وأيد هذا العمل من المنح المقدمة العاملة لKJ من العلوم الطبيعية والهندسة مجلس البحوث كندا (NSERC) وكرون والتهاب القولون مؤسسة من كندا (CCFC). ويدعم VM من قبل الزمالة CFRI وGB على studentship خريج من المعاهد الكندية لأبحاث الصحة (CIHR). BAV هو الأطفال الذين يعانون من اضطرابات المعوية والكبد مؤسسة (الطفل) رئيسا للأطفال IBD البحوث وكرسي أبحاث كندا في الجهاز الهضمي للأطفال وKJ هو أحد كبار العلماء الطبيب بدعم من الطفل والطفل ومعهد بحوث العائلة (CFRI) برنامج الطبيب جائزة العلماء ، جامعة كولومبيا البريطانية.

الإجراءات التي تجرى على الحيوانات اتباع المبادئ التوجيهية رعاية الحيوان التي حددتها اللجنة المؤسسية رعاية الحيوان واستخدام (IACUC) في جامعة كولومبيا البريطانية. وسيتم وصف الإجراءات المذكورة في هذا البروتوكول لكلا الفئران والجرذان، في حين سيتم عرض نتائج ممثلة من الفئران سبراغ داولي. 1. إعداد DNBS والإدارة داخل المستقيم <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتقطير المستقيم من DNBS في الفئران، وإعداد طازجة 15-30 ملغ من DNBS/250 ميكرولتر من 50٪ من الايثانول. بالنسبة للفئران، وإعداد 2-6 ملغ من DNBS/100 ميكرولتر من 50٪ من الايثانول. ملاحظة: تحسين تركيز DNBS بالضبط على أن تدار في كل مرفق. ويفضل الذكور سبراغ داولي الفئران، وC57BL / 6 الفئران لتحريض DNBS التهاب القولون، وسلالات الفئران والجرذان ولكن الآخرين يمكن استخدامها. الفئران والجرذان تعامل فقط مع 50٪ من الإيثانول يمكن أن تستخدم إلا مجموعات المراقبة نظرا للآثار الإيثانول خفيفة أو غائبة، يمكن للمرء أن اومير إدراج هذه المجموعة لدراسة 12. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نعلق حقنة 1 مل إلى 19 إبرة G لديها القسطرة البولي إثيلين (PE-90 - الفئران أو PE-50 - الفئران) تثبيتها حتى نهايتها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بخفة تخدير الفئران أو الماوس يستريح على وسادة التدفئة (مثلا عن طريق إدارة 1.5٪ isoflurane وعبر مخروط الأنف، يجب أن الحيوانات لا تزال لديها وميض وردود الفعل البلع والتنفس العادية عرضه). تطبيق هلام المسيل للدموع لعينيه لتجنب جفاف العينين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق الضغط بلطف مع أطراف الأصابع إلى نهاية الخلفي من الحيوان إلى إزالة أي البراز التي قد تكون موجودة في القولون البعيدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج بلطف القسطرة intrarectally، مع القسطرة ليصل إلى حوالي 8 سم الأقرب إلى فتحة الشرج بالنسبة للفئران، أو 3-4 سم للفئران. حقن كمية صغيرة من الحل في حين إدخال القسطرة لتليين، مما يسهل الإدراج. ملاحظة: إذا كان يشعر أي مقاومة أثناء إدخال القسطرة، لا تستمر لإدراج لأن هذا قد يؤدي إلى انثقابجدار الأمعاء. إزالة القسطرة ومحاولة معاودة بلطف، ومرة ​​أخرى التشحيم القولون كما المتابعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن ببطء 250 (الفئران) أو 100 (الفئران) ميكرولتر من DNBS، أو حجم مساو أو 50٪ من الإيثانول لعناصر. بعد حقن DNBS، ضع الحيوان الرأس إلى أسفل لمدة 90 ثانية لتجنب فقدان DNBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد تناوله DNBS، وإطعام الحيوانات 8٪ من المياه في السكروز 0.2٪ المالحة لمنع الجفاف خلال الأسبوع الأول. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مراقبة بعناية الحيوانات، مع المتابعة اليومية لفقدان الوزن وعلامات الجفاف أو استغاثة لمدة التجربة. ملاحظة: فقدان الوزن قد تقترب بسرعة التوصيات CCAC من الحد الأقصى المسموح به وفقدان الوزن. لأن هذا المستمدة في معظمها من الجفاف، يجب استخدام وفقدان الوزن كمؤشر لإدارة حل رينغر اللاكتيكية للحد من الجفاف. يرجى التأكد من التشاور مع الطبيب البيطري منشأة على القضايا الصحية حسب الاقتضاء. </li></ol> 2. شاركllecting مناديل وتقييم الأضرار النسيجية في الفئران DNBS متحدي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في نقطة الوقت المطلوب بعد التحدي مع DNBS، الموت ببطء الحيوانات عن طريق جرعة زائدة مع isoflurane وفي غرفة التخدير تستكمل مع ما يكفي من الأوكسجين. مراقبة الحيوان حتى لا ينظر الصاعدة والهابطة من الصدر وليس هناك ضربات القلب واضح. تأكيد الحيوان الموت الرحيم تم بشكل صحيح عن طريق عدم وجود استجابة لقرصة أخمص القدمين أو لمس القرنية، تليها خلع عنق الرحم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح تجويف البطن وإزالة الأمعاء الغليظة بأكمله. فتح الأمعاء طوليا؛ ينبغي مراعاة القرحة المخاطية العيانية حوالي 5-6 سم القريبة من النهاية البعيدة من القولون في الفئران (2-3 سم في الفئران). ملاحظة: بعد إزالة الأمعاء الغليظة، وتقييم الأضرار عشرات العيانية اذا شئت. جمع شرائح القولون من المقابلة الموقع التشريحي من الحيوانات السيطرة. ملاحظة: إن الأفراد بتسجيله الأنسجة لدرجات الضرر العيانية ينبغييكون أعمى لهوية الجماعات العلاج. يسجل أقسام الأنسجة باستخدام معايير التالية أو ما شابه ذلك: شدة ومدى تقرح (0-10)، وقد لخص مع عشرات لغياب أو وجود إسهال (0 أو 1)، التصاقات (0 أو 1 أو 2) وأقصى سمك الجدار القولون في ملليمتر 11. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع 0.5 سم أقسام الأقرب إلى موقع الضرر العيانية القصوى. المفاجئة تجميد واحد القسم 0.5 سم في النيتروجين السائل في وقت لاحق لتقييم الميلوبيروكسيداز (MPO) النشاط (مقياس العدلات تسلل)، ووضع القسم الآخر في 10٪ من الفورمالين مخزنة محايدة للتحليل النسيجي. ملاحظة: عض الأنسجة المجمدة لويمكن تخزين الميلوبيروكسيداز مقايسة في -80 درجة مئوية لمدة تصل إلى 1 في الشهر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للأنسجة التي تم جمعها للتحليل النسيجي في الخطوة 2.3 لإصلاح في الفورمالين بين عشية وضحاها، ثم يغسل مع الايثانول 70٪. تضمين الأنسجة في البارافين وقطع لسمك المطلوب (3-5 ميكرون)، وصمة عار مع hemotoxylin ويوزين (HE) لتسجيل النسيجي. </li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> لديهم اثنين من المراقبين يسجل على الأقل ثلاثة أقسام الأنسجة من كل حيوان تحت المجهر ضوء لتحديد درجات الضرر النسيجي لكل مجموعة. ملاحظة: يجب أن يكون أعمى والأفراد بتسجيله الأنسجة لدرجات الضرر النسيجي للهوية مجموعات العلاج. يسجل أقسام الأنسجة باستخدام معايير التالية أو ما شابه ذلك: مدى ارتشاح الخلايا الالتهابية (0 = غائبة، 3 = بطريق)، وفقدان العمارة المخاطية (0 = غائبة، 3 = شديد)، وجود أو عدم وجود خراجات سرداب (0-1) ، واستنفاد الخلايا الكأسية (0-3). تحديد درجة الضرر النسيجي كمجموع هذه الحسابات 11. </li></ol> 3. أداء الميلوبيروكسيداز (MPO) على الفحص DNBS تحدى المعوية الأنسجة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> النشاط MPO مقايسة في قطاعات سم 0.5 القولون حصلت عليه في الخطوة 2.3. التجانس الأنسجة العازلة في التجانس MPO (0.5٪ hexadecyltrimethyl الأمونيوم بروميد في 50 ملي العازلة فوسفات البوتاسيوم (الرقم الهيدروجيني 6.0)) لإعطاء 50 ملغ القولون segmeالإقليم الشمالي / مل من التجانس العازلة التعليق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قسامة الحل المتجانس في 1 مل أجزاء وأجهزة الطرد المركزي في 4 درجات مئوية لمدة 2 دقيقة في 10،000 ز س. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مزيج 100 ميكرولتر من كل قسامة مع 2.9 مل من 50 ملي العازلة الفوسفات (درجة الحموضة 6.0) تحتوي على 0.167 ملغ / مل من س dianisidinedihydrochloride و0.0005٪ بيروكسيد الهيدروجين في كفيت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس معدل الامتصاص باستخدام معمل في 460 نانومتر. ملاحظة: يتم تعريف النشاط MPO كما كمية انزيم المهينة 1 ميكرومول / دقيقة من H 2 O 2 إلى H 2 O في درجة حرارة الغرفة، ويعبر عنها في وحدات لكل ملغ من الأنسجة. </li></ol>

<ol>
	<li>Per&#353;e, M., Cerar, A., Biotechnol, J. .. . B. i. o. m. e. d. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Dextran sodium sulphate colitis mouse model: traps and tricks. , (2012).</li><li>Ghia, J. E., Blennerhassett, P., Deng, Y., Verdu, E., Khan, W., Collins, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactivation+of+inflammatory+bowel+disease+in+a+mouse+model+of+depression.">Reactivation of inflammatory bowel disease in a mouse model of depression.</a> Gastroenterology. 136 (7), 2280-2288 (2009).</li><li>Reber, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+and+animal+models+of+inflammatory+bowel+disease-an+update+on+the+role+of+the+hypothalamo-pituitary-adrenal+axis.">Stress and animal models of inflammatory bowel disease-an update on the role of the hypothalamo-pituitary-adrenal axis.</a> Psychoneuroendocrinology. 37 (1), 1-19 (2012).</li><li>Qiu, B., Vallance, B., Blennerhassett, P., Collins, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+CD4++lymphocytes+in+the+susceptibility+of+mice+to+stress-induced+reactivation+of+experimental+colitis.">The role of CD4+ lymphocytes in the susceptibility of mice to stress-induced reactivation of experimental colitis.</a> Nat. Med. 5 (10), 1178-1182 (1999).</li><li>Boyer, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myenteric+plexus+injury+and+apoptosis+in+experimental+colitis.">Myenteric plexus injury and apoptosis in experimental colitis.</a> Auto. Neurosci. Basic Clin. 117 (1), 41-53 (2005).</li><li>Saunders, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noradrenergic+and+cholinergic+neural+pathways+mediate+stress-induced+reactivation+of+colitis+in+the+rat.">Noradrenergic and cholinergic neural pathways mediate stress-induced reactivation of colitis in the rat.</a> Auto. Neurosci. Basic Clin. 124 (1-2), 56-68 (2006).</li><li>Cuzzocrea, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calpain+inhibitor+I+reduces+colon+injury+caused+by+dinitrobenzene+sulphonic+acid+in+the+rat.">Calpain inhibitor I reduces colon injury caused by dinitrobenzene sulphonic acid in the rat.</a> Gut. 48 (4), 478-488 (2001).</li><li>Cuzzocrea, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melatonin+reduces+dinitrobenzene+sulfonic+acid-induced+colitis.">Melatonin reduces dinitrobenzene sulfonic acid-induced colitis.</a> J. Pineal Res. 30 (1), 1-12 (2001).</li><li>Innis, S., Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+lipids+in+early+development+and+intestinal+inflammatory+disease.">Dietary lipids in early development and intestinal inflammatory disease.</a> Nutr. Rev. 65, S188-S193 (2007).</li><li>Innis, S. M., de La Presa Owens, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+fatty+acid+composition+in+pregnancy+alters+neurite+membrane+fatty+acids+and+dopamine+in+newborn+rat+brain.">Dietary fatty acid composition in pregnancy alters neurite membrane fatty acids and dopamine in newborn rat brain.</a> J. Nutr. 131 (1), 118-122 (2001).</li><li>Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mundra+H.,Innis+S.M.+Intestinal+responsiveness+to+experimental+colitis+in+young+rats+is+altered+by+maternal+diet.">Mundra H.,Innis S.M. Intestinal responsiveness to experimental colitis in young rats is altered by maternal diet.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 289, 13-20 (2005).</li><li>Sanovic, S., Lamb, D. P., Blennerhassett, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Damage+to+the+enteric+nervous+system+in+experimentalcolitis.">Damage to the enteric nervous system in experimentalcolitis.</a> Am. J. Pathol. 155 (4), 1051-107 (1999).</li><li>Vilaseca, J., Salas, A., Guarner, F., Rodriguez, R., Martinez, M., Malagelada, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+fish+oil+reduces+progression+of+chronic+inflammatory+lesions+in+a+rat+model+of+granulomatous+colitis.">Dietary fish oil reduces progression of chronic inflammatory lesions in a rat model of granulomatous colitis.</a> Gut. 31, 539-544 (1990).</li><li>Andoh, A., Tsujikawa, T., Ishizuka, I., Araki, Y., Sasaki, M., Koyama, S., Fujiyama, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=N-3+fatty+acid-rich+diet+prevents+early+response+of+interleukin-6+elevation+in+trinitrobenzene+sulfonic+acid-induced+enteritis.">N-3 fatty acid-rich diet prevents early response of interleukin-6 elevation in trinitrobenzene sulfonic acid-induced enteritis.</a> Int. J. Mol. Med. 12, 721-725 (2003).</li><li>Barros, K. V., Xavier, R. A., Abreu, G. G., Martinez, C. A., Ribeiro, M. L., Gambero, A., Carvalho, P. O., Nascimento, C. M., Silveira, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soybean+and+fish+oil+mixture+increases+IL-10,+protects+against+DNA+damage+and+decreases+colonic+inflammation+in+rats+with+dextran+sulfate+sodium+(DSS)+colitis.">Soybean and fish oil mixture increases IL-10, protects against DNA damage and decreases colonic inflammation in rats with dextran sulfate sodium (DSS) colitis.</a> Lipids Health Dis. 9, 68 (2010).</li><li>Hekmatdoost, A., Wu, X., Morampudi, V., Innis, S. M., Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+oils+modify+the+host+immune+response+and+colonic+tissue+damage+following+Citrobacter+rodentium+infection+in+mice.">Dietary oils modify the host immune response and colonic tissue damage following Citrobacter rodentium infection in mice.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 304 (10), 917-928 (2013).</li><li>Innis, S. M., Dai, C., Wu, X., Buchan, A. M., Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perinatal+lipid+nutrition+alters+early+intestinal+development+and+programs+the+response+to+experimental+colitis+in+young+adult+rats.">Perinatal lipid nutrition alters early intestinal development and programs the response to experimental colitis in young adult rats.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 299 (6), 1376-1385 (1152).</li></ol>

يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

نموذج DNBS الموصوفة في هذا البروتوكول هو قيمة وغير مكلفة، وقابلة للتكرار نموذج التهاب القولون التي يمكن استخدامها لدراسة مختلف جوانب IBD. عندما تدار intrarectally للفئران أو الفئران، DNBS الحث على درجة كبيرة من الالتهابات وإصابات الأنسجة في القولون، تشبه مرض كرون الإنسان من حي...

يتميز مرض التهاب الأمعاء (IBD) عن الالتهاب المزمن الناكس في المعدة والأمعاء (GI) المسالك، مما أدى إلى أعراض الإسهال، وفقدان الوزن، وألم في البطن. التهاب القولون التقرحي (UC) ومرض كرون (CD) هما أشكال رئيسية من مرض التهاب الأمعاء، ويمكن تمييزها عن طريق موقع التهاب في الجهاز الهضمي. في المرضى UC، الالتهاب عادة ما ينطوي على المستقيم وتمتد متاخم يصل القولون لحد متغير تؤثر فقط على الغشاء المخاطي السطحي. في المقابل، يمكن أن تؤثر على CD أي جزء من الجهاز الهضمي، على الرغم من أنه يؤثر في الغالب على الدقاق والأعور. يظهر CD كثيرا ما التهاب بطريق غالبا ما ترتبط مع حبيبية ويؤدي إلى stricturing (fibrostenotic) و / أو اختراق (fistulizing) المرض. على الرغم من أن مسببات مرض التهاب الأمعاء لا يزال بعيد المنال، ومن المتفق عليه أيضا أن IBD هو سياقاتها، التي تنطوي على تفاعلات بين المضيفين الجهاز المناعي، والقابلية الوراثية المسؤولةسيس إلى العوامل البيئية والجرثومية. حتى الآن، تم اقتراح نماذج مختلفة من IBD التي تعرض مختلف الاستجابات السريرية والنسيجية والمناعية سمة من جامعة كاليفورنيا وCD. وتشمل النماذج الأكثر شيوعا الفئران المعدلة وراثيا (IL-2، IL-10، SAMP / تطلب الشركة)، والعدوى النماذج التي يسببها (الليمونية rodentium، السالمونيلا التيفية الفأرية)، ونماذج نقل بالتبني (CD45 + RB عالية، ونقل الخلايا CD62L + في الفئران SCID) و نماذج التهاب القولون يسببها كيميائيا (ديكستران كبريتات الصوديوم (DSS)، Trinitrobenzene حامض السلفونيك (TNBS)، وثنائي نتروبنزين حامض السلفونيك (DNBS)). نظرا لانخفاض تكلفتها وسرعة ظهور المرض، وتعتبر النماذج الكيميائية لا تقدر بثمن لدراسة مختلف جوانب IBD. كل من نماذج التهاب القولون مادة كيميائية مدرجة مزاياه فضلا عن القيود في بعض الجوانب ذات الأهمية السريرية، والمناعية والأنسجة لبنك التنمية بين الامريكتين. مفاجآت صيف دبي هي واحدة من الطرق الكيميائية الأكثر شيوعا المستخدمة للحث على القولونيةتيس في القوارض 1. إدارة 3-10٪ DSS (MW: 42 كيلو دالتون) لمدة 7-10 أيام في مياه الشرب من الفئران يمكن أن تحدث أعراض وعلامات التهاب القولون بما في ذلك فقدان الوزن والاسهال والدم، تقصير القولون، تقرح المخاطية والعدلة التسلل. هذا النموذج هو مفيدة بشكل خاص للدراسات فحص المخدرات، فضلا عن استكشاف آليات التجديد الظهارية، وتأثير المناعة الفطرية في المخاطية التوازن، ودور الالتهاب في تعزيز النمو الشاذ المعوية والتنمية غدية. ولكن هناك بعض السلبيات لنموذج مفاجآت صيف دبي، بما في ذلك الاختلاف في تركيز DSS اللازمة للحث على التهاب القولون في مرافق حيوانية مختلفة، فضلا عن امتصاص المياه غير متناسقة من قبل الفئران وبالتالي التعرض لمفاجآت صيف دبي تتعارض، مما أدى إلى تفاوت في درجة ومدى و توزيع إصابة الغشاء المخاطي وتقرحات في القولون. كل هذه الميزات يؤدي إلى عدم تجانس النتائج والحد من القدرة على مقارنة النتائج عبر دراسات الابام مجموعات بحثية مختلفة. بديلا للنموذج مفاجآت صيف دبي هو DNBS التي يسببها ناشبة أو نماذج TNBS من التهاب القولون. هذا النموذج يستخدم تقطير المستقيم من المخاطية توعية وكلاء DNBS أو TNBS، مخففة في تركيزات متفاوتة من الايثانول. إدارة الإيثانول هو شرط أساسي لكسر حاجز الغشاء المخاطي للقولون للسماح تغلغل DNBS أو TNBS في الصفيحة المخصوصة. سوف DNBS / TNBS ثم haptenize القولون والأمعاء الميكروبي البروتينات المترجمة لتصبح مناعة، مما اثار المضيف الفطرية والاستجابات المناعية التكيفية. بشكل عام، ويرتبط هذا النموذج مع الإسهال الشديد والدموي أحيانا، وفقدان الوزن وسماكة جدار الأمعاء ولكن الأعراض تختلف تبعا لنوع من القوارض المستخدمة، وكذلك توقيت والجرعة ودرجة التعرض إلى DNBS أو TNBS المستخدمة في الدراسة. وتجدر الإشارة إلى الفروق المهمة بين الفئران والجرذان، مع فوائد أقل تكلفة للشراء والمجلس، وكذلك لويص كتلة الجسم لتقليل لكل حيوان تكاليف العلاج في الجسم الحي. هذا يجب تعيين ضد مسار أكثر سرعة وشديدا من التهاب القولون في الفئران، حيث الحيوانات أكثر هشاشة وتستجيب بسرعة قد تصل إلى نقطة نهاية إنسانية. التهاب الأمعاء النتائج في البداية من الإيثانول الناجم عن تلف الخلايا الظهارية في الأمعاء، مما يؤدي إلى زيادة نفاذية الظهارية، والاختراق الميكروبية في الغشاء المخاطي، haptenization من البروتينات المضيف، كل هذا أدى إلى تسلل العدلات، الضامة والخلايا اللمفية تي الاستجابة Th1 في الغشاء المخاطي للتلف. بالمقارنة مع DNBS، ويعتبر TNBS كمادة كيميائية خطرة نظرا لخصائص التأكسدي للغاية لأنه يمكن أن تشكل خطر الانفجار على اتصال مع القواعد مثل الصوديوم وهيدروكسيد البوتاسيوم. لذا يعتبر DNBS حاليا كخيار يفضل الكيميائية على TNBS للحث على التهاب القولون. في القوارض، ويعتبر التهاب القولون DNBS باعتبارها واحدة من الأساليب الأكثر ملاءمة لدراسة فولو فوتبال شيIBD الجناح المرتبطة معدلات المرض: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الاكتئاب وتنشيط التهاب القولون: ولقد ثبت أن التوتر والقلق والاكتئاب في المرضى الذين يعانون IBD وكثيرا ما يرتبط مع انتكاس المرض. DNBS التهاب القولون هو نموذج مناسب لدراسة دور الاكتئاب وآثاره على تنشيط التهاب القولون في الفئران. طريقة الاستقراء الأولي عادة ما ينطوي على التهاب القولون بواسطة DNBS، يليه قرار من التهاب القولون من خلال ترك الفئران لمدة 6-8 أسابيع. ثم تدار الفئران مع الاكتئاب العوامل المسببة مثل ريزيربين أو عن طريق حاسة الشم bulbectomy للحث على الاكتئاب يليه اختبار لهم لتنشيط التهاب القولون من خلال التحدي مع جرعة من subcolitic DNBS 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التوتر وتنشيط التهاب القولون: الإجهاد هو عامل بيئي آخر شائع التي تم ربطها إلى IBD المرضية. هناك مجموعة متزايدة من الأدلة التي تشير إلى وجود علاقة قوية بين التوتر المزمن وظهور الأعراض من جامعة كاليفورنيا وCD في القوارضق وكذلك في البشر والرئيسيات غير البشرية 3. DNBS التهاب القولون هو نموذج جيد لدراسة تفعيل المرتبطة الإجهاد التهاب القولون في كل من الفئران والجرذان. وعادة ما يتم استخدام طريقة بطريقة مماثلة على النحو المذكور أعلاه لعلاج الاكتئاب إلا في مكان والاكتئاب، وتتعرض الحيوانات لعوامل الإجهاد مثل الصوت وضبط النفس الإجهاد 4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التهاب العصبية: وقد وصف عدد من الدراسات إما تعديلات عابرة أو دائمة في الجهاز العصبي المعوي (ENS) البنية والوظيفة، كما رأينا في عينات الأنسجة من النماذج الحيوانية ومن المرضى الذين يعانون من مرض التهاب الأمعاء. DNBS هو نموذج جيد لاستكشاف آثار التهاب على ENS 5 ودراسة كل من نورأدريني والمسارات العصبية كوليني 6. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> آليات إصابة إصلاح: خلال IBD المرضية، كلها قد أظهرت المستمدة من المضيفة وسطاء إصابة مثل أنواع الاكسجين التفاعلية (ROS)، وأكسيد النيتريك (NO)، بين الخلايا جزيء التصاق 3 (ICAM-3)، وف selectin عيكمن دور في تعطيل الظهارية في الأمعاء. DNBS هو نموذج ممتاز لدراسة الإصابات الناجمة عن تنظيم ما يصل من هذه الوسطاء فضلا عن آليات الإصلاح التي يتم تنظيمها باستخدام أدوية مثبطات انتقائية أو 7،8. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التهاب بطريق: بالإضافة إلى التطبيقات المذكورة أعلاه من DNBS، ونموذج يمكن أن تطبق أيضا على دراسة الالتهابات بطريق للامعاء، وميزة الكلاسيكية وجدت في المرضى الذين يعانون من CD. وترتبط كل من DNBS والتهاب القولون TNBS التي يسببها مع تسلل كبيرة من الخلايا الليمفاوية، في الغشاء المخاطي للقولون مما يجعل هذه النماذج مفيدة بشكل خاص لدراسة خلايا T المناعية آليات التابعة. </li></ol> بالمقارنة مع النموذج مفاجآت صيف دبي، ومزايا DNBS والتهاب القولون TNBS التي يسببها تشمل منخفضة التكلفة، والتطور السريع للالتهاب القولون (وعادة ما يتطلب 1-3 أيام لتظهر تقرحات والتهاب استنساخه) والضرر المترجمة متسقة إلى القولون البعيدة. ولكن السلبيات هي شرط لمستوى أعلى من الخبرة التقنية، والتحسين من جرعة DNBS / TNBS، والحاجة للتخدير لإدارة المستقيم. في هذه الورقة المنهجية درسنا آثار تركيزات مختلفة من ن 6 و n-3 الأحماض الدهنية المتعددة غير المشبعة على تغيير استجابة القولون المخاطي لالتهاب القولون DNBS التي يسببها في الفئران باستخدام الزيوت النباتية زيت القرطم (SO) وزيت الكانولا (CO) ، وزيت السمك (FO). وقد تبين أن الأحماض N-6 و n-3 الدهنية وسطاء هاما من مرض التهاب الأمعاء من خلال دورها في الأنصاف أسيل من phosopholipids غشاء الخلية 9. وعلى النقيض من المحتمل proinflammatory ن 6 والأحماض الدهنية، ن 3 الدهنية في تناول جرعات عالية بما فيه الكفاية يمكن أن تكون الأدوية المضادة للالتهابات. يتم بوساطة الإجراءات المضادة للالتهابات ن 3 الدهنية مباشرة من خلال استبدال حمض الأراكيدونيك باعتبارها الركيزة eicosanoid، تثبيط استقلاب حمض الأراكيدونيك وبشكل غير مباشر من خلال تغيير proinflالتعبير الجيني ammatory وإشارة الخلية. الأحماض الدهنية ن 3 أيضا إلى نشوء resolvins، وهي عائلة من الوسطاء المضادة للالتهابات. ويرتبط تناول كميات كبيرة من ن 3 الأحماض الدهنية مع انخفاض في إنتاج eicosanoids proinflammatory، السيتوكينات، كيموكينات، أنواع الاكسجين التفاعلية والتعبير عن جزيئات الالتصاق. في هذه الدراسة، تم تغذية الفئران حمية بالمال وبالشهرة أيضا الإعلانية متطابقة في جميع العناصر الغذائية ما عدا الأحماض الدهنية، مع كطاقة في المئة من الدهون، 20٪ SO، 20٪ CO، أو 18٪ زيت السمك بالاضافة الى 2٪ زيت القرطم (FO) 10-11 . كنسبة مئوية من الطاقة يوميا، شريطة النظام الغذائي SO 15٪ حمض اللينوليك (LA)، مع &lt;0.06٪ α حمض اللينولينيك (ALA)، وحمض الدهني لا (EPA) أو حمض الدوكوساهيكسانويك (DHA)، وكان النظام الغذائي CO 4.2 LA٪ و 1.9٪ مع عدم وجود ALA EPA DHA أو، والنظام الغذائي FO قدمت وكالة حماية البيئة 1.4٪، 4.9٪ DHA، 0.32٪ LA، و 0.12٪ ALA. بعد ثلاثة أسابيع من بدء النظام الغذائي الدهون، كانت تدار على الفئران DNBS داخل المستقيم أو 50٪ من الإيثانول وضحى بعد 5 أيام. وinflتم تقييم استجابة ammatory عن طريق تقييم من فقدان الوزن، وعشرات الضرر النسيجي والأنسجة النشاط الميلوبيروكسيداز.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="627">
	<colgroup>
		<col />
		<col /> 
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">1 mL syringe</td>
			<td style="width:121px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">309659</td>
			<td style="width:167px;"> </td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">19 gauge needle</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>305187</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyethylene tubing PE-50</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>427517</td>
			<td>for intra-rectal administration in mice</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyethylene tubing PE-90</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>427519</td>
			<td>for intra-rectal administration in rat</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DNBS</td>
			<td>MP Bio</td>
			<td>150959</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">tear gel</td>
			<td>Novartis</td>
			<td>63601662596</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10% Formalin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>5F93-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">warming pad</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>TPZ-0510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethanol</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>A-962.4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">hexadecyltrimethyl-ammonium bromide</td>
			<td style="width:121px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>H5882</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Potassium phosphate buffer solution</td>
			<td style="width:121px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>79628-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">O-dianisidine dihydrochloride</td>
			<td style="width:121px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>D3252</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">30% H2O2</td>
			<td style="width:121px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>31642</td>
			<td>hydrogen peroxide</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Spectrophotometer</td>
			<td>BIORAD</td>
			<td>Benchmarker Plus</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Light Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axio Image.Z1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">Data analysis software program </td>
			<td>GraphPad Software</td>
			<td style="width:119px;"> GraphPad Prism Software Version 4.00 </td>
			<td><a href="http://www.graphpad.com/">San Diego California USA, www.graphpad.com</a></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dnbs/tnbs colitis models: providing insights into inflammatory bowel disease and effects of dietary fat

لطالما ارتبط أمراض التهابات الأمعاء (IBD)، بما في ذلك مرض كرون والتهاب القولون التقرحي، مع الأساس الجيني، واستضافة المزيد من الاستجابات المناعية مؤخرا إلى العوامل الميكروبية والبيئية. التهاب القولون ثنائي نتروبنزين حمض السلفونيك (DNBS) التي يسببها يسمح احد لدراسة التسبب في IBD المسببات البيئية المرتبطة بها مثل الإجهاد والنظام الغذائي، وآثار العلاجات المحتملة، والآليات الكامنة وراء التهاب الأمعاء والمخاطية إصابة. في هذه الورقة، ونحن التحقيق آثار الأحماض N-3 و n-6 الدهنية الغذائية على الاستجابة الالتهابية المخاطية القولون التهاب القولون لDNBS التي يسببها في الفئران. تم تغذية الفئران حمية جميع متطابقة مع استثناء من أنواع مختلفة من الأحماض الدهنية [زيت القرطم (SO)، وزيت الكانولا (CO)، أو زيت السمك (FO)] لمدة ثلاثة أسابيع قبل التعرض لDNBS داخل المستقيم. استمرت السيطرة الفئران أعطيت الايثانول داخل المستقيم اكتساب الوزن على مدى 5 أيام الدراسة، في حين والجرذان DNBS المعاملة حمية الدهون تغذية جميع لوسر الوزن مع FO وCO تغذية الفئران مما يدل على فقدان وزن كبير قبل 48 ساعة والفئران التي تغذت SO قبل 72 ساعة. استأنفت زيادة الوزن بعد 72 DNBS آخر ساعة، وبنسبة 5 DNBS أيام آخر، وكان مجموعة FO على وزن أعلى من SO أو مجموعات CO. جمعت أقسام القولون أظهرت 5 أيام آخر DNBS معالجة تقرح التنسيق، وتدمير سرداب، واستنفاد الخلايا الكأسية، والغشاء المخاطي تسلل كل من الخلايا الالتهابية الحادة والمزمنة التي تختلف في شدتها بين الجماعات النظام الغذائي. أظهرت مجموعة تغذية SO الضرر أشد تليها CO، وFO تغذية الجماعات التي أظهرت أخف درجة من إصابة الأنسجة. وبالمثل، كان الميلوبيروكسيداز القولون (MPO) النشاط علامة على النشاط العدلة أعلى بكثير في ذلك وتتبعه الفئران CO فدان، مع وجود FO الفئران التي تغذت أقل بكثير النشاط MPO. هذه النتائج تثبت استخدام DNBS التي يسببها التهاب القولون، على النحو المبين في هذا البروتوكول، لتحديد تأثير النظام الغذائي في التسبب في مرض التهاب الأمعاء.

التحدي المتمثل في الفئران (سبراغ داولي) أو الفئران (C57BL / 6) مع DNBS النتائج عادة في فقدان الوزن والاسهال عابرة، وأحيانا مع الحاضر الدم في البراز. ومع ذلك، يمكن لعوامل مثل الوراثة، والنظام الغذائي ومجهريات البقعة المعوية تعديل القابلية للالتهاب القولون DNBS التي يسببها. وب...

Watch this Scientific Journal Video about DNBS/TNBS Colitis Models: Providing Insights Into Inflammatory Bowel Disease and Effects of Dietary Fat at JoVE.com

DNBS/TNBS Colitis Models: Providing Insights Into Inflammatory Bowel Disease and Effects of Dietary Fat

DNBS / TNBS التهاب القولون الناجم يقدم بديلا وسيلة غير مكلفة لدراسة البيولوجيا المرضية لمرض التهاب الامعاء. بروتوكول مناقشتها في هذه الورقة الخطوط العريضة للتطبيق الناجح لDNBS للحث على التهاب القولون في الفئران والجرذان ويسمح احد لدراسة وافية الردود الأمعاء بوساطة المضيف.

DNBS / TNBS التهاب القولون نماذج: توفير نظرة ثاقبة مرض التهاب الأمعاء وآثار الدهون الغذائية

Inflammatory Bowel Diseases (IBD), including Crohn&#39;s Disease and Ulcerative Colitis, have long been associated with a genetic basis, and more recently ...

dnbstnbs-colitis-models-providing-insights-into-inflammatory-bowel

Research

JoVE Journal

Medicine

46.8K Views.  BC Children's Hospital.  DNBS / TNBS التهاب القولون الناجم يقدم بديلا وسيلة غير مكلفة لدراسة البيولوجيا المرضية لمرض التهاب الامعاء. بروتوكول مناقشتها في هذه الورقة الخطوط العريضة للتطبيق الناجح لDNBS للحث على التهاب القولون في الفئران والجرذان ويسمح احد لدراسة وافية ?...

Video: DNBS/TNBS Colitis Models: Providing Insights Into Inflammatory Bowel Disease and Effects of Dietary Fat

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&beta; using a Whole Blood Stimulation Assay

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues as well as altered cytokine homeostasis. The innate immune system plays a crucial role in recognizing pathogens and other endogenous danger stimuli. One of the major cytokines released by innate immune cells is Interleukin (IL)-1. Therefore, we utilize a whole blood stimulation assay in order to measure the secretion of inflammatory cytokines and specifically of the pro-inflammatory cytokine IL-1&beta; 1, 2, 3.
Patients with genetic dysfunctions of the innate immune system causing autoinflammatory syndromes show an exaggerated release of mature IL-1&beta; upon stimulation with LPS alone. In order to evaluate the innate immune component of patients who present with inflammatory-associated pathologies, we use a specific immunoassay to detect cellular immune responses to pathogen-associated molecular patterns (PAMPs), such as the gram-negative bacterial endotoxin, lipopolysaccharide (LPS). These PAMPs are recognized by pathogen recognition receptors (PRRs), which are found on the cells of the innate immune system 4, 5, 6, 7. A primary signal, LPS, in conjunction with a secondary signal, ATP, is necessary for the activation of the inflammasome, a multiprotein complex that processes pro-IL-1&beta; to its mature, bioactive form 4, 5, 6, 8, 9, 10.
The whole blood assay requires minimal sample manipulation to assess cytokine production when compared to other methods that require labor intensive isolation and culturing of specific cell populations. This method differs from other whole blood stimulation assays; rather than diluting samples with a ratio of RPMI media, we perform a white blood cell count directly from diluted whole blood and therefore, stimulate a known number of white blood cells in culture 2. The results of this particular whole blood assay demonstrate a novel technique useful in elucidating patient cohorts presenting with autoinflammatory pathophysiologies.

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&amp;#946; using a Whole Blood Stimulation Assay

We describe a simple immunoassay to measure the production of pro-inflammatory cytokines, such as IL-1 beta production, in patients presenting with autoinflammatory phenotypes. By activating cells in whole blood cultures with pathogen-associated molecular patterns, specifically with lipopolysaccharide, cytokine secretion can be conveniently evaluated in whole blood supernatants.

دقيقة وبسيطة قياس الموالية للالتهابات سايتوكاين 1β ايل باستخدام تحفيز الدم الجامعة الفحص

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues ...

Segmentation and Measurement of Fat Volumes in Murine Obesity Models Using X-ray Computed Tomography

Obesity is associated with increased morbidity and mortality as well as reduced metrics in quality of life.1 Both environmental and genetic factors are associated with obesity, though the precise underlying mechanisms that contribute to the disease are currently being delineated.2,3 Several small animal models of obesity have been developed and are employed in a variety of studies.4 A critical component to these experiments involves the collection of regional and/or total animal fat content data under varied conditions.
Traditional experimental methods available for measuring fat content in small animal models of obesity include invasive (e.g. ex vivo measurement of fat deposits) and non-invasive (e.g. Dual Energy X-ray Absorptiometry (DEXA), or Magnetic Resonance (MR)) protocols, each of which presents relative trade-offs. Current invasive methods for measuring fat content may provide details for organ and region specific fat distribution, but sacrificing the subjects will preclude longitudinal assessments. Conversely, current non-invasive strategies provide limited details for organ and region specific fat distribution, but enable valuable longitudinal assessment. With the advent of dedicated small animal X-ray computed tomography (CT) systems and customized analytical procedures, both organ and region specific analysis of fat distribution and longitudinal profiling may be possible. Recent reports have validated the use of CT for in vivo longitudinal imaging of adiposity in living mice.5,6 Here we provide a modified method that allows for fat/total volume measurement, analysis and visualization utilizing the Carestream Molecular Imaging Albira CT system in conjunction with PMOD and Volview software packages.

Fat content analysis is routinely conducted in studies utilizing murine obesity models. Emerging methods in small animal CT imaging and analysis are providing for longitudinal detail rich fat content analysis. Here we detail step by step procedures for performing small animal CT imaging, analysis, and visualization.

تجزئة والقياس من وحدات تخزين الدهون في الفئران نماذج السمنة عن طريق الأشعة السينية التصوير المقطعي

Obesity is associated with increased morbidity and mortality as well as reduced metrics in quality of life.1 Both environmental and genetic factors are ...

Gene-environment Interaction Models to Unmask Susceptibility Mechanisms in Parkinson's Disease

Lipoxygenase (LOX) activity has been implicated in neurodegenerative disorders such as Alzheimer&#39;s disease, but its effects in Parkinson&#39;s disease (PD) pathogenesis are less understood. Gene-environment interaction models have utility in unmasking the impact of specific cellular pathways in toxicity that may not be observed using a solely genetic or toxicant disease model alone.&#160;To evaluate if distinct LOX isozymes selectively contribute to PD-related neurodegeneration, transgenic (i.e. 5-LOX and 12/15-LOX deficient) mice can be challenged with a toxin that mimics cell injury and death in the disorder.&#160;Here we describe the use of a neurotoxin, 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP), which produces a nigrostriatal lesion to elucidate the distinct contributions of LOX isozymes to neurodegeneration related to PD. The use of MPTP in mouse, and nonhuman primate, is well-established to recapitulate the nigrostriatal damage in PD.&#160;The extent of MPTP-induced lesioning is measured by HPLC analysis of dopamine and its metabolites and semi-quantitative Western blot analysis of striatum for tyrosine hydroxylase (TH), the rate-limiting enzyme for the synthesis of dopamine. To assess inflammatory markers, which may demonstrate LOX isozyme-selective sensitivity, glial fibrillary acidic protein (GFAP) and Iba-1 immunohistochemistry are performed on brain sections containing substantia nigra, and GFAP Western blot analysis is performed on striatal homogenates.&#160;This experimental approach can provide novel insights into gene-environment interactions underlying nigrostriatal degeneration and PD.

Gene-environment Interaction Models to Unmask Susceptibility Mechanisms in Parkinson&#039;s Disease

Lipoxygenase (LOX) isozymes can generate products that may increase or decrease neuroinflammation and neurodegeneration.&#160;A gene-environment interaction study could identify LOX isozyme-specific effects. Using the 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP) model of nigrostriatal damage in two LOX isozyme-deficient transgenic lines allows for comparison of the contribution of LOX isozymes on dopaminergic integrity and inflammation.

نماذج التفاعل بين الجينات والبيئة لكشف آليات الحساسية في مرض باركنسون

Lipoxygenase (LOX) activity has been implicated in neurodegenerative disorders such as Alzheimer&#39;s disease, but its effects in Parkinson&#39;s disease ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the functions of proteins involved in oncogenic progression or help to discover new tumor suppressors. In addition, injecting cancer cells into mice with different genotypes might provide a better understanding of the importance of the stromal compartment. Many models may be useful to investigate certain aspects of disease progression but do not recapitulate the entire cancerous process. In contrast, breast cancer cells engraftment to the mammary fat pad of mice better recapitulates the location of the disease and presence of the proper stromal compartment and therefore better mimics human cancerous disease. In this article, we describe how to implant breast cancer cells into mice orthotopically and explain how to collect tissues to analyse the tumor milieu and metastasis to distant organs. Using this model, many aspects (growth, angiogenesis, and metastasis) of cancer can be investigated simply by providing a proper environment for tumor cells to grow.

Cancer is a complex disease that is influenced by the tissue surrounding the tumor as well as local pro- and anti-inflammatory mediators. Therefore, orthotropic injection models, rather than subcutaneous models may be useful to study cancer progression in a manner that better mimics human pathology.

حقن مثلي من خلايا سرطان الثدي في الثديية الدهون وسادة من الفئران لدراسة نمو الأورام.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

Assessment of Viability of Human Fat Injection into Nude Mice with Micro-Computed Tomography

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft tissue filler as it is readily available, easily obtained, inexpensive, and inherently biocompatible.1 However, despite its burgeoning popularity, fat grafting is hampered by unpredictable results and variable graft survival, with published retention rates ranging anywhere from 10-80%. 1-3
To facilitate investigations on fat grafting, we have therefore developed an animal model that allows for real-time analysis of injected fat volume retention. Briefly, a small cut is made in the scalp of a CD-1 nude mouse and 200-400 &#181;l&#160;of processed lipoaspirate is placed over the skull. The scalp is chosen as the recipient site because of its absence of native subcutaneous fat, and because of the excellent background contrast provided by the calvarium, which aids in the analysis process. Micro-computed tomography (micro-CT) is used to scan the graft at baseline and every two weeks thereafter. The CT images are reconstructed, and an imaging software is used to quantify graft volumes.
Traditionally, techniques to assess fat graft volume have necessitated euthanizing the study animal to provide just a single assessment of graft weight and volume by physical measurement ex vivo. Biochemical and histological comparisons have likewise required the study animal to be euthanized. This described imaging technique offers the advantage of visualizing and objectively quantifying volume at multiple time points after initial grafting without having to sacrifice the study animal. The technique is limited by the size of the graft able to be injected as larger grafts risk skin and fat necrosis. This method has utility for all studies evaluating fat graft viability and volume retention. It is particularly well-suited to providing a visual representation of fat grafts and following changes in volume over time.

Fat grafting is an essential technique for reconstructing soft tissue deficits. However, it remains an unpredictable procedure characterized by variable graft survival. Our goal was to devise a mouse model that utilizes a novel imaging method to compare volume retention between differing techniques of fat graft preparation and delivery.

تقييم الجدوى من الدهون الإنسان الحقن في الفئران عارية مع مايكرو-التصوير المقطعي

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft ...

Therapeutic Effectiveness of a Dietary Supplement for Management of Halitosis in Dogs

Halitosis is a common complaint involving social and communicational problems in humans and also affects the pet-owner relationship. In this randomized placebo-controlled crossover clinical evaluation, we assessed&#160;the effectiveness of a dedicated dietary supplement to improve chronic halitosis in 32 dogs of different breeds and ages. This protocol describes how to evalute the presence of oral volatile suphur compunds, e.g. methyl mercaptan, hydrogen sulfide and dimethyl sulfide, by means of a portable gas chromatograph device coupled with a syringe, which was used to collect the breath, and a dedicated software, which allows the operator to monitor each compound concentration during each measurement, in a relatively short time (8 min).
A significant modification of halitosis parameters was observed after 30 days since the beginning of treatment (p &#60;0.05), while a long-lasting effect was still observed even 20 days after the suspension of the treatment. Portable gas chromatograph, which is also widely used in clinical practice, can be therefore used to confirm&#160;and control halitosis in humans and animals. Even though human and animal species present some differences,&#160;this innovative and alternative therapy for halitosis management might be extended to human clinical practice as an adjuvant dietary approach.

We describe a simple approach for diagnosis of halitosis in dogs as well as a dietary approach for its management. This protocol may be extended to the management of halitosis in humans in the near future.

الفعالية العلاجية لمكمل غذائي لإدارة رائحة الفم في الكلاب

Halitosis is a common complaint involving social and communicational problems in humans and also affects the pet-owner relationship. In this randomized ...

Surgical Models of Gastroesophageal Reflux with Mice

Multiple surgical procedures have been reported to induce gastroesophageal reflux in animals. Herein, we report three surgical models with mice aiming to induce reflux of gastric contents, duodenal contents or mixed contents. Surgical procedures and general principles have been described in detail. A researcher with surgical experience should be able to grasp the technique after a short period of practice. After surgery, most mice can survive and develop reflux esophagitis similar to that in humans. However, it should be noted that histological differences between mouse and human esophagus are the inherent limitations of these surgical models. If used for research on Barrett&#8217;s esophagus and adenocarcinoma, these procedures may need to be combined with genetic modifications.

This article demonstrates surgical procedures of gastroesophageal reflux with mice. These models are useful tools for research on mechanisms and treatment of gastroesophageal reflux disease and potentially Barrett&#8217;s esophagus and esophageal adenocarcinoma.

نماذج الجراحية من الجزر المعدي مع الفئران

Multiple surgical procedures have been reported to induce gastroesophageal reflux in animals. Herein, we report three surgical models with mice aiming to ...

Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease

The epithelial barrier is the first innate defense of the gastrointestinal tract and selectively regulates transport from the lumen to the underlying tissue compartments, restricting the transport of smaller molecules across the epithelium and almost completely prohibiting epithelial macromolecular transport. This selectivity is determined by the mucous gel layer, which limits the transport of lipophilic molecules and both the apical receptors and tight junctional protein complexes of the epithelium. In vitro cell culture models of the epithelium are convenient, but as a model, they lack the complexity of interactions between the microbiota, mucous-gel, epithelium and immune system. On the other hand, in vivo assessment of intestinal absorption or permeability may be performed, but these assays measure overall gastrointestinal absorption, with no indication of site specificity. Ex vivo permeability assays using &#34;intestinal sacs&#34; are a rapid and sensitive method of measuring either overall intestinal integrity or comparative transport of a specific molecule, with the added advantage of intestinal site specificity. Here we describe the preparation of intestinal sacs for permeability studies and the calculation of the apparent permeability (Papp) of a molecule across the intestinal barrier. This technique may be used as a method of assessing drug absorption, or to examine regional epithelial barrier dysfunction in animal models of gastrointestinal disease.

Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease

This protocol describes the use of excised intestinal tissue preparations or "intestinal sacs" as an ex vivo model of intestinal barrier function. This model may be used to assess integrity of both the epithelial barrier and the mucous gel layer at specific intestinal sites in animal models of digestive disease.

فيفو السابقين المعوية الحويصلات لتقييم الأغشية المخاطية النفاذية في نماذج من الأمراض المعوية

The epithelial barrier is the first innate defense of the gastrointestinal tract and selectively regulates transport from the lumen to the underlying ...

Transplantation Into the Mouse Ovarian Fat Pad

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic transplantation of ovarian surface and tubal epithelia include intraperitoneal and intrabursal administration of cells. The respective limitations of these methods include poorly defined location of injected cells and limited space volume. Furthermore, they are poorly suited for long-term structural preservation of transplanted organs. To address these challenges, we have developed an alternative approach, which is based on the introduction of cells and tissue fragments into the mouse fat pad. The mouse ovarian fat pad is located in the immediate vicinity of the ovary and uterine tube (aka oviduct, fallopian tube), and provides a familiar microenvironment for cells and tissues of these organs. In our approach fluorescence-labeled mouse and human cells, and fragments of the uterine tube are engrafted by using minimally traumatic dorsal incision surgery. Transplanted cells and their outgrowths are easily located in the ovarian fat pad for over 40 days. Long-term transplantation of the entire uterine tube allows correct preservation of all principle tissue components, and does not result in adverse side effects, such as fibrosis and inflammation. Our approach should be uniquely applicable for answering important biological questions such as differentiation, regenerative and neoplastic potential of specific cell populations. Furthermore, it should be suitable for studies of microenvironmental factors in normal development and cancer.

We describe an ovarian fad pad transplantation assay suitable for studies of normal and transformed epithelia of the female reproductive tract. The mouse fat pad allows transplantation of large tissue fragments, is easily accessible for surgery and imaging, and provides the most favorable native environment for tissues of M&#252;llerian origin.

زرع في وسادة الفأرة المبيض الدهون

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic ...

Analyzing Beneficial Effects of Nutritional Supplements on Intestinal Epithelial Barrier Functions During Experimental Colitis

Inflammatory bowel diseases (IBD), including Crohn&#39;s disease and ulcerative colitis, are chronic relapsing disorders of the intestines. They cause severe problems, such as abdominal cramping, bloody diarrhea, and weight loss, in affected individuals. Unfortunately, there is no cure yet, and treatments only aim to alleviate symptoms. Current treatments include anti-inflammatory and immunosuppressive drugs that may cause severe side effects. This warrants the search for alternative treatment options, such as nutritional supplements, that do not cause side effects. Before their application in clinical studies, such compounds must be rigorously tested for effectiveness and security in animal models. A reliable experimental model is the dextran sulfate sodium (DSS) colitis model in mice, which reproduces many of the clinical signs of ulcerative colitis in humans. We recently applied this model to test the beneficial effects of a nutritional supplement containing vitamins C and E, L-arginine, and &#969;3-polyunsaturated fatty acids (PUFA). We analyzed various disease parameters and found that this supplement was able to ameliorate edema formation, tissue damage, leukocyte infiltration, oxidative stress, and the production of pro-inflammatory cytokines, leading to an overall improvement in the disease activity index. In this article, we explain in detail the correct application of nutritional supplements using the DSS colitis model in C57Bl/6 mice, as well as how disease parameters such as histology, oxidative stress, and inflammation are assessed. Analyzing the beneficial effects of different diet supplements may then eventually open new avenues for the development of alternative treatment strategies that alleviate IBD symptoms and/or that prolong the phases of remission without causing severe side effects.

Current treatments of inflammatory bowel diseases (IBD) aim at alleviating disease symptoms but may cause severe side effects. Thus, alternative strategies are being investigated in animal colitis models. Here, we explain how the beneficial effects of diet supplements on clinical IBD signs are analyzed in such a colitis model.

تحليل مفيد آثار المكملات الغذائية على وظائف الأمعاء طلائي الحاجز أثناء التجريبية التهاب القولون

Inflammatory bowel diseases (IBD), including Crohn&#39;s disease and ulcerative colitis, are chronic relapsing disorders of the intestines. They cause ...