This work was supported by grant 13IRG14560023 from the American Heart Association and NIH grants AI078972 and HL108054 to CJO. Support for AOB was from the NIH National Center for Advancing Translational Sciences NIH ULTR001120, and F31 A110417701.

ملاحظة: تم استعراض جميع التجارب الماوس والموافقة عليها من قبل رعاية الحيوان المؤسسية واللجان استخدم في جامعة تكساس مركز العلوم الصحية في سان انطونيو (بروتوكول # 13032-34-01C). رعاية الحيوان والبروتوكولات التجريبية تلتزم القانون 89-544 العامة (قانون رعاية الحيوان) وتعديلاته، والمبادئ التوجيهية خدمات الصحة العامة، ودليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية (وزارة الصحة والخدمات الإنسانية). 1. العدوى <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول BALB / ج الفئران من كلا الجنسين الذين تتراوح أعمارهم بين 10-12 أسبوعا من العمر. ملاحظة: S. الرئوية المصلي 4 سلالة TIGR4 هو عزل السريري الخبيثة التي تم التسلسل 16. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنمو في TIGR4 تود هيويت مرق في 37 ° C في CO 2 5٪ حتى وصلت الكثافة البصرية (OD) 620 0.5 (الموافق 1.0 × 10 8 مستعمرة [كفو] / مل). بيليه الثقافة المكورات الرئوية بواسطة الطرد المركزي لمدة 10 دقيقة في 3، 500 x ج وإزالة طاف باستخدام سطر فراغ. تعليق وتمييع البكتيريا مع الفوسفات مخزنة المالحة عقيمة (PBS) إلى تركيز النهائي من 1.0 × 10 4 CFU / مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام غرفة الاستقراء، تخدير الفئران مع 2.5٪ الأيزوفلورين تبخيرها في الأكسجين. تأكيد حالة تخدير التي كتبها طيف قرصة اصبع القدم مع ملاقط حادة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عقد الماوس تخدير من قبل القفا وتستقيم مع يد واحدة، حقن كل فأر داخل الصفاق (IP) مع 100 ميكرولتر من S. الرئوية تعليق باستخدام حقنة مع 27-30 إبرة قياس (الموافق لجرعة التحدي المتمثل في 1.0 × 10 3 CFU). وضع الجزء الخلفي الماوس في قفصه. الفئران عادة توقظ 30-40 ثانية بعد الحقن. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للعدوى والمضي قدما لمدة 24 على الأقل (المبكر) أو 30 (المتقدمة) ساعة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموت ببطء الفئران عن طريق CO 2 الاختناق. أداء خلع عنق الرحم للتأكد من الماوس والمتوفى. تأكيد القتل الرحيم بمزيد من إزالةمن القلب في الخطوة 1.6. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطهير الذيل مع مسحة الكحول وقص جزء 2-3 ملم. جمع 2 ميكرولتر من الدم وتمييع متسلسل الدم 10 أضعاف في برنامج تلفزيوني يحتوي هيبارين الصوديوم 1 U / مل خمس مرات. لوحة زيتية التخفيفات التسلسلية على لوحة أجار الصويا الدم واحتضان بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية في 5٪ CO 2. استقراء اليوم التالي من مستعمرة بحساب مستوى تجرثم الدم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لشل حركة الماوس في موقف ضعيف على منصة الجراحية. رش الصدر مع 70٪ من الإيثانول واتركها حتى تجف. باستخدام مقص جراحي وملقط فتح تجويف الصدر، وإزالة القفص الصدري، والقطع الحجاب الحاجز لفضح القلب والرئتين. قطع باستخدام مقص الأوعية الدموية متصلة القلب والمكوس بلطف القلب مع الحرص على تجنب كدمات بالملقط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف القلب مع PBS ثم وضع في أشرطة جمع عينة الأنسجة بحيث أقسام الاكليلية ويمكن الحصول على خلال باجتزاء الأنسجة. لتضمين البارافين، جيش التحرير الشعبى الصينىCE الأشرطة في 10٪ من محلول الفورمالين مخزنة-وفي اليوم التالي لإرسال البارافين التضمين. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدلا من ذلك تجميد فلاش باستخدام مجمع أكتوبر ضمن cryomold التي تم وضعها على الثلج الجاف. </li></ol></li></ol> 2. التخيل من القلب الآفات الرئوية وضمن آفات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خفض أقسام القلب وجزءا لا يتجزأ من البارافين مثل أن 4 غرف القلب واضحة في كل قسم الأنسجة. قطع الشرائح في سمك من 5 ميكرون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Deparaffinize وصمة عار الشرائح مع الهيماتوكسيلين ويوزين (H &amp; E) باستخدام أساليب القياسية 17. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مشاهدة H &amp; E الملون أقسام القلب باستخدام المجهر الضوئي في انخفاض (100X، 200X) وارتفاع (الغمر النفط: 400X، 1،000X) تكبير. تميز قلوب لوجود microlesions في عضلة القلب. هنا، واكتساب H &amp; E الصور باستخدام 2 المجهر زايس Axioskop مجهزة 100X 1.3 العددية الهدف فتحة خطة-NEOFLUAR. ملاحظة: في المراحل المبكرة ل القلبيتم التمييز esions التي كتبها التفاضلي مظهرها الملونة، وفي بعض الحالات وجود الخلايا المناعية (وحيدات والمحببة) ما يبدو أن حيدات. في الآفات المتقدمة، ولا سيما تلك التي ظهرت في 30 ساعة، الخلايا المناعية هي ويلاحظ آفات تشبه فجوة غائبة والكبيرة في مكانها. ومن المهم أن نلاحظ أنه في حين يمكن أن يحدث تدفق الخلايا المناعية خلال المراحل الأولى من التنمية الآفة القلبية أنه لا يبدو أن هناك شرط. </li></ol> 3. مناعي المجهري للالرئوية ضمن Microlesions <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قسم القلب في cryomolds مع مشراح لسمك من 5 ميكرون ومكان أقسام على الشرائح الزجاجية موجبة الشحنة. السماح أقسام القلب المجمدة لذوبان الجليد والهواء الجاف. إصلاح أقسام لمدة 10 دقيقة في 10٪ من الفورمالين محايدة مخزنة (الرقم الهيدروجيني 6،8-7،2 عند 25 ° C). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغسل شرائح (3X) في برنامج تلفزيوني لمدة 5 دقائق، permeabilize لمدة 15 دقيقة في 0.2٪ تريتون X-100 في برنامج تلفزيوني، ثم يغسل مرة أخرى في برنامج تلفزيوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> secti الأنسجة كتلة<html> على على الشرائح مع 10٪ مصل الماعز في برنامج تلفزيوني لمدة 1 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف الشرائح مع برنامج تلفزيوني، والغطاء واحتضان أقسام القلب مع الأرنب مكافحة المصلي 4 المكورة الرئوية مصل في 1: 1،000 في برنامج تلفزيوني مع 10٪ مصل الماعز لمدة 2 ساعة على 37 درجة مئوية. ملاحظة: بالنسبة لعناصر التحكم السلبية يجب استخدام المحققين السذاجة مصل الأرنب </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد غسل مع PBS، والغطاء واحتضان المقاطع مع 10٪ الماعز المصل PBS مع الماعز المضادة للأرنب FITC الضد مترافق في 1: 2،000 لمدة 30 دقيقة عند 37 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد تعليمات الشركة الصانعة، واستخدام دابي (4، 6- Diamidino-2-Phenylindole) في 5 ملغ / مل لرؤية نوى حقيقية النواة. غسل وجبل أقسام الأنسجة مع FluorSave. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول على صور الفلورسنت باستخدام نظام المجهر متحد البؤر في التكبير على حد سواء المنخفضة والعالية. ضبط الفتحة العددية وفقا لذلك للحصول على أفضل النتائج. هنا، الحصول على صور الفلورسنت باستخدام نظام متحد البؤر مع الهدف الفتحة العددية 60X 1.42. </li></ol>&quot;&gt; 4. المضادات الحيوية الإنقاذ من الفئران التفسخ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تبدأ مع الفئران المصابة الملكية الفكرية مع 1.0 × 10 3 CFU من TIGR4 كما هو مبين سابقا في الخطوة 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ابتداء من 30 ساعة بعد العدوى، وإدارة الصف الصيدلانية الأمبيسلين الملكية الفكرية (80 ملغم / كغم من وزن الجسم) في 100 ميكرولتر المالحة كل 12 ساعة لمدة 36 ساعة. جمع القلوب في نقطة الوقت المطلوب والعملية كما هو موضح في الخطوة 1.6 لتضمين البارافين والأنسجة، باجتزاء. </li></ol> 5. الكولاجين كشف ترسب <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام الزيلين ويغسل الكحول متدرج مع الماء، deparaffinize والأنسجة هيدرات أقسام منزوع الأيونات باستخدام الأساليب القياسية 17. علاج المقاطع مع مائي حمض الفسفومولبديك 0.2٪ لمدة 5 دقائق ويشطف بالماء منزوع الأيونات لمدة 5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أقسام صمة عار مع 0.1٪ سيريوس الأحمر في حمض البكريك لمدة 2 ساعة في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل المقاطع في 0.01 N حمض الهيدروكلوريك لمدة 3 دقائق ويشطف باستخدام الايثانول 70٪ لمدة 1 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Dehydraالشركة المصرية للاتصالات الأقسام باستخدام متطابقة ولكن ترتيب يغسل إلى أن المبينة في 5.1 عكس، يذوى أقسام القلب في زيادة ومتدرج تركيزات الإيثانول ثم زيلين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أقسام جبل الأنسجة بمحلول متزايدة لتقييم المجهري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتحديد مناطق ترسب الكولاجين، ودراسة أقسام الأنسجة الملون للمناطق من تلطيخ قراءة عميقة تحت التكبير المنخفضة والعالية باستخدام المجهر الضوئي. أي منطقة داخل البطينات من القلب الذي هو الأحمر هي منطقة حيث أودعت الكولاجين. المناطق دون هذه وصمة عار الحمراء هي مواقع من الأنسجة السليمة التي تفتقر إلى ترسب الكولاجين. هنا، واكتساب Picro سيريوس الأحمر صور الملون باستخدام المجهر مجهزة الهدف الفتحة العددية 20X 0.5. ملاحظة: البقع الحمراء في الأذين الأنسجة السليمة. </li></ol>

<ol>
	<li>Corrales-Medina, V. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+complications+in+patients+with+community-acquired+pneumonia:+incidence,+timing,+risk+factors,+and+association+with+short-term+mortality.">Cardiac complications in patients with community-acquired pneumonia: incidence, timing, risk factors, and association with short-term mortality.</a> Circulation. 125, 773-781 (2012).</li><li>Corrales-Medina, V. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+bacterial+pneumonia+is+associated+with+the+occurrence+of+acute+coronary+syndromes.">Acute bacterial pneumonia is associated with the occurrence of acute coronary syndromes.</a> Medicine (Baltimore). 88, 154-159 (2009).</li><li>Corrales-Medina, V. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+complications+in+patients+with+community-acquired+pneumonia:+a+systematic+review+and+meta-analysis+of+observational+studies.">Cardiac complications in patients with community-acquired pneumonia: a systematic review and meta-analysis of observational studies.</a> PLoS Med. 8, e1001048 (2011).</li><li>Corrales-Medina, V. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risk+stratification+for+cardiac+complications+in+patients+hospitalized+for+community-acquired+pneumonia.+Mayo+Clin.">Risk stratification for cardiac complications in patients hospitalized for community-acquired pneumonia. Mayo Clin.</a> Proc. 89, 60-68 (2014).</li><li>Kumar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+11+common+viral+and+bacterial+pathogens+causing+community-acquired+pneumonia+or+sepsis+in+asymptomatic+patients+by+using+a+multiplex+reverse+transcription-PCR+assay+with+manual+(enzyme+hybridization)+or+automated+(electronic+microarray)+detection.">Detection of 11 common viral and bacterial pathogens causing community-acquired pneumonia or sepsis in asymptomatic patients by using a multiplex reverse transcription-PCR assay with manual (enzyme hybridization) or automated (electronic microarray) detection.</a> Journal Of Clinical Microbiology. 46, 3063-3072 (2008).</li><li>Musher, D. M., Rueda, A. M., Kaka, A. S., Mapara, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+association+between+pneumococcal+pneumonia+and+acute+cardiac+events.">The association between pneumococcal pneumonia and acute cardiac events.</a> Clin Infect Dis. 45, 158-165 (2007).</li><li>Brown, A. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Streptococcus+pneumoniae+translocates+into+the+myocardium+and+forms+unique+microlesions+that+disrupt+cardiac+function.">Streptococcus pneumoniae translocates into the myocardium and forms unique microlesions that disrupt cardiac function.</a> PLoS Pathogens. In press, (2014).</li><li>Orihuela, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laminin+receptor+initiates+bacterial+contact+with+the+blood+brain+barrier+in+experimental+meningitis+models.">Laminin receptor initiates bacterial contact with the blood brain barrier in experimental meningitis models.</a> The Journal of Clinical Investigation. 119, 1638-1646 (2009).</li><li>Flick, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+elimination+of+the+binding+motif+on+fibrinogen+for+the+S.+aureus+virulence+factor+ClfA+improves+host+survival+in+septicemia.">Genetic elimination of the binding motif on fibrinogen for the S. aureus virulence factor ClfA improves host survival in septicemia.</a> Blood. 121, 1783-1794 (2013).</li><li>Cheng, A. G., DeDent, A. C., Schneewind, O., Missiakas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+play+in+four+acts:+Staphylococcus+aureus+abscess+formation.">A play in four acts: Staphylococcus aureus abscess formation.</a> Trends Microbiol. 19, 225-232 (2011).</li><li>Arenal, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Do+the+spatial+characteristics+of+myocardial+scar+tissue+determine+the+risk+of+ventricular+arrhythmias.">Do the spatial characteristics of myocardial scar tissue determine the risk of ventricular arrhythmias.</a> Cardiovasc Res. 94, 324-332 (2012).</li><li>Deneke, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+histopathology+of+electroanatomic+mapping+after+cooled-tip+radiofrequency+ablation+to+treat+ventricular+tachycardia+in+remote+myocardial+infarction.">Human histopathology of electroanatomic mapping after cooled-tip radiofrequency ablation to treat ventricular tachycardia in remote myocardial infarction.</a> J Cardiovasc Electrophysiol. 16, 1246-1251 (2005).</li><li>Bakker, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reentry+as+a+cause+of+ventricular+tachycardia+in+patients+with+chronic+ischemic+heart+disease:+electrophysiologic+and+anatomic+correlation.">Reentry as a cause of ventricular tachycardia in patients with chronic ischemic heart disease: electrophysiologic and anatomic correlation.</a> Circulation. 77, 589-606 (1988).</li><li>Verma, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+successful+ablation+sites+and+the+scar+border+zone+defined+by+substrate+mapping+for+ventricular+tachycardia+post-myocardial+infarction.">Relationship between successful ablation sites and the scar border zone defined by substrate mapping for ventricular tachycardia post-myocardial infarction.</a> J Cardiovasc Electrophysiol. 16, 465-471 (2005).</li><li>Wu, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+risk+for+ventricular+tachyarrhythmias+and+sudden+cardiac+death:+is+there+a+role+for+cardiac+MRI.">Assessing risk for ventricular tachyarrhythmias and sudden cardiac death: is there a role for cardiac MRI.</a> Circ Cardiovasc Imaging. 5, 2-5 (2012).</li><li>Tettelin, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+genome+sequence+of+a+virulent+isolate+of+Streptococcus+pneumoniae.">Complete genome sequence of a virulent isolate of Streptococcus pneumoniae.</a> Science. 293, 498-506 (2001).</li><li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematoxylin+and+eosin+staining+of+tissue+and+cell+sections.">Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections.</a> CSH Protoc. 2008, (2008).</li></ol>

The authors declare no conflict of interest in this study.

في هذا التقرير، وهي طريقة تكرار للغاية للحث S. بوساطة الرئوية microlesions القلب في الفئران خلال IPD وأظهرت تقنيات التصور بهم. مصابون الفئران بجرعة من البكتيريا التي تفوق عتبة الجهاز المناعي للتخليص، مما أدى إلى تجرثم الدم عالية الجودة، مماثلة لتلك التي تحدث أثناء...

الاستشفاء من الكبار لالمكتسبة من المجتمع الالتهاب الرئوي (CAP) يحمل مخاطر موثقة للأحداث القلب السلبية التي تساهم في وفيات 1-4. . تم العثور على المضاعفات القلبية في دراسة حديثة أجرتها كوراليس-المدينة المنورة آخرون أن يرتبط و / أو مسؤولة عن 27٪ من الوفيات المرتبطة بالتهاب رئوي 3. العقدية الرئوية (المكورة الرئوية)، والسبب الأكثر شيوعا لCAP والإنتان 5، ارتبط مباشرة مع الأحداث السلبية في القلب ما يصل إلى 19٪ من المرضى البالغين اعترف 6. الأحداث القلب السلبية المرتبطة بالتهاب رئوي تشمل فشل جديد أو ساءت القلب الاحتقاني، عدم انتظام ضربات القلب، واحتشاء عضلة القلب في المرتبة الثانية من حيث التردد 6. في مقال بلوس مسببات الأمراض الأخيرة من جانب براون وآخرون، تم العثور S. الرئوية لتكون قادرة على النبات من خلال البطانة الوعائية القلبية، دخول myocardiuم، وتشكيل آفات مجهرية غير صديدي منفصلة (microlesions) مليئة البكتيريا في البطينين خلال داء المكورات الرئوية الغازية (IPD) 7. وقد لوحظ دليل على تشكيل آفة دقيقة في القلب في القلب عينات من الرئيسيات غير البشرية والأفراد الذين قد استسلمت للعدوى المكورات الرئوية. وبالمثل، الفئران المصابة تجريبيا وضعت بتكاثر microlesions القلب. في الفئران، فقد ارتبط حجم آفة دقيقة وعدد بإيجابية مع مدة وشدة تجرثم الدم، ومستويات التروبونين القلبي في الأمصال، والكهربية القلب الشاذة. تم العثور على النبات البكتيرية في قلب أن يحدث من خلال نفس الآليات المسؤولة عن النبات من المكورات الرئوية عبر حاجز الدم في الدماغ وتطوير التهاب السحايا بالمكورات الرئوية، أي بروتين ملزمة الكولين وغزو بوساطة خلايا بطانة الأوعية الدموية في مستقبلات Laminin وصفائح الدم -activating مستقبلات عامل بطريقة تعتمد 8. Microlesيتطلب تشكيل أيون أيضا إلى تشكيل المسام المكورات الرئوية السم pneumolysin أنه تم العثور على قتل العضلية (7). microlesions القلب الرئوية تختلف من قيحية لينة الأنسجة وخراجات القلب التي تنتج عن غيرها من بكتيريا إيجابية الغرام بما في ذلك المكورات العنقودية الذهبية. وتتميز هذه البؤر من قبل واحد من البكتيريا وتحيط بها العدلات وترسب الفيبرين 9،10. Microlesions التي شكلتها S. الرئوية هي أصغر في الحجم، موزعة في جميع أنحاء قلب المتضررين، وتفتقر تتسرب الخلايا المناعية. خلال المراحل المبكرة من العدوى، microlesions الناجمة عن S. الرئوية تبدو وكأنها مناطق التالفة أو الملتهبة الأنسجة تذكر من علامات المرضية من اعتلال عضلة القلب. يمكن ملاحظة بعض وحيدات خلال هذا الوقت، ولكن وجودهم هو لم يدم طويلا والآفات تصبح بسرعة الناخر في المظهر ومليئة البكتيريا في الوقت الذي تواصل في الوقت نفسه إلى GRآه في الحجم حتى موت الحيوان أو تدخل مضادات الميكروبات. الأهم من ذلك، خلال 3 أيام من تدخل المضادات الحيوية، لوحظ وافر تسلل الخلايا المناعية في موقع الآفة السابق وهذا يترافق ترسب الكولاجين القوي. تم الإبلاغ عن إعادة القلب مماثل أن يحدث بعد احتشاء جنبا إلى جنب مع عواقب دائمة على وظيفة القلب 11-15. وهكذا، microlesions هي تفسيرا محتملا للأحداث القلب السلبية التي تحدث أثناء IPD وربما زيادة في معدل الوفيات المرتبطة القلب في الأفراد النقاهة الذين نجوا الحلقة المرض. هنا، يتم توفير تعليم على نموذج الفأر تجريبية من IPD وتشكيل الآفة القلبية وتصور microlesions القلب في المراحل المبكرة والمتأخرة من العدوى. ويتجلى بروتوكول للكشف عن ترسب الكولاجين في الحيوانات التي تم حفظها من قبل تدخل مضادات الميكروبات. والهدف من هذه المقالة هو وacilitate البحث من المحققين الآخرين على هذا علم الأمراض الرئوية المهم ورواية.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="769">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Name of Reagent/ Equipment</td>
			<td style="width:175px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Todd-Hewitt broth&#160;</td>
			<td style="width:175px;">Neogen</td>
			<td>7161A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:308px;">O.C.T Compound&#160;</td>
			<td style="width:175px;">Tissue-Tek (Sakura Finetek)&#160;</td>
			<td style="width:119px;">4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Triton X-100&#160;</td>
			<td style="width:175px;">Fisher Scientific (Acros)</td>
			<td>9002-93-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Normal Goat Serum</td>
			<td style="width:175px;">Abcam</td>
			<td style="width:119px;">ab7481</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">anti-serotype 4 pneumococcus antiserum&#160;</td>
			<td>Statens Serum Institut</td>
			<td style="width:119px;">16747</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">goat anti-rabbit FITC conjugated antibody&#160;</td>
			<td style="width:175px;">Jackson ImmunoResearch</td>
			<td style="width:119px;">111-096-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">DAPI</td>
			<td style="width:175px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Fluorsave</td>
			<td style="width:175px;">Millipore</td>
			<td>345789</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Permount</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S70104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Ampicillin</td>
			<td style="width:175px;">Sigma</td>
			<td>A9393</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">phosphomolybdic acid 0.2%&#160;</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>26357-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">0.1% Sirius Red in picric acid&#160;</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>26357-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">0.01 N hydrochloric acid&#160;</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>26357-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Tissue Tack Microscope Slides</td>
			<td style="width:175px;">Polysciences, Inc</td>
			<td style="width:119px;">24216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Paralube Vet Ointment</td>
			<td style="width:175px;">Dechra</td>
			<td>12920060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Hematoxylin and Eosin Staining Kit</td>
			<td style="width:175px;">unspeciified&#160;</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Standard</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

visualization of streptococcus pneumoniae within cardiac microlesions and subsequent cardiac remodeling

خلال تجرثم الدم العقدية الرئوية يمكن نقل من عبر البطانة الوعائية في عضلة القلب وتشكيل البكتيريا مليئة منفصلة آفات مجهرية (microlesions) التي هي ملحوظا نظرا لعدم وجود تسلل الخلايا المناعية. بسبب إطلاق سراحهم من المنتجات للقلب، S. ويعتقد الرئوية ضمن microlesions للمساهمة في فشل القلب الذي كثيرا ما لوحظ خلال إنفجر داء المكورات الرئوية الغازية في البالغين. وهنا يتجلى بروتوكول للعدوى الماوس التجريبي الذي يؤدي إلى استنساخه تشكيل آفة دقيقة قلبية في غضون 30 ساعة. وتقدم تعليمات حول تحديد آفة دقيقة في الهيماتوكسيلين ويوزين أقسام القلب الملون والفروق الشكلية بين microlesions المبكرة والمتأخرة وتسليط الضوء عليها. يتم توفير التعليمات على بروتوكول للتحقق من S. الرئوية ضمن microlesions باستخدام الأجسام المضادة ضد المكورات الرئوية السكاريد المحفظة والمجهري مناعي. وأخيرا، يتم توفير بروتوكول للتدخل المضادات الحيوية التي تنقذ الفئران المصابة وللكشف وتقييم تشكيل ندبة في قلوب الفئران نقاهة. معا، وهذه البروتوكولات تسهيل التحقيق في الآليات الجزيئية الكامنة وراء الغزو القلب الرئوية، والموت cardiomyocyte، وإعادة عرض القلب نتيجة التعرض لS. الرئوية، والاستجابة المناعية للالمكورات الرئوية في القلب.

تصور Microlesions التي كتبها H &amp; E وقد لوحظت microlesions القلب في البطينين من H &amp; E الملون أقسام القلب من الفئران مع IPD التالية التحدي الملكية الفكرية مع TIGR4 الشكل 1 يوضح الزيادة في حجم هذه الآفات ما بين 24 و 30 ساعة بعد العدوى (HPI)،...

Watch this Scientific Journal Video about Visualization of Streptococcus pneumoniae within Cardiac Microlesions and Subsequent Cardiac Remodeling at JoVE.com

Visualization of Streptococcus pneumoniae within Cardiac Microlesions and Subsequent Cardiac Remodeling

Streptococcus pneumoniae forms discrete non-purulent microscopic lesions in the heart. Outlined is the protocol for a murine model of cardiac microlesion formation. Instruction is provided on microlesion visualization using microscopy, discrimination between early and late microlesions, and methods to detect cardiac remodeling in hearts of convalescent animals.

التصور<em&gt; العقدية الرئوية</em&gt; داخل القلب Microlesions وإعادة عرض القلب لاحقا

During bacteremia Streptococcus pneumoniae can translocate across the vascular endothelium into the myocardium and form discrete bacteria-filled ...

visualization-streptococcus-pneumoniae-within-cardiac-microlesions

Research

JoVE Journal

Medicine

Visualization of Streptococcus pneumoniae within Cardiac Microlesions and Subsequent Cardiac Remodeling

8.9K Views.  The University of Texas Health Science Center at San Antonio. Streptococcus pneumoniae forms discrete non-purulent microscopic lesions in the heart. Outlined is the protocol for a murine model of cardiac microlesion formation. Instruction is provided on microlesion visualization using microscopy, discrimination between early and late microlesions, and methods to detect cardiac remodeling in hearts of convalescent animals. 

Video: Visualization of Streptococcus pneumoniae within Cardiac Microlesions and Subsequent Cardiac Remodeling

Cardiac Stress Test Induced by Dobutamine and Monitored by Cardiac Catheterization in Mice

Dobutamine is a &beta;-adrenergic agonist with an affinity higher for receptor expressed in the heart (&beta;1) than for receptors expressed in the arteries (&beta;2). When systemically administered, it increases cardiac demand. Thus, dobutamine unmasks abnormal rhythm or ischemic areas potentially at risk of infarction. 
Monitoring of heart function during a cardiac stress test can be performed by either ecocardiography or cardiac catheterization. The latter is an invasive but more accurate and informative technique that the former.
Cardiac stress test induced by dobutamine and monitored by cardiac catheterization accomplished as described here allows, in a single experiment, the measurement of the following hemodynamic parameters: heart rate (HR), systolic pressure, diastolic pressure, end-diastolic pressure, maximal positive pressure development (dP/dtmax) and maximal negative pressure development (dP/dtmin), at baseline conditions and under increasing doses of dobutamine.
As expected, in normal mice we observed a dobutamine dose-related increase in HR, dP/dtmax and dP/dtmin. Moreover, at the highest dose tested (12 ng/g/min) the cardiac decompensation of high fat diet-induced obese mice was unmasked.

We describe the protocol to perform a cardiac stress test induced by dobutamine and monitored by cardiac catheterization in normal mice. Also we show its application to unmask subclinical cardiac disease in high fat diet-induced obese mice.

القلب اختبار الاجهاد الناجم عن الدوبوتامين ومراقبتها من قبل القسطرة القلبية في الفئران

Dobutamine is a &beta;-adrenergic agonist with an affinity higher for receptor expressed in the heart (&beta;1) than for receptors expressed in the ...

Direct Pressure Monitoring Accurately Predicts Pulmonary Vein Occlusion During Cryoballoon Ablation

Cryoballoon ablation (CBA) is an established therapy for atrial fibrillation (AF). Pulmonary vein (PV) occlusion is essential for achieving antral contact and PV isolation and is typically assessed by contrast injection. We present a novel method of direct pressure monitoring for assessment of PV occlusion.
Transcatheter pressure is monitored during balloon advancement to the PV antrum. Pressure is recorded via a single pressure transducer connected to the inner lumen of the cryoballoon. Pressure curve characteristics are used to assess occlusion in conjunction with fluoroscopic or intracardiac echocardiography (ICE) guidance. PV occlusion is confirmed when loss of typical left atrial (LA) pressure waveform is observed with recordings of PA pressure characteristics (no A wave and rapid V wave upstroke). Complete pulmonary vein occlusion as assessed with this technique has been confirmed with concurrent contrast utilization during the initial testing of the technique and has been shown to be highly accurate and readily reproducible.
We evaluated the efficacy of this novel technique in 35 patients. A total of 128 veins were assessed for occlusion with the cryoballoon utilizing the pressure monitoring technique; occlusive pressure was demonstrated in 113 veins with resultant successful pulmonary vein isolation in 111 veins (98.2%). Occlusion was confirmed with subsequent contrast injection during the initial ten procedures, after which contrast utilization was rapidly reduced or eliminated given the highly accurate identification of occlusive pressure waveform with limited initial training.
Verification of PV occlusive pressure during CBA is a novel approach to assessing effective PV occlusion and it accurately predicts electrical isolation. Utilization of this method results in significant decrease in fluoroscopy time and volume of contrast.

Effective pulmonary vein isolation utilizing a cryoballoon depends on complete pulmonary vein occlusion. The point of occlusion can be effectively predicted by direct analysis of pulmonary vein pressure waveform analysis during balloon inflation using a simple and reproducible technique.

مراقبة ضغط المباشر تتنبأ بدقة انسداد الوريد الرئوي خلال تذرية Cryoballoon

Cryoballoon  ablation (CBA) is an established therapy for atrial fibrillation (AF).  Pulmonary vein (PV) occlusion is essential for achieving antral ...

A Model of Cardiac Remodeling Through Constriction of the Abdominal Aorta in Rats

Heart failure is one of the leading causes of death worldwide. It is a complex clinical syndromethat includes fatigue, dyspnea, exercise intolerance, and fluid retention. Changes in myocardial structure, electrical conduction, and energy metabolism develop with heart failure, leading to contractile dysfunction, increased risk of arrhythmias, and sudden death. Hypertensive heart disease is one of the key contributing factors of cardiac remodeling associated with heart failure. The most commonly-used animal model mimicking hypertensive heart disease is created via surgical interventions, such as by narrowing the aorta. Abdominal aortic constriction is a useful experimental technique to induce a pressure overload, which leads to heart failure. The surgery can be easily performed, without the need for chest opening or mechanical ventilation. Abdominal aortic constriction-induced cardiac pathology progresses gradually, making this model relevant to clinical hypertensive heart failure. Cardiac injury and remodeling can be observed 10 weeks after the surgery. The method described here provides a simple and effective approach to produce a hypertensive heart disease animal model that is suitable for studying disease mechanisms and for testing novel therapeutics.

A rat model of abdominal aortic constriction that induces cardiac hypertrophy and remodeling is described. An efficient, highly-reproducible, and minimally-invasive method is used to provide a simple yet useful platform for research in myocardial hypertrophy and dysfunction.

نموذج من القلب إعادة عرض من خلال انقباض البطن الأورطي في الجرذان

Heart failure is one of the leading causes of death worldwide. It is a complex clinical syndromethat includes fatigue, dyspnea, exercise intolerance, and ...

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

To date, the available surgical and pharmacological treatments for cardiovascular diseases (CVD) are limited and often palliative. At the same time, gene and cell therapies are highly promising alternative approaches for CVD treatment. However, the broad clinical application of gene therapy is greatly limited by the lack of suitable gene delivery systems. The development of appropriate gene delivery vectors can provide a solution to current challenges in cell therapy. In particular, existing drawbacks, such as limited efficiency and low cell retention in the injured organ, could be overcome by appropriate cell engineering (i.e., genetic) prior to transplantation. The presented protocol describes the efficient and safe transient modification of endothelial cells using a polyethyleneimine superparamagnetic magnetic nanoparticle (PEI/MNP)-based delivery vector. Also, the algorithm and methods for cell characterization are defined. The successful intracellular delivery of microRNA (miR) into human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) has been achieved without affecting cell viability, functionality, or intercellular communication. Moreover, this approach was proven to cause a strong functional effect in introduced exogenous miR. Importantly, the application of this MNP-based vector ensures cell magnetization, with accompanying possibilities of magnetic targeting and non-invasive MRI tracing. This may provide a basis for magnetically guided, genetically engineered cell therapeutics that can be monitored non-invasively with MRI.

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

This manuscript describes the efficient, non-viral delivery of miR to endothelial cells by a PEI/MNP vector and their magnetization. Thus, in addition to genetic modification, this approach allows for magnetic cell guidance and MRI detectability. The technique can be used to improve the characteristics of therapeutic cell products.

إعداد و<em&gt; في المختبر</em&gt; توصيف ممغنط مير تعديل الخلايا البطانية

To date, the available surgical and pharmacological treatments for cardiovascular diseases (CVD) are limited and often palliative. At the same time, gene ...

Cardiac Magnetic Resonance for the Evaluation of Suspected Cardiac Thrombus: Conventional and Emerging Techniques

We present the conventional cardiac magnetic resonance (CMR) protocol for evaluating a suspected thrombus and highlight emerging techniques.&#160;The appearance of a mass on certain magnetic resonance (MR) sequences can help differentiate a thrombus from competing diagnoses such as a tumor. T1 and T2 signal characteristics of a thrombus are related to the evolution of hemoglobin properties. A thrombus typically does not enhance following contrast administration, which also helps differentiation from a tumor. We also highlight the emerging role of T1 mapping in the evaluation of a thrombus, which can add another level of support in diagnosis. Prior to any CMR exam, patient screening and interviews are critical to ensure safety and to optimize patient comfort. Effective communication during the exam between the technologist and the patient promotes proper breath holding technique and higher quality images. Volumetric post processing and structured reporting are helpful to ensure that the radiologist answers the ordering services&#39; question and communicates these results effectively. Optimal pre-MR safety evaluation, CMR exam execution, and post exam processing and reporting allow for delivery of high quality radiological service in the evaluation of a suspected cardiac thrombus.

The goal of this article is to describe how cardiac magnetic resonance can be used for the evaluation and diagnosis of a suspected cardiac thrombus. The method presented will describe data acquisition as well as the pre-procedure and post-procedure protocol.

الرنين المغناطيسي القلبي لتقييم الجلطات القلبية المشتبه بها: التقنيات التقليدية والناشئة

We present the conventional cardiac magnetic resonance (CMR) protocol for evaluating a suspected thrombus and highlight emerging techniques.&#160;The ...

Isolation and Purification of Murine Cardiac Pericytes

Pericytes, perivascular cells of microvessels and capillaries, are known to play a part in angiogenesis, vessel stabilization, and endothelial barrier integrity. However, their tissue-specific functions in the heart are not well understood. Moreover, there is currently no protocol utilizing readily accessible materials to isolate and purify pericytes of cardiac origin. Our protocol focuses on using the widely used mammalian model, the mouse, as our source of cells. Using the enzymatic digestion and mechanical dissociation of heart tissue, we obtained a crude cell mixture that was further purified by fluorescence activating cell sorting (FACS) by a plethora of markers. Because there is no single unequivocal marker for pericytes, we gated for cells that were CD31-CD34-CD45-CD140b+NG2+CD146+. Following purification, these primary cells were cultured and passaged multiple times without any changes in morphology and marker expression. With the ability to regularly obtain primary murine cardiac pericytes using our protocol, we hope to further understand the role of pericytes in cardiovascular physiology and their therapeutic potential.

We have optimized a protocol to isolate and purify murine cardiac pericytes for basic research and investigation of their biology and therapeutic potential.

عزل وتنقية البيريكيتالقلبي ة المورين

Pericytes, perivascular cells of microvessels and capillaries, are known to play a part in angiogenesis, vessel stabilization, and endothelial barrier ...

An Intact Pericardium Ischemic Rodent Model

This protocol has shown that the pericardium and its contents play an essential anti-fibrotic role in the ischemic rodent model (coronary ligation to induce myocardial injury). The majority of pre-clinical myocardial infarction models require the disruption of pericardial integrity with loss of the homeostatic cellular milieu. However, recently a methodology has been developed by us to induce myocardial infarction, which minimizes pericardial damage and retains the heart&#39;s resident immune cell population. An improved cardiac functional recovery in mice with an intact pericardial space following coronary ligation has been observed. This method provides an opportunity to study inflammatory responses in the pericardial space following myocardial infarction. Further development of the labeling techniques can be combined with this model to understand the fate and function of pericardial immune cells in regulating the inflammatory mechanisms that drive remodeling in the heart, including fibrosis.

This protocol outlines the steps for inducing myocardial infarction in mice while preserving the pericardium and its contents.

نموذج القوارض الإقفارية التامور سليمة

This protocol has shown that the pericardium and its contents play an essential anti-fibrotic role in the ischemic rodent model (coronary ligation to ...

Robotized Testing of Camera Positions to Determine Ideal Configuration for Stereo 3D Visualization of Open-Heart Surgery

Stereo 3D video from surgical procedures can be highly valuable for medical education and improve clinical communication. But access to the operating room and the surgical field is restricted. It is a sterile environment, and the physical space is crowded with surgical staff and technical equipment. In this setting, unobscured capture and realistic reproduction of the surgical procedures are difficult. This paper presents a method for rapid and reliable data collection of stereoscopic 3D videos at different camera baseline distances and distances of convergence. To collect test data with minimum interference during surgery, with high precision and repeatability, the cameras were attached to each hand of a dual-arm robot. The robot was ceiling-mounted in the operating room. It was programmed to perform a timed sequence of synchronized camera movements stepping through a range of test positions with baseline distance between 50-240 mm at incremental steps of 10 mm, and at two convergence distances of 1100 mm and 1400 mm. Surgery was paused to allow 40 consecutive 5-s video samples. A total of 10 surgical scenarios were recorded.

The human depth perception of 3D stereo videos depends on the camera separation, point of convergence, distance to, and familiarity of the object. This paper presents a robotized method for rapid and reliable test data collection during live open-heart surgery to determine the ideal camera configuration.

اختبار روبوتي لمواقع الكاميرا لتحديد التكوين المثالي لتصور ستيريو 3D لجراحة القلب المفتوح

Stereo 3D video from surgical procedures can be highly valuable for medical education and improve clinical communication. But access to the operating room ...

Large-Animal Model of Donation after Circulatory Death and Normothermic Regional Perfusion for Cardiac Assessment

The increase in demand for cardiac transplantation throughout the years has fueled interest in donation after circulatory death (DCD) to expand the organ donor pool. However, the DCD process is associated with the risk of cardiac tissue injury due to the inevitable period of warm ischemia. Normothermic regional perfusion (NRP) allows for an in situ organ assessment, allowing the procurement of hearts determined to be viable. Here, we describe a clinically relevant large-animal model of DCD followed by NRP. Circulatory death is established in anesthetized pigs by stopping mechanical ventilation. After a preset warm ischemia period, an extracorporeal membrane oxygenator (ECMO) is used for a NRP period lasting at least 30 min. During this reperfusion period, the model allows the collection of various myocardial biopsies and blood samples for initial cardiac evaluation. Once NRP is weaned, biochemical, hemodynamic, and echocardiographic assessments of cardiac function and metabolism can be performed before organ procurement. This protocol closely simulates the clinical scenario previously described for DCD and NRP in heart transplantation and has the potential to facilitate studies aimed at decreasing ischemia-reperfusion injury and enhance cardiac functional preservation and recovery.

The protocol describes a large-animal (porcine) model of donation after circulatory death, followed by thoracoabdominal normothermic regional perfusion that closely simulates the clinical scenario in heart transplantation, and has the potential to facilitate therapeutic studies and strategies.

نموذج التبرع الحيواني الكبير بعد موت الدورة الدموية والتروية الإقليمية النورمومية لتقييم القلب

The increase in demand for cardiac transplantation throughout the years has fueled interest in donation after circulatory death (DCD) to expand the organ ...

Analysis of Cardiac Contractile Dysfunction and Ca2+ Transients in Rodent Myocytes

Contractile dysfunction and Ca2+ transients are often analyzed at the cellular level as part of a comprehensive assessment of cardiac-induced injury and/or remodeling. One approach for assessing these functional alterations utilizes unloaded shortening and Ca2+ transient analyses in primary adult cardiac myocytes. For this approach, adult myocytes are isolated by collagenase digestion, made Ca2+ tolerant, and then adhered to laminin-coated coverslips, followed by electrical pacing in serum-free media. The general protocol utilizes adult rat cardiac myocytes but can be readily adjusted for primary myocytes from other species. Functional alterations in myocytes from injured hearts can be compared to sham myocytes and/or to in vitro therapeutic treatments. The methodology includes the essential elements needed for myocyte pacing, along with the cell chamber and platform components. The detailed protocol for this approach incorporates the steps for measuring unloaded shortening by sarcomere length detection and cellular Ca2+ transients measured with the ratiometric indicator Fura-2 AM, as well as for raw data analysis.

Analysis of Cardiac Contractile Dysfunction and Ca2+ Transients in Rodent Myocytes

A set of protocols are presented that describe the measurement of contractile function via sarcomere length detection along with calcium (Ca2+) transient measurement in isolated rat myocytes. The application of this approach for studies in animal models of heart failure is also included.

تحليل ضعف انقباض القلب و Ca2+ عابر في الخلايا العضلية القوارض

Contractile dysfunction and Ca2+ transients are often analyzed at the cellular level as part of a comprehensive assessment of cardiac-induced injury ...