

The human pathogen Aeromonas has been clinically shown to cause gastroenteritis, wound infections, septicemia, and urinary tract infections. Most human diseases have been reported to be associated with four species of bacteria: Aeromonas dhakensis, Aeromonas hydrophila, Aeromonas veronii, and Aeromonas caviae. The model organism Caenorhabditis elegans is a bacterivore that provides an excellent infection model by which to study the bacterial pathogenesis of Aeromonas. Here, we introduce three different experiments to study Aeromonas infection using a C. elegans model, including survival, liquid toxicity, and muscle necrosis assays. The results of the three methods determining the virulence of Aeromonas were consistent. A. dhakensis was shown to be the most toxic among the 4 major Aeromonas species causing clinical infections. These methods are shown to be a convenient way to evaluate the toxicity among and within Aeromonas species and contribute to our understanding of the pathogenesis of Aeromonas infection.

Evaluating Virulence and Pathogenesis of Aeromonas Infection in a Caenorhabditis elegans Model

Here, we introduce three different experiments to study Aeromonas infection in C. elegans. Using these convenient methods, it is easy to evaluate the toxicity among and within Aeromonas species.

تقييم الفوعة والمرضية للعدوى أيروموناس في نموذج ايليجانس كاينورهابديتيس

The human pathogen Aeromonas has been clinically shown to cause gastroenteritis, wound infections, septicemia, and urinary tract infections. Most human ...

Imaging of In Situ Interferon Gamma Production in the Mouse Spleen following Listeria monocytogenes Infection

Cytokines are small proteins secreted by cells, mediating cell-cell communications that are crucial for effective immune responses. One characteristic of cytokines is their pleiotropism, as they are produced by and can affect a multitude of cell types. As such, it is important to understand not only which cells are producing cytokines, but also in which environment they do so, in order to define more specific therapeutics. Here, we describe a method to visualize cytokine production in situ following bacterial infection. This technique relies on imaging cytokine-producing cells in their native environment by confocal microscopy. To do so, tissue sections are stained for markers of multiple cell types together with a cytokine stain. Key to this method, cytokine secretion is blocked directly in vivo before harvesting the tissue of interest, allowing for detection of the cytokine that accumulated inside the producing cells. The advantages of this method are multiple. First, the microenvironment in which cytokines are produced is preserved, which could ultimately inform on the signals required for cytokine production and the cells affected by those cytokines. In addition, this method gives an indication of the location of the cytokine production in vivo, as it does not rely on artificial in vitro re-stimulation of the producing cells. However, it is not possible to simultaneously analyze cytokine downstream signaling in cells that receive the cytokine. Similarly, the cytokine signals observed correspond&#160;only to the time-window during which cytokine secretion was blocked. While we describe the visualization of the cytokine Interferon (IFN) gamma in the spleen following mouse infection by the intracellular bacteria Listeria monocytogenes, this method could potentially be adapted to the visualization of any cytokine in most organs.

Imaging of In Situ Interferon Gamma Production in the Mouse Spleen following Listeria monocytogenes Infection

Here, we describe a simple confocal imaging method to visualize the in situ localization of cells secreting the cytokine Interferon gamma in murine secondary lymphoid organs. This protocol can be extended for the visualization of other cytokines in diverse tissues.

تصوير إنتاج غاما للإنترفيرون في الموقع في طحال الفأر بعد عدوى الليستيريا أحادية الخلايا

Cytokines are small proteins secreted by cells, mediating cell-cell communications that are crucial for effective immune responses. One characteristic of ...

Generation of In-Frame Gene Deletion Mutants in Pseudomonas aeruginosa and Testing for Virulence Attenuation in a Simple Mouse Model of Infection

Microorganisms are genetically versatile and diverse and have become a major source of many commercial products and biopharmaceuticals. Though some of these products are naturally produced by the organisms, other products require genetic engineering of the organism to increase the yields of production. Avirulent strains of Escherichia coli have traditionally been the preferred bacterial species for producing biopharmaceuticals; however, some products are difficult for E. coli to produce. Thus, avirulent strains of other bacterial species could provide useful alternatives for production of some commercial products. Pseudomonas aeruginosa is a common and well-studied Gram-negative bacterium that could provide a suitable alternative to E. coli. However, P. aeruginosa is an opportunistic human pathogen. Here, we detail a procedure that can be used to generate nonpathogenic strains of P. aeruginosa through sequential genomic deletions using the pEX100T-NotI plasmid. The main advantage of this method is to produce a marker-free strain. This method may be used to generate highly attenuated P. aeruginosa strains for the production of commercial products, or to design strains for other specific uses. We also describe a simple and reproducible mouse model of bacterial systemic infection via intraperitoneal injection of validated test strains to test the attenuation of the genetically engineered strain in comparison to the FDA-approved BL21 strain of E. coli.

Generation of In-Frame Gene Deletion Mutants in Pseudomonas aeruginosa and Testing for Virulence Attenuation in a Simple Mouse Model of Infection

Here, we describe a simple and reproducible protocol of mouse model of infection to evaluate the attenuation of the genetically modified strains of Pseudomonas aeruginosa in comparison to the United States Food and Drug Administration (FDA)-approved Escherichia coli for commercial applications.

جيل من المتحولين في الإطار الجينات الحذف في الزائفة الزنجاريه واختبار لتوهين ضراوة في نموذج الماوس بسيطه من العدوى

Microorganisms are genetically versatile and diverse and have become a major source of many commercial products and biopharmaceuticals. Though some of ...

Real-Time Quantification of Reactive Oxygen Species in Neutrophils Infected with Meningitic Escherichia Coli

Escherichia coli (E. coli) is the most common Gram-negative bacteria causing neonatal meningitis. The occurrence of bacteremia and bacterial penetration through the blood-brain barrier are indispensable steps for the development of E. coli meningitis. Reactive oxygen species (ROS) represent the major bactericidal mechanisms of neutrophils to destroy the invaded pathogens. In this protocol, the time-dependent intracellular ROS production in neutrophils infected with meningitic E. coli was quantified using fluorescent ROS probes detected by a real-time fluorescence microplate reader. This method may also be applied to the assessment of ROS production in mammalian cells during pathogen-host interactions.

Real-Time Quantification of Reactive Oxygen Species in Neutrophils Infected with Meningitic Escherichia Coli

Escherichia coli is the leading cause of neonatal Gram-negative bacterial meningitis. During the bacterial infection, reactive oxygen species produced by neutrophils play a major bactericidal role. Here we introduce a method to detect the reactive oxygen species in neutrophils in response to meningitis E. coli.

التحديد الكمي في الوقت الحقيقي لأنواع الأكسجين التفاعلية في العدلات المصابة بالإشريشيا القولونية السحايا

Escherichia coli (E. coli) is the most common Gram-negative bacteria causing neonatal meningitis. The occurrence of bacteremia and bacterial penetration ...

Tools for the Real-Time Assessment of a Pseudomonas aeruginosa Infection Model

Pseudomonas aeruginosa (Pa) is one of the most common opportunistic pathogens associated with cystic fibrosis (CF). Once Pa colonization is established, a large proportion of the infecting bacteria form biofilms within airway sputum. Pa biofilms isolated from CF sputum have been shown to grow in small, dense aggregates of ~10-1,000 cells that are spatially organized and exhibit clinically relevant phenotypes such as antimicrobial tolerance. One of the biggest challenges to studying how Pa aggregates respond to the changing sputum environment is the lack of nutritionally relevant and robust systems that promote aggregate formation. Using a synthetic CF sputum medium (SCFM2), the life history of Pa aggregates can be observed using confocal laser scanning microscopy (CLSM) and image analysis at the resolution of a single cell. This in vitro system allows the observation of thousands of aggregates of varying size in real time, three dimensions, and at the micron scale. At the individual and population levels, having the ability to group aggregates by phenotype and position facilitates the observation of aggregates at different developmental stages and their response to changes in the microenvironment, such as antibiotic treatment, to be differentiated with precision.

Tools for the Real-Time Assessment of a Pseudomonas aeruginosa Infection Model

Synthetic cystic fibrosis sputum medium (SCFM2) can be utilized in combination with both confocal laser scanning microscopy and fluorescence-activated cell sorting to observe bacterial aggregates at high resolution. This paper details methods to assess aggregate populations during antimicrobial treatment as a platform for future studies.

أدوات للتقييم في الوقت الحقيقي لنموذج عدوى السودوموناس aeruginosa

Pseudomonas aeruginosa (Pa) is one of the most common opportunistic pathogens associated with cystic fibrosis (CF). Once Pa colonization is established, a ...