بتمويل من المعاهد الوطنية الأميركية للصحة (يمنح R01EB008678، R01DK096075، R01DK084053، R00DK088962 وF32 DK103500)، مشروع CIMIT رقم 12-1732 والمستشفيات Shriners للأطفال ومن المسلم به بامتنان. ونود أن نعترف بامتنان الضفة نيو انغلاند الجهاز لدعم هذا العمل.

يجب إعادة النظر في استخدام الأنسجة البشرية من قبل مجلس مراجعة المؤسسية (IRB) أو ما يعادلها. وتمت الموافقة على العمل الموصوف هنا وأعلن معفى من قبل مستشفى المؤسسي مجلس مراجعة ماساتشوستس العام (رقم 2011P001496). 1. إعداد الحل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جو معقم و مطهر إضافة ملاحق الفينول الحمراء الخالية ويليامز المتوسط ​​E على النحو المبين في الجدول 1. وينبغي إعداد حل الطازجة قبل استخدامها. وينبغي أن يضاف الأنسولين فقط قبل الاستخدام. </li></ol> 2. عودة إعداد جدول الكبد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع وعاء الجهاز مملوءة الجليد على العقيمة، سطح رايات. إزالة الكبد من مربع، تركها في كيس من الحل الحفاظ على البارد. حفاظ على الكبد المغمورة في الغالب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد الشريان الكبدي (HA)، والتي سوف يكون موجودا البعيدة إلى التصحيح الأبهر. تشريح مجانا الشريان للكشف عن مختلف فروع قطع على طول باستخدام مقص Metzenbaum. ديس بعنايةط م على طول الشريان لمنع قطع السفينة التي تزود الكبد. لا قطع أو ربط الفروع التي ليس لها نهاية واضحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ربطة عنق من جميع فروع الشرايين بعدم تزويد الكبد باستخدام الخيط الحرير تتراوح من 0 إلى حجم 4-0، اعتمادا على حجم السفينة. فروع الوثيقة التي هي قصيرة جدا لادراك التعادل، أو ثقوب في الشريان مع غرزة من 7-0 البرولين. ربطة عنق وقطع شرايين المعدة الطحال واليسرى قريبة من أصلهم على الجذع الاضطرابات الهضمية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة التصحيح الأبهر عن طريق قطع الجذع الاضطرابات الهضمية مباشرة تحت التصحيح. يقني؛ يدخل القنية الجذع الاضطرابات الهضمية باستخدام قنية الأبهر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التعرف على الوريد البابي (PV) وتشريح بصراحة انها كانت حرة. ربطة عنق من أي فروع ويقني؛ يدخل القنية في PV مع قطاع استعداد لحجم 24 الأنابيب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة أجزاء من الحجاب الحاجز من الوريد الأجوف فوق الكبد، بدون تقطيع الوريد نفسه. تدفق من المصارف الوريد الأجوف مباشرة الى غرفة الجهاز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع 2 كامل محيط منظمة الشفافية الدوليةعينات ssue (2-3 ملم طول) من نهاية القناة الصفراوية المشتركة؛ المفاجئة تجميد واحد في النيتروجين السائل (مخزن في -80 ° C) وتخزين البعض في 10٪ من الفورمالين مخزنة، لالأنسجة والتحليل النسيجي، على التوالي. يقني؛ يدخل القنية القناة الصفراوية المشتركة مع قنية السفينة وأنبوب التصريف المصنوعة من مكساج غشاء الأنبوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد وligate القناة الكيسي بالتعادل 0 الحرير. تم العثور على القناة المرارية بين القناة الصفراوية المشتركة والمرارة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توصيل أنابيب تدفق المقرر أن أكياس الثلج الباردة من (LR) محلول رينغر اللاكتاتي ورئيس وأنابيب، وإزالة كل الهواء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط منظم التدفق على أنابيب دافق الى حد كبير بطيئة. قبل توصيل أنابيب تدفق للقنية الوريد البابي، انسداد الوريد البابي مع الأصابع في نقير وملء قنية والوريد مع دافق لإزالة الهواء من الوريد البابي. لا رفع الكيس أكثر من 20 سم على ارتفاع الكبد أثناء التنظيف البارد لتجنب الضغط المفرط علىالوريد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وخلال فترة وجيزة دافق تسد PV عند أدنى نقطة. دراسة PV من وجود تسرب. فروع سفينة يمكن إغلاق قبالة كما هو موضح أعلاه. مسح الكبد من خلال PV مع ما مجموعه 2 L من LR-الجليد الباردة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الخطوات من 2.10، 2.11 لHA مع 1 لتر من LR. </li></ol> 3. تحفيز نظام SNMP <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رئيس جهاز نضح بإضافة 2 L من سائل الإرواء (21 ° C) إلى وعاء الجهاز وتشغيل الجهاز لرئيس الأنبوب. اتبع تعليمات الجهاز للتحضير للنضح، وتحديد درجة الحرارة إلى 21 درجة مئوية. تبدأ مع الضغوط من 3 مم زئبق و 30 مم زئبق على PV وHA، على التوالي. فتح خزان الغاز وتعيين إلى تدفق 3 لتر / دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أخذ عينة غازات الدم من كل من HA و PV تدفق من خلال الاعتماد على عينة 0.3 مل من عينة الموانئ وتشغيله في الجهاز تحليل غازات الدم وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. تأكيد الأوكسجين الكافي (ص 2&gt; 700 مم زئبق) والرقم الهيدروجيني (7،35-7،45). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل الكبد يتم توصيل أخذ عينة 1.0 مل من سائل الإرواء كما في = 0 قياس في أنبوب إيبندورف وتخزينها في -80 ° C. قطع اثنين ± 250 الخزعات إسفين ملغ من الكبد باستخدام شفرة الفولاذ واحدة للفوز. المفاجئة تجميد واحد في النيتروجين السائل (مخزن في -80 ° C) وتخزين البعض في 10٪ من الفورمالين مخزنة. وزن الكبد قبل التروية. </li></ol> 4. الكبد الإرواء الإنسان <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الكبد إلى الجهاز. قم بتوصيل تدفق PV لقنية PV، بعد إزالة الهواء من PV كما في الخطوة 2.10. ربط HA بطريقة مماثلة. تعيين PV وHA الضغط إلى 3 و 30 مم زئبق. الكبد يجب أن يغطس تقريبا من سائل الإرواء. تغطية أي الأسطح الجافة، بما في ذلك السفن تدفق، مع شاش معقم الرطب لمنع الجفاف </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للاستنزاف الأنابيب الصفراء في وعاء جمع. تأكد من أن افتتاح استنزاف الصفراء هو على مستوى الكبد أو أدنى للسماح الصفراء لتشغيل سالتحرير بحرية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> معدلات تدفق المستهدفة هي 275-325 مل / min.kg و50-100 مل / min.kg لPV وHA على التوالي مرة واحدة ارتفعت درجة حرارة الكبد إلى 21 ° C. وبما أن كل كبد يتفاعل بشكل مختلف لنضح، ومراقبة تدفق كثب خلال الدقائق الأولى. زيادة أو تقليل الضغط على أي من السفن إذا لم يتم التوصل إلى معدلات تدفق الهدف. لا تتجاوز 50 مم زئبق على HA و 5 مم زئبق على PV. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يمكن أخذ عينات من أنسجة الكبد، الإرواء والصفراء في تفضيل المحققين. ونحن نوصي على الأقل على نظام جمع العينات التالية خلال نضح. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الخزعات النسيجية، ن = 2 × 250 ملغ، كل ساعة. التخزين: المفاجئة تجميد واحد في النيتروجين السائل وتخزينها في -80 ° C المدى الطويل. بالإضافة إلى ذلك، أخذ خزعة آخر قبل وبعد نضح وإصلاح في 10٪ مخزنة الفورمالين (ن = 1) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عينات سائل الإرواء، ن = 2X 1 مل، كل 15 دقيقة لمدة ساعة الأولى وكل 30 دقيقة بعد ذلك. أخذ عينات من الوقود النووي المشع PVمنخفض ميناء العينة. التخزين: -80 ° C المدى الطويل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحليل غازات الدم من PV وHA تدفق، والوريد الأجوف تدفق. ن = 3 × 0.3 مل، كل 30 دقيقة. أخذ عينات من كل من PV والموانئ عينة HA. رسم عينة 0.3 مل من الوريد الأجوف عن طريق إدخال حقنة في الوريد وتشغيل مباشرة في تحليل غازات الدم. استخدام الانتاج لضمان الأوكسجين ودرجة الحموضة كافية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إنتاج الصفراء، ن = 1 × 1 مل، كل ساعة. بصريا تحديد إنتاج الصفراء في كل ساعة وأخذ عينة من حاويات خاصة لجمع. تجديد الحاوية بعد أخذ العينات. التخزين: الثلج الجاف و-80 ° C المدى الطويل. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تواصل نضح لمدة 3 ساعة. مراقبة الضغط، ودرجة الحموضة والأوكسجين وأخذ عينات طوال الوقت. ضبط درجة الحموضة انه من خلال إضافة بيكربونات الصوديوم إلى سائل الإرواء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في نهاية نضح أخذ العينات النهائية في الوقت الذي يجري perfused لالكبد. فصل الكبد وإزالة قنية القناة الصفراوية. اتخاذ 2 عينات الأنسجة بعد نضح منالقناة الصفراوية كما هو موضح من قبل لتخزين في -80 درجة مئوية و في 10٪ من الفورمالين مخزنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجاهل الكبد البشري التالية المبادئ التوجيهية للتخلص السليم واقية. </li></ol>

<ol>
	<li>Merion, R. M., Pelletier, S. J., Goodrich, N., Englesbe, M. J., Delmonico, F. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donation+after+cardiac+death+as+a+strategy+to+increase+deceased+donor+liver+availability.">Donation after cardiac death as a strategy to increase deceased donor liver availability.</a> Ann Surg. 244 (4), 555-562 (2006).</li><li>Guarrera, J. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypothermic+machine+preservation+facilitates+successful+transplantation+of+'orphan'+extended+criteria+donor+livers.">Hypothermic machine preservation facilitates successful transplantation of 'orphan' extended criteria donor livers.</a> Am J Transplant. 15, 161-169 (2015).</li><li>Dutkowski, P., Schlegel, A., de Oliveira, M., M&#252;llhaupt, B., Clavien, P. -. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HOPE+for+human+liver+grafts+obtained+from+donors+after+cardiac+death.">HOPE for human liver grafts obtained from donors after cardiac death.</a> J Hepatol. 60 (4), 765-772 (2013).</li><li>Dutkowski, P., Clavien, P. -. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solutions+to+Shortage+of+Liver+Grafts+for+Transplantation.">Solutions to Shortage of Liver Grafts for Transplantation.</a> Br J Surg. 101 (7), 739-774 (2014).</li><li>Vogel, T., Brockmann, J. G., Friend, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex-vivo+Normothermic+Liver+Perfusion:+An+Update.">Ex-vivo Normothermic Liver Perfusion: An Update.</a> Curr Opin Organ Transplant. 15 (2), 167-172 (2010).</li><li>Monbaliu, D., Brassil, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Machine+Perfusion+of+the+Liver:+Past,+Present,+and+Future.">Machine Perfusion of the Liver: Past, Present, and Future.</a> Curr Opin Organ Transplant. 15 (2), 160-166 (2010).</li><li>Matsuno, M., Uchida, K., Furukawa, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+Machine+Perfusion+Preservation+of+Liver+Grafts+From+Donation+After+Cardiac+Death.">Impact of Machine Perfusion Preservation of Liver Grafts From Donation After Cardiac Death.</a> Transplant Proc. 46 (4), 1099-1103 (2014).</li><li>Schlegel, A., Dutkowski, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+hypothermic+machine+perfusion+in+liver+transplantation.">Role of hypothermic machine perfusion in liver transplantation.</a> Transplant Int. , (2014).</li><li>Op den Dries, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+normothermic+machine+perfusion+and+viability+testing+of+discarded+human+donor+livers.">Ex vivo normothermic machine perfusion and viability testing of discarded human donor livers.</a> Am J Transplant. 13, 1327-1335 (2013).</li><li>Bruinsma, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibiotic+prophylaxis+in+(sub)normothermic+organ+preservation:+In+vitro+efficacy+and+toxicity+of+cephalosporins.">Antibiotic prophylaxis in (sub)normothermic organ preservation: In vitro efficacy and toxicity of cephalosporins.</a> Transplantation. 95 (8), 1064-1069 (2013).</li><li>Post, I. C., Dirkes, M. C., Heger, M., Bezemer, R., van't Leven, J., van Gulik, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+flow+and+pressure+management+in+machine+perfusion+systems+for+organ+preservation.">Optimal flow and pressure management in machine perfusion systems for organ preservation.</a> Ann Biomed Eng. 40 (12), 2698-2707 (2012).</li><li>Post, I. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+cell+preservation+at+hypothermic+to+normothermic+conditions+using+clinical+and+experimental+organ+preservation+solutions.">Endothelial cell preservation at hypothermic to normothermic conditions using clinical and experimental organ preservation solutions.</a> Exp Cell Res. 319 (17), 2501-2513 (2013).</li><li>Klein, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+Donation+and+Utilization+in+the+United+States,+1999-2008.">Organ Donation and Utilization in the United States, 1999-2008.</a> Am J Transplant. 10 (4), 973-986 (2010).</li><li>Jay, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Increased+Costs+of+Donation+After+Cardiac+Death+Liver+Transplantation.">The Increased Costs of Donation After Cardiac Death Liver Transplantation.</a> Ann Surg. 251 (4), 743-748 (2010).</li><li>Seehofer, D., Eurich, D., Veltzke-Schlieker, W., Neuhaus, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+Complications+After+Liver+Transplantation:+Old+Problems+and+New+Challenges.">Biliary Complications After Liver Transplantation: Old Problems and New Challenges.</a> Am J Transplant. 13, 253-265 (2013).</li><li>Morrissey, P., Monaco, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donation+After+Circulatory+Death:+Current+Practices,+Ongoing+Challenges+and+Potential+Improvement.">Donation After Circulatory Death: Current Practices, Ongoing Challenges and Potential Improvement.</a> Transplantation. 97 (3), 258-264 (2014).</li><li>Verdonk, R., Buis, C., Porte, R., Haagsma, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+complications+after+liver+transplantation:+A+review.">Biliary complications after liver transplantation: A review.</a> Scand J Gastroenterol. 41, 89-101 (2006).</li><li>Pine, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+Transplantation+Following+Donation+After+Cardiac+Death:+An+Analysis+Using+Matched+Pairs.">Liver Transplantation Following Donation After Cardiac Death: An Analysis Using Matched Pairs.</a> Liver Transpl. 15 (9), 1072-1082 (2009).</li><li>Sutton, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Criteria+for+viability+assessment+of+discarded+human+donor+livers+during+ex+vivo+normothermic+machine+perfusion.">Criteria for viability assessment of discarded human donor livers during ex vivo normothermic machine perfusion.</a> PLoS One. 11, e110642 (2014).</li><li>Bruinsma, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subnormothermic+Machine+Perfusion+for+Ex+Vivo+Preservation+and+Recovery+of+the+Human+Liver+for+Transplantation.">Subnormothermic Machine Perfusion for Ex Vivo Preservation and Recovery of the Human Liver for Transplantation.</a> Am J Transplant. 14, 1400-1409 (2014).</li><li>Bruinsma, B. G., Yarmush, M. L., Uygun, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organomatics+and+organometrics:+Novel+platforms+for+long-term+whole-organ+culture.">Organomatics and organometrics: Novel platforms for long-term whole-organ culture.</a> Technology. 02 (1), 13-22 (2014).</li><li>Berendsen, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+subnormothermic+machine+perfusion+system+restores+ischemically+damaged+liver+grafts+in+a+rat+model+of+orthotopic+liver+transplantation.">A simplified subnormothermic machine perfusion system restores ischemically damaged liver grafts in a rat model of orthotopic liver transplantation.</a> Transplant Res. 1 (1), 6 (2012).</li></ol>

الدكاترة. BE UYGUN، K UYGUN وYarmush هم المخترعين على براءات الاختراع في انتظار التي هي ذات الصلة لهذه الدراسة (WO / 2011/002926)، والدكاترة. BE UYGUN، K UYGUN وYarmush هم المخترعين على براءات الاختراع في انتظار التي هي ذات الصلة لهذه الدراسة (WO / 2011/35223). الدكاترة. K UYGUN وبروينسما ديك طلب البراءة المؤقت المتعلقة بهذا العمل. الدكتور K UYGUN وBE UYGUN لديهم مصلحة مالية في الجهاز حلول، وهي شركة تركز على تطوير التكنولوجيا الحفاظ على الجهاز. الدكتور K UYGUN، وتكون تدار مصالح UYGUN من قبل MGH والشركاء للرعاية الصحية وفقا للصراعهم سياسات الفائدة.

في محاولة لاستعادة كبد أصيبوا خلال نقص التروية قمنا بتطوير نظام SNMP التي يمكن استخدامها بعد فترة من التخزين البارد. Subnormothermic نضح الجهاز يقدم بديلا صالحا للتخزين البارد التقليدية، فضلا عن طرائق آلة نضح منخفض الحرارة وسوي الحرارة. وتوجد العديد من أنظمة مختلفة؛ كل توفر مزايا وعيوب مختلفة 3،9،20. SNMP تسمح لنضح دون حاملة الأكسجين، ومطالب الأكسجين التمثيل الغذائي في 21 والتقى ° C بواسطة الأوكسجين النشط للسائل الإرواء. وعلى الرغم من انخفاض في ظل ظروف subnormothermic، والتمثيل الغذائي هو كبير ويتطلب دعم حل نضح الغنية بالمغذيات. الحلول نضح التقليدية، مثل حل الجهاز نضح Belzer، هي الحد الأدنى عموما في تكوين ومصممة لنضح البارد. وقد ويليامز المتوسطة E المستخدمة كوسيلة الثقافة الكبدية لسنوات عديدة، ويحتوي جomponents التي هي حقوق عالمية لدعم وظيفة الخلوية، ولا سيما في ظل الظروف الدافئة خارج الحي. القياسات التي أجريت خلال آلة نضح هي تعكس وظيفة الجهاز. المعلمات ملاحظتها مباشرة مثل إنتاج الصفراء وامتصاص الأوكسجين هي القياسات في الوقت الحقيقي التي يمكن استخدامها لتقييم الكبد ما قبل الزرع. وبالمثل، علامات الإصابة الخلوية ونقص التروية (K +، وإطلاق سراح اللاكتات) يمكن قياسها بشكل مباشر في حل نضح ويمكن أن تكون مؤشرا على وظيفة الجهاز 20. مع تطور التكنولوجيا آلة نضح أبعد من ذلك وتحقق التطبيق السريري أكثر انتشارا، العلاقات المتبادلة بين دقيقة خارج الحي وظيفة ونتائج سريرية يمكن إجراء وسيكون المعلمات نضح مفيدا في مساعدة القرارات لزرع كبد أو رفض ذات جودة هامشية. وعلاوة على ذلك، ونقطة من الرعاية الأدوات التحليلية مسبقا، وتحليل أكثر تطورا تصبح متاحة مباشرة خلال آلة perfuسيون 21. في هذا العمل وتبين لنا أن كبد ويمكن دعم في النظام SNMP مع الحد الأدنى من إصابة في الكبد والأنسجة التي تعكسها وإطلاق ALT. هو أفضل ينعكس الانتعاش وظيفية من الكبد عن طريق ATP، وهو ما ثبت لربط لقابلية الكبد ويوحي بقوة للنجاح زرع في النماذج الحيوانية 22. سيكون خارج الحي والانتعاش قبل زرع الطعوم الكبد تسمح توسعا كبيرا من الجهات المانحة تجمع الكبد، وتصحيح التفاوت بين العرض والطلب من كبد المانحة في الزرع.

زرع الكبد هو العلاج العلاجية الوحيدة لعشرات الآلاف من المرضى الذين يعانون من أمراض الكبد في نهاية المرحلة. لتسهيل زرع ناجحة، والحفاظ الأمثل للكبد من وقت شراؤها من الجهات المانحة حتى الوقت هو مزروع في المتلقي هو ضروري لمنع التدهور السريع للالكسب غير المشروع. يسمى المعيار الحالي للحفاظ على الكبد التخزين البارد ثابت &#39;: يتم تبريد الكبد في محلول الحفاظ على الجليد الباردة، مما يقلل من عملية التمثيل الغذائي في الكبد وتباطؤ الآثار الضارة للنقص التروية. على الرغم من أن سمحت هذه التقنية التخزين الباردة لزرع ناجحة، أجهزة نوعية هامشية مثل أجهزة DCD التي تضررت من نقص التروية دافئ أو إظهار تنكس دهني المريض أدنى نواتج 1. وهناك مجموعة متنامية من الأدلة على أن فيفو السابقين نضح الجهاز الطعوم الكبد باعتبارها المحافظة طريقة بديلة يمكن أن يحتمل ايمتثبت نتائج لهذه الأجهزة هامشية 2،3. زراعة كبد قد يصبح ضحية لنجاحه. ويشار أكثر بكثير المرضى لزرع كبد من هناك المتاحة، والآلاف يموتون على قائمة الانتظار في الولايات المتحدة كل عام. وبالنظر إلى واقع نقص الكبد المانحة وزيادة استخدام الطعوم الكبد من نوعية دون المستوى الأمثل للمستفيدين المحتاجين، ويقام على نطاق واسع أن فيفو السابقين نضح الجهاز الطعوم الكبد قبل الزرع يبشر نقلة نوعية في زراعة الكبد. كان هناك زيادة ملحوظة في مصلحة الأبحاث في هذا الموضوع في السنوات الأخيرة 4-8. في مختلف المراكز الأوروبية وأمريكا الشمالية جعلت آلة منخفض الحرارة نضح وقد تم مؤخرا تطبيق السريرية مقدمة 8 و سوي الحرارة آلة نضح في درجات حرارة الفسيولوجية للكبد الإنسان التخلص منها ويتم ترجمتها إلى الاستخدام السريري فضلا 9.وقد أدى تطوير واسعة لوضع بروتوكولات مختلفة، في حين يحدد التحسين المستمر نضح الأمثل معلمات 10-12. زاد استخدام الطعوم ذات جودة هامشية أكثر من 10 أضعاف خلال العقد الماضي (13). بالمقارنة مع الوضع الحالي للحفاظ على الكبد (التخزين البارد ثابت)، فيفو السابقين نضح الجهاز يوفر العديد من الفوائد المحتملة، ينتج كل منها في التوسع تشتد الحاجة إليها من حوض السباحة الجهاز ويحتمل أن ينخفض ​​في حدوث مضاعفات ما بعد الزرع. على وجه الخصوص، ومضاعفات المرارية التي يعاني منها حاليا الطعوم الكبد ذات جودة الأمثل بعد الزرع لا تزال قضية كبيرة 14-18. نضح الجهاز في الظروف subnormothermic يوفر نافذة زمنية لتقييم وظيفة الكسب غير المشروع بموضوعية لصلاحيتها للزراعة 19. في الوقت الذي يجري perfused لالكبد في دائرة خارج الحي، فإن كلا من سائل الإرواء لالثانية الصفراء المنتجة خلال نضح يمكن أخذ عينات لقياس علامات على وظيفة الجهاز. وبهذه الطريقة &quot;خطر شديد&quot; كبد التي يتم التخلص منها لزرع بموجب المعايير الحالية يمكن تقييمها بشكل موضوعي لمدى ملاءمتها للزراعة. يحتمل أن يسمح تقييم الجدوى للعديد من هذه الأجهزة لاستخدامها للزرع. فائدة قوية بنفس القدر من الجهاز نضح هي إصلاح وتحسين الكبد التي تضررت من دافئ / نقص التروية الباردة. يتم استنفاد ATP بسرعة كبيرة خلال الحار والبارد لاحق نقص التروية، ويمكن repleted خلال الفترة من الجهاز نضح قبل زرع الكبد 20. الكبد، مع مخازن الطاقة والتمثيل الغذائي الدولة تتجدد، وشروطا مسبقة وأفضل استعدادا لمواجهة الآثار الضارة للإصابة ضخه بعد الزرع في المتلقي. يصف هذا العمل وسيلة لخارج الحي نضح الجهاز من غراف الكبد البشريTS في المختبر، والتي سوف تكون مفيدة للباحثين الذين يرغبون في الدراسة كل من تقنية والآثار المفيدة للخارج الحي الجهاز الارواء. علينا الاستفادة من كبد المانحة الإنسان التي تم رفض للزرع ثم يتم تخصيص لأغراض البحث. وتتضمن تقنية المشتريات الكبد القياسية دافق الشرايين الموقع من الكبد التالية الأبهر عبر لقط في الدماغ متبرعين متوفين (DBD) أو بعد اعتقال الدورة الدموية في الدورة الدموية المانحين الموت (DCD)، وصفت في مزيد من التفاصيل في أي مكان آخر في 20. بالإضافة إلى ذلك، يتم تبريد الكبد خلال الشراء عن طريق ملء تجويف البطن المتبرع مع الثلج. تفضيلات حل دافق تختلف بين المناطق، مع غالبية المشتريات باستخدام جامعة ويسكونسن أو الحامض الأميني التربتوفان-كيتوغلوتارات (HTK) حل. وتدفق الجدول الخلفي إضافي من الوريد البابي يحسن الغسل من الدم المتبقي. وغالبا ما تقوم كبد ترك سور جزء الأبهرالتقريب الجذع الاضطرابات الهضمية. هو قطعي المرارة، ويستنشق الصفراء، ويتم مسح القناة الصفراوية. يتم تعبئتها من كبد في أكياس معقمة تحتوي على حل الحفاظ على الجليد الباردة وتنقل في صناديق معينة أو مبردات. للحصول على نتائج تمثيلية الحارة والباردة الوقت نقص التروية ينبغي أن تقتصر على 60 دقيقة و 12 ساعة، على التوالي. وعلى الرغم من الفحص المصلي روتيني لمسببات الأمراض المعدية، ويجب اتخاذ الاحتياطات القياسية عند تسليم بالأعضاء البشرية، وعينات تم الحصول عليها من الأعضاء البشرية، وأية منتجات النفايات. هنا يصف بروتوكول subnormothermic نضح الجهاز باستخدام جهاز نضح الكبد متاحة تجاريا. استخدام مثل هذا الجهاز يسمح للمزيد من الترجمة السريعة لإعداد سريرية وعبر التحقق من صحة بروتوكولات مختلفة وإعدادات الجهاز بين المجموعات البحثية ومراكز زرع.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Liver Assist perfusion device</td>
			<td>Organ Assist B.V.</td>
			<td>Liver Assist</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liver Assist disposable set</td>
			<td>Organ Assist B.V.</td>
			<td>Liver Assist disposable</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Williams&#8217; Medium E</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>W1878&#8211;6x500ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>Eli Lilly &#38; Co</td>
			<td>Humulin R U-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin 5,000 U/ml</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15070-063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>25030-156</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrocortisone</td>
			<td>MGH pharmacy</td>
			<td>7750500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbogen gas tank 95% O2/5% CO2</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>ZO2OX9522000043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Specialty gas regulator</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>Y11244D580</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lactated Ringer&#8217;s solution</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>2B2324X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% neutral buffered formalin</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>316-155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toothed Adson forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Debakey tissue forceps, 7.75&#8221;, 2.25 mm</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-7562</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metzenbaum Scissors 7&#34; Curved SureCut Tungsten</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-6965SC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo Needle holder 5.5&#8211;7&#8221;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12565-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0 blackbraided silk sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>SA66G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 nylon suture, Nurolon RB1</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>C554D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood gas analysis machine</td>
			<td>Siemens</td>
			<td>RapidPoint 500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balance scale</td>
			<td>Cole Parmer</td>
			<td>EW-10000-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pressure display box</td>
			<td>Medtronic</td>
			<td>66000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable pressure display sets</td>
			<td>Medtronic</td>
			<td>61000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Handheld thermocouple thermometer and probe</td>
			<td>Cole Parmer</td>
			<td colspan="2">EW-91500-04 and EW-08516-55</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acorn-tipped vessel cannula, 4 mm</td>
			<td>Medtronic</td>
			<td>30005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Irrigation set flush tubing</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>06543-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mixing bowl, 4L</td>
			<td>Cole Parmer</td>
			<td>EW-07300-40</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

functional human liver preservation and recovery by means of subnormothermic machine perfusion

There is currently a severe shortage of liver grafts available for transplantation. Novel organ preservation techniques are needed to expand the pool of donor livers. Machine perfusion of donor liver grafts is an alternative to traditional cold storage of livers and holds much promise as a modality to expand the donor organ pool. We have recently described the potential benefit of subnormothermic machine perfusion of human livers. Machine perfused livers showed improving function and restoration of tissue ATP levels. Additionally, machine perfusion of liver grafts at subnormothermic temperatures allows for objective assessment of the functionality and suitability of a liver for transplantation. In these ways a great many livers that were previously discarded due to their suboptimal quality can be rescued via the restorative effects of machine perfusion and utilized for transplantation. Here we describe this technique of subnormothermic machine perfusion in detail. Human liver grafts allocated for research are perfused via the hepatic artery and portal vein with an acellular oxygenated perfusate at 21 &#176;C.

لا يمكن أن يؤديها عدد من الملاحظات والتحليلات على الكبد خلال نضح، بما في ذلك الملاحظات في الوقت الحقيقي مباشرة، مثل معدلات التدفق وإنتاج الصفراء. قياسات الوقت الحقيقي، مثل تحليل الغاز من سائل الإرواء، وقياسات خاصة بعد أن تتم بعد جمع العينات بما في ذلك تحليل الكيمياء الحيوية من الإرواء والأنسجة والتحليل النسيجي. النتائج المذكورة هنا هي من 22 كبد الإنسان perfused ل. وقد رفضت كبد للزرع لأسباب مختلفة، بما في ذلك السن المانحة، والإفراط الوقت الدماغية دافئ، ونتائج الخزعة (تنكس دهني، والتهاب، والتليف) وذلك لأسباب لوجستية. وتم شراء 18 كبد بعد وفاة القلب، و 4 بعد وفاة الدماغ. في كلتا الحالتين، كانت سابقة التجهيز مع الجهات المانحة 30،000 وحدة من الهيبارين ومسح في الموقع وعلى الطاولة مرة أخرى مع الحل UW. يعني الوقت الدماغية البارد كان 531 ± 237 (SD) دقيقة ومتوسط ​​الوقت الدماغية دافئ كان 27 ± 10 (SD) دقيقة، ويقاس من الانسحاب من الحياةالدعم لمطاردة البارد. الملاحظات في الوقت الحقيقي والقياسات يمكن استخدامها لتقييم الكبد خلال نضح، في حين كشفت قياسات خاصة في مرحلة ما بعد بعد نضح. الملاحظات في الوقت الحقيقي تدفق من خلال الكبد يبدأ أقل من معدلات تدفق الهدف، نتيجة لمقاومة ارتفاع في الكبد الباردة. باستخدام الضغط من 3 مم زئبق على PV و 30 مم زئبق على HA عموما يمكن أن يتحقق التدفقات الهدف مرة واحدة الكبد ارتفعت درجة حرارة تصل إلى 21 &#160; ° C بعد 60 دقيقة من نضح (الشكل 1A). عموما يمكن أن يلاحظ تدفق الصفراء في غضون 10 دقيقة من نضح ويتم إنتاج باطراد خلال نضح (الشكل 1B). كمية الصفراء تعتمد على نوعية الكبد وتتراوح من 0.3 مل / ساعة / كجم من الكبد إلى 18 مل / دقيقة / كجم. في كبد مع وقتا أطول الدماغية دافئ، وتدفق الصفراء تميل الى الاضمحلال، في حين أن أقصر النتائج الوقت الدماغية الدافئة في أكثر ثابت او حتى زيادةإنتاج الصفراء. قياسات الوقت الحقيقي القياس المباشر والمتكرر للسائل الإرواء من خلال تحليل غازات الدم في أساسي سواء بالنسبة للأغراض التجريبية وكذلك الحفاظ على ظروف نضح كافية، والأهم الأوكسجين ودرجة الحموضة. وينبغي أن يكون حله ضغط الأكسجين الجزئي أكبر من 700 مم زئبق على تدفق كل من PV وHA. تدفق ضغط الأكسجين، وتقاس في الوريد الأجوف، ويقلل عموما مع أطول نضح، مما يعكس زيادة امتصاص الأوكسجين. ويمكن حساب معدلات امتصاص الأوكسجين كما هو موضح سابقا 13 وتراوحت 0،5-2،2 مل O 2 / دقيقة / كغ في بداية نضح إلى 2،4-9،7 مل O 2 / دقيقة / كغ في ر = 3 ساعة (الشكل 1C). ويلاحظ وجود انخفاض في درجة الحموضة في 30 دقيقة الأولى (الشكل 1D)، في المقام الأول نتيجة لإطلاق اللاكتات في الإرواء. وهذا يمكن أن تكون معتمدة من قبل مكملات مع 8.4٪ bicarbo الصوديومنيت وبعد حوالي 90 دقيقة تنخفض درجة الحموضة مرة أخرى إلى المعدل الطبيعي. عادة، 30-50 مل من 8.4٪ بيكربونات الصوديوم هو مطلوب. زيادة تركيز اللاكتات بسرعة في دقيقة 15-30 الأول، ولكن تبدأ لذلك فاة بعد الساعة الأولى (الشكل 1E). القياسات ما بعد خاصة الترانساميناسات الكبد مثل ALT يمكن قياسها في الإرواء. في 30 دقيقة الأولى لوحظ زيادة كبيرة في ALT عموما الذي يعكس فشل من ALT التي تم إصدارها خلال نقص التروية (الشكل 1F). وقد تبين ALT أنها تتطابق جيدا مع دافئ الوقت الدماغية 13. آلة نضح زيادة المحتوى ATP 2.8 أضعاف، مما يعكس وضعا الطاقة الانتعاش (الشكل 1G). H &amp; E التحليل النسيجي يكشف عدم وجود إصابات إضافية لحقت به خلال آلة نضح (الشكل 1H، I). وتجدر الإشارة إلى أن نظام خزعة المقترحة في هذا البروتوكول هو للوحدات السكنيةقد لا تكون أغراض earch وقابلة للتطبيق لأغراض سريرية. <img alt="الشكل (1)" src="/files/ftp_upload/52777/52777fig1.jpg" /> الشكل 1: تقييم كبد الإنسان خلال آلة نضح تدفق من خلال PV وHA خلال SNMP (A)، وإنتاج الصفراء، وكميا في الساعة التروية (B)، معدل الأكسجين uprate (لدينا)، وتحسب من الفرق في تدفق (PV + HA) وتدفق (الوريد الأجوف)، توقف خطوط تظهر الضغوط الجزئية الأوكسجين في داخلية وتدفق خلال نضح (C)، ودرجة الحموضة واللاكتات خلال نضح (D، E)، وإطلاق سراح ALT في الإرواء (F)، ATP المحتوى قياس في الأنسجة من الخزعات في الساعة (G) وH &amp; E بقع الكبد (DCD 54 عاما، 19 دقيقة نقص التروية دافئ، 559 دقيقة نقص التروية البارد) قبل (H) وبعد (I) الارواء. يتم عرض النتائج على النحو يعني ± SEM. <aأ href = &quot;https://www.jove.com/files/ftp_upload/52777/52777fig1large.jpg&quot; الهدف = &quot;_ فارغة&quot;&gt; الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.

Watch this Scientific Journal Video about Functional Human Liver Preservation and Recovery by Means of Subnormothermic Machine Perfusion at JoVE.com

Functional Human Liver Preservation and Recovery by Means of Subnormothermic Machine Perfusion

نحن تصف طريقة فيفو السابقين نضح الجهاز الطعوم الكبد الإنسان في درجة حرارة subnormothermic (21 ° C).

المحافظة على الكبد وظيفية الإنسان والاسترداد من قبل وسائل Subnormothermic آلة الإرواء

There is currently a severe shortage of liver grafts available for transplantation.  Novel organ preservation techniques are needed to expand the pool of ...

functional-human-liver-preservation-recovery-means-subnormothermic

Research

JoVE Journal

Medicine

16.6K Views.  Massachusetts General Hospital, Harvard Medical School.  نحن تصف طريقة فيفو السابقين نضح الجهاز الطعوم الكبد الإنسان في درجة حرارة subnormothermic (21 ° C). 

Video: Functional Human Liver Preservation and Recovery by Means of Subnormothermic Machine Perfusion

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for liver transplantation die without receiving an organ transplant or are delisted for disease progression. One strategy to increase the donor pool is the utilization of marginal grafts, such as fatty livers, grafts from older donors, or donation after cardiac death (DCD). The current preservation technique of cold static storage is only poorly tolerated by marginal livers resulting in significant organ damage. In addition, cold static organ storage does not allow graft assessment or repair prior to transplantation.
These shortcomings of cold static preservation have triggered an interest in warm perfused organ preservation to reduce cold ischemic injury, assess liver grafts during preservation, and explore the opportunity to repair marginal livers prior to transplantation. The optimal pressure and flow conditions, perfusion temperature, composition of the perfusion solution and the need for an oxygen carrier has been controversial in the past.
In spite of promising results in several animal studies, the complexity and the costs have prevented a broader clinical application so far. Recently, with enhanced technology and a better understanding of liver physiology during ex vivo perfusion the outcome of warm liver perfusion has improved and consistently good results can be achieved.
This paper will provide information about liver retrieval, storage techniques, and isolated liver perfusion in pigs. We will illustrate a) the requirements to ensure sufficient oxygen supply to the organ, b) technical considerations about the perfusion machine and the perfusion solution, and c) biochemical aspects of isolated organs.

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

Marginal grafts, such as fatty livers, grafts from older donors, or livers retrieved after cardiac death (DCD) tolerate conventional, cold static storage only poorly. We developed a novel model of subnormothermic ex vivo liver perfusion for preservation, assessment, and repair of marginal liver grafts prior to transplantation.

تقنية Subnormothermic<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; الكبد الإرواء للتخزين، تقييم، وإصلاح الطعوم الكبد الهامشية

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for ...

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous perfusion of organs provides the opportunity to improve organ quality and allows ex situ viability assessment of donor livers prior to transplantation. This video article provides a step by step protocol for ex situ normothermic machine perfusion (37 &#176;C) of human donor livers using a device that provides a pressure and temperature controlled pulsatile perfusion of the hepatic artery and continuous perfusion of the portal vein. The perfusion fluid is oxygenated by two hollow fiber membrane oxygenators and the temperature can be regulated between 10 &#176;C and 37 &#176;C. During perfusion, the metabolic activity of the liver as well as the degree of injury can be assessed by biochemical analysis of samples taken from the perfusion fluid. Machine perfusion is a very promising tool to increase the number of livers that are suitable for transplantation.

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Here we present a protocol describing oxygenated ex situ machine perfusion of donor liver grafts. This article contains a step by step protocol to procure and prepare the liver graft for machine perfusion, prepare the perfusion fluid, prime the perfusion machine and perform oxygenated normothermic machine perfusion of the liver graft.

خارج الموقع سوي الحرارة آلة الإرواء من الأكباد المانحة

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous ...

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a serious problem. Therefore, the acceptance criteria for organ donors have been extended leading to the usage of marginal kidney grafts. These marginal organs tolerate cold storage poorly resulting in increased preservation injury and higher rates of delayed graft function. To overcome the limitations of cold storage, extensive research is focused on alternative normothermic preservation methods.
Ex vivo normothermic organ perfusion is an innovative preservation technique. The first experimental and clinical trials for ex vivo lung, liver, and kidney perfusions demonstrated favorable outcomes.
In addition to the reduction of cold ischemic injury, the method of normothermic kidney storage offers the opportunity for organ assessment and repair. This manuscript provides information about kidney retrieval, organ preservation techniques, and isolated ex vivo normothermic kidney perfusion (NEVKP) in a porcine model. Surgical techniques, set up for the perfusion solution and the circuit, potential assessment options, and representative results are demonstrated.

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

The severe organ shortage has resulted in increased use of marginal kidney grafts for transplantation. This has triggered interest in alternative storage methods, since marginal grafts especially tolerate cold storage poorly. The technique of normothermic ex vivo kidney perfusion (NEVKP) represents a novel preservation method for kidney grafts prior to &#160;transplantation.

سوي الحرارة<em&gt; السابقين فيفو</em&gt; الإرواء الكلى للحفاظ على الكلى الطعوم قبل الزرع

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a ...

Method of Direct Segmental Intra-hepatic Delivery Using a Rat Liver Hilar Clamp Model

Major hepatic surgery with inflow occlusion, and liver transplantation, necessitate a period of warm ischemia, and a period of reperfusion leading to ischemia/reperfusion (I/R) injury with myriad negative consequences. Potential I/R injury in marginal organs destined for liver transplantation contributes to the current donor shortage secondary to a decreased organ utilization rate. A significant need exists to explore hepatic I/R injury in order to mediate its impact on graft function in transplantation. Rat liver hilar clamp models are used to investigate the impact of different molecules on hepatic I/R injury. Depending on the model, these molecules have been delivered using inhalation, epidural infusion, intraperitoneal injection, intravenous administration or injection into the peripheral superior mesenteric vein. A rat liver hilar clamp model has been developed for use in studying the impact of pharmacologic molecules in ameliorating I/R injury. The described model for rat liver hilar clamp includes direct cannulation of the portal supply to the ischemic hepatic segment via a side branch of the portal vein, allowing for direct segmental hepatic delivery. Our approach is to induce ischemia in the left lateral and median lobes for 60 min, during which time the substance under study is infused. In this case, pegylated-superoxide dismutase (PEG-SOD), a free radical scavenger, is infused directly into the ischemic segment. This series of experiments demonstrates that infusion of PEG-SOD is protective against hepatic I/R injury. Advantages of this approach include direct injection of the molecule into the ischemic segment with consequent decrease in volume of distribution and reduction in systemic side effects.

A unique rat liver hilar clamp model was developed for studying the impact of pharmacologic molecules in ameliorating ischemia-reperfusion injury. This model includes direct cannulation of the portal supply to the ischemic liver segment via a branch of the portal vein, allowing for direct hepatic delivery.

طريقة التسليم المباشر القطاعي البينية الكبد باستخدام نموذج الفأر الكبد نقيري المشبك

Major hepatic surgery with inflow occlusion, and liver transplantation, necessitate a period of warm ischemia, and a period of reperfusion leading to ...

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) has been introduced as a method to evaluate and modify organ function. NEVLP has many advantages in comparison to hypothermic and subnormothermic perfusion including reduced preservation injury, restoration of normal organ function under physiologic conditions, assessment of organ performance, and as a platform for organ repair, remodeling, and modification. Both murine and porcine NEVLP models have been described. We demonstrate a rat model of NEVLP and use this model to show one of its important applications &#8212; the use of a therapeutic molecule added to liver perfusate. Catalase is an endogenous reactive oxygen species (ROS) scavenger and has been demonstrated to decrease ischemia-reperfusion in the eye, brain, and lung. Pegylation has been shown to target catalase to the endothelium. Here, we added pegylated-catalase (PEG-CAT) to the base perfusate and demonstrated its ability to mitigate liver preservation injury. An advantage of our rodent NEVLP model is that it is inexpensive in comparison to larger animal models. A limitation of this study is that it does not currently include post-perfusion liver transplantation. Therefore, prediction of the function of the organ post-transplantation cannot be made with certainty. However, the rat liver transplant model is well established and certainly could be used in conjunction with this model. In conclusion, we have demonstrated an inexpensive, simple, easily replicable NEVLP model using rats. Applications of this model can include testing novel perfusates and perfusate additives, testing software designed for organ evaluation, and experiments designed to repair organs.

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

There is a significant liver donor shortage, and criteria for liver donors have been expanded. Normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) has been developed to evaluate and modify organ function. This study demonstrates a rat model of NEVLP and tests the ability of pegylated-catalase, to mitigate liver preservation injury.

نموذج حيوانات صغيرة من نضح الكبد نورموثيرميك السابقين فيفو

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, ...

Dynamic Navigation in Endodontics: Guided Access Cavity Preparation by Means of a Miniaturized Navigation System

In the case of teeth with pulp canal calcification (PCC) and apical pathology or pulpitis, root canal treatment can be very challenging. PCC are common sequelae of dental trauma but can also occur with stimuli such as caries, bruxism, or after placing a restoration. In order to access the root canal as minimally invasive as possible in case of a necessary root canal treatment, dynamic navigation has recently been introduced in endodontics in addition to static navigation. The use of a dynamic navigation system (DNS) requires pre-operative cone-beam computed tomography (CBCT) imaging and a digital surface scan. If necessary, reference markers must be placed on the teeth before the CBCT scan; with some systems, these can also be planned and created digitally afterward. By means of a stereo camera connected to the planning software, the drill can now be coordinated with the help of reference markers and virtual planning. As a result, the position of the drill can be displayed on the monitor in real-time during preparation in different planes. In addition, the spatial displacement, the angular deviation, and the depth position are also displayed separately. The few commercially available DNS mostly consist of relatively large camera-marker-systems. Here, the DNS contains miniaturized components: a low-weight camera (97 g) mounted on the micromotor of the electric handpiece utilizing a manufacturer-specific connecting mechanism and a small marker (10 mm x 15 mm), which can be easily attached to an individually manufactured intraoral tray. For research purposes, a post-operative CBCT scan can be matched with the pre-operative one, and the volume of tooth structure removed can be calculated by the software. This work aims to present the technique of guided access cavity preparation by means of a miniaturized navigation system from imaging to clinical implementation.

Dynamic navigation systems (DNS) provide real-time visualization and guidance to the operator during endodontic access cavities preparation. The planning of the procedure requires three-dimensional imaging utilizing cone beam computed tomography and surface scans. After the export of the planning data to the DNS, access cavities can be prepared with minimal invasion.

الملاحة الديناميكية في علاج جذور الأسنان: إعداد تجويف الوصول الموجه عن طريق نظام ملاحة مصغر

In the case of teeth with pulp canal calcification (PCC) and apical pathology or pulpitis, root canal treatment can be very challenging. PCC are common ...

Normothermic Ex Vivo Pancreas Perfusion for the Preservation of Pancreas Allografts before Transplantation

Pancreas transplantation (PTx) is a curative treatment for people who live with the burden of a diagnosis of diabetes mellitus (DM). However, due to organ shortages and increasing numbers of patients being listed for PTx, new strategies are needed to increase the number of available grafts for transplantation. 
Static cold storage (SCS) is considered the gold standard for standard criteria organs. However, standard criteria donors (SCD) are becoming scarce and new strategies that can increase the rate of organ acceptance from extended criteria donors (ECD) are urgently needed. 
Normothermic ex vivo perfusion (NEVP) is one of the strategies that has become increasingly popular over the past couple of decades. This preservation method has already been used successfully in other organs (liver, kidneys, and lungs) but has been minimally explored in pancreas transplantation. The few papers that describe the method for pancreas show little success, edema being one of the major issues. The following manuscript describes the successful NEVP method and setup developed by our group to perfuse swine pancreas.

Normothermic Ex Vivo Pancreas Perfusion for the Preservation of Pancreas Allografts before Transplantation

Normothermic ex vivo machine perfusion (NEVP) has scarcely been explored for the preservation of pancreas allografts. We present an innovative preservation technique for pancreas allografts before transplantation.

نضح البنكرياس خارج الجسم الحي للحفاظ على الطعم الخيفي للبنكرياس قبل الزرع

Pancreas transplantation (PTx) is a curative treatment for people who live with the burden of a diagnosis of diabetes mellitus (DM). However, due to organ ...

Lung Rapid Recovery Procurement Combined with Abdominal Normothermic Regional Perfusion in Controlled Donation after Circulatory Death

Controlled donation after circulatory death (cDCD) has contributed to increasing donor numbers all over the world. Experiences published in the last years confirm that the outcomes after lung transplantation from cDCD are similar to those from brain death donors; however, the utilization of lungs from asystole donors remains low. Several reasons may be involved: different legal frameworks among countries and centers with different premortem interventions, inadequate lung donor care before procurement, or even poor experience with cDCD procedures and protocols.
Initially, the rapid recovery technique was commonly employed for the procurement of thoracic and abdominal organs in cDCD, but, in the last decade, abdominal normothermic regional perfusion (ANRP) with extracorporeal membrane oxygenation devices has become a useful method to restore blood flow to abdominal organs, allowing their quality improvement and their functional assessment prior to transplantation. This makes the donation procedure more complex and generates doubts about injury to the grafts due to dual temperature.
The aim of this article is to describe a protocol based on a single center experience with Maastricht III donors combining lung cooling rapid recovery in the thorax and abdominal normothermic regional perfusion. Tips and tricks focused on premortem interventions and lung procurement procedure techniques are explained. This may help to minimize the reluctance among professionals to use this combined technique and encourage other donor centers to use it, despite the increased complexity of the procedure.

The protocol combines a lung cooling rapid recovery technique with abdominal normothermic regional perfusion for abdominal graft procurement in controlled asystole donors, which is a safe and useful method to expand the donor pool.

شراء التعافي السريع للرئة جنبا إلى جنب مع التروية الإقليمية للبطن في التبرع الخاضع للرقابة بعد موت الدورة الدموية

Controlled donation after circulatory death (cDCD) has contributed to increasing donor numbers all over the world. Experiences published in the last years ...

In Situ Mouse Liver Perfusion Model to Study Metabolic Responses to Substrates

Hepatic Glucose Production, Ureagenesis, and Lipolysis Quantified using the Perfused Mouse Liver Model

The liver has numerous functions, including nutrient metabolism. In contrast to other in vitro and in vivo models of liver research, the isolated perfused liver allows the study of liver biology and metabolism in the whole liver with an intact hepatic architecture, separated from the influence of extra-hepatic factors. Liver perfusions were originally developed for rats, but the method has been adapted to mice as well. Here we describe a protocol for in situ perfusion of the mouse liver. The liver is perfused antegradely through the portal vein with oxygenated Krebs-Henseleit bicarbonate buffer, and the output is collected from the suprahepatic inferior vena cava with clamping of the infrahepatic inferior vena cava to close the circuit. Using this method, the direct hepatic effects of a test compound can be evaluated with a detailed time resolution. Liver function and viability are stable for at least 3 h, allowing the inclusion of internal controls in the same experiment. The experimental possibilities using this model are numerous and may infer insight into liver physiology and liver diseases.

Author Spotlight: Investigating Hepatic Adaptations and Prediabetic Progression in Liver Diseases 

Here, we present a robust method for in situ perfusion of the mouse liver to study the acute and direct regulation of liver metabolism without disturbing the hepatic architecture but in the absence of extra-hepatic factors.

تم قياس إنتاج الجلوكوز الكبدي وتكوين اليوريا وتحلل الدهون باستخدام نموذج كبد الفأر المنحرف

The liver has numerous functions, including nutrient metabolism. In contrast to other in vitro and in vivo models of liver research, the isolated perfused ...

Mouse Liver Operation and Perfusion for Studying Hepatic Metabolism 

To begin, place the anesthetized C57 Black/6 JRj mouse. Supine on a heated operation table. Confirm the absence of reflex responses to toe pinching.Spray the mouse with 70%ethanol to prevent hair from sticking to the scissors. Using scissors, make an abdominal incision at the base, cutting upwards on both sides to the rib cage to expose the abdominal cavity. Use a cotton swab to move the intestines to the right, exposing the portal vein.Using curved forceps, place two ligatures under the portal vein and loosely tie each ligature. Next, insert a 0.7-millimeter catheter into the portal vein. When perforated, remove the needle from the catheter and guide the catheter through the vein until the tip of the catheter is close to the liver.Then, tighten the ligatures. Observe the liver. Set the flow rate from the roller pump and attach the profusion tube.Initiate the profusion of the liver at 37 degrees Celsius. Once the liver turns pale, use scissors to cut the rib cage and diaphragm. Then, using fine point forceps, place ligature under the suprahepatic inferior vena cava.Next, insert a catheter into the suprahepatic inferior vena cava through the right atrium of the heart. When perforated, remove the needle and guide the catheter through the vein closer to the liver. Then, tighten the ligature.Attach a tube for the collection of perfusion effluent and secure all tubes with waterproof tape. Using a vessel clamp adapter, place a vessel clamp across the infrahepatic vena cava immediately above the right renal vein to prevent dead mixture. Next, increase the perfusion flow rate to 3.5 milliliters per minute.Start the timer and pressure recording. Cover the liver with a sterile drape moistened with saline, equilibrate for 30 minutes, and measure the volume of effluent. After 30 minutes of equilibration, initiate the experiment for the first baseline sample collection in the fraction collector.Monitor the bubble trap regularly and refill with perfusion buffer when close to empty. Collect a buffer sample via a three-way stopcock immediately before it enters the organ and from the collecting catheter inserted in the inferior vena cava. Using a blood gas analyzer, measure the collected sample to confirm that the organ is metabolically active.After 15 minutes of baseline perfusion, using a syringe pump, start the first stimulation by infusing a test substance through a three-way stopcock at desired flow rate. After the simulation, collect baseline samples for 20 to 30 minutes before starting the second stimulation. The production of urea in the perfused liver with steady baseline periods preceding each of two stimulation periods suggested that the response of urea to two consecutive stimulations with mixed amino acids is consistent.A steady basal release of glucose and non-esterified fatty acids was observed. Before a robust increase in glucose and non-ED fatty acids during the glucagon infusion. The mean value at the basal state and during the glucagon infusion suggests that glucagon rapidly stimulates hepatic glycogenolysis and lipolysis.However, without steady basal periods, it becomes impossible to distinguish one urea response from the next.