Name: encapsulation thermogenic preadipocytes for transplantation into adipose tissue depots
Uploaded: 2015-06-02T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 30 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots at JoVE.com

Wir möchten Jennifer Petrosino und David Disilvestro für redaktionelle Hilfe danken. Diese Arbeit wurde von Verleihungsnummer 20020728 von der American Egg Board und Verleihungsnummer 10040042 von Novo Nordisk Pharma als auch von der Food Innovation Center, Referat für Internationale Angelegenheiten, Center for Advanced Functional Foods Forschung und Entrepreneurship an OSU sowie die unterstützten National Science Foundation gewähren EWG-0914790 (LJL). Die beschriebene wurde von Preis Anzahl R21OD017244 (OZ) und UL1RR025755 (OSUCCC) unterstützt von der National Center for Research Resources Projekt, die das Amt des Direktors, des National Institutes of Health (OD) für medizinische Forschung und finanziert und von der NIH-Roadmap unterstützt NCI P30CA16058. Der Inhalt ist allein in der Verantwortung der Autoren und nicht notwendigerweise die offizielle Meinung des National Center for Research Resources oder der National Institutes of Health.

Das Studienprotokoll wurde von der Ohio State University Ethikkommissionen genehmigt. Tierversuche wurden von IACUC Protokoll genehmigt. Alle Verfahren wurden unter der Ebene 2 Biosicherheitswerkbank mit laminaren Strömung durchgeführt. Wir folgten alle Standard-Sicherheitsanforderungen und Verfahren. Die Mikroverkapselung Technik zur Herstellung von Mikrokapseln wurde beschrieben als 17, 18 durchgeführt. 1. Vorbereitungen für Werkstoff <ol><li> Herstellung von 10 ml der 2% igen Natriumalginatlösung in autoklaviert physiologische Salzlösung (0,9% NaCl in Wasser). Vorzubereiten 0,05% PLL-Lösung in physiologischer Kochsalzlösung. Bereiten Sie diese Lösungen am Tag vor und über Nacht gerührt. Filtern Sie die Lösungen mit 0,22 um Filter vor dem Gebrauch. </li><li> Vorbereitung 50 mM Natriumcitrat und 100 mM CaCl 2 in 0,9% NaCl-Lösungen und autoklavieren. </li><li> Autoklaven alle Lösungen, Nadeln, Elektroden, und Becher. Gründlich reinigen Nadeln mit Drähten zu vermeiden Verstopfung. </li><li> Bestimmung der geeigneten Menge an Zellen für die Kapseln verwenden (102 Mikrokapseln werden für jeden cm 2 erforderlich, und auch gibt es ungefähr 500 Zellen pro Kapsel 18). Verwenden Sie 1 ml Natriumalginat pro zwei Millionen Zellen. </li><li> Vorbereitung eines &quot;Fibroblast Growth Medium&quot;, enthaltend 10% Kälberserum und 100 U / ml Penicillin / Streptomycin in einer hohen Glucose (4.500 mg / l Glucose), Dulbeccos modifiziertes Eagle-Medium (DMEM). <ol><li> Vorbereitung einer &quot;Differenzierung Medium I &#39;, das 10% fötales Rinderserum, 10 ug / ml Insulin, 1 &amp; mgr; M Dexamethason, 0,5 mM 3-Isobutyl-1-methyl xanthin und 100 U / ml Penicillin / Streptomycin in DMEM. </li><li> Bereiten Sie eine &quot;Differenzierungsmedium II &#39;, das 10% fötales Rinderserum, 10 ug / ml Insulin und 100 U / ml Penicillin / Streptomycin in DMEM. </li></ol></li><li> Vorbereitung Lysepuffer enthaltend ein Protease-Inhibitor-Tablette pro 10 ml Radioimmunfällung Assaypuffer (RIPA-Puffer). </li></ol> 2. Alginate Microbeads Vorbereitung (Abbildung 1A) <ol><li> Entfernen Sie alte Medium von Zellkulturflasche. Spülen Zellen mit 10 ml PBS. Bringen Zellen in Suspension mit 0,25% Trypsin-EDTA (2 ml pro einem konfluenten T175-Kolben). </li><li> Zählen von Zellen in der Zellsuspension unter Verwendung eines Hämozytometers. Verwenden Sie 10 ml Aliquot aus der Zellsuspension und zählen Zellen gemäß den Anweisungen des Herstellers. Zentrifugieren der verbleibenden Zellen in Medium, Zentrifugation bei 480 × g bei Raumtemperatur für 5 min. </li><li> Suspendiere das Zellpellet in Natriumalginat, wie in Schritt 1.4 beschrieben. Übertragen die Natriumalginat-Zell-Lösung in einen 5 ml-Spritze. </li><li> Entfernen Sie Luftblasen in der Lösung, fügen Sie eine 23-Gauge-Nadel und drehen Sie die Spritze, um eine 1 ml Luftblase zu erstellen. </li><li> Setzen Sie einen kleinen Becher (180 ml) enthält 144 ml 100 mM CaCl 2 -Lösung unter der Nadel Auslauf des encapsulator. Bringen Sie die Elektrode an das encapsulator mit der Spitze approximLICH 2,5 cm über der Oberfläche des 100 mM CaCl 2 -Lösung. </li><li> Legen fest die Spritze mit dem Natriumalginat-Zell-Lösung in der Spritzenpumpe. Befestigen Sie den Gummischlauch an die Öffnung der Spritze. Drücken Sie den Kolben, bis der Natriumalginat-Zell-Lösung tritt auf halbem Weg durch das Rohr. Stellen Sie die Spannung bis 5,4 kV. Stellen Sie die 12,06 mm Durchmesser in der Spritzenpumpe. Passen Sie die Geschwindigkeit bis 3 ml / h. Starten Sie die Pumpe. Schalten Sie den encapsulator und Aufrechterhaltung der Spannung bei 5,4 kV. </li><li> Schließen Sie das Fenster der Haube und vermeiden unnötige Vibrationen bis zum Ende der Ausbildung der Alginat-Mikrokügelchen. Schließlich Lösung durch die Nadel spielt erstarren die Alginat kugelförmigen Mikroperlen in der 100 mM CaCl2-Lösung für weitere 20 min vor der Beschichtung mit PLL. </li></ol> 3. Beschichtungs Microbeads mit PLL (1B) <ol><li> Entfernen Sie das Becherglas mit der Natriumalginat-Zell kugelförmigen Mikroperlen und übertragen diese microbEADS in ein 50 ml Zentrifugenröhrchen. Entfernen CaCl 2 -Lösung aus dem Mikrokügelchen Pellets. </li><li> Durch Zugabe von 30 ml 0,9% NaCl waschen die Alginat-Zell kugelförmigen Mikrokügelchen. Schütteln Sie das Röhrchen mit der Hand sanft. Entfernen Sie 0,9% NaCl mit 25 ml Pipette nach dem die Mikrokügelchen wurden durch die Schwerkraft ausgefällt. Wiederholen Sie zwei weitere Male für insgesamt 3 Waschschritten. </li><li> Verwenden von 10 ml 0,05% PLL-Lösung pro 1 ml Natriumalginatlösung. Fügen Sie die 0,05% PLL und Wirbel bei 1.000 Umdrehungen pro Minute für 10 Minuten. Hinweis: In der Regel ist 10 Minuten ausreichend für PLL-Beschichtung. </li><li> Nach PLL Mantel gebildet wird, entfernen Sie die PLL-Lösung und waschen Sie die Kapseln 3 mal wie in 3.2 beschrieben. </li></ol> 4. Entfernung von Alginat Core (1C) <ol><li> 30 ml 50 mM Natriumcitrat-Lösung. Warte 5 Minuten oder bis das Natriumalginat aufgelöst ist. Waschkapseln dreimal wie in Schritt 3.1.1 beschrieben. </li><li> Entfernen Sie die 0,9% NaCl, 20 ml Kulturmedium zu der 50 ml Tubeabtreten und Kapseln mit den Zellen bis zu einer Zellkulturflasche. Griff eingekapselten Zellen unter Standardzellkulturbedingungen 18. </li></ol> 5. In-vitro-Anwendungen zu Xenograft und Host-Zell-Interaktionen oder Kinetik der Metabolit Influx / Efflux zwischen Zellen zu untersuchen (Abbildung 2) <ol><li> Kultur von Wirtszellen auf Platte mit 24 Vertiefungen bis zur Konfluenz für Co-Kulturen. Verwenden Sie die &quot;Fibroblast Growth Medium &#39;für die Kultivierung Präadipozyten. </li><li> Transfer-Mikrokapseln in 24 Well-Platte mit konfluenten Wirtszellen. In Mikrokapseln, um eine Monoschicht zu erreichen (102 Mikrokapseln / cm 2 von gut). </li><li> Induzieren Pre-Adipozyten-Differenzierung mit Differenzierungsmedium I. Jede 48 Stunden, Wechselmedien, um die Differenzierung Medium II für sechs Tage. Lyse-Zellen in RIPA-Puffer. Verwenden Sie 50 ug Protein pro Zustand um die Proteinexpression mittels Western-Blot-Analyse. </li></ol> 6. In vivo-Anwendung für Treatment of Obesity (Abbildung 3) <ol><li> Mischen Sie 4% Isofluran mit Sauerstoff zur Einleitung der Narkose und 2% Isofluran mit Sauerstoff zur Aufrechterhaltung der Anästhesie. Bestätigen ausreichende Narkosetiefe von toe Prise. <ol><li> Bewerben Anti-Juckreiz Salbe auf die Augen, um die Hornhaut vor dem Austrocknen zu schützen. </li></ol></li><li> Verwenden eingekapselten Zellen, die dauerhaft mit künstlichen fluoreszierendes Protein markiert sind, wie grün fluoreszierendes Protein (GFP). </li><li> Verwenden Sie ein 3-ml-Spritze und einer 20-Gauge-Nadel, um verkapselten Zellen injizieren. <ol><li> Injizieren 0,5 x 10 6 Zellen in 0,2 ml PBS in jede IAB Fettdepots, die im Bereich zwischen einem intraperitoneale Gonade und Niere angeordnet ist, wie in 3 gezeigt eingestellt. Mit diesem Volumen PBS und die Zellzahl für Mäuse mit einem durchschnittlichen Gewicht von 40 g. Einzustellen Zellzahl und Volumen bei Mäusen, die unterschiedliche Gewichts oder zur Bestimmung der Dosis-abhängigen Wirkung. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Vogeli, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+chronic+conditions:+prevalence,+health+consequences,+and+implications+for+quality,+care+management,+and+costs.">Multiple chronic conditions: prevalence, health consequences, and implications for quality, care management, and costs.</a> Journal of general internal medicine. 22, 391-395 (2007).</li><li>Vija, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cells:+Stem+cell+therapy+perspectives+for+type+1+diabetes.">Mesenchymal stem cells: Stem cell therapy perspectives for type 1 diabetes.</a> Diabetes &amp; metabolism. 35, 85-93 (2009).</li><li>Acarregui, A., Orive, G., Pedraz, J. L., Hernandez, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+applications+of+encapsulated+cells.">Therapeutic applications of encapsulated cells.</a> Methods in molecular biology. 1051, 349-364 (2013).</li><li>Chang, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Semipermeable+Microcapsules.">Semipermeable Microcapsules.</a> Science. 146, 524-525 (1964).</li><li>Elliott, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+encapsulated+porcine+islets+from+a+type+1+diabetic+patient+9.5+yr+after+xenotransplantation.">Live encapsulated porcine islets from a type 1 diabetic patient 9.5 yr after xenotransplantation.</a> Xenotransplantation. 14, 157-161 (2007).</li><li>Lim, F., Sun, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microencapsulated+islets+as+bioartificial+endocrine+pancreas.">Microencapsulated islets as bioartificial endocrine pancreas.</a> Science. 210, 908-910 (1980).</li><li>Vos, P., Spasojevic, M., Faas, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+diabetes+with+encapsulated+islets.">Treatment of diabetes with encapsulated islets.</a> Advances in experimental medicine and biology. 670, 38-53 (2010).</li><li>Cotton, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+challenges+in+cell-encapsulation+technology.">Engineering challenges in cell-encapsulation technology.</a> Trends in biotechnology. 14, 158-162 (1996).</li><li>Yach, D., Stuckler, D., Brownell, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiologic+and+economic+consequences+of+the+global+epidemics+of+obesity+and+diabetes.">Epidemiologic and economic consequences of the global epidemics of obesity and diabetes.</a> Nature medicine. 12, 62-66 (2006).</li><li>Ng, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global,+regional,+and+national+prevalence+of+overweight+and+obesity+in+children+and+adults+during+1980-2013:+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2013.">Global, regional, and national prevalence of overweight and obesity in children and adults during 1980-2013: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2013.</a> Lancet. 384, 766-781 (2014).</li><li>Kissebah, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relation+of+body+fat+distribution+to+metabolic+complications+of+obesity.">Relation of body fat distribution to metabolic complications of obesity.</a> The Journal of clinical endocrinology and metabolism. 54, 254-260 (1982).</li><li>Bray, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relation+of+central+adiposity+and+body+mass+index+to+the+development+of+diabetes+in+the+Diabetes+Prevention+Program.">Relation of central adiposity and body mass index to the development of diabetes in the Diabetes Prevention Program.</a> The American journal of clinical nutrition. 87, 1212-1218 (2008).</li><li>Klein, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+are+subcutaneous+adipocytes+really+good+for.">What are subcutaneous adipocytes really good for.</a> Experimental dermatology. 16, 45-70 (2007).</li><li>Tran, T. T., Yamamoto, Y., Gesta, S., Kahn, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beneficial+effects+of+subcutaneous+fat+transplantation+on+metabolism.">Beneficial effects of subcutaneous fat transplantation on metabolism.</a> Cell metabolism. 7, 410-420 (2008).</li><li>Seale, P., Kajimura, S., Spiegelman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+control+of+brown+adipocyte+development+and+physiological+function--of+mice+and+men.">Transcriptional control of brown adipocyte development and physiological function--of mice and men.</a> Genes &amp; development. 23, 788-797 (2009).</li><li>Kozak, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+variation+in+brown+fat+activity+and+body+weight+regulation+in+mice:+lessons+for+human+studies.">Genetic variation in brown fat activity and body weight regulation in mice: lessons for human studies.</a> Biochimica et biophysica acta. 1842, 370-376 (2014).</li><li>Zhang, X., He, H., Yen, C., Ho, W., Lee, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+biodegradable,+immunoprotective,+dual+nanoporous+capsule+for+cell-based+therapies.">A biodegradable, immunoprotective, dual nanoporous capsule for cell-based therapies.</a> Biomaterials. 29, 4253-4259 (2008).</li><li>Yang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+prolonged+survival+of+fibroblasts+with+forced+lipid+catabolism+in+visceral+fat+following+encapsulation+in+alginate-poly-L-lysine.">The prolonged survival of fibroblasts with forced lipid catabolism in visceral fat following encapsulation in alginate-poly-L-lysine.</a> Biomaterials. 33, 5638-5649 (2012).</li><li>Chang, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Artificial+cells+with+emphasis+on+bioencapsulation+in+biotechnology.">Artificial cells with emphasis on bioencapsulation in biotechnology.</a> Biotechnology annual review. 1, 267-295 (1995).</li><li>Chang, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hybrid+artificial+cells:+microencapsulation+of+living+cells.">Hybrid artificial cells: microencapsulation of living cells.</a> ASAIO journal. 38, 128-130 (1992).</li><li>Koo, J., Chang, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secretion+of+erythropoietin+from+microencapsulated+rat+kidney+cells:+preliminary+results.">Secretion of erythropoietin from microencapsulated rat kidney cells: preliminary results.</a> The International journal of artificial organs. 16, 557-560 (1993).</li><li>Weidenauer, U., Bodmer, D., Kissel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microencapsulation+of+hydrophilic+drug+substances+using+biodegradable+polyesters.+Part+I:+evaluation+of+different+techniques+for+the+encapsulation+of+pamidronate+di-sodium+salt.">Microencapsulation of hydrophilic drug substances using biodegradable polyesters. Part I: evaluation of different techniques for the encapsulation of pamidronate di-sodium salt.</a> Journal of microencapsulation. 20, 509-524 (2003).</li><li>Smidsrod, O., Skjak-Braek, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alginate+as+immobilization+matrix+for+cells.">Alginate as immobilization matrix for cells.</a> Trends in biotechnology. 8, 71-78 (1990).</li><li>Lewinska, D., Rosinski, S., Werynski, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+process+conditions+during+impulsed+electrostatic+droplet+formation+on+size+distribution+of+hydrogel+beads.">Influence of process conditions during impulsed electrostatic droplet formation on size distribution of hydrogel beads.</a> Artificial cells, blood substitutes, and immobilization biotechnology. 32, 41-53 (2004).</li><li>Chan, E. S., Lee, B. B., Ravindra, P., Poncelet, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prediction+models+for+shape+and+size+of+ca-alginate+macrobeads+produced+through+extrusion-dripping+method.">Prediction models for shape and size of ca-alginate macrobeads produced through extrusion-dripping method.</a> Journal of colloid and interface science. 338, 62-72 (2009).</li><li>Bhujbal, S. V., Paredes-Juarez, G. A., Niclou, S. P., de Vos, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+influencing+the+mechanical+stability+of+alginate+beads+applicable+for+immunoisolation+of+mammalian+cells.">Factors influencing the mechanical stability of alginate beads applicable for immunoisolation of mammalian cells.</a> Journal of the behavior of biomedical materials. 37, 196-208 (2014).</li><li>Gushchina, L. V., Yasmeen, R., Ziouzenkova, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moderate+vitamin+A+supplementation+in+obese+mice+regulates+tissue+factor+and+cytokine+production+in+a+sex-specific+manner.">Moderate vitamin A supplementation in obese mice regulates tissue factor and cytokine production in a sex-specific manner.</a> Archives of biochemistry and biophysics. 539, 239-247 (2013).</li><li>Ziouzenkova, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinaldehyde+represses+adipogenesis+and+diet-induced+obesity.">Retinaldehyde represses adipogenesis and diet-induced obesity.</a> Nature. 13, 695-702 (2007).</li><li>Yasmeen, R., Jeyakumar, S. M., Reichert, B., Yang, F., Ziouzenkova, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+contribution+of+vitamin+A+to+autocrine+regulation+of+fat+depots.">The contribution of vitamin A to autocrine regulation of fat depots.</a> Biochimica et biophysica acta. 1821, 190-197 (2012).</li><li>Liu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miR-133a+regulates+adipocyte+browning+in+vivo.">miR-133a regulates adipocyte browning in vivo.</a> PLoS genetics. 9, e1003626 (2013).</li><li>Rao, R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meteorin-like+is+a+hormone+that+regulates+immune-adipose+interactions+to+increase+beige+fat+thermogenesis.">Meteorin-like is a hormone that regulates immune-adipose interactions to increase beige fat thermogenesis.</a> Cell. 157, 1279-1291 (2014).</li><li>Kir, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumour-derived+PTH-related+protein+triggers+adipose+tissue+browning+and+cancer+cachexia.">Tumour-derived PTH-related protein triggers adipose tissue browning and cancer cachexia.</a> Nature. 513, 100-104 (2014).</li></ol>

No conflicts of interest declared.

Verschiedene Verfahren wurden verwendet, um Zellen, einschließlich Trocknen, Extrudieren und Emulsion 19 einzukapseln. In diesem Verfahren werden die Alginatkapseln durch eine Nadel extrudiert, dann mit PLL beschichtet und das Alginat Kern aufgelöst wird, um die Verkapselung zu vervollständigen. Obwohl dieses Verfahren seit Jahren verwendet worden ist, ist die Bildung der Kügelchen mit der gewünschten Grße und Kugelform immer noch eine Herausforderung. Die Größe der Kapseln ist stark abhängig von der...

Zunehmende Häufigkeit von chronischen Krankheiten 1 hat Studien über die Transplantation von therapeutischen Zellpopulationen 2 stimuliert. Syngenen oder allogenen Stammzellen sind die am häufigsten verwendeten Zelltypen für diese Anwendungen 2. Jedoch sind diese Behandlungen nicht erlauben Steuerung Differenzierung und Migration von Stammzellen nach der Implantation und sind nicht kosteneffizient. Die Transplantation von genetisch modifizierten Zellen mit nützlichen Funktionen rechnet die Verbesserung der Behandlung vieler Krankheiten. Allerdings sind genetische Zell Änderungen durch den Host-Immunsystem erkannt, deshalb diese Behandlungen benötigen Immunsuppression 3. Verkapselung von Zellen, die Insulin wurde von Dr. Chang 4 entwickelt. Die Technik basiert auf Verkapselung der Zellen im Alginat-Tröpfchen, die in einer Calciumchloridlösung eingetaucht sind, beruht. Alginat Moleküle aus Mannuronsäure (M) und Guluronsäure (G) und können durch Ca 2+ verbunden werden. Nach der Gelierung werden die Perlen ein Poly-L-Lysin (PLL) suspendiert. Während dieser Stufe bindet PLL bis G und M in der Alginat-Moleküle, die die Kapselmembran herstellt. Die Porosität der Kapselmembran kann durch Variation der M und PLL-Konzentrationen, die Inkubationszeit und der Temperatur moduliert werden. Die Bindung von PLL hängt auch von der Art und Konzentration des Alginats. Alginat Matrizen mit Ca 2+ -Ionen vernetzt, sind instabil in der physiologischen Umgebung oder in gemeinsamen Pufferlösungen mit einer hohen Konzentration an Phosphat und Citrationen. Diese Puffer können Ca 2+ aus dem Alginat zu extrahieren und zu verflüssigen den Kern. Verflüssigung des Alginats Kern schafft Platz in den Kapseln für die zelluläre Bewegung und Wachstum. Zellen in polyanionischen Alginats mit polykationische Poly-L-Lysin (APL) eingekapselt sind undurchlässig für Immunglobuline aber Zustrom von Nährstoffen und Ausstrom von Toxinen. Objekte Das APL ermöglichen die langfristige survival von verkapselten Zellen nach Transplantation in genetisch verschiedenen Hosts. Elliott et al. Berichteten über die Überlebensrate von funktionierenden eingekapselt Schweinepankreaszellen in einem menschlichen Patienten neun Jahre nach der Implantation 5. Verkapselungstechniken können in Mikroverkapselung (3-800 &amp; mgr; m) und Makroverkapselung (größer als 1000 &amp; mgr; m) klassifiziert werden. Mikrokapseln sind haltbarer als Makrokapseln 6. Seit seiner Entdeckung durch Dr. Chang und seine Kollegen im Jahr 1964, Mikroverkapselung wurde in großem Umfang für die Verkapselung von anabolen Zellen Insulin produzieren, andere Hormone, und bioaktive Moleküle 7 verwendet. Diese Behandlungen konfrontiert mehrere Herausforderungen in das Wirtsgewebe einschließlich Fibrose und Immunantwort 8. Anfänglich sind die Nebenwirkungen auf die Qualität des Biopolymeren bezogen wurden gelöst. Jedoch Transplantation von anabolen Zellen noch initiiert Nebenwirkungen, wie Fibrose infolge der Hormon overproduktion außerhalb eines spezialisierten Drüse. In den letzten Jahrzehnten, Fettleibigkeit und Typ-2-Diabetes hat epidemische Ausmaße erreicht 9. Mehr als 30% der erwachsenen Menschen weltweit sind übergewichtig und fettleibig 10. Vermehrtem intraabdominellen (IAB) Fettbildung erhöht die Inzidenz der chronischen Entzündung und fördert die Typ-2-Diabetes, Herz-Kreislauf- Erkrankungen, bestimmte Krebsarten und andere Begleiterkrankungen 11-13. Mehrere Beweis vorgeschlagen, dass Pathogenese mit IAB Fett verbunden sind, können durch spezifische Fettzellen verhindert werden. Jüngste Studien haben gezeigt, dass die Transplantation von subkutanen Fettzellen in IAB-Region kann den Stoffwechsel zu verbessern und die Adipositas und Insulinresistenz bei Nagern in vivo 14 gezeigt. Senkung von Adipositas und Insulinresistenz mit thermogenic Adipozyten Energie aufnehmend in Form von Wärme 15,16 in Verbindung gebracht. Thermogenic Änderung der Fettzellen kann durch eine stabile Transfektion erreicht werdenvon Genen, die an der mitochondrialen Protonenentkopplungs wie Abkoppeln Protein 1 (UCP1) oder von Genen regulieren die Expression von UCP1 und andere thermogene Gene 15,16. Unsere bisherigen Studien zeigten, dass Mängel in der Aldehyddehydrogenase 1 a1 (Aldh1a1) führt zum thermogene Remodellierung von Iab Fett, Fettsucht und Insulinresistenz bei diesen Mäusen 17,18 verringert. Bemerkenswert ist, Verkapselung von thermogenic Aldh1a1 mangel (Aldh1a1 - / -) Präadipozyten vermittelt gleiche therapeutische Wirkung im IAB Fett bei übergewichtigen Wildtyp-Mäusen, was darauf hindeutet, neue therapeutische Möglichkeiten zur Behandlung der IAB-Fett 18. In experimentellen Einstellungen verkapselten Zellen können die Forscher die Auswirkungen spezifischer Zellpopulationen in einer kosteneffektiven Weise 19 zu studieren. Hier diskutieren wir die Methode der Verkapselung eines thermogene katabolen Zelllinie und ihre Labor und therapeutische Anwendung in einem Mausmodell für Fettleibigkeit. Das Protokoll beschreibt three Phasen für die Mikrokapselherstellung (Abbildung 1): die Bildung von Alginat-Mikrokugeln (Figur 1A), die Bildung der polykationische Poly-L-Lysin (PLL) Membranen, die auf der Oberfläche der Mikrokügelchen, (1B), und das Entfernen des Alginat-Kerne (1C).

<table><tbody><tr><td>Encapsulation device (VAR V1)</td><td>Nisco</td><td>LIN-0042</td><td>None</td></tr><tr><td>KD scientific syringe pump</td><td>KD scientific</td><td>780100Y</td><td>None</td></tr><tr><td>Olympus microscope&amp;nbsp;</td><td>Olympus Optical</td><td>IX70-S8F2</td><td>None</td></tr><tr><td>Sodium alginate</td><td>Sigma</td><td>MKBP8122V</td><td>None</td></tr><tr><td>Poly-L-lysine hydrobromide (PLL)</td><td>Sigma</td><td>020M5006V</td><td>None</td></tr><tr><td>Calcium chloride</td><td>Sigma</td><td>SLBJ2662V</td><td>None</td></tr><tr><td>Sodium citrate tribasic dihydrate</td><td>Sigma</td><td>030M0200</td><td>None</td></tr><tr><td>Sodium chloride</td><td>Sigma</td><td>SLBD2595V</td><td>None</td></tr><tr><td>Mini-PROTEAN TGX Gels</td><td>Bio-Rad</td><td>456-1093</td><td>None</td></tr><tr><td>ATGL primary antibody (from rabbit)</td><td>Cell Signaling</td><td>2138S</td><td>None</td></tr><tr><td>Secondary anti body (anti rabbit)</td><td>LI-COR</td><td>926-68071</td><td>None</td></tr><tr><td>Radio-Immunoprecipitation Assay (RIPA) buffer</td><td>Boston BioProducts</td><td>D25Y6Z</td><td>None</td></tr><tr><td>Phosphate buffered saline (PBS)</td><td>Sigma</td><td>RNBD2893</td><td>None</td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td>None</td></tr><tr><td>Cortizone 10 anti-itch ointment</td><td>Cortizone 10</td><td>C4029138</td><td>None</td></tr><tr><td>Dulbecco&#039;s Modified Eagle Medium (DMEM)</td><td>Gibco</td><td>11965-092</td><td>None</td></tr><tr><td>Newborn calf serum (CS)</td><td>Sigma</td><td>N4762</td><td>None</td></tr><tr><td>Fetal bovine serum (FBS)</td><td>Sigma</td><td>F4135</td><td>None</td></tr><tr><td>3-Isobutyl-1-methylxanthine (IBMX)</td><td>Sigma</td><td>I0516</td><td>None</td></tr><tr><td>Dexamethasone</td><td>Sigma</td><td>D4902</td><td>None</td></tr><tr><td>Insulin (bovine)</td><td>Sigma</td><td>I5879</td><td>None</td></tr><tr><td>Protease inhibitor cocktail tablets</td><td>Roche</td><td>4693159001</td><td>None</td></tr></tbody></table>

encapsulation thermogenic preadipocytes for transplantation into adipose tissue depots

Verkapselung von Zellen entwickelt worden, um lebensfähige Zellen in semipermeable Membranen einschließen. Die transplantierten Zellen können eingekapselt Gewicht niedermolekularen Metaboliten in Gewebe des behandelten Wirts austauschen, um langfristiges Überleben zu erreichen. Die semipermeable Membran ermöglicht engrafted eingekapselten Zellen um die Abstoßung durch das Immunsystem zu vermeiden. Die Verkapselung Verfahren wurde entwickelt, um eine kontrollierte Freisetzung von bioaktiven Verbindungen, wie Insulin, andere Hormone und Cytokine aktivieren. Hier beschreiben wir eine Methode zur Verkapselung von Abbauzellen, die Lipide für die Wärmeerzeugung und Energieverlust (Thermogenese) im intra-abdominale Fettgewebe von fettleibigen Mäusen verbrauchen. Verkapselung von thermogenic katabolen Zellen können potentiell für die Prävention und Behandlung von Fettleibigkeit und Typ-2-Diabetes. Eine weitere mögliche Anwendung der katabolen Zellen können Entgiftung von Alkoholen oder anderen toxischen Metaboliten und Umweltschadstoffe sind.

Figur 1 zeigt, daß jeder Schritt der Mikroproduktion könnte unter dem Mikroskop kontrolliert werden. 2A zeigt, wie man mit einer Monoschicht von eingekapselten Zellen Kokultur Adipozyten. 2B ist ein repräsentatives Beispiel für eine quantitative Untersuchung mit Adipozyten / Mikrokapseln Kokulturen dass wurden in Abschnitt 5 beschriebenen Lysate von Adipozyten wurden mittels Western-Blot analysiert. Eingekapselten Zellen wurden in diesem Experiment untersucht. 1.000...

Watch this Scientific Journal Video about Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots at JoVE.com

Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

Here, we present a protocol for encapsulation of catabolic cells, which consume lipids for heat production in intra-abdominal adipose tissue and increase energy dissipation in obese mice.

Encapsulation Thermogenic Präadipozyten für die Transplantation in Fettgewebe Depots

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular ...

encapsulation-thermogenic-preadipocytes-for-transplantation-into

Microsoft Bing

Research

JoVE Journal

Medicine

9.3K Aufrufe.  The Ohio State University. Here, we present a protocol for encapsulation of catabolic cells, which consume lipids for heat production in intra-abdominal adipose tissue and increase energy dissipation in obese mice.

Serie: Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

A Microphysiologic Platform for Human Fat: Sandwiched White Adipose Tissue

White adipose tissue (WAT) plays a crucial role in regulating weight and everyday health. Still, there are significant limitations to available primary culture models, all of which have failed to faithfully recapitulate the adipose microenvironment or extend WAT viability beyond two weeks. The lack of a reliable primary culture model severely impedes research in WAT metabolism and drug development. To this end we have utilized NIH's standards of a microphysiologic system to develop a novel platform for WAT primary culture called 'SWAT' (sandwiched white adipose tissue). We overcome the natural buoyancy of adipocytes by sandwiching minced WAT clusters between sheets of adipose-derived stromal cells. In this construct, WAT samples are viable over eight weeks in culture. SWAT maintains the intact ECM, cell-to-cell contacts, and physical pressures of in vivo WAT conditions; additionally, SWAT maintains a robust transcriptional profile, sensitivity to exogenous chemical signaling, and whole tissue function. SWAT represents a simple, reproducible, and effective method of primary adipose culture. Potentially, it is a broadly applicable platform for research in WAT physiology, pathophysiology, metabolism, and pharmaceutical development.

White adipose tissue (WAT) has critical deficiencies in its current primary culture models, hindering pharmacological development and metabolic studies. Here, we present a protocol to produce an adipose microphysiological system by sandwiching WAT between sheets of stromal cells. This construct provides a stable and adaptable platform for primary WAT culture.

Eine Microphysiologic Plattform für menschliches Fett: weißen Fettgewebe eingeklemmt

White adipose tissue (WAT) plays a crucial role in regulating weight and everyday health.  Still, there are significant limitations to available primary ...

Forschung

Verhalten

Isolation, Expansion, and Adipogenic Induction of CD34+CD31+ Endothelial Cells from Human Omental and Subcutaneous Adipose Tissue

Obesity is accompanied by an extensive remodeling of adipose tissue primarily via adipocyte hypertrophy. Extreme adipocyte growth results in a poor response to insulin, local hypoxia, and inflammation. By stimulating the differentiation of functional white adipocytes from progenitors, radical hypertrophy of the adipocyte population can be prevented and, consequently, the metabolic health of adipose tissue can be improved along with a reduction of inflammation. Also, by stimulating a differentiation of beige/brown adipocytes, the total body energy expenditure can be increased, resulting in weight loss. This approach could prevent the development of obesity co-morbidities such as type 2 diabetes and cardiovascular disease.
This paper describes the isolation, expansion, and differentiation of white and beige adipocytes from a subset of human adipose tissue endothelial cells that co-express the CD31 and CD34 markers. The method is relatively cheap and is not labor-intensive. It requires access to human adipose tissue and the subcutaneous depot is suitable for sampling. For this protocol, fresh adipose tissue samples from morbidly obese subjects [body mass index (BMI) &#62;35] are collected during bariatric surgery procedures. Using a sequential immunoseparation from the stromal vascular fraction, enough cells are produced from as little as 2&#8211;3 g of fat. These cells can be expanded in culture over 10&#8211;14 days, can be cryopreserved, and retain their adipogenic properties with passaging up to passage 5&#8211;6. The cells are treated for 14 days with an adipogenic cocktail using a combination of human insulin and the PPAR&#947; agonist-rosiglitazone.
This methodology can be used for obtaining proof of concept experiments on molecular mechanisms that drive adipogenic responses in adipose endothelial cells, or for screening new drugs that can enhance the adipogenic response directed either towards white or beige/brown adipocyte differentiation. Using small subcutaneous biopsies, this methodology can be used to screen out non-responder subjects for clinical trials aimed to stimulate beige/brown and white adipocytes for the treatment of obesity and co-morbidities.

The differentiation of white and beige adipocytes from adipose tissue vascular progenitors bears potential for metabolic improvement in obesity. We describe protocols for a CD34+CD31+ endothelial cell isolation from human fat and for a subsequent in vitro expansion and differentiation into white and beige adipocytes. Several downstream applications are discussed.

Isolation, Expansion und Adipogenen Induktion von CD34 + CD31 + Endothelial Zellen aus menschlichen Omentalis und subkutanem Fettgewebe

Obesity is accompanied by an extensive remodeling of adipose tissue primarily via adipocyte hypertrophy. Extreme adipocyte growth results in a poor ...

Immunologie und Infektion

Isolation and Differentiation of Stromal Vascular Cells to Beige/Brite Cells

Brown adipocytes have the ability to uncouple the respiratory chain in mitochondria and dissipate chemical energy as heat. Development of UCP1-positive brown adipocytes in white adipose tissues (so called beige or brite cells) is highly induced by a variety of environmental cues such as chronic cold exposure or by PPAR&gamma; agonists, therefore, this cell type has potential as a therapeutic target for obesity treatment. Although most immortalized adipocyte lines cannot recapitulate the process of "browning" of white fat in culture, primary adipocytes isolated from stromal vascular fraction in subcutaneous white adipose tissue (WAT) provide a reliable cellular system to study the molecular control of beige/brite cell development. Here we describe a protocol for effective isolation of primary preadipocytes and for inducing differentiation to beige/brite cells in culture. The browning effect can be assessed by the expression of brown fat-selective markers such as UCP1.

Primary white preadipocytes isolated from white adipose tissues in mice can be differentiated into beige/brite cells. Presented here is a reliable cellular model system to study the molecular regulation of "browning" of white fat.

Isolation und Differenzierung von Stroma-Vascular Cells Beige / Brite Cells

Brown adipocytes have the ability to uncouple the  respiratory chain in mitochondria and dissipate chemical energy as heat.  Development of UCP1-positive ...

Biologie

Three-Dimensional Culture of Vascularized Thermogenic Adipose Tissue from Microvascular Fragments

Engineering thermogenic adipose tissue (e.g., beige or brown adipose tissues) has been investigated as a potential therapy for metabolic diseases or for the design of personalized microtissues for health screening and drug testing. Current strategies are often quite complex and fail to accurately fully depict the multicellular and functional properties of thermogenic adipose tissue. Microvascular fragments, small intact microvessels comprised of arteriole, venules, and capillaries isolated from adipose tissue, serve as a single autologous source of cells that enable vascularization and adipose tissue formation. This article describes methods for optimizing culture conditions to enable the generation of three-dimensional, vascularized, and functional thermogenic adipose tissues from microvascular fragments, including protocols for isolating microvascular fragments from adipose tissue and culture conditions. Additionally, best practices are discussed, as are techniques for characterizing the engineered tissues, and sample results from both rodent and human microvascular fragments are provided. This approach has the potential to be utilized for the understanding and development of treatments for obesity and metabolic disease.

Here, we present a detailed protocol outlining the use of microvascular fragments isolated from rodent or human fat tissue as a straightforward approach to engineer functional, vascularized beige adipose tissue.

Dreidimensionale Kultivierung von vaskularisiertem thermogenem Fettgewebe aus mikrovaskulären Fragmenten

Engineering thermogenic adipose tissue (e.g., beige or brown adipose tissues) has been investigated as a potential therapy for metabolic diseases or for ...

Biotechnik

Fat-Covered Islet Transplantation Using Epididymal White Adipose Tissue

Islet transplantation is a cellular replacement therapy for severe diabetes mellitus. The intraperitoneal cavity is typically the transplant site for this procedure. However, intraperitoneal islet transplantation has some limitations, including poor transplant efficacy, difficult graft detection ability, and a lack of graftectomy capability for post-transplant analysis. In this paper, "fat-covered islet transplantation", an intraperitoneal islet transplantation method that utilizes epididymal white adipose tissue, is used to assess the therapeutic effects of bioengineered islets. The simplicity of the method lies in the seeding of islets onto epididymal white adipose tissue and using the tissue to cover the islets. While this method can be categorized as an intraperitoneal islet transplantation technique, it shares characteristics with intra-adipose tissue islet transplantation. The fat-covered islet transplantation method demonstrates more robust therapeutic effects than intra-adipose tissue islet transplantation, however, including the improvement of blood glucose and plasma insulin levels and the potential for graft removal. We recommend the adoption of this method for assessing the mechanisms of islet engraftment into white adipose tissue and the therapeutic effects of bioengineered islets.

This fat-covered islet transplantation method is suitable for the detection of engrafted islets in the intraperitoneal cavity. Notably, it does not require the use of biobinding agents or suturing.

Fettbedeckte Inseltransplantation mit Nebenhoden-weißem Fettgewebe

Islet transplantation is a cellular replacement therapy for severe diabetes mellitus. The intraperitoneal cavity is typically the transplant site for this ...

Medizin

Human Adipose Tissue Micro-fragmentation for Cell Phenotyping and Secretome Characterization

In the past decade, adipose tissue transplants have been widely used in plastic surgery and orthopaedics to enhance tissue repletion and/or regeneration. Accordingly, techniques for harvesting and processing human adipose tissue have evolved in order to quickly and efficiently obtain large amounts of tissue. Among these, the closed system technology represents an innovative and easy-to-use system to harvest, process, and re-inject refined fat tissue in a short time and in the same intervention (intra-operatively). Adipose tissue is collected by liposuction, washed, emulsified, rinsed and minced mechanically into cell clusters of 0.3 to 0.8 mm. Autologous transplantation of mechanically fragmented adipose tissue has shown remarkable efficacy in different therapeutic indications such as aesthetic medicine and surgery, orthopedic and general surgery. Characterization of micro-fragmented adipose tissue revealed the presence of intact small vessels within the adipocyte clusters; hence, the perivascular niche is left unperturbed. These clusters are enriched in perivascular cells (i.e., mesenchymal stem cell (MSC) ancestors) and in vitro analysis showed an increased release of growth factors and cytokines involved in tissue repair and regeneration, compared to enzymatically derived MSCs. This suggests that the superior therapeutic potential of microfragmented adipose tissue is explained by a higher frequency of presumptive MSCs and enhanced secretory activity. Whether these added pericytes directly contribute to higher growth factor and cytokine production is not known. This clinically approved procedure allows the transplantation of presumptive MSCs without the need for expansion and/or enzymatic treatment, thus bypassing the requirements of GMP guidelines, and reducing the costs for cell-based therapies.

Here, we present human adipose tissue enzyme-free micro-fragmentation using a closed system device. This new method allows the obtainment of sub-millimeter clusters of adipose tissue suitable for in vivo transplantation, in vitro culture, and further cell isolation and characterization.

Human Adipose Tissue Mikrofragmentierung für Zell-Phänotypisierung und Secretome-Charakterisierung

In the past decade, adipose tissue transplants have been widely used in plastic surgery and orthopaedics to enhance tissue repletion and/or regeneration. ...

Preparation of Adipose Progenitor Cells from Mouse Epididymal Adipose Tissues

Obesity and metabolic disorders such as diabetes, heart disease, and cancer, are all associated with dramatic adipose tissue remodeling. Tissue-resident adipose progenitor cells (APCs) play a key role in adipose tissue homeostasis and can contribute to the tissue pathology. The growing use of single cell analysis technologies &#8211; including single-cell RNA-sequencing and single-cell proteomics &#8211; is transforming the stem/progenitor cell field by permitting unprecedented resolution of individual cell expression changes within the context of population- or tissue-wide changes. In this article, we provide detailed protocols to dissect mouse epididymal adipose tissue, isolate single adipose tissue-derived cells, and perform fluorescence activated cell sorting (FACS) to enrich for viable Sca1+/CD31-/CD45-/Ter119- APCs. These protocols will allow investigators to prepare high quality APCs suitable for downstream analyses such as single cell RNA sequencing.

We present a simple method to isolate highly viable adipose progenitor cells from mouse epididymal fat pads using fluorescence activated cell sorting.

Herstellung von Adipose-Progenitorzellen aus Maus-Epididymal-Adipose-Geweben

Obesity and metabolic disorders such as diabetes, heart disease, and cancer, are all associated with dramatic adipose tissue remodeling. Tissue-resident ...

<meta charset="utf8"></head><body>SATMVECs beim Menschen: Isolations- und Adipozyten-Crosstalk-Studien

Studying Adipose Endothelial Cell/Adipocyte Cross-Talk in Human Subcutaneous Adipose Tissue

Microvascular endothelial cells (MVECs) have many critical roles, including control of vascular tone, regulation of thrombosis, and angiogenesis. Significant heterogeneity in endothelial cell (EC) genotype and phenotype depends on their vascular bed and host disease state. The ability to isolate MVECs from tissue-specific vascular beds and individual patient groups offers the opportunity to directly compare MVEC function in different disease states. Here, using subcutaneous adipose tissue (SAT) taken at the time of insertion of cardiac implantable electronic devices (CIED), we describe a method for the isolation of a pure population of functional human subcutaneous adipose tissue MVEC (hSATMVEC) and an experimental model of hSATMVEC-adipocyte cross-talk.
hSATMVEC were isolated following enzymatic digestion of SAT by incubation with anti-CD31 antibody-coated magnetic beads and passage through magnetic columns. hSATMVEC were grown and passaged on gelatin-coated plates. Experiments used cells at passages 2-4. Cells maintained classic features of EC morphology until at least passage 5. Flow cytometric assessment showed 99.5% purity of isolated hSATMVEC, defined as CD31+/CD144+/CD45-. Isolated hSATMVEC from controls had a population doubling time of approximately 57 h, and active proliferation was confirmed using a cell proliferation imaging kit. Isolated hSATMVEC function was assessed using their response to insulin stimulation and angiogenic tube-forming potential. We then established an hSATMVEC-subcutaneous adipocyte co-culture model to study cellular cross-talk and demonstrated a downstream effect of hSATMVEC on adipocyte function.
hSATMVEC can be isolated from SAT taken at the time of CIED insertion and are of sufficient purity to both experimentally phenotype and study hSATMVEC-adipocyte cross-talk.

<meta charset="utf8"></head><body>Autor im Rampenlicht: Einblicke in kardiometabolische Erkrankungen mit subkutanem Fettgewebe Mikrovaskulaturstudien

Here, we describe a protocol for isolating, culturing, and phenotyping microvascular endothelial cells from human subcutaneous adipose tissue (hSATMVECs). Additionally, we describe an experimental model of hSATMVEC-adipocyte cross-talk.

Encapsulation Thermogenic Präadipozyten für die Transplantation in Fettgewebe Depots

Zusammenfassung

Weitere Videos entdecken

Kapitel in diesem Video

Eine Microphysiologic Plattform für menschliches Fett: weißen Fettgewebe eingeklemmt

Isolation, Expansion und Adipogenen Induktion von CD34 + CD31 + Endothelial Zellen aus menschlichen Omentalis und subkutanem Fettgewebe

Isolation und Differenzierung von Stroma-Vascular Cells Beige / Brite Cells

Dreidimensionale Kultivierung von vaskularisiertem thermogenem Fettgewebe aus mikrovaskulären Fragmenten

Fettbedeckte Inseltransplantation mit Nebenhoden-weißem Fettgewebe

Human Adipose Tissue Mikrofragmentierung für Zell-Phänotypisierung und Secretome-Charakterisierung

Herstellung von Adipose-Progenitorzellen aus Maus-Epididymal-Adipose-Geweben

Untersuchung der Wechselwirkung zwischen Fettendothelzellen und Adipozyten im menschlichen subkutanen Fettgewebe

Untersuchung der Wechselwirkung zwischen Fettendothelzellen und Adipozyten im menschlichen subkutanen Fettgewebe

Untersuchung der Wechselwirkung zwischen Fettendothelzellen und Adipozyten im menschlichen subkutanen Fettgewebe