Este trabalho foi apoiado por subvenções de funcionamento a KJ de Ciências Naturais e Engenharia do Conselho de Pesquisa do Canadá (NSERC) ea doença de Crohn e Colite Foundation of Canada (CCFC). VM é apoiado por uma bolsa CFRI e uma bolsa de estudo de pós-graduação GB dos Institutos Canadenses de Pesquisa em Saúde (CIHR). BAV é um Crianças com intestinal e doenças hepáticas Foundation (CRIANÇA) Chair of Pediatric Research IBD ea Cátedra de Pesquisa do Canadá em Gastroenterologia Pediátrica e KJ é um Clínico Cientista Sênior apoiado pelo Criança e da Criança e do Instituto de Pesquisa da Família (CFRI) Programa Clínico Prêmio Cientistas , University of British Columbia.

Procedimentos envolvendo assuntos animais seguir as orientações de cuidados de animais delineadas pelo Animal Care e Use Comitê Institucional (IACUC) da Universidade de British Columbia. Procedimentos descritos no presente protocolo irá ser descrito, tanto para os ratos e murganhos, enquanto que os resultados representativos, será apresentado a partir de ratos Sprague-Dawley. 1. Preparação de DNBS e administração intra-rectal <ol><li> Para a instilação rectal de DNBS em ratos, recém preparar 15-30 mg de DNBS/250 ul de etanol a 50%. Para ratos, preparar 2-6 mg de DNBS/100 mL de etanol 50%. Nota: Otimizar a concentração DNBS exato a ser administrado em cada instalação. Ratos machos Sprague-Dawley e murganhos C57BL / 6 são os preferidos para a indução da colite DNBS, no entanto outras estirpes de ratinho e de rato pode ser utilizado. Os ratinhos e ratos tratados apenas com etanol a 50% podem ser usados ​​como grupos de controlo no entanto, devido aos efeitos do etanol são ligeiros ou ausentes, pode omit a inclusão deste grupo em um estudo de 12. </li><li> Anexar uma seringa de 1 ml de uma agulha 19 G que tem um cateter de polietileno (PE-90 - ratos e PE-50 - ratos) preso ao seu fim. </li><li> Levemente anestesiar o rato ou de descanso do mouse sobre uma almofada de aquecimento (por exemplo, através da administração de isoflurano a 1,5% via nariz cone, os animais ainda deve ter piscar e os reflexos de deglutição e respiração exibir regular). Aplique gel lágrima aos seus olhos para evitar os olhos sequem. </li><li> Suavemente aplicar pressão com os dedos para a extremidade posterior do animal para remover quaisquer fezes que podem estar presentes no cólon distai. </li><li> Insira cuidadosamente o cateter por via retal, com o cateter atingindo aproximadamente 8 cm proximal ao ânus para os ratos, ou 3-4 cm para ratos. Injectar uma pequena quantidade da solução durante a inserção do cateter para lubrificar, permitindo uma inserção mais fácil. Nota: Se qualquer resistência é sentida durante a inserção do cateter, não continuem a inserir, pois isso pode levar à perfuração doa parede intestinal. Remover o cateter e tentar reinserir suavemente, novamente lubrificação do cólon como prosseguir. </li><li> Lentamente injectar 250 (ratos) ou 100 (ratinhos) ul de DNBS, ou um volume igual ou etanol a 50% para os controlos. Depois de injetar a DNBS, posicionar o animal de cabeça para baixo por 90 segundos para evitar a perda do DNBS. </li><li> Após administração DNBS, alimentar os animais de 8% de sacarose em água de 0,2% de solução salina para evitar a desidratação, durante a primeira semana. </li><li> Observar atentamente os animais, com acompanhamento diário para perda de peso e sinais de desidratação ou sofrimento para a duração do experimento. Nota: A perda de peso pode se aproximar rapidamente as recomendações do CCAC de perda de peso máximo autorizado. Uma vez que esta parte derivada desidratação, perda de peso, deve ser utilizado como um indicador para a administração de solução de Ringer com lactato para limitar a desidratação. Por favor, não deixe de consultar o veterinário facilidade em questões de saúde, conforme o caso. </li></ol> 2. Collecting Tecidos e avaliação do dano histológico em DNBS Desafiado Ratos <ol><li> No ponto de tempo desejado após o desafio com DNBS, sacrificar animais por overdose com isoflurano em uma câmara de anestesia complementada com oxigênio suficiente. Observar o animal até que não ascendente ou descendente do peito é visto e não há batimento cardíaco palpável. Confirme o animal foi corretamente sacrificados por falta de resposta a pitada dedo do pé ou tocar da córnea, seguido por deslocamento cervical. </li><li> Abra a cavidade abdominal e remover todo o intestino grosso. Abra o intestino longitudinalmente, úlceras macroscópicas deve ser observada cerca de 5-6 cm proximal da extremidade distai do cólon de ratos (2-3 cm em ratinhos). Nota: Após a remoção do intestino grosso, avaliar contagens danos macroscópicos se desejado. Colete segmentos de cólon a partir correspondente localização anatômica de animais controle. Nota: Os indivíduos marcando o tecido para escores de danos macroscópicos deveriaser cegos para a identidade dos grupos de tratamento. Pontuação cortes de tecido usando os seguintes critérios: ou similar gravidade e extensão da ulceração (0-10), somados com a pontuação de ausência ou presença de diarréia (0 ou 1), aderências (0, 1 ou 2) e máxima espessura da parede do cólon em 11 milímetros. </li><li> Recolher 0,5 seções cm proximal ao local do dano macroscópico máxima. Encaixar congelar uma seção 0,5 centímetros em nitrogênio líquido para avaliar mais tarde mieloperoxidase (MPO) atividade (uma medida da infiltração de neutrófilos), e coloque a outra parte em 10% formalina tamponada neutra para análise histológica. Nota: Encaixe tecidos congelados para ensaio de mieloperoxidase pode ser armazenada a -80 ° C durante 1 mês. </li><li> Permita que os tecidos coletados para análise histológica no passo 2.3 para corrigir em formol durante a noite e, em seguida, lavar com etanol 70%. Incorporar tecidos em parafina e cortadas a espessura desejada (3-5 mm), mancha com hemotoxilina e eosina (HE) para marcar histológica. </li&gt; <li> Ter dois observadores marcar pelo menos três cortes de tecido de cada animal sob um microscópio de luz para determinar os escores histológicos de dano para cada grupo. Nota: Os indivíduos a marcar o tecido para as pontuações de danos histológicos deve ser cegos para a identidade dos grupos de tratamento. Pontuação secções de tecido utilizando os seguintes critérios: ou semelhantes extensão da infiltração de células inflamatórias (0 = ausente, 3 = transmural), perda da arquitectura da mucosa (0 = ausente, 3 = grave), a presença ou ausência de abcessos das criptas (0-1) e depleção de células caliciformes (0-3). Determine pontuação dano histológico como a soma destes escores 11. </li></ol> 3. Realizando mieloperoxidase (MPO) Ensaio sobre DNBS Desafiado tecido intestinal <ol><li> Ensaio de actividade de MPO nos 0,5 centímetros segmentos do cólon obtidos no passo 2.3. Homogeneizar os tecidos em tampão de homogeneização a MPO (0,5% de brometo de hexadeciltrimetil-amónio em tampão de fosfato de potássio 50 mM (pH 6,0)) para dar um segme cólon 50 mgnt / ml de suspensão de tampão de homogeneização. </li><li> Alíquota da solução homogeneizada em porções de 1 ml e centrifugar a 4 ° C durante 2 min a 10.000 x g. </li><li> Misturar 100 ml de cada solução com 2,9 ml de 50 mM de tampão de fosfato (pH 6,0) contendo 0,167 mg / ml de o-dianisidinedihydrochloride e 0,0005% de peróxido de hidrogénio numa cuvete. </li><li> Medir a velocidade de absorção usando um espectrofotómetro a 460 nm. Nota: A actividade de MPO é definida como a quantidade de enzima que degrada 1 umol / min de H 2 O 2 H 2 O, à temperatura ambiente, e é expressa em unidades por mg de tecido. </li></ol>

<ol>
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E., Blennerhassett, P., Deng, Y., Verdu, E., Khan, W., Collins, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactivation+of+inflammatory+bowel+disease+in+a+mouse+model+of+depression.">Reactivation of inflammatory bowel disease in a mouse model of depression.</a> Gastroenterology. 136 (7), 2280-2288 (2009).</li><li>Reber, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+and+animal+models+of+inflammatory+bowel+disease-an+update+on+the+role+of+the+hypothalamo-pituitary-adrenal+axis.">Stress and animal models of inflammatory bowel disease-an update on the role of the hypothalamo-pituitary-adrenal axis.</a> Psychoneuroendocrinology. 37 (1), 1-19 (2012).</li><li>Qiu, B., Vallance, B., Blennerhassett, P., Collins, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+CD4++lymphocytes+in+the+susceptibility+of+mice+to+stress-induced+reactivation+of+experimental+colitis.">The role of CD4+ lymphocytes in the susceptibility of mice to stress-induced reactivation of experimental colitis.</a> Nat. 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Basic Clin. 124 (1-2), 56-68 (2006).</li><li>Cuzzocrea, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calpain+inhibitor+I+reduces+colon+injury+caused+by+dinitrobenzene+sulphonic+acid+in+the+rat.">Calpain inhibitor I reduces colon injury caused by dinitrobenzene sulphonic acid in the rat.</a> Gut. 48 (4), 478-488 (2001).</li><li>Cuzzocrea, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melatonin+reduces+dinitrobenzene+sulfonic+acid-induced+colitis.">Melatonin reduces dinitrobenzene sulfonic acid-induced colitis.</a> J. Pineal Res. 30 (1), 1-12 (2001).</li><li>Innis, S., Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+lipids+in+early+development+and+intestinal+inflammatory+disease.">Dietary lipids in early development and intestinal inflammatory disease.</a> Nutr. Rev. 65, S188-S193 (2007).</li><li>Innis, S. M., de La Presa Owens, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+fatty+acid+composition+in+pregnancy+alters+neurite+membrane+fatty+acids+and+dopamine+in+newborn+rat+brain.">Dietary fatty acid composition in pregnancy alters neurite membrane fatty acids and dopamine in newborn rat brain.</a> J. 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R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+fish+oil+reduces+progression+of+chronic+inflammatory+lesions+in+a+rat+model+of+granulomatous+colitis.">Dietary fish oil reduces progression of chronic inflammatory lesions in a rat model of granulomatous colitis.</a> Gut. 31, 539-544 (1990).</li><li>Andoh, A., Tsujikawa, T., Ishizuka, I., Araki, Y., Sasaki, M., Koyama, S., Fujiyama, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=N-3+fatty+acid-rich+diet+prevents+early+response+of+interleukin-6+elevation+in+trinitrobenzene+sulfonic+acid-induced+enteritis.">N-3 fatty acid-rich diet prevents early response of interleukin-6 elevation in trinitrobenzene sulfonic acid-induced enteritis.</a> Int. J. Mol. Med. 12, 721-725 (2003).</li><li>Barros, K. V., Xavier, R. A., Abreu, G. G., Martinez, C. A., Ribeiro, M. L., Gambero, A., Carvalho, P. O., Nascimento, C. M., Silveira, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soybean+and+fish+oil+mixture+increases+IL-10,+protects+against+DNA+damage+and+decreases+colonic+inflammation+in+rats+with+dextran+sulfate+sodium+(DSS)+colitis.">Soybean and fish oil mixture increases IL-10, protects against DNA damage and decreases colonic inflammation in rats with dextran sulfate sodium (DSS) colitis.</a> Lipids Health Dis. 9, 68 (2010).</li><li>Hekmatdoost, A., Wu, X., Morampudi, V., Innis, S. M., Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+oils+modify+the+host+immune+response+and+colonic+tissue+damage+following+Citrobacter+rodentium+infection+in+mice.">Dietary oils modify the host immune response and colonic tissue damage following Citrobacter rodentium infection in mice.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 304 (10), 917-928 (2013).</li><li>Innis, S. M., Dai, C., Wu, X., Buchan, A. M., Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perinatal+lipid+nutrition+alters+early+intestinal+development+and+programs+the+response+to+experimental+colitis+in+young+adult+rats.">Perinatal lipid nutrition alters early intestinal development and programs the response to experimental colitis in young adult rats.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 299 (6), 1376-1385 (1152).</li></ol>

Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.

O modelo descrito neste DNBS protocolo é um modelo válido, barato e reprodutível que a colite pode ser utilizado para o estudo de vários aspectos da DII. Quando administrado por via retal de ratos ou camundongos, DNBS induz um grau substancial de inflamação e lesão tecidual no cólon, assemelhando-se a doença de Crohn humana em termos de suas várias características histológicas, incluindo infiltração transmural de polimorfonucleares e predominante NF-kB-dependente ativação Th1. <p class="jove_content"...

Doença inflamatória do intestino (IBD) é caracterizada por uma inflamação crónica recidivante no tracto gastro-intestinal (GI), resultando em sintomas de diarreia, perda de peso e dor abdominal. A colite ulcerosa (UC) e doença de Crohn (CD) são as duas formas principais de DII, e podem ser distinguidas pela localização da inflamação dentro do tracto GI. Em pacientes UC, a inflamação geralmente envolve o reto e estende-se de forma contígua no cólon por um grau variável afetando apenas a mucosa superficial. Em contraste, o CD pode afectar qualquer parte do tracto GI, embora afecta predominantemente o íleo e ceco. CD freqüentemente se manifesta como uma inflamação transmural muitas vezes associada a granulomas e levando a stricturing (fibrostenotic) e / ou penetrante (fistulizing) doença. Embora a etiologia da DII permanece indefinida, é bem aceito que IBD é multifatorial, envolvendo interações entre as hostes do sistema imunológico, a susceptibilidade genética e responses a fatores ambientais e microbianos. Até à data, modelos diferentes de DII foram propostos que exibem várias respostas clínicas, histológicas e imunológicas característicos de UC e CD. Os modelos mais utilizados incluem ratinhos geneticamente modificados (IL-2, IL-10, SAMP / yit), infecção modelos induzidas (Citrobacter rodentium, Salmonella typhimurium), os modelos de transferência adoptivos (CD45 + RB alto, de transferência de células CD62L + em ratinhos SCID) e modelos de colite induzida quimicamente (sulfato de sódio de dextrano (DSS), ácido sulfônico Trinitrobenzeno (TNBS), e ácido sulfónico dinitrobenzeno (DNBS)). Devido ao seu baixo custo e um rápido início da doença, os modelos químicos são considerados de grande valor para o estudo de diferentes aspectos da DII. Cada um dos modelos de colite químicos listados tem vantagens, bem como as limitações em alguns aspectos de sua relevância clínica, imunológica e histopatológica de IBD. DSS é um dos métodos químicos mais comuns utilizados para induzir colitis em roedores 1. Administração de 3-10% DSS (PM: 42 kDa) durante 7-10 dias na água de beber dos ratos pode induzir sintomas e sinais de colite, incluindo perda de peso, diarreia com sangue, a gordura do cólon, ulceração da mucosa e a infiltração de neutrófilos. Este modelo é particularmente útil para estudos de pesquisa de drogas, bem como para explorar os mecanismos de regeneração epitelial, o impacto da imunidade inata na homeostase da mucosa, e o papel da inflamação na promoção displasia intestinal e desenvolvimento de adenocarcinoma. No entanto, existem algumas desvantagens no modelo DSS, incluindo a variação na concentração de DSS necessária para induzir a colite, em diferentes instalações de animais, assim como a absorção de água pela inconsistente ratinhos e, assim, a exposição incoerente DSS, resultando em variações no grau, extensão e distribuição de lesão da mucosa e ulceração no cólon. Todas essas características levam a heterogeneidade dos resultados e limitar a capacidade de comparar os resultados entre os estudos frdiferentes grupos de pesquisa Om. Uma alternativa ao modelo DSS é o DNBS induzida por hapteno ou modelos TNBS de colite. Este modelo utiliza a instilação rectal da mucosa agentes sensibilizantes DNBS ou TNBS, diluídas em várias concentrações de etanol. A administração do etanol é um pré-requisito para quebrar a barreira mucosa do cólon para permitir a penetração de DNBS ou TNBS na lâmina própria. DNBS / TNBS então haptenize as proteínas do cólon e intestino microbianas localizadas para se tornar imunogênica, desencadeando o anfitrião inata e resposta imune adaptativa. Em geral, este modelo está associado com diarreia severa e por vezes sanguinolenta, perda de peso e espessamento da parede intestinal, no entanto os sintomas variam dependendo do tipo de roedor utilizadas, bem como o tempo, a dose e o grau de exposição ao DNBS ou TNBS utilizado na estudo. Distinções importantes entre ratos e ratinhos deve-se notar, com os benefícios de menor custo de compra e de bordo, bem como Lower de massa corporal para diminuir os custos por animal de tratamento in vivo. Isso deve ser definido contra o curso mais rápida e grave da colite em ratos, onde os animais mais frágeis e sensíveis podem rapidamente chegar a um desfecho humano. A inflamação intestinal resulta inicialmente a partir de etanol danos induzidos às células epiteliais do intestino delgado, o que leva a um aumento da permeabilidade epitelial, penetração microbiana na mucosa, haptenization de proteínas do hospedeiro, tudo isto resultando na infiltração de neutrófilos, macrófagos e linfócitos T Th1 para a mucosa danificada. Em comparação com DNBS, TNBS é considerado como uma substância química perigosa, devido às suas propriedades altamente oxidativas que podem representar um risco de explosão em contacto com bases, tais como sais de sódio e hidróxido de potássio. Portanto DNBS é considerado atualmente como uma escolha preferida de química sobre TNBS para induzir colite. Em roedores, a colite DNBS é considerado como um dos métodos mais convenientes para estudar o seguinasa IBD modificadores da doença associada: <ol><li> A depressão e a reactivação da colite: Demonstrou-se que o stress, a ansiedade e depressão em pacientes IBD são frequentemente associadas com a recidiva da doença. Colite DNBS é um modelo adequado para estudar o papel da depressão e as suas consequências sobre a reactivação de colite em ratos. O método geralmente envolve a indução inicial de colite por DNBS, seguido pela resolução da colite, deixando os ratos durante 6-8 semanas. Os ratinhos são então administradas com agentes causando depressão, tais como a reserpina ou por bulbectomy olfatório para induzir depressão seguida testando-os para a reactivação de colite por desafio com uma dose de DNBS subcolitic 2. </li><li> Stress e reativação de colite: O estresse é outro fator ambiental comum que tem sido associada ao IBD patogênese. Há um crescente corpo de evidências que sugerem uma forte associação entre o estresse crônico eo aparecimento de sintomas de UC e CD em roedors, bem como em seres humanos e primatas não-humanos 3. Colite DNBS é um bom modelo para estudar a reativação associada ao estresse da colite em ratos e ratos. O método é normalmente empregue de forma semelhante como mencionado acima para a depressão, excepto em lugar da depressão, os animais são expostos a factores de stress tais como o stress sonoro e de retenção 4. </li><li> Inflamação neurogénica: Uma série de estudos descreve tanto alterações transitórias ou permanentes no sistema nervoso entérico (ENS), estrutura e função, como pode ser visto em amostras de tecido a partir de modelos animais e a partir de pacientes com IBD. DNBS é um bom modelo para explorar os efeitos da inflamação na ENS 5 e estudar tanto noradrenérgica e vias neurais colinérgicos 6. </li><li> Mecanismos de lesão de reparação: Durante IBD patogênese, mediadores de lesão derivados do hospedeiro, como as espécies reativas de oxigênio (ROS), o óxido nítrico (NO), molécula de adesão intercelular (ICAM-3 3) e P-selectina têm sido mostrados para pcolocar um papel na ruptura epitelial intestinal. DNBS é um excelente modelo para estudar as lesões causadas pelo aumento da regulação desses mediadores, bem como os mecanismos de reparo que são regulados pelo uso de drogas ou inibidores seletivos 7,8. </li><li> Inflamação transmural: Para além das aplicações de DNBS acima mencionados, o modelo pode também ser aplicada ao estudo de inflamação transmural do intestino, uma característica clássica encontrada em pacientes com CD. Ambos DNBS e colite induzida por TNBS estão associadas com a infiltração de linfócitos significativa, na mucosa do cólon tornando estes modelos particularmente úteis para o estudo de células T mecanismos imunitários dependentes. </li></ol> Em comparação com o modelo de DSS, as vantagens de DNBS e colite induzida por TNBS incluem baixo custo, o rápido desenvolvimento de colite (geralmente requer 1-3 dias para mostrar ulceração reprodutível e inflamação) e dano localizado consistente no cólon distai. No entanto, as desvantagens são um requisito para amaior nível de conhecimento técnico, a otimização da dose DNBS / TNBS, ea necessidade de anestesia para administração rectal. Neste papel metodológico estudámos os efeitos de diferentes concentrações de n-6 e n-3 ácidos gordos poliinsaturados em alterar a resposta da mucosa do cólon com colite induzida pelo DNBS em ratos usando o óleo de cártamo óleos vegetais (SO) e de óleo de canola (CO) e óleo de peixe (FO). Demonstrou-se que os ácidos n-6 e n-3 ácidos gordos são importantes mediadores de doenças inflamatórias intestinais através do seu papel como radicais acilo de phosopholipids membrana celular 9. Em contraste com a pró-inflamatória potencial de n-6 Os ácidos gordos n-3 ácidos gordos no suficientemente elevado consumo são agentes potencialmente anti-inflamatórios potentes. As ações anti-inflamatórias de n-3 os ácidos gordos são mediados diretamente através de substituição de ácido araquidônico como substrato de eicosanóides, inibindo o metabolismo do ácido araquidônico e, indiretamente, através de alteração de proinflexpressão gênica ammatory e sinalização celular. Os n-3 ácidos gordos também dar origem a resolvins, uma família de mediadores anti-inflamatórios. O consumo elevado de n-3 ácidos gordos está associada com uma diminuição na produção de eicosanoides pró-inflamatórios, citocinas, quimiocinas, espécies reactivas de oxigénio e expressão de moléculas de adesão. Neste estudo, os ratos foram alimentados ad libitum dietas idênticos em todos os nutrientes excepto ácidos gordos, com uma energia como por cento de gordura, 20% de SO, 20% de CO, ou 18% de óleo de peixe, mais 2% de óleo de cártamo (FO) 10-11 . Como percentual da energia diária, a dieta SO fornecido 15% de ácido linoléico (LA), com &lt;0,06% de ácido linolênico-α (ALA) e não o ácido eicosapentaenóico (EPA) ou ácido docosahexaenóico (DHA), a dieta de CO teve 4,2 LA% e 1,9% ALA sem EPA ou DHA, ea dieta FO, desde 1,4% EPA, DHA 4,9%, 0,32% LA, e de 0,12% ALA. Três semanas após o início das dietas de lípidos, os ratinhos foram administrados DNBS intra-rectal ou etanol a 50% e sacrificados 5 dias mais tarde. A inflammatory resposta foi avaliada por avaliação da perda de peso, escores de danos histológicos e atividade da mieloperoxidase tecido.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="627">
	<colgroup>
		<col />
		<col /> 
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">1 mL syringe</td>
			<td style="width:121px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">309659</td>
			<td style="width:167px;"> </td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">19 gauge needle</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>305187</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyethylene tubing PE-50</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>427517</td>
			<td>for intra-rectal administration in mice</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyethylene tubing PE-90</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>427519</td>
			<td>for intra-rectal administration in rat</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DNBS</td>
			<td>MP Bio</td>
			<td>150959</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">tear gel</td>
			<td>Novartis</td>
			<td>63601662596</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10% Formalin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>5F93-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">warming pad</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>TPZ-0510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethanol</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>A-962.4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">hexadecyltrimethyl-ammonium bromide</td>
			<td style="width:121px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>H5882</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Potassium phosphate buffer solution</td>
			<td style="width:121px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>79628-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">O-dianisidine dihydrochloride</td>
			<td style="width:121px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>D3252</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">30% H2O2</td>
			<td style="width:121px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>31642</td>
			<td>hydrogen peroxide</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Spectrophotometer</td>
			<td>BIORAD</td>
			<td>Benchmarker Plus</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Light Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axio Image.Z1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">Data analysis software program </td>
			<td>GraphPad Software</td>
			<td style="width:119px;"> GraphPad Prism Software Version 4.00 </td>
			<td><a href="http://www.graphpad.com/">San Diego California USA, www.graphpad.com</a></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dnbs/tnbs colitis models: providing insights into inflammatory bowel disease and effects of dietary fat

Doenças inflamatórias do intestino (DII), incluindo a doença de Crohn e colite ulcerativa, têm sido associados com uma base genética, e, mais recentemente, a resposta imune do hospedeiro agentes microbianos e ambientais. Colite dinitrobenzeno ácido sulfônico (DNBS) induzida pelo permite estudar a patogênese da DII gatilhos ambientais associados, como estresse e dieta, os efeitos de terapias potenciais e os mecanismos subjacentes a inflamação intestinal e da mucosa da lesão. Neste trabalho, investigamos os efeitos dos ácidos n-3 e n-6 ácidos graxos na dieta sobre a resposta inflamatória da mucosa do cólon de colite induzida por DNBS em ratos. Todos os ratos foram alimentados com dietas idênticos com a excepção de diferentes tipos de ácidos gordos [óleo de cártamo (SO), óleo de canola (CO), ou óleo de peixe (FO)] durante três semanas antes da exposição ao intrarectal DNBS. Ratos controle dadas etanol intra-retal continuou a ganhar peso ao longo do estudo de 5 dias, enquanto que, os ratos tratados com DNBS dietas lipídicas alimentados todos lost de peso em ratos e FO CO alimentados demonstrando significativa perda de peso por 48 horas e ratos alimentados SO por 72 horas. O ganho de peso retomada após 72 horas pós DNBS, e por 5 dias após DNBS, o grupo FO teve um peso corporal superior ao SO ou grupos CO. Seções do Colo coletadas 5 dias após DNBS-tratamento mostrou ulceração focal, destruição cripta, a depleção de células caliciformes, e mucosa infiltração de ambas as células inflamatórias agudas e crônicas que diferiam em termos de gravidade entre os grupos de dieta. O grupo SO alimentada mostrou o dano mais grave, seguido pela CO, e FO alimentado grupos que apresentaram o mais suave grau de lesão tecidual. Da mesma forma, a mieloperoxidase colónica (MPO) A actividade, um marcador da actividade de neutrófilos foi significativamente mais elevada nas SO seguidos de ratos alimentados com CO, com FO ratos alimentados com actividade significativamente menor MPO. Estes resultados demonstram o uso de colite induzida por DNBS, conforme descrito neste protocolo, para determinar o impacto da dieta na patogênese da DII.

Desafio de ratos (Sprague-Dawley) ou ratinhos (C57BL / 6) com DNBS normalmente resulta na perda de peso transiente e diarreia, por vezes, com a presença de sangue nas fezes. No entanto, fatores como a genética, dieta e microbiota intestinal pode modificar a susceptibilidade a colite induzida DNBS. Portanto, os animais incluídos nos experimentos deve ser da mesma instituição, seja derivada localmente ou ordenadas a partir de um fornecedor animal. Todos os animais devem ser cuidadosamente monitorizados para o grau de...

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DNBS/TNBS Colitis Models: Providing Insights Into Inflammatory Bowel Disease and Effects of Dietary Fat

DNBS / colite induzida por TNBS oferece um método alternativo e de baixo custo para estudar a fisiopatologia das doenças inflamatórias do intestino. O protocolo discutidos neste documento descreve a aplicação bem-sucedida de DNBS para induzir colite em camundongos e ratos e permite estudar minuciosamente respostas intestinais com hospedeiros.

DNBS / TNBS Colite Modelos: elucidando sua Doença Inflamatória Intestinal e Efeitos de gordura na dieta

Inflammatory Bowel Diseases (IBD), including Crohn&#39;s Disease and Ulcerative Colitis, have long been associated with a genetic basis, and more recently ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

46.8K visualizações.  BC Children's Hospital.  DNBS / colite induzida por TNBS oferece um método alternativo e de baixo custo para estudar a fisiopatologia das doenças inflamatórias do intestino. O protocolo discutidos neste documento descreve a aplicação bem-sucedida de DNBS para induzir colite em camundongos e ratos e permite estudar minuciosamente respostas intestinais com hospedeiros. 

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Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&beta; using a Whole Blood Stimulation Assay

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues as well as altered cytokine homeostasis. The innate immune system plays a crucial role in recognizing pathogens and other endogenous danger stimuli. One of the major cytokines released by innate immune cells is Interleukin (IL)-1. Therefore, we utilize a whole blood stimulation assay in order to measure the secretion of inflammatory cytokines and specifically of the pro-inflammatory cytokine IL-1&beta; 1, 2, 3.
Patients with genetic dysfunctions of the innate immune system causing autoinflammatory syndromes show an exaggerated release of mature IL-1&beta; upon stimulation with LPS alone. In order to evaluate the innate immune component of patients who present with inflammatory-associated pathologies, we use a specific immunoassay to detect cellular immune responses to pathogen-associated molecular patterns (PAMPs), such as the gram-negative bacterial endotoxin, lipopolysaccharide (LPS). These PAMPs are recognized by pathogen recognition receptors (PRRs), which are found on the cells of the innate immune system 4, 5, 6, 7. A primary signal, LPS, in conjunction with a secondary signal, ATP, is necessary for the activation of the inflammasome, a multiprotein complex that processes pro-IL-1&beta; to its mature, bioactive form 4, 5, 6, 8, 9, 10.
The whole blood assay requires minimal sample manipulation to assess cytokine production when compared to other methods that require labor intensive isolation and culturing of specific cell populations. This method differs from other whole blood stimulation assays; rather than diluting samples with a ratio of RPMI media, we perform a white blood cell count directly from diluted whole blood and therefore, stimulate a known number of white blood cells in culture 2. The results of this particular whole blood assay demonstrate a novel technique useful in elucidating patient cohorts presenting with autoinflammatory pathophysiologies.

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&amp;#946; using a Whole Blood Stimulation Assay

We describe a simple immunoassay to measure the production of pro-inflammatory cytokines, such as IL-1 beta production, in patients presenting with autoinflammatory phenotypes. By activating cells in whole blood cultures with pathogen-associated molecular patterns, specifically with lipopolysaccharide, cytokine secretion can be conveniently evaluated in whole blood supernatants.

Medição precisa e simples do pró-inflamatórias IL-1β citocinas usando um ensaio Estimulação Sangue Total

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues ...

Medicina

Segmentation and Measurement of Fat Volumes in Murine Obesity Models Using X-ray Computed Tomography

Obesity is associated with increased morbidity and mortality as well as reduced metrics in quality of life.1 Both environmental and genetic factors are associated with obesity, though the precise underlying mechanisms that contribute to the disease are currently being delineated.2,3 Several small animal models of obesity have been developed and are employed in a variety of studies.4 A critical component to these experiments involves the collection of regional and/or total animal fat content data under varied conditions.
Traditional experimental methods available for measuring fat content in small animal models of obesity include invasive (e.g. ex vivo measurement of fat deposits) and non-invasive (e.g. Dual Energy X-ray Absorptiometry (DEXA), or Magnetic Resonance (MR)) protocols, each of which presents relative trade-offs. Current invasive methods for measuring fat content may provide details for organ and region specific fat distribution, but sacrificing the subjects will preclude longitudinal assessments. Conversely, current non-invasive strategies provide limited details for organ and region specific fat distribution, but enable valuable longitudinal assessment. With the advent of dedicated small animal X-ray computed tomography (CT) systems and customized analytical procedures, both organ and region specific analysis of fat distribution and longitudinal profiling may be possible. Recent reports have validated the use of CT for in vivo longitudinal imaging of adiposity in living mice.5,6 Here we provide a modified method that allows for fat/total volume measurement, analysis and visualization utilizing the Carestream Molecular Imaging Albira CT system in conjunction with PMOD and Volview software packages.

Fat content analysis is routinely conducted in studies utilizing murine obesity models. Emerging methods in small animal CT imaging and analysis are providing for longitudinal detail rich fat content analysis. Here we detail step by step procedures for performing small animal CT imaging, analysis, and visualization.

Segmentação e medição de volumes de gordura em modelos de obesidade em roedores usando raios-X Tomografia Computadorizada

Obesity is associated with increased morbidity and mortality as well as reduced metrics in quality of life.1 Both environmental and genetic factors are ...

Gene-environment Interaction Models to Unmask Susceptibility Mechanisms in Parkinson's Disease

Lipoxygenase (LOX) activity has been implicated in neurodegenerative disorders such as Alzheimer&#39;s disease, but its effects in Parkinson&#39;s disease (PD) pathogenesis are less understood. Gene-environment interaction models have utility in unmasking the impact of specific cellular pathways in toxicity that may not be observed using a solely genetic or toxicant disease model alone.&#160;To evaluate if distinct LOX isozymes selectively contribute to PD-related neurodegeneration, transgenic (i.e. 5-LOX and 12/15-LOX deficient) mice can be challenged with a toxin that mimics cell injury and death in the disorder.&#160;Here we describe the use of a neurotoxin, 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP), which produces a nigrostriatal lesion to elucidate the distinct contributions of LOX isozymes to neurodegeneration related to PD. The use of MPTP in mouse, and nonhuman primate, is well-established to recapitulate the nigrostriatal damage in PD.&#160;The extent of MPTP-induced lesioning is measured by HPLC analysis of dopamine and its metabolites and semi-quantitative Western blot analysis of striatum for tyrosine hydroxylase (TH), the rate-limiting enzyme for the synthesis of dopamine. To assess inflammatory markers, which may demonstrate LOX isozyme-selective sensitivity, glial fibrillary acidic protein (GFAP) and Iba-1 immunohistochemistry are performed on brain sections containing substantia nigra, and GFAP Western blot analysis is performed on striatal homogenates.&#160;This experimental approach can provide novel insights into gene-environment interactions underlying nigrostriatal degeneration and PD.

Gene-environment Interaction Models to Unmask Susceptibility Mechanisms in Parkinson&#039;s Disease

Lipoxygenase (LOX) isozymes can generate products that may increase or decrease neuroinflammation and neurodegeneration.&#160;A gene-environment interaction study could identify LOX isozyme-specific effects. Using the 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP) model of nigrostriatal damage in two LOX isozyme-deficient transgenic lines allows for comparison of the contribution of LOX isozymes on dopaminergic integrity and inflammation.

Modelos de interação gene-ambiente para desmasca mecanismos de suscetibilidade na doença de Parkinson

Lipoxygenase (LOX) activity has been implicated in neurodegenerative disorders such as Alzheimer&#39;s disease, but its effects in Parkinson&#39;s disease ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the functions of proteins involved in oncogenic progression or help to discover new tumor suppressors. In addition, injecting cancer cells into mice with different genotypes might provide a better understanding of the importance of the stromal compartment. Many models may be useful to investigate certain aspects of disease progression but do not recapitulate the entire cancerous process. In contrast, breast cancer cells engraftment to the mammary fat pad of mice better recapitulates the location of the disease and presence of the proper stromal compartment and therefore better mimics human cancerous disease. In this article, we describe how to implant breast cancer cells into mice orthotopically and explain how to collect tissues to analyse the tumor milieu and metastasis to distant organs. Using this model, many aspects (growth, angiogenesis, and metastasis) of cancer can be investigated simply by providing a proper environment for tumor cells to grow.

Cancer is a complex disease that is influenced by the tissue surrounding the tumor as well as local pro- and anti-inflammatory mediators. Therefore, orthotropic injection models, rather than subcutaneous models may be useful to study cancer progression in a manner that better mimics human pathology.

Injeção Orthotopic de células cancerosas da mama na mamária Fat Pad de Ratos para o Estudo de crescimento tumoral.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

Assessment of Viability of Human Fat Injection into Nude Mice with Micro-Computed Tomography

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft tissue filler as it is readily available, easily obtained, inexpensive, and inherently biocompatible.1 However, despite its burgeoning popularity, fat grafting is hampered by unpredictable results and variable graft survival, with published retention rates ranging anywhere from 10-80%. 1-3
To facilitate investigations on fat grafting, we have therefore developed an animal model that allows for real-time analysis of injected fat volume retention. Briefly, a small cut is made in the scalp of a CD-1 nude mouse and 200-400 &#181;l&#160;of processed lipoaspirate is placed over the skull. The scalp is chosen as the recipient site because of its absence of native subcutaneous fat, and because of the excellent background contrast provided by the calvarium, which aids in the analysis process. Micro-computed tomography (micro-CT) is used to scan the graft at baseline and every two weeks thereafter. The CT images are reconstructed, and an imaging software is used to quantify graft volumes.
Traditionally, techniques to assess fat graft volume have necessitated euthanizing the study animal to provide just a single assessment of graft weight and volume by physical measurement ex vivo. Biochemical and histological comparisons have likewise required the study animal to be euthanized. This described imaging technique offers the advantage of visualizing and objectively quantifying volume at multiple time points after initial grafting without having to sacrifice the study animal. The technique is limited by the size of the graft able to be injected as larger grafts risk skin and fat necrosis. This method has utility for all studies evaluating fat graft viability and volume retention. It is particularly well-suited to providing a visual representation of fat grafts and following changes in volume over time.

Fat grafting is an essential technique for reconstructing soft tissue deficits. However, it remains an unpredictable procedure characterized by variable graft survival. Our goal was to devise a mouse model that utilizes a novel imaging method to compare volume retention between differing techniques of fat graft preparation and delivery.

Avaliação da viabilidade de gordura humana injecção em ratinhos nu com Micro-Tomografia Computadorizada

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft ...

Therapeutic Effectiveness of a Dietary Supplement for Management of Halitosis in Dogs

Halitosis is a common complaint involving social and communicational problems in humans and also affects the pet-owner relationship. In this randomized placebo-controlled crossover clinical evaluation, we assessed&#160;the effectiveness of a dedicated dietary supplement to improve chronic halitosis in 32 dogs of different breeds and ages. This protocol describes how to evalute the presence of oral volatile suphur compunds, e.g. methyl mercaptan, hydrogen sulfide and dimethyl sulfide, by means of a portable gas chromatograph device coupled with a syringe, which was used to collect the breath, and a dedicated software, which allows the operator to monitor each compound concentration during each measurement, in a relatively short time (8 min).
A significant modification of halitosis parameters was observed after 30 days since the beginning of treatment (p &#60;0.05), while a long-lasting effect was still observed even 20 days after the suspension of the treatment. Portable gas chromatograph, which is also widely used in clinical practice, can be therefore used to confirm&#160;and control halitosis in humans and animals. Even though human and animal species present some differences,&#160;this innovative and alternative therapy for halitosis management might be extended to human clinical practice as an adjuvant dietary approach.

We describe a simple approach for diagnosis of halitosis in dogs as well as a dietary approach for its management. This protocol may be extended to the management of halitosis in humans in the near future.

Eficácia terapêutica de um suplemento dietético para a Gestão de Halitose em Cães

Halitosis is a common complaint involving social and communicational problems in humans and also affects the pet-owner relationship. In this randomized ...

Surgical Models of Gastroesophageal Reflux with Mice

Multiple surgical procedures have been reported to induce gastroesophageal reflux in animals. Herein, we report three surgical models with mice aiming to induce reflux of gastric contents, duodenal contents or mixed contents. Surgical procedures and general principles have been described in detail. A researcher with surgical experience should be able to grasp the technique after a short period of practice. After surgery, most mice can survive and develop reflux esophagitis similar to that in humans. However, it should be noted that histological differences between mouse and human esophagus are the inherent limitations of these surgical models. If used for research on Barrett&#8217;s esophagus and adenocarcinoma, these procedures may need to be combined with genetic modifications.

This article demonstrates surgical procedures of gastroesophageal reflux with mice. These models are useful tools for research on mechanisms and treatment of gastroesophageal reflux disease and potentially Barrett&#8217;s esophagus and esophageal adenocarcinoma.

Modelos cirúrgicos de refluxo gastroesofágico com Ratos

Multiple surgical procedures have been reported to induce gastroesophageal reflux in animals. Herein, we report three surgical models with mice aiming to ...

Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease

The epithelial barrier is the first innate defense of the gastrointestinal tract and selectively regulates transport from the lumen to the underlying tissue compartments, restricting the transport of smaller molecules across the epithelium and almost completely prohibiting epithelial macromolecular transport. This selectivity is determined by the mucous gel layer, which limits the transport of lipophilic molecules and both the apical receptors and tight junctional protein complexes of the epithelium. In vitro cell culture models of the epithelium are convenient, but as a model, they lack the complexity of interactions between the microbiota, mucous-gel, epithelium and immune system. On the other hand, in vivo assessment of intestinal absorption or permeability may be performed, but these assays measure overall gastrointestinal absorption, with no indication of site specificity. Ex vivo permeability assays using &#34;intestinal sacs&#34; are a rapid and sensitive method of measuring either overall intestinal integrity or comparative transport of a specific molecule, with the added advantage of intestinal site specificity. Here we describe the preparation of intestinal sacs for permeability studies and the calculation of the apparent permeability (Papp) of a molecule across the intestinal barrier. This technique may be used as a method of assessing drug absorption, or to examine regional epithelial barrier dysfunction in animal models of gastrointestinal disease.

Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease

This protocol describes the use of excised intestinal tissue preparations or "intestinal sacs" as an ex vivo model of intestinal barrier function. This model may be used to assess integrity of both the epithelial barrier and the mucous gel layer at specific intestinal sites in animal models of digestive disease.

Ex Vivo Intestinal Sacs para Avaliar mucosa Permeabilidade de modelos de doença gastrointestinal

The epithelial barrier is the first innate defense of the gastrointestinal tract and selectively regulates transport from the lumen to the underlying ...

Transplantation Into the Mouse Ovarian Fat Pad

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic transplantation of ovarian surface and tubal epithelia include intraperitoneal and intrabursal administration of cells. The respective limitations of these methods include poorly defined location of injected cells and limited space volume. Furthermore, they are poorly suited for long-term structural preservation of transplanted organs. To address these challenges, we have developed an alternative approach, which is based on the introduction of cells and tissue fragments into the mouse fat pad. The mouse ovarian fat pad is located in the immediate vicinity of the ovary and uterine tube (aka oviduct, fallopian tube), and provides a familiar microenvironment for cells and tissues of these organs. In our approach fluorescence-labeled mouse and human cells, and fragments of the uterine tube are engrafted by using minimally traumatic dorsal incision surgery. Transplanted cells and their outgrowths are easily located in the ovarian fat pad for over 40 days. Long-term transplantation of the entire uterine tube allows correct preservation of all principle tissue components, and does not result in adverse side effects, such as fibrosis and inflammation. Our approach should be uniquely applicable for answering important biological questions such as differentiation, regenerative and neoplastic potential of specific cell populations. Furthermore, it should be suitable for studies of microenvironmental factors in normal development and cancer.

We describe an ovarian fad pad transplantation assay suitable for studies of normal and transformed epithelia of the female reproductive tract. The mouse fat pad allows transplantation of large tissue fragments, is easily accessible for surgery and imaging, and provides the most favorable native environment for tissues of M&#252;llerian origin.

Transplantação no Pad Mouse ovário Fat

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic ...

Analyzing Beneficial Effects of Nutritional Supplements on Intestinal Epithelial Barrier Functions During Experimental Colitis

Inflammatory bowel diseases (IBD), including Crohn&#39;s disease and ulcerative colitis, are chronic relapsing disorders of the intestines. They cause severe problems, such as abdominal cramping, bloody diarrhea, and weight loss, in affected individuals. Unfortunately, there is no cure yet, and treatments only aim to alleviate symptoms. Current treatments include anti-inflammatory and immunosuppressive drugs that may cause severe side effects. This warrants the search for alternative treatment options, such as nutritional supplements, that do not cause side effects. Before their application in clinical studies, such compounds must be rigorously tested for effectiveness and security in animal models. A reliable experimental model is the dextran sulfate sodium (DSS) colitis model in mice, which reproduces many of the clinical signs of ulcerative colitis in humans. We recently applied this model to test the beneficial effects of a nutritional supplement containing vitamins C and E, L-arginine, and &#969;3-polyunsaturated fatty acids (PUFA). We analyzed various disease parameters and found that this supplement was able to ameliorate edema formation, tissue damage, leukocyte infiltration, oxidative stress, and the production of pro-inflammatory cytokines, leading to an overall improvement in the disease activity index. In this article, we explain in detail the correct application of nutritional supplements using the DSS colitis model in C57Bl/6 mice, as well as how disease parameters such as histology, oxidative stress, and inflammation are assessed. Analyzing the beneficial effects of different diet supplements may then eventually open new avenues for the development of alternative treatment strategies that alleviate IBD symptoms and/or that prolong the phases of remission without causing severe side effects.

Current treatments of inflammatory bowel diseases (IBD) aim at alleviating disease symptoms but may cause severe side effects. Thus, alternative strategies are being investigated in animal colitis models. Here, we explain how the beneficial effects of diet supplements on clinical IBD signs are analyzed in such a colitis model.

Analisando Efeitos benéficos de suplementos nutricionais sobre as funções intestinais epitelial de barreira Durante Experimental Colite

Inflammatory bowel diseases (IBD), including Crohn&#39;s disease and ulcerative colitis, are chronic relapsing disorders of the intestines. They cause ...