Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области трансплантации островка, такие как пересадка островка в omentum. Последствия этого метода распространяются на терапию диабета типа I, потому что omentum вновь появился в качестве потенциального места значения для трансплантации островка. Основным преимуществом этой техники является то, что изолированные островки смешиваются с гидрогелем и смесь помещается в omentum мешок диабетической мыши.
Начните с подготовки асептического поля в хирургической области с стерильным материалом, таким как шторы и одноразовые. Поместите стерилизованные хирургические инструменты в асептическое поле. Выберите островки донора под стерео-микроскопом с помощью наконечника пипетки 200 микролитров.
Для каждого животного, собрать от 450 до 500 островков и передачи в стерильные 1,5 миллилитров оснастки верхней трубки со 100 микролитров CMRL 10 66 среды. Поместите трубку на лед до готовности к пересадке. После того, как островки были собраны, оттепель подвале мембраны матрицы гидрогеля на льду.
Взвешивание и пометить все диабетической мышей получателя. После обезболивания первой мыши в соответствии с институционально утвержденным протоколом, проверьте глубину анестезии, внося щепотку ноша. Если нет абстиненции рефлекс, уровень анестезии является правильным для хирургии.
Администрирование ветеринара мазь для глаз, чтобы предотвратить сухость во время под наркозом. Шваб брюшной полости с 70%этанола. Затем побрить волосы с места операции.
Накройте животное стерильной шторой и дезинфицировать область йодом. После использования офтальмологических ножниц для создания 4 до 5 сантиметров разрез вдоль средней линии живота, переместить кишечник в левую сторону и накрыть солевым раствором пропитанной марлей, чтобы предотвратить обезвоживание во время операции. Затем используйте ватные тампоны, чтобы полностью разоблачить желудок и найти omentum ниже желудка.
В этот момент гидрогель должен быть полностью разморожен. Спин трубки, содержащей островки на 200 раз г в течение 30 секунд. После вращения удалите супернатант.
Затем аспирировать 50 микролитров гидрогеля добавить его в трубку, содержащую островки и аккуратно перемешать, избегая образования пузырьков. Затем используйте две пары типсов, чтобы забрать края omentum и осторожно поднять его, чтобы сформировать паз между стенкой желудка и кишечника. На данный момент в хирургии, второй человек необходим, чтобы аспирировать перерасход смеси гидрогеля островка с 200 микролитера пипетки отзыв и доставить его в паз.
Убедитесь, что смесь хорошо расположена в паз, осторожно поднимая или опуская края omentum. Завершите позиционирование смеси в течение трех минут, прежде чем гидрогель затвердеет. После гидрогеля устанавливает, сложите omentum для того чтобы покрыть трансплантат.
Omentum будет придерживаться окружающих желудочной стенки, как гидрогель затвердевает. Когда гидрогель полностью затвердев, используйте ватные тампоны, чтобы переместить кишечник в брюшной полости, заботясь, чтобы не коснуться места трансплантации. Далее обойтись 200 микролитров соответствующего антибиотика в брюшной полости для предотвращения инфекции.
Затем используйте 4 O шва, чтобы закрыть живот. Вообще индивидуалы новые к этому методу будут бороться потому что места omentum в мышах малы и утомляют для того чтобы определить. Поместите мышь в разогретую клетку восстановления, пока она полностью не восстановит внешнюю лежачие места.
На следующий день и каждый день после этого в течение одной недели, вводить антибиотик в качестве послеоперационной профилактики. Кроме того, измеряйте уровень глюкозы в крови неэстивинга из образца крови хвостовой вены с помощью счетчика глюкозы в крови один раз в день после трансплантации. При пересадке в omentum, островок трансплантата может иметь задержку функции и не достичь совершенно нормального уровня глюкозы в крови в течение двух-трех недель.
Привитая ткань была извлечена из усыпанной мыши через 14 дней после трансплантации. Здесь трансплантат виден как скопление ядер после окрашивания DAPI. Функциональность привитой ткани раскрывается путем окрашивания иммунофлуоресценции антиинсу инсулиновыми антителами.
Окрашивание Н И Э показывает привитые ткани, окруженные адипоцитами оментума. После освоения, этот метод может быть сделано в течение одного часа, если она выполняется должным образом. При попытке этой процедуры, важно помнить, тоже мышь omentum является хрупким.
После этой процедуры, другие методы, как используется в различных средней школе, МБ производительности во всем, что будет отвечать на конкретные вопросы, как распространение островка в васкулизации и производительности. После этого развития, этот метод проложил путь для исследователей в их и трансплантации для изучения лечения диабета типа I в более чем одном отрывке. После просмотра этого видео, вы должны иметь хорошее понимание того, как пересадить островки в omentum в мыши.
