فإن الكتاب أود أن أشكر العلوم الطبيعية والهندسة مجلس البحوث كندا لتوفير الدعم المالي لهذا المشروع.

1. عزل الطحالب الكتلة الحيوية الجافة لاستخدامها معايير الإسفار قراءات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة وحدة تخزين عينة من ثقافة الطحالب المتزايدة من شأنها أن توفر ما لا يقل عن 200 ملغ من الكتلة الحيوية الجافة، 400-600 ملغ هو الأفضل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عينة الطرد المركزي في 4 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة في 10،000 ز س. تجاهل طاف ويغسل بيليه مع حجم مساو من العازلة الفوسفات وضعت لنفس درجة الحموضة وسائل الاعلام النمو. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الخطوة 1.2 ليصبح المجموع 3 خطوات الغسيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعادة تعليق بيليه في غير المتأينة المياه ونقل إلى طبق وزنه قبل تزن. اسمحوا الجافة عند 50 درجة مئوية لمدة 48 ساعة. ملاحظة: التجفيف تحت فراغ سينخفض ​​وقت التجفيف وتجفيف الثقافة في درجات الحرارة فوق 50 درجة مئوية قد تجعل من الصعب إعادة تعليق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> متجر المجففة الثقافات الطحالب في درجة حرارة الغرفة لاستخدامها في المستقبل. </li></ol> 2. الكمي الوزني من الدهون المحايدة التي كتبها الهكسين استخراج (مقتبس من بليغ وداير 4) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس ما يقرب من 50 ملغ من الطحالب الكتلة الحيوية الجافة في وزن الطبق. ملاحظة: الجماهير تتراوح 40-80 ملغ يمكن استخدامها دون فقدان للاستنساخ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الكتلة الحيوية إلى هاون غسلها مسبقا مع الهكسان. إذا لزم الأمر، وغسل تزن الطبق مع كمية صغيرة (1 مل) من الهكسان باستخدام ماصة باستور من أجل نقل تماما الكتلة الحيوية إلى الهاون. ملاحظة: الهكسين هو عبارة عن مادة شديدة التقلب والسامة. يجب التعامل معها في غطاء الدخان مع الملابس الواقية المناسبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> طحن الكتلة الحيوية للطحالب لمدة 5 دقائق باستخدام مدقة. تبدأ طحن لطيف وزيادة كثافة تدريجيا. طحن الكتلة الحيوية إلى عجينة غرامة وسلس في الفترة 5 دقائق. إذا تم استخدام الهكسان الزائدة عند نقل الكتلة الحيوية إلى الهاون، فمن الأفضل أن ننتظر الهكسان لتتبخر قبل طحن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة بضع مل من الهكسان إلى الهاون ويخلط الناتج الطين مع مدقة حتى يتم المتجانس ذلك. التأكد من أن جميع الحطام الخلية انضمت إلى جدران موروطرقت القطران حرة وعلقت في السائل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الخليط كتلة خلايا الهكسان إلى أنبوب الطرد المركزي. ملاحظة: يجب أن يكون أنبوب الطرد المركزي إما الزجاج أو البوليمر مناسبة متوافقة مع الهكسان مثل التفلون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الخطوات من 2.4 و 2.5 حتى يتم نقل جميع الكتلة الحيوية إلى أنبوب الطرد المركزي (3-5X). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الطرد المركزي العينة عند 4 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة في 10،000 ز س. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة بعناية طاف في المعادن وزنه قبل تزن الطبق. تخزين في غطاء الدخان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء استخراج 2 الثانية الهكسان بإضافة 3 مل من الهكسان لبيليه وبقوة vortexing لمدة 1 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الخطوات من 2.7 و 2.8. إذا لزم الأمر، قم بتشغيل العينات لمدة 30 دقيقة في أجهزة الطرد المركزي أثناء استخراج الثاني لضمان كل الحطام الخلية يستقر بالكامل. تحديد كتلة من النفط المستخرج gravimetrically بعد الهكسان قد تبخرت تماما. </li></ol> 3. فلوروميتريك الكمي من الدهون المحايدة عن طريق النيل الأحمر (كما حرية تقريرتيد من قبل دي لا هوز سيجلر وآخرون 11) ملاحظة: هناك حاجة فقط 10 ميكرولتر لتعليق الطحالب في 5 ز / L لقراءة مضان. عموما، والعزلة من الكتلة الحيوية الطحالب الجافة من 1.5 مل من مرق الثقافة هي أكثر من كافية. أيضا، لشدة ضوء المصباح في معمل يمكن أن تتحلل بمرور الوقت. فمن المستحسن أن تشمل المعايير في كل تجربة للتأكد من أن الاختلافات في الصك لا تضيف الخطأ غير الضرورية إلى القياسات. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الحل النيل الأحمر بتركيز 10 ميكروغرام / مل الذائبة في الكحول كاشف الصف الايثانول. تخزين هذا الحل في الظلام في 4 درجات مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 30٪ (V / V) حل الإيثانول في الماء منزوع الأيونات وتخزينها في 4 درجات مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد جميع عينات الطحالب في تركيز الكتلة الحيوية نفسها (ينصح 5 ز / L) وبنفس الطريقة والمعايير المستخدمة في القياس. القيام بذلك عن طريق إما بتعليق عينات ما قبل المجففة في كمية مناسبةمن العازلة الفوسفات (0.6 غرام / لتر ثنائي القاعدة فوسفات البوتاسيوم، و 1.4 غرام / لتر البوتاسيوم أحادى فوسفات)، أو ضبط تركيز ثقافة الطحالب المتزايدة إلى 5 ز / L مع العازلة الفوسفات بعد قياس العكارة. ملاحظة: القياسات التي أجريت على الثقافات الحية الطحالب وغالبا ما يكون خطأ أكبر المرتبطة بها اعتمادا على الدقة من منحنى المعايرة التعكر. إعادة التعليق عينات المجففة قد تتطلب استخدام الخالط لتفريق بالكامل الكتلة الحيوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لكل عينة، مزيج 80 ميكرولتر من الحل الايثانول 30٪، و 10 ميكرولتر من الحل النيل الأحمر، و 10 ميكرولتر من تعليق الطحالب في بئر واحدة من 96 لوحة جيدا. من أجل حساب صحيح لتنوع قياس مضان، نفذ 5 مكررات من كل عينة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشغيل منحنى المعايرة نقطتين مع معايير معدة مسبقا وذلك لحساب ليوم ليوم الاختلافات في الصك والتحضير. إعداد معايير لقياس مضان باستخدام قالإجراء AME كما العينات. ملاحظة: عموما نقطتين كافية لإعادة تقويم الصك، يمكن تشغيل ثلاث نقاط للتحقق الخطي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء قياسات مضان في متعددة جيدا قارئ لوحة طيفي. عثر على الشروط التالية لتسفر عن نتائج أكثر اتساقا 11: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يهز في 1،200 دورة في الدقيقة، مدار 3 مم، لمدة 30 ثانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان عند 40 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يهز في 1،200 دورة في الدقيقة، مدار 3 مم، لمدة 30 ثانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سجل مضان، الإثارة في 530 نانومتر، والانبعاثات في 604 نانومتر. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحويل القياسات مضان لمحتوى الزيت باستخدام النتائج من المعايير الداخلية. </li></ol> 4. مضان المجهري تقنيات ملاحظة: تم تصميم بروتوكول تلطيخ الموضحة في قسم 3 للتحليل الكمي، ولكن يمكن أيضا أن تكون مفيدة لتوفير تمثيل مرئي من التقنيات المعتمدة وصمة عار للمؤسسات التعليمية والتوضيحية بوrposes. لإنتاج صور من عينة واحدة يتطلب مضان المجهر الضوئي مع انتقال وإضاءة إضافية epifluorescence المصادر التقليدية. الإثارة وانبعاث ضوء المرشحات في 530 نانومتر (الأخضر) و 604 نانومتر (الأحمر) مجموعة، على التوالي، وهناك حاجة لنهر النيل وصمة عار الأحمر فضلا عن كاميرا محمولة المجهر مع البرامج المرتبطة بها. تم الحصول على الصور المبينة في هذه الدراسة (الشكل 1) باستخدام مجهر حقل مشرق مجهزة الكاميرا وأحادية اللون لتحويل RGB حدة. ويرد الإجراء لإنتاج النيل الأحمر الصور مضان باستخدام هذه الأدوات أدناه: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد عينة الثقافة مع وصمة عار النيل الأحمر وفقا للمادة 3 من البروتوكول. ملاحظة: عينة في نطاق تركيز 5 جم / لتر تنتج الشرائح من كثافة الخلية كافية دون اكتظاظ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الانتهاء من الخطوة 3.6 من البروتوكول تلطيخ، وإعداد شريحة المجهر من العينة المجهزة وفقا لإجراءات المختبر القياسية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدءا من المجهر في وضع الإرسال، تحميل أعدت الشريحة في المجهر، وتحديد موقع الخلايا على التكبير المطلوب (تم الحصول عليها الصور المبينة في هذه المادة بهدف 100X). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة مركزة، تبديل المجهر من انتقال لوضع الإضاءة epifluorescence. مصدر الضوء ينبغي الآن تأتي مباشرة من العدسة الشيئية (هذا يمكن التأكد بصريا من خلال مراقبة الفضاء بين الشرائح وعدسة الهدف). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج مرشح الإثارة الخضراء في مصدر الضوء ومرشح الانبعاثات الحمراء في مسار الضوء المراقبة؛ يجب أن يكون مضان من الخلايا الملون الآن مرئية مباشرة من خلال العدسة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تبديل وضع المراقبة المجهر من العدسة إلى كاميرا محمولة واستخدام برامج عرض لالتقاط صورة للخلايا الاستشعاع. تبعا لحساسية الكاميرا، قد لا تظهر العينة في البداية في إطار المعاينة (أي الشاشة سوفتكون سوداء)؛ لتصحيح هذا، وضبط وقت التعرض وكسب الكاميرا إلى المستوى الذي كانت الخلايا مرئية. سوف تختلف إعدادات محددة مع الأدوات والمعدات، وأنواع الخلايا. </li></ol>

<ol>
	<li>Chisti, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodiesel+from+microalgae.">Biodiesel from microalgae.</a> Biotechnol. Adv. 25, 294-306 (2007).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=National+Algal+Biofuels+Technology+Roadmap.+Energy+Efficiency+&amp;+Renewable+Energy.">National Algal Biofuels Technology Roadmap. Energy Efficiency &amp; Renewable Energy.</a> U.S. Department of Energy, Office of Energy Efficiency and Renewable Energy, Biomass Program. , (2010).</li><li>de la Hoz Siegler, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+microalgal+productivity+using+an+adaptive,+non-linear+model+based+strategy.">Optimization of microalgal productivity using an adaptive, non-linear model based strategy.</a> Bioresour. Technol. 104, 537-546 (2012).</li><li>Bligh, E. G., Dyer, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Rapid+method+of+total+lipid+extraction+and+purification.">A Rapid method of total lipid extraction and purification.</a> Can. J. Biochem. Physiol. 37, 911-917 (1959).</li><li>Hara, A., Radin, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+extraction+of+tissues+with+a+low-toxicity+solvent.">Lipid extraction of tissues with a low-toxicity solvent.</a> Anal. Biochem. 90, 420-426 (1978).</li><li>Han, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+of+methods+used+for+microalgal+lipid-content+analysis.">Review of methods used for microalgal lipid-content analysis.</a> Energ. Procedia. 12, 944-950 (2011).</li><li>Pino, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical+and+high+throughput+microscopic+assessment+of+fat+mass+in+Caenorhabditis+elegans.">Biochemical and high throughput microscopic assessment of fat mass in Caenorhabditis elegans.</a> J. Vis. Exp. (73), (2013).</li><li>Sitepu, I. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+high-throughput+Nile+red+fluorescence+assay+for+estimating+intracellular+lipids+in+a+variety+of+yeast+species.">An improved high-throughput Nile red fluorescence assay for estimating intracellular lipids in a variety of yeast species.</a> J. Microbiol. Meth. 91, 321-328 (2012).</li><li>Izard, J., Limberger, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+screening+method+for+quantitation+of+bacterial+cell+lipids+from+whole+cells.">Rapid screening method for quantitation of bacterial cell lipids from whole cells.</a> J. Microbiol. Meth. 55, 411-418 (2003).</li><li>Chen, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high+throughput+Nile+red+method+for+quantitative+measurement+of+neutral+lipids+in+microalgae.">A high throughput Nile red method for quantitative measurement of neutral lipids in microalgae.</a> J. Microbiol. Meth. 77, 41-47 (2009).</li><li>de la Hoz Siegler, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+the+reliability+of+fluorescence-based+neutral+lipid+content+measurements+in+microalgal+cultures.">Improving the reliability of fluorescence-based neutral lipid content measurements in microalgal cultures.</a> Algal Res. 1, 176-184 (2012).</li><li>de la Jara, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+determination+of+lipid+content+in+a+marine+dinoflagellate,+Crypthecodinium+cohnii.">Flow cytometric determination of lipid content in a marine dinoflagellate, Crypthecodinium cohnii.</a> J. Appl. Phycol. 15, 433-438 (2003).</li><li>Elsey, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+measurement+of+microalgal+neutral+lipids.">Fluorescent measurement of microalgal neutral lipids.</a> J. Microbiol. Meth. 68, 639-642 (2007).</li><li>Feng, G. -. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+FT-IR+and+Nile+Red+methods+for+microalgal+lipid+characterization+and+biomass+composition+determination.">Evaluation of FT-IR and Nile Red methods for microalgal lipid characterization and biomass composition determination.</a> Bioresour. Technol. 128, 107-112 (2013).</li><li>Guzm&#225;n, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimate+by+means+of+flow+cytometry+of+variation+in+composition+of+fatty+acids+from+Tetraselmis+suecica+in+response+to+culture+conditions.">Estimate by means of flow cytometry of variation in composition of fatty acids from Tetraselmis suecica in response to culture conditions.</a> Aquacult. Int. 18, 189-199 (2010).</li><li>Huang, G. -. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+screening+method+for+lipid+production+in+alga+based+on+Nile+red+fluorescence.">Rapid screening method for lipid production in alga based on Nile red fluorescence.</a> Biomass Bioenerg. 33, 1386-1392 (2009).</li><li>Lee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+method+for+the+determination+of+lipid+from+the+green+alga+Botryococcus+braunii.">Rapid method for the determination of lipid from the green alga Botryococcus braunii.</a> Biotechnol. Tech. 12, 553-556 (1998).</li><li>Montero, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+high-lipid+content+strains+of+the+marine+microalga+Tetraselmis+suecica+for+biodiesel+production+by+flow+cytometry+and+single-cell+sorting.">Isolation of high-lipid content strains of the marine microalga Tetraselmis suecica for biodiesel production by flow cytometry and single-cell sorting.</a> J. Appl. Phycol. 23, 1053-1057 (2011).</li><li>Vigeolas, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+partial+characterization+of+mutants+with+elevated+lipid+content+in+Chlorella+sorokiniana+and+Scenedesmus+obliquus.">Isolation and partial characterization of mutants with elevated lipid content in Chlorella sorokiniana and Scenedesmus obliquus.</a> J. Biotechnol. 162, 3-12 (2012).</li><li>Bertozzini, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+the+standard+addition+method+for+the+absolute+quantification+of+neutral+lipids+in+microalgae+using+Nile+red.">Application of the standard addition method for the absolute quantification of neutral lipids in microalgae using Nile red.</a> J. Microbiol. Meth. 87, 17-23 (2011).</li><li>Kou, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+measurement+of+lipid+content+in+the+model+organism+Chlamydomonas+reinhardtii.">Fluorescent measurement of lipid content in the model organism Chlamydomonas reinhardtii.</a> J. Appl. Phycol. , 1-9 (2013).</li></ol>

يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

يجب أن تكون الطحالب المستخدمة في منحنى القياسية نفس الأنواع المزروعة تحت نفس الظروف التجريبية مثل تلك التي يجري قياسها. تغييرات كبيرة في تكوين وسائل الإعلام، وتقنية زراعة، وبروتوكول تلطيخ يمكن أن تؤثر على شدة القراءة مضان. وقد استخدم استخراج الهكسان (الموصوفة في ال?...

نظرا لقدرتها على تخزين الدهون تحت بعض الهيئات ظروف الإجهاد، تلقى الطحالب قدرا كبيرا من الاهتمام في السنوات الأخيرة كمصدر للوقود المتجددة المحتملة 1،2. يمكن أن الدهون محايدة تمثل أكثر من 60٪ من الوزن الجاف خلية في ظل ظروف النمو المناسبة 3. بعد صناعة لايوجد بروتوكول موحد بسيطة ونظيفة وسريعة، وموثوق بها ل quantitate المحتوى الدهني للخلايا الطحالب من أجل رصد أداء العمليات الحيوية بشكل صحيح وتحليل الثقافات، وشاشة لسلالات جديدة. تطوير أسلوب بليغ-داير الجاذبية منذ نحو 50 عاما لا تزال من بين الأساليب الأكثر شيوعا المستخدمة اليوم 4،5. في حين أن هذا الإجراء هو بسيط وموثوق بها، ويسهل حملها خارج، وأنها تستغرق وقتا طويلا، يتطلب حجم العينة كبير، ويجعل من استخدام المذيبات السامة. أنه ليس من العملي لتحليل العديد من العينات من شوط التخمير أو الكشف عن سلالات جديدة الغنية بالنفط. أساليب أخرى قد بالتابعين المتقدمة، ولكن عادة ما تتطلب المعدات المتطورة والتي لم يتم توحيدها 6. البديل الذي قد حصل قدرا كبيرا من الاهتمام هو وصمة عار النيل الأحمر. وقد النيل الأحمر، وهي الصبغة التي تتفلور تفضيلي في بيئات غير القطبية، وتستخدم لتحديد أو تقدير الهيئات الدهون في الكائنات المختلفة بما في ذلك الديدان الخيطية 7، 8 الخميرة والبكتيريا 9، والطحالب 10-19. كانت التقنيات الأولية التي تنطوي على النيل الأحمر الغالب النوعي أو شبه الكمي، والجمع بين وصمة عار مع واحد أو القياس الطيفي كفيت التدفق الخلوي. بالإضافة إلى ذلك، بعض الفئات من الطحالب مثل الطحالب الخضراء لديهم آبار الخلية سميكة التي هي غير منفذة في الغالب إلى الصبغة، والتي تقتصر على مجموعة من تقنية 10. وقد تم الإبلاغ عن التحسينات الأخيرة إلى أسلوب تلطيخ النيل الأحمر أن تجاوز أوجه القصور الأولي للبروتوكول 10،11. تلطيخ الخلايا في وجود كارهيئة الإنصاف والمصالحة المذيبات مثل DMSO 10 أو الإيثانول 10،11 linearizes العلاقة بين محتوى الزيت والامتصاصية، والسماح لقياسات كمية موثوق بها. المذيب يساعد permeabilize غشاء الخلية بحيث تكون جزيئات النيل الأحمر يمكن أن تمر من خلال. بالإضافة إلى ذلك، يشتمل على معمل مع قدرات القراءة لوحة صغيرة تمكن بروتوكولات إنتاجية عالية مناسبة للتحليل الكمي. في هذه المادة ونحن من التفصيل طريقة بسيطة لقياس نسبة الزيت من الخلايا الطحلبية التي كتبها تلطيخ الثقافات مع النيل الأحمر في حضور الإيثانول، مذيب خفيف. من أجل معظم بدقة تمثل الضوضاء الخلفية في القياسات، تم تطوير منحنى القياسية ربط كثافة مضان لمحتوى الزيت باستخدام خلايا الطحالب من تكوين النفط المعروفة. ويتم تكييف طريقة من البروتوكولات نشرت سابقا 10،11. باستخدام مطياف 96 جيدا، هو واحد قادرا على تحليل نفس الكمية من العينات في ثا ساعةر سيستغرق يوما لمراقبة من قبل وسائل الجاذبية. وعلاوة على ذلك، من خلال معايرة باستخدام عينات تمثيلية من أنواع الطحالب المطلوبة هذه الطريقة تنتج قياسات دقيقة نسبيا التي هي للتفسير مباشرة. توجد العديد من البروتوكولات تحدد أساليب تلطيخ مع الطحالب النيل الأحمر الأمثل لسلالات والتطبيقات المختلفة؛ بروتوكول المعروضة هنا وضعت أصلا من قبل دي لا هوز سيجلر وآخرون 11 لprotothecoides Auxenochlorella، شلوريلا الشائع، Scenedesmus dimorphus، وScenedesmus المائلة، على الرغم من انها مناسبة المرجح لعدد أكبر من الأنواع والطبقات. قد تم تصميمه مع تطبيق معين من رصد الأداء والعمليات الحيوية أنها تعمل بشكل جيد على قدم المساواة للعينات المجففة سابقا وعينات الرطب من ثقافة متنامية.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="817">
	<colgroup>
		<col />
		<col span="2" />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Dry Weight</td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">25 ml disposable pipettes</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">13-676-10K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Pipette Bulb</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">13-681-51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">40 ml Nalgene Teflon Centrifuge Tubes</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">05-562-16A</td>
			<td>Teflon needed for hexane</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Weigh Dishes (polypropylene)</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">2-202B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">1.5 ml micro-centrifuge tubes</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">05-408-129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:152px;">Sorvall</td>
			<td style="width:152px;">RC6plus</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Drying Oven (Fisher 625D)</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">13-254-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Storage vials</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">0337-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Bench-top microcentrifuge (Eppendorf 5415D)</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">05-40-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Gravimetric Quantification</td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Porcelain Mortar (Coorstek)</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">12-961A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Porcelain Pestle (Coorstek)</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">12-961-5A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">40 ml Centrifugation tubes (FEP)</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">05-562-16A</td>
			<td>Could also use glass tubes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Pasteur Glass Pipettes</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">13-678-20C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Aluminum weigh dishes</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">08-732-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Hexanes</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">H292-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:18px;width:347px;">Fluorometric quantification of oil content</td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:347px;">Fluorescence multi-well plate reader</td>
			<td style="width:152px;">Thermo Lab Systems</td>
			<td style="width:152px;">Fluoroskan Ascent</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Fluorescence reader software</td>
			<td style="width:152px;">Thermo Lab Systems</td>
			<td style="width:152px;">Ascent Software 2.6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">COSTAR 96 well plate with round bottom</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">06-443-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Nile Red&#160;</td>
			<td style="width:152px;">Sigma</td>
			<td style="width:152px;">N3013-100MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Ethanol (Alcohol reagent grade)</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">AC65109-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Imaging Fluorescent cells</td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Leica DMRXA2 (or equivalent) microscope</td>
			<td style="width:152px;">Leica</td>
			<td style="width:152px;">DMRXA2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Microscope slides</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Microscope cover slips</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">12-541B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Camera</td>
			<td style="width:152px;">Qimaging</td>
			<td style="width:152px;">Retiga Ex</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Imaging software</td>
			<td style="width:152px;">Qimaging</td>
			<td style="width:152px;">QCapture v.1.1.8</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a simple and rapid protocol for measuring neutral lipids in algal cells using fluorescence

وتعتبر الطحالب المرشحين ممتازة لمصادر الوقود المتجددة بسبب قدرات التخزين الدهون الطبيعية. مراقبة قوية من عمليات التخمير الطحالب والكشف عن سلالات الغنية بالنفط الجديد يتطلب بروتوكول سريعة وموثوق بها لتحديد محتوى الدهون داخل الخلايا. الممارسات الحالية تعتمد إلى حد كبير على أساليب الجاذبية لتحديد نسبة الزيت، وضعت التقنيات منذ عقود التي هي مضيعة للوقت وتتطلب كميات عينة كبيرة. في هذه الورقة، يتم تضمينها النيل الأحمر، صبغة الفلورسنت التي تم استخدامها لتحديد وجود هيئات الدهون في أنواع عديدة من الكائنات الحية، إلى بروتوكول بسيطة وسريعة، وموثوقة لقياس المحتوى الدهني محايدة من protothecoides Auxenochlorella، خضراء الطحالب. يستخدم الأسلوب الإيثانول، مذيب خفيف نسبيا، لpermeabilize غشاء الخلية قبل تلطيخ و96 جيدا لوحة صغيرة لزيادة القدرة عينة خلال قياسات كثافة مضان. فقد كان تصميمإد مع تطبيق معين من الأداء رصد العمليات الحيوية. عينات المجففة سابقا أو عينات حية من ثقافة متنامية يمكن أن تستخدم في الفحص.

وصفت الخلايا الطحلبية ممثل ملطخة النيل الأحمر صبغ في الشكل 1. الجزأين ألف وباء من الشكل 1 عرض الصور A. protothecoides نمت في النيتروجين الزائد، مما يؤدي إلى تراكم الدهون منخفضة جدا داخل الخلايا. في أجزاء C و D، وعينات من A. ...

Watch this Scientific Journal Video about A Simple and Rapid Protocol for Measuring Neutral Lipids in Algal Cells Using Fluorescence at JoVE.com

A Simple and Rapid Protocol for Measuring Neutral Lipids in Algal Cells Using Fluorescence

يوصف بروتوكول بسيط لتحديد محتوى الدهن محايدة من خلايا الطحالب باستخدام إجراء تلطيخ النيل الأحمر. هذه التقنية لتوفير الوقت يوفر بديلا للدهون البروتوكولات التقليدية الكمي القائم على الجاذبية. وقد تم تصميمه لتطبيق معين من الأداء رصد العمليات الحيوية.

بسيط وبروتوكول السريع لقياس الدهون في خلايا الطحالب المحايدة عن طريق الإسفار

Algae are considered excellent candidates for renewable fuel sources due to their natural lipid storage capabilities. Robust monitoring of algal ...

a-simple-rapid-protocol-for-measuring-neutral-lipids-algal-cells

Research

JoVE Journal

Chemistry

35.3K Views.  University of Alberta.  يوصف بروتوكول بسيط لتحديد محتوى الدهن محايدة من خلايا الطحالب باستخدام إجراء تلطيخ النيل الأحمر. هذه التقنية لتوفير الوقت يوفر بديلا للدهون البروتوكولات التقليدية الكمي القائم على الجاذبية. وقد تم تصميمه لتطبيق معين من الأداء رصد العملي?...

Video: A Simple and Rapid Protocol for Measuring Neutral Lipids in Algal Cells Using Fluorescence

Untargeted Metabolomics from Biological Sources Using Ultraperformance Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry (UPLC-HRMS)

Here we present a workflow to analyze the metabolic profiles for biological samples of interest including; cells, serum, or tissue. The sample is first separated into polar and non-polar fractions by a liquid-liquid phase extraction, and partially purified to facilitate downstream analysis. Both aqueous (polar metabolites) and organic (non-polar metabolites) phases of the initial extraction are processed to survey a broad range of metabolites. Metabolites are separated by different liquid chromatography methods based upon their partition properties. In this method, we present microflow ultra-performance (UP)LC methods, but the protocol is scalable to higher flows and lower pressures. Introduction into the mass spectrometer can be through either general or compound optimized source conditions. Detection of a broad range of ions is carried out in full scan mode in both positive and negative mode over a broad m/z range using high resolution on a recently calibrated instrument. Label-free differential analysis is carried out on bioinformatics platforms. Applications of this approach include metabolic pathway screening, biomarker discovery, and drug development.

Untargeted Metabolomics from Biological Sources Using Ultraperformance Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry UPLC-HRMS

Untargeted metabolomics provides a hypothesis generating snapshot of a metabolic profile. This protocol will demonstrate the extraction and analysis of metabolites from cells, serum, or tissue. A range of metabolites are surveyed using liquid-liquid phase extraction, microflow ultraperformance liquid chromatography/high-resolution mass spectrometry (UPLC-HRMS) coupled to differential analysis software.

الايض غير مستهدفة من مصادر بيولوجية عن طريق Ultraperformance اللوني السائل عالية الدقة الطيف الكتلي (UPLC-HRMS)

Here we present a workflow to analyze the metabolic profiles for biological samples of interest including; cells, serum, or tissue. The sample is first ...

Preparing Adherent Cells for X-ray Fluorescence Imaging by Chemical Fixation

X-ray fluorescence imaging allows us to non-destructively measure the spatial distribution and concentration of multiple elements simultaneously over large or small sample areas. It has been applied in many areas of science, including materials science, geoscience, studying works of cultural heritage, and in chemical biology. In the case of chemical biology, for example, visualizing the metal distributions within cells allows us to study both naturally-occurring metal ions in the cells, as well as exogenously-introduced metals such as drugs and nanoparticles. Due to the fully hydrated nature of nearly all biological samples, cryo-fixation followed by imaging under cryogenic temperature represents the ideal imaging modality currently available. However, under the circumstances that such a combination is not easily accessible or practical, aldehyde based chemical fixation remains useful and sometimes inevitable. This article describes in as much detail as possible in the preparation of adherent mammalian cells by chemical fixation for X-ray fluorescent imaging.

Here, we present a protocol on how to determine the quantity and distribution of metals in a sample using synchrotron X-ray fluorescence. We focus on adherent cells, and describe the chemical fixation method to prepare this sample. We then describe how to mount and image the sample using synchrotron X-rays.

إعداد خلايا منتسب للتصوير الإسفار الأشعة السينية من قبل التثبيت الكيميائية

X-ray fluorescence imaging allows us to non-destructively measure the spatial distribution and concentration of multiple elements simultaneously over ...

Rapid High-throughput Species Identification of Botanical Material Using Direct Analysis in Real Time High Resolution Mass Spectrometry

We demonstrate that direct analysis in real time-high resolution mass spectrometry can be used to produce mass spectral profiles of botanical material, and that these chemical fingerprints can be used for plant species identification. The mass spectral data can be acquired rapidly and in a high throughput manner without the need for sample extraction, derivatization or pH adjustment steps. The use of this technique bypasses challenges presented by more conventional techniques including lengthy chromatography analysis times and resource intensive methods. The high throughput capabilities of the direct analysis in real time-high resolution mass spectrometry protocol, coupled with multivariate statistical analysis processing of the data, provide not only class characterization of plants, but also yield species and varietal information. Here, the technique is demonstrated with two psychoactive plant products, Mitragyna speciosa (Kratom) and Datura (Jimsonweed), which were subjected to direct analysis in real time-high resolution mass spectrometry followed by statistical analysis processing of the mass spectral data. The application of these tools in tandem enabled the plant materials to be rapidly identified at the level of variety and species.

A method for species identification of botanical material by direct analysis in real time-high resolution mass spectrometry and multivariate statistical analysis is presented.

سريع سرعة عالية الإنتاجية الأنواع النباتية تحديد المواد عن طريق تحليل المباشر في الوقت الحقيقي عالية الدقة قياس الطيف الكتلي

We demonstrate that direct analysis in real time-high resolution mass spectrometry can be used to produce mass spectral profiles of botanical material, ...

A Simple and Efficient Protocol for the Catalytic Insertion Polymerization of Functional Norbornenes

Norbornene can be polymerized by a variety of mechanisms, including insertion polymerization whereby the double bond is polymerized and the bicyclic nature of the monomer is conserved. The resulting polymer, polynorbornene, has a very high glass transition temperature, Tg, and interesting optical and electrical properties. However, the polymerization of functional norbornenes by this mechanism is complicated by the fact that the endo substituted norbornene monomer has, in general, a very low reactivity. Furthermore, the separation of the endo substituted monomer from the exo monomer is a tedious task. Here, we present a simple protocol for the polymerization of substituted norbornenes (endo:exo ca. 80:20) bearing either a carboxylic acid or a pendant double bond. The process does not require that both isomers be separated, and proceeds with low catalyst loadings (0.01 to 0.02 mol%). The polymer bearing pendant double bonds can be further transformed in high yield, to afford a polymer bearing pendant epoxy groups. These simple procedures can be applied to prepare polynorbornenes with a variety of functional groups, such as esters, alcohols, imides, double bonds, carboxylic acids, bromo-alkyls, aldehydes and anhydrides.

We describe the catalytic insertion polymerization of 5-norbornene-2-carboxylic acid and 5-vinyl-2-norbornene to form functional polymers with a very high glass transition temperature.

بروتوكول بسيطة وفعالة لالتحفيزي الإدراج بلمرة Norbornenes وظيفية

Norbornene can be polymerized by a variety of mechanisms, including insertion polymerization whereby the double bond is polymerized and the bicyclic ...

A Protocol for Safe Lithiation Reactions Using Organolithium Reagents

Organolithium reagents are powerful tools in the synthetic chemist&#39;s toolbox. However, the extreme pyrophoric nature of the most reactive reagents warrants proper technique, thorough training, and proper personal protective equipment. To aid in the training of researchers using organolithium reagents, a thorough, step-by-step protocol for the safe and effective use of tert-butyllithium on an inert gas line or within a glovebox is described. As a model reaction, preparation of lithium tert-butyl amide by the reaction of tert-butyl amine with one equivalent of tert-butyl lithium is presented.

The safe and proper use of organolithium reagents is described.

بروتوكول لردود الفعل الآمن Lithiation عن طريق Organolithium الكواشف

Organolithium reagents are powerful tools in the synthetic chemist&#39;s toolbox. However, the extreme pyrophoric nature of the most reactive reagents ...

Simultaneous Measurement of HDAC1 and HDAC6 Activity in HeLa Cells Using UHPLC-MS

The search for new histone deacetylase (HDAC) inhibitors is of increasing interest in drug discovery. Isoform selectivity has been in the spotlight since the approval of romidepsin, a class I HDAC inhibitor for cancer therapy, and the clinical investigation of HDAC6-specific inhibitors for multiple myeloma. The present method is used to determine the inhibitory activity of test compounds on HDAC1 and HDAC6 in cells. The isoform activity is measured using the ultra-high-performance liquid chromatography &#8211; mass spectrometry (UHPLC-MS) analysis of specific substrates incubated with treated and untreated HeLa cells. The method has the advantage of reflecting the endogenous HDAC activity within the cell environment, in contrast to cell-free biochemical assays conducted on isolated isoforms. Moreover, because it is based on the quantification of synthetic substrates, the method does not require the antibody recognition of endogenous acetylated proteins. It is easily adaptable to several cell lines and an automated process. The method has already proved useful in finding HDAC6-selective compounds in neuroblasts. Representative results are shown here with the standard HDAC inhibitors trichostatin A (non-specific), MS275 (HDAC1-specific), and tubastatin A (HDAC6-specific) using HeLa cells.

The present method serves to identify isoform-specific inhibitors of histone deacetylases (HDAC) in HeLa cells by the UHPLC-MS analysis of multiple substrates. This is an antibody-free method developed to reflect HDAC1 and HDAC6 activity in the living cell environment, in contrast to single-isoform cell-free assays.

قياس واحد من HDAC1 والنشاط HDAC6 في الحلة الخلايا باستخدام أوهبلك--مرض التصلب العصبي المتعدد

The search for new histone deacetylase (HDAC) inhibitors is of increasing interest in drug discovery. Isoform selectivity has been in the spotlight since ...

Quantifying X-Ray Fluorescence Data Using MAPS

The quantification of X-ray fluorescence (XRF) microscopy maps by fitting the raw spectra to a known standard is crucial for evaluating chemical composition and elemental distribution within a material. Synchrotron-based XRF has become an integral characterization technique for a variety of research topics, particularly due to its non-destructive nature and its high sensitivity. Today, synchrotrons can acquire fluorescence data at spatial resolutions well below a micron, allowing for the evaluation of compositional variations at the nanoscale. Through proper quantification, it is then possible to obtain an in-depth, high-resolution understanding of elemental segregation, stoichiometric relationships, and clustering behavior.
This article explains how to use the MAPS fitting software developed by Argonne National Laboratory for the quantification of full 2-D XRF maps. We use as an example results from a Cu(In,Ga)Se2 solar cell, taken at the Advanced Photon Source beamline 2-ID-D at Argonne National Laboratory. We show the standard procedure for fitting raw data, demonstrate how to evaluate the quality of a fit and present the typical outputs generated by the program. In addition, we discuss in this manuscript certain software limitations and offer suggestions for how to further correct the data to be numerically accurate and representative of spatially resolved, elemental concentrations.

Here, we demonstrate the use of the X-ray fluorescence fitting software, MAPS, created by Argonne National Laboratory for the quantification of fluorescence microscopy data. The quantified data that results is useful for understanding the elemental distribution and stoichiometric ratios within a sample of interest.

التحديد الكمي للبيانات Fluorescence الأشعة السينية باستخدام خرائط

The quantification of X-ray fluorescence (XRF) microscopy maps by fitting the raw spectra to a known standard is crucial for evaluating chemical ...

Fabrication and Testing of Catalytic Aerogels Prepared Via Rapid Supercritical Extraction

Protocols for preparing and testing catalytic aerogels by incorporating metal species into silica and alumina aerogel platforms are presented. Three preparation methods are described: (a) the incorporation of metal salts into silica or alumina wet gels using an impregnation method; (b) the incorporation of metal salts into alumina wet gels using a co-precursor method; and (c) the addition of metal nanoparticles directly into a silica aerogel precursor mixture. The methods utilize a hydraulic hot press, which allows for rapid (&#60;6 h) supercritical extraction and results in aerogels of low density (0.10 g/mL) and high surface area (200-800 m2/g). While the work presented here focuses on the use of copper salts and copper nanoparticles, the approach can be implemented using other metal salts and nanoparticles. A protocol for testing the three-way catalytic ability of these aerogels for automotive pollution mitigation is also presented. This technique uses custom-built equipment, the Union Catalytic Testbed (UCAT), in which a simulated exhaust mixture is passed over an aerogel sample at a controlled temperature and flow rate. The system is capable of measuring the ability of the catalytic aerogels, under both oxidizing and reducing conditions, to convert CO, NO and unburned hydrocarbons (HCs) to less harmful species (CO2, H2O and N2). Example catalytic results are presented for the aerogels described.

Here we present protocols for preparing and testing catalytic aerogels by incorporating metal species into silica and alumina aerogel platforms. Methods for preparing materials using copper salts and copper-containing nanoparticles are featured. Catalytic testing protocols demonstrate the effectiveness of these aerogels for three-way catalysis applications.

تصنيع واختبار أيروجيلس الحفاز أعدت عن طريق استخراج فوق الحرجة السريع

Protocols for preparing and testing catalytic aerogels by incorporating metal species into silica and alumina aerogel platforms are presented. Three ...

Rapid Nanoprobe Signal Enhancement by In Situ Gold Nanoparticle Synthesis

The use of nanoprobes such as gold, silver, silica or iron-oxide nanoparticles as detection reagents in bioanalytical assays can enable high sensitivity and convenient colorimetric readout. However, high densities of nanoparticles are typically needed for detection. The available synthesis-based enhancement protocols are either limited to gold and silver nanoparticles or rely on precise enzymatic control and optimization. Here, we present a protocol to enhance the colorimetric readout of gold, silver, silica, and iron oxide nanoprobes. It was observed that the colorimetric signal can be improved by up to a 10000-fold factor. The basis for such signal enhancement strategies is the chemical reduction of Au3+ to Au0. There are several chemical reactions that enable the reduction of Au3+ to Au0. In the protocol, Good&#39;s buffers and H2O2 are used and it is possible to favor the deposition of Au0 onto the surface of existing nanoprobes, in detriment of the formation of new gold nanoparticles. The protocol consists of the incubation of the microarray with a solution consisting of chloroauric acid and H2O2 in 2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid pH 6 buffer following the nanoprobe-based detection assay. The enhancement solution can be applied to paper and glass-based sensors. Moreover, it can be used in commercially available immunoassays as demonstrated by the application of the method to a commercial allergen microarray. The signal development requires less than 5 min of incubation with the enhancement solution and the readout can be assessed by naked eye or low-end image acquisition devices such as a table-top scanner or a digital camera.

Rapid Nanoprobe Signal Enhancement by In Situ Gold Nanoparticle Synthesis

In this work, a protocol for signal enhancement of nanoprobe-based biosensing is presented. The protocol is based on the reduction of chloroauric acid onto the surface of existing nanoprobes that consist of gold, silver, silica or iron-oxide nanoparticles.

تعزيز السريع نانوبروبي إشارة بتوليف نانوحبيبات الذهب في الموقع

The use of nanoprobes such as gold, silver, silica or iron-oxide nanoparticles as detection reagents in bioanalytical assays can enable high sensitivity ...

Separation of Aldehydes and Reactive Ketones from Mixtures Using a Bisulfite Extraction Protocol

The purification of organic compounds is an essential component of routine synthetic operations. The ability to remove contaminants into an aqueous layer by generating a charged structure provides an opportunity to use extraction as a simple purification technique. By combining the use of a miscible organic solvent with saturated sodium bisulfite, aldehydes and reactive ketones can be successfully transformed into charged bisulfite adducts that can then be separated from other organic components of a mixture by the introduction of an immiscible organic layer. Here, we describe a simple protocol for the removal of aldehydes, including sterically-hindered neopentyl aldehydes and some ketones, from chemical mixtures. Ketones can be separated if they are sterically unhindered cyclic or methyl ketones. For aliphatic aldehydes and ketones, dimethylformamide is used as the miscible solvent to improve removal rates. The bisulfite addition reaction can be reversed by basification of the aqueous layer, allowing for the re-isolation of the reactive carbonyl component of a mixture.

Here, we present a protocol to remove aldehydes and reactive ketones from mixtures by a liquid-liquid extraction protocol directly with saturated sodium bisulfite in a miscible solvent. This combined protocol is rapid and facile to perform. The aldehyde or ketone can be re-isolated by the basification of the aqueous layer.

الفصل بين الألدهيدات والكيتونات رد الفعل من الخلائط استخدام بروتوكول استخراج بيكبريتيت

The purification of organic compounds is an essential component of routine synthetic operations. The ability to remove contaminants into an aqueous layer ...