Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo del trasplante de islotes, como el trasplante de islotes al omentum. Las implicaciones de esta técnica se extienden hacia la terapia de la diabetes tipo I porque el omentum es ree emergiente como un sitio de valor potencial para el trasplante de islotes. La principal ventaja de esta técnica es que los islotes aislados se mezclan con hidrogel y la mezcla se coloca en la bolsa de omentum de ratón diabético.
Comience preparando un campo aséptico en el área quirúrgica con material estéril como cortinas y desechables. Coloque los instrumentos quirúrgicos esterilizados en el campo aséptico. Escoja los islotes del donante bajo el microscopio estéreo usando una punta de pipeta de 200 microlitros.
Para cada animal, recoger 450 a 500 islotes y transferir a un tubo superior estéril de 1,5 mililitros snap superior con 100 microlitros de CMRL 10 66 medio. Coloque el tubo sobre hielo hasta que esté listo para el trasplante. Una vez cosechados los islotes, descongela el hidrogel de matriz de membrana del sótano sobre hielo.
Pesar y etiquetar todos los ratones receptores diabéticos. Después de anestesiar el primer ratón de acuerdo con un protocolo aprobado institucionalmente, pruebe la profundidad de la anestesia mediante la administración de un pellizco del dedo del Si no hay reflejo de abstinencia, el nivel de anestesia es correcto para la cirugía.
Administrar la pomada veterinaria a los ojos para evitar la sequedad mientras está bajo anestesia. Frota el abdomen con 70%etanol. Luego afeita el cabello del sitio de la cirugía.
Cubra al animal con una cortina estéril y desinfecte la zona con un exfoliante de yodo. Después de usar tijeras oftálmicas para crear una incisión de 4 a 5 centímetros a lo largo de la línea media del abdomen, mueva los intestinos hacia el lado izquierdo y cúbralo con gasa empapada en solución salina para prevenir la deshidratación durante el procedimiento de cirugía. Luego usa hisopos de algodón para exponer completamente el estómago y localizar el omento debajo del estómago.
En este punto, el hidrogel debe ser completamente descongelado. Gire el tubo que contiene los islotes a 200 g durante 30 segundos. Después del giro, retire el sobrenadante.
A continuación, aspirar 50 microlitros del hidrogel añadirlo al tubo que contiene los islotes y mezclar suavemente evitando la formación de burbujas. A continuación, utilice dos pares de fórceps para recoger los bordes del omento y elevarlo suavemente para formar una ranura entre la pared gástrica y los intestinos. En este punto de la cirugía, se necesita una segunda persona para aspirar la mezcla de hidrogel de islotes resuspendido con una punta de pipeta de 200 microlitros y entregarla en la ranura.
Asegúrese de que la mezcla esté bien posicionada en la ranura elevando o bajando suavemente los bordes del omento. Completar el posicionamiento de la mezcla dentro de tres minutos antes de que el hidrogel se solidifique. Después de que el hidrogel se ponga, dobla el omento para cubrir el injerto.
El omento se adhiere a la pared gástrica circundante a medida que el hidrogel se solidifique. Cuando el hidrogel esté completamente solidificado, utilice hisopos de algodón para reposicionar los intestinos en la cavidad abdominal teniendo cuidado de no tocar el lugar del trasplante. A continuación, dispensar 200 microlitros de un antibiótico adecuado en la cavidad abdominal para prevenir la infección.
Luego usa la sutura 4 O para cerrar el abdomen. Generalmente los individuos nuevos en este método lucharán porque los sitios del omento en ratones es pequeño y agotador para evaluar. Coloque el ratón en una jaula de recuperación calentada hasta que recupere completamente la reclinaciones externas.
Al día siguiente y todos los días posteriores durante una semana, inyectar antibiótico como profilaxis post-cirugía. Además, mida el nivel de glucosa en sangre no en ayunas a partir de una muestra de sangre de vena de cola usando un medidor de glucosa en sangre una vez al día después del trasplante. Al trasplantarse al omentum, el injerto de islote puede tener una función retardada y no alcanzar un nivel de glucosa en sangre completamente normal durante dos a tres semanas.
El tejido injertado fue recuperado del ratón eutanizado 14 días después del trasplante. Aquí el injerto es visible como un grupo de núcleos después de la tinción DAPI. La funcionalidad del tejido injertado se revela mediante tinción de inmunofluorescencia con anticuerpos anti-insulina.
La tinción de H&E muestra los tejidos injertados rodeados por los adipocitos del omento. Una vez masterada, esta técnica se puede hacer en una hora si se realiza correctamente. Al intentar este procedimiento, es importante recordar también que el ratón omentum es frágil.
Siguiendo este procedimiento, otros métodos como se utilizan en diferentes escuelas secundarias, el rendimiento de MB en todo lo que responderá a preguntas particulares como la propagación del islote en la vascuolización y el rendimiento. Después de este desarrollo, esta técnica allanó el camino para que los investigadores en su y trasplante exploraran el tratamiento para la diabetes tipo I en más de un extracto. Después de ver este video, usted debe tener una buena comprensión de cómo trasplantar los islotes al omentum en el ratón.
