طريقة لزرع جزيرة ليلى إلى الثرب في الماوس

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في حقل زرع الجزر مثل زرع الجزير إلى الـ omentum. تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية نحو علاج مرض السكري من النوع الأول لأن الأومونتوم هو إعادة الظهور كموقع قيمة محتملة لزرع الجزيرة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أن الجزر المعزولة مختلطة مع الهيدرجيل ويتم وضع الخليط في الحقيبة omentum من فأر السكري.

ابدأ بإعداد حقل معقمة في المنطقة الجراحية بمواد معقمة مثل الستائر والمستلزمات. ضع الأدوات الجراحية المعقمة في الحقل العقيم. اختيار الجزر المانحة تحت المجهر ستيريو باستخدام 200 ميكرولتر ماصات تلميح.

لكل حيوان، وجمع 450 إلى 500 الجزر ونقلها إلى أنبوب معقم 1.5 ملليلتر المفاجئة أعلى أنبوب مع 100 ميكرولتر من CMRL 10 66 المتوسطة. ضع الأنبوب على الثلج حتى يصبح جاهزاً للزرع. مرة واحدة وقد تم حصاد الجزر، ذوبان غشاء مصفوفة الغشاء السفلي هيدروجيل على الجليد.

وزن وعلامة جميع الفئران المتلقية السكري. بعد تخدير الفأرة الأولى وفقًا لبروتوكول معتمد مؤسسيًا ، اختبر عمق التخدير عن طريق إدارة قرصة إصبع. إذا لم يكن هناك رد فعل الانسحاب، ومستوى التخدير هو الصحيح لعملية جراحية.

إدارة مرهم الطبيب البيطري إلى العينين لمنع جفاف أثناء التخدير. مسحة البطن مع 70٪ الإيثانول. ثم حلق الشعر من موقع الجراحة.

غطي الحيوان بستارة معقمة، وطهر المنطقة بمقشر اليود. بعد استخدام مقص العيون لإنشاء شق 4 إلى 5 سنتيمتر على طول خط الوسط في البطن ، حرّك الأمعاء إلى الجانب الأيسر واغطيها بالشاش المحلى المُنقع لمنع الجفاف أثناء إجراء الجراحة. ثم استخدام مسحات القطن لفضح المعدة تماما وتحديد موقع الومنيوم تحت المعدة.

عند هذه النقطة، يجب أن تذوب هيدروجيل تماما. تدور أنبوب يحتوي على الجزر في 200 مرة ز لمدة 30 ثانية. بعد الدوران، وإزالة افرا.

ثم pirate 50 ميكرولترات من هيدروجيل إضافته إلى أنبوب يحتوي على الجزر ومزيج بلطف تجنب تشكيل فقاعات. المقبل استخدام اثنين من أزواج من ملقط لالتقاط حواف الوروم ورفع بلطف لتشكيل الأخدود بين جدار المعدة والأمعاء. عند هذه النقطة في الجراحة، هناك حاجة إلى شخص ثان لpirate خليط هيدروجيل جزيرة متأرجح مع 200 طرف ماصة ميكرولتر وتسليمها في الأخدود.

تأكد من أن الخليط هو في وضع جيد في الأخدود عن طريق رفع بلطف أو خفض حواف الوميم. استكمال تحديد المواقع من الخليط في غضون ثلاث دقائق قبل hydrogel يتجمد. بعد مجموعات الهيدروجيل، أضعاف omentum لتغطية الكسب غير المشروع.

سوف omentum التمسك جدار المعدة المحيطة بها كما يتجمد هيدروجيل. عندما يتم ترسيخ هيدروجيل تماما، واستخدام مسحات القطن لإعادة وضع الأمعاء في تجويف البطن مع الحرص على عدم لمس موقع زرع. الاستغناء التالي 200 ميكرولترات من مضاد حيوي مناسب في تجويف البطن لمنع العدوى.

ثم استخدم 4 خياطة لإغلاق البطن. عموما سوف الأفراد جديدة لهذا الأسلوب النضال لأن مواقع من الومونوم في الفئران صغيرة ومتعبة لتقييم. ضع الماوس في قفص الانتعاش الدافئ حتى يستعيد تماما إعادة شغل الوظائف الخارجية.

في اليوم التالي وكل يوم بعد ذلك لمدة أسبوع واحد ، حقن المضادات الحيوية بعد الجراحة الوقاية. أيضا، قياس مستوى السكر في الدم غير الصيام من عينة الدم الوريدي الذيل باستخدام مقياس السكر في الدم مرة واحدة في اليوم بعد عملية الزرع. عند زرع إلى omentum، قد يكون الكسب غير المشروع في جزيرة وظيفة تأخر ولا تصل إلى مستوى السكر في الدم طبيعية تماما لمدة أسبوعين إلى ثلاثة أسابيع.

تم استرداد الأنسجة المطعمة من الفأر الرحيم بعد 14 يومًا من الزرع. هنا الكسب غير المشروع مرئياً ككتلة من النوى بعد تلطيخ DAPI. يتم الكشف عن وظيفة الأنسجة المطعمة من خلال وصمة عار المناعة مع الأجسام المضادة للأنسولين.

يُظهر تلطيخ H&E الأنسجة المطعمة المحاطة بالضبيّعات الشحمية في الأومونتوم. مرة واحدة يتقن، يمكن أن يتم هذا الأسلوب في ساعة واحدة إذا تم تنفيذها بشكل صحيح. أثناء محاولة هذا الإجراء، من المهم تذكر أيضاً ماوس omentum الهشة.

بعد هذا الإجراء، أساليب أخرى مثل المستخدمة في المدارس الثانوية المختلفة، وأداء ميغابايت في كل ما من شأنها الإجابة على أسئلة معينة مثل انتشار جزيرة في الأوعية الدموية والأداء. بعد هذا التطور، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في زرعهم واستكشاف علاج مرض السكري من النوع الأول في أكثر من مقتطف. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية زرع الجزر إلى الماوس.