This work was supported by grant 13IRG14560023 from the American Heart Association and NIH grants AI078972 and HL108054 to CJO. Support for AOB was from the NIH National Center for Advancing Translational Sciences NIH ULTR001120, and F31 A110417701.

NOT: Tüm fare deneyleri gözden ve San Antonio Texas Sağlık Bilimleri Merkezi Üniversitesi&#39;nde (protokol # 13032-34-01C) Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komiteleri tarafından kabul edildi. Hayvan bakımı ve Kamu Hukuku 89-544 (Hayvan Refahı Yasası) ve değişiklikleri, Halk Sağlığı Hizmetleri kurallar ve Laboratuvar Hayvanları Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu (Sağlık ve İnsan Hizmetleri Bakanlığı&#39;nın) yapıştırılır deney protokolleri. 1. Enfeksiyon <ol><li> Yaş 10-12 haftalık yaş arası her iki cinsiyetten, BALB / c fareleri elde edilir. NOT: S. pneumoniae serotip 4 suşu TIGR4 16 sıralandı edilmiş bir şiddetli klinik izolat olduğunu. </li><li> Optik yoğunluk (OD) 0.5 620 ulaşana kadar% 5 CO2 içinde 37 ° C &#39;de, Todd-Hewitt lapası içindeki TIGR4 büyütün (1.0 x 10 8 koloni oluşturan birim [CFU] / ml&#39;ye karşılık gelir). 3 ile 10 dakika boyunca santrifüj ile pnömokokal kültür Pelet500 xg ve bir vakum hattı kullanarak süpernatant kaldırmak. Askıda ve 1.0 x 10 4 CFU / ml&#39;lik bir son konsantrasyona değin steril fosfat-tamponlu tuzlu su (PBS) ile bakteri seyreltin. </li><li> Bir indüksiyon odasını kullanarak, oksijen% 2.5 buharlaşmış izofluran ile fareler uyutmak. Künt cımbız ile nazik ayak tutam tarafından anestezi durumunu onaylayın. <ol><li> Bir yandan ile ense anestezi fare tutarak, dik, S. 100 ul her bir fare karın içinden (ip) enjekte (1.0 x 10 3 CFU yükleme dozuna tekabül eden), 27-30 ölçü iğne ile bir şırınga kullanılarak pneumoniae süspansiyon. Kendi kafeste fare geri yerleştirin. Fareler genellikle enjeksiyondan sonra 30-40 sn uyandırmak. </li></ol></li><li> Enfeksiyon en az (erken) 24 veya 30 (gelişmiş) saat devam izin verin. <ol><li> CO 2 boğularak fareler Euthanize. Fareyi sağlamak için servikal dislokasyon yapın vefat etti. Ötenazi ayrıca uzaklaştırılarak onaylanırAdım 1.6 kalbin. </li></ol></li><li> Alkollü bir bezle kuyruk dezenfekte ve 2-3 mm&#39;lik bölümü makasla kesme. Kan, 2 ul toplayın ve seri olarak, sodyum heparin, 1 U / mL, beş kez içeren PBS içinde kan 10 kat seyreltilir. Plaka seri bir triptik soya kan agar plakası üzerinde seyreltme ve koloni ertesi gün tahmin etmek bakteremi seviyesini önemli olan CO 2.% 5, 37 ° C&#39;de gece boyunca inkübe edilir. </li><li> Bir cerrahi platformda bir yatar pozisyonda fare hareketsiz. % 70 etanol ve pat kuru ile göğüs püskürtün. Cerrahi makas ve forseps göğüs boşluğu açmak kullanarak, göğüs kafesini çıkarmak ve kalp ve akciğerler maruz diyaframı transect. Kullanımı makas kalbe bağlı kan damarlarını kesmek ve yavaşça forseps ile morarma önlemek için dikkatle kalp tüketim. </li><li> PBS ile kalp durulayın ve ardından koronal kesitler doku kesit sırasında elde olacağı gibi doku örnek toplama kasetleri içine yerleştirin. Parafin gömme, pla içinparafin gömme için göndermek% 10 tamponlu formalin çözeltisi ve ertesi gün kasetler ce. <ol><li> Alternatif kuru buz konulmuş bir cryomold içinde Ekim Bileşik kullanarak flaş dondurma. </li></ol></li></ol> Kardiyak Lezyonların ve Lezyonlarının içinde pnömokok 2. Görselleştirme <ol><li> Kalbin 4 odaları her doku bölümünde görünür şekilde parafin kalp bölümleri azaltın. 5 mikron kalınlığında slaytlar kesin. </li><li> Standart yöntemler kullanılarak 17 hematoksilen eosin ve (H &amp; E) ile Deparaffinize ve leke slaytlar. </li><li> Büyütme: Görünüm H &amp; E düşük (100X, 200X) ve yüksek (400X, 1,000X yağ daldırma) bir ışık mikroskobu kullanılarak kalp bölümleri boyandı. Miyokardiyumda microlesions varlığı için kalpleri karakterize etmektedir. Burada, bir 100X 1.3 Sayısal açıklık Planı-Neofluar amacı ile donatılmış bir Zeiss Axioskop 2 mikroskop kullanılarak, H &amp; E görüntüleri kazanır. NOT: En erken kardiyak l aşamalarıesions bağışıklık hücrelerine monositler gibi görünen (monositler ve granülositler) varlığında ayırıcı renkli görünüm ve bazı durumlarda ayrımcılık yapılmaktadır. Özellikle 30 saatte görülen ilerlemiş lezyonlar, ise, bağışıklık hücreleri yok ve büyük vakuol benzeri lezyonlar onların yerine gözlenmektedir vardır. Kalp lezyon gelişiminin erken evrelerinde bağışıklık hücre akını oluşabilir ederken bir gereklilik olarak görünmüyor unutmayın önemlidir. </li></ol> Microlesions içinde pnömokokki, 3. immünoflüoresan mikroskopi <ol><li> Pozitif yüklü cam slaytlar üzerine 5 um ve yer bölümleri bir kalınlığa mikrotom ile cryomolds Bölüm kalp. Dondurulmuş kalp bölümler çözülme ve hava kuru izin ver. (25 ° C&#39;de, pH 6.8-7.2) 10 dakika,% 10 nötr tamponlu formalin için bölümler düzeltildi. </li><li> Daha sonra PBS içinde tekrar yıkama, PBS içinde% 0.2 Triton X-100 içinde, 15 dakika boyunca geçirgenliği, 5 dakika boyunca PBS içinde slaytlar (3x) yıkanır. </li><li> Blok doku secti<html> 1 saat boyunca PBS içinde% 10 keçi serumu ile slaytlar üzerine. </li><li> PBS, kapaklı slaytlar durulayın ve 1 tavşan anti-serotip 4 pnömokok antiserumu ile kardiyak bölümleri inkübe: 1000 PBS içerisinde% 10 keçi serumu ile 2 st için 37 ° C &#39;de. NOT: Negatif kontroller için araştırmacılar naif tavşan antiserumunu kullanmanız gerekir </li><li> 37 ° C&#39;de 30 dakika süre ile 2000: 1 bir keçi anti-tavşan FITC ile konjüge edilmiş antikor ile% 10 keçi serumu-PBS ile bölümlere PBS, kapak ile yıkanıp inkübe sonra. </li><li> Üreticinin talimatlarına sonra ökaryotik çekirdeklerin görünüm için, 5 mg / ml DAPI (4 &#39;, 6-diamidino-2-fenilindol) kullanın. Yıkayın ve FluorSave ile doku bölümleri monte edin. </li><li> Düşük ve yüksek hem büyütmede bir konfokal mikroskop sistemi kullanılarak floresan görüntü elde. En iyi sonuçları elde etmek için buna göre sayısal diyafram ayarlayın. Burada, bir 60X 1.42 sayısal diyafram amacı ile bir konfokal sistemi kullanılarak floresan görüntüler elde. </li></ol>Septik Fareler &quot;&gt; 4. Antibiyotik Kurtarma <ol><li> Daha önce 1. adımda belirtildiği gibi TIGR4 1.0 x 10 3 CFU ile fareler enfekte ip ile başlayın. </li><li> 30 saat sonra enfeksiyondan itibaren, 36 saat süre ile 100 ul tuzlu su içinde her 12 saat farmasötik dereceli ampisilin ip (80 mg / kg vücut ağırlığı) uygulamaktadır. Parafine ve doku, kesit olarak, adım 1.6 de tarif edildiği gibi arzu edilen bir zaman noktasında ve süreç kalpleri toplayın. </li></ol> 5. Kollajen Biriktirme Algılama <ol><li> Standart yöntemler kullanılarak 17 deiyonize su, deparaffinize ve hidrat doku bölümleri ile ksilen ve kademeli alkol yıkar kullanma. 5 dakika boyunca, sulu% 0.2 fosfomolibdik asit ile bölümleri tedavi ve 5 dakika boyunca iyonu giderilmiş su ile durulama. </li><li> Oda sıcaklığında 2 saat süre ile pikrik asit içinde% 0.1 Sirius Kırmızı leke bölümleri. </li><li> 3 dakika boyunca 0.01 N hidroklorik asit bölümleri yıkayın ve 1 dakika boyunca% 70 etanol ile yıkayın. </li><li> Dehydraaynı kullanarak bölümleri te ancak 5.1 de tarif edilene yıkama sırasını tersine çevirmek, ksilen artan kardiyak bölümleri kurutmak ve daha sonra etanol konsantrasyonlarını kademeli. </li><li> Mikroskopik değerlendirme için bir montaj çözümü Mount doku bölümleri. </li><li> Kollajen birikimi bölgeleri belirlemek için, bir ışık mikroskobu kullanılarak düşük ve yüksek büyütme altında derin okuma boyama alanlarında lekeli doku bölümleri inceleyin. Kırmızı kalp ventriküller içinde herhangi bir alan kollajen tevdi edilmiş bir alandır. Bu kırmızı leke olmadan Alanları kollajen birikimi eksik sağlıklı doku sitelerdir. Burada, bir 20X 0.5 sayısal diyafram objektif ile donatılmış bir mikroskop kullanılarak Picro Sirius Kırmızı lekeli görüntüler elde. NOT: Sağlıklı dokularda kırmızı atrium lekeleri. </li></ol>

<ol><li>Corrales-Medina, V. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+complications+in+patients+with+community-acquired+pneumonia%3A+incidence%2C+timing%2C+risk+factors%2C+and+association+with+short-term+mortality%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Cardiac complications in patients with community-acquired pneumonia: incidence, timing, risk factors, and association with short-term mortality.</a> Circulation. 125, 773-781 (2012).</li>
<li>Corrales-Medina, V. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+bacterial+pneumonia+is+associated+with+the+occurrence+of+acute+coronary+syndromes%5BTitle%5D)+AND+%22Medicine+%28Baltimore%29%22%5BJournal%5D)">Acute bacterial pneumonia is associated with the occurrence of acute coronary syndromes.</a> Medicine (Baltimore). 88, 154-159 (2009).</li>
<li>Corrales-Medina, V. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+complications+in+patients+with+community-acquired+pneumonia%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis+of+observational+studies%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Med%22%5BJournal%5D)">Cardiac complications in patients with community-acquired pneumonia: a systematic review and meta-analysis of observational studies.</a> PLoS Med. 8, e1001048(2011).</li>
<li>Corrales-Medina, V. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+stratification+for+cardiac+complications+in+patients+hospitalized+for+community-acquired+pneumonia.+Mayo+Clin%5BTitle%5D)+AND+%22Proc%22%5BJournal%5D)">Risk stratification for cardiac complications in patients hospitalized for community-acquired pneumonia. Mayo Clin.</a> Proc. 89, 60-68 (2014).</li>
<li>Kumar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+11+common+viral+and+bacterial+pathogens+causing+community-acquired+pneumonia+or+sepsis+in+asymptomatic+patients+by+using+a+multiplex+reverse+transcription-PCR+assay+with+manual+%28enzyme+hybridization%29+or+automated+%28electronic+microarray%29+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Detection of 11 common viral and bacterial pathogens causing community-acquired pneumonia or sepsis in asymptomatic patients by using a multiplex reverse transcription-PCR assay with manual (enzyme hybridization) or automated (electronic microarray) detection.</a> Journal Of Clinical Microbiology. 46, 3063-3072 (2008).</li>
<li>Musher, D. M., Rueda, A. M., Kaka, A. S., Mapara, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+association+between+pneumococcal+pneumonia+and+acute+cardiac+events%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">The association between pneumococcal pneumonia and acute cardiac events.</a> Clin Infect Dis. 45, 158-165 (2007).</li>
<li>Brown, A. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Streptococcus+pneumoniae+translocates+into+the+myocardium+and+forms+unique+microlesions+that+disrupt+cardiac+function%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Streptococcus pneumoniae translocates into the myocardium and forms unique microlesions that disrupt cardiac function.</a> PLoS Pathogens. In press, (2014).</li>
<li>Orihuela, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laminin+receptor+initiates+bacterial+contact+with+the+blood+brain+barrier+in+experimental+meningitis+models%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Laminin receptor initiates bacterial contact with the blood brain barrier in experimental meningitis models.</a> The Journal of Clinical Investigation. 119, 1638-1646 (2009).</li>
<li>Flick, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+elimination+of+the+binding+motif+on+fibrinogen+for+the+S.+aureus+virulence+factor+ClfA+improves+host+survival+in+septicemia%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Genetic elimination of the binding motif on fibrinogen for the S. aureus virulence factor ClfA improves host survival in septicemia.</a> Blood. 121, 1783-1794 (2013).</li>
<li>Cheng, A. G., DeDent, A. C., Schneewind, O., Missiakas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+play+in+four+acts%3A+Staphylococcus+aureus+abscess+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Microbiol%22%5BJournal%5D)">A play in four acts: Staphylococcus aureus abscess formation.</a> Trends Microbiol. 19, 225-232 (2011).</li>
<li>Arenal, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Do+the+spatial+characteristics+of+myocardial+scar+tissue+determine+the+risk+of+ventricular+arrhythmias%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Do the spatial characteristics of myocardial scar tissue determine the risk of ventricular arrhythmias.</a> Cardiovasc Res. 94, 324-332 (2012).</li>
<li>Deneke, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+histopathology+of+electroanatomic+mapping+after+cooled-tip+radiofrequency+ablation+to+treat+ventricular+tachycardia+in+remote+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cardiovasc+Electrophysiol%22%5BJournal%5D)">Human histopathology of electroanatomic mapping after cooled-tip radiofrequency ablation to treat ventricular tachycardia in remote myocardial infarction.</a> J Cardiovasc Electrophysiol. 16, 1246-1251 (2005).</li>
<li>Bakker, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reentry+as+a+cause+of+ventricular+tachycardia+in+patients+with+chronic+ischemic+heart+disease%3A+electrophysiologic+and+anatomic+correlation%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Reentry as a cause of ventricular tachycardia in patients with chronic ischemic heart disease: electrophysiologic and anatomic correlation.</a> Circulation. 77, 589-606 (1988).</li>
<li>Verma, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+between+successful+ablation+sites+and+the+scar+border+zone+defined+by+substrate+mapping+for+ventricular+tachycardia+post-myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cardiovasc+Electrophysiol%22%5BJournal%5D)">Relationship between successful ablation sites and the scar border zone defined by substrate mapping for ventricular tachycardia post-myocardial infarction.</a> J Cardiovasc Electrophysiol. 16, 465-471 (2005).</li>
<li>Wu, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+risk+for+ventricular+tachyarrhythmias+and+sudden+cardiac+death%3A+is+there+a+role+for+cardiac+MRI%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Cardiovasc+Imaging%22%5BJournal%5D)">Assessing risk for ventricular tachyarrhythmias and sudden cardiac death: is there a role for cardiac MRI.</a> Circ Cardiovasc Imaging. 5, 2-5 (2012).</li>
<li>Tettelin, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complete+genome+sequence+of+a+virulent+isolate+of+Streptococcus+pneumoniae%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Complete genome sequence of a virulent isolate of Streptococcus pneumoniae.</a> Science. 293, 498-506 (2001).</li>
<li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematoxylin+and+eosin+staining+of+tissue+and+cell+sections%5BTitle%5D)+AND+%22CSH+Protoc%22%5BJournal%5D)">Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections.</a> CSH Protoc. 2008, (2008).</li>
</ol>

The authors declare no conflict of interest in this study.

Bu raporda, son derece tekrarlanabilir bir yöntem S. ikna etmek pneumoniae IPD sırasında farelerde kalp microlesions aracılı ve görselleştirme teknikleri gösterilmiştir. Fareler, insan sepsiste oluşur ve miyokarda nihai bakteriyel translokasyon neden benzer yüksek dereceli bakteremi, yol temizlenmesi için bağışıklık sisteminin eşiği aşması bakterilerin bir dozu ile enfekte edilir. S., henüz bilinmeyen nedenlerden dolayı merkezinde pneumoniae vücut bağışıkl?...

Toplum kökenli pnömoni (TKP) için yetişkinlerin Yatış mortalite 1-4 katkıda istenmeyen kardiyak olaylar için belgelenmiş bir risk taşır. Corrales-Medine ve ark tarafından yapılan yeni bir çalışmada. Kardiyak komplikasyonlar ve / veya sorumlu pnömoni ile ilişkili ölümlerin 3% 27 için ilişkili bulunmuştur. Streptococcus pneumoniae (pnömokok), TKP&#39;nin ve sepsis 5 en yaygın nedeni, doğrudan başvuran erişkin hastaların 6 gibi birçok 19 olarak% olumsuz kardiyak olaylar ile ilişkili olmuştur. Pnömoni ile ilişkili advers kardiyak olaylar sıklığını 6 azalan yeni veya kötüleşen konjestif kalp yetmezliği, aritmi ve miyokard infarktüsü sayılabilir. Brown ve arkadaşları tarafından yapılan bir PLoS patojenler makalede., S. pneumoniae myocardiu içine kardiyak vasküler endotelyum, giriş ile translokasyon yeteneğine sahip olduğu bulunmuşturm ve invaziv pnömokokal hastalığın (IPD) 7 sırasında ventrikül bakteri dolu ayrık olmayan pürülan mikroskobik lezyonlar (microlesions) oluşumu. Kardiyak microlesion oluşumunun kanıtı pnömokok enfeksiyonuna yenik olan insan olmayan primatlar ve bireylerden kardiyak örnekleri gözlenmiştir. Benzer şekilde, deneysel olarak enfekte olmuş fareler, yeniden üretilebilir kalp microlesions geliştirdi. Farelerde, microlesion büyüklüğü ve sayısı olumlu süresi ve bakteriyemi, serumlar kardiyak troponin düzeyleri şiddeti ve anormal kalp elektrofizyoloji ile korelasyon. Kalbine bakteriyel translokasyon, kan-beyin engeli ve pnömokok menenjit, bir laminin reseptörü ve Trombosit vasküler endotel hücrelerinin, yani kolin bağlanma proteini A aracılı istilası karşısında pnömokokun translokasyon için sorumlu olan mekanizmalar aracılığıyla meydana geldiği bulunmuştur harekete geçirme faktörü reseptörü bağımlı bir şekilde 8. Microlesiyon oluşumu, kardiyomiyositlerde 7 öldürdüğü bulunmuştur pnömokok gözenek oluşturucu toksin pnömolizin gerekiyor. Pnömokok kalp microlesions Staphylococcus aureus gibi diğer gram pozitif bakterilerin neden olduğu iltihaplı yumuşak doku ve kardiyak abseler farklıdır. Bu, nötrofillerin ve fibrin oluşumu, 9,10 ile çevrili bir bakteri, tek odakları ile karakterize edilir. Microlesions S. tarafından oluşturulan pneumoniae etkilenen bir kalp boyunca dağılmış, boyut olarak daha küçüktür, ve immün hücre infiltrasyonu yoksundur. Enfeksiyonun erken aşamalarında, microlesions S. neden pneumoniae kardiyomiyopati patolojik bulguların anımsatan hasarlı veya iltihaplı doku alanlar olarak görünür. Bazı monositler, ancak kendi varlığını kısa ömürlü ve lezyonlar hızla aynı anda GR devam ederken görünüm nekrotik hale gelir ve bakteri dolu, bu süre içinde görülebilirhayvan veya antimikrobiyal müdahale ölümüne kadar boyutu ow. Önemli bir şekilde, antibiyotik müdahale 3 gün içinde, aşırı bağışık hücre içi filtratı önceki lezyon bölgesinde görülmektedir ve bu sağlam kollajen birikimi eşlik eder. Benzer kalp biçimlenme kardiyak fonksiyon 11-15 sonuçlarını kalıcı birlikte enfarktüsü aşağıdaki meydana bildirilmiştir. Böylece, microlesions hastalık bölüm hayatta nekahet bireylerde kalp-ilişkili mortalite insidansında artış IPD&#39;ye sırasında ve muhtemelen ortaya istenmeyen kardiyak olaylar için potansiyel bir açıklama vardır. Burada, kullanıcı enfeksiyonun erken ve geç aşamalarında IPD ve kardiyak lezyon oluşumu ve kardiyak microlesions görselleştirme deneysel fare modelinde sağlanır. antimikrobiyal müdahale ile kaydedilmiş olan hayvanlarda kollajen birikimi tespiti için protokol gösterilmiştir. Bu makalenin amacı f olduğunuBu önemli ve yeni pnömokok patoloji diğer araştırmacıların araştırma acilitate.

<table><tbody><tr><td>Todd-Hewitt broth&amp;nbsp;</td><td>Neogen</td><td>7161A</td><td></td></tr><tr><td>O.C.T Compound&amp;nbsp;</td><td>Tissue-Tek (Sakura Finetek)&amp;nbsp;</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100&amp;nbsp;</td><td>Fisher Scientific (Acros)</td><td>9002-93-1</td><td></td></tr><tr><td>Normal Goat Serum</td><td>Abcam</td><td>ab7481</td><td></td></tr><tr><td>anti-serotype 4 pneumococcus antiserum&amp;nbsp;</td><td>Statens Serum Institut</td><td>16747</td><td></td></tr><tr><td>goat anti-rabbit FITC conjugated antibody&amp;nbsp;</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>111-096-144</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Invitrogen</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>Fluorsave</td><td>Millipore</td><td>345789</td><td></td></tr><tr><td>Permount</td><td>Fisher Scientific</td><td>S70104</td><td></td></tr><tr><td>Ampicillin</td><td>Sigma</td><td>A9393</td><td></td></tr><tr><td>phosphomolybdic acid 0.2%&amp;nbsp;</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>26357-01</td><td></td></tr><tr><td>0.1% Sirius Red in picric acid&amp;nbsp;</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>26357-02</td><td></td></tr><tr><td>0.01 N hydrochloric acid&amp;nbsp;</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>26357-03</td><td></td></tr><tr><td>Tissue Tack Microscope Slides</td><td>Polysciences, Inc</td><td>24216</td><td></td></tr><tr><td>Paralube Vet Ointment</td><td>Dechra</td><td>12920060</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin and Eosin Staining Kit</td><td>unspeciified&amp;nbsp;</td><td></td><td>Standard</td></tr></tbody></table>

visualization of streptococcus pneumoniae within cardiac microlesions and subsequent cardiac remodeling

Bakteriyemi sırasında Streptococcus pneumoniae miyokard içine vasküler endotel boyunca transloke ve ayrık bakteri dolu mikroskobik lezyonlar nedeniyle bağışıklık hücrelerini infiltre yokluğu dikkat çekiyor (microlesions) oluşturabilir. Nedeniyle kardiyotoksik ürünlerin onların serbest bırakılması, S. microlesions içinde pneumoniae sıklıkla erişkinlerde fulminate invazif pnömokok hastalığı sırasında gözlenen kalp yetmezliğine katkıda bulunduğu düşünülmektedir. Burada 30 saat içinde kalp microlesion oluşumunu tekrarlanabilir neden deneysel fare enfeksiyonu için bir protokol gösterilmiştir. Öğretim Hematoksilin ve lekeli kalp bölümleri ve erken ve geç microlesions arasındaki morfolojik farklılıkları eozin içinde microlesion tanımlama sağlanır vurgulanır. Öğretim S. doğrulanması için bir protokol sağlanır Pnömokok kapsüler polisakkarit ve karşı antikorlar kullanılarak microlesions içinde pneumoniaeimmunofluorescent mikroskopi. Son, enfekte fare ve algılama ve nekahet farelerin kalplerinde skar oluşumu değerlendirilmesi için kurtarır antibiyotik müdahale için bir protokol sağlanır. Birlikte, bu protokoller S. maruz kalma sonucu pnömokok kalp işgali, kardiyomiyosit ölümü, kardiyak remodeling altında yatan moleküler mekanizmaların soruşturma kolaylaştıracaktır pneumoniae ve kalp pneumococci için bağışıklık tepkisi.

H &amp; E ile Microlesions görselleştirme Kardiyak microlesions Şekil 1. TIGR4 ile ip meydan aşağıdaki İPH farelerin kalp bölümleri lekeli H &amp; E ventrikül gözlenen hematoksilen daha fazla sayıda 24 ve 30 saat sonrası enfeksiyon (hpi) arasındaki bu lezyonların boyutunda artış gösteriyor edildi lezyon içinde görünür -stained (yani, mor-mavi) pnömokok. Microlesions bir vakuol-benzeri morfolojisi, daha yoğun eosin (kırmızı), lezyo...

Watch this Scientific Journal Video about Visualization of Streptococcus pneumoniae within Cardiac Microlesions and Subsequent Cardiac Remodeling at JoVE.com

Visualization of Streptococcus pneumoniae within Cardiac Microlesions and Subsequent Cardiac Remodeling

Streptococcus pneumoniae forms discrete non-purulent microscopic lesions in the heart. Outlined is the protocol for a murine model of cardiac microlesion formation. Instruction is provided on microlesion visualization using microscopy, discrimination between early and late microlesions, and methods to detect cardiac remodeling in hearts of convalescent animals.

Görselleştirme<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Kalp Microlesions ve sonraki Kardiyak Tadilat içinde

During bacteremia Streptococcus pneumoniae can translocate across the vascular endothelium into the myocardium and form discrete bacteria-filled ...

visualization-streptococcus-pneumoniae-within-cardiac-microlesions

Research

JoVE Journal

Medicine

Visualization of Streptococcus pneumoniae within Cardiac Microlesions and Subsequent Cardiac Remodeling

9.0K Görüntüleme.  The University of Texas Health Science Center at San Antonio. Streptococcus pneumoniae forms discrete non-purulent microscopic lesions in the heart. Outlined is the protocol for a murine model of cardiac microlesion formation. Instruction is provided on microlesion visualization using microscopy, discrimination between early and late microlesions, and methods to detect cardiac remodeling in hearts of convalescent animals. 

Video: Visualization of Streptococcus pneumoniae within Cardiac Microlesions and Subsequent Cardiac Remodeling

Ultrasonic Assessment of Myocardial Microstructure

Echocardiography is a widely accessible imaging modality that is commonly used to noninvasively characterize and quantify changes in cardiac structure and function. Ultrasonic assessments of cardiac tissue can include analyses of backscatter signal intensity within a given region of interest. Previously established techniques have relied predominantly on the integrated or mean value of backscatter signal intensities, which may be susceptible to variability from aliased data from low frame rates and time delays for algorithms based on cyclic variation. Herein, we describe an ultrasound-based imaging algorithm that extends from previous methods, can be applied to a single image frame&#160;and accounts for the full distribution of signal intensity values derived from a given myocardial sample. When applied to representative mouse and human imaging data, the algorithm distinguishes between subjects with and without exposure to chronic afterload resistance. The algorithm offers an enhanced surrogate measure of myocardial microstructure and can be performed using open-access image analysis software.

Echocardiography is commonly used to noninvasively characterize and quantify changes in cardiac structure and function. We describe an ultrasound-based imaging algorithm that offers an enhanced surrogate measure of myocardial microstructure and can be performed using open-access image analysis software.

Miyokard Mikroyapısının Ultrasonik Değerlendirmesi

Echocardiography is a widely accessible imaging modality that is commonly used to noninvasively characterize and quantify changes in cardiac structure and ...

Tıp

Quantitative Visualization of Leukocyte Infiltrate in a Murine Model of Fulminant Myocarditis by Light Sheet Microscopy

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently labelled structures in large biological specimens, and is down to cellular resolution. Meanwhile, the constant refinement of underlying protocols and the enhanced availability of specialized commercial systems enable us to investigate the microstructure of whole mouse organs and even allow for the characterization of cellular behavior in various live-cell imaging approaches. Here, we describe a protocol for the spatial whole-mount visualization and quantification of the CD45+ leukocyte population in inflamed mouse hearts. The method employs a transgenic mouse strain (CD11c.DTR)that has recently been shown to serve as a robust, inducible model for the study of the development of fulminant fatal myocarditis, characterized by lethal cardiac arrhythmias. This protocol includes myocarditis induction, intravital antibody-mediated cell staining, organ preparation, and LSFM with subsequent computer-assisted image post-processing. Although presented as a highly-adapted method for our particular scientific question, the protocol represents the blueprint of an easily adjustable system that can also target completely different fluorescent structures in other organs and even in other species.

Here, we describe a light-sheet microscopy approach to visualize the cardiac CD45+ leukocyte infiltrate in a murine model of aseptic fulminant myocarditis, which is induced by the intratracheal diphtheria toxin treatment of CD11c.DTR mice.

Bir Fulminan Miyokardit Modelinde Işık Yeri Mikroskopisi İle Lökosit İnfiltrasyonunun Nicel Görselleştirilmesi

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently ...

Refined CLARITY-Based Tissue Clearing for Three-Dimensional Fibroblast Organization in Healthy and Injured Mouse Hearts

Cardiovascular disease is the most prevalent cause of mortality worldwide and is often marked by heightened cardiac fibrosis that can lead to increased ventricular stiffness with altered cardiac function. This increase in cardiac ventricular fibrosis is due to activation of resident fibroblasts, although how these cells operate within the 3-dimensional (3-D) heart, at baseline or after activation, is not well understood. To examine how fibroblasts contribute to heart disease and their dynamics in the 3-D heart, a refined CLARITY-based tissue clearing and imaging method was developed that shows fluorescently labeled cardiac fibroblasts within the entire mouse heart. Tissue resident fibroblasts were genetically labeled using Rosa26-loxP-eGFP florescent reporter mice crossed with the cardiac fibroblast expressing Tcf21-MerCreMer knock-in line. This technique was used to observe fibroblast localization dynamics throughout the entire adult left ventricle in healthy mice and in fibrotic mouse models of heart disease. Interestingly, in one injury model, unique patterns of cardiac fibroblasts were observed in the injured mouse heart that followed bands of wrapped fibers in the contractile direction. In ischemic injury models, fibroblast death occurred, followed by repopulation from the infarct border zone. Collectively, this refined cardiac tissue clarifying technique and digitized imaging system allows for 3-D visualization of cardiac fibroblasts in the heart without the limitations of antibody penetration failure or previous issues surrounding lost fluorescence due to tissue processing.

A refined method of tissue clearing was developed and applied to the adult mouse heart. This method was designed to clear dense, autofluorescent cardiac tissue, while maintaining labeled fibroblast fluorescence attributed to a genetic reporter strategy.

Sağlıklı ve Yaralı Fare Kalplerinde Üç Boyutlu Fibroblast Organizasyonu için Rafine CLARITY Tabanlı Doku Temizleme

Cardiovascular disease is the most prevalent cause of mortality worldwide and is often marked by heightened cardiac fibrosis that can lead to increased ...

An Intact Pericardium Ischemic Rodent Model

This protocol has shown that the pericardium and its contents play an essential anti-fibrotic role in the ischemic rodent model (coronary ligation to induce myocardial injury). The majority of pre-clinical myocardial infarction models require the disruption of pericardial integrity with loss of the homeostatic cellular milieu. However, recently a methodology has been developed by us to induce myocardial infarction, which minimizes pericardial damage and retains the heart&#39;s resident immune cell population. An improved cardiac functional recovery in mice with an intact pericardial space following coronary ligation has been observed. This method provides an opportunity to study inflammatory responses in the pericardial space following myocardial infarction. Further development of the labeling techniques can be combined with this model to understand the fate and function of pericardial immune cells in regulating the inflammatory mechanisms that drive remodeling in the heart, including fibrosis.

This protocol outlines the steps for inducing myocardial infarction in mice while preserving the pericardium and its contents.

Bozulmamış Bir Perikard İskemik Kemirgen Modeli

This protocol has shown that the pericardium and its contents play an essential anti-fibrotic role in the ischemic rodent model (coronary ligation to ...

Tissue Preparation Techniques for Contrast-Enhanced Micro Computed Tomography Imaging of Large Mammalian Cardiac Models with Chronic Disease

Structural remodeling is a common consequence of chronic pathological stresses imposed on the heart. Understanding the architectural and compositional properties of diseased tissue is critical to determine their interactions with arrhythmic behavior. Microscale tissue remodeling, below the clinical resolution, is emerging as an important source of lethal arrhythmia, with high prevalence in young adults. Challenges remain in obtaining high imaging contrast at sufficient microscale resolution for preclinical models, such as large mammalian whole hearts. Moreover, tissue composition-selective contrast enhancement for three-dimensional high-resolution imaging is still lacking. Non-destructive imaging using micro-computed tomography shows promise for high-resolution imaging. The objective was to alleviate sufferance from X-ray over attenuation in large biological samples. Hearts were extracted from healthy pigs (N = 2), and sheep (N = 2) with either induced chronic myocardial infarction and fibrotic scar formation or induced chronic atrial fibrillation. Excised hearts were perfused with: a saline solution supplemented with a calcium ion quenching agent and a vasodilator, ethanol in serial dehydration, and hexamethyldisilizane under vacuum. The latter reinforced the heart structure during air-drying for 1 week. Collagen-dominant tissue was selectively bound by an X-ray contrast-enhancing agent, phosphomolybdic acid. Tissue conformation was stable in air, permitting long-duration microcomputed tomography acquisitions to obtain high-resolution (isotropic 20.7 &#181;m) images. Optimal contrast agent loading by diffusion showed selective contrast enhancement of the epithelial layer and sub-endocardial Purkinje fibers in healthy pig ventricles. Atrial fibrillation (AF) hearts showed enhanced contrast accumulation in the posterior walls and appendages of the atria, attributed to greater collagen content. Myocardial infarction hearts showed increased contrast selectively in regions of cardiac fibrosis, which enabled the identification of interweaving surviving myocardial muscle fibers. Contrast-enhanced air-dried tissue preparations enabled microscale imaging of the intact large mammalian heart and selective contrast enhancement of underlying disease constituents.

Here, we present a protocol to obtain high resolution micro computed tomography images of healthy and pathological large mammalian whole hearts with collagen-selective contrast enhancement.

Kronik Hastalığı Olan Büyük Memeli Kardiyak Modellerinin Kontrastlı Mikro Bilgisayarlı Tomografi Görüntülemesinde Doku Hazırlama Teknikleri

Structural remodeling is a common consequence of chronic pathological stresses imposed on the heart. Understanding the architectural and compositional ...

Scanning Electron Microscopy of Macerated Tissue to Visualize the Extracellular Matrix

Fibrosis is a component of all forms of heart disease regardless of etiology, and while much progress has been made in the field of cardiac matrix biology, there are still major gaps related to how the matrix is formed, how physiological and pathological remodeling differ, and most importantly how matrix dynamics might be manipulated to promote healing and inhibit fibrosis. There is currently no treatment option for controlling, preventing, or reversing cardiac fibrosis. Part of the reason is likely the sheer complexity of cardiac scar formation, such as occurs after myocardial infarction to immediately replace dead or dying cardiomyocytes. The extracellular matrix itself participates in remodeling by activating resident cells and also by helping to guide infiltrating cells to the defunct lesion. The matrix is also a storage locker of sorts for matricellular proteins that are crucial to normal matrix turnover, as well as fibrotic signaling. The matrix has additionally been demonstrated to play an electromechanical role in cardiac tissue. Most techniques for assessing fibrosis are not qualitative in nature, but rather provide quantitative results that are useful for comparing two groups but that do not provide information related to the underlying matrix structure. Highlighted here is a technique for visualizing cardiac matrix ultrastructure. Scanning electron microscopy of decellularized heart tissue reveals striking differences in structure that might otherwise be missed using traditional quantitative research methods.

Shown here is a method for visualizing extracellular matrix ultrastructure in decellularized cardiac tissues.

Macerated Tissue taramalı elektron mikroskobu Ekstraselüler Matrix Visualize&#39;a

Fibrosis is a component of all forms of heart disease regardless of etiology, and while much progress has been made in the field of cardiac matrix ...

Biyoloji

Ultrasound-Guided Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocyte Implantation in Myocardial Infarcted Mice

The key objective of cell therapy after myocardial infarction (MI) is to effectively enhance the cell grafted rate, and human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes (hiPSC-CMs) are a promising cell source for cardiac repair after ischemic damage. However, a low grafted rate is a significant obstacle for effective cardiac tissue regeneration after transplantation. This protocol shows that multiple hiPSC-CM ultrasound-guided percutaneous injections into an MI area effectively increase cell transplantation rates. The study also describes the entire hiPSC-CM culture process, pretreatment, and ultrasound-guided percutaneous delivery methods. In addition, the use of human mitochondrial DNA help detect the absence of hiPSC-CMs in other mouse organs. Lastly, this paper describes the changes in cardiac function, angiogenesis, cell size, and apoptosis at the infarcted border zone in mice 4 weeks after cell delivery. It can be concluded that echocardiography-guided percutaneous injection of the left ventricular myocardium is a feasible, relatively invasive, satisfactory, repeatable, and effective cellular therapy.

Ultrasound-guided cell delivery around the site of myocardial infarction in mice is a safe, effective, and convenient way of cell transplantation.

Miyokard Enfarktüslü Farelerde Ultrason Rehberliğinde İndüklenen Pluripotent Kök Hücre Kaynaklı Kardiyomiyosit İmplantasyonu

The key objective of cell therapy after myocardial infarction (MI) is to effectively enhance the cell grafted rate, and human induced pluripotent stem ...

An Experimental Model of Myocardial Infarction for Studying Cardiac Repair and Remodeling in Knockout Mice

Cardiovascular disease is the most prevalent cause of death in Western countries, with acute myocardial infarction (MI) being the most prevalent form. This paper describes a protocol for studying the role of galectin 3 (Gal-3) in the temporal evolution of cardiac healing and remodeling in an experimental animal model of MI. 
The procedures described include an experimental model of MI with a permanent coronary ligature in male C57BL/6J (control) and Gal-3 knockout (KO) mice, an echocardiography procedure to study cardiac remodeling and systolic function in vivo, a histological evaluation of interstitial myocardial fibrosis with picrosirius red-stained and rhodamine-conjugated lectin-stained sections for studying myocyte hypertrophy by the cross-sectional area (MCSA), and the quantification of infarct size and cardiac remodeling (scar thinning, septum thickness, and expansion index) by planimetry in slices stained with Masson's trichrome and triphenyl tetrazolium chloride. Gal-3 KO mice with MI showed disrupted cardiac remodeling and an increase in the scar thinning ratio and the expansion index. At the onset of MI, myocardial function and cardiac remodeling were also severely affected. At 4 weeks post MI, the natural evolution of fibrosis in infarcted Gal-3 KO mice was also affected. 
In summary, the experimental model of MI is a suitable model for studying the temporal evolution of cardiac repair and remodeling in mice with the genetic deletion of Gal-3 and other animal models. The lack of Gal-3 affects the dynamics of cardiac repair and disrupts the evolution of cardiac remodeling and function after MI.

<meta charset="utf8"></head><body>Nakavt farelerde kardiyak onarım ve yeniden şekillenmeyi incelemek için deneysel bir miyokard enfarktüsü modeli

Here, we describe an experimental model of myocardial infarction, an echocardiography procedure to study cardiac remodeling and function, and procedures for quantifying fibrosis and hypertrophy in picrosirius red-stained and rhodamine-stained sections, as well as the infarct size and expansion index in slices stained with Masson's trichrome.

Nakavt farelerde kardiyak onarım ve yeniden şekillenmeyi incelemek için deneysel bir miyokard enfarktüsü modeli

Cardiovascular disease is the most prevalent cause of death in Western countries, with acute myocardial infarction (MI) being the most prevalent form. ...

Murin Pulmoner Venlerin Miyokard Mimarisinin Ortaya Çıkarılması

Microdissection and Immunofluorescence Staining of Myocardial Sleeves in Murine Pulmonary Veins

Pulmonary veins (PVs) are the major source of ectopic beats in atrial arrhythmias and play a crucial role in the development and progression of atrial fibrillation (AF). PVs contain myocardial sleeves (MS) composed of cardiomyocytes. MS are implicated in the initiation and maintenance of AF, as they preserve similarities to the cardiac working myocardium, including the ability to generate ectopic electrical impulses. Rodents are widely used and may represent excellent animal models to study the pulmonary vein myocardium since cardiomyocytes are widely present all over the vessel wall. However, precise microdissection and preparation of murine PVs is challenging due to the small organ size and intricate anatomy.
We demonstrate a microscopy-guided microdissection protocol for isolating the murine left atrium (LA) together with the PVs. Immunofluorescence staining using cardiac Troponin-T (cTNT) and connexin 43 (Cx43) antibodies is performed to visualize the LA and PVs in full length. Imaging at 10x and 40x magnification provides a comprehensive view of the PV structure as well as detailed insights into the myocardial architecture, particularly highlighting the presence of connexin 43 within the MS.

Yazar Spotlight: Türler Arası Atriyal Fibrilasyon Araştırmaları için Translasyonel Bir Model Geliştirme 

This protocol demonstrates microscopy-guided isolation and immunofluorescence staining of murine pulmonary veins. We prepare tissue samples containing the left atrium, pulmonary veins, and the corresponding lungs and stain them for cardiac Troponin T and Connexin 43.

Murin Pulmoner Venlerde Miyokard Kılıflarının Mikrodiseksiyonu ve İmmünofloresan Boyanması

Pulmonary veins (PVs) are the major source of ectopic beats in atrial arrhythmias and play a crucial role in the development and progression of atrial ...

Görselleştirme

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Miyokard Mikroyapısının Ultrasonik Değerlendirmesi

Bir Fulminan Miyokardit Modelinde Işık Yeri Mikroskopisi İle Lökosit İnfiltrasyonunun Nicel Görselleştirilmesi

Sağlıklı ve Yaralı Fare Kalplerinde Üç Boyutlu Fibroblast Organizasyonu için Rafine CLARITY Tabanlı Doku Temizleme

Bozulmamış Bir Perikard İskemik Kemirgen Modeli

Kronik Hastalığı Olan Büyük Memeli Kardiyak Modellerinin Kontrastlı Mikro Bilgisayarlı Tomografi Görüntülemesinde Doku Hazırlama Teknikleri

Macerated Tissue taramalı elektron mikroskobu Ekstraselüler Matrix Visualize'a

Miyokard Enfarktüslü Farelerde Ultrason Rehberliğinde İndüklenen Pluripotent Kök Hücre Kaynaklı Kardiyomiyosit İmplantasyonu

Nakavt farelerde kardiyak onarım ve yeniden şekillenmeyi incelemek için deneysel bir miyokard enfarktüsü modeli

Nakavt farelerde kardiyak onarım ve yeniden şekillenmeyi incelemek için deneysel bir miyokard enfarktüsü modeli

Murin Pulmoner Venlerde Miyokard Kılıflarının Mikrodiseksiyonu ve İmmünofloresan Boyanması