ويؤيد هذا العمل من قبل جمعية القلب الأمريكية 14FTF20370058 (DMA) وNIH T32 HL007101-35 (DMA).

1. الاستعدادات المواصلة القسطرة ومعايرة الضغط <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ربط تصرف القسطرة إلى وحدة القسطرة الدورة الدموية. معايرة إلكترونيا قياسات الضغط والحجم عن طريق تسجيل ضغط مسبقا وحجم تعيين على وحدة القسطرة. تسجيل اقتفاء أثر 0 ملم زئبق و 25 ملم زئبق (الشكل 1A) وتعيين الفولتية على كل من اقتفاء أثر الضغط (1B الشكل و1C). وبالمثل، تسجيل تتبع حجم 5 RVU و 25 RVU (1D الشكل) وتعيين الفولتية على كل من اقتفاء أثر حجم (1E و1F). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأكيد معايرة ضغط الإلكترونية مع الضغط المعايرة اليدوية، وذلك باستخدام مقياس ضغط الدم عمود الزئبق. تناسب ميناء مقياس ضغط الدم الكفة مع محبس 3-الطريقة. شغل نظام صمام الإرقاء 3-الميناء، وغالبا ما تستخدم لرأب الأوعية التاجية، مع الماء RT باستخدام منفذ الجانب. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع غيض من القسطرة تصرف في السائل شغل صمام الإرقاء وتأمين بلطف الطرافةالحوت مجعد القسطرة. ربط صمام الإرقاء إلى مقياس ضغط الدم وتضخم إلى 200 مم زئبق وقفل 3-الطريقة محبس. بحث ما إذا كان ضغط قياس يتوافق مع ضغط تضخم على مقياس ضغط الدم. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان القسطرة في المياه المالحة ساخنة إلى 37 درجة مئوية وهذا هو على مستوى الضغط مجال التشغيل والتدبير. ضبط التحكم في الضغط حتى الضغوط المسجلة هي عند مستوى الصفر. </li></ol> 2. التخدير / التنبيب <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدارة الكيتامين / زيلازين (80-100 / 10 ملغ كجم -1) بمثابة حقن داخل الصفاق. ملاحظة: وكلاء مخدر البديل يمكن استخدامها. يتم توفير قائمة واسعة من التخدير في الاستعراضات السابقة من هذه التقنية 11،12. ويمكن التأكد من التخدير المناسبة التي كتبها طيف قرصة الذيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة تخدير، حلق الرقبة والصدر مع الشعر كليبرز ومكان على وسادة ساخنة. الحفاظ على درجة حرارة الجسم الماوس في 36،5-37،5 درجة مئوية. درجة حرارة الجسم منخفضةسيؤدي في معدل ضربات القلب والاكتئاب. تطبيق مرهم للعين لمنع جفاف </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل شق خط الوسط في الرقبة وتشريح عضلات القصبة الهوائية بعيدا لفضح القصبة الهوائية. وضع أنبوب القصبة الهوائية عن طريق الفم، بينما تصور القصبة الهوائية لضمان التنبيب، والاتصال إلى جهاز التنفس الصناعي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على الماوس على جهاز التنفس الصناعي أثناء العملية. تعيين إعدادات جهاز التنفس الصناعي على أساس وزن الحيوان كما هو موضح سابقا (11). حجم المد والجزر (مل) = 6،2 س (وزن الحيوان بالكيلوغرام) 1.01 ومعدل التنفس = 53.5 العاشر (وزن الحيوان بالكيلوغرام) -0.26. </li></ol> 3. التنسيب من المواصلة قسطرة في غرفة LV <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نهج السباتي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لضمان العقم، ومجموعتين من الأدوات الجراحية المعقمة هي واحدة used- الاولي شق الجلد واحدة للعمل في بضع الصدر. يجب تطهير أدوات استخدام جهاز تعقيم جاف بين الحيوانات أثناء جلسة الجراحية الفردية لالثاني تعقيمها في نهاية كل يوم الجراحي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد أن تم تطهير الجلد مع ثلاث دورات من الكلورهيكسيدين + الكحول فرك الجلد (0.5٪ الكلورهيكسيدين / 70٪ محلول الكحول)، وجعل شق على الشريان السباتي الأيمن من الفك السفلي لعظمة القص. تشريح الأنسجة المحيطة لفضح الشريان السباتي الأيمن، وقطع العصب المبهم الذي يمتد المتاخمة للالسباتي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع العقيمة خياطة 6-0 الحرير قرب نهاية البعيدة (بعيدا عن الصدر) من الشريان السباتي، وتعادل وآمنة. وضع اثنين من خيوط إضافية تحت القريبة الشريان السباتي (أقرب إلى الصدر) لخياطة الأولى، وربط فضفاضة خياطة المتوسطة. برفق خياطة الداني والذي يوفر الحماية تحامل على الجلد. تأكد من أن الشريان السباتي قد فرضت على حد سواء بشكل قريب وبشكل أقصى قبل المتابعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء شق صغير في الشريان السباتي R.، الأقرب إلى خياطة الأولى، وتمتد طوليا نحو صدره. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج غيض تصرف القسطرة،غارقة في المياه المالحة الدافئة سابقا لمدة 30 دقيقة، إلى السفينة من خلال شق وتأمين القسطرة باستخدام خياطة المتوسطة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بلطف دفع القسطرة في البطين الأيسر عبر الشريان السباتي، أثناء مشاهدة حلقة حجم الضغط تتبع للتأكد من موضع الصحيح. ملاحظة: وضع الأمثل للقسطرة ينبغي أن تسفر حلقات الضغط حجم التي تظهر مستطيلة (انظر الشكل 2). إذا واجهت أي مقاومة لمرور القسطرة، وسحب بلطف ذهابا وتقدم مرة أخرى مع ضغط لطيف. تناوب لطيف من القسطرة قد تساعد مع وضع في البطين الأيسر. يمكن إجبار القسطرة تصرف يؤدي إلى مضاعفات القلب والأوعية الدموية الخطيرة أو الأضرار التي لحقت القسطرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سجل خط الأساس الضغط حجم الحلقات ~ 10 دقيقة بعد وضع القسطرة وتحقيق حالة مستقرة (الشكل 2). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نهج القمي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في الماوس تخدير والتهوية، وجعل الاب شقأوم عملية الخنجري وقطع طريق جدار الصدر أفقيا حتى الحجاب الحاجز مرئيا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع الرغم من أن الحجاب الحاجز ووضع تصور لقمة القلب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج القسطرة تصرف في قمة البطين الأيسر عن طريق طعنة الإبرة (باستخدام إبرة G 25-30)، حتى القطب الداني هو فقط داخل البطين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سجل خط الأساس الضغط حجم الحلقات ~ 10 دقيقة بعد وضع القسطرة وتحقيق حالة مستقرة. </li></ol></li></ol> 4. متفاوتة بعد التحميل عن طريق عابر الأورطي الإنسداد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لأداء انسداد الشريان الأبهر عابرة، وجعل شق أفقي صغير في أعلى الصدر وتشريح الأنسجة المحيطة لفضح الشريان الأورطي عرضية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع ربطة 6-0 الحرير تحت الشريان الأورطي عرضية. بعد أن عاد حلقات الضغط حجم خط الأساس، قفل طرفي الخيط مع المشبك إبرة، برفق وببطء رفع خياطة أكثر من 1-2 ثانية، وببطء الافراج عن التوتر. </لى&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر هذا الإجراء، حتى يتم إجراء ثلاثة تسجيلات المثلى منفصلة عن نفس الحيوان. ملاحظة: يجب أن يكون التسجيلات الأمثل لا يقل عن 5 حجم الضغط دورات حلقة والارتفاع المطرد في الضغوط الانقباضي نهاية خلال تطبيق التوتر على خياطة (3A الشكل و3C). </li></ol> 5. متفاوتة التحميل المسبق عن طريق عابر الوريد الأجوف السفلي انسداد (IVC) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لأداء عابرة انسداد الوريد الأجوف السفلي، وجعل شق أفقي تحت عملية الخنجري، تحت الحجاب الحاجز لفضح IVC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع ربطة 6-0 الحرير تحت IVC. بعد أن عاد حلقات الضغط حجم خط الأساس، قفل طرفي الخيط مع المشبك إبرة؛ بلطف وببطء رفع خياطة أكثر من 1-2 ثانية، وببطء الافراج عن التوتر. ويمكن أيضا IVC انسداد يتم تنفيذها من قبل التطبيق لطيف من الضغط باستخدام قطعة من القطن يميل مسحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر هذا الإجراء، حتى ثلاثة تسجيلات المثلى منفصلة هي مADE من نفس الحيوان. ملاحظة: يجب أن يكون التسجيلات الأمثل لا يقل عن 5 حجم الضغط دورات حلقة وانخفاض مطرد في البطين الأيسر نهاية الانبساط الضغوط خلال تطبيق التوتر على خياطة (4A الشكل و4B). </li></ol> 6. المالحة المعايرة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وفي ختام هذه الدراسة، يمكن أن يكون تصرف الموازي (V ع) قيمة الحصول عن طريق حقن البلعة 10 ميكرولتر من محلول ملحي مفرط التوتر (15٪) في الحيوانات عن طريق الوريد الوداجي (الشكل 5A و5B). ملاحظة: هذا بلعة يسبب زيادة واضحة في حجم مع أي تغيير في الضغط. هذا التغير الواضح في حجم هو نتيجة لتغيير في الدم تجمع تصرف بدلا من ذلك بسبب زيادة فعلية في حجم. انخفاض عابر في موانئ دبي / دينارا كحد أقصى يمكن ملاحظتها، كما المالحة مفرط التوتر له تأثير سلبي مؤثر في التقلص العضلي (13). يمكن أن يتم إدخال V ص محسوبة في حجم الضغط برامج التحليل حلقة على طولمع المعلمات كوفيت المعايرة وتحويل من RVUs في ميكرولتر. </li></ol> 7. كوفيت المعايرة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لإجراء معايرة كفيت، ضع كفيت مع آبار ذات أقطار المعروف المقدمة من قبل الشركة المصنعة على وسادة التدفئة أو حمام مائي درجة حرارة 37 درجة مئوية ل. ملء الثقوب 4-5 الأولى مع الطازجة الدم heparinized حارا من الفئران التي تمر تقييم الدورة الدموية. ملاحظة: معايرة كفيت يسمح لتقييم دقيق لتجمع الدم البطين الأيسر باستخدام الماوس الدم ويسمح لتحويل البيانات من حجم RVUs إلى ميكرولتر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج القسطرة تصرف في أول بئر، حتى يتم غمر جميع الأقطاب. تحرك بلطف القسطرة في البئر، والتي سوف تولد RVUs متفاوتة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسجيل التغييرات تصرف في قناة الصوت في RVUs. حدد أعلى RVU لمعايرة. ملاحظة: يمكن أن تكون إما حساب حجم الآبار التي كتبها 1) باستخدام معادلة لنظام القبولويستند ه اسطوانة، حيث نصف قطرها هو أن البئر كفيت وطول على طول بين الداخلية قطبين الاستشعار أو 2) التدقيق في تعليمات الشركة الصانعة. يمكن ربط مخرجات تصرف مع كميات معروفة لتطوير معادلة المعايرة الذي يحول البيانات من RVUs إلى 11 ميكرولتر. </li></ol> 8. القتل الرحيم <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في ختام البروتوكول، يصرح باستخدامها الفئران باستخدام خلع عنق الرحم في حين تحت التخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> من أجل ضمان الموت، الفئران بعد أن خضع لخلع عنق الرحم يجب أن تخضع طريقة الثانوي القتل الرحيم. نحن نستخدم استنزاف تحت التخدير، مع حصاد الأنسجة القلبية للتجريب، أو بضع الصدر الثنائي تحت التخدير. </li></ol> 9. تحليل البيانات باستخدام حجم الضغط حلقة تحليل البرمجيات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب V ص من المؤسسة العامة لتحلية المعايرة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد الضغط وvoluلي الحلقات التي تم الحصول عليها خلال طرد من المياه المالحة مفرط التوتر (الشكل 5A و5B) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تصدير حلقات لبرامج التحليل حجم الضغط. اختيار الخيار لتحلية المعايرة (الشكل 5C) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسجيل تحسب قيمة V ص (الشكل 5D). ملاحظة: يتم احتساب قيمة V ص عن طريق تحديد تقاطع حجم 1) نهاية الانبساطي مقابل حجم نهاية الانقباض من معايرة المالحة و2) نهاية الانبساط حجم = نهاية الانقباضي خط حجم. تقاطع هذه الخطوط يوفر ص V، والذي يحسب على حجم الضغط برامج التحليل الحلقة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أدخل تصرف للحجم (RVU) العلاقة في خيارات القناة حجم (الشكل 1F) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس خط الأساس الضغط وحجم الحلقة علاقة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد 10/08 دورات القلب من الضغط والحجم قنوات مرة واحدة وقد تم تحقيق حالة مستقرة (الشكل 2A) وتصديرها إلى تحليل لينةوير. تحديد 06/05 الحلقات نهاية الزفير (الشكل 2B) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام V قيمة ص لتصحيح تصرف الموازي. اختيار &quot;الحالة الثابتة&quot; الخيار وإنشاء جدول ملخص الدورة الدموية (الشكل 2C) </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس الضغط والحجم حلقة العلاقة أثناء انقباض الشريان الأورطي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد 10/08 دورات القلب من الضغط والحجم القنوات التي تتوافق مع انقباض الشريان الأورطي قبل زيادة الضغوط نهاية الانبساط (الشكل 3A) وتصديرها إلى برمجيات تحليل. تحديد 06/05 الحلقات نهاية الزفير (الشكل 3C) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد &quot;انقباض&quot; تحليل (الشكل 3B)، التي سوف يحسب للنهاية الانقباضي حجم الضغط العلاقة (ESPVR) </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس الضغط والحجم حلقة العلاقة خلال IVC انقباض <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد 10/08 دورات القلب من الضغط والحجم القنوات التي تتوافق مع IVC انقباض (شملت رقمالبريد 4A) وتصديرها إلى برمجيات تحليل. تحديد 06/05 الحلقات نهاية الزفير (الشكل 4B) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد &quot;انقباض&quot; تحليل (الشكل 3B)، التي سوف يحسب التحميل المسبق Recruitable السكتة الدماغية العمل (PRSW) (الشكل 4C)، الحد الأقصى لموانئ دبي / DT مقابل EDV (الشكل 4D)، وكذلك ESPVR ونهاية الانبساط حجم الضغط علاقة (الشكل 4E) </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Clark, J. E., Marber, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advancements+in+pressure-volume+catheter+technology+-+stress+remodelling+after+infarction.">Advancements in pressure-volume catheter technology - stress remodelling after infarction.</a> Exp Physiol. 98 (3), 614-621 (2013).</li><li>Sunagawa, K., Maughan, W. L., Burkhoff, D., Sagawa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Left+ventricular+interaction+with+arterial+load+studied+in+isolated+canine+ventricle.">Left ventricular interaction with arterial load studied in isolated canine ventricle.</a> Am J Physiol. 245 (Pt 1), H773-H780 (1983).</li><li>Suga, H., Sagawa, K., Demer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determinants+of+instantaneous+pressure+in+canine+left+ventricle.+Time+and+volume+specification.">Determinants of instantaneous pressure in canine left ventricle. Time and volume specification.</a> Circ Res. 46 (2), 256-263 (1980).</li><li>Suga, H., Sagawa, K., Shoukas, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Load+independence+of+the+instantaneous+pressure-volume+ratio+of+the+canine+left+ventricle+and+effects+of+epinephrine+and+heart+rate+on+the+ratio.">Load independence of the instantaneous pressure-volume ratio of the canine left ventricle and effects of epinephrine and heart rate on the ratio.</a> Circ Res. 32 (3), 314-322 (1973).</li><li>Kass, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+left+ventricular+mechanics+from+acute+VDD+pacing+in+patients+with+dilated+cardiomyopathy+and+ventricular+conduction+delay.">Improved left ventricular mechanics from acute VDD pacing in patients with dilated cardiomyopathy and ventricular conduction delay.</a> Circulation. 99 (12), 1567-1573 (1999).</li><li>Kass, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diastolic+Compliance+of+Hypertrophied+Ventricle+Is+Not+Acutely+Altered+by+Pharmacological+Agents+Influencing+Active+Processes.">Diastolic Compliance of Hypertrophied Ventricle Is Not Acutely Altered by Pharmacological Agents Influencing Active Processes.</a> Annals of Internal Medicine. 119 (6), 466-473 (1993).</li><li>Georgakopoulos, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+murine+left+ventricular+pressure-volume+relations+by+miniaturized+conductance+micromanometry.">In vivo murine left ventricular pressure-volume relations by miniaturized conductance micromanometry.</a> Am J Physiol. 274 (4 pt 2), H1416-H1422 (1998).</li><li>Cingolani, O. H., Kass, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pressure-volume+relation+analysis+of+mouse+ventricular+function.">Pressure-volume relation analysis of mouse ventricular function.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 301 (6), H2198-H2206 (2011).</li><li>Baan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+Measurement+of+Left-Ventricular+Volume+in+Animals+and+Humans+by+Conductance+Catheter.">Continuous Measurement of Left-Ventricular Volume in Animals and Humans by Conductance Catheter.</a> Circulation. 70 (5), 812-823 (1984).</li><li>Pearce, J. A., Porterfield, J. E., Larson, E. R., Valvano, J. W., Feldman, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accuracy+considerations+in+catheter+based+estimation+of+left+ventricular+volume.">Accuracy considerations in catheter based estimation of left ventricular volume.</a> Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. 2010, 3556-3558 (2010).</li><li>Pacher, P., Nagayama, T., Mukhopadhyay, P., Batkai, S., Kass, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+cardiac+function+using+pressure-volume+conductance+catheter+technique+in+mice+and+rats.">Measurement of cardiac function using pressure-volume conductance catheter technique in mice and rats.</a> Nature Protocols. 3 (9), 1422-1434 (1038).</li><li>Hanusch, C., Hoeger, S., Beck, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaesthesia+of+small+rodents+during+magnetic+resonance+imaging.">Anaesthesia of small rodents during magnetic resonance imaging.</a> Methods. 43 (1), 68-78 (2007).</li><li>Georgakopoulos, D., Kass, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+parallel+conductance+by+dual-frequency+conductance+catheter+in+mice.">Estimation of parallel conductance by dual-frequency conductance catheter in mice.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 279 (1), H443-H450 (2000).</li><li>Esposito, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+myocardial+contractility+and+enhanced+exercise+function+in+transgenic+mice+overexpressing+either+adenylyl+cyclase+5+or+8.">Increased myocardial contractility and enhanced exercise function in transgenic mice overexpressing either adenylyl cyclase 5 or 8.</a> Basic Res Cardiol. 103 (1), 22-30 (2008).</li><li>Kohout, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Augmentation+of+cardiac+contractility+mediated+by+the+human+beta(3)-adrenergic+receptor+overexpressed+in+the+hearts+of+transgenic+mice.">Augmentation of cardiac contractility mediated by the human beta(3)-adrenergic receptor overexpressed in the hearts of transgenic mice.</a> Circulation. 104 (20), 2485-2491 (2001).</li><li>Kim, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=beta-Arrestin-biased+AT1R+stimulation+promotes+cell+survival+during+acute+cardiac+injury.">beta-Arrestin-biased AT1R stimulation promotes cell survival during acute cardiac injury.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 303 (8), H1001-H1010 (2012).</li><li>Suga, H., Sagawa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mathematical+Interrelationship+between+Instantaneous+Ventricular+Pressure-Volume+Ratio+and+Myocardial+Force-Velocity+Relation.">Mathematical Interrelationship between Instantaneous Ventricular Pressure-Volume Ratio and Myocardial Force-Velocity Relation.</a> Annals of Biomedical Engineering. 1 (2), 160-181 (1972).</li><li>Suga, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ventricular+energetics.">Ventricular energetics.</a> Physiol Rev. 70 (2), 247-277 (1990).</li><li>Kass, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+contractile+state+on+curvilinearity+of+in+situ+end-systolic+pressure-volume+relations.">Influence of contractile state on curvilinearity of in situ end-systolic pressure-volume relations.</a> Circulation. 79 (1), 167-178 (1989).</li><li>Little, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+left+ventricular+dP/dtmax-end-diastolic+volume+relation+in+closed-chest+dogs.">The left ventricular dP/dtmax-end-diastolic volume relation in closed-chest dogs.</a> Circ Res. 56 (6), 808-815 (1985).</li><li>Glower, D. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Linearity+of+the+Frank-Starling+relationship+in+the+intact+heart:+the+concept+of+preload+recruitable+stroke+work.">Linearity of the Frank-Starling relationship in the intact heart: the concept of preload recruitable stroke work.</a> Circulation. 71 (5), 994-1009 (1985).</li><li>Sharir, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ventricular+systolic+assessment+in+patients+with+dilated+cardiomyopathy+by+preload-adjusted+maximal+power.+Validation+and+noninvasive+application.">Ventricular systolic assessment in patients with dilated cardiomyopathy by preload-adjusted maximal power. Validation and noninvasive application.</a> Circulation. 89 (5), 2045-2053 (1994).</li><li>Baan, J., Van der Velde, E. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitivity+of+left+ventricular+end-systolic+pressure-volume+relation+to+type+of+loading+intervention+in+dogs.">Sensitivity of left ventricular end-systolic pressure-volume relation to type of loading intervention in dogs.</a> Circ Res. 62 (6), 1247-1258 (1988).</li><li>Wei, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Volume+catheter+parallel+conductance+varies+between+end-systole+and+end-diastole.">Volume catheter parallel conductance varies between end-systole and end-diastole.</a> IEEE Trans Biomed Eng. 54 (8), 1480-1489 (2007).</li><li>Porterfield, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+correction+for+parallel+conductance,+GP,+and+gain+factor,+alpha,+in+invasive+murine+left+ventricular+volume+measurements.">Dynamic correction for parallel conductance, GP, and gain factor, alpha, in invasive murine left ventricular volume measurements.</a> J Appl Physiol (1985). 107 (6), 1693-1703 (2009).</li></ol>

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

نحن تصف طريقة لperfoming حجم الضغط تحليل حلقة باستخدام القسطرة تصرف في الفئران، لاستخلاص تحليلات شاملة لكل من انقباض القلب والاسترخاء. سوجا، ساجوا وزملاؤه تستخدم الضغط حجم الحلقات لتحديد تدابير لانقباض القلب، وتحديدا المنحدر من ESPVR، أو مرانية نهاية الانقباضي (الخانا...

يوفر القلب تحليل ضغط حجم حلقة على معلومات مفصلة من وظيفة القلب وهي المعيار الذهبي لتقييم وظيفي 1. بينما تقنيات التصوير مثل ضربات القلب أو التصوير بالرنين المغناطيسي القلب وتوفر تدابير وظيفية، وتعتمد اعتمادا كبيرا على ظروف التحميل هذه التدابير. تتطلب تدابير تحميل مستقلة عن انقباض القلب والاسترخاء القياسات الحيوية من ضغط البطين وحجم العلاقة على مجموعة من التحميل وبعد التحميل. هذا الفهم للعلاقة حجم الضغط الذي يطرح نفسه من العمل الرائد من ساجوا وزملاؤه 2،3. تظاهروا في خارج الحي قلوب الكلاب perfused أن حجم الضغط حلقة التدابير انقباض المستمدة مستقلة عن ظروف التحميل 4. في تطبيق الجسم الحي من هذه التحليلات اصبح ممكنا مع تطور القسطرة تصرف في 1980s. هذا التقدم التقني يسمح كاSS وزملاؤه لأداء ضغط حجم تحليل حلقة في البشر 5،6. جعل التصغير القسطرة تصرف والتحسينات في التقنيات الجراحية في وقت متأخر من عام 1990 7 تحليل القوارض وظيفة القلب ممكنا، مما يسمح للدراسات الجينية والدوائية التي يتعين القيام بها. هذا التقدم منذ ذلك الحين تؤدي إلى الاستخدام الواسع النطاق للضغط حجم تحليل حلقة ولدت قدرا كبيرا من التبصر في علم وظائف الأعضاء قلبية الثدييات. وثمة مفهوم رئيسي في استخدام القسطرة تصرف وتفسير البيانات التي تم الحصول عليها منه هي العلاقة بين الحجم وتصرف. تصرف يرتبط عكسيا مع الجهد، والتي تقاس باستخدام القسطرة مع أقطاب كهربية وضعت قريب، وعادة ما يوضع تحت الصمام الأبهري، وبشكل أقصى، في ذروة LV 8. يتم قياس التغيرات في الجهد أو تصرف من قبل التغيرات في التيار المتدفق من الأقرب إلى القطب البعيدة. على الرغم من أن تجمع الدم تسهمق إلى حد كبير في تصرف، ومساهمة من جدار البطين، وصف تصرف الموازي (V ع)، للا بد من طرح تصرف قياس للحصول على قياسات حجم LV المطلقة. طرق لأداء هذا التصحيح، ودعا الى معايرة المالحة، تمت مناقشتها في بروتوكول أدناه. العلاقة الرياضية بين تصرف وحدة التخزين، التي وصفها باحت والزملاء، هي أن حجم = 1 / α؛ (ρ L 2) (GG ع)، حيث معامل التصحيح α = حقل موحد، ρ = المقاومة الدم، L = المسافة بين الأقطاب، G = تصرف وG ع = تصرف غير الدم-9. من المذكرة، ومعامل التصحيح الحقل الموحد في الفئران يقترب 1.0 بسبب كميات غرفة صغيرة 10. إلى جانب محولات الضغط، والقسطرة تصرف يوفر في الوقت الحقيقي ضغط في وقت واحد وحجم البيانات. لض القلبإعادة حجم يعرض تحليل مزايا معينة أكثر من غيرها من التدابير من وظيفة القلب، لأنها تسمح لقياس وظيفة البطين مستقلة عن ظروف التحميل ومعدل ضربات القلب. مؤشرات محددة الحمل مستقل القلب من انقباض وتشمل: نهاية الانقباضي حجم الضغط علاقة (ESPVR)، د ف / د ر ماكس--end الانبساطي حجم العلاقة، مرانية القصوى (E كحد أقصى) والتحميل المسبق عمل السكتة الدماغية recruitable (PRSW). مقياس الحمل مستقلة عن وظيفة الانبساطي هي العلاقة حجم الضغط نهاية الانبساط (EDPVR) 11. يصف بروتوكول التالية سلوك القلب حجم الضغط تحليل حلقة، باستخدام كل من الشريان السباتي ونهج القمي. بينما وصفت منهجية لتنفيذ هذه الدراسات بالتفصيل سابقا 8،11، وسوف نستعرض الخطوات الأساسية للحصول على قياسات ضغط حجم دقيقة، بما في ذلك المياه المالحة وكوفيت المعايرة التصحيح، وتوفير مظاهرة البصرية من تساإجراءات ه. وكان التعامل مع الحيوانات البحوث التي أجريت لهذه الدراسة وفقا لبروتوكولات المعتمدة واللوائح الرفق بالحيوان لجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسي المركز الطبي لجامعة ديوك.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AnaSed (xylazine)&#160;</td>
			<td>Lloyd Laboratories</td>
			<td>NADA no. 139-236</td>
			<td>Anesthetic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketaset (ketamine)</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>440842</td>
			<td>Anesthetic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VIP3000</td>
			<td>Matrx Medical Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Anesthesia machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ventilator</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>Model 683</td>
			<td>Surgical Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing kit</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-1049</td>
			<td>Surgical Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homeothermic Blanket&#160;</td>
			<td>Kaz Inc.</td>
			<td>5628</td>
			<td>Surgical Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope</td>
			<td>Carl Zeiss Optical Inc.</td>
			<td>Stemi 2000</td>
			<td>Surgical Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Illuminator</td>
			<td>Cole&#8211;Parmer</td>
			<td>41720</td>
			<td>Surgical Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont no. 55 Dumostar Forceps&#160;</td>
			<td>Fine Science Tools Inc</td>
			<td>11295-51</td>
			<td>Surgical Instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe forceps, curved&#160;</td>
			<td>Fine Science Tools Inc</td>
			<td>11052-10</td>
			<td>Surgical Instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moria MC31 forceps&#160;</td>
			<td>Fine Science Tools Inc</td>
			<td>11370-31</td>
			<td>Surgical Instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayo scissors&#160;</td>
			<td>Fine Science Tools Inc</td>
			<td>14512-15</td>
			<td>Surgical Instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris scissors&#160;</td>
			<td>Fine Science Tools Inc</td>
			<td>14041-10</td>
			<td>Surgical Instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Halsey needle holder&#160;</td>
			<td>Fine Science Tools Inc</td>
			<td>12501-13</td>
			<td>Surgical Instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olsen&#8211;Hegar needle holder&#160;</td>
			<td>Fine Science Tools Inc</td>
			<td>12002-12</td>
			<td>Surgical Instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>spring scissors</td>
			<td>Fine Science Tools Inc</td>
			<td>15610-08</td>
			<td>Surgical Instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>disposable underpads</td>
			<td>Kendall/Tyco Healthcare</td>
			<td>1038</td>
			<td>Surgical Supplies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gauze sponges, sterile&#160;</td>
			<td>Dukal</td>
			<td>62208</td>
			<td>Surgical Supplies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-tipped applicators, sterile&#160;</td>
			<td>Solon</td>
			<td>368</td>
			<td>Surgical Supplies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical suture,&#160; silk, 6-0&#160;</td>
			<td>DemeTECH</td>
			<td>FT-639-1</td>
			<td>Surgical Supplies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 cc Insulin syringes&#160;</td>
			<td>Becton Dickenson</td>
			<td>329412</td>
			<td>Surgical Supplies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Access-9&#8482; Hemostasis Valve</td>
			<td>Merit Medical&#160;</td>
			<td>MAP111</td>
			<td>Hemodynamic equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sphygmomanometer</td>
			<td>Baumanometer</td>
			<td>320</td>
			<td>Hemodynamic equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millar PV system MPVS-300/400 or MPVS Ultra (includes calibration cuvette)</td>
			<td>ADInstruments Inc</td>
			<td></td>
			<td>Hemodynamic equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.4F conductance catheter&#160;</td>
			<td>ADInstruments Inc</td>
			<td>SPR-839</td>
			<td>Hemodynamic equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PowerLab 4/30 with Chart Pro</td>
			<td>ADInstruments Inc.</td>
			<td>ML866/P</td>
			<td>Hemodynamic software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>animal clipper</td>
			<td>Wahl</td>
			<td>8787-450A</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intradermic tubing PE-10 (Becton Dickinson, cat. no. )</td>
			<td>Becton Dickenson</td>
			<td>427401</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intradermic tubing PE-50 (Becton Dickinson, cat. no.)</td>
			<td>Becton Dickenson</td>
			<td>427411</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle assortment (18, 25 and 30 gauge; Thomas Scientific)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.9% (wt/vol) sodium chloride injection, USP , cat. no. )</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>NDC no. 0409-4888-50</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical tape</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alconox (Alconox Inc.) for catheter cleaning</td>
			<td>ADInstruments Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

cardiac pressure-volume loop analysis using conductance catheters in mice

Cardiac pressure-volume loop analysis is the &#8220;gold-standard&#8221; in the assessment of load-dependent and load-independent measures of ventricular systolic and diastolic function. Measures of ventricular contractility and compliance are obtained through examination of cardiac response to changes in afterload and preload. These techniques were originally developed nearly three decades ago to measure cardiac function in large mammals and humans. The application of these analyses to small mammals, such as mice, has been accomplished through the optimization of microsurgical techniques and creation of conductance catheters. Conductance catheters allow for estimation of the blood pool by exploiting the relationship between electrical conductance and volume. When properly performed, these techniques allow for testing of cardiac function in genetic mutant mouse models or in drug treatment studies. The accuracy and precision of these studies are dependent on careful attention to the calibration of instruments, systematic conduct of hemodynamic measurements and data analyses. We will review the methods of conducting pressure-volume loop experiments using a conductance catheter in mice.

ويمكن استخدام حجم الضغط تحليل حلقة لقياس وظيفة القلب في الفئران المعدلة وراثيا 14،15 أو الفئران تمر دراسات المخدرات 16. وتقدم الممثلة حلقات حجم الضغط من الأعمال المنشورة سابقا 16 دراسة أثر ß-Arrestin منحازة AT1R يجند، TRV120023. لاختبار ما إذا TRV120023 يؤثر على وظيفة...

Watch this Scientific Journal Video about Cardiac Pressure-Volume Loop Analysis Using Conductance Catheters in Mice at JoVE.com

Cardiac Pressure-Volume Loop Analysis Using Conductance Catheters in Mice

Cardiac pressure-volume loop analysis is the most comprehensive way to measure cardiac function in the intact heart. We describe a technique to perform and analyze cardiac pressure volume loops, using conductance catheters.

القلب حجم الضغط تحليل حلقة عن طريق القسطرة المواصلة في الفئران

Cardiac pressure-volume loop analysis is the &#8220;gold-standard&#8221; in the assessment of load-dependent and load-independent measures of ventricular ...

cardiac-pressure-volume-loop-analysis-using-conductance-catheters

Research

JoVE Journal

Biology

19.3K Views.  Duke University Medical Center. Cardiac pressure-volume loop analysis is the most comprehensive way to measure cardiac function in the intact heart. We describe a technique to perform and analyze cardiac pressure volume loops, using conductance catheters. 

Video: Cardiac Pressure-Volume Loop Analysis Using Conductance Catheters in Mice

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

The protocol presented here is designed to study the activation of the large conductance, voltage- and Ca2+-activated K+ (BK) channels. The protocol may also be used to study the structure-function relationship for other ion channels and neurotransmitter receptors1. BK channels are widely expressed in different tissues and have been implicated in many physiological functions, including regulation of smooth muscle contraction, frequency tuning of inner hair cells and regulation of neurotransmitter release2-6. BK channels are activated by membrane depolarization and by intracellular Ca2+ and Mg2+ 6-9. Therefore, the protocol is designed to control both the membrane voltage and the intracellular solution. In this protocol, messenger RNA of BK channels is injected into Xenopus laevis oocytes (stage V-VI) followed by 2-5 days of incubation at 18&deg;C10-13. Membrane patches that contain single or multiple BK channels are excised with the inside-out configuration using patch clamp techniques10-13. The intracellular side of the patch is perfused with desired solutions during recording so that the channel activation under different conditions can be examined. To summarize, the mRNA of BK channels is injected into Xenopus laevis oocytes to express channel proteins on the oocyte membrane; patch clamp techniques are used to record currents flowing through the channels under controlled voltage and intracellular solutions.

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

Ionic current of BK channels is recorded using patch clamp techniques. BK channels are expressed in Xenopus oocytes by injecting messenger RNA. The intracellular solution during patch clamp recordings is controlled by a perfusion system.

أعربت المشبك التصحيح وتقنيات الإرواء لدراسة في قنوات ايون القيطم البويضات

The protocol presented here is designed to study the activation of the large conductance, voltage- and Ca2+-activated K+ (BK) channels. The protocol may ...

Bioengineering Human Microvascular Networks in Immunodeficient Mice

The future of tissue engineering and cell-based therapies for tissue regeneration will likely rely on our ability to generate functional vascular networks in vivo. In this regard, the search for experimental models to build blood vessel networks in vivo is of utmost importance 1. The feasibility of bioengineering microvascular networks in vivo was first shown using human tissue-derived mature endothelial cells (ECs) 2-4; however, such autologous endothelial cells present problems for wide clinical use, because they are difficult to obtain in sufficient quantities and require harvesting from existing vasculature. These limitations have instigated the search for other sources of ECs. The identification of endothelial colony-forming cells (ECFCs) in blood presented an opportunity to non-invasively obtain ECs 5-7. We and other authors have shown that adult and cord blood-derived ECFCs have the capacity to form functional vascular networks in vivo 7-11. Importantly, these studies have also shown that to obtain stable and durable vascular networks, ECFCs require co-implantation with perivascular cells. The assay we describe here illustrates this concept: we show how human cord blood-derived ECFCs can be combined with bone marrow-derived mesenchymal stem cells (MSCs) as a single cell suspension in a collagen/fibronectin/fibrinogen gel to form a functional human vascular network within 7 days after implantation into an immunodeficient mouse. The presence of human ECFC-lined lumens containing host erythrocytes can be seen throughout the implants indicating not only the formation (de novo) of a vascular network, but also the development of functional anastomoses with the host circulatory system. This murine model of bioengineered human vascular network is ideally suited for studies on the cellular and molecular mechanisms of human vascular network formation and for the development of strategies to vascularize engineered tissues.

Here, we describe a methodology to deliver human cord blood-derived endothelial colony-forming cells (ECFCs) and bone marrow-derived mesenchymal stem cells (MSCs), embedded in a collagen/fibronectin gel, subcutaneously into immunodeficient mice. This cell/gel combination generates a human vascular network that connects with the mouse vasculature.

الهندسة الحيوية شبكات الاوعية الدموية الدقيقة الإنسان في الفئران العوز المناعي

The future of tissue engineering and cell-based therapies for tissue regeneration will likely rely on our ability to generate functional vascular networks ...

Expression and Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein in Saccharomyces cerevisiae

The cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) is a chloride channel, that when mutated, can give rise to cystic fibrosis in humans.There is therefore considerable interest in this protein, but efforts to study its structure and activity have been hampered by the difficulty of expressing and purifying sufficient amounts of the protein1-3. Like many 'difficult' eukaryotic membrane proteins, expression in a fast-growing organism is desirable, but challenging, and in the yeast S. cerevisiae, so far low amounts were obtained and rapid degradation of the recombinant protein was observed 4-9. Proteins involved in the processing of recombinant CFTR in yeast have been described6-9 .In this report we describe a methodology for expression of CFTR in yeast and its purification in significant amounts. The protocol describes how the earlier proteolysis problems can be overcome and how expression levels of CFTR can be greatly improved by modifying the cell growth conditions and by controlling the induction conditions, in particular the time period prior to cell harvesting. The reagants associated with this protocol (murine CFTR-expressing yeast cells or yeast plasmids) will be distributed via the US Cystic Fibrosis Foundation, which has sponsored the research. An article describing the design and synthesis of the CFTR construct employed in this report will be published separately (Urbatsch, I.; Thibodeau, P. et al., unpublished). In this article we will explain our method beginning with the transformation of the yeast cells with the CFTR construct - containing yeast plasmid (Fig. 1). The construct has a green fluorescent protein (GFP) sequence fused to CFTR at its C-terminus and follows the system developed by Drew et al. (2008)10. The GFP allows the expression and purification of CFTR to be followed relatively easily. The JoVE visualized protocol finishes after the preparation of microsomes from the yeast cells, although we include some suggestions for purification of the protein from the microsomes. Readers may wish to add their own modifications to the microsome purification procedure, dependent on the final experiments to be carried out with the protein and the local equipment available to them. The yeast-expressed CFTR protein can be partially purified using metal ion affinity chromatography, using an intrinsic polyhistidine purification tag. Subsequent size-exclusion chromatography yields a protein that appears to be &gt;90% pure, as judged by SDS-PAGE and Coomassie-staining of the gel.

Expression and Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein in Saccharomyces cerevisiae

Attempts to express the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) in Saccharomyces cerevisiae have, until now, yielded relatively low amounts of protein. This protocol and the associated reagents distributed via the Cystic Fibrosis Foundation should allow the preparation of milligram amounts of this 'difficult' eukaryotic membrane protein.

التعبير وتنقية عبر الغشاء التليف الكيسي بروتين منظم المواصلة في خميرة الخباز

The  cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) is a chloride  channel, that when mutated, can give rise to cystic fibrosis in  ...

Measurement of Leaf Hydraulic Conductance and Stomatal Conductance and Their Responses to Irradiance and Dehydration Using the Evaporative Flux Method (EFM)

Water is a key resource, and the plant water transport system sets limits on maximum growth and drought tolerance. When plants open their stomata to achieve a high stomatal conductance (gs) to capture CO2 for photosynthesis, water is lost by transpiration1,2. Water evaporating from the airspaces is replaced from cell walls, in turn drawing water from the xylem of leaf veins, in turn drawing from xylem in the stems and roots. As water is pulled through the system, it experiences hydraulic resistance, creating tension throughout the system and a low leaf water potential (&Psi;leaf). The leaf itself is a critical bottleneck in the whole plant system, accounting for on average 30% of the plant hydraulic resistance3. Leaf hydraulic conductance (Kleaf = 1/ leaf hydraulic resistance) is the ratio of the water flow rate to the water potential gradient across the leaf, and summarizes the behavior of a complex system: water moves through the petiole and through several orders of veins, exits into the bundle sheath and passes through or around mesophyll cells before evaporating into the airspace and being transpired from the stomata. Kleaf is of strong interest as an important physiological trait to compare species, quantifying the effectiveness of the leaf structure and physiology for water transport, and a key variable to investigate for its relationship to variation in structure (e.g., in leaf venation architecture) and its impacts on photosynthetic gas exchange. Further, Kleaf responds strongly to the internal and external leaf environment3. Kleaf can increase dramatically with irradiance apparently due to changes in the expression and activation of aquaporins, the proteins involved in water transport through membranes4, and Kleaf declines strongly during drought, due to cavitation and/or collapse of xylem conduits, and/or loss of permeability in the extra-xylem tissues due to mesophyll and bundle sheath cell shrinkage or aquaporin deactivation5-10. Because Kleaf can constrain gs and photosynthetic rate across species in well watered conditions and during drought, and thus limit whole-plant performance they may possibly determine species distributions especially as droughts increase in frequency and severity11-14.
We present a simple method for simultaneous determination of Kleaf and gs on excised leaves. A transpiring leaf is connected by its petiole to tubing running to a water source on a balance. The loss of water from the balance is recorded to calculate the flow rate through the leaf. When steady state transpiration (E, mmol &bull; m-2 &bull; s-1) is reached, gs is determined by dividing by vapor pressure deficit, and Kleaf by dividing by the water potential driving force determined using a pressure chamber (Kleaf= E /- &Delta;&psi;leaf, MPa)15.
This method can be used to assess Kleaf responses to different irradiances and the vulnerability of Kleaf to dehydration14,16,17.

Measurement of Leaf Hydraulic Conductance and Stomatal Conductance and Their Responses to Irradiance and Dehydration Using the Evaporative Flux Method EFM

We describe a relatively rapid (30 min) and realistic method for simultaneously measurement of leaf hydraulic conductance (Kleaf) and stomatal conductance (gs) for transpiring excised leaves. The method can be modified to measure the light and dehydration responses of Kleaf and gs.

قياس المواصلة والمواصلة الهيدروليكية ليف الثغور وردودها على الإشعاع والجفاف باستخدام أسلوب التمويه التبخر (EFM)

Water is a key resource, and the plant water transport system sets limits on maximum growth and drought tolerance. When plants open their stomata to ...

Intravital Microscopy of the Microcirculation in the Mouse Cremaster Muscle for the Analysis of Peripheral Stem Cell Migration

In the era of intravascular cell application protocols in the context of regenerative cell therapy, the underlying mechanisms of stem cell migration to nonmarrow tissue have not been completely clarified. We describe here the technique of intravital microscopy applied to the mouse cremaster microcirculation for analysis of peripheral bone marrow stem cell migration in vivo. Intravital microscopy of the M. cremaster has been previously introduced in the field of inflammatory research for direct observation of leucocyte interaction with the vascular endothelium. Since sufficient peripheral stem and progenitor cell migration includes similar initial steps of rolling along and firm adhesion at the endothelial lining it is conceivable to apply the M. cremaster model for the observation and quantification of the interaction of intravasculary administered stem cells with the endothelium. As various chemical components can be selectively applied to the target tissue by simple superfusion techniques, it is possible to establish essential microenvironmental preconditions, for initial stem cell recruitment to take place in a living organism outside the bone marrow.

Intravital microscopy of the mouse M. cremaster microcirculation offers a unique and well-standardized in vivo model for the analysis of peripheral bone marrow stem cell migration.

حيوي داخلي المجهري للدوران الأوعية الدقيقة في العضلات المشمرة ماوس لتحليل الهجرة الجذعية الطرفية المحمولة

In the era of intravascular cell application protocols in the context of regenerative cell therapy, the underlying mechanisms of stem cell migration to ...

Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein Expressed in Saccharomyces cerevisiae

Defects in the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) protein cause cystic fibrosis (CF), an autosomal recessive disease that currently limits the average life expectancy of sufferers to &#60;40 years of age. The development of novel drug molecules to restore the activity of CFTR is an important goal in the treatment CF, and the isolation of functionally active CFTR is a useful step towards achieving this goal.
We describe two methods for the purification of CFTR from a eukaryotic heterologous expression system, S. cerevisiae. Like prokaryotic systems, S. cerevisiae can be rapidly grown in the lab at low cost, but can also traffic and posttranslationally modify large membrane proteins. The selection of detergents for solubilization and purification is a critical step in the purification of any membrane protein. Having screened for the solubility of CFTR in several detergents, we have chosen two contrasting detergents for use in the purification that allow the final CFTR preparation to be tailored to the subsequently planned experiments.
In this method, we provide comparison of the purification of CFTR in dodecyl-&#946;-D-maltoside (DDM) and 1-tetradecanoyl-sn-glycero-3-phospho-(1&#39;-rac-glycerol) (LPG-14). Protein purified in DDM by this method shows ATPase activity in functional assays. Protein purified in LPG-14 shows high purity and yield, can be employed to study post-translational modifications, and can be used for structural methods such as small-angle X-ray scattering and electron microscopy. However it displays significantly lower ATPase activity.

Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein Expressed in Saccharomyces cerevisiae

Heterologous expression and purification of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) are significant challenges and limiting factors in the development of drug therapies for cystic fibrosis. This protocol describes two methods for the isolation of milligram quantities of CFTR suitable for functional and structural studies.&#160;

تنقية التليف الكيسي عبر الغشاء المواصلة منظم البروتين المعبر عنه في<em&gt; خميرة الخباز</em

Defects in the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) protein cause cystic fibrosis (CF), an autosomal recessive disease that ...

A New Technique for Quantitative Analysis of Hair Loss in Mice Using Grayscale Analysis

Alopecia is a common form of hair loss which can occur in many different conditions, including male-pattern hair loss, polycystic ovarian syndrome, and alopecia areata. Alopecia can also occur as a side effect of chemotherapy in cancer patients. In this study, our goal was to develop a consistent and reliable method to quantify hair loss in mice, which will allow investigators to accurately assess and compare new therapeutic approaches for these various forms of alopecia. The method utilizes a standard gel imager to obtain and process images of mice, measuring the light absorption, which occurs in rough proportion to the amount of black (or gray) hair on the mouse. Data that has been quantified in this fashion can then be analyzed using standard statistical techniques (i.e., ANOVA, T-test). This methodology was tested in mouse models of chemotherapy-induced alopecia, alopecia areata and alopecia from waxing. In this report, the detailed protocol is presented for performing these measurements, including validation data from C57BL/6 and C3H/HeJ strains of mice. This new technique offers a number of advantages, including relative simplicity of application, reliance on equipment which is readily available in most research laboratories, and applying an objective, quantitative assessment which is more robust than subjective evaluations. Improvements in quantification of hair growth in mice will improve study of alopecia models and facilitate evaluation of promising new therapies in preclinical studies.

Alopecia is a common form of hair loss which can occur in many different conditions, including as a side-effect of chemotherapy. We have developed a method to quantify hair loss in mice, utilizing a standard gel imager to perform a grayscale analysis, to facilitate study of promising new alopecia therapies.

تقنية جديدة لتحليل الكمي لتساقط الشعر في الفئران عن طريق تحليل درجات الرمادي

Alopecia is a common form of hair loss which can occur in many different conditions, including male-pattern hair loss, polycystic ovarian syndrome, and ...

Relating Stomatal Conductance to Leaf Functional Traits

Leaf functional traits are important because they reflect physiological functions, such as transpiration and carbon assimilation. In particular, morphological leaf traits have the potential to summarize plants strategies in terms of water use efficiency, growth pattern and nutrient use. The leaf economics spectrum (LES) is a recognized framework in functional plant ecology and reflects a gradient of increasing specific leaf area (SLA), leaf nitrogen, phosphorus and cation content, and decreasing leaf dry matter content (LDMC) and carbon nitrogen ratio (CN). The LES describes different strategies ranging from that of short-lived leaves with high photosynthetic capacity per leaf mass to long-lived leaves with low mass-based carbon assimilation rates. However, traits that are not included in the LES might provide additional information on the species&#39; physiology, such as those related to stomatal control. Protocols are presented for a wide range of leaf functional traits, including traits of the LES, but also traits that are independent of the LES. In particular, a new method is introduced that relates the plants&#8217; regulatory behavior in stomatal conductance to vapor pressure deficit. The resulting parameters of stomatal regulation can then be compared to the LES and other plant functional traits. The results show that functional leaf traits of the LES were also valid predictors for the parameters of stomatal regulation. For example, leaf carbon concentration was positively related to the vapor pressure deficit (vpd) at the point of inflection and the maximum of the conductance-vpd curve. However, traits that are not included in the LES added information in explaining parameters of stomatal control: the vpd at the point of inflection of the conductance-vpd curve was lower for species with higher stomatal density and higher stomatal index. Overall, stomata and vein traits were more powerful predictors for explaining stomatal regulation than traits used in the LES.

Unraveling how physiology and morphology are linked allows a deeper understanding of mechanistic functioning of plant leaves. We present both a procedure to derive parameters of stomatal regulation from stomatal conductance measurements and correlations with traditional functional leaf traits.

فيما الثغور المواصلة إلى ورقة الصفات الوظيفية

Leaf functional traits are important because they reflect physiological functions, such as transpiration and carbon assimilation. In particular, ...

Contractility Measurements on Isolated Papillary Muscles for the Investigation of Cardiac Inotropy in Mice

Papillary muscle isolated from adult mouse hearts can be used to study cardiac contractility during different physiological/pathological conditions. The contractile characteristics can be evaluated independently of external influences such as vascular tonus or neurohumoral status. It depicts a scientific approach between single cell measurements with isolated cardiac myocytes and in vivo studies like echocardiography. Thus, papillary muscle preparations serve as an excellent model to study cardiac physiology/pathophysiology and can be used for investigations like the modulation by pharmacological agents or the exploration of transgenic animal models. Here, we describe a method of isolating the murine left anterior papillary muscle to investigate cardiac contractility in an organ bath setup. In contrast to a muscle strip preparation isolated from the ventricular wall, the papillary muscle can be prepared in toto without damaging the muscle tissue severely. The organ bath setup consists of several temperature-controlled, gassed and electrode-equipped organ bath chambers. The isolated papillary muscle is fixed in the organ bath chamber and electrically stimulated. The evoked twitch force is recorded using a pressure transducer and parameters such as twitch force amplitude and twitch kinetics are analyzed. Different experimental protocols can be performed to investigate the calcium- and frequency-dependent contractility as well as dose-response curves of contractile agents such as catecholamines or other pharmaceuticals. Additionally, pathologic conditions like acute ischemia can be simulated.

Murine left ventricular papillary muscle can be used to investigate cardiac contractility in vitro. This article describes in detail the isolation and experimental protocols to study cardiac contractile characteristics.

انقباض القياسات على العضلات الحليمية معزولة للتحقيق في القلب Inotropy في الفئران

Papillary muscle isolated from adult mouse hearts can be used to study cardiac contractility during different physiological/pathological conditions. The ...

Measuring Pressure Volume Loops in the Mouse

Understanding the causes and progression of heart disease presents a significant challenge to the biomedical community. The genetic flexibility of the mouse provides great potential to explore cardiac function at the molecular level. The mouse&#39;s small size does present some challenges in regards to performing detailed cardiac phenotyping. Miniaturization and other advancements in technology have made many methods of cardiac assessment possible in the mouse. Of these, the simultaneous collection of pressure and volume data provides a detailed picture of cardiac function that is not available through any other modality. Here a detailed procedure for the collection of pressure-volume loop data is described. Included is a discussion of the principles underlying the measurements and the potential sources of error. Anesthetic management and surgical approaches are discussed in great detail as they are both critical to obtaining high quality hemodynamic measurements. The principles of hemodynamic protocol development and relevant aspects of data analysis are also addressed.

This manuscript describes a detailed protocol for the collection of pressure-volume data from the mouse.

قياس حجم حلقات الضغط في الماوس

Understanding the causes and progression of heart disease presents a significant challenge to the biomedical community. The genetic flexibility of the ...