الإجراء Alvar Gaaud هو تطبيق التحفيز المباشر للتيار عبر الجمجمة في الفئران. وقد تحقق ذلك من خلال توليد تيارات منخفضة الكثافة من مولد تيار مباشر، وإرساله مباشرة إلى الحيوان من خلال الأقطاب الكهربائية. وقد تم التحقيق في tDCS كبديل غير الدوائية العلاجية للاضطرابات النفسية الرئيسية في البشر، مثل الاكتئاب، الفصام، مرض الزهايمر، AHDH، والتوحد.
وعلاوة على ذلك، tDCS هي تقنية فريدة من نوعها نظرا لانخفاض تكلفتها وسهولة الاستخدام، وغير الغازية الشخصية. ومع ذلك، فإن الآثار البيولوجية لـ tDCS ليست مفهومة تمامًا، ولا يوجد توافق في الآراء بشأن معلمات التحفيز، مثل الكثافة الحالية والمدة والبلاط في مناطق الدماغ. لذلك، استخدام الحد الأدنى من أوامر أمر ضروري لدراسة شاملة لهذه الآليات، والتي سوف تؤدي إلى فهم أفضل للفعالية السريرية من tDCS من خلال اكتساب وتحليل البيانات الخلوية والجزيئية السلوك.
هناك حاليا اثنين من الاجهزة القطب لـ tDCS ، ويشار إلى أنودال والكاثوال تحفيز. في التحفيز الأنودالي، يتم تسليم التيارات مباشرة إلى رأس الحيوان، من خلال جسم الحيوان، وإلى الكاثود المتمركز على صدر الحيوان. بينما في تحفيز الكاثdal يدخل التيار من خلال صدر الحيوان ، يسافر حتى رأسه وإلى الكاثود.
في كلتا الحالتين المولدات الحالية تسيطر على كثافة الحالية ومدة التحفيز. أثناء إنتاج جودة الاتصال واستنتاج الملاحظات. هناك العديد من الاجهزة المختلفة لتحديد المواقع النشطة.
لذلك، ينبغي أن تؤخذ في الاعتبار جميع محور ثلاثي الأبعاد. في هذا البروتوكول تم زرع قطب الرأس ملليمتر واحد في البريغما الجذور، على الجانب إلى الخط الأوسط من الجمجمة، وتم وضع قطب الجسم على صدر الحيوان. بسبب محاكاة فترة قصيرة ، تم التوصية باستخدام إجراء سريع وتخدير قصير الأجل ، مثل isoflurane المتبخر.
يتكون هذا الإجراء من خطوتين هامتين. وضع الأقطاب الكهربائية والتنشيط المباشر للتيار عبر الجمجمة. تم تعقيم الأدوات الجراحية مع ما قبل الصيانة في 440 درجة مئوية.
تم اغذية اغذية قطنية بسعر 20 رطل لكل بوصة مربعة عند 121 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. بدوره تحكم منصة الحرارية إلى 37 درجة مئوية. وزن الحيوان، وحساب الجرعة المناسبة للتحريض التخدير.
استخدم خليطًا من الكيتامين والزيلازين بجرعة 100 ملليغرام لكل كيلوغرام من الكيتامين، و8 ملليغرام لكل كيلوغرام من الزيلازين. إبرة حجم 31G. يجب أن يغفو الحيوان في غضون 2 إلى 3 دقائق.
استخدم ماكينة حلاقة كهربائية أو حلاقة حلاقة في مكان الجراحة. وضع الحيوان على جهاز استريو كسوسيك على لوحة التدفئة قبل الدفء. أمسك رأس الحيوان وأدخل قضبان الأذن الطرفية في كل من أذني الحيوان ، لإصلاحه إلى منصة sterotaxic.
تحقق من عدم وجود تحول في الرأس الجانبي ، وحركة رأسية صغيرة عن طريق تغيير رأس الحيوان ببطء. حرك قناع التخدير بلطف فوق أنف الماوس، ثم قم بإصلاحه في مكانه عن طريق شد المسمار. ضع مرهم العين على عيون الحيوان لمنع تجفيف القرنية أثناء الجراحة.
استخدام مسحة القطن لإعداد موقع الجراحة مع ثلاثة الدعك بالتناوب من اليود povidone، أو 2٪ chlorohexidine و 70٪ ethinol. استخدام زوج من ملاقط للتحقق من التخدير اعتماد عن طريق الضغط طفيفة أصابع الحيوان، والتحقق من قوانين الحيوان pedo الانسحاب منعكس قرصة العامة. إجراء شق حوالي ثلاثة ملليمترات الخلفي إلى خط الأذن الحيوان، ووقف في خط العين.
يجب أن يكون طول موقع الشق سنتيمتر واحد تقريبًا ليكون كبيرًا بما يكفي لتلقي الغرسة. كشط بلطف الجمجمة مع مكشطة العظام لتحسين الغراء والأسمنت الالتزام. يجب أن يتم ذلك ضوء سلمت مع نية خلق الخدوش الصغيرة.
ضع خطاطيف جراحية بعناية على الجلد المترهل للحفاظ على حقل جراحي مفتوح وتحريره من العوائق، مثل الجلد الفراء. استخدام مسحة القطن العقيمة لتجفيف فروة الرأس بلطف الحيوان. استخدم مجهر تشريح لتصور الجزء العلوي من الجمجمة الحيوانية.
نعلق إبرة إلى حامل sterotaxic وتحديد موقع bregma. موضع الإبرة مباشرة فوق رأس الحيوان هو لمس طفيفة bregma. استخدم البريغما كمرجع لضبط إحداثيات منطقة الاهتمام.
إصلاح زرع على حامل ستيريو تكسينيك. ضع الغرسة فوق رأس الحيوان واخفضها ببطء على المنطقة ذات الأهمية. استخدام إبرة لنشر قطرة واحدة، ما يقرب من 35 ميكرولتر، من superglue على مساحة زرع.
تحرك ببطء حامل إلى أسفل حتى تلامس الجمجمة. تأكد من أن مساحة الزرع على اتصال كامل مع السطح. إعداد الأسمنت الجراحي وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.
بعد تحديد المواقع بدقة، ضعي ثلاث طبقات رقيقة، حتى من الأسمنت عبر الجمجمة، وعلى الجزء السفلي من الغرسة. تطبيق إسقاط لكل قطرة باستخدام فرشاة تطبيق. يجب أن تشكل الطبقات هيكلًا على شكل حرف U لمزيد من الدعم الهيكلي للزرع.
اترك الخيط المسماري للغرس نظيفًا من الأسمنت للسماح باتصال سلس وغير معوق. السماح لكل طبقة لتجف لمدة أربع دقائق تقريبا. بعد التجفيف، قم بإزالة الحامل بعناية حتى يتم فصله تمامًا عن الغرسة.
استخدم الحذر الشديد دائمًا عند التعامل مع الغرسة ، لأنها قد تكون قد دُمِرت عن طريق الخطأ من جمجمة الحيوان. هيدرات جلد الحيوان وموقع شق مع مسحة القطن المنقوعة المالحة. قطع الجلد على قاعدة الزرع.
استخدمي ملاقط لجمع النسيج معاً، واغلق الشق مع قطرة واحدة من الغراء الجراحي للأنسجة لكل نقطة سنتيمترين من الأنسجة. التسلل 1 إلى 2٪ الليدوكائين في موقع شق والأنسجة الكامنة. هيدرات الحيوان مع 500 ميكرولتر من الرنين اللاكتات في وقت واحد.
وضع الماوس في قبل warmed 37 درجة مئوية نظيفة قفص منزل واحد. بناء طبق صغير من الكريات الغذائية الرطبة في القفص، لسهولة الحصول على الطعام في الساعات التالية. سجل وزن الحيوان بعد الجراحة.
يجب أن تدار الحيوان مع كيتوبروفين. 5 ملليغرام لكل كيلوغرام في وقت واحد بعد الجراحة وعلى مدى اليومين المقبلين. تأكد من أن tDCS هو مشحونة بالكامل.
قم بتوصيل كابلات الأنود والكاثود بمحفز tDCS وجعله متاحًا بالقرب من موقع المحاكاة. إرفاق القطب من نوع دبوس إلى حامل sterotaxic. تعيين منصة الحرارية إلى 37 درجة مئوية.
بدوره على مقياس تدفق الأوكسجين على نظام التخدير استنشاق إلى 1 لتر في الدقيقة. ضع الفأر في غرفة التخدير التعريفية. بدوره على مرذاذ isoflurane إلى 3٪ السماح للحيوان للخضوع لآثار ايزوفلورا لمدة أربع دقائق.
بينما الحيوان في غرفة التعريفي، واستخدام حقنة معقمة لملء القطب الجسم مع محلول ملحي 0.9٪. إزالة الحيوان من غرفة التعريفي ووضع صدره على قطب الجسم. مرر قناع التخدير برفق فوق أنف الماوس ثم قم بإصلاحه في مكانه.
خفض الإخراج isoflurane إلى 1.5٪ ملء الزرع والأقطاب من نوع دبوس مع المالحة. إرفاق بعناية لهم معا. ضبط وقت التحفيز وكثافة الحالية وفقا للبروتوكول الخاص بك.
تحقق من جودة جهة الاتصال على نظام tDCS لاحقاً. ابدأي التحفيز مراقبة الحالي زيادة لمدة 20 ثانية إلى القيمة المحددة.
والحفاظ على نفسها بدلا من الوقت المحدد. ثم، في نهاية القسم المنحدرين مرة أخرى. قم بتنشيط زر الشِن للتحكم.
مراقبة الحالي زيادة لمدة 20 ثانية إلى القيمة المحددة. ثم أسفل واحد لبقية فترة التحفيز، مع منحدر النهائي إلى القيمة المختارة، في نهاية المطاف، مع تصاعد متتالية إلى أسفل. واحد قسم التحفيز كاملة، ونقل بعناية الحيوان إلى قفص درجة حرارة مسبقة 37 لمدة 10 دقائق.
يستخدم هذا البروتوكول tDCS لتحفيز قشرة الدماغ الماوس ملليمتر واحد في الجزء الأمامي من bregma. يُظهر هذا الرسم البياني التعبير الإحصائي والمورث بعد بروتوكول التحفيز tDCS. باستخدام 0.35 مللي امبيرس كثافة الحالية لمدة 10 دقائق في اليوم الواحد.
قدمت زرع tCDS النفس قابلة للحياة من اليوم الأول إلى خمسة مع عدم وجود فرق كبير بين الأيام في جودة الاتصال. هناك مجموعة متنوعة من بروتوكولات التحفيز tCDS في العقول النموذجية. يجب اختيار البروتوكولات وفقًا لخصوصيات تجربتك التي تستند إليها.
منطقة التحفيز، كثافة التيار، مدة الجلسة، وتحديد المواقع الكهربائي. في هذا البروتوكول بالذات ، ونحن تهدف إلى تحوير القشرة الحركية من خلال tDCS المعروفة لدينا مع التيار من 350 microamperes لمدة 10 دقائق. بعد مشاهدة هذا الفيديو سوف تكون قادرة على أداء tDCS في الفئران.
عندما يمارس شخص ما الجراحة قد يستغرق ما يصل إلى أربع دقائق لكل. من الضروري أن تأخذ في الاعتبار المبادئ التوجيهية لرعاية الحيوان عند استخدام الفئران أثناء العملية وبعد الرعاية بعد الجراحة للحيوانات بحيث تبقى الحيوانات بصحة جيدة أثناء الدراسة. كما نوصي بالانتظار بعد خمسة إلى سبعة أيام من وضع الغرسة لإجراء التجارب، لأن استجابة الحيوان الفسيولوجية للصدمة قد تتداخل مع النتائج البيولوجية.
