نود أن نشكر جنيفر بيتروسينو وديفيد DiSilvestro للمساعدة التحريرية. وأيد هذا البحث من قبل جائزة الرقم 20020728 من مجلس البيض الأمريكي وجائزة الرقم 10040042 من نوفو نورديسك الصيدلة فضلا عن مركز للأغذية والابتكار، ومكتب للشؤون الدولية، ومركز بحوث الأغذية وظيفية متقدمة، وريادة الأعمال في جامعة ولاية أوهايو، وكذلك منح المؤسسة الوطنية للعلوم EEC-0914790 (LJL). مشروع وصف وبدعم من جائزة عدد R21OD017244 (OZ) وUL1RR025755 (OSUCCC) من المركز الوطني للبحوث الموارد، بتمويل من مكتب المدير والمعاهد الوطنية للصحة (OD) وبدعم من المعاهد الوطنية للصحة خارطة الطريق للبحوث الطبية و NCI P30CA16058. المحتوى هو فقط من مسؤولية الكتاب ولا تمثل بالضرورة وجهة النظر الرسمية للمركز الوطني للبحوث الموارد أو المعاهد الوطنية للصحة.

وتمت الموافقة على بروتوكول الدراسة من قبل لجان أخلاقيات جامعة ولاية أوهايو. وتمت الموافقة على التجارب الحيوانية بروتوكول IACUC. تم تنفيذ جميع الإجراءات المنصوص عليها في مجلس الوزراء مستوى 2 للسلامة الأحيائية مع تدفق الصفحي. تابعنا جميع متطلبات السلامة القياسية والإجراءات. وقد تم تنفيذ تقنية الكبسلة لإعداد كبسولات كما هو موضح 17، 18. 1. الاستعدادات المواد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 10 مل من 2٪ حل الجينات الصوديوم في تعقيمها المالحة الفسيولوجية (0.9٪ كلوريد الصوديوم في الماء). إعداد 0.05٪ PLL حل في المياه المالحة الفسيولوجية. إعداد هذه الحلول في اليوم السابق ويقلب بين عشية وضحاها. تصفية الحلول مع 0.22 ميكرون التصفية قبل الاستخدام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجهيز 50 ملي سيترات الصوديوم و 100 ملي CaCl 2 في 0.9٪ كلوريد الصوديوم حلول وتعقيم لهم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأوتوكلاف كل الحلول، والإبر، والأقطاب، والأكواب. تماما الإبر النظيفة مع الأسلاك لتجنب انسداد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد المبلغ المناسب من الخلايا لاستخدامه في كبسولات (وهناك حاجة إلى 102 كبسولات لكل سم 2 من جيد وهناك ما يقرب من 500 خلية لكل كبسولة 18). استخدام 1 مل من الجينات الصوديوم لكل مليوني الخلايا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد &#39;متوسط ​​الخلايا الليفية النمو &quot;التي تحتوي على 10٪ العجل المصل، و 100 U / البنسلين مل / الستربتومايسين في ارتفاع نسبة الجلوكوز (4500 ملغم / لتر الجلوكوز) المتوسطة Dulbecco لتعديل النسر (DMEM). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد &#39;متوسطة التمايز I&#39; تحتوي على 10٪ مصل بقري جنيني و 10 ميكروغرام / مل الأنسولين، 1 ميكرومتر ديكساميثازون 0.5 ملي الكزانتين 3-إيسوبوتيل-1-ميثيل، و 100 U / البنسلين مل / الستربتومايسين في DMEM. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد تحتوي على 10٪ مصل ل&#39;متوسطة التمايز II &quot;بقري جنيني و 10 ميكروغرام / مل الأنسولين، و 100 U / البنسلين مل / الستربتومايسين في DMEM. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد العازلة تحلل تحتوي على الأنزيم البروتيني واحد المانع قرص لكل 10 مل راديو مناعي الفحص العازلة (RIعازلة PA). </li></ol> 2. الجيني بلي إعداد (الشكل 1A) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة المتوسطة القديمة من زراعة الخلايا القارورة. شطف الخلايا مع 10 مل من برنامج تلفزيوني. جلب الخلايا في تعليق مع 0.25٪ التربسين-EDTA (2 مل لكل واحد متموجة T175 قارورة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عدد الخلايا في تعليق خلية باستخدام عدادة الكريات. استخدام 10 مل قسامة من التعليق الخلية وعدد الخلايا وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. الطرد المركزي الخلايا المتبقية في الطرد المركزي المتوسطة في 480 x ج في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعليق بيليه خلية في الجينات الصوديوم كما هو موضح في الخطوة 1.4. نقل الحل الصوديوم خلايا الجينات إلى حقنة 5 مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة فقاعات الهواء في الحل، إضافة إبرة عيار 23 وعكس حقنة لإنشاء جيب 1 مل من الهواء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع كوب صغير (180 مل) التي تحتوي على 144 مل من 100 ملي CaCl 2 الحل تحت صنبور إبرة encapsulator. نعلق القطب إلى encapsulator مع approxim طرف¢ الأمر 2.5 سم فوق سطح 100 ملي CaCl 2 الحل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع بإحكام حقنة تحتوي على محلول خلايا الجينات الصوديوم في ضخ حقنة. نعلق الأنبوب المطاطي لافتتاح الحقنة. دفع المكبس حتى يدخل حل الخلية الجينات الصوديوم في منتصف الطريق من خلال أنبوب. ضبط الجهد إلى 5.4 كيلو فولت. تعيين 12.06 مم على ضخ حقنة. ضبط السرعة إلى 3 مل / ساعة. بدء تشغيل المضخة. بدوره على encapsulator والحفاظ على الجهد في 5،4 كيلو فولت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق نافذة غطاء محرك السيارة وتجنب أي اهتزاز غير ضروري حتى نهاية تشكيل بلي الجينات. بعد مرور كل حل من خلال الإبرة، وترسيخ شكل الكرة الجينات بلي في 100 ملي CaCl 2 حل لإضافي 20 دقيقة قبل طلاء مع PLL. </li></ol> 3. بلي طلاء مع PLL (الشكل 1B) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الكأس الذي يحتوي على الصوديوم خلايا الجينات على شكل الكرة بلي ونقل هذه microbEADS في أنبوب الطرد المركزي 50 مل. إزالة CaCl 2 الحل من بيليه microbead. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل خلايا الجينات على شكل الكرة بلي بإضافة 30 مل من 0.9٪ كلوريد الصوديوم. هز أنبوب باليد بلطف. إزالة كلوريد الصوديوم 0.9٪ مع 25 مل ماصة بعد أن عجلت بلي بواسطة الجاذبية. كرر مرتين أخريين ليصبح المجموع 3 يغسل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام 10 مل من 0.05٪ حل PLL لكل 1 مل من محلول الجينات الصوديوم. إضافة PLL 0.05٪ ودوامة في 1000 التناوب لكل دقيقة لمدة 10 دقيقة. ملاحظة: عادة، 10 دقيقة كافية لPLL طلاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد تشكيل معطف PLL، وإزالة حل PLL وغسل كبسولات 3 مرات كما هو موضح في 3.2. </li></ol> 4. إزالة الجينات الأساسية (الشكل 1C) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 30 مل من 50 ملي حل سيترات الصوديوم. الانتظار مدة 5 دقائق أو حتى يذوب كل الجينات الصوديوم. غسل كبسولات ثلاث مرات كما هو موضح في الخطوة 3.1.1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة كلوريد الصوديوم 0.9٪، إضافة 20 مل من مستنبت في أنبوب 50 ملونقل عن كبسولات تحتوي على الخلايا إلى قارورة ثقافة الخلية. التعامل مع الخلايا مغلفة تحت الظروف القياسية ثقافة الخلية 18. </li></ol> 5. في تطبيقات المختبر لدراسة طعم أجنبي والخلية المضيفة التفاعلات أو حركية المستقلب تدفق / الدفق بين الخلايا (الشكل 2) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الخلايا المضيفة الثقافة على 24 لوحة جيدا حتى متموجة لاشتراكهما في الثقافات. استخدام &#39;متوسط ​​الخلايا الليفية النمو &quot;لpreadipocytes زراعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كبسولات نقل إلى 24 لوحة تحتوي على الآبار الخلايا المضيفة متموجة. إضافة كبسولات لتحقيق أحادي الطبقة (102 كبسولات / سم 2 من جيد). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لحث على تمايز قبل خلية شحمية مع متوسطة التمايز I. كل 48 ساعة، ووسائل الإعلام التغيير إلى متوسطة التمايز II لمدة ستة أيام. الخلايا ليز في المخزن RIPA. استخدام البروتين 50 ميكروغرام لكل حالة لتحليل البروتين التعبير عن الرأي وصمة عار الغربية. </li></ol> 6. في التطبيق فيفو لTreatmوالأنف والحنجرة من السمنة (الشكل 3) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مزيج 4٪ الأيزوفلورين مع الأكسجين لتحريض التخدير و 2٪ الأيزوفلورين مع الأكسجين لصيانة التخدير. تأكيد عمق التخدير الكافي من قرصة أخمص قدميه. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق مرهم المضادة للحكة في العينين لحماية القرنيات من الجفاف. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الخلايا مغلفة التي وصفت بشكل دائم مع البروتين مضان الاصطناعي، مثل البروتين مضان أخضر (GFP). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام حقنة 3 مل و إبرة قياس 20 إلى حقن الخلايا مغلفة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضخ 0.5 × 10 6 خلايا علقت في 0.2 مل من برنامج تلفزيوني في كل مستودع الدهون IAB الذي يقع في منطقة الغشاء البريتوني بين الغدد التناسلية والكلى كما هو مبين في الشكل (3). استخدم هذا الحجم من برنامج تلفزيوني وعدد الخلايا للفئران بمتوسط ​​وزن 40 غرام. ضبط عدد الخلايا وحجم في الفئران التي لديها وزن مختلفة أو لتحديد الآثار التي تعتمد على الجرعة. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Vogeli, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+chronic+conditions:+prevalence,+health+consequences,+and+implications+for+quality,+care+management,+and+costs.">Multiple chronic conditions: prevalence, health consequences, and implications for quality, care management, and costs.</a> Journal of general internal medicine. 22, 391-395 (2007).</li><li>Vija, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cells:+Stem+cell+therapy+perspectives+for+type+1+diabetes.">Mesenchymal stem cells: Stem cell therapy perspectives for type 1 diabetes.</a> Diabetes &amp; metabolism. 35, 85-93 (2009).</li><li>Acarregui, A., Orive, G., Pedraz, J. L., Hernandez, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+applications+of+encapsulated+cells.">Therapeutic applications of encapsulated cells.</a> Methods in molecular biology. 1051, 349-364 (2013).</li><li>Chang, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Semipermeable+Microcapsules.">Semipermeable Microcapsules.</a> Science. 146, 524-525 (1964).</li><li>Elliott, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+encapsulated+porcine+islets+from+a+type+1+diabetic+patient+9.5+yr+after+xenotransplantation.">Live encapsulated porcine islets from a type 1 diabetic patient 9.5 yr after xenotransplantation.</a> Xenotransplantation. 14, 157-161 (2007).</li><li>Lim, F., Sun, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microencapsulated+islets+as+bioartificial+endocrine+pancreas.">Microencapsulated islets as bioartificial endocrine pancreas.</a> Science. 210, 908-910 (1980).</li><li>Vos, P., Spasojevic, M., Faas, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+diabetes+with+encapsulated+islets.">Treatment of diabetes with encapsulated islets.</a> Advances in experimental medicine and biology. 670, 38-53 (2010).</li><li>Cotton, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+challenges+in+cell-encapsulation+technology.">Engineering challenges in cell-encapsulation technology.</a> Trends in biotechnology. 14, 158-162 (1996).</li><li>Yach, D., Stuckler, D., Brownell, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiologic+and+economic+consequences+of+the+global+epidemics+of+obesity+and+diabetes.">Epidemiologic and economic consequences of the global epidemics of obesity and diabetes.</a> Nature medicine. 12, 62-66 (2006).</li><li>Ng, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global,+regional,+and+national+prevalence+of+overweight+and+obesity+in+children+and+adults+during+1980-2013:+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2013.">Global, regional, and national prevalence of overweight and obesity in children and adults during 1980-2013: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2013.</a> Lancet. 384, 766-781 (2014).</li><li>Kissebah, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relation+of+body+fat+distribution+to+metabolic+complications+of+obesity.">Relation of body fat distribution to metabolic complications of obesity.</a> The Journal of clinical endocrinology and metabolism. 54, 254-260 (1982).</li><li>Bray, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relation+of+central+adiposity+and+body+mass+index+to+the+development+of+diabetes+in+the+Diabetes+Prevention+Program.">Relation of central adiposity and body mass index to the development of diabetes in the Diabetes Prevention Program.</a> The American journal of clinical nutrition. 87, 1212-1218 (2008).</li><li>Klein, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+are+subcutaneous+adipocytes+really+good+for.">What are subcutaneous adipocytes really good for.</a> Experimental dermatology. 16, 45-70 (2007).</li><li>Tran, T. T., Yamamoto, Y., Gesta, S., Kahn, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beneficial+effects+of+subcutaneous+fat+transplantation+on+metabolism.">Beneficial effects of subcutaneous fat transplantation on metabolism.</a> Cell metabolism. 7, 410-420 (2008).</li><li>Seale, P., Kajimura, S., Spiegelman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+control+of+brown+adipocyte+development+and+physiological+function--of+mice+and+men.">Transcriptional control of brown adipocyte development and physiological function--of mice and men.</a> Genes &amp; development. 23, 788-797 (2009).</li><li>Kozak, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+variation+in+brown+fat+activity+and+body+weight+regulation+in+mice:+lessons+for+human+studies.">Genetic variation in brown fat activity and body weight regulation in mice: lessons for human studies.</a> Biochimica et biophysica acta. 1842, 370-376 (2014).</li><li>Zhang, X., He, H., Yen, C., Ho, W., Lee, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+biodegradable,+immunoprotective,+dual+nanoporous+capsule+for+cell-based+therapies.">A biodegradable, immunoprotective, dual nanoporous capsule for cell-based therapies.</a> Biomaterials. 29, 4253-4259 (2008).</li><li>Yang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+prolonged+survival+of+fibroblasts+with+forced+lipid+catabolism+in+visceral+fat+following+encapsulation+in+alginate-poly-L-lysine.">The prolonged survival of fibroblasts with forced lipid catabolism in visceral fat following encapsulation in alginate-poly-L-lysine.</a> Biomaterials. 33, 5638-5649 (2012).</li><li>Chang, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Artificial+cells+with+emphasis+on+bioencapsulation+in+biotechnology.">Artificial cells with emphasis on bioencapsulation in biotechnology.</a> Biotechnology annual review. 1, 267-295 (1995).</li><li>Chang, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hybrid+artificial+cells:+microencapsulation+of+living+cells.">Hybrid artificial cells: microencapsulation of living cells.</a> ASAIO journal. 38, 128-130 (1992).</li><li>Koo, J., Chang, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secretion+of+erythropoietin+from+microencapsulated+rat+kidney+cells:+preliminary+results.">Secretion of erythropoietin from microencapsulated rat kidney cells: preliminary results.</a> The International journal of artificial organs. 16, 557-560 (1993).</li><li>Weidenauer, U., Bodmer, D., Kissel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microencapsulation+of+hydrophilic+drug+substances+using+biodegradable+polyesters.+Part+I:+evaluation+of+different+techniques+for+the+encapsulation+of+pamidronate+di-sodium+salt.">Microencapsulation of hydrophilic drug substances using biodegradable polyesters. Part I: evaluation of different techniques for the encapsulation of pamidronate di-sodium salt.</a> Journal of microencapsulation. 20, 509-524 (2003).</li><li>Smidsrod, O., Skjak-Braek, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alginate+as+immobilization+matrix+for+cells.">Alginate as immobilization matrix for cells.</a> Trends in biotechnology. 8, 71-78 (1990).</li><li>Lewinska, D., Rosinski, S., Werynski, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+process+conditions+during+impulsed+electrostatic+droplet+formation+on+size+distribution+of+hydrogel+beads.">Influence of process conditions during impulsed electrostatic droplet formation on size distribution of hydrogel beads.</a> Artificial cells, blood substitutes, and immobilization biotechnology. 32, 41-53 (2004).</li><li>Chan, E. S., Lee, B. B., Ravindra, P., Poncelet, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prediction+models+for+shape+and+size+of+ca-alginate+macrobeads+produced+through+extrusion-dripping+method.">Prediction models for shape and size of ca-alginate macrobeads produced through extrusion-dripping method.</a> Journal of colloid and interface science. 338, 62-72 (2009).</li><li>Bhujbal, S. V., Paredes-Juarez, G. A., Niclou, S. P., de Vos, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+influencing+the+mechanical+stability+of+alginate+beads+applicable+for+immunoisolation+of+mammalian+cells.">Factors influencing the mechanical stability of alginate beads applicable for immunoisolation of mammalian cells.</a> Journal of the behavior of biomedical materials. 37, 196-208 (2014).</li><li>Gushchina, L. V., Yasmeen, R., Ziouzenkova, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moderate+vitamin+A+supplementation+in+obese+mice+regulates+tissue+factor+and+cytokine+production+in+a+sex-specific+manner.">Moderate vitamin A supplementation in obese mice regulates tissue factor and cytokine production in a sex-specific manner.</a> Archives of biochemistry and biophysics. 539, 239-247 (2013).</li><li>Ziouzenkova, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinaldehyde+represses+adipogenesis+and+diet-induced+obesity.">Retinaldehyde represses adipogenesis and diet-induced obesity.</a> Nature. 13, 695-702 (2007).</li><li>Yasmeen, R., Jeyakumar, S. M., Reichert, B., Yang, F., Ziouzenkova, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+contribution+of+vitamin+A+to+autocrine+regulation+of+fat+depots.">The contribution of vitamin A to autocrine regulation of fat depots.</a> Biochimica et biophysica acta. 1821, 190-197 (2012).</li><li>Liu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miR-133a+regulates+adipocyte+browning+in+vivo.">miR-133a regulates adipocyte browning in vivo.</a> PLoS genetics. 9, e1003626 (2013).</li><li>Rao, R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meteorin-like+is+a+hormone+that+regulates+immune-adipose+interactions+to+increase+beige+fat+thermogenesis.">Meteorin-like is a hormone that regulates immune-adipose interactions to increase beige fat thermogenesis.</a> Cell. 157, 1279-1291 (2014).</li><li>Kir, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumour-derived+PTH-related+protein+triggers+adipose+tissue+browning+and+cancer+cachexia.">Tumour-derived PTH-related protein triggers adipose tissue browning and cancer cachexia.</a> Nature. 513, 100-104 (2014).</li></ol>

No conflicts of interest declared.

وقد استخدمت أساليب مختلفة لتغليف الخلايا، بما في ذلك التجفيف، وقذف، ومستحلب 19. في هذه الطريقة، تنبثق حبات الجينات من خلال إبرة، ثم المغلفة مع PLL وسيتم حل جوهر الجينات لاستكمال التغليف. على الرغم من أن هذه الطريقة قد استخدمت لسنوات، وتشكيل حبات مع الحجم المطلوب ?...

زيادة معدلات الإصابة بالأمراض المزمنة 1 حفزت الدراسات على زرع السكان الخلية العلاجية 2. الخلايا الجذعية Syngenic أو الصنعية هي أنواع الخلايا الأكثر استخداما لهذه التطبيقات 2. ومع ذلك، هذه العلاجات لا تسمح بالتحكم في التمايز وهجرة الخلايا الجذعية بعد زرع ولا فعالة من حيث التكلفة. زرع الخلايا المعدلة وراثيا مع وظائف مفيدة تتوقع تحسنا في علاج الكثير من الأمراض. ومع ذلك، يتم إدراج تعديلات الخلية الوراثية الجهاز المناعي للمضيف، وبالتالي، فإن هذه العلاجات تتطلب المناعة 3. وقد وضعت تغليف الخلايا المنتجة للأنسولين من قبل الدكتور تشانغ 4. وتستند هذه التقنية على تغليف الخلايا في قطرات الجينات التي يتم مغمورة في محلول كلوريد الكالسيوم. وتتكون من جزيئات الجينات من الحمض mannuronic (M) وguluronic (G) ويمكن ان تكون مرتبطة ب Ca 2+. بعد دبق، يتم تعليق الخرز حل بولي-L-ليسين (PLL). خلال هذه الخطوة، PLL بربط G و M في جزيئات الجينات التي تنص على غشاء الكبسولة. مسامية غشاء الكبسولة يمكن عن طريق التضمين متفاوتة تركيزات M وPLL، وفترة حضانة، ودرجة الحرارة. الربط من PLL يعتمد أيضا على نوع وتركيز الجينات. المصفوفات الجينات crosslinked مع الكالسيوم 2+ الأيونات، غير مستقرة في البيئة الفسيولوجية أو في محاليل مشتركة مع نسبة عالية من الفوسفات وأيونات السيترات. ويمكن لهذه المخازن استخراج الكالسيوم 2+ من الجينات وتسييل الأساسية. تسييل جوهر الجينات يوفر مساحة داخل كبسولات للحركة الخلوية والنمو. خلايا مغلفة في الجينات polyanionic مع polycationic بولي-L-ليسين (APL) هي منيعة لالمناعية ولكن لديها تدفق المواد الغذائية وهروب رأس المال من السموم. خصائص هذه APL وتمكن على المدى الطويل سوrvival الخلايا مغلفة بعد الزرع إلى المضيفين مختلفة وراثيا. إليوت وآخرون. وذكرت بقاء تعمل خلايا البنكرياس الخنزيري مغلفة في المرضى من البشر بعد تسع سنوات من غرس 5. ويمكن تصنيف تقنيات التغليف في الكبسلة (3-800 ميكرون)، وmacroencapsulation (أكبر من 1000 ميكرون). كبسولات هي أكثر دواما من macrocapsules 6. منذ اكتشافه من قبل الدكتور تشانغ وزملاؤه في عام 1964، وقد استخدمت على نطاق واسع الكبسلة لتغليف الخلايا المنتجة للأنسولين المنشطة والهرمونات الأخرى، والجزيئات النشطة بيولوجيا 7. هذه العلاجات واجهت العديد من التحديات في الأنسجة المضيفة بما في ذلك تليف والاستجابة المناعية 8. في البداية، قد تم حلها الآثار الجانبية المرتبطة بنوعية البوليمرات الحيوية. ومع ذلك، زرع الخلايا المنشطة لا يزال يبدأ الآثار الجانبية، مثل التليف، نتيجة لهرمون overprالعامة oduction خارج غدة المتخصصة. في العقود الأخيرة، والسمنة، ونوع وصلت السكري 2 وبائية 9. أكثر من 30٪ من الأشخاص البالغين يعانون من زيادة الوزن والسمنة 10 في جميع أنحاء العالم. زيادة داخل البطن (IAB) تشكيل الدهون يزيد من نسبة حدوث التهاب مزمن ويعزز السكري من النوع 2 وأمراض القلب والأوعية الدموية، وبعض أنواع السرطان، والحالات المرضية الأخرى 11-13. عدة أسطر من الأدلة تشير إلى أن المرضية المرتبطة الدهون IAB يمكن تجنبها من قبل الخلايا الشحمية محددة. وقد أظهرت الدراسات الحديثة أن زرع الخلايا الشحمية تحت الجلد في المنطقة IAB يمكن تحسين التمثيل الغذائي والحد من البدانة ومقاومة الانسولين في القوارض في الجسم الحي 14. ارتبط انخفاض الفعال للسمنة ومقاومة الأنسولين مع الخلايا الشحمية حرارة قادرة على تبديد الطاقة في شكل حرارة 15،16. لا يمكن أن يتحقق تعديل حرارة من الخلايا الشحمية التي كتبها ترنسفكأيشن مستقرةمن الجينات المشاركة في فك ربط بروتون الميتوكوندريا، مثل البروتين فك ربط 1 (Ucp1) أو الجينات التي تنظم التعبير عن Ucp1 والجينات حرارة أخرى 15،16. وأظهرت لنا الدراسات الحديثة أن نقص في ألدهيد نازعة 1 A1 (Aldh1a1) يؤدي إلى إعادة حرارة من IAB الدهون تقلل من البدانة ومقاومة الانسولين في هذه الفئران 17،18. والجدير بالذكر، التغليف من مولد للحرارة Aldh1a1 ناقصة (Aldh1a1 - / -) preadipocytes تتوسط نفس التأثير العلاجي في IAB الدهون في السمنة الفئران نوع البرية، مما يشير إلى فرص علاجية جديدة لعلاج IAB الدهون 18. في إعدادات التجريبية، وخلايا مغلفة تمكن الباحثين لدراسة الآثار المترتبة على السكان خلية معينة في التكلفة بطريقة فعالة 19. هنا نناقش طريقة تغليف خط الخلية تقويضي حرارة ومختبرها وتطبيق العلاجي في نموذج الفأر من السمنة. يصف بروتوكول رمراحل hree لإنتاج ميكروكابسولي (الشكل 1): تشكيل بلي الجينات (الشكل 1A)، تشكيل polycationic بولي-L-ليسين (PLL) الأغشية على سطح بلي (الشكل 1B)، وإزالة النوى الجينات (الشكل 1C).

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Encapsulation device (VAR V1)</td>
			<td>Nisco</td>
			<td>LIN-0042</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KD scientific syringe pump</td>
			<td>KD scientific</td>
			<td>780100Y</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus microscope&#160;</td>
			<td>Olympus Optical</td>
			<td>IX70-S8F2</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium alginate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>MKBP8122V</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-l-lysine hydrobromide (PLL)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>020M5006V</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>SLBJ2662V</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium citrate tribasic dihydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>030M0200</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>SLBD2595V</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini-PROTEAN TGX Gels</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>456-1093</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ATGL primary antibody (from rabbit)</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>2138S</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Secondary anti body (anti rabbit)</td>
			<td>LI-COR</td>
			<td>926-68071</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Radio-Immunoprecipitation Assay (RIPA) buffer</td>
			<td>Boston BioProducts</td>
			<td>D25Y6Z</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>RNBD2893</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25200-056</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cortizone 10 anti-itch ointment</td>
			<td>Cortizone 10</td>
			<td>C4029138</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium (DMEM)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11965-092</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Newborn calf serum (CS)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>N4762</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F4135</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-Isobutyl-1-methylxanthine (IBMX)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I0516</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexamethasone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4902</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin (bovine)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I5879</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease inhibitor cocktail tablets</td>
			<td>Roche</td>
			<td>4693159001</td>
			<td>None</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

encapsulation thermogenic preadipocytes for transplantation into adipose tissue depots

وقد وضعت التغليف خلية للإيقاع خلايا قابلة للحياة داخل أغشية شبه منفذة. الخلايا مغلفة المغروسة يمكن صرف منخفض الأيض الوزن الجزيئي في أنسجة المضيف المعالجة لتحقيق البقاء على المدى الطويل. غشاء نصف نافذ يسمح المغروسة الخلايا مغلفة لتجنب رفض من قبل النظام المناعي. وقد تم تصميم هذا الإجراء التغليف لتمكين تسيطر عليها الافراج عن المركبات النشطة بيولوجيا، مثل الأنسولين والهرمونات الأخرى، والسيتوكينات. نحن هنا تصف طريقة لتغليف الخلايا الهدم، التي تستهلك الدهون لإنتاج الحرارة وتبديد الطاقة (توليد الحرارة) في الأنسجة الدهنية داخل البطن من الفئران السمينة. تغليف الخلايا تقويضي حرارة قد تكون قابلة للتطبيق المحتمل للوقاية والعلاج من السمنة والسكري من النوع 2. ويمكن أن تشمل تطبيق آخر محتمل للخلايا الهدم وإزالة السموم من الكحول او نواتج سامة أخرى والملوثات البيئية.

ويبين الشكل 1 أن كل خطوة من خطوات الإنتاج بلي يمكن السيطرة تحت المجهر. الشكل 2A يبين كيف أن تشارك في الثقافة الخلايا الشحمية مع أحادي الطبقة من الخلايا مغلفة. الشكل 2B هو مثال الممثلين الدراسة الكمية باستخدام خلية شحمية / كبسولات المشترك الثق?...

Watch this Scientific Journal Video about Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots at JoVE.com

Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

Here, we present a protocol for encapsulation of catabolic cells, which consume lipids for heat production in intra-abdominal adipose tissue and increase energy dissipation in obese mice.

التغليف حرارة Preadipocytes للزراعة إلى الدهنية مستودعات الأنسجة

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular ...

encapsulation-thermogenic-preadipocytes-for-transplantation-into

Research

JoVE Journal

Medicine

9.2K Views.  The Ohio State University. Here, we present a protocol for encapsulation of catabolic cells, which consume lipids for heat production in intra-abdominal adipose tissue and increase energy dissipation in obese mice.

Video: Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

Subretinal Transplantation of MACS Purified Photoreceptor Precursor Cells into the Adult Mouse Retina

Vision impairment and blindness due to the loss of the light-sensing cells of the retina, i.e. photoreceptors, represents the main reason for disability in industrialized countries. Replacement of degenerated photoreceptors by cell transplantation represents a possible treatment option in future clinical applications. Indeed, recent preclinical studies demonstrated that immature photoreceptors, isolated from the neonatal mouse retina at postnatal day 4, have the potential to integrate into the adult mouse retina following subretinal transplantation. Donor cells generated a mature photoreceptor morphology including inner and outer segments, a round cell body located at the outer nuclear layer, and synaptic terminals in close proximity to endogenous bipolar cells. Indeed, recent reports demonstrated that donor photoreceptors functionally integrate into the neural circuitry of host mice. For a future clinical application of such cell replacement approach, purified suspensions of the cells of choice have to be generated and placed at the correct position for proper integration into the eye. For the enrichment of photoreceptor precursors, sorting should be based on specific cell surface antigens to avoid genetic reporter modification of donor cells. Here we show magnetic-associated cell sorting (MACS) - enrichment of transplantable rod photoreceptor precursors isolated from the neonatal retina of photoreceptor-specific reporter mice based on the cell surface marker CD73. Incubation with anti-CD73 antibodies followed by micro-bead conjugated secondary antibodies allowed the enrichment of rod photoreceptor precursors by MACS to approximately 90%. In comparison to flow cytometry, MACS has the advantage that it can be easier applied to GMP standards and that high amounts of cells can be sorted in relative short time periods. Injection of enriched cell suspensions into the subretinal space of adult wild-type mice resulted in a 3-fold higher integration rate compared to unsorted cell suspensions.

Cell transplantation represents a strategy for the treatment of retinal degeneration characterized by photoreceptor loss. Here we describe a method for enrichment of transplantable photoreceptors and their subretinal grafting into adult mice.

زرع تحت الشبكية من MACS تنقية الخلايا السلائف مستقبلات ضوئية في شبكية العين الماوس الكبار

Vision impairment and blindness due to the loss of the light-sensing cells of the retina, i.e. photoreceptors, represents the main reason for disability ...

Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed results. However, the cellular and molecular mechanisms of the neotissue development, valve thickening, and stenosis development are not researched extensively. To answer the above questions, we developed a murine heterotopic heart valve transplantation model. A heart valve was harvested from a valve donor mouse and transplanted to a heart donor mouse. The heart with a new valve was transplanted heterotopically to a recipient mouse. The transplanted heart showed its own heartbeat, independent of the recipient&#8217;s heartbeat. The blood flow was quantified using a high frequency ultrasound system with a pulsed wave Doppler. The flow through the implanted pulmonary valve showed forward flow with minimal regurgitation and the peak flow was close to 100 mm/sec. This murine model of heart valve transplantation is highly versatile, so it can be modified and adapted to provide different hemodynamic environments and/or can be used with various transgenic mice to study neotissue development in a tissue engineered heart valve.

In order to understand the cellular and molecular mechanisms underlying neotissue formation and stenosis development in tissue engineered heart valves, a murine model of heterotopic heart valve transplantation was developed. A pulmonary heart valve was transplanted to recipient using the heterotopic heart transplantation technique.

زرع صمام الرئوي عن طريق نموذج الفأر من غيري مكاني القلب زرع

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

Cerenkov Luminescence Imaging of Interscapular Brown Adipose Tissue

Brown adipose tissue (BAT), widely known as a &#8220;good fat&#8221; plays pivotal roles for thermogenesis in mammals. This special tissue is closely related to metabolism and energy expenditure, and its dysfunction is one important contributor for obesity and diabetes. Contrary to previous belief, recent PET/CT imaging studies indicated the BAT depots are still present in human adults. PET imaging clearly shows that BAT has considerably high uptake of 18F-FDG under certain conditions. In this video report, we demonstrate that Cerenkov luminescence imaging (CLI) with 18F-FDG can be used to optically image BAT in small animals. BAT activation is observed after intraperitoneal injection of norepinephrine (NE) and cold treatment, and depression of BAT is induced by long anesthesia. Using multiple-filter Cerenkov luminescence imaging, spectral unmixing and 3D imaging reconstruction are demonstrated. Our results suggest that CLI with 18F-FDG is a practical technique for imaging BAT in small animals, and this technique can be used as a cheap, fast, and alternative imaging tool for BAT research.

In this video report, we show the application of Cerenkov Luminescence Imaging (CLI) for interscapular brown adipose tissue in mice under activated and depressed conditions.

كيرينكوف التلألؤ التصوير من الأنسجة الدهنية بين الكتفين براون

Brown adipose tissue (BAT), widely known as a &#8220;good fat&#8221; plays pivotal roles for thermogenesis in mammals. This special tissue is closely ...

Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots

Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 reached a staggering sum of $190.2 billion in direct medical costs alone. Obesity is a major risk factor for a wide host of diseases. Historically, little was known regarding adipose and its major and essential functions in the body. Brown and white adipose are the two main types of adipose but current literature has identified a new type of fat called brite or beige adipose. Research has shown that adipose depots have specific metabolic profiles and certain depots allow for a propensity for obesity and other related disorders. The goal of this protocol is to provide researchers the capacity to identify and excise adipose depots that will allow for the analysis of different factorial effects on adipose; as well as the beneficial or detrimental role adipose plays in disease and overall health. Isolation and excision of adipose depots allows investigators to look at gross morphological changes as well as histological changes. The adipose isolated can also be used for molecular studies to evaluate transcriptional and translational change or for in vitro experimentation to discover targets of interest and mechanisms of action. This technique is superior to other published techniques due to the design allowing for isolation of multiple depots with simplicity and minimal contamination.

Due to the drastic and negative connection between obesity and other comorbidities, research on the role adipose plays in disease and overall health is warranted. We present a protocol for the isolation and excision of adipose depots allowing for the study of adipose using in situ and in vitro methods.

الأقلمة، تحديد الهوية، واستئصال مستودعات الفئران الدهنية

Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 ...

Human Brown Adipose Tissue Depots Automatically Segmented by Positron Emission Tomography/Computed Tomography and Registered Magnetic Resonance Images

Reliably differentiating brown adipose tissue (BAT) from other tissues using a non-invasive imaging method is an important step toward studying BAT in humans. Detecting BAT is typically confirmed by the uptake of the injected radioactive tracer 18F-Fluorodeoxyglucose (18F-FDG) into adipose tissue depots, as measured by positron emission tomography/computed tomography (PET-CT) scans after exposing the subject to cold stimulus. Fat-water separated magnetic resonance imaging (MRI) has the ability to distinguish BAT without the use of a radioactive tracer. To date, MRI of BAT in adult humans has not been co-registered with cold-activated PET-CT. Therefore, this protocol uses 18F-FDG PET-CT scans to automatically generate a BAT mask, which is then applied to co-registered MRI scans of the same subject. This approach enables measurement of quantitative MRI properties of BAT without manual segmentation. BAT masks are created from two PET-CT scans: after exposure for 2 hr to either thermoneutral (TN) (24 &#176;C) or cold-activated (CA) (17 &#176;C) conditions. The TN and CA PET-CT scans are registered, and the PET standardized uptake and CT Hounsfield values are used to create a mask containing only BAT. CA and TN MRI scans are also acquired on the same subject and registered to the PET-CT scans in order to establish quantitative MRI properties within the automatically defined BAT mask. An advantage of this approach is that the segmentation is completely automated and is based on widely accepted methods for identification of activated BAT (PET-CT). The quantitative MRI properties of BAT established using this protocol can serve as the basis for an MRI-only BAT examination that avoids the radiation associated with PET-CT.

The method presented here uses 18F-Fluorodeoxyglucose (18F-FDG) positron emission tomography/computed tomography (PET-CT) and fat-water separated magnetic resonance imaging (MRI), each scanned following 2 hr exposure to thermoneutral (24 &#176;C) and cold conditions (17 &#176;C) in order to map brown adipose tissue (BAT) in adult human subjects.

الإنسان براون الدهنية مستودعات الأنسجة مجزأة تلقائيا من قبل البوزيترون البوزيتروني / التصوير المقطعي والرنين المغناطيسي مسجل صور

Reliably differentiating brown adipose tissue (BAT) from other tissues using a non-invasive imaging method is an important step toward studying BAT in ...

Transplantation Into the Mouse Ovarian Fat Pad

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic transplantation of ovarian surface and tubal epithelia include intraperitoneal and intrabursal administration of cells. The respective limitations of these methods include poorly defined location of injected cells and limited space volume. Furthermore, they are poorly suited for long-term structural preservation of transplanted organs. To address these challenges, we have developed an alternative approach, which is based on the introduction of cells and tissue fragments into the mouse fat pad. The mouse ovarian fat pad is located in the immediate vicinity of the ovary and uterine tube (aka oviduct, fallopian tube), and provides a familiar microenvironment for cells and tissues of these organs. In our approach fluorescence-labeled mouse and human cells, and fragments of the uterine tube are engrafted by using minimally traumatic dorsal incision surgery. Transplanted cells and their outgrowths are easily located in the ovarian fat pad for over 40 days. Long-term transplantation of the entire uterine tube allows correct preservation of all principle tissue components, and does not result in adverse side effects, such as fibrosis and inflammation. Our approach should be uniquely applicable for answering important biological questions such as differentiation, regenerative and neoplastic potential of specific cell populations. Furthermore, it should be suitable for studies of microenvironmental factors in normal development and cancer.

We describe an ovarian fad pad transplantation assay suitable for studies of normal and transformed epithelia of the female reproductive tract. The mouse fat pad allows transplantation of large tissue fragments, is easily accessible for surgery and imaging, and provides the most favorable native environment for tissues of M&#252;llerian origin.

زرع في وسادة الفأرة المبيض الدهون

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic ...

A Technique for Subcutaneous Abdominal Adipose Tissue Biopsy via a Non-diathermy Method

Adipose tissue biopsies offer tissue samples that, upon analysis, may provide insightful overviews of mechanisms relating to metabolism and disease. To obtain subcutaneous adipose tissue biopsies in the abdominal area, researchers and physicians use either a surgical or a needle-based technique. However, surgical subcutaneous fat biopsies can offer tissue samples that may provide a more comprehensive overview of the complexities of biological indices in white adipose tissue. Usually, a surgical adipose tissue biopsy includes a diathermy treatment for cauterizing blood vessels to prevent excessive bleeding. Nevertheless, side effects, such as flash fires and skin lesions in the tissue, have been reported after diathermy. Therefore, we aimed to standardize a surgical abdominal adipose tissue biopsy performed under local anesthesia using a non-diathermy method. We conducted 115 subcutaneous adipose tissue biopsies in healthy men using a non-diathermy abdominal surgical biopsy method. Our results showed three cases of excessive post-operation bleeding out of 115 operations (2.61%).In conclusion, our standardized subcutaneous abdominal adipose tissue surgical biopsy using a non-diathermy method can be safely applied to healthy men at the bedside, with minimal side effects.

We standardized an abdominal adipose tissue biopsy using a non-diathermy method performed under local anesthesia. Three cases of excessive post-operation bleeding out of 115 operations (2.61%) occurred.We conclude that an abdominal adipose tissue surgical biopsy using a non-diathermy method can be safely applied to healthy men.

تقنية للأنسجة الدهنية تحت الجلد للبطن خزعة عبر أسلوب غير النافذة

Adipose tissue biopsies offer tissue samples that, upon analysis, may provide insightful overviews of mechanisms relating to metabolism and disease. To ...

Assessment of Human Adipose Tissue Microvascular Function Using Videomicroscopy

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. It is hypothesized that pro-atherogenic mediators released from fat tissues particularly in association with central/visceral adiposity may promote pathogenic vascular changes locally and systemically, and the notion that cardiovascular disease may be the consequence of adipose tissue dysfunction continues to evolve. Here, we describe a unique method of videomicroscopy that involves analysis of vasodilator and vasoconstrictor responses of intact small human arterioles removed from the adipose depot of living human subjects. Videomicroscopy is used to examine functional properties of isolated microvessels in response to pharmacological or physiological stimuli using a pressured system that mimics in vivo conditions. The technique is a useful approach to gain understanding of the pathophysiology and molecular mechanisms that contribute to vascular dysfunction locally within the adipose tissue milieu. Moreover, abnormalities in the adipose tissue microvasculature have also been linked with systemic diseases. We applied this technique to examine depot-specific vascular responses in obese subjects. We assessed endothelium-dependent vasodilation to both increased flow and acetylcholine in adipose arterioles (50 - 350 &#181;m internal diameter, 2 - 3 mm in length) isolated from two different adipose depots during bariatric surgery from the same individual. We demonstrated that arterioles from visceral fat exhibit impaired endothelium-dependent vasodilation compared to vessels isolated from the subcutaneous depot. The findings suggest that the visceral microenvironment is associated with vascular endothelial dysfunction which may be relevant to clinical observation linking increased visceral adiposity to systemic disease mechanisms. The videomicroscopy technique can be used to examine vascular phenotypes from different fat depots as well as compare findings across individuals with different degrees of obesity and metabolic dysfunction. The method can also be used to examine vascular responses longitudinally in response to clinical interventions.

Videomicroscopy systems are used to examine functional properties of isolated adipose tissue arterioles in response to physiological and pharmacological stimuli. This technique can be used to examine microvascular phenotypes in different adipose tissue domains in obese humans.

تقييم الدالة Microvascular الأنسجة الدهنية البشرية باستخدام فيديوميكروسكوبي

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. ...

Transplantation of Adipose Tissue-Derived Stem Cell Sheet to Reduce Leakage After Partial Colectomy in A Rat Model

Anastomotic leakage is a disastrous complication after colorectal surgery. Although current methods for leakage prevention have different levels of clinical efficacy, they are until now imperfect solutions. Stem cell therapy using ASC sheets could provide a solution to this problem. ASCs are considered as promising candidates for promoting tissue healing because of their trophic and immunomodulatory properties. Here, we provide methods to produce high-density ASC sheets, that are transplanted onto a colorectal anastomosis in a rat model to reduce the leakage. ASCs formed cell sheets in thermo-responsive culture dishes that could be easily detached. On the day of the transplantation, a partial colectomy with a 5-suture colorectal anastomosis was performed. Animals were immediately transplanted with 1 ASC sheet per rat. ASC sheets adhered spontaneously to the anastomosis without any glue, suture, or any biomaterial. Animal groups were sacrificed 3 and 7 days postoperatively. Compared to transplanted animals, the incidence of anastomotic abscesses and leakage was higher in control animals. In our model, the transplantation of ASC sheets after colorectal anastomosis was successful and associated with a lower leakage rate.

The preparation and transplantation of adipose tissue derived stem cell (ASC) sheets onto insufficiently sutured colorectal anastomoses in a rat model is presented. This novel application shows that ASC sheets can reduce colorectal anastomosis leakage.

زرع صفحة الخلايا الجذعية المشتقة من الأنسجة الدهنية للحد من تسرب بعد Colectomy الجزئية في نموذج الفئران

Anastomotic leakage is a disastrous complication after colorectal surgery. Although current methods for leakage prevention have different levels of ...

Clinical Protocol of Producing Adipose Tissue-Derived Stromal Vascular Fraction for Potential Cartilage Regeneration

Osteoarthritis (OA) is one of the most common debilitating disorders.&#160;Recently, numerous attempts have been made to improve the functions of the knees by using different forms of mesenchymal stem cells (MSCs). In Korea, bone marrow concentrates and cord blood-derived stem cells have been approved by the Korean Food and Drug Administration (KFDA) for cartilage regeneration. In addition, an adipose tissue-derived stromal vascular fraction (SVF) has been allowed by the KFDA for joint injections in human patients. Autologous adipose tissue-derived SVF contains extracellular matrix (ECM) in addition to mesenchymal stem cells. ECM excretes various cytokines that, along with hyaluronic acid (HA) and platelet-rich plasma (PRP) activated by calcium chloride, may help MSCs to regenerate cartilage and improve knee functions. In this article, we presented a protocol to improve knee functions by regenerating cartilage-like tissue in human patients with OA. The result of the protocol was first reported in 2011 followed by a few additional publications. The protocol involves liposuction to obtain autologous lipoaspirates that are mixed with collagenase. This lipoaspirates-collagenase mixture is then cut and homogenized to remove large fibrous tissue that may clog up the needle during the injection. Afterwards, the mixture is incubated to obtain adipose tissue-derived SVF. The resulting adipose tissue-derived SVF, containing both adipose tissue-derived MSCs and remnants of ECM, is injected into knees of patients, combined with HA and calcium chloride activated PRP. Included are three cases of patients who were treated with our protocol resulting in improvement of knee pain, swelling, and range of motion along with MRI evidence of hyaline cartilage-like tissue.

Here, we present a protocol to produce an adipose tissue-derived stromal vascular fraction and its application to improve knee functions by regenerating cartilage-like tissue in human patients with osteoarthritis.

بروتوكول السريرية لإنتاج كسر الأوعية الدموية Stromal المستمدة من الأنسجة الدهنية لتجديد الغضاريف المحتملة

Osteoarthritis (OA) is one of the most common debilitating disorders.&#160;Recently, numerous attempts have been made to improve the functions of the ...