وأيد هذا العمل من قبل مؤسسة العلوم الاكاديمية والطب غرانت؛ (MB)؛ مجلس البحوث الصحية والطبية الوطنية في أستراليا منح المشروع (KLS، 338516)؛ وبرنامج دعم البنية التحتية التشغيلية للحكومة فيكتوريا (استراليا).

1. إعداد خلايا، وسائل الإعلام، والكواشف <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد المحتوية على ميثيل متوسطة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل 1.5 غرام من ميثيل في 100 مل من العقيمة Dulbecco لتعديل النسر متوسطة (DMEM) (بدون إضافات) في قارورة 250 مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسخين الحل على انخفاض في الميكروويف لمدة 5 دقائق؛ الحرص على تجنب غليان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة مسحوق ميثيل شبه المنحل، إضافة النمام المغناطيسي نظيفة وسائل الإعلام لاتخاذ وحدة التخزين إلى 125 مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مزيج، قلب، ويقلب في درجة حرارة الغرفة لمدة 1.5 ساعة، تليها اثارة في 4 درجات مئوية خلال الليل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقسيم الحل إلى أربعة بالتساوي 50 مل أنابيب الطرد المركزي ومقابل 1.5 ساعة عند 2،300 ز س. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع واضحة، وطاف لزج للغاية (حوالي 90-95٪ من الأسهم)، قسامة في أنابيب معقمة 50 مل، وتخزينها في 4 درجة مئوية لمدة تصل إلى 3 أشهر. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الثقافة وصفها من الخلايا <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على خطوط الخلايا السرطانية في المبيض في أحادي الطبقة في منظمة الشفافية الدوليةssue حاضنة الثقافة عند 37 درجة مئوية، 5٪ CO 2 في وسائل الإعلام الملائمة النمو (DMEM للخلايا KGN 17 و MCBD110: M199 للOVCA429 وOVCA433 خطوط الخلايا 18) تستكمل مع 10٪ مصل الجنين البقري (FBS)، 2 مم L الجلوتامين، و 1٪ البنسلين الستربتوميسين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على الخلايا الظهارية البشرية LP9 في M199: همس سائل الاعلام F12 تحتوي على 15٪ FBS، 10 نانوغرام / مل عامل نمو البشرة (صندوق تعديل العولمة الأوروبي) و 400 نانوغرام / مل الهيدروكورتيزون، في حاضنة عند 37 درجة مئوية، 5٪ CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلايا البذور في قارورة حجم المطلوب وتنمو إلى ما يقرب من 75٪ confluency. خلايا الحصاد عن طريق استخدام trypsinization 0.05٪ التربسين / EDTA، وتدور في 186 x ج لمدة 5 دقائق، وغسل بيليه الخلية مرتين مع برنامج تلفزيوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عد الخلايا باستخدام عدادة الكريات. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختياري نيون الطريقة وصفها الخليوي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الخلايا السرطانية في resuspend في تركيز النهائي من 1 × 10 6 خلية / مل في 1 مل من prewarmed PBS/0.1٪ BSA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 2 ميكرولتر من 5 ملم الأسهم الخليوي آرالآس حل CSFE (أو غيرها من تسمية الخلية المفضل الذي يتم الاحتفاظ على المدى الطويل) إلى الخلايا في تركيز النهائي من 10 ميكرومتر واحتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 10-15 دقيقة في بالحمام المائي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إخماد رد فعل مع 1 مل من الجليد الباردة المتوسطة التي تحتوي على 10٪ FBS وإعادة بيليه عن طريق الطرد المركزي. resuspend في 10 مل من متوسط ​​النمو prewarmed الملائمة (انظر الخطوة 1.2.1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلايا البذور إلى 75 سم 2 قارورة المغطاة مرشح والثقافة في 37 درجة مئوية، 5٪ CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقق الخلايا تحت المجهر مضان للتحقق من أن مستوى وضع العلامات مضان كافية للكشف. مرة واحدة الخلايا إلى حوالي 75٪ confluency، والحصاد والاعتماد كما في الخطوات 1.2.3 و1.2.4 أعلاه. </li></ol></li></ol> 2. توليد الأجسام الشبه الكروية في ميثيل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب حجم خلايا سرطان المبيض من القسم 1 اللازمة لتوليد كروي (مطلوبة ما مجموعه 300،000 الخلايا لكل تجربة لوحة 96 جيدا كاملة). لاالشركة المصرية للاتصالات: في حالة استخدام خطوط مختلفة من الخلايا من المعروضة هنا، قد تحتاج كثافة الخلايا لتوليد كروي موحد ليكون الأمثل لكل خط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لحساب التخفيف من الخلايا في وسائل الإعلام ميثيل، طرح أولا حجم الخلية المطلوبة (الخطوة 2.1) من 15 مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 3 مل من محلول المخزون ميثيل (لجعل 20٪ ميثيل النهائي) إلى وحدة تخزين من مستنبت المناسبة لكل خط الخلية، أي ما يعادل 15 مل ناقص حجم الخلية ومزيج دقيق من قبل انعكاس لطيف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة إلى 300،000 الخلايا التي تحتوي على ميثيل المتوسطة ويخلط جيدا بواسطة انعكاس لطيف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة 150 ميكرولتر من مزيج خلية / ميثيل / وسائل الإعلام (أي ما مجموعه 3،000 خلية / جيد) في كل بئر من 96 لوحة جيدا مقعر أسفل الثقافة والثقافة في 37 درجة مئوية، 5٪ CO 2 ل1-4 أيام أو حتى تشكيل الأجسام الشبه الكروية موحدة (1 كروي / جيد ويلاحظ عادة). </li></ol> 3. RTCA الخليوي الغزو فحوصات NOTE: يتم التعبير عن قراءات مقاومة كما مؤشر الخلية (CI)، معلمة أبعاد وهي التغير النسبي في قياس مقاومة الخلية تمثل حالة الخلية. للتحليل، وبيانات الاستيراد في جدول بيانات، مثل Microsoft Excel. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد لوحة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> العمل في مجموعات من 4 آبار في وقت واحد، إضافة 50 ميكرولتر مصفوفة (01:10 المخفف في وسائل الإعلام ثقافة خالية من مصل) إلى كل بئر من الغرفة العلوية من لوحة 16 جيدا RTCA CIM للتأكد من أن المساحة الإجمالية تغطي . إزالة 30 ميكرولتر من المصفوفة على الفور، ولكن ببطء، للتخلص من السوائل الزائدة أي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان لوحة عند 37 درجة مئوية لمدة 4 ساعات قبل استخدامها في حاضنة زراعة الأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 30 ميكرولتر من المصل خالية المتوسطة (SFM) المناسبة لكل خط الخلايا السرطانية إلى مجلس الشيوخ و 160 ميكرولتر من وسائل الإعلام مع أو بدون مصل (حسب التصميم الخاص بك تجريبية) لمجلس النواب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجميع لوحة CIM بالضغط على النواب في مجلس الشيوخ وequilibrيأكلون في الحاضنة 37 درجة مئوية لمدة 1 ساعة في حاضنة زراعة الأنسجة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> برمجة الصك RTCA <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح البرنامج RTCA وحدد علامة التبويب &quot;تخطيط&quot;. تسليط الضوء على جميع الآبار التجريبية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقر بزر الماوس الأيمن على الآبار وحدد &quot;تشغيل آبار &#39;؛ ثم شغل في الظروف التجريبية وأسماء الخلية كما تريد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لإضافة الخطوات أو substeps للبرنامج، اختر &quot;الجدول&quot; علامة التبويب وانقر بزر الماوس الأيمن على &quot;أضف خطوة &#39;. الخطوة الأولى هي اكتساح خلفية مبرمج مسبقا، والتي يتم تضمينها تلقائيا في البرنامج مرة واحدة &quot;إضافة خطوة&quot; يتم اختيار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدخال تفاصيل البرنامج المطلوب لالخطوة 2 من برنامج RTCA، والتي سوف تسجل قراءات خلال إنشاء أحادي الطبقة LP9. إضافة فترات زمنية بين القراءات مقاومة من خلال تحديد علامة التبويب &quot;الفاصل&quot; ودخول &#39;15 دقيقة &#39;. إضافة مدة تجريبية عن طريق اختيار &#39;المدة&#39; التبويب ود دخول وقت بين 12-24 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لإضافة الخطوات اللاحقة، حدد &quot;جدولة&quot; علامة التبويب وانقر بزر الماوس الأيمن على &quot;أضف خطوة &#39;وأدخل تفاصيل الخطوات الإضافية، على النحو الوارد أعلاه. سوف الخطوة 3 من برنامج RTCA توجيه أداة لاتخاذ القراءات خلال غزو كروي؛ أدخل دقيقة &#39;5 &#39;تحت&#39; &#39;علامة التبويب و&#39;48 ساعة&#39; الفاصل ضمن علامة التبويب &quot;المدة&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختر &#39;لوحة&#39; على شريط القوائم وحفظها. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جيل من LP9 أحادي الطبقة وقياس كروي الغزو <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع لوحة في CIM RTCA صك والبرنامج مفتوح من الخطوة 3.2 أعلاه. قبل إضافة خلايا، حدد &#39;تنفيذ&#39; في شريط القوائم ثم &#39;بداية&#39;. سيتم تلقائيا أجريت عملية مسح الخلفية (الخطوة 1 في تعليمات برنامج RTCA). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة لوحة CIM من الصك بعد الاجتياح الخلفية ومكان في نسيج الثقافة هود. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لوحة 50،000 LP9 الخلايا علقت في 160 ميكرولتر الإدارة المستدامة للغابات في الغرفة العليا من كل لوحة CIM جيدا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع لوحة في الصك RTCA واتخاذ القراءات كل 15 دقيقة بينما أحادي الطبقة LP9 يتم بين عشية وضحاها إنشاء (الخطوة 2 من برنامج RTCA). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصاد الكروية السرطان ولدت تحت الخطوة 2 &quot;جيل من الأجسام الشبه الكروية في ميثيل &#39;أعلاه. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جو معقم و مطهر، وقطع 1 ملم من الجزء العلوي من غيض ماصة 1 مل واستخدامها لاسترداد بلطف محتويات كل بئر. نقل إلى أنبوب العقيمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أجهزة الطرد المركزي في 120 x ج الكروية لمدة 8 دقائق، وإزالة ميثيل تحتوي على المتوسط ​​بواسطة الشفط لطيف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يغسل الأجسام الشبه الكروية مرتين أكثر مع برنامج تلفزيوني، الطرد المركزي في 120 x ج لمدة 8 دقائق لتكوير الأجسام الشبه الكروية بعد كل غسل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لكل بئر تجريبية، في resuspend ما مجموعه 10 الكروية في 160 ميكرولتر من وسيط وبدون FBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إيقاف التجربة RTCA باختيار &#39;تنفيذ&#39; من شريط القوائم والتدقيق و# 8216؛ وقفة &quot;. إزالة لوحة CIM من الصك، ووضع في نسيج الثقافة هود. نضح قبالة وسائل الإعلام من كل بئر واستبدالها مع وسائل الإعلام التي تحتوي على كروي (10 المجالات في 160 ميكرولتر) أو وسائط جديدة للآبار مراقبة LP9 فقط. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> العودة إلى لوحة الصك RTCA. اختر &#39;تنفيذ&#39; من شريط القوائم وتحقق من &quot;إحباط الخطوة &#39;. هذا البرنامج سوف تنتقل إلى الخطوة التالية تلقائيا. لاستئناف التجربة، اختر &#39;تنفيذ&#39; من شريط القوائم وتحقق &quot;ابدأ / متابعة. سوف الخطوة 3 في برنامج RTCA بدء. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحليل البيانات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتحديد مستوى الغازية خلية كروي، طرح القيم التي تم الحصول عليها لأحادي الطبقة LP9 فقط من القراءات الفردية التي حصل عليها لالمبيض خطوط الخلايا السرطانية في كل timepoint. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لمؤامرة &#39;غزو كروي &quot;، وتطبيع جميع القيم إلى النقطة الوقت الذي أضيفت الكروية لوحة، من خلال قetting تلك النقطة الوقت ل&#39;0 &#39;. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Ferlay, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimates+of+worldwide+burden+of+cancer+in+2008:+GLOBOCAN.">Estimates of worldwide burden of cancer in 2008: GLOBOCAN.</a> Int J Cancer. 127, 2893-2917 (2008).</li><li>Ahmed, N., Stenvers, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Getting+to+know+ovarian+cancer+ascites:+opportunities+for+targeted+therapy-+based+translational+research.">Getting to know ovarian cancer ascites: opportunities for targeted therapy- based translational research.</a> Frontiers in Oncology. 3, (2013).</li><li>Karst, A. M., Drapkin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+cancer+pathogenesis:+a+model+in+evolution.">Ovarian cancer pathogenesis: a model in evolution.</a> J Oncol. 2010, (2010).</li><li>Lengyel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+cancer+development+and+metastasis.">Ovarian cancer development and metastasis.</a> Am J Pathol. 177, 1053-1064 (2010).</li><li>Shield, K., Ackland, M. L., Ahmed, N., Rice, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicellular+spheroids+in+ovarian+cancer+metastases:+Biology+and+pathology.">Multicellular spheroids in ovarian cancer metastases: Biology and pathology.</a> Gynecol Oncol. 113, 143-148 (2009).</li><li>Hudson, L. G., Zeineldin, R., Stack, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+plasticity+of+neoplastic+ovarian+epithelium:+unique+cadherin+profiles+in+tumor+progression.">Phenotypic plasticity of neoplastic ovarian epithelium: unique cadherin profiles in tumor progression.</a> Clin Exp Metastasis. 25, 643-655 (2008).</li><li>Burleson, K. M., Boente, M. P., Pambuccian, S. E., Skubitz, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disaggregation+and+invasion+of+ovarian+carcinoma+ascites+spheroids.">Disaggregation and invasion of ovarian carcinoma ascites spheroids.</a> J Transl Med. 4, 6 (2006).</li><li>Burleson, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+carcinoma+ascites+spheroids+adhere+to+extracellular+matrix+components+and+mesothelial+cell+monolayers.">Ovarian carcinoma ascites spheroids adhere to extracellular matrix components and mesothelial cell monolayers.</a> Gynecol Oncol. 93, 170-181 (2004).</li><li>Burleson, K. M., Hansen, L. K., Skubitz, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+carcinoma+spheroids+disaggregate+on+type+I+collagen+and+invade+live+human+mesothelial+cell+monolayers.">Ovarian carcinoma spheroids disaggregate on type I collagen and invade live human mesothelial cell monolayers.</a> Clin Exp Metastasis. 21, 685-697 (2004).</li><li>Kenny, H. A., Kaur, S., Coussens, L. M., Lengyel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+initial+steps+of+ovarian+cancer+cell+metastasis+are+mediated+by+MMP-2+cleavage+of+vitronectin+and+fibronectin.">The initial steps of ovarian cancer cell metastasis are mediated by MMP-2 cleavage of vitronectin and fibronectin.</a> J Clin Invest. 118, 1367-1379 (2008).</li><li>Kenny, H. A., Nieman, K. M., Mitra, A. K., Lengyel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+First+Line+of+Abdominal+Metastatic+Attack:+Breaching+the+Mesothelial+Cell+Layer.">The First Line of Abdominal Metastatic Attack: Breaching the Mesothelial Cell Layer.</a> Cancer Discov. 1, 100-102 (2011).</li><li>Hattermann, K., Held-Feindt, J., Mentlein, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spheroid+confrontation+assay:+a+simple+method+to+monitor+the+three-dimensional+migration+of+different+cell+types+in+vitro.">Spheroid confrontation assay: a simple method to monitor the three-dimensional migration of different cell types in vitro.</a> Ann Anat. 193, 181-184 (2011).</li><li>Laib, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spheroid-based+human+endothelial+cell+microvessel+formation+in+vivo.">Spheroid-based human endothelial cell microvessel formation in vivo.</a> Nat Protoc. 4, 1202-1215 (2009).</li><li>Latifi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+tumor+cells+from+the+ascites+of+ovarian+cancer+patients:+molecular+phenotype+of+chemoresistant+ovarian+tumors.">Isolation and characterization of tumor cells from the ascites of ovarian cancer patients: molecular phenotype of chemoresistant ovarian tumors.</a> PLoS One. 7, (2012).</li><li>Davidowitz, R. A., Iwanicki, M. P., Brugge, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+mesothelial+clearance+assay+that+models+the+early+steps+of+ovarian+cancer+metastasis.">In vitro mesothelial clearance assay that models the early steps of ovarian cancer metastasis.</a> J Vis Exp. (60), (2012).</li><li>Iwanicki, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+cancer+spheroids+use+myosin-generated+force+to+clear+the+mesothelium.">Ovarian cancer spheroids use myosin-generated force to clear the mesothelium.</a> Cancer Discov. 1, 144-157 (2011).</li><li>Nishi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+characterization+of+a+steroidogenic+human+granulosa-like+tumor+cell+line,+KGN,+that+expresses+functional+follicle-stimulating+hormone+receptor.">Establishment and characterization of a steroidogenic human granulosa-like tumor cell line, KGN, that expresses functional follicle-stimulating hormone receptor.</a> Endocrinology. 142, 437-445 (2001).</li><li>Xu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+outcome+of+heregulin-induced+activation+of+ovarian+cancer+cells+depends+on+the+relative+levels+of+HER-2+and+HER-3+expression.">The outcome of heregulin-induced activation of ovarian cancer cells depends on the relative levels of HER-2 and HER-3 expression.</a> Clin Cancer Res. 5, 3653-3660 (1999).</li></ol>

Open access fee paid for by ACEA Biosciences, Inc. and MIMR-PHI Institute of Medical Research.

غزو ​​خلايا سرطان المبيض التفاعل مع مجموعة متنوعة من أنواع الخلايا على سطح الصفاق، بما في ذلك الخلايا الليفية، الخلايا الشحمية، والخلايا الظهارية، ويعتقد الاتصالات ثنائية الاتجاه بين الخلايا السرطانية والخلايا البريتوني لتلعب دورا رئيسيا في قيادة عملية النقيلي 2. مرة واحدة يتقن، وبروتوكول الموصوفة هنا هي قابلة للتكيف بسهولة لدراسة هذه التفاعلات داخل المكروية البريتوني، على سبيل المثال، من خلال إضافة السيتوكينات الخارجية، عوامل النمو، أو مثبطات محددة إلى غرف العلوي أو السفلي من لوحة CIM جيدا أو التلاعب الجيني من السرطان أو خطوط الخلايا البريتوني. وعلاوة على ذلك، وهذه الطريقة يمكن استخدامها مع الخلايا السرطانية في المبيض الأساسي المقطوع حديثا من استسقاء الخبيثة و / أو الخلايا الأولية البريتوني للحصول على أفكار المباشر في الإشارات التنظيمية والتفاعلات الخلوية التي تحكم إنشاء الآفة المنتشر داخل التجويف البريتوني <sتصل&gt; 2. استخدام أداة RTCA لقياس القدرة الغازية واحد من الخلايا أو الأجسام الشبه الكروية يقدم العديد من المزايا أكثر من المقايسات نقطة النهاية واحدة التقليدية ويحلل صورة مرور الزمن. يقيس أداة RTCA الغزو الخلوية على فترات محددة باستمرار على مدار مقايسة، والتي يمكن أن تكون ساعات أو أيام. وهذا يتيح تحديد التغيرات في معدل الغزو مع مرور الوقت، والذي يتغلب على القيود المفروضة على المقايسات نقطة النهاية واحدة. على سبيل المثال، ودراسة البيانات الغزو من مختلف خطوط الخلايا السرطانية في نقطة النهاية واحدة (الشكل 2)، على سبيل المثال، 3 ساعة، قد أدت إلى الاستنتاج الخاطئ بأن KGN وOVCA433 الخلايا الغازية كانوا أكثر بكثير من OVCA429 الخلايا. ميزة أخرى لهذه التكنولوجيا هو أن الصك RTCA يقيس التغيرات في مقاومة الكهربائية. وهذا يعني أن فحوصات يمكن تشغيلها دون وصفها الخلايا مع وكيل الخارجية، والتي يمكن أن يكون لها آثار غير مقصودة على كايسي الخليةotype أو وظيفة. هذا يصبح من المهم بشكل خاص عند دراسة خلايا سرطان المبيض الأولية المستمدة من استسقاء الخبيثة، والتي لا بد من الحفاظ على التلاعب إلى أدنى حد ممكن وذلك لتجنب إدخال التغيرات الجزيئية والمظهرية التي لا تعكس في الجسم الحي طبيعتها 2. علاوة على ذلك، استخدام أداة RTCA تمكن جمع البيانات الكمية في الوقت الحقيقي، والذي يتجنب ليس فقط مضيعة للوقت التحليلات المرتبطة الوقت الفاصل بين المجهري ولكن أيضا يمكن تحديد السريع من النوافذ التجريبية الرئيسية للمقايسة الأمثل. هذا هو مفيدة بشكل خاص عند مقارنة آثار مجموعة من العوامل على غزو كروي، قد عوامل مختلفة مثل ممارسة آثارها القصوى في timepoints مختلفة أو مع ملامح مختلفة إلى حد كبير على مر الزمن. على الرغم من أن هذا البروتوكول هو قابل للتعديلات (على سبيل المثال، استخدام مصفوفة مختلفة ECM، مختلف خطوط الخلايا السرطانية، أو مختلفة سل الهدفليرة سورية)، إذا كان ذلك، من المهم أن نلاحظ أن الظروف التجريبية المختلفة يجب أولا أن يكون الأمثل. على سبيل المثال، قبل البدء في الدراسات لغزو كروي، والعدد الأمثل من الخلايا السرطانية / CIM لوحة جيدا يجب أولا يحدده الفحص المعايرة من عدد الخلايا في الثقافة أحادي الطبقة. ثم يستند العدد الأمثل من الأجسام الشبه الكروية لاستخدام لكل بئر على هذا التحليل. على سبيل المثال، في الطريقة الحالية، تتكون الأجسام الشبه الكروية حوالي 3،000 الخلايا كل حين ولدت أولا. إذا معايرات عدد الخلايا الأولية تشير إلى أن 30،000 الخلايا في أحادي الطبقة هي الأمثل للكشف في الغزو ويحلل، ثم تضاف 10 الكروية في لوحة CIM جيدا. علاوة على ذلك، عند إجراء التجارب ثقافة مشتركة، فمن المهم لدراسة السلوكيات من &#39;هدف&#39; أحادي الطبقة خلية على حدة من أجل تحديد ما إذا كانت هذه الخلايا هي بطبيعتها الغازية، وهذا يمكن أن يتغلب على النتائج. في المثال تظاهر، ومطلي الكروية السرطان على قمة monola خلية LP9ريال يمني، مع وبدون FBS تضاف إلى أسفل كذلك جاذب كيميائي. في موازاة ذلك، ومثقف الخلايا LP9 وحدها، تحت كل حالة العلاج. وبالمثل، عند دراسة القدرة الغازية من الخلايا والأجسام الشبه الكروية، فإنه من المهم أيضا لفحص قدراتها المهاجرة وكذلك من أجل التمييز بين السلوكيات اثنين (أي الغزو يتطلب هضم بروتين من حاجز ECM حين يفعل الهجرة لا). للقيام بذلك، بحذف حاجز ECM (خطوات 3.1.1 - 3.1.3) وإجراء الفحص بالتوازي مع حاجز ECM في المكان. يمكن تصحيح &#39;الغزو&#39; الإجراء الأخير إلى &#39;الهجرة&#39; التدبير السابق، إذا رغبت في ذلك. أخيرا، من المهم أن نلاحظ أن المعلومات المكتسبة من التدابير لمقاومة كهربائية محدودة في النطاق: مرة واحدة قد غزت الخلايا في الغرفة السفلي، قد التغيرات في تمسكهم، ونشر، وانتشار على الجانب السفلي من الغشاء المساهمة في التغييرات في مقاومة الجرمية<html> الضربات. وبالتالي، هذه المنهجية هو أكبر قدر من المعلومات عندما تستخدم بالاقتران مع فحوصات أخرى من الجدوى كروي الخلية، التصاق، والهجرة، والتشكل من أجل تقييم شامل السلوكيات خلية كروي. على سبيل المثال، من الناحية المثالية، من أجل التوصل إلى فهم كامل التفاعلات كروي-الظهارية، كما ينبغي تصويرها المشترك الثقافات منفصلة دوري تحت المجهر القياسية المرحلة بحيث التقييمات النوعية من مورفولوجيا كروي والصحة يمكن أن يتم بالتوازي مع المقايسات RTCA الكمي من الغزو. إذا تم تنفيذ الخطوة وضع العلامات اختياري، ومن ثم يمكن تحديد سلوك الخلايا السرطانية واحد تحت المجهر الفلورسنت لأنها تفصيل من كروي والتفاعل مع الخلايا الظهارية غير المسماة. ميزة إضافية من وصفها fluorescently الخلايا السرطانية عندما شارك مع زراعة نوع الخلية الثاني هو أنه من الممكن بعد ذلك للتأكد من أن الخلايا السرطانية فقط قد غزت من خلال الحواجز الخلية وECM. &gt; باختصار، يمثل هذا الأسلوب إنتاجية عالية من التحليل الكمي المبيض غزو كروي سرطان الظهارية وECM الحواجز. من خلال إضافة السيتوكينات الخارجية، عوامل النمو، أو مثبطات محددة إلى غرف العلوي أو السفلي من لوحة CIM جيدا، وهذه الطريقة تمكن السريع، وتحديد العوامل التي تنظم التفاعلات بين الخلايا كروي سرطان المبيض من خلال غزو الظهارية والحواجز على مصفوفة الوقت.

سرطان المبيض لديها أعلى معدل وفيات من جميع سرطانات أمراض النساء 1. في جميع أنحاء العالم، وهناك ~ 230،000 حالات وأكثر من 100،000 حالة وفاة بسبب هذا المرض كل عام 1. ويتم تشخيص معظم المرضى (&gt; 75٪) بعد كان السرطان قد انتشر بالفعل، عندما معقد مزيد من العلاج عن طريق زيادة مقاومة للعلاج الكيميائي والتكهن هو الفقراء 2. المرضى الذين يعانون من III-IV مرحلة المرض المنتشر لديهم معدلات البقاء على قيد الحياة لمدة 5 سنوات من 3٪ فقط 30-40. وبالتالي، هناك حاجة ملحة لفهم أفضل لسلوكيات الخلوية الكامنة المبيض سرطان ورم خبيث من أجل علاج المرض المتقدمة على نحو فعال. النموذج الحالي من ورم خبيث في المبيض سرطان يقترح عدة خطوات في عملية المنتشر، كل الذي يحدث في المكروية متميزة مما يؤثر على سلوك الورم. الانتشار إلى خلايا سرطان المبيض في البداية يتم تسليط من موقع الورم الرئيسي والبقاء على قيد الحياة في nonadherالدولة والأنف والحنجرة في السائل البريتوني كخلايا مفردة أو متعددة الخلايا هياكل ثلاثية الأبعاد، ووصف المجاميع المتعددة الخلايا أو الأجسام الشبه الكروية 2،4،5. الخلايا التي لا تشكل الأجسام الشبه الكروية في تعليق أكثر عرضة للanoikis 2،4،5. الأجسام الشبه الكروية أيضا يحمل زيادة المقاومة لمبحث المعالجة الكيميائية، والمساهمة في مرض المتبقية وتكرار لاحقة من 2،4،5 السرطان. والخطوة الحاسمة الثانية في المبيض الانبثاث السرطان هو الانتقال من المجاميع من مجموعات التعويم الحر للأورام الثانوية التي أنشئت داخل الجدار البريتوني والثرب 5،6. قد تورطت خلية خلية وخلية الركيزة التفاعلات في تشكيل الكلي، البقاء على قيد الحياة، والتمسك المصفوفة خارج الخلية (ECM) التي تنتجها بطانة الظهارية الصفاق 4-11. حتى الآن، ولا يزال الغموض يكتنف هذه العمليات. لتحديد الآليات التي تشارك في نشر سرطان المبيض، يمكن أن تكون الأجسام الشبه الكروية ينايرated من خطوط الخلايا السرطانية التي أنشئت باستخدام أساليب غير ملتصق الثقافة، والحفاظ على الخلايا في التعليق إما بإضافة ميثيل إلى وسائل الإعلام أو عن طريق الثقافة 12،13 زراعة الخلايا على لوحات الالكتروني المرفق انخفاض 2،14. عند تربيتها في هذه الطريقة، وخلايا سرطان المبيض التجمع في مجاميع متعددة الخلايا أو الأجسام الشبه الكروية التي تظهر الخصائص الخلوية والجزيئية والكيمياء الحيوية مشابهة لتلك التي وجدت المجاميع الورم في الجسم الحي 2،14. بعد تشكيل، الكروية يمكن حصاده في وقت لاحق من المتوسط ​​وغير ملتصق replated على مجموعة متنوعة من السطوح الصلبة لمزيد من الدراسات وظيفية. هذا يمثل تقدما على المقايسات في الثقافة أحادي الطبقة، التي لا نموذج بدقة السلوكيات من خلايا سرطان المبيض المتفاقمة ضمن بيئة غير ملتصق مثل السائل داخل الصفاق. القدرة الغازية من الأجسام الشبه الكروية سرطان يمكن تقييمها في المقايسات نقطة النهاية التقليدية في بويدن غرف 2 </suع&gt;، ولكن هذا النهج يمكن أن تكون مضللة، والغزو خلية سرطان المبيض هو عملية ديناميكية مع مرور الوقت. وقد ابتكر طريقة في الوقت الحقيقي الأخيرة باستخدام الوقت الفاصل بين المجهري الفيديو إزالة الخلايا الظهارية من خلال غزو الأجسام الشبه الكروية سرطان المبيض 15،16؛ ومع ذلك، وتحليل البيانات مرور الوقت هو مضيعة للوقت، ويمكن أن يكون ذاتيا. هنا، يوصف لذلك، الأسلوب الكمي السريع لتقييم السلوكيات الغازية من الأجسام الشبه الكروية سرطان المبيض في الوقت الحقيقي. أولا، تم إنشاء نموذج الخلايا الظهارية كروي الذي يمثل مرحلة المبيض ورم خبيث السرطان عندما نعلق الأجسام الشبه الكروية المتعددة الخلايا إلى وغزو بطانة البريتوني لتشكيل أورام ثانوية. ثم منهجية لمحلل في الوقت الحقيقي الخليوي (RTCA، وانظر الجدول مواد للحصول على تفاصيل الشركة) تم تكييفها لإجراء قياسات في الوقت الحقيقي الكمي للقدرات مختلفة الغازية من خطوط الخلايا السرطانية في المبيض كما نمت الكروية واختبارها في هذا النموذج. في RTCA فيstrument، ويتم رصد الاستجابات الخلوية بشكل مستمر على مدار مقايسة، دون الحاجة للتسميات الخارجية، عن طريق قياس التغيرات في مقاومة الكهربائية. لوحات ثقافة المصممة خصيصا لها الذهب المطلي microelectrodes يقع تحت غشاء الصغيرة التي يسهل اختراقها في واجهة بين الغرف العلوية والسفلية من 2 غرف جيدا (&#39;CIM &quot;لوحات). موقع الأقطاب في مجلس النواب يمكن قياس التغيرات في مقاومة الكهربائية كخلايا غزو أو من خلال ECM ECM / حاجز الخلوية. وهي مغلفة واجهة الغشاء بين الغرف 2 من كل لوحة CIM جيدا أولا مع المكون ECM من الفائدة. في النظام النموذجي خلية كروي الظهارية، وهي مغلفة واجهة بطبقة من Matrigel (انظر الجدول مواد للحصول على تفاصيل الشركة)، لتقليد ECM المعقدة الكامنة بطانة الظهارية الصفاق، تليها أحادي الطبقة الظهارية متكدسة من الإنسان &#39; &#39;الخلايا المستهدفة. أخيرا، قبل تشكيلها الأجسام الشبه الكروية سرطان المبيض هي إعلاندائرة التنمية الاقتصادية. خلايا كروي سرطان المبيض يجب أن تغزو بنشاط من خلال طبقة الخلايا المستهدفة ومصفوفة للوصول إلى غرفة أسفل وتغيير قراءات مقاومة الكهربائية. يتم تقييم الخلايا المستهدفة من تلقاء نفسها أيضا للتأكد من أنها لا تغزو من خلال طبقة مصفوفة ومناسبة للاستخدام في هذا الاختبار.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="734">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">xCELLigence RTCA DP Analyser</td>
			<td style="width:291px;">ACEA biosciences</td>
			<td style="width:87px;">RTCA DP</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">xCELLigence CIM plates&#160;</td>
			<td>ACEA biosciences</td>
			<td>5665817001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cell TraceTM CFSE&#160;</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>C34554</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Methylcellulose (4000 centipose)&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M0512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:293px;">Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium (DMEM)</td>
			<td>Life Technologies&#160;</td>
			<td>11966-025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Medium 199&#160;</td>
			<td>Life Technologies&#160;</td>
			<td style="width:87px;">11150067</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Ham&#39;s F-12 Nutrient mix</td>
			<td>Life Technologies&#160;</td>
			<td style="width:87px;">11765062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Epidermal Growth Factor (EGF)</td>
			<td>PeproTech&#160;</td>
			<td>100-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hydrocortisone&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H4001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsin EDTA</td>
			<td style="width:291px;">Gibco-Invitrogen</td>
			<td style="width:87px;">15400-054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">96-well concave culture plate&#160;</td>
			<td>Grenier Bio-One</td>
			<td>650185</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LP9 Human mesothelial cell line</td>
			<td>Coriell Institute for Medical Research&#160;</td>
			<td>AG07086</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Growth Factor-reduced Matrigel matrix</td>
			<td>BD Biosciences&#160;</td>
			<td>354230</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of ovarian cancer spheroid attachment and invasion of mesothelial cells in real time

سرطان المبيض تنتشر من خلال تسليط داخل السائل البريتوني وتشتيت للمواقع البعيدة داخل الصفاق. الثقافات أحادي الطبقة لا نموذج بدقة السلوكيات الخلايا السرطانية ضمن بيئة غير ملتصق، والخلايا السرطانية تجميع بطبيعتها في هياكل متعددة الخلايا التي تساهم في عملية المنتشر عن طريق ربط لوغزو بطانة البريتوني لتشكيل أورام ثانوية. لنمذجة هذه المرحلة الهامة من ورم خبيث في المبيض السرطان، وحدات متعددة الخلايا، أو الأجسام الشبه الكروية، يمكن أن تتولد من المبيض خطوط الخلايا السرطانية التي أنشئت في ظل ظروف غير ملتصق المحافظة. لتقليد المكروية البريتوني عن طريق الخلايا السرطانية في الجسم الحي واجه، تم إنشاء نموذج التعاون ثقافة كروي-الظهارية التي بريفورميد ومطلي الكروية على رأس أحادي الطبقة الظهارية خلايا الإنسان، شكلت على مدى حاجز المصفوفة خارج الخلية. تم تطويرها باستخدام أساليب ثم محلل الخلية في الوقت الحقيقي لإجراء الحقيقي الكميقياسات وقت القدرة الغازية من مختلف خطوط الخلايا السرطانية في المبيض كما نمت الكروية. هذا النهج يتيح للقياس المستمر للغزو على مدى فترات طويلة من الزمن، والتي لديها العديد من المزايا أكثر من المقايسات نقطة النهاية التقليدية ويحلل أكثر شاقة صورة مجهرية الوقت الحقيقي. باختصار، وهذه الطريقة تمكن السريع، وتحديد العوامل التي تنظم التفاعلات بين الخلايا كروي سرطان المبيض من خلال غزو الظهارية ومصفوفة الحواجز مع مرور الوقت.

يمكن أن تتولد الأجسام الشبه الكروية سرطان المبيض من أنواع عديدة من خطوط الخلايا عن طريق زرع لهم في تعليق أو عن طريق حصاد الخلايا السرطانية الأولية من استسقاء الخبيثة 2،14. هنا اثنين من خطوط الخلايا السرطانية في المبيض الظهاري، وOVCA433 OVCA429، وعلى خط ورم الخلايا الحبيبية المبيض، KGN، وقد استخدمت لتوليد الأجسام الشبه الكروية (الشكل 1A). في هذه الطريقة، والخلايا المستزرعة في آبار U-القاع بينما علقت في وسائل الإعلام التي أحرز لزجة بإضافة ميثيل. في ظل هذه الظروف، فإن العديد من خلايا سرطان المبيض تظهر القدرة الكامنة لتجميع لتشكيل الأجسام الشبه الكروية 13. الثقافة بين عشية وضحاها التالية معلقة في ميثيل / وسائل الإعلام، وجميع خطوط الخلايا الثلاث شكلت هياكل كروي مضغوط من حوالي 400-500 ميكرون في القطر (الشكل 1A). وفي الوقت نفسه، يتم إعداد لوحة RTCA CIM، أولا عن طريق طلاء واجهة غشاء يسهل اختراقها مع مصفوفة ثم أحادي الطبقة متموجة من مس الإنسانخلايا othelial (الشكل 1B). ثم يتم نقلها مرة واحدة شكلت، الكروية لوحة CIM المعدة. ومطلي الأجسام الشبه الكروية سرطان المقطوع على رأس أحادي الطبقة LP9 وتقييمها كما هو موضح أدناه. تؤخذ الصور تحت المجهر المرحلة القياسية (أو تحت المجهر الفلورسنت، وإذا تبع الخطوة وضع العلامات الخلية اختياري) الثقافات الموازية دوريا للمساعدة في تفسير البيانات RTCA (الشكل 1C). فمن بالمعلومات لتقييم كل من المستوى القاعدي من غزو خط الخلايا السرطانية، فضلا عن الغزو التي يسببها جاذب كيميائي. عادة، يتم قياس القاعدية الغازية بإضافة الإدارة المستدامة للغابات في كل من الغرف العلوية والسفلية. وسائل الإعلام كاملة (10٪ FBS)، والذي يحتوي على العديد من chemoattractants المحتملة، ويستخدم في المثال الحالي لدراسة &#39;التي يسببها جاذب كيميائي&#39; الغزو (الشكل 2). أكدت دراسات موازية للخلايا الظهارية LP9 وحدها أن هذه الخلايا هي الحد الأدنى فيvasive كانت أكثر من 2 أيام تحت إما القاعدية أو &quot;جاذب كيميائي &#39;الظروف التي يسببها وبالتالي نوع من الخلايا جيدة لاستخدامها في المقايسات شارك في الثقافة مع خلايا سرطان المبيض (أرقام 2A و 2B). في المقابل، الأجسام الشبه الكروية سرطان المبيض إنشاؤها باستخدام أي من خطوط الخلايا ثلاثة أظهرت القدرة على غزو نحو جاذب كيميائي (FBS) (الشكلان 2A-2C). والميزة الرئيسية لاستخدام RTCA الصكوك في الوقت الحقيقي على المقايسات نقطة النهاية التقليدية هي أن التغيرات في سلوك الخلية / كروي يمكن قياسها كميا مع مرور الوقت. على الفحص 2 يوم، KGN، OVCA429، وخطوط الخلايا OVCA433 جميع معارضها القدرة على غزو نحو جاذب كيميائي (المشار إليها عن طريق زيادة مؤشرات الخلية) القاعدية ولكن مستويات منخفضة من الغزو (الشكل 2C). خطوط الخلايا أظهرت معدلات مماثلة من الغزو، كما يتبين من المنحدرات موازية للمنحنيات (الشكل 2C)؛ ومع ذلك، أظهرت منحنى OVCA429 على الخط المقارب العليا أعلى،التي أشارت إلى أقصى مستوى أعلى من الغزو بالمقارنة مع خطوط الخلايا الأخرى. وعلاوة على ذلك، وخطوط الخلايا عرضت الاختلافات في اوقاتها لبداية الغزو، مع الخلايا KGN الغازية بسرعة الحواجز الخلية ومصفوفة وOVCA433 وOVCA429 الخلايا أخذ 3-5X تعد لغزو، على التوالي (الشكل 2D). الأهم من ذلك، كانت تصرفاتهم في بداية الغزو لا التنبؤية لقدراتها الشاملة للغزو (أرقام 2C و 2D). هذا يشير إلى القدرات الكامنة مختلفة من خطوط الخلايا السرطانية ولكن أيضا قد تشير إلى أن عوامل مختلفة قد تنظم السلوكيات المبكرة والمتأخرة الغازية من الأجسام الشبه الكروية. <img alt="الشكل 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51655/51655fig1highres.jpg" width="500" /> الشكل 1 جيل كروي وطراز التجريبية إعداد:. أنا<html> السحراء تحت المجهر الطوري من الأجسام الشبه الكروية في تشكيل ميثيل / وسائل الإعلام (أعلى) وخط خلية مطابقة نمت كما أحادي الطبقة (القاع) ب:. تخطيطي يبين RTCA 2 غرف CIM لوحة مجموعة جيدة تصل، التي شكلت في مرحلة ما قبل سرطان المبيض ومطلي الكروية على رأس أحادي الطبقة من LP9 الظهارية طبقة / مصفوفة حاجز في مجلس الشيوخ وسائل الإعلام ± FBS باعتبارها جاذب كيميائي يتم إضافتها إلى مجلس النواب. الأقطاب الكهربائية تحت واجهة التدبير 2 غرف زيادة مقاومة الكهربائية على أنها أكثر الخلايا غزو عبر الحواجز إلى انخفاض غرفة C: صور الأجسام الشبه الكروية KGN على رأس أحادي الطبقة LP9 تحت المجهر النقيض من المرحلة (يسار) أو المجهري مضان (يمين). أشرطة النطاق = 100 ميكرومتر. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51655/51655fig1highres.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> FO: المحافظة على together.within صفحة = &quot;دائما&quot;&gt; <img alt="الرقم 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51655/51655fig2highres.jpg" width="500" /> . الرقم 2 في الوقت الحقيقي البيانات الغزو المبيض كروي سرطان A - B: نتائج الممثل من مقايسة الغزو RTCA أجريت مع وبدون FBS في غرفة أسفل لوحة CIM جيدا. تتم مقارنة غزو الخلايا إلى خلايا الظهارية KGN LP9. وتظهر النتائج على النحو مؤشر متوسط ​​± SD خلية من الآبار ثلاث نسخ في timepoint ساعة 24 (A) وعلى مدى فترة فحص اثنين يوم كامل (B) C - D: مقارنة بين القدرات الغازية من KGN، OVCA429، وخلية OVCA433 خطوط صورت على مدى فترة 24 ساعة (C) وبطريقة أكثر تفصيلا خلال فترة زمنية 2.5 ساعة (D).

Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Ovarian Cancer Spheroid Attachment and Invasion of Mesothelial Cells in Real Time at JoVE.com

Assessment of Ovarian Cancer Spheroid Attachment and Invasion of Mesothelial Cells in Real Time

غزو ​​الخلايا السرطانية في المبيض في بطانة الظهارية الصفاق هو عملية ديناميكية مع مرور الوقت. الاستفادة من وجود محلل في الوقت الحقيقي، والقدرة الغازية من خلايا سرطان المبيض في زنزانة نموذج التعاون ثقافة كروي-الظهارية يمكن قياس مدى فترات زمنية طويلة، وتوفير نظرة ثاقبة العوامل التي تنظم عملية النقيلي.

تقييم سرطان المبيض كروي مرفق وغزو الخلايا الظهارية في الوقت الحقيقي

Ovarian cancers metastasize by shedding into the peritoneal fluid and dispersing to distal sites within the peritoneum. Monolayer cultures do not ...

assessment-ovarian-cancer-spheroid-attachment-invasion-mesothelial

Research

JoVE Journal

Medicine

17.2K Views.  MIMR-PHI Institute of Medical Research.  غزو ​​الخلايا السرطانية في المبيض في بطانة الظهارية الصفاق هو عملية ديناميكية مع مرور الوقت. الاستفادة من وجود محلل في الوقت الحقيقي، والقدرة الغازية من خلايا سرطان المبيض في زنزانة نموذج التعاون ثقافة كروي-الظهارية يمكن قياس مدى فترات ?...

Video: Assessment of Ovarian Cancer Spheroid Attachment and Invasion of Mesothelial Cells in Real Time

A Real-time Electrical Impedance Based Technique to Measure Invasion of Endothelial Cell Monolayer by Cancer Cells

Metastatic dissemination of malignant cells requires degradation of basement membrane, attachment of tumor cells to vascular endothelium, retraction of endothelial junctions and finally invasion and migration of tumor cells through the endothelial layer to enter the bloodstream as a means of transport to distant sites in the host1-3. Once in the circulatory system, cancer cells adhere to capillary walls and extravasate to the surrounding tissue to form metastatic tumors4,5. The various components of tumor cell-endothelial cell interaction can be replicated in vitro by challenging a monolayer of human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) with cancer cells. Studies performed with electron and phase-contrast microscopy suggest that the in vitro sequence of events fairly represent the in vivo metastatic process6. Here, we describe an electrical-impedance based technique that monitors and quantifies in real-time the invasion of endothelial cells by malignant tumor cells.
Giaever and Keese first described a technique for measuring fluctuations in impedance when a population of cells grow on the surface of electrodes7,8. The xCELLigence instrument, manufactured by Roche, utilizes a similar technique to measure changes in electrical impedance as cells attach and spread in a culture dish covered with a gold microelectrode array that covers approximately 80% of the area on the bottom of a well. As cells attach and spread on the electrode surface, it leads to an increase in electrical impedance9-12. The impedance is displayed as a dimensionless parameter termed cell-index, which is directly proportional to the total area of tissue-culture well that is covered by cells. Hence, the cell-index can be used to monitor cell adhesion, spreading, morphology and cell density.
The invasion assay described in this article is based on changes in electrical impedance at the electrode/cell interphase, as a population of malignant cells invade through a HUVEC monolayer (Figure 1). The disruption of endothelial junctions, retraction of endothelial monolayer and replacement by tumor cells lead to large changes in impedance. These changes directly correlate with the invasive capacity of tumor cells, i.e., invasion by highly aggressive cells lead to large changes in cell impedance and vice versa. This technique provides a two-fold advantage over existing methods of measuring invasion, such as boyden chamber and matrigel assays: 1) the endothelial cell-tumor cell interaction more closely mimics the in vivo process, and 2) the data is obtained in real-time and is more easily quantifiable, as opposed to end-point analysis for other methods.

This article describes an in vitro technique for monitoring cancer cells invading through a monolayer of endothelial cells. The data is acquired in real-time as a function of changes in impedance on the surface of electrodes at the well bottom.

في الوقت الحقيقي المعاوقة الكهربائية تقنية تستند إلى قياس غزو أحادي الطبقة الخلية البطانية من قبل خلايا السرطان

Metastatic dissemination of malignant cells requires degradation of basement membrane, attachment of tumor cells to vascular endothelium, retraction of ...

Evaluation of Nanoparticle Uptake in Tumors in Real Time Using Intravital Imaging

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle uptake in tumors at the microscopic level1,2,3, highlighting the utility of a suitable xenograft model in which to perform detailed uptake analyses. Here, we use high-resolution intravital imaging to evaluate nanoparticle uptake in human tumor xenografts in a modified, shell-less chicken embryo model. The chicken embryo model is particularly well-suited for these in vivo analyses because it supports the growth of human tumors, is relatively inexpensive and does not require anesthetization or surgery 4,5. Tumor cells form fully vascularized xenografts within 7 days when implanted into the chorioallantoic membrane (CAM) 6. The resulting tumors are visualized by non-invasive real-time, high-resolution imaging that can be maintained for up to 72 hours with little impact on either the host or tumor systems. Nanoparticles with a wide range of sizes and formulations administered distal to the tumor can be visualized and quantified as they flow through the bloodstream, extravasate from leaky tumor vasculature, and accumulate at the tumor site. We describe here the analysis of nanoparticles derived from Cowpea mosaic virus (CPMV) decorated with near-infrared fluorescent dyes and/or polyethylene glycol polymers (PEG) 7, 8, 9,10,11. Upon intravenous administration, these viral nanoparticles are rapidly internalized by endothelial cells, resulting in global labeling of the vasculature both outside and within the tumor7,12. PEGylation of the viral nanoparticles increases their plasma half-life, extends their time in the circulation, and ultimately enhances their accumulation in tumors via the enhanced permeability and retention (EPR) effect 7, 10,11. The rate and extent of accumulation of nanoparticles in a tumor is measured over time using image analysis software. This technique provides a method to both visualize and quantify nanoparticle dynamics in human tumors.

We present a novel approach to quantify nanoparticle localization in the vasculature of human xenografted tumors using dynamic, real-time intravital imaging in an avian embryo model.

تقييم امتصاص الجسيمات النانوية في الأورام في الوقت الحقيقي باستخدام التصوير Intravital

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle ...

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient management strategies. Orthotopic mouse models of oral cancer have been developed to facilitate the study of factors that impact invasion and serve as model system for evaluating anti-tumor therapeutics. In these systems, visualization of disseminated tumor cells within oral cavity tissues has typically been conducted by either conventional histology or with in vivo bioluminescent methods. A primary drawback of these techniques is the inherent inability to accurately visualize and quantify early tumor cell invasion arising from the primary site in three dimensions. Here we describe a protocol that combines an established model for squamous cell carcinoma of the tongue (SCOT) with two-photon imaging to allow multi-vectorial visualization of lingual tumor spread. The OSC-19 head and neck tumor cell line was stably engineered to express the F-actin binding peptide LifeAct fused to the mCherry fluorescent protein (LifeAct-mCherry). Fox1nu/nu mice injected with these cells reliably form tumors that allow the tongue to be visualized by ex-vivo application of two-photon microscopy. This technique allows for the orthotopic visualization of the tumor mass and locally invading cells in excised tongues without disruption of the regional tumor microenvironment. In addition, this system allows for the quantification of tumor cell invasion by calculating distances that invaded cells move from the primary tumor site. Overall this procedure provides an enhanced model system for analyzing factors that contribute to SCOT invasion and therapeutic treatments tailored to prevent local invasion and distant metastatic spread. This method also has the potential to be ultimately combined with other imaging modalities in an in vivo setting.

A comprehensive overview of the techniques involved in generating a mouse model of oral cancer and quantitative monitoring of tumor invasion within the tongue through multi-photon microscopy of labeled cells is presented. This system can serve as a useful platform for the molecular assessment and drug efficacy of anti-invasive compounds.

متعدد الفوتون التصوير من غزو خلايا الورم في الفأر نموذج مثلي الفم سرطان الخلايا الحرشفية

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Spheroid Assay to Measure TGF-&#946;-induced Invasion

TGF-&beta; has opposing roles in breast cancer progression by acting as a tumor suppressor in the initial phase, but stimulating invasion and metastasis at later stage1,2. Moreover, TGF-&beta; is frequently overexpressed in breast cancer and its expression correlates with poor prognosis and metastasis 3,4. The mechanisms by which TGF-&beta; induces invasion are not well understood.
TGF-&beta; elicits its cellular responses via TGF-&beta; type II (T&beta;RII) and type I (T&beta;RI) receptors. Upon TGF-&beta;-induced heteromeric complex formation, T&beta;RII phosphorylates the T&beta;RI. The activated T&beta;RI initiates its intracellular canonical signaling pathway by phosphorylating receptor Smads (R-Smads), i.e. Smad2 and Smad3. These activated R-Smads form heteromeric complexes with Smad4, which accumulate in the nucleus and regulate the transcription of target genes5. In addition to the previously described Smad pathway, receptor activation results in activation of several other non-Smad signaling pathways, for example Mitogen Activated Protein Kinase (MAPK) pathways6.
To study the role of TGF-&beta; in different stages of breast cancer, we made use of the MCF10A cell system. This system consists of spontaneously immortalized MCF10A1 (M1) breast epithelial cells7, the H-RAS transformed M1-derivative MCF10AneoT (M2), which produces premalignant lesions in mice8, and the M2-derivative MCF10CA1a (M4), which was established from M2 xenografts and forms high grade carcinomas with the ability to metastasize to the lung9. This MCF10A series offers the possibility to study the responses of cells with different grades of malignancy that are not biased by a different genetic background.
For the analysis of TGF-&beta;-induced invasion, we generated homotypic MCF10A spheroid cell cultures embedded in a 3D collagen matrix in vitro (Fig 1). Such models closely resemble human tumors in vivo by establishing a gradient of oxygen and nutrients, resulting in active and invasive cells on the outside and quiescent or even necrotic cells in the inside of the spheroid10. Spheroid based assays have also been shown to better recapitulate drug resistance than monolayer cultures11. This MCF10 3D model system allowed us to investigate the impact of TGF-&beta; signaling on the invasive properties of breast cells in different stages of malignancy.

Spheroid Assay to Measure TGF-&amp;#946;-induced Invasion

An assay to quantitatively measure Transforming Growth Factor (TGF)-&#x03B2;-induced invasion in 3-dimensional collagen gels is described. This assay takes advantage of the MCF10A series of cell lines, which represent different stages of breast cancer development. This method can be adopted to be used with other cell lines and might be used to investigate other potential activators or inhibitors of invasion.

كروي الفحص لقياس TGF - β بفعل الغزو

TGF-&beta; has opposing roles in breast cancer progression by acting as a tumor suppressor in the initial phase, but stimulating invasion and metastasis ...

In vitro Mesothelial Clearance Assay that Models the Early Steps of Ovarian Cancer Metastasis

Ovarian cancer is the fifth leading cause of cancer related deaths in the United States1. Despite a positive initial response to therapies, 70 to 90 percent of women with ovarian cancer develop new metastases, and the recurrence is often fatal2. It is, therefore, necessary to understand how secondary metastases arise in order to develop better treatments for intermediate and late stage ovarian cancer. Ovarian cancer metastasis occurs when malignant cells detach from the primary tumor site and disseminate throughout the peritoneal cavity. The disseminated cells can form multicellular clusters, or spheroids, that will either remain unattached, or implant onto organs within the peritoneal cavity3 (Figure 1, Movie 1). 
All of the organs within the peritoneal cavity are lined with a single, continuous, layer of mesothelial cells4-6 (Figure 2). However, mesothelial cells are absent from underneath peritoneal tumor masses, as revealed by electron micrograph studies of excised human tumor tissue sections3,5-7 (Figure 2). This suggests that mesothelial cells are excluded from underneath the tumor mass by an unknown process. 
Previous in vitro experiments demonstrated that primary ovarian cancer cells attach more efficiently to extracellular matrix than to mesothelial cells8, and more recent studies showed that primary peritoneal mesothelial cells actually provide a barrier to ovarian cancer cell adhesion and invasion (as compared to adhesion and invasion on substrates that were not covered with mesothelial cells)9,10. This would suggest that mesothelial cells act as a barrier against ovarian cancer metastasis. The cellular and molecular mechanisms by which ovarian cancer cells breach this barrier, and exclude the mesothelium have, until recently, remained unknown. 
Here we describe the methodology for an in vitro assay that models the interaction between ovarian cancer cell spheroids and mesothelial cells in vivo (Figure 3, Movie 2). Our protocol was adapted from previously described methods for analyzing ovarian tumor cell interactions with mesothelial monolayers8-16, and was first described in a report showing that ovarian tumor cells utilize an integrin &#x2013;dependent activation of myosin and traction force to promote the exclusion of the mesothelial cells from under a tumor spheroid17. This model takes advantage of time-lapse fluorescence microscopy to monitor the two cell populations in real time, providing spatial and temporal information on the interaction. The ovarian cancer cells express red fluorescent protein (RFP) while the mesothelial cells express green fluorescent protein (GFP). RFP-expressing ovarian cancer cell spheroids attach to the GFP-expressing mesothelial monolayer. The spheroids spread, invade, and force the mesothelial cells aside creating a hole in the monolayer. This hole is visualized as the negative space (black) in the GFP image. The area of the hole can then be measured to quantitatively analyze differences in clearance activity between control and experimental populations of ovarian cancer and/ or mesothelial cells. This assay requires only a small number of ovarian cancer cells (100 cells per spheroid X 20-30 spheroids per condition), so it is feasible to perform this assay using precious primary tumor cell samples. Furthermore, this assay can be easily adapted for high throughput screening.

In vitro Mesothelial Clearance Assay that Models the Early Steps of Ovarian Cancer Metastasis

The mesothelial clearance assay described here takes advantage of fluorescently labeled cells and time-lapse video microscopy to visualize and quantitatively measure the interactions of ovarian cancer multicellular spheroids and mesothelial cell monolayers. This assay models the early steps of ovarian cancer metastasis.

في الفحص المختبري التخليص الظهارية النماذج أن الخطوات في وقت مبكر من الإنبثاث سرطان المبيض

Ovarian cancer is the fifth leading cause of cancer related deaths in the United States1. Despite a positive initial response to therapies, 70 to 90 ...

Cerebrospinal Fluid MicroRNA Profiling Using Quantitative Real Time PCR

MicroRNAs (miRNAs) constitute a potent layer of gene regulation by guiding RISC to target sites located on mRNAs and, consequently, by modulating their translational repression. Changes in miRNA expression have been shown to be involved in the development of all major complex diseases. Furthermore, recent findings showed that miRNAs can be secreted to the extracellular environment and enter the bloodstream and other body fluids where they can circulate with high stability. The function of such circulating miRNAs remains largely elusive, but systematic high throughput approaches, such as miRNA profiling arrays, have lead to the identification of miRNA signatures in several pathological conditions, including neurodegenerative disorders and several types of cancers. In this context, the identification of miRNA expression profile in the cerebrospinal fluid, as reported in our recent study, makes miRNAs attractive candidates for biomarker analysis.
There are several tools available for profiling microRNAs, such as microarrays, quantitative real-time PCR (qPCR), and deep sequencing. Here, we describe a sensitive method to profile microRNAs in cerebrospinal fluids by quantitative real-time PCR. We used the Exiqon microRNA ready-to-use PCR human panels I and II V2.R, which allows detection of 742 unique human microRNAs. We performed the arrays in triplicate runs and we processed and analyzed data using the GenEx Professional 5 software.
Using this protocol, we have successfully profiled microRNAs in various types of cell lines and primary cells, CSF, plasma, and formalin-fixed paraffin-embedded tissues.

We describe a protocol of real time PCR to profile microRNAs in the cerebrospinal fluid (CSF). With the exception of RNA extraction protocols, the procedure can be extended to RNA extracted from other body fluids, cultured cells, or tissue specimens.

النخاعي السوائل عن طريق الرنا الميكروي التنميط الكمي في الوقت الحقيقي PCR

MicroRNAs (miRNAs) constitute a potent layer of gene regulation by guiding RISC to target sites located on mRNAs and, consequently, by modulating their ...

Method for Obtaining Primary Ovarian Cancer Cells From Solid Specimens

Reliable tools for investigating ovarian cancer initiation and progression are urgently needed. While the use of ovarian cancer cell lines remains a valuable tool for understanding ovarian cancer, their use has many limitations. These include the lack of heterogeneity and the plethora of genetic alterations associated with extended in vitro passaging.&#160;Here we describe a method that allows for rapid establishment of primary ovarian cancer cells form solid clinical specimens collected at the time of surgery. The method consists of subjecting clinical specimens to enzymatic digestion for 30 min. The isolated cell suspension is allowed to grow and can be used for downstream application including drug screening. The advantage of primary ovarian cancer cell lines over established ovarian cancer cell lines is that they are representative of the original specific clinical specimens they are derived from and can be derived from different sites whether primary or metastatic ovarian cancer.

This study describes a detailed method for isolation and characterization of primary ovarian cancer cells from solid clinical specimens. Ovarian cancer clinical specimens are subjected to enzymatic digestion to obtain viable, fibroblast-free epithelial ovarian cancer (EOC) cells highly suitable for downstream applications.

طريقة الحصول على خلايا سرطان المبيض الابتدائية من العينات الصلبة

Reliable tools for investigating ovarian cancer initiation and progression are urgently needed. While the use of ovarian cancer cell lines remains a ...

Enrichment for Chemoresistant Ovarian Cancer Stem Cells from Human Cell Lines

Cancer stem cells (CSCs) are defined as a subset of slow cycling and undifferentiated cells that divide asymmetrically to generate highly proliferative, invasive, and chemoresistant tumor cells. Therefore, CSCs are an attractive population of cells to target therapeutically. CSCs are predicted to contribute to a number of types of malignancies including those in the blood, brain, lung, gastrointestinal tract, prostate, and ovary. Isolating and enriching a tumor cell population for CSCs will enable researchers to study the properties, genetics, and therapeutic response of CSCs. We generated a protocol that reproducibly enriches for ovarian cancer CSCs from ovarian cancer cell lines (SKOV3 and OVCA429). Cell lines are treated with 20 &#181;M cisplatin for 3 days. Surviving cells are isolated and cultured in a serum-free stem cell media containing cytokines and growth factors. We demonstrate an enrichment of these purified CSCs by analyzing the isolated cells for known stem cell markers Oct4, Nanog, and Prom1 (CD133) and cell surface expression of CD177 and CD133. The CSCs exhibit increased chemoresistance. This method for isolation of CSCs is a useful tool for studying the role of CSCs in chemoresistance and tumor relapse.

Cancer stem cells (CSCs) are&#160;implicated in tumor relapse due to chemoresistance. We have optimized a protocol for selection and expansion of CSCs from ovarian cancer cell lines. By treating cells with the chemotherapeutic cisplatin and culturing&#160;in a stem cell promoting media we enrich for non-adherent CSC cultures.

لتخصيب Chemoresistant سرطان المبيض الخلايا الجذعية من خطوط الخلايا البشرية

Cancer stem cells (CSCs) are defined as a subset of slow cycling and undifferentiated cells that divide asymmetrically to generate highly proliferative, ...

In vitro Enrichment of Ovarian Cancer Tumor-initiating Cells

Evidence suggests that small subpopulations of tumor cells maintain a unique self-renewing and differentiation capacity and may be responsible for tumor initiation and/or relapse. Clarifying the mechanisms by which these tumor-initiating cells (TICs) support tumor formation and progression could lead to the development of clinically favorable therapies. Ovarian cancer is a heterogeneous and highly recurrent disease. Recent studies suggest TICs may play an important role in disease biology. We have identified culture conditions that enrich for TICs from ovarian cancer cell lines. Growing either adherent cells or non-adherent &#8216;floater&#8217; cells in a low attachment plate with serum free media in the presence of growth factors supports the propagation of ovarian cancer TICs with stem cell markers (CD133 and ALDH activity) and increased tumorigenicity without the need to physically separate the TICs from other cell types within the culture. Although the presence of floater cells is not common for all cell lines, this population of cells with innate low adherence may have high tumorigenic potential.Compared to adherent cells grown in the presence of serum, TICs readily form spheres, are significantly more tumorigenic in mice, and express putative stem cell markers. The conditions are easy to establish in a timely manner and can be used to study signaling pathways important for maintaining stem characteristics, and to identify drugs or combinations of drugs targeting TICs. The culture conditions described herein are applicable for a variety of ovarian cancer cells of epithelial origin and will be critical in providing new information about the role of TICs in tumor initiation, progression, and relapse.

In vitro Enrichment of Ovarian Cancer Tumor-initiating Cells

Tumor-initiating cells (TICs) may represent a viable therapeutic target for the treatment of ovarian cancer, a highly recurrent and fatal disease. We present a protocol for culture conditions that enrich for this highly tumorigenic population of cells.

في التخصيب في المختبر من خلايا سرطان المبيض-الشروع ورم

Evidence suggests that small subpopulations of tumor cells maintain a unique self-renewing and differentiation capacity and may be responsible for tumor ...

Three-Dimensional (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in particular (e.g., brain tumors such as glioblastoma multiforme and squamous cell carcinoma of the head and neck &#8211; SCCHN) it is a cause of severe morbidity and can be life-threatening even in the absence of distant metastases. In addition, cancers which have relapsed following treatment unfortunately often present with a more aggressive phenotype. Therefore, there is an opportunity to target the process of invasion to provide novel therapies that could be complementary to standard anti-proliferative agents. Until now, this strategy has been hampered by the lack of robust, reproducible assays suitable for a detailed analysis of invasion and for drug screening. Here we provide a simple micro-plate method (based on uniform, self-assembling 3D tumor spheroids) which has great potential for such studies. We exemplify the assay platform using a human glioblastoma cell line and also an SCCHN model where the development of resistance against targeted epidermal growth factor receptor (EGFR) inhibitors is associated with enhanced matrix-invasive potential. We also provide two alternative methods of semi-automated quantification: one using an imaging cytometer and a second which simply requires standard microscopy and image capture with digital image analysis.

Three-Dimensional 3D Tumor Spheroid Invasion Assay

Invasion of surrounding normal tissues is a defining characteristic of malignant tumors. We provide here a simple, semi-automated micro-plate assay of invasion into a natural 3D biomatrix that has been exemplified with a number of models of advanced human cancers.

ثلاثي الأبعاد (3D) ورم الجسم الشبه الكروي الغزو الفحص

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in ...