نشكر مانفريد هيكمان لإجراء مناقشات مفيدة خلال إقامة هذه الطريقة. علاوة على ذلك، نشكر كلوديا سومر للحصول على المساعدة الفنية وفرانك شوبير للدعم إنتاج الفيديو. وأيد هذا العمل من قبل الوزارة الاتحادية للتعليم والبحوث (BMBF)، وألمانيا، FKZ: 01EO1002 والمركز المتعدد التخصصات للبحوث السريرية (IZKF) من مستشفى جامعة يينا.

تمت الموافقة على جميع الإجراءات التجريبية المذكورة في البروتوكول التالي من قبل سلطات الدولة تورينغن (Thüringer Landesamt FÜR Verbraucherschutz، Reg.-Nr. 02-044/12). 1. الاستعدادات للتجربة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تصنيع أقطاب الشفط <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سحب micropipette باستخدام معيار الزجاج الشعرية البورسليكات مع ساحبة micropipette، مثل القطب التصحيح القياسية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الفرامل الكهربائي لإبعاد قطر من 0.5-1 ملم (أكبر قليلا من قطر الجذور الظهرية) باستخدام ملف الماس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سوف البولندية الحرارة طرف لذلك لن يضر الجذرية الظهرية عند امتص فيه. معمل الشعلة القياسية تكون مناسبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جبل خيوط الزجاج على حامل قطب كهربائي متصلة حقنة من خلالها الضغط السلبي يمكن تطبيقها. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الحلول <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفئران حقن لل: مزيج 0.75 مل الكيتامين 10٪، 0.24 مل زيلازين 2٪الثانية 5 مل 0.9٪ المالحة. سيتم حقن 10 ميكرولتر / ز وزن الجسم (BW) من الحل الغشاء البريتونى (الملكية الفكرية). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السائل النخاعي الاصطناعي (ACSF): تمييع في الماء المقطر مزدوجة الأملاح التالية (مم): كلوريد الصوديوم 134؛ بوكل 3؛ KH 2 PO 4 1.25؛ MgSO 4 • H 2 O 2؛ NaHCO 3 25؛ و CaCl 2 2؛ D- الجلوكوز 10. إضافة H 2 O 2 إلى تركيز النهائي من 0.003٪. دائما استخدام الطازجة الحل. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الإعداد تسجيل (الشكل 2) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توصيل مكبر للصوت إلى واجهة PC لرقمنة البيانات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام برنامج الكمبيوتر المستندة إلى توقيت أو التماثلية لتحريك مشجعا نبض مربع، والحصول على البيانات على القرص الصلب لجهاز الكمبيوتر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام silverwires chlorided متصلة أصحاب الزجاج الكهربائي القياسية كما لتحفيز والتسجيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجميع ثلاثة المتلاعبين لتحفيز وتسجيل والإلكترود المرجعي على التوالي حول إستيرالإطار otactic بالنسبة للفئران، حتى يتسنى لجميع أقطاب الحصول على الحبل الشوكي على استعداد في وقت لاحق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ربط الأنابيب والحقن لأصحاب القطب أن يكون التفاح لتطبيق الضغط السلبي. </li></ol></li></ol> 2. تعليقات عامة للتجارب على الحيوانات وإعداد الحيوان للتسجيل الداخلي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أداء جميع التجارب باستخدام الفئران وفقا للمبادئ التوجيهية للجنة رعاية الحيوان المؤسسية واستخدام كل منها. أداء جميع الجراحة والتسجيلات تحت التخدير العميق ضمان أن معاناة الحيوانات إلى الحد الأدنى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الحيوان عن طريق الحقن الملكية الفكرية من الكيتامين / زيلازين (125mg و8mg في ز BW الكيتامين وزيلازين، على التوالي، و 10 ميكرولتر / ز BW من الحل استعداد كما هو موضح أعلاه). إذا لزم الأمر خلال تسجيلات طويلة الأجل، والحقن إضافية يمكن جعل الملكية الفكرية أو ايم ملاحظة: الحقن المتكرر من ايم 0.05-0.1 مل من محلول الكيتامين / زيلازين في أعلى الفخذين أثبتت أنها مناسبةللحفاظ على الحيوانات في التخدير العميق لمدة تصل إلى 3 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام مرهم الطبيب البيطري على العينين لمنع جفاف بينما تحت التخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إصلاح رأس الحيوان في إطار المجسم واستخدام وسادة التدفئة مع التحقيق المستقيم وحلقة العاكسة للسيطرة على درجة حرارة جسم الحيوان أثناء التجربة. التثبيت من الحبل الشوكي في إطار التجسيمي ليست ضرورية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل البدء في إعداد، والتحقق من عمق الخدر التي كتبها العاكسة eyeblink وارتعاش بين أصابع القدم من الفئران. ينبغي إلغاء ردود الفعل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح الجلد على طول خط الوسط فوق الحبل الشوكي من المستوى الصدري العلوي لخفض المناطق القطنية للحصول على حقل تشغيلية واضحة باستخدام مشرط. لا تستخدم مقص لجعل شقوق الجلد. تفقد بعناية الجلد من الأنسجة الكامنة. خلال الخطوات اللاحقة حفاظ على الجرح مبلل بنسبة 0.9٪ المالحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع الأوتار والأنسجة الضامة على جانبي الفقرات القطنية إلى مستويات من الصدر باستخدام مشرط ومقص. </لى&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة العمليات الشائكة وبقية الأنسجة الضامة حول فقرات باستخدام القراص الصغيرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الكراك بعناية فقرات مع القراص بدءا من مستويات قطني (L4/L5) تحت مجهر تشريح. يشق غيض من القراص في الفضاء بين الفقرات والحبل الشوكي ورفع قطع العظام عن بعضها البعض. لا تضر الجافية وتجنب الضغط على الحبل الشوكي. كلاهما الحرجة للنجاح. الحفاظ على الحبل الشوكي مبلل أثناء الإجراء بأكمله. المضي قدما إلى مستويات منتصف الصدر. </li></ol> 3. فصل من الجذور الظهرية والحزب الثورى الديمقراطى تسجيل (الشكل 2) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح الأم الجافية بعناية باستخدام إبرة رقيقة (30 G) مع طرف عازمة. استخدام ACSF لتبليل من الآن فصاعدا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فصل الجذور الظهرية قدر الإمكان باستخدام مقياس وقطع اثنين من جذور المجاورة كما القاصي ممكن. قوية سحب على الجذور خلال فصل يؤثر على نجاح التجربة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خفض الشفط الكهربائي وصولا الى تأليفRSAL الجذور. إضافة قدر ACSF إلى الحبل الشوكي ممكن لأن السائل يساعد على امتصاص الجذور في ظهري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمتص نهاية قطع من الجذر الظهرية واحدة في واحدة الماصات الزجاج عن طريق تطبيق الضغط السلبي من خلال حقنة. إذا لزم الأمر، قم بتحريك الجذرية الظهرية أمام افتتاح الكهربائي باستخدام إبرة رفيعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كان الجذر الظهرية تقع الجافة داخل القطب الشفط، وإضافة بعض ACSF إلى طرفها في حين مص بعناية حتى يتم تعبئة ماصة بما فيه الكفاية مع ACSF. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد امتص الجذرية الظهرية في، ورفع طرف القطب من الحبل الشوكي. الحرص على أن لا &quot;الجسر المياه&quot; بين طرف ماصة والحبل الشوكي القصير دائرة القطب تسجيل / التحفيز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الخطوات من 3،3-3،6 لجذر المجاورة المماثل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الإلكترود المرجعي في أقرب وقت ممكن الى الجذور الظهرية والحفاظ عليه من خلال تطبيق ACSF مبلل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> من خلال إنشاء الإعداد التسجيل، يتم اختيار جذر واحد بالفعل لتحفيز وأخرى للتسجيل. زيادة الجهد تدريجية أثناء التسجيل من الجذر الظهرية الثانية يتم في وضع المشبك الحالي. يمكن للمرء أن لاحظت وجود انحراف النزولي قصيرة والتي تبعتها بطيئة، طويلة الأمد انحراف التصاعدي الذي يمثل الحزب الثورى الديمقراطى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط الجهد حافزا لمستويات فوق الأعظمي وتسجيل العديد من الاحتلالات (لا يقل عن 20 - 30 الاحتلالات / الجذر الظهري عند 0.1 هرتز، وتصفية بين 0.3 هرتز، 3 كيلو هرتز). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسجيل القطارات قصيرة من ثلاثة المحفزات (100 هرتز) للحصول على معلومات حول الجمع تعتمد على الوقت من الحزب الثورى الديمقراطى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التبديل تسجيل وموقع التحفيز للتسجيلات المقابل إضافية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وليس المقصود الحيوانات من أجل البقاء الإجراء. تضحية الحيوانات بعد آخر تسجيل بقطع الرأس في حين لا يزال تحت التخدير العميق (الكيتامين / زيلازين، انظر أعلاه، خطوة 2.2). </li></ol> 4. تحليل البيانات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل البيانات إلى برنامج التحليل (مثل سيغما الأرض، ايغور برو، أو MATLAB). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب متوسط ​​آثار الابام 20-30 الاحتلالات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اتخاذ السعة القصوى للانحراف الجهد (من خط الأساس؛ DRP ذروة السعة) لمزيد من التحليل (الشكل 3). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب نسبة ذروة السعة DRP بعد ثلاثة البقول ونبض واحد للحصول على قدر من الوقت تعتمد الجمع من إمكانات لاحقة. </li></ol>

<ol>
	<li>Eccles, J. C., Eccles, R. M., Magni, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+inhibitory+action+attributable+to+presynaptic+depolarization+produced+by+muscle+afferent+volleys.">Central inhibitory action attributable to presynaptic depolarization produced by muscle afferent volleys.</a> J. Physiol. 159, 147-166 (1961).</li><li>Levy, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+gaba+in+primary+afferent+depolarization.">The role of gaba in primary afferent depolarization.</a> Prog. Neurobiol. 9, 211-267 (1977).</li><li>Eccles, J. C., Magni, F., Willis, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Depolarization+of+central+terminals+of+Group+I+afferent+fibres+from+muscle.">Depolarization of central terminals of Group I afferent fibres from muscle.</a> J. Physiol. 160, 62-93 (1962).</li><li>Eccles, J. C., Schmidt, R., Willis, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+Studies+on+Presynaptic+Inhibition.">Pharmacological Studies on Presynaptic Inhibition.</a> J. Physiol. 168, 500-530 (1963).</li><li>Maxwell, D. J., Bannatyne, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructure+of+muscle+spindle+afferent+terminations+in+lamina+VI+of+the+cat+spinal+cord.">Ultrastructure of muscle spindle afferent terminations in lamina VI of the cat spinal cord.</a> Brain Res. 288, 297-301 (1983).</li><li>Barber, R. P., Vaughn, J. E., Saito, K., McLaughlin, B. J., Roberts, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABAergic+terminals+are+presynaptic+to+primary+afferent+terminals+in+the+substantia+gelatinosa+of+the+rat+spinal+cord.">GABAergic terminals are presynaptic to primary afferent terminals in the substantia gelatinosa of the rat spinal cord.</a> Brain Res. 141, 35-55 (1978).</li><li>Wall, P. D., Lidierth, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Five+sources+of+a+dorsal+root+potential:+their+interactions+and+origins+in+the+superficial+dorsal+horn.">Five sources of a dorsal root potential: their interactions and origins in the superficial dorsal horn.</a> J. Neurophysiol. 78, 860-871 (1997).</li><li>Rudomin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+search+of+lost+presynaptic+inhibition.">In search of lost presynaptic inhibition.</a> Exp. Brain Res. 196, 139-151 (2009).</li><li>Rudomin, P., Schmidt, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presynaptic+inhibition+in+the+vertebrate+spinal+cord+revisited.">Presynaptic inhibition in the vertebrate spinal cord revisited.</a> Exp. Brain Res. 129, 1-37 (1999).</li><li>Kullmann, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presynaptic,+extrasynaptic+and+axonal+GABAA+receptors+in+the+CNS:+where+and+why?.">Presynaptic, extrasynaptic and axonal GABAA receptors in the CNS: where and why?.</a> Prog. Biophys. Mol. Biol. 87, 33-46 (2005).</li><li>Hochman, S., Shreckengost, J., Kimura, H., Quevedo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presynaptic+inhibition+of+primary+afferents+by+depolarization:+observations+supporting+nontraditional+mechanisms.">Presynaptic inhibition of primary afferents by depolarization: observations supporting nontraditional mechanisms.</a> Ann. N.Y. Acad. Sci. 1198, 140-152 (2010).</li><li>Thompson, S. W., Wall, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+GABA+and+5-HT+receptor+antagonists+on+rat+dorsal+root+potentials.">The effect of GABA and 5-HT receptor antagonists on rat dorsal root potentials.</a> Neurosci. Lett. 217, 153-156 (1996).</li><li>Enriquez-Denton, M., Manjarrez, E., Rudomin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistence+of+PAD+and+presynaptic+inhibition+of+muscle+spindle+afferents+after+peripheral+nerve+crush.">Persistence of PAD and presynaptic inhibition of muscle spindle afferents after peripheral nerve crush.</a> Brain Res. 1027, 179-187 (2004).</li><li>Wall, P. D., Devor, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+peripheral+nerve+injury+on+dorsal+root+potentials+and+on+transmission+of+afferent+signals+into+the+spinal+cord.">The effect of peripheral nerve injury on dorsal root potentials and on transmission of afferent signals into the spinal cord.</a> Brain Res. 209, 95-111 (1981).</li><li>Witschi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presynaptic+&#945;2-GABAA+Receptors+in+Primary+Afferent+Depolarization+and+Spinal+Pain+Control.">Presynaptic &#945;2-GABAA Receptors in Primary Afferent Depolarization and Spinal Pain Control.</a> J. Neurosci. 31, 8134-8142 (2011).</li><li>Calancie, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+that+alterations+in+presynaptic+inhibition+contribute+to+segmental+hypo-+and+hyperexcitability+after+spinal+cord+injury+in.">Evidence that alterations in presynaptic inhibition contribute to segmental hypo- and hyperexcitability after spinal cord injury in.</a> 89, 177-186 (1993).</li><li>Geis, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stiff+person+syndrome-associated+autoantibodies+to+amphiphysin+mediate+reduced+GABAergic+inhibition.">Stiff person syndrome-associated autoantibodies to amphiphysin mediate reduced GABAergic inhibition.</a> Brain. 133, 3166-3180 (2010).</li><li>Geis, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+IgG+directed+against+amphiphysin+induces+anxiety+behavior+in+a+rat+model+after+intrathecal+passive+transfer.">Human IgG directed against amphiphysin induces anxiety behavior in a rat model after intrathecal passive transfer.</a> J. Neural Transm. 119 (8), 981-985 (2012).</li><li>Barron, D. H., Matthews, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+interpretation+of+potential+changes+in+the+spinal+cord.">The interpretation of potential changes in the spinal cord.</a> J. Physiol. 92, 276-321 (1938).</li><li>Schmidt, R. F., Trautwein, W., Zimmermann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dorsal+root+potentials+evoked+by+natural+stimulation+of+cutaneous+afferents.">Dorsal root potentials evoked by natural stimulation of cutaneous afferents.</a> Nature. 212, 522-523 (1966).</li><li>Eccles, J. C., Schmidt, R. F., Willis, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presynaptic+inhibition+of+the+spinal+monosynaptic+reflex+pathway.">Presynaptic inhibition of the spinal monosynaptic reflex pathway.</a> J. Physiol. 161, 282-297 (1962).</li><li>Manjarrez, E., Rojas-Piloni, J. G., Jimenez, I., Rudomin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+synaptic+transmission+from+segmental+afferents+by+spontaneous+activity+of+dorsal+horn+spinal+neurones+in+the+cat.">Modulation of synaptic transmission from segmental afferents by spontaneous activity of dorsal horn spinal neurones in the cat.</a> J. Physiol. 529 Pt 2, 445-460 (2000).</li><li>Geis, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Stiff-Person+Syndrome+IgG+Induces+Anxious+Behavior+in+Rats.">Human Stiff-Person Syndrome IgG Induces Anxious Behavior in Rats.</a> PLoS One. 6, e16775 (2011).</li><li>Martinez-Gomez, J., Lopez-Garcia, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+and+pharmacological+characterisation+of+ascending+anterolateral+axons+in+the+in+vitro+mouse+spinal+cord.">Electrophysiological and pharmacological characterisation of ascending anterolateral axons in the in vitro mouse spinal cord.</a> J. Neurosci. Methods. 146, 84-90 (2005).</li></ol>

الكتاب تعلن أي المصالح المالية المتنافسة.

تسجيلات من خارج وداخل الخلايا الكهربية من نشاط الخلايا العصبية وإمكانات متشابك في الجسم الحي هي دولة من أحدث التقنيات في التحقيق في وظائف الخلايا العصبية الجهاز العصبي المركزي والفيزيولوجيا المرضية. التكامل الشوكي هو أمر حاسم لوظيفة الحركية، مثل حركة الأ...

تثبيط قبل المشبكي هي واحدة من آليات المثبطة أقوى في الحبل الشوكي. وهو يحول دون إمكانات بعد المشبكي مثير (EPSPS) في العصبونات الحركية متحمس monosynaptically دون تغيير محتمل الغشاء بعد المشبكي واستثارة من العصبونات الحركية 1-3. الاستقطاب وارد الأولية (PAD) التي تسببها الذخائر المتروكة نقاط الاشتباك العصبي GABAergic المحوار قبل المشبكي على ألياف الحسية هي الآلية الأساسية 4-7 (انظر أيضا Figure1a). هذه نقاط الاشتباك العصبي GABA تحتوي على A-B-GABA ومستقبلات (GABA A R وGABA B R). النشاط GABA A R يؤدي إلى زيادة في كلوريد تصرف الذي يتسبب PAD بسبب توزيع أيون المحلية. هذا الاستقطاب كتل انتشار إمكانات العمل في محطات محوار ويقلل من قوتها مما أدى إلى انخفاض الكالسيوم 2 +-تدفق والحد من إطلاق الإرسال. تنشيط مستقبلات GABA B لا لار المساهمة في PAD ولكن يؤدي إلى الحد من كا 2 +-تدفق وبالتالي تعزيز تثبيط قبل المشبكي. في حين يبدو أن تفعيل GABA A R أن تشارك في تثبيط المدى القصير، وتشارك GABA B R في التشكيل طويلة الأجل 8-10. بالإضافة إلى GABA، التي تمثل الجزء الأكبر من PAD وتثبيط قبل المشبكي، قد نظم الإرسال الأخرى أيضا تعدل والمساهمة في هذا 11،12 آلية. التغيرات المرضية في تثبيط قبل المشبكي يبدو أن تكون حاسمة في العديد من الحالات المرضية مثل التهاب الطرفية وآلام الأعصاب 13،14، فضلا عن معالجة الألم غير طبيعي المركزي 15، واصابات الحبل الشوكي 16، وأمراض الجهاز العصبي المركزي مع فرط الاستثارية المحرك بوساطة معيبة GABAergic نقل 17، 18. وبالتالي، تقدير تثبيط قبل المشبكي جدير بالاهتمام للتحقيق في الحالات المرضية التجريبية على مستوى النخاع الشوكي في الجسم الحي </em&gt;. PAD يثير إمكانات حجم أجريت توفير مقياسا مباشرا لتثبيط قبل المشبكي في الحبل الشوكي. وتسمى تلك الإمكانات إمكانات الجذرية الظهرية (الحزب الثورى الديمقراطى) ويمكن قياسها من الجذور الظهرية الحبل الشوكي بعد التحفيز من الجذور الظهرية المجاورة 7. وقد تم الإبلاغ عن القياسات الأولى من DRP في القطط والضفادع 19 ودرست بشكل مكثف في القطط عن طريق اكليس، شميت، وغيرها في أوائل 1970s 3،4،20،21. في حين في الجسم الحي تسجيلات DRP في القطط والفئران 22 23 وقد استخدمت على نطاق واسع، والقياسات في الفئران وقد أجريت بشكل حصري تقريبا في فيفو السابقين معزولة الاستعدادات الحبل الشوكي 15،24. هنا، نحن تصف طريقة لتسجيل DRP في الفئران تخدير في الجسم الحي السماح مقياسا مباشرا لتثبيط قبل المشبكي في الكائن الحي سليما.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Glass tubing (inner diameter 1.16 mm)</td>
			<td>Science Products (Hofheim, Germany)</td>
			<td>GB200F-10</td>
			<td>Other glass tubing might also be suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfusion solution (sterile, 0,9% NaCl)</td>
			<td>Braun Melsungen AG&#160;</td>
			<td>3570350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(Melsungen, Germany)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rompun 2% (Xylazine)</td>
			<td>Bayer Animal Health GmbH (Leverkusen, Germany)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamin 10%</td>
			<td>Medistar GmbH (Ascheberg, Germany)</td>
			<td>KETAMIN 10%</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30G micro needle/ Sterican</td>
			<td>Braun Melsungen AG&#160;</td>
			<td>4656300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(Melsungen, Geramny)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Salts for aCSF</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>Diverse</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S88 Dual Output Square Pulse</td>
			<td>Grass Technologies (Warwick, USA)</td>
			<td>S88X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stimulator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SIU5 RF Transformer Isolation Unit</td>
			<td>Grass Technologies (Warwick, USA)</td>
			<td>SIU-V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InstruTECH LIH 8+8</td>
			<td>HEKA (Lambrecht, Deutschland)</td>
			<td>LIH 8+8 + Patchmaster software</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data acquisition&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Universal amplifier</td>
			<td>npi (Tamm, Deutschland)</td>
			<td>ELC-03X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette puller</td>
			<td>Sutter Instruments (Novato, USA)</td>
			<td>P-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Olympus (Tokyo, Japan)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>Sutter Instruments (Novato, USA)</td>
			<td>MPC-200/MPC-325</td>
			<td>Mechanical micromanipulators also possible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homeothermic Blanket System</td>
			<td>Stoelting (Wood Dale, USA)</td>
			<td>50300V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intra-/extracellular recording electrode holder</td>
			<td>Harvard Apparatus (Holliston, USA)</td>
			<td>641227</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring spinal presynaptic inhibition in mice by dorsal root potential recording in vivo

تثبيط قبل المشبكي هي واحدة من آليات المثبطة أقوى في الحبل الشوكي. الآلية الفسيولوجية الأساسية هو الاستقطاب من الألياف وارد الأولية بوساطة GABAergic نقاط الاشتباك العصبي الذخائر المتروكة المحوار (الاستقطاب وارد الأولية). قوة الاستقطاب وارد الأولية يمكن أن تقاس تسجيل إمكانات التي أجريت في حجم الجذر الظهري (إمكانات الجذرية الظهرية، الحزب الثورى الديمقراطى). التغيرات المرضية من تثبيط قبل المشبكي تشكل عاملا حاسما في المعالجة المركزية غير طبيعي للظروف معينة، والألم في بعض اضطرابات فرط الاستثارية السيارات. هنا، نحن تصف طريقة تسجيل DRP في الجسم الحي في الفئران. وأوضح إعداد الحبل الشوكي جذور الظهرية في تخدير الحيوان وإجراءات تسجيل باستخدام أقطاب الشفط. يسمح هذا الأسلوب قياس GABAergic الحزب الثورى الديمقراطى، وبالتالي تقدير تثبيط قبل المشبكي في العمود الفقري في الماوس الحية. في تركيبة مع نماذج الماوس المعدلة وراثيا، قد تسجيل DRP حد ذاتهRVE كأداة قوية لتحقيق المرتبطة بأمراض العمود الفقري الفيزيولوجيا المرضية. في الجسم الحي تسجيل ديها العديد من المزايا مقارنة مع فيفو السابقين الاستعدادات الحبل الشوكي منعزلة، مثل إمكانية التسجيل أو التلاعب في الشبكات فوق الشوك وتحريض من قبل الحزب الثورى الديمقراطى تحفيز الأعصاب الطرفية في وقت واحد.

وتظهر آثار DRP نموذجية في الشكل 3. وعادة ما يعقب تحفيز قطعة أثرية بارزة من خلال انحراف النزولي قصيرة. بعد ذلك بطيئة وطويلة الأمد انحراف التصاعدي، الذي يمثل الحزب الثورى الديمقراطى هو واضح للتمييز. في مجموعة فرعية من التسجيلات، وردود الفعل الجذرية الظهرية مرئي...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Spinal Presynaptic Inhibition in Mice By Dorsal Root Potential Recording In Vivo at JoVE.com

Measuring Spinal Presynaptic Inhibition in Mice By Dorsal Root Potential Recording In Vivo

GABAergic تثبيط قبل المشبكي هو آلية المثبطة قوية في الحبل الشوكي المهم للمحرك والتكامل الحسي في إشارة الشبكات الحبل الشوكي. ويمكن قياس الكامنة وارد الأولية الاستقطاب عن طريق تسجيل إمكانيات الجذر الظهري (الحزب الثورى الديمقراطى). نحن هنا يبرهن على وجود طريقة في الجسم الحي تسجيل DRP في الفئران.

قياس العمود الفقري قبل المشبكي في الفئران عن طريق تثبيط الظهرية جذر تسجيل المحتملة<em&gt; في فيفو</em

Presynaptic inhibition is one of the most powerful inhibitory mechanisms in the spinal cord. The underlying physiological mechanism is a depolarization of ...

measuring-spinal-presynaptic-inhibition-mice-dorsal-root-potential

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Measuring Spinal Presynaptic Inhibition in Mice By Dorsal Root Potential Recording In Vivo

13.9K Views.  Jena University Hospital, Jena, Germany.  GABAergic تثبيط قبل المشبكي هو آلية المثبطة قوية في الحبل الشوكي المهم للمحرك والتكامل الحسي في إشارة الشبكات الحبل الشوكي. ويمكن قياس الكامنة وارد الأولية الاستقطاب عن طريق تسجيل إمكانيات الجذر الظهري (الحزب الثورى الديمقراطى). نحن هنا يبرهن ...

Video: Measuring Spinal Presynaptic Inhibition in Mice By Dorsal Root Potential Recording In Vivo

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural connectivity form during development. In mice, retinofugal projections are arranged in a topographic manner and form eye-specific layers in the Lateral Geniculate Nucleus (dLGN) of the thalamus and the Superior Colliculus (SC). The development of these precise patterns of retinofugal projections has typically been studied by labeling populations of RGCs with fluorescent dyes and tracers, such as horseradish peroxidase1-4. However, these methods are too coarse to provide insight into developmental changes in individual RGC axonal arbor morphology that are the basis of retinotopic map formation. They also do not allow for the genetic manipulation of RGCs.
Recently, electroporation has become an effective method for providing precise spatial and temporal control for delivery of charged molecules into the retina5-11. Current retinal electroporation protocols do not allow for genetic manipulation and tracing of retinofugal projections of a single or small cluster of RGCs in postnatal mice. It has been argued that postnatal in vivo electroporation is not a viable method for transfecting RGCs since the labeling efficiency is extremely low and hence requires targeting at embryonic ages when RGC progenitors are undergoing differentiation and proliferation6. 
In this video we describe an in vivo electroporation protocol for targeted delivery of genes, shRNA, and fluorescent dextrans to murine RGCs postnatally. This technique provides a cost effective, fast and relatively easy platform for efficient screening of candidate genes involved in several aspects of neural development including axon retraction, branching, lamination, regeneration and synapse formation at various stages of circuit development. In summary we describe here a valuable tool which will provide further insights into the molecular mechanisms underlying sensory map development.

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

We demonstrate an in vivo electroporation protocol for transfecting single or small clusters of retinal ganglion cells (RGCs) and other retinal cell types in postnatal mice over a wide range of ages. The ability to label and genetically manipulate postnatal RGCs in vivo is a powerful tool for developmental studies.

ترنسفكأيشن من خلايا الشبكية بواسطة الماوس العقدة في الجسم الحي Electroporation

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural ...

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

The overall goal of this method is to record single-unit responses from an identified population of neurons. In vivo electrophysiological recordings from individual neurons are critical for understanding how neural circuits function under natural conditions. Traditionally, these recordings have been performed 'blind', meaning the identity of the recorded cell is unknown at the start of the recording. Cellular identity can be subsequently determined via intracellular1, juxtacellular2 or loose-patch3 iontophoresis of dye, but these recordings cannot be pre-targeted to specific neurons in regions with functionally heterogeneous cell types. Fluorescent proteins can be expressed in a cell-type specific manner permitting visually-guided single-cell electrophysiology4-6. However, there are many model systems for which these genetic tools are not available. Even in genetically accessible model systems, the desired promoter may be unknown or genetically homogenous neurons may have varying projection patterns. Similarly, viral vectors have been used to label specific subgroups of projection neurons7, but use of this method is limited by toxicity and lack of trans-synaptic specificity. Thus, additional techniques that offer specific pre-visualization to record from identified single neurons in vivo are needed. Pre-visualization of the target neuron is particularly useful for challenging recording conditions, for which classical single-cell recordings are often prohibitively difficult8-11. The novel technique described in this paper uses retrograde transport of a fluorescent dye applied using tungsten needles to rapidly and selectively label a specific subset of cells within a particular brain region based on their unique axonal projections, thereby providing a visual cue to obtain targeted electrophysiological recordings from identified neurons in an intact circuit within a vertebrate CNS.
The most significant novel advancement of our method is the use of fluorescent labeling to target specific cell types in a non-genetically accessible model system. Weakly electric fish are an excellent model system for studying neural circuits in awake, behaving animals12. We utilized this technique to study sensory processing by "small cells" in the anterior exterolateral nucleus (ELa) of weakly electric mormyrid fish. "Small cells" are hypothesized to be time comparator neurons important for detecting submillisecond differences in the arrival times of presynaptic spikes13. However, anatomical features such as dense myelin, engulfing synapses, and small cell bodies have made it extremely difficult to record from these cells using traditional methods11, 14. Here we demonstrate that our novel method selectively labels these cells in 28% of preparations, allowing for reliable, robust recordings and characterization of responses to electrosensory stimulation.

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

Retrograde transport of fluorescent dye labels a sub-population of neurons based on anatomical projection. Labeled axons can be visually targeted in vivo, permitting extracellular recording from identified axons. This technique facilitates recording when neurons cannot be labeled through genetic manipulation or are difficult to isolate using 'blind' in vivo approaches.

الفلورسنت وصفها الوراء يسمح لخارج الخلية المستهدفة واحدة وحدة التسجيل من الخلايا العصبية التي تم تحديدها<em&gt; في الجسم الحي</em

The overall goal of this method is to record single-unit responses from an identified population of neurons. In vivo electrophysiological recordings from ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise from extra-retinal sources. Ex vivo ERG provides an efficient method to dissect the function of retinal cells directly from an intact isolated retina of animals or donor eyes. In addition, ex vivo ERG can be used to test the efficacy and safety of potential therapeutic agents on retina tissue from animals or humans. We show here how commercially available in vivo ERG systems can be used to conduct ex vivo ERG recordings from isolated mouse retinas. We combine the light stimulation, electronic and heating units of a standard in vivo system with custom-designed specimen holder, gravity-controlled perfusion system and electromagnetic noise shielding to record low-noise ex vivo ERG signals simultaneously from two retinas with the acquisition software included in commercial in vivo systems. Further, we demonstrate how to use this method in combination with pharmacological treatments that remove specific ERG components in order to dissect the function of certain retinal cell types.

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Ex vivo ERG can be used to record electrical activity of retinal cells directly from isolated intact retinas of animals or humans. We demonstrate here how common in vivo ERG systems can be adapted for ex vivo ERG recordings in order to dissect the electrical activity of retinal cells.

متزامنة<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; اختبار وظيفي اثنين من شبكية العين من قبل<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; نظام مخطط كهربية

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...

Polygraphic Recording Procedure for Measuring Sleep in Mice

Recording of the epidural electroencephalogram (EEG) and electromyogram (EMG) in small animals, like mice and rats, has been pivotal to study the homeodynamics and circuitry of sleep-wake regulation. In many laboratories, a cable-based sleep recording system is used to monitor the EEG and EMG in freely behaving mice in combination with computer software for automatic scoring of the vigilance states on the basis of power spectrum analysis of EEG data. A description of this system is detailed herein. Steel screws are implanted over the frontal cortical area and the parietal area of 1 hemisphere for monitoring EEG signals. In addition, EMG activity is monitored by the bilateral placement of wires in both neck muscles. Non-rapid eye movement (Non-REM; NREM) sleep is characterized by large, slow brain waves with delta activity below 4 Hz in the EEG, whereas a shift from low-frequency delta activity to a rapid low-voltage EEG in the theta range between 6 and 10 Hz can be observed at the transition from NREM to REM sleep. By contrast, wakefulness is identified by low- to moderate-voltage brain waves in the EEG trace and significant EMG activity.

The recording of electroencephalogram (EEG) and electromyogram (EMG) in freely behaving mice is a critical step to correlate behavior and physiology with sleep and wakefulness. The experimental protocol described herein provides a cable-based system for acquiring EEG and EMG recordings in mice.

تسجيل الطباعة الداخلي لقياس النوم في الفئران

Recording of the epidural electroencephalogram (EEG) and electromyogram (EMG) in small animals, like mice and rats, has been pivotal to study the ...

Hydraulic Extrusion of the Spinal Cord and Isolation of Dorsal Root Ganglia in Rodents

Traditionally, the spinal cord is isolated by laminectomy, i.e. by breaking open the spinal vertebrae one at a time. This is both time consuming and may result in damage to the spinal cord caused by the dissection process. Here, we show how the spinal cord can be extruded using hydraulic pressure. Handling time is significantly reduced to only a few minutes, likely decreasing protein damage. The low risk of damage to the spinal cord tissue improves subsequent immunohistochemical analysis. By performing hydraulic spinal cord extrusion instead of traditional laminectomy, the rodents can further be used for DRG isolation, thereby lowering the number of animals and allowing analysis across tissues from the same rodent. We demonstrate a consistent method to identify and isolate the DRGs according to their localization relative to the costae. It is, however, important to adjust this method to the particular animal used, as the number of spinal cord segments, both thoracic and lumbar, may vary according to animal type and strain. In addition, we illustrate further processing examples of the isolated tissues.

Here, we present a protocol for hydraulic extrusion of the spinal cord as well as identification and isolation of specific dorsal root ganglia (DRGs) in the same rodent. Compared to standard spinal cord isolation methods, this method is significantly faster and reduces the risk of tissue damage.

البثق الهيدروليكي من الحبل الشوكي وعزل الظهرية جذر العقد في القوارض

Traditionally, the spinal cord is isolated by laminectomy, i.e. by breaking open the spinal vertebrae one at a time. This is both time consuming and may ...

Dorsal Root Ganglion Injection and Dorsal Root Crush Injury as a Model for Sensory Axon Regeneration

Achieving axon regeneration after nervous system injury is a challenging task. As different parts of the central nervous system (CNS) differ from each other anatomically, it is important to identify an appropriate model to use for the study of axon regeneration. By using a suitable model, we can formulate a specific treatment based on the severity of injury, the neuronal cell type of interest, and the desired spinal tract for assessing regeneration. Within the sensory pathway, DRG neurons are responsible for relaying sensory information from the periphery to the CNS. We present here a protocol that uses a DRG injection with a viral vector and a concurrent dorsal root crush injury in the lower cervical spinal cord of an adult rat as a model to study sensory axon regeneration. As demonstrated using a control virus, AAV5-GFP, we show the effectiveness of a direct DRG injection in transducing DRG neurons and tracing sensory axons into the spinal cord. We also show the effectiveness of the dorsal root crush injury in denervating the forepaw as an injury model for evaluating axon regeneration. Despite the requirement for specialized training to perform this invasive surgical procedure, the protocol is flexible, and potential users can modify many parts to accommodate their experimental requirements. Importantly, it can serve as a foundation for those in search of a suitable animal model for their studies. We believe that this article will help new users to learn the procedure in a very efficient and effective manner.

This protocol presents the use of a dorsal root ganglion (DRG) injection with a viral vector and a concurrent dorsal root crush injury in an adult rat as a model to study sensory axon regeneration. This model is suitable for investigating the use of gene therapy to promote sensory axon regeneration.

الظهرية جذر حقن العقدة وظهري الجذر سحق إصابة نموذجا لالحسية أكسون التجديد

Achieving axon regeneration after nervous system injury is a challenging task. As different parts of the central nervous system (CNS) differ from each ...

Laminotomy for Lumbar Dorsal Root Ganglion Access and Injection in Swine

Dorsal root ganglia (DRG) are anatomically well defined structures that contain all primary sensory neurons below the head. This fact makes DRG attractive targets for injection of novel therapeutics aimed at treating chronic pain. In small animal models, laminectomy has been used to facilitate DRG injection because it involves surgical removal of the vertebral bone surrounding each DRG. We demonstrate a technique for intraganglionic injection of lumbar DRG in a large animal species, namely, swine. Laminotomy is performed to allow direct access to DRG using standard neurosurgical techniques, instruments, and materials. Compared with more extensive bone removal via laminectomy, we implement laminotomy to conserve spinal anatomy while achieving sufficient DRG access. Intraoperative progress of DRG injection is monitored using a non-toxic dye. Following euthanasia on post-operative day 21, the success of injection is determined by histology for intraganglionic distribution of 4&#39;,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI). We inject a biologically inactive solution to demonstrate the protocol. This method could be applied in future preclinical studies to target therapeutic solutions to DRG. Our methodology should facilitate testing the translatability of intraganglionic small animal paradigms in a large animal species. Additionally, this protocol may serve as a key resource for those planning preclinical studies of DRG injection in swine.

We describe a method for laminotomy in swine that provides access to lumbar dorsal root ganglia (DRG) for intraganglionic injection. Injection progress is monitored intraoperatively and histologically confirmed up to 21 days after surgery. This protocol could be used for future preclinical studies involving DRG injection.

و Laminotomy للوصول إلى العقدة الجذر الظهرية القطنية وحقن في الخنازير

Dorsal root ganglia (DRG) are anatomically well defined structures that contain all primary sensory neurons below the head. This fact makes DRG attractive ...

Investigating Mammalian Axon Regeneration: In Vivo Electroporation of Adult Mouse Dorsal Root Ganglion

Electroporation is an essential non-viral gene transfection approach to introduce DNA plasmids or small RNA molecules into cells. A sensory neuron in the dorsal root ganglion (DRGs) extends a single axon with two branches. One branch goes to the peripheral nerve (peripheral branch), and the other branch enters the spinal cord through the dorsal root (central branch). After the neural injury, the peripheral branch regenerates robustly whereas the central branch does not regenerate. Due to the high regenerative capacity, sensory axon regeneration has been widely used as a model system to study mammalian axon regeneration in both the peripheral nervous system (PNS) and the central nervous system (CNS). Here, we describe a previously established approach protocol to manipulate gene expression in mature sensory neurons in vivo via electroporation. Based on transfection with plasmids or small RNA oligos (siRNAs or microRNAs), the approach allows for both loss- and gain-of-function experiments to study the roles of genes-of-interests or microRNAs in regulation of axon regeneration in vivo. In addition, the manipulation of gene expression in vivo can be controlled both spatially and temporally within a relatively short time course. This model system provides a unique tool to investigate the molecular mechanisms by which mammalian axon regeneration is regulated in vivo.

Investigating Mammalian Axon Regeneration: In Vivo Electroporation of Adult Mouse Dorsal Root Ganglion

Electroporation is an effective approach to deliver genes of interests into cells. By applying this approach in vivo on the neurons of adult mouse dorsal root ganglion (DRG), we describe a model to study axon regeneration in vivo.

التحقيق إكسون الثدييات التجديد: في فيفو انهانسر من العقدة الجذر الظهرية الماوس الكبار

Electroporation is an essential non-viral gene transfection approach to introduce DNA plasmids or small RNA molecules into cells. A sensory neuron in the ...

Use of In Vivo Single-fiber Recording and Intact Dorsal Root Ganglion with Attached Sciatic Nerve to Examine the Mechanism of Conduction Failure

Single-fiber recording has been a classical and effective electrophysiological technique over the last few decades because of its specific application for nerve fibers in the central and peripheral nervous systems. This method is particularly applicable to dorsal root ganglia (DRG), which are primary sensory neurons that exhibit a pseudo-unipolar structure of nervous processes. The patterns and features of the action potentials passed along axons are recordable in these neurons. The present study uses in vivo single-fiber recordings to observe the conduction failure of sciatic nerves in complete Freund&#8217;s adjuvant (CFA)-treated rats. As the underlying mechanism cannot be studied using in vivo single-fiber recordings, patch-clamp-recordings of DRG neurons are performed on preparations of intact DRG with the attached sciatic nerve. These recordings reveal a positive correlation between conduction failure and the rising slope of the after-hyperpolarization potential (AHP) of DRG neurons in CFA-treated animals. The protocol for in vivo single fiber-recordings allows the classification of nerve fibers via the measurement of conduction velocity and monitoring of abnormal conditions in nerve fibers in certain diseases. Intact DRG with attached peripheral nerve allows observation of the activity of DRG neurons in most physiological conditions. Conclusively, single-fiber recording combined with electrophysiological recording of intact DRGs is an effective method to examine the role of conduction failure during the analgesic process.

Single-fiber recording is an effective electrophysiological technique that is applicable to the central and peripheral nervous systems. Along with the preparation of intact DRG with the attached sciatic nerve, the mechanism of conduction failure is examined. Both protocols improve the understanding of the peripheral nervous system&#39;s relationship with pain.

استخدام في فيفو تسجيل واحد من الألياف والعقدة الجذر الرحالة سليمة مع العصب الوركي المرفقة لدراسة آلية فشل التوصيل

Single-fiber recording has been a classical and effective electrophysiological technique over the last few decades because of its specific application for ...

Rapid Isolation of Dorsal Root Ganglion Macrophages

There are growing interests to study the molecular and cellular interactions among immune cells and sensory neurons in the dorsal root ganglia after peripheral nerve injury. Peripheral monocytic cells, including macrophages, are known to respond to a tissue injury through phagocytosis, antigen presentation, and cytokine release. Emerging evidence has implicated the contribution of dorsal root ganglia macrophages to neuropathic pain development and axonal repair in the context of nerve injury. Rapidly phenotyping (or &#8220;rapid isolation of&#8221;) the response of dorsal root ganglia macrophages in the context of nerve injury is desired to identify the unknown neuroimmune factors. Here we demonstrate how our lab rapidly and effectively isolates macrophages from the dorsal root ganglia using an enzyme-free mechanical dissociation protocol. The samples are kept on ice throughout to limit cellular stress. This protocol is far less time consuming compared to the standard enzymatic protocol and has been routinely used for our Fluorescence-activated Cell Sorting analysis.

Here we present a mechanical dissociation protocol to rapidly isolate macrophages from the dorsal root ganglion for phenotyping and functional analysis.

العزلة السريعة للضامة الجذرية الدجورة

There are growing interests to study the molecular and cellular interactions among immune cells and sensory neurons in the dorsal root ganglia after ...