Процедура Alvar Gaaud заключается в применении транскраниальной стимуляции прямого тока у мышей. Это достигается путем генерации низких интенсивных течений из генератора прямого тока и отправки его непосредственно животному через электроды. tDCS был исследован как немедикаментозная терапевтическая альтернатива для основных психических расстройств у людей, таких как депрессия, шизофрения, болезнь Альцгеймера, AHDH, и аутизм.
Кроме того, tDCS является уникальной техникой из-за его низкой стоимости, простоты использования и неинвазивного профиля. Тем не менее, биологические эффекты tDCS не совсем понял, и нет консенсуса в отношении параметров стимуляции, таких как текущая интенсивность, продолжительность, и плитка областей мозга. Для этого использование минимальных заказов имеет важное значение для тщательного изучения таких механизмов, что приведет к лучшему пониманию клинической эффективности tDCS путем приобретения и анализа поведения клеточных и молекулярных данных.
В настоящее время существуют две установки электродов для tDCS, называемые анодальной и катодальной стимуляцией. При анодальной стимуляции токи доставляются непосредственно в голову животного, через тело животного и в катод, расположенный на грудной клетке животного. В то время как в катодной стимуляции ток проникает через грудную клетку животного, перемещается до его головы и в катод.
В обеих ситуациях ток-генератор контролирует текущую интенсивность и продолжительность стимуляции. При производстве качества контакта и вывод обратной связи. Есть много различных установок для активного позиционирования.
Для этого следует принимать во внимание все трехмерные оси. В этом протоколе головной электрод был имплантирован на один миллиметр в корневую брегму, на среднюю линию черепа, а электрод тела был расположен на груди животного. Из-за короткого периода моделирования, было рекомендовано использовать быстрое действие и краткосрочной анестезии, такие как испаряется изофлюран.
Эта процедура состоит из двух важнейших шагов. Размещение электродов и транскраниальная стимуляция прямого тока. Хирургические инструменты были стерилизованы при предварительном обслуживании при 440 градусах цельсия.
Хлопковые тампоны были autoclaved на 20 фунтов на квадратный дюйм при 121 градусов по Цельсию в течение 20 минут. Поверните контроллер тепловой платформы до 37 градусов по Цельсию. Взвесить животное и рассчитать соответствующую дозу для индукции анестезии.
Используйте смесь кетамина и ксилазина в дозе 100 миллиграммов на килограмм кетамина и 8 миллиграммов на килограмм ксилазина. Размер иглы 31G. Зверь должен заснуть в течение 2-3 минут.
Используйте электрическую бритву или бритву, чтобы побрить хирургическое место. Поместите животное на стереотаксисный аппарат над предварительно разогретой нагревательной пластиной. Держите голову животного и вставьте кончик уха в уши каждого животного, чтобы зафиксировать его на стеротаксисной платформе.
Убедитесь, что нет бокового смещения головы, и мало вертикального движения, медленно перемещая голову животного. Аккуратно сдвиньте маску анестезии над носом мыши и зафиксировать на месте, затягивая винт. Нанесите мазь на глаза животного, чтобы предотвратить высыхание роговицы во время операции.
Используйте ватный тампон для подготовки хирургического участка с тремя чередующимися скрабами йода повидоне, или 2%хлорогексидина и 70% этинола. Используйте пару пинцетов для проверки анестезии принять, слегка сжимая ног животного, и проверки законов животных педо-вывода общего щепотку рефлекс. Сделайте разрез около трех миллиметров задней линии уха животного, и остановитесь в линии глаза.
Место разреза должно иметь примерно один сантиметр в длину, чтобы быть достаточно большим, чтобы получить имплантат. Аккуратно соскребать череп с костной скребок для улучшения клея и цемента соблюдения. Это должно быть сделано легко передал с намерением создания микро-царапин.
Тщательно распоистите хирургические крючки для свободной кожи, чтобы сохранить открытое хирургическое поле и освободить его от препятствий, таких как кожа меха. Используйте стерильный ватный тампон, чтобы аккуратно высушить кожу головы животного. Используйте микроскоп для визуализации верхней части черепа животного.
Прикрепите иглу к держатель sterotaxic и найти брегму. Позиция иглы прямо над головой животного слегка касаясь брегмы. Используйте брегму в качестве ссылки для корректировки координат области интересов.
Зафиксировать имплантат на стереотаксисе. Распоить имплантат над головой животного и медленно опустить его в область интереса. Используйте иглу, чтобы распространить одну каплю, приблизительно 35 микролитров, суперклея на пространство имплантата.
Медленно двигай держатель вниз, пока он не коснется черепа. Убедитесь, что пространство имплантата полностью находится в контакте с поверхностью. Подготовка хирургического цемента в соответствии с инструкциями производителя.
После точного позиционирования нанесите три тонких, даже слоя цемента поперек черепа и на нижнюю часть имплантата. Нанесите каплю на каплю с помощью кисти приложения. Слои должны образовывать U-образную структуру для дальнейшей структурной поддержки имплантата.
Оставьте винтовую нить имплантата чистой цемента, чтобы обеспечить гладкое, беспрепятственное соединение. Дайте каждому слою высохнуть в течение примерно четырех минут. После высыхания осторожно удалите держатель, пока он полностью не отсоединится от имплантата.
Всегда используйте крайнюю осторожность при обращении с имплантатом, так как он может быть случайно удален из черепа животного. Увлажните кожу животного и место разреза солевым пропитанным ватным тампоном. Вырежьте кожу над основанием имплантата.
Используйте пару пинцетов, чтобы объединить ткани, и закрыть разрез с одной каплей ткани хирургического клея в точку 2 сантиметра ткани. Проникнуть от 1 до 2%лидокаин в месте разреза и основных тканей. Гидрат животного с 500 микролитров лактата звонарь одновременно.
Поместите мышь в предварительно разогретую 37 градусов по Цельсию чистой одной клетке дома. Постройте небольшое блюдо из влажных пищевых гранул в клетке, для легкого доступа к пище в последующие часы. Зарегистрируйте послеоперационный вес животного.
Зверь должен быть введен с кетопрофеном. 5 миллиграммов на килограмм одновременно после операции и в течение следующих двух дней. Убедитесь, что стимулятор tDCS полностью заряжен.
Прикрепите анодные и катодные кабели к стимулятору tDCS и сделайте их доступными рядом с местом моделирования. Прикрепите электрод контактного типа к держатель sterotaxic. Установите тепловую платформу до 37 градусов по Цельсию.
Включите кислородный поток на системе ингаляционной анестезии до 1 литра в минуту. Поместите мышь в индукционной камере анестезии. Включите испаритель изофлюрана до 3%Позвольте животному пройти изофлюрановые эффекты в течение четырех минут.
Пока животное находится в индукционной камере, используйте стерильный шприц, чтобы заполнить электрод тела 0,9% солевым раствором. Удалите животное из индукционной камеры и располагаем грудью над электродом тела. Аккуратно сдвиньте маску анестезии на нос мыши и зафиксируете на месте.
Снизить выход изофлюрана до 1,5%Заполните имплантат и электрод контактного типа солевым раствором. Аккуратно прикрепите их вместе. Отрегулируйте время стимуляции и текущую интенсивность в соответствии с вашим протоколом.
Проверить качество контакта в системе tDCS позже. Начните стимуляцию. Наблюдайте за тем, как ток нарастает в течение 20 секунд до выбранного значения.
И поддержание себя вместо установленного времени. Затем, в конце раздела ramping вниз снова. Активируйте кнопку голени для управления.
Наблюдайте за тем, как ток нарастает в течение 20 секунд до выбранного значения. А затем вниз один для остальной части периода стимуляции, с окончательным пандусом к выбранному значению, в конце, с последовательным ramped вниз. Один из разделов стимуляции завершен, тщательно перенесите животное в предварительно разогретую 37-градусную клетку по Цельсию в течение 10 минут.
Этот протокол использует tDCS для стимуляции коры головного мозга мыши на один миллиметр передней к брегме. На этом графике показаны статистика и экспрессия генов после протокола стимуляции tDCS. Использование 0,35 миллиампер текущей интенсивности в течение 10 минут в день.
Имплантат tCDS представил себя жизнеспособным с первого дня до пяти без существенной разницы между днями в контакте качества. Существуют различные протоколы стимуляции tCDS в мозге модели. Протоколы должны быть выбраны в соответствии с особенностями вашего эксперимента основывается на.
Область стимуляции, текущая интенсивность, продолжительность сеанса и позиционирование электродов. В данном конкретном протоколе, мы направлены на модуляцию моторной коры через наш известный tDCS с током 350 микроамперов в течение 10 минут. После просмотра этого видео вы сможете выполнять tDCS у мышей.
Когда кто-то практикует хирургии может занять до четырех минут на животное. Важно принимать во внимание руководящие принципы по уходу за животными при использовании мышей во время операции и после послеоперационного ухода за животными, чтобы животные остаются здоровыми во время исследования. Мы также рекомендуем ждать пять-семь дней после размещения имплантата для проведения экспериментов, так как физиологическая реакция животного на травму может помешать биологическим результатам.
