Saremco Dental Switzerland and Olympus Microsystems France Companies are gratefully acknowledged for their financial support. Saremco Dental is also acknowledged for the generous donation of the dental composites ELS extra low shrinkage. The authors also wish to express their appreciation to Dr Simon Banks from the department of Chemistry (University College London) for his assistance with English revision.

ويتكون البروتوكول من ثلاث خطوات رئيسية: تتألف الخطوة الأولى في إعداد خلاصة المركب في وسائل الإعلام الثقافة. اهتمامات الثانية الابتدائية اللثة الخلايا الليفية الإنسان (HGF) زراعة الخلايا، وخلايا الاتصال مع مقتطفات مركبة وتلطيخ الخلية؛ تتكون الخطوة الثالثة من التصوير متحد البؤر وتحليل الإشارات الفلورسنت. لأنسجة اللثة أخذ، وتمت الموافقة على البروتوكول في الامتثال للتشريعات الفرنسية والموافقة المستنيرة واللجنة الأخلاقية المحلية. 1. المركب مقتطفات التحضير استخدام Dulbecco لتعديل النسر المتوسط ​​(DMEM) باعتبارها وسيلة شطف. تأكد من أن النسبة بين المساحة السطحية للعينات وحجم استخراج المتوسطة هي في أدنى مستوى متطلبات ISO 10993/12. ومؤخرا وصفت الإجراء 11 و بإيجاز فيما يلي: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشكيل عينات كروية من مركب غير مخمر الأسنان باستخدام قبضة مفصلإيه. حجم حامل هو في دائرة نصف قطرها 2 مم، وهو ما يتفق مع عمق المعالجة ينصح عموما في العلاج السريري عن طريق الفم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الآبار لوحة، كل منها يحتوي على 1 مل من مستنبت (DMEM)، مع مزيج 5٪ من البنسلين / الستربتومايسين و 1٪ من الأمفوتريسين لكن دون مصل بقري جنيني (FBS). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عينات علاج داخل DMEM المتوسط ​​تحتوي أيضا باستخدام مصباح ضوء LED مع 1070 ميغاواط سم -2 كثافة (λ = 465-475 نانومتر) لمدة 40 ثانية. تأكد أن المسافة بين طرف علاج والعينات هي في حدود 0.5 مم. استخدام هذا الوضع علاج لمحاكاة اتصال مؤقت بين الأسنان والأسنان مركب غير مخمر. في الحالة السريرية، يحدث الاتصال عندما يتم وضع مركب التصالحية في تجويف الفم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان عينات (المركبة العينات في DMEM المتوسطة) عند 37 درجة مئوية تحت جو مرطب 5٪ CO 2 في الهواء. احتضان DMEM المتوسطة (بدون عينات مركبة) للخلايا السيطرة في نفس الظروف. </li></ol> 2. HGF خلية ثقافة، مركب مقتطفات اختبار وخلايا تلطيخ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نمو وصيانة مزارع الخلايا عزل الخلايا الليفية الإنسان من اللثة صحية خزعات الأنسجة اللثوية من المرضى التي اتخذت خلال الاستخراج تقويم الأسنان الروتينية. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> زراعة الخلايا الليفية اللثة الإنسان في DMEM في حضور 10٪ FBS، 5٪ البنسلين / الستربتوميسين و 1٪ الامفوتريسين B. الحفاظ على الخلايا عند 37 درجة مئوية في حاضنة تحت جو مرطب من CO 2 5٪ في الهواء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> متوسطة تغير كل 3 أيام، ومرور الخلايا كل 5 أيام. بعد التوصل confluency، وخلايا الحصاد قبل trypsinization. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلايا الطرد المركزي في 90 x ج لمدة 5 دقائق واعادة تعليق لها على المديين المتوسط ​​الثقافة. عد الخلايا مع عداد الخلايا صولجان يده الآلي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعليق خلية البذور في مناطق ذات كثافة خلية من 2.5 × 10 4 خلية / مل في نظام الشرائح غرفة. السماح للحضانة الخلايا بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية في جو من 5٪. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة مقتطفات المركبة إلى خلايا في الثقافة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استبدال وسائل الإعلام من بئرين من الشريحة الغرفة بنسبة 1 مل من مقتطفات مركبة اختبار (بعد 24 ساعة من الحضانة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على اثنين من الآبار المتبقية (خلايا السيطرة) في نفس الظروف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان الشريحة غرفة تحتوي على أربعة آبار في 37 درجة مئوية في حاضنة، في ظل جو مرطب 5٪ CO 2 في الهواء. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تلطيخ الفلورسنت استخدام لايف / الميت السمية الخلوية وصمة عار للخلايا حقيقية النواة وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. ملاحظة: توفر مجموعة من اللونين الفلورسنت فحص سريع لتحديد الجدوى من الخلايا في عدد السكان على أساس سلامة غشاء البلازما والنشاط استريز. وصمة عار تميز على الهواء مباشرة من الخلايا التالفة من خلال وصفها في وقت واحد مع الأخضر الفلورسنت Calcein-AM للإشارة إلى النشاط استريز داخل الخلايا الحمراء وفلوري إيثيديوم homodimer-1 (EthD-1) للإشارة إلى فقدان MEMBRANالبريد النزاهة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد محلول العمل من اثنين من الكواشف وصمة عار يحتوي على 2 ميكرومتر من Calcein AM و 4 ميكرومتر EthD-1 (تركيز النهائي عنها لتكون مناسبة لتلطيخ الخلايا الليفية). إضافة وصمة عار على الخلايا الملتصقة مثقف في وجود أو عدم وجود مقتطفات المركبة المحدد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مراقبة مباشرة وبسرعة على السكان الخلية الملون على الأقل 15 دقيقة بعد تلطيخ وخلال الوقت الفاصل بين التصوير. لا الطرد المركزي وليس صورة ذهنية الخلايا الملون. </li></ol></li></ol> 3. متحد البؤر الوقت الفاصل بين التصوير وتحليل الإشارات تم تجهيز النظام المستخدم مع أربع وحدات ليزر ديود والملون متعدد الصورة لمدة تصل إلى أربعة الأصباغ الفلورية لكل عينة. النظام يمكن أن تؤدي صورة رسم الخرائط (10X التكبير) الذي يعطي لمحة عامة عن عينة الاختبار على أي واحد يمكن ان تتحرك لمراقبة المنطقة ذات الاهتمام (600X التكبير). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الوقت الفاصل بين التصوير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع Specimens (الشريحة غرفة تحتوي على عينات الملون) في غرفة مظلمة من حاضنة متكاملة مبائر (37 ° C، 5٪ من CO 2 والجو رطب). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد الليزر المقابلة. استخدام مصادر الليزر اثنين 473 نانومتر (15 ميغاواط) و 559 نانومتر (18 ميغاواط) لإثارة Calcein وEthD-1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام وضع متسلسل اثنين للحصول على الصور من خلال تسلسل الخط دون الحديث المتبادل في التصوير مع اثنين من الأصباغ المستخدمة مضان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام كاشف مع طائفة وضعت حديثا لوضع شروط تلقائيا وفقا للصبغة مضان في وحدة المسح الضوئي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحسين عرض النطاق الترددي من مضان الكشف عن كل قناة إلى أقصى حد. سجل جميع عمليات الاستحواذ بالتتابع لتجنب المحتملين عبر الحديث. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد الشروط التصوير أكثر ملائمة بناء على اختيار صبغة الفلورسنت باستخدام برنامج الاستحواذ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول على صورة الخريطة التي يتم إنشاؤها تلقائيا من المركز بشكل لولبي،مع مجال اهتمام اختياره بسهولة لدراسة أعمق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختر وضع المراقبة. اختر حتى خمسة أنواع من وسائط المراقبة بما في ذلك مرور الزمن، Z المكدس، ومنطقة متعددة حسب الحاجة. استخدام مزيج من Z-المكدس وسائط مرور الزمن في الدراسة وإكمال بسرعة التقاط الصورة، </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغيير وتبديل صبغة الفلورسنت. بدلا من ذلك، تراكب فلوري وعلى النقيض من الصور الضوئية مع بعضها البعض. مراقبة الصورة الحية باستخدام نقطة اختيارهم على اليسرى السفلى الشاشة خريطة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد منطقة التصوير باستخدام تأطير والتكبير وظائف. اختياريا، تبديل بين عرض لكل نوع من الصبغة مضان. ملاحظة: المجهر المستخدمة في هذا البروتوكول لديه نفس الوظائف ك ومتحد البؤر التقليدية عالية في تصميم مضغوط. تم تجهيز المجهر مع أهداف الغمر بالمياه المقلوب التي هي مناسبة بشكل مثالي لمستقر الوقت الفاصل بين التصوير من الخلايا الحية مع مبسطة المدمج في الحاضنة. </lأنا&gt; </ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحليل الإشارات وتقدير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام برامج التصوير لقياس إشارة مضان. الحصول على خمس صور خريطة بهدف 10X لكل من اختبار العينة والخلايا السيطرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول على الصور العادية 1024 × 1024 بكسل، مع 0.231 ميكرون × 0،231 بكسل حجم ميكرون. تخزين الصور وتنسيق أوليمبوس صورة (المنظمة الدولية للفرانكوفونية) لتحليل الإشارات. هذا الشكل يتيح تخزين إعدادات المعلمة المختلفة والصور معا. استخدام أدوات التحليل المختلفة (قياس كثافة الشخصية، ونسبة كثافة بين اثنين من القنوات المستخدمة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخزين الصور الإسقاط القصوى على شكل ملفات TIFF 12 بت / بكسل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التشكيل التحليلات الإحصائية باستخدام برنامج القائد R. تحليل الاختلافات باستخدام تحليل التباين في اتجاه واحد (ANOVA) واختبار التكرار. النتائج تقرير الانحراف المتوسط ​​وفقا لمعايير (± SD) ودلالة إحصائية عند P &lt;0.05. </li></ol></li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests, they have nothing to disclose.

سلوك المواد توافق مع الحياة هو المعلمة الأكثر مسبق ليتم تقييمها قبل الاستعمال الطبي. تغطي المعايير الدولية الأجهزة الطبية ISO 10993 33 وتحديدا مواد طب الأسنان ISO 7405 34. إن عدم وجود آثار سامة على الخلايا المحيطة هو القاعدة الرئيسية في تقييم توافق مع الحياة من هذه المواد. هذا هو السبب في اختبار السمية الخلوية لديه مثل هذه الأهمية في تقييم مواد طب الأسنان التوافق الحيوي 35-37. اقترح ISO يمكن أن تستند طرق الاختبار على النشاط الأيضي أو سلامة الغشاء. يجب النهاية اختيار متابعة شروط محددة لترتيب الآثار السلبية الناجمة عن مادة الاختبار وذلك لتقليل الوقت وتكلفة المقايسات التقييم. الطريقة الحالية من التحقيق (3D الوقت متحد البؤر التصوير مرور) هو سلامة غشاء القائم. ويبدو تقييم السمية الخلوية عبر هذه نقطة النهاية لتكون علامة قيمة من خلية biocompatibility مع المواد المختبرة وأنه هو أيضا وافق ISO نقطة النهاية. في المختبر يتم تصميم اختبارات لتحديد كيفية تأثير عينة مادية نوع خلية معينة. وقد وصف MTT فحص اللونية في الأصل من قبل موسمان (1983) كوسيلة مفيدة لقياس سمية الخلايا في المختبر وتكاثر الخلايا. ويستند اختبار MTT على تحويل الملح نتروبلو إلى بلورات formazan من قبل خلايا نشطة، والذي يحدد نشاط الميتوكوندريا. وهذا يمكن أن تترجم بمعدل 38 الجدوى. وذكرت والمتعاونين غوبتا أن الاختبار الإنتقالي العسكري هو الأسلوب الأكثر استخداما على نطاق واسع لقياس السمية الخلوية من الراتنجات المركبة. كما استخدمت نازعة السكسينيك وردود الفوسفاتيز القلوية لنفس الغرض 39. ومع ذلك، لا يمكن أن تتبع الخلايا مصير ما يصل، لأن الفحص الإنتقالي العسكري يتطلب قتل الخلايا في كل نقطة زمنية القياس. من أجل مراقبة عن كثب سلوك الخلايا الملون في الدراسة الحالية، ديتم إجراء المراقبة مصحح من الخلايا الحية، وذلك بفضل لوقت التصوير مرور CLSM جنبا إلى جنب مع تلطيخ بروتوكول القصير، تحليل الصور آليا والكمي إشارة الفلورسنت. المركبة الأسنان تأتي في اتصال وثيق مع أنسجة الفم واللثة وخصوصا اللب الخلايا. أن الخلايا الليفية يكون الهدف من مكونات صدر من هذه المركبات التصالحية 40-41. وعلاوة على ذلك، فقد ذكرت العديد من الدراسات أن الخلايا خلد والخلايا الأولية قد تكون الاستجابات الخلوية المختلفة في اتصال مع المواد الحيوية. تم العثور على الخلايا الأولية لتكون أكثر ملاءمة لتقييم آثار المواد الحيوية 42. هذا ما يفسر استخدام الخلايا الليفية اللثة الإنسان الأساسية كنموذج خلية لتقييم السمية الخلوية للمركب الأسنان اختبرت في الدراسة الحالية. وقد درس على نطاق واسع احتمال سمية المواد التي تطلق من مركب الأسنان 43-44. من أجل تقييم رانه السامة المحتملة من المواد، ويمكن أن يؤديها خلايا نموذج الاتصال اثنين. في نظام نموذجي اتصال مباشر يتم وضع المواد مباشرة مع الخلايا المستهدفة بينما في نظام الاتصال غير المباشر، استهداف الخلايا هي على اتصال مع elutes من وسائل الاعلام البيولوجي. في التطبيقات السريرية والإجراءات التصالحية، وتوضع حشوة ضوئية على اتصال غير مباشر مع أنسجة اللثة. لهذا السبب، كان يركز البروتوكول التجريبي الحالي على نظام اتصال غير مباشر مع الخلايا الليفية الإنسان اللثة (خلايا بحضور مقتطفات مركبة اختبار). كما ذكرت سابقا دال والمتعاونين، كانت في المرتبة استجابات شديدة السمية الخلوية مثل (&lt;30٪)، متوسطة (30-60٪)، خفيف (60-90٪) أو غير السامة للخلايا (&gt; 90٪) على أساس النشاط النسبي ل القيم التي تم الحصول عليها لضوابط 45. وبالتالي، وفقا لهذا الترتيب، وفي ضوء النتائج التي تم الحصول عليها (الجدول 1)، يمكن أن يكون في المرتبة مركب ELS انكماش منخفض خارج كما الاصدارذ السامة للخلايا قليلا، وأظهر سلوك مماثل للسيطرة على الخلايا خلال فترة الفاصل الزمني بأكملها. باستخدام نفس الطريقة بالضبط التحقيق، يمكن مقارنة نتائج هذه الدراسة إلى أن من دراسة نشرت مؤخرا. أظهر ELS إضافية منخفضة انكماش مركب توافق مع الحياة متفوقة مقارنة مع اثنين من اختبار المركبة المستخدمة سابقا لنفس التطبيق السريري الذي هو استعادة مباشرة 11. دراسات أخرى لا تزال ضرورية لإقامة المقارنة أكثر اكتمالا. عند البت فيها فحص السمية الخلوية للموافقة على إجراء تقييم نقطة نهاية محددة، فإنه من المهم فهم مزايا وحدود كل فحص. الغرض الرئيسي من التصوير متحد البؤر هو تحقيق العمارة 3-D من الخلايا والأعضاء. هذه التقنية قادرة على كشف ليس فقط سطح العينة، ولكن أيضا تحت السطحية لها. بروتوكول الموصوفة هنا يؤكد استخدام 3D CLSM وقت التصوير مرور متحد البؤر، كما سينسيطريقة موانع لتقييم السلوك توافق مع الحياة في المختبر من مركب الأسنان. ومع ذلك، من أجل تجنب القيود التي واجهتها في هذا العمل، يمكن أن تستخدم محطات العمل المضادة للاهتزاز وذلك للسماح أكثر استقرارا وأطول وقت التصوير مرور. الطاولة يمكن عزل نظام متحد البؤر المستخدمة من الآثار الضارة التي الاهتزازات في المختبر قد يسبب. وعلاوة على ذلك، ومواد لاستخدامها في جوف الفم يجب أن يكون مثاليا غير ضارة للأنسجة اللثة ويجب أن لا تحتوي على المواد التي يمكن أن تسبب سمية جهازية. وفقا للمنهجية المتبعة والنتائج المتحصل عليها من هذه الدراسة يمكن استنتاج أن مركب اختبار (ELS انكماش منخفض خارج) لا السامة للخلايا في الظروف التجريبية الحالية. كما أن طريقة CLSM يمكن أن تعطي بحساسية معدل الأولي للخلايا قابلة للحياة، يمكن أن يتوقع احتمالات أخرى لتقييم نقاط نهاية أخرى. على وجه الخصوص، كما أفيد مؤخرا أن تؤثر على الخلايا أحادية المركبة عبتيough أنواع الاكسجين التفاعلية (ROS) 46- 48، هناك حاجة إلى إجراء مزيد من التحقيقات لتقييم الارتباطات إن وجدت بين السمية الخلوية وشبكات إنتاج ROS الإشارة. ويمكن تصميم البروتوكول المقبل لتقييم الانتاج في وقت واحد ريوس (H 2 O 2 و / أو O 2 - تلوين) ونسبة السمية الخلوية (لايف / تلطيخ الميت) باستخدام التصوير مرور الوقت CLSM.

واحدة من المعايير الرئيسية المدرجة في التوصيات ISO لتحديد توافق مع الحياة هو غياب سمية المواد إلى الخلايا. للراتنجات المركبة الأسنان قد تطلق سراح عناصر من المصفوفة راتنجية، التي يمكن أن تكون بسبب البداية إلى البلمرة الجزئية، و / أو في وقت لاحق بسبب عمليات التدهور بمرور الوقت 1-4. هذه المكونات صدر تتلامس مع أنسجة الفم ويمكن لها عيوب مختلفة مثل التفاعلات الشروية و5 المخاطية، وتنمية الحساسية وفرط الحساسية ردود الفعل في 6 مرضى أو تعديلات من الخلايا الليفية اللثة التشكل والحد على النوع الأول الكولاجين بروتين 7، كبت المناعة أو تنبيه المناعة على mitogen -driven انتشار تنقية الخلايا اللمفاوية التائية وخلايا الطحال (8) والحمض النووي من التلف في الخلايا الليفية اللثة الإنسان الأساسية، وهو ما يؤكد على السمية الجينية المحتملة 9. يمكن أن العديد من المعلمات تؤثر سمية مركب الأسنان مثل الظل من جomposite، وعلاج الخفيفة، والتركيب الكيميائي للمونومر الراتنج، حشو ودرجة تحويل 10- 13. منذ إمكانات في المختبر من المواد السامة يمكن التنبؤ في حالات المجراة ويمكن مقارنة الحالات السريرية من خلال دراسة بعض النقاط الطرفية ذات الصلة. وسمية الخلايا من المواد المركبة الأسنان ومكوناتها تم تقييمها على نطاق واسع باستخدام أنظمة زراعة الخلايا 14- 16. وقد تم تطوير هذه الأنظمة في المختبر لتقييم توافق مع الحياة المركبة الأسنان في مدة: نمو الخلايا وموت الخلايا المبرمج الخلية باستخدام THP-1monocytes مثل خلايا 17، سمية الخلايا الليفية في اللثة الإنسان 18، وإمكانات التهابات في القرنية مثل خلايا HaCaT 2، وظائف الخلية odontoblast- مثل MDPC 23 19 خلايا، والحد من إجمالي مستويات RNA، وزيادة كبيرة في استحثاث موت الخلايا المبرمج على اللثة الإنسان الكيراتينية 20 والحمض النووي من التلف في اللثة واللب خلايا الليفية 21. واقترح منهجيات مختلفة للتحقيق في توافق مع الحياة من المواد المركبة الأسنان. تبقى المقايسات اللونية، التي تنطوي على تلوينات محددة وقياسات امتصاص الضوء، والأكثر شيوعا، نظرا لبساطتها النسبية والتكلفة المنخفضة 22- 26. التحليل المجهري على النقيض من ذلك الضوء في كثير من الأحيان يستهلك المزيد من الوقت وتتحمل تكاليف أعلى. ومع ذلك، هذه التقنيات المجهري لديها بعض المزايا الهامة. مراقبة هيكل الخلية تعطي معلومات موسعة حول الآثار السامة من ذوي الخبرة، وبالتالي توفير المزيد من البيانات ذات الصلة والحساسة. على وجه الخصوص، وقد سمح إدخال المجهري متحد البؤر 27 لمراقبة الهياكل البيولوجية مع تحسين دقة المحوري مقارنة واسعة المجال المجاهر مضان التصوير التقليدية. وبالتالي، أصبح التصوير متحد البؤر أداة تحقيق قوية في مختلف مجالاتالبحوث الطبية والعلمية. وعلى النقيض من تقنيات المجهر الإلكتروني والمسح الضوئي المجهري متحد البؤر يوفر القدرة على تصور مكونات متميزة من الخلايا عن طريق إدراج علامات الفلورسنت محددة. معظم هذه استشفاف محددة هي مستقر في البيئة المائية، يمكن قياسه بشكل معقول وغير مكلفة وغير سامة 28، مما يتيح استخدامها في السريرية وكذلك البحوث والدراسات المخبرية. وعلاوة على ذلك، وتجفيف العينات والتثبيت اللازمة لتحليل المجهر الإلكتروني التقليدية ليست ضرورية للمضي وقت التصوير متحد البؤر، وبالتالي الاستحواذ التي تعتمد على الوقت من الممكن أيضا على عينات. مقارنة مع التصوير ثنائي الأبعاد، ومبدأ التصوير متحد البؤر تمكن التصور العينة الجوفية وإعادة هيكل ثلاثي الأبعاد من مختلف الصور التي تم الحصول عليها العمق. الذي يترتب عليه، أكثر دقة وأكثر هيكلية التفاصيل 29، 30. الدراسة الحالية الفيديو هو مثال على استخدام ثلاثي الأبعاد الوقت الفاصل بين Confocal الليزر الضوئي المجهري (3D-CLSM) جنبا إلى جنب مع لايف / وضع العلامات الفلورية الميت وإشارة الكمي كطريقة مبتكرة. هذه التقنية المقدمة في هذه الورقة لديه ميزة تمكين التقييم والوقت الفاصل بين التصوير من حساسية الخلايا الحية دون تغيير بنية الخلية المقررة. ليس هناك حاجة لخطوات التحضير قبل تحليل متحد البؤر. سابقا، تم استخدام نفس تلطيخ لتقييم جدوى مثقف النوى عظم إسفنجي 31 ولكن من دون متحد البؤر الوقت الفاصل التالية. وبالمثل تم استخدام نفس الإجراء الوقت الفاصل بين متحد البؤر لتقييم النشاط الاريثروميسين الوقت القتل في البكتيريا من الحمأة المنشطة وفقا لمن نوع 32 غرام باستخدام بكتيريا محددة لايف / تلطيخ ميت. وقد تكيفت هذه الطرق مؤخرا واستخدمت لمقارنة سمية المركبة الأسنان على أساس أحادية ميتاكريليت 11.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Olympus Fluoview FV10i&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Olympus</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Confocal microscope</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">O2/Co2 Incubator</td>
			<td style="width:71px;">Pnasonic</td>
			<td style="width:119px;">MCO 5M</td>
			<td>Cell incubation</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">Live/Dead&#174; Kit</td>
			<td>Invitrogen&#160;</td>
			<td style="width:119px;">MP 03224</td>
			<td>Stain&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">ELS extra low shrinkage&#174;&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Saremco&#160;</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Dental composite</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">DMEM medium</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">D 6046</td>
			<td>Culture medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Trypsin</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">T1426</td>
			<td>harvesting cells</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">chamber slide system&#160;&#160;</td>
			<td style="width:71px;">PAA</td>
			<td style="width:119px;">14220040X</td>
			<td>Culture chamber</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">penicillin/streptomycin&#160;</td>
			<td style="width:71px;">PAA</td>
			<td style="width:119px;">P11-010</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Amphotericin B</td>
			<td style="width:71px;">PAA</td>
			<td style="width:119px;">P11-001</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Foetal bovine serum&#160;</td>
			<td style="width:71px;">PAA</td>
			<td style="width:119px;">A11-101</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cell Counter</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td style="width:119px;">00110230TP1</td>
			<td>Cell counting&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

confocal time lapse imaging as an efficient method for the cytocompatibility evaluation of dental composites

ومن المسلم به عموما أن التفاعل في المختبر مادة الخلية هو المعيار مفيدا في تقييم الأسنان توافق مع الحياة المادية. كان الهدف من هذه الدراسة هو استخدام 3D CLSM وقت التصوير مرور متحد البؤر لتقييم توافق مع الحياة في المختبر من مركبات الأسنان. وهذه الطريقة توفر مؤشرا دقيقا وحساسا من معدل خلية قابلة للحياة في اتصال مع مقتطفات مركب الأسنان. وELS انكماش منخفضة خارج، وهو مركب يستخدم لترميم الأسنان مباشرة، اتخذت كمثال. تم إجراء التقييم في المختبر على خلايا الليفية مثقف الأولية الإنسان اللثة باستخدام ايف / تلطيخ الميت. تم الحصول على الصور مع النظام البيولوجي متحد البؤر FV10i مقلوب وتحليلها مع FV10-ASW 3.1 البرمجيات. وأظهر تحليل الصور والسمية الخلوية الطفيفة جدا في وجود مركب اختبار بعد 5 ساعات من وقت مضي. وقد أظهرت انخفاض طفيف في بقاء الخلية على اتصال مع مقتطفات مركب compar اختبارإد للسيطرة على الخلايا. أبرزت نتائج استخدام 3D CLSM التصوير الفاصل الزمني كوسيلة حساسة نوعيا وكميا لتقييم السلوك توافق مع الحياة من المواد المركبة الأسنان.

أظهر الرقم 1 لمحة عامة عن / خلايا حية ملطخة الميت في صور الخرائط التي تم الحصول عليها (الهدف 10X) لكل من السيطرة والخلايا المعرضة لمقتطفات مركبة اختبار (ELS انكماش منخفضة إضافية). يمكن تصور هيكل ثلاثي الأبعاد من الخلايا في 600X التكبير. يتم تقديم التصور الخلايا التي تم جمعها في غرفة التحكم والخلايا التي تم جمعها في الغرفة بحضور مقتطفات مركبة اختبارها في الشكل 2. الإسقاط الأقصى (60X موضوعي) يوضح مصير السكان الخلية المحددة في بداية مرور الوقت (15 دقيقة) و في نهاية الفترة الفاصل الزمني (في 5 ساعة). وتم الحصول على سبعة وخمسين رزمة من الصور (xyzt مسح وزارة الدفاع، 39 صورة في أكوام، فوكسل متعمقة 1.00 ميكرون) خلال هذه الفترة. وقد تم الحصول على انخفاض طفيف في إشارة الفلورية الخضراء واختلاف طفيف جدا في أحمر فلوري في الخلايا المعرضة. وقد لوحظ عدم وجود اختلاف كبير عن السيطرةالخلايا. تولت خلايا مقتطفات تتعرض المركبة مماثل المغزل التشكل للسيطرة على الخلايا، لم تغير التشكل في هذه الظروف التجريبية (على الرغم من انخفاض إشارة خضراء والزيادة إشارة حمراء في وجود مركب اختبار). أجري تحليل الصورة على خمسة أكوام صورة مختلفة مختارة الموافق السكان خلية مختلفة عن الصور التي تم الحصول عليها لاختبار المركب بالمقارنة مع الخلايا السيطرة السلبية للإشارة الخضراء والحمراء على حد سواء. ويتضح من ملف كثافة الخلايا الملون في الشكل 3؛ كان تطور إشارة خضراء وحمراء من الخلايا في اتصال مع مركب اختبار مماثلة لتلك الخلايا السيطرة. تم قياس Calcein وEthD-1 كثافة الانبعاثات مضان على الخلايا والسيطرة على الخلايا المركبة المكشوفة. وقد تم قياس على فترات ساعة واحدة لمدة تصل إلى خمس ساعة. و/ نسبة مضان أحمر أخضر (بناء على شدة متكاملة من 495-515 نانومتر الأخضر والأحمر 620-650 إشارات نانومترتم حساب) خلال فترة مرور الزمن. وتظهر نسب الجدوى للرقابة والخلايا المعرضة لELS مقتطفات منخفض خارج انكماش في تي 1 قادرة. وفي وجود مركب اختبارها، تم العثور على النسبة المئوية للخلايا الحية لخفض قليلا من 100٪ إلى 93.9٪ بعد ساعة من 1 للإتصال به. وقد لوحظ فرق كبير بين مركب اختبار والسيطرة السلبية (الخلايا دون أي مقتطفات مركبة) بعد 5 ساعة من فترة مرور الزمن المشار إليها. <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/51949/51949fig1highres.jpg" /> الرقم 1: نظرة عامة على رسم الخرائط أظهرت صورة ملطخة الخلايا في موضوعي 10X، (A) خلايا السيطرة و (ب) الخلايا في وجود مقتطفات المركبة (ELS انكماش منخفض الخارجة) في بداية الفترة الفاصل الزمني (ر = 15 دقيقة). المناطق الخضراء هي الخلايا الحية والمناطق الحمراء هي الخلايا التالفة. في هذا<html> وقد لوحظ شروط التجربة، لا الاختلاف (لكل مضان أخضر وأحمر) للمركبات تتعرض خلايا مقارنة مع الخلايا السيطرة السلبية. <img alt="الرقم 2" src="/files/ftp_upload/51949/51949fig2highres.jpg" /> الشكل 2: صور CLSM في موضوعي 60X من السكان الخلية من (A) غرفة التحكم و (ب) مقتطفات مركبة الغرفة في بداية ونهاية فترة التعرض مرور الزمن (I: 15 دقيقة والثاني: 5 ساعة، على التوالي ). المناطق الخضراء هي الخلايا الحية والمناطق الحمراء هي الخلايا التالفة. وأظهرت لوحة من الصور تغيير طفيف في كثافة إشارة (انخفاض طفيف في إشارة الخضراء وزيادة طفيفة جدا في حمراء واحدة). ولم تلاحظ اي تغييرات مورفولوجيا الخلايا في وجود مقتطفات مركبة. كشف خلايا حافظت التشكل على شكل مغزل وأرومي ليفي على شكل خلايا السيطرة. gether.within صفحة = &quot;دائما&quot;&gt; <img alt="الرقم 3" src="/files/ftp_upload/51949/51949fig3highres.jpg" /> الرقم 3: الملف الخط من الخلايا التي لوحظت في الوقت الفاصل بين المجهري خلايا (A) تحكم (ب) خلايا مقتطفات المركبة المكشوفة، (I) في 15 دقيقة و (الثاني) في 5 ساعة. لا يوجد تباين واضح في تطور إشارة خضراء في وجود مركب اختبار بغض النظر عن اتصال الوقت. ومع ذلك، لوحظ زيادة طفيفة للإشارة الحمراء في وجود مركب 5 بعد ساعة من الاتصال. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td rowspan="2"> وقت الاتصال (ساعة) </td><td colspan="5"> بقاء الخلية (٪) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 2 </td><td> 3 </td><td> 4 </td><td> 5 </td></tr><tr><td> الخلايا السيطرة </td><td> 100 </td><td> 100 </td><td> 100 &lt;/ td&gt; <td> 100 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> ELS منخفض خارج انكماش ® </td><td> 93.9 ± 7 </td><td> 91.3 ± 5 * </td><td> 89.5 ± 3 * </td><td> 87.6 ± 2 * </td><td> 87.7 ± 3 * </td></tr></tbody></table> وكان يعاير معدل تطور الخلايا الحية HGF بعد 1 و 2 و 3 و 4 و 5 ساعة من الاتصال مع المركبة مقتطفات بقاء الخلية من خلال تلطيخ باستخدام ايف / طقم سمية الخلايا الميتة: الجدول 1. وتظهر بيانات القيم يعني ± SD من خمس صور مداخن التحليل. القيم تختلف اختلافا كبيرا من الخلايا السيطرة على P &lt;0.05.

Watch this Scientific Journal Video about Confocal Time Lapse Imaging as an Efficient Method for the Cytocompatibility Evaluation of Dental Composites at JoVE.com

Confocal Time Lapse Imaging as an Efficient Method for the Cytocompatibility Evaluation of Dental Composites

الجانب الأكثر درس من توافق مع الحياة من المواد المركبة الأسنان هو السمسة 3D CLSM الوقت الفاصل بين التصوير الخاصة بهم جنبا إلى جنب مع فلوري الكمي إشارة يسمح تقييم حساسية في مصير الخلايا مع مرور الوقت. يمكن استخدام هذه الطريقة تكون أداة فعالة لتقييم cytocompatibility من المواد المركبة الأسنان.

التصوير متحد البؤر الفاصل الزمني كما وسيلة فعالة لتقييم Cytocompatibility من المركبات الأسنان

It is generally accepted that in vitro cell material interaction is a useful criterion in the evaluation of dental material biocompatibility. The ...

confocal-time-lapse-imaging-as-an-efficient-method-for

Research

JoVE Journal

Medicine

13.4K Views.  UMR CNRS 5615, Université Lyon1.  الجانب الأكثر درس من توافق مع الحياة من المواد المركبة الأسنان هو السمسة 3D CLSM الوقت الفاصل بين التصوير الخاصة بهم جنبا إلى جنب مع فلوري الكمي إشارة يسمح تقييم حساسية في مصير الخلايا مع مرور الوقت. يمكن استخدام هذه الطريقة تكون أداة فعالة لت...

Video: Confocal Time Lapse Imaging as an Efficient Method for the Cytocompatibility Evaluation of Dental Composites

Evaluation of Nanoparticle Uptake in Tumors in Real Time Using Intravital Imaging

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle uptake in tumors at the microscopic level1,2,3, highlighting the utility of a suitable xenograft model in which to perform detailed uptake analyses. Here, we use high-resolution intravital imaging to evaluate nanoparticle uptake in human tumor xenografts in a modified, shell-less chicken embryo model. The chicken embryo model is particularly well-suited for these in vivo analyses because it supports the growth of human tumors, is relatively inexpensive and does not require anesthetization or surgery 4,5. Tumor cells form fully vascularized xenografts within 7 days when implanted into the chorioallantoic membrane (CAM) 6. The resulting tumors are visualized by non-invasive real-time, high-resolution imaging that can be maintained for up to 72 hours with little impact on either the host or tumor systems. Nanoparticles with a wide range of sizes and formulations administered distal to the tumor can be visualized and quantified as they flow through the bloodstream, extravasate from leaky tumor vasculature, and accumulate at the tumor site. We describe here the analysis of nanoparticles derived from Cowpea mosaic virus (CPMV) decorated with near-infrared fluorescent dyes and/or polyethylene glycol polymers (PEG) 7, 8, 9,10,11. Upon intravenous administration, these viral nanoparticles are rapidly internalized by endothelial cells, resulting in global labeling of the vasculature both outside and within the tumor7,12. PEGylation of the viral nanoparticles increases their plasma half-life, extends their time in the circulation, and ultimately enhances their accumulation in tumors via the enhanced permeability and retention (EPR) effect 7, 10,11. The rate and extent of accumulation of nanoparticles in a tumor is measured over time using image analysis software. This technique provides a method to both visualize and quantify nanoparticle dynamics in human tumors.

We present a novel approach to quantify nanoparticle localization in the vasculature of human xenografted tumors using dynamic, real-time intravital imaging in an avian embryo model.

تقييم امتصاص الجسيمات النانوية في الأورام في الوقت الحقيقي باستخدام التصوير Intravital

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle ...

Time-lapse Imaging of Primary Preneoplastic Mammary Epithelial Cells Derived from Genetically Engineered Mouse Models of Breast Cancer

Time-lapse imaging can be used to compare behavior of cultured primary preneoplastic mammary epithelial cells derived from different genetically engineered mouse models of breast cancer. For example, time between cell divisions (cell lifetimes), apoptotic cell numbers, evolution of morphological changes, and mechanism of colony formation can be quantified and compared in cells carrying specific genetic lesions. Primary mammary epithelial cell cultures are generated from mammary glands without palpable tumor. Glands are carefully resected with clear separation from adjacent muscle, lymph nodes are removed, and single-cell suspensions of enriched mammary epithelial cells are generated by mincing mammary tissue followed by enzymatic dissociation and filtration. Single-cell suspensions are plated and placed directly under a microscope within an incubator chamber for live-cell imaging. Sixteen 650 &mu;m x 700 &mu;m fields in a 4x4 configuration from each well of a 6-well plate are imaged every 15 min for 5 days. Time-lapse images are examined directly to measure cellular behaviors that can include mechanism and frequency of cell colony formation within the first 24 hr of plating the cells (aggregation versus cell proliferation), incidence of apoptosis, and phasing of morphological changes. Single-cell tracking is used to generate cell fate maps for measurement of individual cell lifetimes and investigation of cell division patterns. Quantitative data are statistically analyzed to assess for significant differences in behavior correlated with specific genetic lesions.

Time-lapse imaging is used to assess behavior of primary preneoplastic mammary epithelial cells derived from genetically engineered mouse models of breast cancer risk to determine if there are correlations between specific behavioral parameters and distinct genetic lesions.

الوقت الفاصل بين التصوير من الخلايا الثديية سابق للورم ظهاري الأولية المستمدة من نماذج الماوس المعدلة وراثيا لسرطان الثدي

Time-lapse  imaging can be used to compare behavior of cultured primary preneoplastic  mammary epithelial cells derived from different genetically ...

The In Ovo Chick Chorioallantoic Membrane (CAM) Assay as an Efficient Xenograft Model of Hepatocellular Carcinoma

The chick chorioallantoic membrane (CAM) begins to develop by day 7 after fertilization and matures by day 12. The CAM is naturally immunodeficient and highly vascularized, making it an ideal system for tumor implantation. Furthermore, the CAM contains extracellular matrix proteins such as fibronectin, laminin, collagen, integrin alpha(v)beta3, and MMP-2, making it an attractive model to study tumor invasion and metastasis. Scientists have long taken advantage of the physiology of the CAM by using it as a model of angiogenesis. More recently, the CAM assay has been modified to work as an in vivo xenograft model system for various cancers that bridges the gap between basic in vitro work and more complex animal cancer models. The CAM assay allows for the study of tumor growth, anti-tumor therapies, and pro-tumor molecular pathways in a biologically relevant system that is both cost- and time-effective. Here, we describe the development of CAM xenograft model of hepatocellular carcinoma (HCC) with embryonic survival rates of up to 93% and reliable tumor take leading to growth of three-dimensional, vascularized tumors.

The In Ovo Chick Chorioallantoic Membrane CAM Assay as an Efficient Xenograft Model of Hepatocellular Carcinoma

The chick chorioallantoic membrane (CAM) is immunodeficient and highly vascularized, making it a natural in vivo model of tumor growth and angiogenesis. In this protocol, we describe a reliable method of growing three-dimensional, vascularized hepatocellular carcinoma (HCC) tumors using the CAM assay.

ال<em&gt; في البيضة</em&gt; الفرخ مشيمائي غشاء (CAM) الفحص بمثابة طعم أجنبي نموذج فعال لسرطان الكبد

The chick chorioallantoic membrane (CAM) begins to develop by day 7 after fertilization and matures by day 12. The CAM is naturally immunodeficient and ...

An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity is a commonly used model to study both acute lung injury and fibrosis, and multiple methods have been developed for administering bleomycin (and other toxic agents) into the lungs. However, many of these approaches, such as transtracheal instillation, have inherent drawbacks, including the need for strong anesthetics and survival surgery. This paper reports a quick, reproducible method of intratracheal intubation that involves mild inhaled anesthesia, visualization of the trachea, and the use of a surrogate spirometer to confirm exposure. As a proof of concept, 8-12 week old C57BL/6 mice were administered either 2.0 U/kg of bleomycin or an equivalent volume of PBS, and both damage and fibrotic endpoints were measured post-exposure. This procedure allows researchers to treat a large cohort of mice in a relatively short period with little expense and minimal post-procedure care.

This article presents a rapid and simple method for administering bleomycin directly into the mouse trachea via intubation. Key advantages of this method are that it is highly reproducible, easy to master, and does not require specialized equipment or lengthy recovery times.

افضل طريقة لرابيد تنبيب القصبة الهوائية في الفئران

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity ...

Extended Time-lapse Intravital Imaging of Real-time Multicellular Dynamics in the Tumor Microenvironment

In the tumor microenvironment, host stromal cells interact with tumor cells to promote tumor progression, angiogenesis, tumor cell dissemination and metastasis. Multicellular interactions in the tumor microenvironment can lead to transient events including directional tumor cell motility and vascular permeability. Quantification of tumor vascular permeability has frequently used end-point experiments to measure extravasation of vascular dyes. However, due to the transient nature of multicellular interactions and vascular permeability, the kinetics of these dynamic events cannot be discerned. By labeling cells and vasculature with injectable dyes or fluorescent proteins, high-resolution time-lapse intravital microscopy has allowed the direct, real-time visualization of transient events in the tumor microenvironment. Here we describe a method for using multiphoton microscopy to perform extended intravital imaging in live mice to directly visualize multicellular dynamics in the tumor microenvironment. This method details cellular labeling strategies, the surgical preparation of a mammary skin flap, the administration of injectable dyes or proteins by tail vein catheter and the acquisition of time-lapse images. The time-lapse sequences obtained from this method facilitate the visualization and quantitation of the kinetics of cellular events of motility and vascular permeability in the tumor microenvironment.

This protocol describes the use of multiphoton microscopy to perform extended time-lapse imaging of multicellular interactions in real time, in vivo at single cell resolution.

تمديد الوقت الفاصل بين حيوي داخلي تصوير في الوقت الحقيقي متعددة الخلايا حيوية في المكروية ورم

In the tumor microenvironment, host stromal cells interact with tumor cells to promote tumor progression, angiogenesis, tumor cell dissemination and ...

An Anesthesia, Surgery, and Harvest Method for the Evaluation of Transpedicular Screws Using an In Vivo Porcine Lumbar Spine Model

Pedicle screw fixation is the gold standard for the treatment of spinal diseases. However, many studies have reported the issue of loosening pedicle screws after spinal surgery, which is a serious concern. To address this problem, diverse types of pedicle screws have been examined to identify those with good fixation strength and osseointegration in spine bone. The porcine spine is a good alternative for the human spine in the evaluation of pedicle screws due to the anatomical size, mechanical characteristics, and cost. Although several studies have reported that pedicle screws are efficient in the porcine model, no study has described detailed protocols for the evaluation of a pedicle screw using the porcine model. Here, we describe a detailed method for evaluating transpedicular screws using an in vivo porcine lumbar spine model. The technical details for anesthesia, spine surgery, and harvest provided here will facilitate with the evaluation of the transpedicular screw fixation model.

An Anesthesia, Surgery, and Harvest Method for the Evaluation of Transpedicular Screws Using an In Vivo Porcine Lumbar Spine Model

Here, we introduce a method to evaluate transpedicular screws by using an in vivo porcine lumbar spine model.

التخدير، والجراحة، وطريقة الحصاد لتقييم مسامير ترانسبديكولار باستخدام<em&gt; في فيفو</em&gt; الخنزير القطني العمود الفقري نموذج

Pedicle screw fixation is the gold standard for the treatment of spinal diseases. However, many studies have reported the issue of loosening pedicle ...

Second Harmonic Generation Signals in Rabbit Sclera As a Tool for Evaluation of Therapeutic Tissue Cross-linking (TXL) for Myopia

Methods to strengthen tissue by introducing chemical bonds (non-enzymatic cross-linking) into structural proteins (fibrillar collagens) for therapy include photochemical cross-linking and tissue cross-linking (TXL) methods. Such methods for inducing mechanical tissue property changes are being employed to the cornea in corneal thinning (mechanically weakened) disorders such as keratoconus as well as the sclera in progressive myopia, where thinning and weakening of the posterior sclera occurs and likely contributes to axial elongation. The primary target proteins for such tissue strengthening are fibrillar collagens which constitute the great majority of dry weight proteins in the cornea and sclera. Fortuitously, fibrillar collagens are the main source of second harmonic generation signals in the tissue extracellular space. Therefore, modifications of the collagen proteins, such as those induced through cross-linking therapies, could potentially be detected and quantitated through the use of second harmonic generation microscopy (SHGM). Monitoring SHGM signals through the use of a laser scanning microscopy system coupled with an infrared excitation light source is an exciting modern imaging method that is enjoying widespread usage in the biomedical sciences. Thus, the present study was undertaken in order to evaluate the use of SHGM microscopy as a means to measure induced cross-linking effects in ex vivo rabbit sclera, following an injection of a chemical cross-linking agent into the sub-Tenon&#39;s space (sT), an injection approach that is standard practice for causing ocular anesthesia during ophthalmologic clinical procedures. The chemical cross-linking agent, sodium hydroxymethylglycinate (SMG), is from a class of cosmetic preservatives known as formaldehyde releasing agents (FARs). Scleral changes following reaction with SMG resulted in increases in SHG signals and correlated with shifts in thermal denaturation temperature, a standard method for evaluating induced tissue cross-linking effects.

Second Harmonic Generation Signals in Rabbit Sclera As a Tool for Evaluation of Therapeutic Tissue Cross-linking TXL for Myopia

This protocol describes techniques for evaluating chemical cross-linking of the rabbit sclera using&#160;second harmonic generation imaging and differential scanning calorimetry.

إشارات جيل التوافقي الثاني في أرنب الصلبة كأداة للتقييم للأنسجة العلاجي العابرة للربط (TXL) لقصر النظر

Methods to strengthen tissue by introducing chemical bonds (non-enzymatic cross-linking) into structural proteins (fibrillar collagens) for therapy ...

Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful compared to other more aggressive methods such as retro-orbital plexus sample collection. However, this blood collection method is sometimes limited by an unsatisfactory success rate. Here, we introduce a method for blood collection through the subclavian vein puncture. The subclavian vein is located just under the clavicle and this vein is large enough to fulfill the volume requirements of blood collection. Our results show that this method is safe and applicable for blood collection sampling with the required blood volume. Blood collection through the subclavian vein puncture could serve as an alternative blood collection method in case of failed tail vein blood sampling in rats.

Here, we present a protocol to collect blood samples from the rat subclavian vein.

ثقب الوريد Subclavian كطريقة بديلة لجمع عينات الدم في الفئران

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful ...

In vitro Time-lapse Live-Cell Imaging to Explore Cell Migration toward the Organ of Corti

To study the effects of mesenchymal stem cells (MSCs) on cell regeneration and treatment, this method tracks MSC migration and morphological changes after co-culture with cochlear epithelium. The organ of Corti was immobilized on a plastic coverslip by pressing a portion of the Reissner's membrane generated during the dissection. MSCs confined by a glass cylinder migrated toward cochlear epithelium when the cylinder was removed. Their predominant localization was observed in the modiolus of the organ of Corti, aligned in a direction similarly to that of the nerve fibers. However, some MSCs were localized in the limbus area and showed a horizontally elongated shape. In addition, migration into the hair cell area was increased, and the morphology of the MSCs changed to various forms after kanamycin treatment. In conclusion, the results of this study indicate that the coculture of MSCs with cochlear epithelium will be useful for the development of therapeutics via cell transplantation and for studies of cell regeneration that can examine various conditions and factors.

In this study, we present a real-time imaging method using confocal microscopy to observe cells moving toward damaged tissue by ex vivo incubation with the cochlear epithelium containing the organ of Corti.

في المختبر الوقت الفاصل التصوير بالخلايا الحية لاستكشاف هجرة الخلايا نحو جهاز كورتي

To study the effects of mesenchymal stem cells (MSCs) on cell regeneration and treatment, this method tracks MSC migration and morphological changes after ...

Guided Endodontics: Three-Dimensional Planning and Template-Aided Preparation of Endodontic Access Cavities

Pulp canal obliterations (PCO) are often a consequence of dental trauma, such as luxation injuries. Even though dentin apposition is a sign of vital pulp, pulpitis or apical periodontitis may develop in the long term. Root canal treatment of teeth with severe PCO and pulpal or periapical pathosis is challenging for general practitioners and even for well-equipped endodontic specialists. To ensure detection of the calcified root canal and avoid excessive loss of tooth structure or root perforation, static navigation using templates ("Guided Endodontics") was introduced a few years ago. The general workflow includes three-dimensional imaging using cone-beam computed tomography (CBCT), a digital surface scan, and superimposition of both in a planning software. This is followed by virtual planning of the access cavity and the design of a template that will guide the drill to the desired target point. To do this, a true-to-scale virtual image of the drill must be placed in a way that the tip of the drill reaches the orifice of the calcified root canal. Once the template has been fabricated using computer-aided design and computer-aided manufacturing (CAD/CAM) or a 3D printer, guided preparation of the access cavity can be performed clinically. For research purposes, a postoperative CBCT image can be used to quantify the accuracy of the access cavity performed. This work aims to present the technique of static guided endodontics from imaging to clinical implementation.

Guided endodontics describes a template-aided approach for access cavity preparation. The procedure requires cone-beam computed tomography and a surface scan to produce a template. An incorporated sleeve guides the drill to the target point. This allows the preparation of minimally invasive endodontic access cavities in calcified teeth.

علاج جذور الأسنان الموجه: التخطيط ثلاثي الأبعاد والتحضير بمساعدة القالب لتجاويف الوصول اللبية

Pulp canal obliterations (PCO) are often a consequence of dental trauma, such as luxation injuries. Even though dentin apposition is a sign of vital pulp, ...